專利名稱：豆腐果苷類似物及其制備抗老年癡呆癥藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及豆腐果苷類似物及其制備抗老年癡呆藥物的用途。
背景技術(shù)：
隨著全世界人口的老齡化，阿爾茨海默病(俗稱老年癡呆，Alzhemer′s disease，AD)成為威脅老人晚年生活的主要疾病之一。AD是一種不可逆轉(zhuǎn)的大腦進(jìn)行性退變疾病。臨床表現(xiàn)為記憶力減退伴有其他認(rèn)識(shí)功能損害的獲得性智能減退，致使晚期患者喪失綜合視、聽、觸、嗅等信息的能力，導(dǎo)致患者不能獨(dú)立生活。AD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病因?qū)W尚未完全清楚，至今沒有好的根治或逆轉(zhuǎn)病程的藥物。目前，對(duì)于AD的病因主要有以下三種說法其一，大腦皮層及其它腦區(qū)神經(jīng)上出現(xiàn)β-淀粉樣蛋白(βAP)沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFT)。βAP在AD的神經(jīng)元損害中起了重要作用。βAP沉積作用于神經(jīng)細(xì)胞膜引起的細(xì)胞損害甚至死亡。其二，AD的發(fā)生與衰老引起的生理、生化改變有密切的關(guān)系。鈣平衡失調(diào)、自由基增多等都可導(dǎo)致神經(jīng)元的損害。其三，AD與中樞神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿、5-羥色胺、興奮性氨基酸等異常有關(guān)。大量的研究證實(shí)，AD病人學(xué)習(xí)和記憶能力的喪失與乙酰膽堿能神經(jīng)功能的下降有直接關(guān)系。膽堿能假說為AD的治療提供了理論依據(jù)，乙酰膽堿酯酶抑制劑成為目前治療AD最有效的手段。
乙酰膽堿酯酶抑制劑如它克林，毒扁豆堿，加蘭他敏，齊多哌啶，石杉?jí)A甲能夠增強(qiáng)AD病人的認(rèn)知能力，但是多數(shù)藥物因其具有中樞或外周系統(tǒng)副作用而使其廣泛應(yīng)用受到限制。因此對(duì)老年癡呆疾病仍需繼續(xù)研究尋找一類新型化合物，開發(fā)新一代毒副作用低、療效高的乙酰膽堿酯酶抑制劑。
豆腐果苷(Helicid)，屬芳香酚苷，化學(xué)名為對(duì)苯甲醛-O-β-D-阿洛吡喃糖苷，由對(duì)羥基苯甲醛和葡萄糖兩部分構(gòu)成。是山龍眼科植物蘿卜樹(Helicid Hilgirica Beed)的果實(shí)中的有效成分。豆腐果苷是化學(xué)結(jié)構(gòu)與天麻素有相似的單體糖苷。經(jīng)藥理和臨床研究證明，豆腐果苷對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用與天麻素相似，但其鎮(zhèn)靜、安眠、止痛的作用較天麻素強(qiáng)，對(duì)神經(jīng)官能癥引起的頭痛、頭昏、睡眠障礙的治療作用顯效快，一般用藥3～7天顯效。目前豆腐果苷已作為OTC藥物應(yīng)用于國(guó)內(nèi)臨床。國(guó)內(nèi)外尚未見豆腐果苷行為致畸效應(yīng)及其他毒副作用的報(bào)道。
豆腐果苷是一種較好的鎮(zhèn)靜、止痛藥，具有天然資源豐富、價(jià)格低廉、無毒、無明顯副作用等特點(diǎn)。豆腐果苷的研究，主要集中在80年代，近幾年研究較少，且均停留在對(duì)已有功能的進(jìn)一步研究如毒性研究，神經(jīng)性頭痛的臨床觀察，穩(wěn)定性研究等。近期有文獻(xiàn)報(bào)道豆腐果苷本身具有新的抗抑郁活性，與金絲桃甙相近。但目前國(guó)內(nèi)外還沒有針對(duì)豆腐果苷進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，系統(tǒng)研究其類似物的構(gòu)效關(guān)系的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一類新的具有對(duì)乙酰膽堿酯酶高選擇性抑制作用的豆腐果苷類似物。
解決上述目的的技術(shù)方案是式I所示的豆腐果苷類似物
其中，式I中的Ra表示為Ra＝O或NNHCSNH2或NNHCONH2或NOH或NOCH3或NHCSNH2或NHCONH2，Rb表示為全保護(hù)或部分保護(hù)或未保護(hù)的五碳糖、六碳糖、二糖中的一種。
優(yōu)選地，所述豆腐果苷類似物為式II所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙?；?；或均為新戊酰基；或均為苯甲酰基；或均為芐基；或均為烯丙基；或R1和R2為異丙叉基，R3，R4為H；或R1，R2為H，R3和R4為芐叉基；或R4為三苯甲基或磷酸酯或?qū)谆交撬狨ィ琑1，R2，R3為H；或R4為H，R1，R2，R3為乙酰基或新戊?；虮郊柞；蚱S基或烯丙基。
優(yōu)選地，所述豆腐果苷類似物為式III所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙?；换蚓鶠樾挛祯；换蚓鶠楸郊柞；?；或均為芐基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或均為乙?；鶗r(shí)，Ra為氧的已知化合物。
更優(yōu)選地，R1，R2，R3，R4均為H，Ra為NOCH3，其結(jié)構(gòu)式如下
優(yōu)選地，所述豆腐果苷類似物為式IV所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙?；?；或均為新戊酰基；或均為苯甲?；?；或均為芐基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或乙?；鶗r(shí)，Ra為氧的已知化合物。
優(yōu)選地，所述豆腐果苷類似物為式VI所示 R1，R2，R3自獨(dú)立地是H，或均為乙?；?；或均為新戊?；?；或均為苯甲?；换蚓鶠槠S基；或均為烯丙基。
優(yōu)選地，所述豆腐果苷類似物為式VII所示
R1，R2，R3自獨(dú)立地是H；或均為乙酰基；或均為新戊酰基；或均為苯甲?；?；或均為芐基；或均為烯丙基。
更優(yōu)選地，R1，R2，R3或各自獨(dú)立地是H，Ra為O，結(jié)構(gòu)式為 優(yōu)選地，所述豆腐果苷類似物為式VIII所示 其中R1，R2，R4，R6，R7，R8，R9各自獨(dú)立地是H，或均為乙?；换蚓鶠樾挛祯；?；或均為苯甲酰基；或均為芐基；或均為烯丙基。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于治療老年癡呆癥的藥物組合物。
