專利名稱：催產(chǎn)素和/或血管升壓素的拮抗劑在輔助生殖中的應用的制作方法
催產(chǎn)素和/或血管升壓素的拮抗劑在輔助生殖中的應用
本發(fā)明涉及催產(chǎn)素拮抗劑或催產(chǎn)素和血管升壓素拮抗劑或血管升壓
素拮抗劑或它們的藥用鹽，例如阿托西班、barusiban或瑞考伐普坦或它們 與其它物質(zhì)的組合用于制備藥物的應用，其主要的作用模式是抑制哺乳動 物的非妊娠子宮中的催產(chǎn)素和/或血管升壓素受體，導致胚胎移植中的子 宮感受性的改善。本發(fā)明還涉及上述物質(zhì)用于制備藥物的應用，所述藥物 在經(jīng)歷人工授精程序的受試者中調(diào)節(jié)子宮收縮性。
將輔助生殖技術應用于人以治療不育和用于動物以產(chǎn)生妊娠。不育癥 影響著世界范圍內(nèi)約10%的人類夫妻，可以通過體外受精和胚胎移植 (IVF-ET)進行治療，或在較不復雜的病例中_通過人工授精進行治療。 人類中IVF-ET程序的成功率通常是在每個治療周期10%到40%妊娠的范 圍內(nèi)，對于人工授精則可達到20%的成功率的水平。 一般地，胚胎移植的 成功取決于子宮感受性，其被定義為子宮提供適當移植和胚胎發(fā)育所需要 的最適條件的能力。子宮感受性的基本成分是子宮收縮活性和子宮內(nèi)膜的 狀態(tài)。在胚胎移植過程中發(fā)生的過分的子宮收縮性可能會將胚胎從子宮中 推出到陰道或輸卵管中，由此可能導致治療失敗，或在后者的情形中，會 導致宮外孕- 一種嚴重的可能危及生命的并發(fā)癥。此外，人工授精的成 功 -除了與精子質(zhì)量相關外-還與子宮收縮波的強度和方向以及子宮內(nèi) 膜的狀態(tài)相關。當子宮收縮的方向是從子宮底到子宮頸時，在所述程序中 被注入子宮的精子從子宮中移出，這會影響該程序的功效。
在人類中，其中發(fā)生子宮內(nèi)移植的周期可表征為減少的子宮收縮活 性。子宮收縮還在飼育動物中影響胚胎移植。已知移植率與子宮收縮的頻 率成負相關。在高子宮收縮活性和低子宮收縮活性的婦女之間移植的成功 率差異可超過50%。除此之外，子宮來源的前列腺素減少了子宮內(nèi)膜的灌 流，損害了子宮的感受性。減少子宮收縮性的藥物如(3-激動劑的應用與頻 繁的副作用相關，并且不影響移植的成功率。
本發(fā)明的目的是提供增加輔助生殖程序的成功率的藥物并且鑒定可以用于生產(chǎn)所述藥物的物質(zhì)，需要考慮的是這些藥物應該沒有目前使用的 藥物特有的副作用，并且在輔助生殖中具有改善的臨床功效。
本發(fā)明的主題是應用和藥物，其在后附的權利要求中被定義。具體地， 其涉及催產(chǎn)素的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的 拮抗劑用于制備藥物的應用，所述藥物用于改善胚胎移植或人工授精中的 子宮感受性。
具體地，本發(fā)明涉及有效量的催產(chǎn)素的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管升壓素 的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑、或它們的藥用鹽用于制備藥物的應用， 所述藥物在輔助生殖的程序中應用，并且其可以在胚胎移植之前、期間和 之后應用，并且其通過改善子宮感受性來發(fā)揮作用。根據(jù)本發(fā)明，催產(chǎn)素 的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑、或它
們的藥用鹽以在約0.01mg直至約10g范圍內(nèi)的24小時劑量腸內(nèi)或腸胃 外施用。