一種用于治療老年癡呆癥的藥物組合物，它含有上述的豆腐果苷類似物作為有效成分以及藥學(xué)上可接受的輔助劑。
本發(fā)明的另一目的是提供上述豆腐果苷類似物在在制備抗老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。
采用現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的活性測(cè)試方法[見Ellman等“A New and Rapid ColorimetricDetermination of Acetylcholineterase Activity”，Biochem.Pharm.1，88，(1961)]。對(duì)式I所示豆腐果苷類似物作為乙酰膽堿抑制劑的活性進(jìn)行測(cè)試，通過乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶抑制體外測(cè)試表明，豆腐果苷本身抗乙酰膽堿作用很弱，然而式I所示豆腐果苷類似物具有顯著的抗乙酰膽堿活性，其乙酰膽堿酯酶IC50均優(yōu)于對(duì)照物加蘭他敏(IC50＝0.55μM)；同時(shí)對(duì)丁酰膽堿酯酶抑制作用非常弱因而表現(xiàn)出很好的選擇性。因此式I所示的豆腐果苷類似物可用于制備治療老年癡呆癥的藥物。
因此，本發(fā)明提供了如式I所示豆腐果苷類似物制備抗老年癡呆癥藥物的用途。
本發(fā)明提供的新的豆腐果苷類似物及其制備抗老年癡呆癥藥物的用途填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的空白，為開發(fā)新一代毒副作用低、療效高的治療老年癡呆癥的藥物開拓了新的思路。


下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步闡述。
圖1是部分化合物(8d和9bd)乙酰膽堿酯酶抑制曲線示意圖；圖2是化合物8d和9bd.的乙酰膽堿酯酶抑制動(dòng)力學(xué)雙倒數(shù)圖，其中a代表化合物8d；b代表化合物9bd。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明中的豆腐果苷類似物，部分是由天然豆腐果苷經(jīng)過化學(xué)修飾(即對(duì)醛基和糖上羥基進(jìn)行改造，例如在醛基上引入含氮的基團(tuán)而得到的；部分是由對(duì)羥基苯甲醛為起始原料合成得到。
本發(fā)明的豆腐果苷類似物的制備如以下反應(yīng)式1-2所示反應(yīng)式1
2a R1，R2，R3，R4＝Ac 3a R1，R2，R3，R4＝H R5＝NHCSNH22b R1，R2，R3，R4＝Bz 3b R1，R2，R3，R4＝H，R5＝NHCONH22c R1，R2，R3，R4＝Bn 3c R1，R2，R3，R4＝H，R5＝OH2d R1，R2＝C(CH3)2；R3，R4＝H 3d R1，R2，R3，R4＝H，R5＝OCH32e R1，R2＝H；R3，R4＝PhCH3ab R1，R2，R3，R4＝Ac，R5＝NHCONH22f R4＝PO(OCH3)2；R1，R2，R3＝H3ac R1，R2，R3，R4＝Ac，R5＝OH2g R4＝C(Ph)3；R1，R2，R3＝H 3ad R1，R2，R3，R4＝Ac，R5＝OCH32h R4＝H；R1，R2，R3＝Ac 3ba R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝NHCSNH23bb R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝NHCONH23bc R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝OH3bd R1，R2，R3，R4＝Bz，R5＝OCH33da R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝NHCSNH23db R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝NHCONH23dc R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝OH3dd R1，R2＝(CH3)2C，R3，R4＝H，R5＝OCH3反應(yīng)式2
其中R5＝NHCSNH2或NHCONH2或OH或OCH3。
以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例12，3，4，6-O-四乙酰基豆腐果苷(2a)合成先將1.0g豆腐果苷(1，3.5mmol)、無水吡啶2mL加入到圓底燒瓶中，攪拌至完全溶解后，滴加2.5g乙酸酐(25mmol)，室溫反應(yīng)12h。倒入50ml冰水?dāng)嚢璋胄r(shí)后，分層萃取氯仿層。冰水洗滌數(shù)次后，無水硫酸鎂干燥，旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到淡黃色糖漿狀物質(zhì)，95％乙醇重結(jié)晶得白色固體粉末2a，產(chǎn)率56.1％。熔點(diǎn)135-136℃。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR，MS和元素分析數(shù)據(jù)確定。
Anal.Calcd for C21H24O11C55.75，H5.35；foundC55.79，H5.26；IR(KBr，cm-1)υ1752(C-O)，1693(CHO)，1601(Ph)，1506(Ph)，1224(C-O)，1157(C-O-C)，1127(C-O-C)，1085(C-O-C)，914(糖基)，876(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.91(s，1H，CHO)，7.85(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.13(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.75(t，1H，J＝2.9Hz，H-3’)，5.48(d，1H，J＝8.1Hz，H-1’)，5.19(dd，1H，J＝3.0Hz，8.1Hz，H-2’)，5.16(dd，1H，J＝2.8Hz，9.9Hz，H-4’)，4.27-4.32(m，1H，H-5’)，4.24-4.26(m，2H，H-6’)，2.04，2.05，2.08，2.18(4×s，4×3H，4×CH3CO)；ACPI-MSm/z469.9(M+NH4+，100).
實(shí)施例22，3，4，6-O-四苯甲?；垢?2b)合成先將1.0g豆腐果苷(1，3.5mmol)溶于20mL氯仿中。室溫?cái)嚢柘?，依次加?.5g苯甲酰氯(25mmol)，無水吡啶4mL。后室溫反應(yīng)24h。加入10mL甲醇終止反應(yīng)，攪拌10分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑得油狀物。加入氯仿稀釋，分別用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，冰水洗滌。減壓濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析分離得白色固體粉末2b，產(chǎn)率為47.7％。熔點(diǎn)182.9-183.2℃。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR，MS和元素分析數(shù)據(jù)確定。
Anal.Calcd for C41H32O11C70.28，H4.60，foundC70.37，H4.49；IR(KBr，cm-1)υ1752(C-O)，1690(CHO)，1601(Ph)，1508(Ph)，1451，1266(C-O)，1157(C-O-C)，1108(C-O-C)，1025(糖基)，832(Ph)，710，619(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ ppm9.86(s，1H，CHO)，7.90-8.04，7.29-7.65(m，20H，ArH)，7.72(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，7.16(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，6.32(t，1H，J＝3.0Hz，H-3’)，5.82(d，1H，J＝7.8Hz，H-1’)，5.69(dd，1H，J＝3.1Hz，7.8Hz，H-2’)，5.61(dd，1H，J＝9.7Hz，2.8Hz，H-4’)，4.71-4.78(m，2H，H-6’，H-5’)，4.50(dd，1H，H-6’)；ACPI-MSm/z 700.9(M+H，3)，717.9(M+NH4+，100)實(shí)施例32，3，4，6-O-四芐基豆腐果苷(2c)合成將3.5mmol豆腐果苷(1)，四丁基溴化銨0.43g(1.33mmol)，粉末狀氫氧化鉀7.0g(30mmol)，加入到盛有10mL二氯甲烷的50mL圓底燒瓶中攪拌10分鐘后，緩慢滴加含芐溴2.4ml的二氯甲烷5mL，室溫下攪拌反應(yīng)5h。后將反應(yīng)物倒入50ml冰水中，萃取分離有機(jī)相，水洗數(shù)次后，加入無水硫酸鎂干燥，減壓蒸干溶劑得淺黃色糖漿。再用硅膠柱層析分離得無色透明糖漿物，產(chǎn)率56.2％。
IR(KBr，cm-1)υ1693(CHO)，1601(Ph)，1505(Ph)，，1308(C-O)，1245(C-O-C)，1161(C-O-C)，1094(糖基)，832(Ph)，737，698(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.86(s，1H，CHO)，7.29-7.65，7.90-8.04(m，20H，ArH)，7.72(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.16(d，2H，J＝8.6 Hz，ArH)，6.32(t，1H，J＝3.7Hz，H-3’)，5.88(d，1H，J＝7.8Hz，H-1’)，5.70(dd，1H，J＝3.5Hz，8.8Hz，H-2’)，4.47-4.53(m，1H，H-6’)，4.71-4.78(m，2H，H-6’，H-5’)，5.59-5.63(dd，1H，J＝8.7Hz，12.6Hz，H-4’)；ACPI-MSm/z 764.1(M+NH4+，100).
實(shí)施例42，3-O-異丙叉基豆腐果苷(2d)合成取0.3g碘溶解于50mL干燥丙酮中，待溶解完全后加入1.0g豆腐果苷(1，3.5mmol)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h。溶液變透明澄清，加入稀硫代硫酸鈉溶液除去多余的碘，最后得到無色透明溶液。用二氯甲烷萃取，水洗數(shù)次后，無水硫酸鈉干燥，蒸干溶劑得淺黃色固體。再用硅膠柱層析分離得白色固體粉末2d，產(chǎn)率為70.3％，mp.153-154℃。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR(1H，13C，COSY)，MS和元素分析數(shù)據(jù)確定。
Anal.Calcd for C16H20O7C59.25，H6.22，foundC59.13，H6.26；IR(KBr，cm-1)υ3456(O-H)，1752(C-O)，1683(CHO)，1602(Ph)，1509(Ph)，1387(CH3)，1254(C-O)，1216(C-O-C)，1141(C-O-C)，1098(C-O-C)，967(糖基)，836(Ph)；1H NMR(CDCl3，500MHz)δppm9.90(s，1H，CHO)，7.85(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.11(d，J＝8.6 Hz，2H，ArH)，5.53(d，1H，J＝9.6 Hz，H-1’)，4.70(dd，1H，J＝2.9Hz，6.8Hz，H-3’)，4.47(dd，1H，J＝6.7，3.0Hz，H-2’)，4.16(dd，1H，J＝5.9Hz，9.6Hz，H-4’)，3.88-3.92(m，1H，H-5’)，3.80-3.85，(dd，1H，J＝8.4 Hz，11.8Hz，H-6’)，3.69-3.75(dd，1H，J＝7.1Hz，11.8Hz，H-6’)，1.45(s，3H，-C-CH3)，1.58(s，3H，-C-CH3)；13C NMR(CDCl3，125MHz)δppm190.12，161.09，131.99，131.22，116.22，110.84，96.40，75.33，73.62，73.47，65.24，62.97，26.69，24.89；ESI-MSm/z 323(M-1，100).