催產(chǎn)素的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮 抗劑、或它們的藥用鹽可以是肽或非肽類物質(zhì)。特別地，催產(chǎn)素的拮抗劑， 催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑，或血管升壓素的拮抗劑是選自下組的物 質(zhì)阿托西班、barusiban 、瑞考伐普坦、TT-235 (ANTAG III， l-PMP(S)-2-Trp-6-Pen-8-Arg-催產(chǎn)素)、L-365，209 [環(huán)(L-異亮氨酰 -0-2，3,4,5-四氫-3-噠嗪羰基丄-2,3,4，5-四氫-3-噠嗪羰基-^甲基-0-苯基丙 氨酰-L-脯氨酰-D-苯基丙氨酰]、L隱366,509 [2隱羥基-7，7-二甲基-l-((螺(lH-茚-l,4'-哌啶)-l'-基磺酰基)甲基)二環(huán)(2.2.1)庚烷-2-乙酸]、L-371,257 P-(l-(4-((N-乙?；?4-哌啶基)氧基)-2-甲氧基苯甲?；?哌啶-4-基)-4H-3,l-苯并噁嗪-2(lH)-酮]、L-372,662 [l-(l-4-(l-(2-甲基-l-氧吡啶(oxidopridin)-3陽 基甲基)哌啶-4-基氧基-2-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-1 ，4-二氫苯并(d)( 1 ，3) 噁嗪-2-酮]、L 368,899 [l-(((7，7-二甲基-2-(2-氨基-4-(甲基磺酰基)丁酰氨基) 二環(huán)(2.2.1)庚-1-基)甲基)磺?；鵐-(2-甲基苯基)哌嗪]、 desGly(NH2)9d(CH2)5(Tyr(Me)2Thr4]OVT、化合物PA1-6酸、ANTAG II (l-PMP-2-Trp-8匿Arg-催產(chǎn)素)、ANTAG I (l-PMP-2-Trp-3-Phe-4-Ile-8誦Arg-催產(chǎn)素)、L-366，948 (環(huán)(3-(2-萘基)-D-丙氨酰-L-異亮氨酰-D-2-哌啶羰基 丄-2-哌啶羰基-0-組氨酰丄-脯氨酰)、L-366,682 (環(huán)(D-組氨酰-L-脯氨酰-D-色氨酰-L-異亮氨酰-D-2-哌啶羰基-L-2-哌啶羰基)、OTA (d(CH2)5[Tyr(Me)2Thr4,Tyr- NH2(9)]鳥氨酸加壓催產(chǎn)素)、SSR126768A(4-氯-3-[(3R)-(+)-5-氯-l-(2,4-二甲氧基芐基)-3-甲基-2-氧代-2，3-二氫-lH』引哚 -3隱基]->!-乙基-^(3-吡啶基甲基)-苯甲酰胺，鹽酸鹽)，編碼為GW405212X 的物質(zhì)和編碼為OPC-21268的物質(zhì)[l-(l-(4-(3-乙?；被趸?苯甲酰 基)-4-哌啶基)-3,4-二氫-2(lH)-喹啉酮]。
根據(jù)本發(fā)明的具體應用涉及治療人類不育，特別涉及胚胎移植的程 序，尤其涉及新鮮的或冷凍/解凍的胚胎的移植。根據(jù)本發(fā)明的有利應用 涉及體外受精-胚胎移植程序(IVF-ET)，或涉及胚胎移植，其中卵母細胞 或精子_胚胎的成分取自供體。本發(fā)明具體涉及在飼育動物中進行的治 療，所述動物如牛、豬、馬、羊(綿羊(sheep))，其中進行胚胎移植程序。 本發(fā)明的實施另外涉及使用可以應用于輔助生殖的其它的藥物，尤其是氧 化氮供體、氧化氮合酶的底物、孕激素(progestagen)、前列腺素拮抗劑、 甲基oxantines、 P-激動劑、前列環(huán)素激動劑。