實(shí)施例54，6-O-芐叉基豆腐果苷(2e)合成取豆腐果苷1.0g(3.3mmol)，苯甲醛二甲縮醛0.5mL(3.5mmol)，無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)15mL，對(duì)甲基苯磺酸10mg，50℃攪拌反應(yīng)過夜。后將反應(yīng)液倒入100mL冰水中得到白色沉淀。過濾，抽干，石油醚洗滌后得白色固體粉末0.9g，產(chǎn)率70％。mp.175.8℃。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，1HNMR，F(xiàn)AB-MS和元素分析數(shù)據(jù)確定。
Anal.Calcd for C20H20O7C 64.51，H 5.41，foundC 64.69，H 5.29；IR(KBr，cm-1)υ3443(O-H)，1690(CHO)，1603(Ph)，1410(Ph)，1249(C-O)，1216(C-O-C)，1076(C-O-C)，1017(C-O-C)，836，617；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm9.88(s，1H，CHO)，7.86(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，7.44-7.46(m，2H，ArH)，7.35-7.38(m，3H，ArH)，7.24(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，5.62(s，1H，CH)，5.37，5.40(d，1H，J＝7.9Hz，H-1’)，5.32-5.33(m，1H，H-2’)，4.24-4.28(m，1H，H-3’)，4.10-4.14(m，2H，H-5’，H-4’)，3.62-3.71(m，2H，H-6’)；FAB-MSm/z 373(M+1).
實(shí)施例66-O-磷酸二甲酯基豆腐果苷(2f)合成稱取3mmol(2d)溶于10mL氯仿中，后加入3mmol三乙胺，冰浴下攪拌30min，逐滴加入3mmol三氯氧磷，冰浴下繼續(xù)反應(yīng)2h，后過濾除沉淀，濾液減壓濃縮后，加入丙酮10mL，水4mL，碳酸氫鈉0.8g，室溫?cái)嚢?h，再次減壓濃縮，加入氯仿萃取，無水硫酸鎂干燥，減壓蒸干溶劑得橙紅色固體，經(jīng)硅膠柱層析得淺黃色固體，產(chǎn)率83.3％。熔點(diǎn)180-181℃。
IR(KBr，cm-1)υ3315(OH)，1169(CHO)，1604(Ph)，1508(Ph)，1300(OCH3)，1254(C-O)，1216(C-O-C)，1170(C-O-C)，1068(C-O-C)，1010(糖基)，860(Ph)；1H NMR；(d6-DMSO，500MHz)δppm9.88(s，1H，CHO)，7.86(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，7.25(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，5.73(s，0.5H，OH)，5.71(s，0.5H，OH)，5.53(s，0.5H，OH)，5.50(s，0.5H，OH)，5.38(d，1H，J＝8.0Hz，H-1’)，4.42-4.46(m，3H，H-3’，H-4’，H-5’)，4.12-4.14(m，2H，H-6’)，3.76(s，3H，OCH3)，3.72(s，3H，OCH3)，3.62-3.67(m，1H，H-2’)；13C NMR(d6-DMSO，125MHz)δppm55.10，55.17，63.21，67.52，68.93，69.38，76.25，97.97，116.38，130.80，131.58，161.67，191.44；31P NMR(1∶10 H3PO4水溶液作外標(biāo))δ2.38ppm；ESI-MSm/z 393(M+1，25)。
實(shí)施例72，3，4-O-三乙?；垢?2h)合成I.稱取0.01mol豆腐果苷溶于20mL無水吡啶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?0min后，加入0.015mol三苯甲基氯，繼續(xù)室溫反應(yīng)20h。TLC跟蹤至反應(yīng)完全。后倒入冰水中，氯仿萃取，分離有機(jī)相，用1M鹽酸、水洗數(shù)次后，無水硫酸鎂干燥，減壓旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到棕黃色糖漿狀物質(zhì)，后經(jīng)硅膠柱層析分離得白色固體粉末(2g)3.54g，產(chǎn)率67.5％，mp 148-149℃。
IR(KBr，cm-1)υ3405(O-H)，2914，1691(CHO)，1590(Ph)，1424(Ph)，1241(C-O)，1066(C-O-C)，708(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.78(s，1H，CHO)，7.72(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.30-7.38(m，5H，ArH)，7.05-7.20(m，12H，ArH)，5.26(d，1H，J＝7.9Hz，H-1’)，4.18(s，1H，CH)，3.85-3.88(m，1H，CH)，3.68(d，1H，J＝5.6Hz，CH)，3.55-3.58(m，1H，CH)；3.32-3.37(m，2H，2×CH)；3.08(s，1H，-OH)；2.92(s，2H，2×-OH)；FAB-MSm/z 525(M+1)，547(M+Na).
II.取5mmol 2g溶于5mL乙酸酐中，后加入1mL吡啶，室溫?cái)嚢?2h，TLC跟蹤至反應(yīng)完全。后倒入50mL冰水中，用氯仿萃取，分離有機(jī)相。水洗數(shù)次后，無水硫酸鎂干燥，減壓旋干溶劑，得到淡黃色糖漿狀物。未經(jīng)純化直接下步反應(yīng)。
III.將II中得到的產(chǎn)物直接溶于20mL無水甲醇中，完全溶解后，加入碘300mg，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，TLC跟蹤反應(yīng)基本完全。加入稀硫代硫酸鈉溶液除去多余的碘，得到無色透明溶液。用氯仿萃取，水洗，無水硫酸鈉干燥，蒸干溶劑得黃色糖漿。后經(jīng)硅膠柱層析分離得淺黃色糖漿(2h)，1.20g，產(chǎn)率58.8％，熔點(diǎn)140-141℃。
IR(KBr，cm-1)υ3471(O-H)，2947，1757(CHO)，1590(Ph)，1391(Ph)，1232(C-O)，1066(C-O-C)，841，625(Ph)；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.83(s，1H，CHO)，7.76(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.05(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，5.64(s，1H，CH)，5.37(d，1H，J＝8.1Hz，H-1’)，5.00(dd，1H，J＝5.5Hz，8.3Hz，CH)，4.32-4.36(m，1H，CH)，4.14-4.17(m，1H，CH)，4.02-4.05(m，1H，CH)；3.80(dd，1H，J＝7.0Hz，9.6 Hz，CH)，2.09，2.06，2.04(3×s，3×3H，3×CH3CO)；FAB-MSm/z 411(M+1).
實(shí)施例81-(4-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)硫代氨基脲(3aa)取2a(0.45g，1mmol)溶解于15mL乙醇中，另稱取氨基硫脲(0.09g，1mmol)加入到上述溶液中。回流攪拌反應(yīng)3小時(shí)后，過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后得到固體。乙醚洗滌，95％乙醇重結(jié)晶，干燥得純品3aa。白色固體粉末，產(chǎn)率95.0％，熔點(diǎn)135.6-136.3℃.
Anal.calcd C50.28，H5.18，N8.00；FoundC49.95，H4.910，N7.749；IR(KBr，cm-1)υ3452，3301，1753，1579，503，1409，1226，1092，1046，714；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δppm10.04(s，1H，NH)，7.89(s，1H，-CH＝N-)，7.61(d，2H，J＝8.7Hz，Ar-H)，7.19(s，1H，NH)，7.04(d，2H，J＝8.7Hz，Ar-H)，6.49(s，1H，NH)，5.75(t，1H，J＝3.0Hz，CH)，5.42(d，1H，J＝8.1Hz，H-1’)，5.17(dd，1H，J＝8.1Hz，3.1Hz，CH)，5.073(dd，1H，J＝9.6Hz，2.7Hz，CH)，4.28(d，1H，J＝4.2Hz，CH)，4.25(s，2H，2×CH)，2.18，2.09，2.06，2.04(4×s，4×3H，4×CH3CO)；13C NMR178.5，171.3，171.2，170.3，158.3，143.2，129.8，129.6，158.3，117.4，96.5，70.8，69.7，68.1，66.7，62.6，26.2，21.3，21.2；ESI-MSm/z 526(M+1，33.5)，548(M+Na，100).
實(shí)施例91-(4-(2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)氨基脲(3ab)取2a(0.45g，1mmol)溶解于15mL乙醇中，另稱取鹽酸羥胺(0.11g，1mmol)用氫氧化鈉溶液調(diào)pH＝6-7后加入到上述溶液中。回流攪拌反應(yīng)6小時(shí)后，冷卻過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后得到固體。乙醚洗滌，95％乙醇重結(jié)晶，干燥得純品3ab。白色固體粉末，產(chǎn)率85.1％，熔點(diǎn).m.p.211.4-211.9℃.IR(KBr，cm-1)υ3423，1716，1572，1409，1232，1093，1052；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm8.79(s，1H，N-H)，7.59(s，1H，-CH＝N)，7.58(d，2H，J＝8.7 Hz，ArH)，7.05(d，2H，J＝8.7Hz，ArH)，5.75(t，1H，J＝2.7Hz，CH)，5.42(d，1H，J＝8.4Hz，H-1′)，5.18(dd，1H，J＝2.7Hz，8.7Hz，CH)，5.08(dd，1H，J＝2.7Hz，8.3Hz，CH)，4.26-4.29(m，3H，3×CH)，2.19，2.10，2.07，2.05(4×s，12H，4×CH3-C＝O)；13C-NMR(CDCl3，75MHz)δppm171.9，171.1，169.5，159.4，154.8，141.8，129.2，128.7，117.5，97.3，71.9，69.2，67.6，66.5，63.2，21.2，21.1，21.0；ESI-MSm/z 510(M+1，77.4)，532(M+Na，100)。
實(shí)施例101-(4-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)羥胺(3ac)取2a(0.45g，1mmol)溶解于15mL乙醇中，另稱取鹽酸羥胺(0.07g，1mmol)用氫氧化鈉溶液調(diào)pH＝6-7后加入到上述溶液中。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后得到固體。乙醚洗滌，95％乙醇重結(jié)晶，干燥得純品3ac。白色固體粉末，產(chǎn)率78.2％，熔點(diǎn)161.0-161.9℃.IR(KBr，cm-1)υ3454，1752，1687，1376，1224，1099，1054，952；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm8.07(s，1H，-CH＝N-)，7.50(d，J＝8.6Hz，2H，ArH)，6.98(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.27-5.31(m，2H，2×CH)，5.10-5.20(m，2H，2×CH)，4.28(dd，1H，J＝7.0Hz，12.3Hz，CH)，4.17(dd，1H，J＝10.3Hz，12.3Hz，CH)，3.86-3.91(m，1H，CH)，2.04，2.05，2.06，2.07(4×s，4×3H，4×CH3-C＝O)；ESI-MSm/z 468(M+1，5)，490(M+Na，100).