特別地，根據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)的藥物可以在輔助生殖的程序期間使用，特 別用于調(diào)節(jié)子宮收縮活性，其在人工授精后改善雌性生殖道的精子的運 輸。在本專利的具體實施中，其涉及在人類中進行的治療或在飼育動物-牛、豬、羊、馬中的治療，其中進行了人工授精。最后，本發(fā)明的另外的 物質(zhì)構成了根據(jù)以上定義的本申請生產(chǎn)的藥物。
本發(fā)明的主題是應用有效量的催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素 的拮抗劑，或血管升壓素的拮抗劑，或它們的藥用鹽，例如阿托西班、 barusiban或瑞考伐普坦用于制備藥物的應用，所述藥物應用于輔助生殖的 程序，特別用于胚胎移植或人工授精。在胚胎移植之前和/或期間和/或之 后以及在人工授精之前和/或期間和/或之后，以肽(例如阿托西班)或非肽 (例如瑞考伐普坦)的形式應用本發(fā)明的藥物。將這些藥物以約0,01 mg直 至約10g的24小時劑量進行腸內(nèi)或腸胃外施用。這些藥物的應用涉及在 人中治療不育，尤其用于體外受精和新鮮胚胎的移植，或新鮮/解凍胚胎 的移植，在該情形中一個或兩個配子取自供體或兩個配子(卵母細胞和精 子)取自配偶。還在詞育動物-牛、豬、馬、羊中進行用催產(chǎn)素的拮抗劑、 催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗劑，或它們的藥用鹽，例如阿托西班、bamsiban或瑞考伐普坦的治療，并且所述治療包括胚胎移 植，其中假定約0.01mg直至約10g的每日劑量的有效應用。
用肽或非肽物質(zhì)形式的催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗 劑或血管升壓素的拮抗劑或它們的藥用鹽進行的治療涉及在人類中和在 飼育動物-牛、豬、馬、羊中的人工授精的程序，其中這些在所述程序 之前和/或期間和/或之后進行應用。在所述治療中，將本發(fā)明定義的藥物 用于調(diào)節(jié)子宮收縮性，改善精子在雌性生殖道中的運輸，其中假定約 0，01mg直到約10g的24小時劑量。
催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗 劑或它們的藥用鹽，例如阿托西班、barusiban或瑞考伐普坦用于制備用于 輔助生殖程序的藥物的應用是與下列物質(zhì)中的一種或多種的應用組合進 行氧化氮供體、氧化氮合酶的底物、孕激素、前列腺素拮抗劑、甲基 oxantines、 (3激動劑、前列環(huán)素激動劑。
良好的安全曲線(pK)file)是包含催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓 素的拮抗劑，或血管升壓素的拮抗劑，或它們的藥用鹽，例如阿托西班、 barusiban或瑞考伐普坦的藥物的一個有利性質(zhì)，尤其因為這些物質(zhì)的高特 異性和選擇性，通常將這些藥物的作用限于子宮。
抑制子宮中的催產(chǎn)素和/或血管升壓素受體導致以數(shù)種途徑改善子宮 感受性_首先，通過減少子宮收縮性，第二，通過抑制局部前列腺素釋 放(該釋放減少子宮內(nèi)膜的灌流)來達到對子宮內(nèi)膜狀態(tài)的有利影響。在子 宮收縮方向是由子宮底向子宮頸的時候，在人工授精之前、期間或之后抑 制催產(chǎn)素和/或血管升壓素受體將阻止精子從子宮排出到陰道中。