實(shí)施例111-(4-(2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃阿洛糖基)苯亞甲基)甲氧基胺(3ad)以甲氧基胺鹽酸鹽為原料，合成步驟同3ac。白色固體粉末，產(chǎn)率67.5％.熔點(diǎn)131.8-132.0℃.IR(KBr，cm-1)υ1748，1608，1509，1236，1046，917；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm8.0(s，1H，-CH＝N)，7.50(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，6.97(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.26-5.31(m，2H，2×CH)，5.09-5.19(m，2H，2×CH)，4.26(dd，1H，J＝7.0Hz，12.3Hz，CH)，4.17(dd，1H，J＝10.4Hz，12.4Hz，CH)，3.95(s，3H，OCH3)，3.85-3.91(m，1H，CH)，2.04，2.05，2.06，2.08(4×s，4×3H，4×CH3-C＝O)；ESI-MSm/z 482(M+1，6)，504(M+Na，100).
實(shí)施例12對(duì)甲?；椒?2，3，4，6-O-四乙?；?β-D-葡萄糖苷(6b)合成I取葡萄糖5g溶解于20ml吡啶中，攪拌至完全溶解后，加入乙酸酐25mL，室溫?cái)嚢?h，后加入少量冰水?dāng)嚢?0min，再用50mL氯仿稀釋。分離有機(jī)相，依次用水洗，2M硫酸，飽和碳酸鈉，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干溶劑得無色透明糖漿。后用95％乙醇洗滌得白色固體。
II取5g全乙?；咸烟?I中產(chǎn)物)，溶于20mL二氯甲烷中，冰浴0℃攪拌10min后，緩慢滴加33％氫溴酸冰醋酸溶液12mL。改為室溫?cái)嚢?h。二氯甲烷稀釋后，倒入100mL冰水中。分離有機(jī)相，依次用水洗，飽和碳酸氫鈉，飽和食鹽水洗滌，減壓蒸干溶劑得棕黃色糖漿，石油醚和乙醚洗滌得白色固體粉末，α-溴代-2，3，4，6-四-O-乙?；拎咸烟?，熔點(diǎn).87-89℃(lit.88-89℃)。
III取對(duì)羥基苯甲醛2mmol，氫氧化鈉2.1mmol，四丁基溴化銨0.2mmol，水10ml，氯仿10ml于100ml三口瓶中，50℃攪拌至完全溶解，后緩慢滴加含溴代糖2mmol的氯仿溶液25ml，繼續(xù)反應(yīng)5-12h。分離有機(jī)相，稀氫氧化鈉洗滌，水洗，無水硫酸鎂干燥，減壓蒸干溶劑，經(jīng)硅膠柱層析得到6b，白色固體，產(chǎn)率約50％，熔點(diǎn)142-143℃。
Anal.Calcd for C12H24O11C55.75，H5.35；foundC55.56，H5.48；IR(KBr，cm-1)υ2963，2746；1750；1737；1692；1601；1222；1H NMR(CDCl3，300MHz)δppm9.90(s，1H，CHO)，7.83(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.10(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，5.46-5.54(m，2H，2×CH)，5.17(d，1H，J＝8.1Hz，H-1’)，5.10-5.14(m，1H，CH)，4.09-4.25(m，3H，H-5’，H-6’)，2.19(s，3H，CH3CO)；2.06(s，2×3H，2×CH3CO)；2.02(s，3H，CH3CO)；ACPI-MSm/z 469.8(M+NH4+，100)同上述方法制備得到6a，6e.
實(shí)施例13對(duì)甲?；椒?2，3，4-O-三苯甲酰基-β-D-核糖苷(6d)合成I取核糖5g溶解于20mL吡啶中，攪拌至完全溶解后，冰浴下滴加苯甲酰氯10mL，室溫?cái)嚢?4h，后加入少量冰水?dāng)嚢?0min，再用氯仿100mL稀釋。分離有機(jī)相，依次用水洗，稀酸，飽和碳酸鈉水溶液，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干溶劑得無色透明糖漿。
II取5g保護(hù)糖(I中產(chǎn)物)，溶于20mL CH2Cl2中，冰浴0℃攪拌10min后，緩慢滴加33％氫溴酸的冰醋酸溶液12mL。后改為室溫?cái)嚢?0h。50mL二氯甲烷稀釋后，倒入100ml冰水中。分離有機(jī)相，依次用水洗，飽和碳酸氫鈉，飽和食鹽水洗滌，減壓蒸干溶劑得棕黃色糖漿。后用石油醚洗滌得白色固體粉末，溴代-2，3，4，-三-O-苯甲酰基吡喃核糖，熔點(diǎn)120-122℃(lit.121-122℃)。
III取對(duì)羥基苯甲醛3mmol，氫氧化鈉3mmol，四丁基溴化銨1mmol，水10mL，氯仿10mL于100mL三口瓶中，50℃攪拌至完全溶解，后緩慢滴加含溴代糖2mmol的氯仿溶液25mL，繼續(xù)反應(yīng)24h。分離有機(jī)相，1M氫氧化鈉溶液洗滌，水洗數(shù)次，無水硫酸鎂干燥，減壓蒸干溶劑，經(jīng)硅膠柱層析得到6d，白色固體粉末，產(chǎn)率27％，熔點(diǎn).129-130℃。
Calcd for C33H26O9C 69.96，H 4.63；foundC 70.03，H 4.54；IR(KBr，cm-1)υ1727(C-O)，1694(CHO)，1600(Ph)，1505(Ph)，1260(C-O)，1103(C-O-C)，1025(糖基)，859(Ph)，707(Ph)；1HNMR(CDCl3，300MHz)δppm9.83(s，1H，CHO)，7.94-7.96(m，4H，Ar-H)，7.77-7.80(m，4H，Ar-H)，7.38-7.49(m，4H，Ar-H)，7.17-7.22(m，7H，Ar-H)，5.92(t，1H，J＝3.6Hz，H-2’)，5.86(d，1H，J＝3.3Hz，H-1’)，5.63(d，1H，J＝7.4 Hz，H-3’)，5.62(d，1H，J＝6.3Hz，H-4’)，4.22(d，1H，J＝12.7Hz，H-5’)，4.09(dd，1H，J＝1.8Hz，12.7Hz，H-5’)；ACPI-MSm/z 583.9(M+NH4+，100)使用上述通法合成6c.
實(shí)施例14對(duì)甲?；椒?O-β-D-核糖苷(8d)合成稱取(6d)0.57g(1mmol)溶于15ml無水甲醇中，后加入配制好的含0.2mol/L甲醇鈉的甲醇溶液15mL，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)20h。后倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯多次萃取。減壓濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析分離得8b，淺黃色固體，產(chǎn)率85.3％。熔點(diǎn)162-163℃。
IR(KBr，cm-1)υ3405；1683；1582；1415；1240；1109；1000；825；650；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm9.85(s，1H，CHO)，7.84(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.17(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，5.41(d，1H，J＝5.2Hz，H-1’)，5.22(s，1H，OH)，5.03(s，1H，OH)，3.89(s，1H，CH)，3.59-3.69(m，4H，4×CH)；13C NMR(DMSO-d6，75MHz)δppm192.46，162.48，133.04，132.61，131.45，117.43，116.80，99.09，71.04，69.05，68.58，65.05；FAB-MSm/z 255(M+1，3)，277(M+Na，15).
實(shí)施例151-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)硫代氨基脲(9ba)白色固體粉末，產(chǎn)率92.6％，熔點(diǎn)211.5-211.8℃.IR(KBr，cm-1)υ3425，1569，1500，1412，1201，1076，956；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm11.31(s，1H，N-H)，8.10(s，1H，N-H)，7.97(s，1H，-CH＝N)，7.92(s，1H，N-H)，7.71(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.01(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，4.92(d，1H，J＝7.0Hz，H-1’)，3.69-3.69(m，1H，CH)，3.43-3.46(m，1H，CH)，3.15-3.35(m，4H，4×CH)；ESI-MSm/z 358(M+1，5)，380(M+Na，100).
實(shí)施例161-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)氨基脲(9bb)白色固體粉末，產(chǎn)率92.6％，熔點(diǎn)206.9-207.8℃.IR(KBr，cm-1)υ3381，2917，1676，1579，1507，1457，1243，1172，1034，926，872；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm10.09(s，1H，N-H)，7.77(s，1H，-CH＝N)，7.62(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.00(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，6.42(brs，2H，N-H)，4.89(d，1H，J＝7.0 Hz，H-1’)，3.69-3.69(m，1H，CH)，3.42-3.48(m，1H，CH)，3.15-3.35(m，4H，4×CH)；ESI-MSm/z 342(M+1，3)，364(M+Na，100).
實(shí)施例171-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)羥胺(9bc)稱取1mmol 8b溶于15mL甲醇中，另取鹽酸羥胺1.1mmol(0.08g)用氫氧化鈉水溶液中和至pH＝6-7，緩慢滴加到上述甲醇溶液中，45℃反應(yīng)2h后，靜置冷卻出現(xiàn)淺黃色固體。抽濾，乙醇洗滌，真空干燥，得淺黃色固體8bc，產(chǎn)率92.6％。熔點(diǎn)162-163℃。
IR(KBr，cm-1)υ3384，2913，1606，1513，1242，1082，965；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm11.02(brs，1H，-OH)，8.05(s，1H，-CH＝N)，7.50(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.02(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，4.89(d，1H，J＝7.0Hz，H-1’)，3.31-3.36(m，2H，2×CH)，3.23-3.29(m，2H，2×CH)，3.13-3.19(m，2H，2×CH)；ESI-MSm/z 300(M+1，3)，322(M+Na，100).
實(shí)施例181-(4-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯亞甲基)甲氧胺(9bd)白色固體粉末，產(chǎn)率92.6％，熔點(diǎn)102.7-103.7℃.IR(KBr，cm-1)γ3355，2930，1608，1509，1236，1046，916；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm8.14(s，1H，-CH＝N-)，7.52(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.03(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，4.91(d，1H，J＝7.3Hz，H-1’)，3.84(s，3H，OCH3)，3.68(brs，0.5H，-OH)，3.65(brs，0.5H，-OH)，3.41-3.47(m，1H，CH)，3.17-3.35(m，5H，5×CH)；ESI-MSm/z 314(M+1，8)，336(M+Na，100).
實(shí)施例19豆腐果苷及其類似物膽堿酯酶抑制活性測(cè)試取5支1.5mL分別裝有840μL0.1MpH為8.0的磷酸鹽緩沖液離心管，依次加入0，5，10，20，40，50μL的1.0mM的樣品(豆腐果苷及其類似物)二甲基亞砜(DMSO)溶液，并用DMSO加至890μL。分別加入50μL 4mg/mL DTNB(5，5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸))和10μL乙酰膽堿酯酶溶液，并在37℃保溫15min，立刻加入50μL 2mg/mL硫代乙酰膽堿溶液，搖勻后測(cè)其在λ＝412mm處的吸光度(AN)。參比用0.1M pH8.0磷酸鹽緩沖液，以未加樣品所測(cè)的吸光度(ACONTROL)值作為100個(gè)活力單位相對(duì)酶活力Ar＝(AN/ACONTROL)×100
然后以酶的相對(duì)活力對(duì)抑制劑濃度作圖，根據(jù)抑制曲線求得各個(gè)化合物的IC50值(抑制酶活力50％時(shí)的抑制濃度)。
如圖1所示中8d及9bd的抑制曲線圖，由圖1可分別讀出抑制活力50％時(shí)對(duì)應(yīng)的化合物抑制濃度，分別是0.20μM，0.49μM。
表一部分豆腐果苷類似物膽堿酯酶(AChE及BuChE)抑制活性(IC50，μM).


and表示在樣品濃度為500μM范圍內(nèi)未檢測(cè)到.b文獻(xiàn)報(bào)道IC50值0.8-0.3μM.
如表一所示，部分豆腐果苷類似物具有較強(qiáng)的乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制活性，如化合物6b，7bc，7db，7dd，8d，9bc，9bd，IC50值均小于10μM，尤其是化合物8d和9bd，IC50值小于對(duì)照藥加蘭他敏氫溴酸鹽(IC50＝0.55μM)。除苯甲?；擒栈衔锿猓渌衔锒紝?duì)丁酰膽堿酯酶(BuChE)的作用非常弱，因而具有很高的選擇性。
實(shí)施例20部分豆腐果苷類似物對(duì)乙酰膽堿酯酶抑制動(dòng)力學(xué)測(cè)試乙酰膽堿酯酶的動(dòng)力學(xué)測(cè)試方法見J.Massoulie，S.Bon，I.Silman.Progress.of BrainResearch.98(1993)139-146。取5支1.5mL分別裝有840，850，855，860，870μL磷酸鹽緩沖液的離心管，加入一定量的樣品DMSO溶液，并用DMSO加至DMSO占總體積5％，分別加入50μL 4mg/mL DTNB和10μL乙酰膽堿酯酶溶液，并在37℃恒溫水浴槽中保溫15分鐘，再分別加入50，40，35，30，20μL 2mg/mL硫代乙酰膽堿溶液。用紫外分析測(cè)試儀檢測(cè)412nm處乙酰膽堿酯酶催化水解硫代乙酰膽堿的時(shí)間掃描曲線。曲線的斜率即為反應(yīng)的初速度[V]，然后以1/[V]對(duì)1/[S]作圖，以未加樣品的為控制線，如圖2所示。
由圖2可知雙倒數(shù)所做的直線束延長(zhǎng)后交于一點(diǎn)，且交點(diǎn)落在第二象限(8d)或第三象限內(nèi)(9bd)，并不在X或Y軸上，故可判斷化合物8d和9bd均屬混合型抑制劑。說明該類化合物既能直接與乙酰膽堿酯酶的活性部位結(jié)合，也能和酶的其他部位結(jié)合從而抑制乙酰膽堿酯酶的活性。
權(quán)利要求
1.式I所示的豆腐果苷類似物 其中，式I中的Ra表示為Ra＝O或NNHCSNH2或NNHCONH2或NHCSNH2或NHCONH2或NOH或NOCH3，Rb表示為全保護(hù)或部分保護(hù)或未保護(hù)的五碳糖、六碳糖、二糖中的一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特征在于所述豆腐果苷類似物為式II所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙?；换蚓鶠樾挛祯；?；或均為苯甲?；?；或均為芐基；或均為烯丙基；或R1和R2為異丙叉基，R3，R4為H；或R1，R2為H，R3和R4為芐叉基；或R4為三苯甲基或磷酸酯基或?qū)妆交撬狨セ?，R1，R2，R3為H；或R4為H，R1，R2，R3為乙酰基或新戊?；虮郊柞；蚱S基或烯丙基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特征在于所述豆腐果苷類似物為式III所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙酰基；或均為新戊酰基；或均為苯甲酰基；或均為芐基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或均為乙?；鶗r(shí)，Ra為氧的已知化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的豆腐果苷類似物，其特征在于R1，R2，R3，R4均為H，Ra為NOCH3，其結(jié)構(gòu)式如下
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特征在于所述豆腐果苷類似物為式IV所示 其中R1，R2，R3，R4均為H；或均為乙酰基；或均為新戊酰基；或均為苯甲酰基；或均為芐基；或均為烯丙基；但不包括R1，R2，R3，R4均為H或均為乙?；鶗r(shí)，Ra為氧的已知化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特征在于所述豆腐果苷類似物為式VI或VII所示 R1，R2，R3各自獨(dú)立地是H，或均為乙?；?；或均為新戊酰基；或均為苯甲?；?；或均為芐基；或均為烯丙基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的豆腐果苷類似物，其特征在于R1，R2，R3或各自獨(dú)立地是H，Ra為O，結(jié)構(gòu)式為
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豆腐果苷類似物，其特征在于所述豆腐果苷類似物為式VIII所示 其中R1，R2，R4，R6，R7，R8，R9各自獨(dú)立地是H，或均為乙?；换蚓鶠樾挛祯；?；或均為苯甲酰基；或均為芐基；或均為烯丙基。
9.一種用于治療老年癡呆癥的藥物組合物，它含有以權(quán)利要求1-8任一所述的豆腐果苷類似物作為有效成分以及藥學(xué)上可接受的輔助劑。
10.權(quán)利要求1-8任一所述的豆腐果苷類似物在制備抗老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一類新的具有對(duì)乙酰膽堿酯酶高選擇性抑制作用的式I的豆腐果苷類似物，其中，式I中的R
文檔編號(hào)A61P25/00GK101029064SQ20071002750
公開日2007年9月5日 申請(qǐng)日期2007年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月11日
發(fā)明者聞環(huán), 王子厚, 周亞耀, 林崇懶, 葛輝, 彭文烈, 宋化燦, 曹日暉, 戴曉暢, 胡利昆, 張利生, 王艷華 申請(qǐng)人:昆明貝克諾頓制藥有限公司