催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑，或血管升壓素的拮 抗劑，或它們的藥用鹽與其它物質(zhì)(例如卩-激動劑)的組合抑制子宮收縮性， 發(fā)揮超加成(hyperadditive)作用。所述作用可以用于減少活性物質(zhì)在組 合藥物中的劑量，并且這與在所述組合物中使用的物質(zhì)的作用的增強有 關。結(jié)果，其還減少不利的藥物反應的可能性。氧化氮供體、氧化氮合酶 底物、前列腺素抑制劑、甲基oxantines、前列環(huán)素模擬物或孕激素是物質(zhì) 的實例，其可以與催產(chǎn)素的拮抗劑或催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管
升壓素的拮抗劑或它們的藥用鹽組合，改善子宮感受性并且調(diào)節(jié)子宮收縮
9性，和減少藥物不利反應的可能性。
本發(fā)明將導致在胚胎移植和人工授精后妊娠率的提高。在人類中，它 對于人口具有直接的社會學價值，另外減少了治療不育的費用。本發(fā)明在 ^W^中的應甩將減少育種的費用。
與在專利WO 9609824中公開的催產(chǎn)素拮抗劑的備選應用相反，在所 述專利中其聲稱通過延長黃體功能增加了畜牧動物的生育力和胚胎存活， 所述黃體提供孕酮的來源并且支持妊娠，而本發(fā)明涉及輔助生殖程序而不 涉及自發(fā)分娩。另外，本發(fā)明不涉及黃體的形成或維持，因為在胚胎移植 周期中不存在黃體。因此，在胚胎移植和人工授精兩種情形中，根據(jù)本發(fā) 明的妊娠率的提高是通過不同的改善子宮感受性的機制來實現(xiàn)。 為了更好地舉例說明本發(fā)明，本發(fā)明提供了下列的附圖。

圖1表示通過在患者中進行經(jīng)陰道的超聲檢査來評估關于子宮收縮 活性的圖，該病例在實施例1中進行描述。關于圖B和圖C的子宮收縮 用淺顏色標記以更好的觀察。在數(shù)字圖像分析方法中，由于高圖像質(zhì)量的 需要，選擇總共記錄的5分鐘中4分鐘的階段進行分析。
A) 子宮收縮性的非侵入性評估的原理的示意圖(與Fanchin等類似進 行，[Hum.Reprod(人類生殖).1998;13(7):1968-74]))描述U-子宮，En -子宮內(nèi)膜(子宮的內(nèi)層)-在子宮收縮的過程中，觀察到子宮內(nèi)膜的結(jié) 構和外形的變化，My-子宮肌膜(子宮的中層，平滑肌組織的構造)，T-測 試部分，評估其中表示子宮收縮活性的子宮內(nèi)膜輪廓的運動。
B) 在應用催產(chǎn)素拮抗劑阿托西班之前表示子宮收縮活性的圖。觀察 到收縮活動過強。圖例個-子宮收縮，1分鐘-表示數(shù)字記錄的1分鐘 的部分，T-測試部分，其中評估反映子宮收縮活性的子宮內(nèi)膜輪廓的運 動；C)在催產(chǎn)素拮抗劑阿托西班的最大作用的時間內(nèi)表示子宮收縮活性 的圖。子宮收縮活性顯著減少。圖例個-子宮收縮，l分鐘-代表l分鐘 數(shù)字記錄的部分，T-測試部分，其中評估反映子宮收縮活性的子宮內(nèi)膜 輪廓的運動。
圖2，其基于實施例2繪制，表示在對照樣品和在暴露于3種濃度的 阿托西班(300nM， 1000 nM i 3000 nM)的樣品中的人類精子游動性的參數(shù) 比較。該圖包括3張圖表:A-代表與暴露于阿托西班(0nM,300nM，1000nM i 3000 nM)和暴露時間相關的活躍游動的精子百分比的圖。B -代表暴 露于阿托西班(0 nM， 300nM， 1000 nM i 3000 nM)和暴露時間相關的游動 精子的百分比的圖。C-代表與暴露于阿托西班(OnM, 300nM, 1000nMi 3000nM)和暴露時間相關的活動過強的游動精子的百分比的圖。在對照(O nM)組和實驗組(阿托西班300nM, 1000 nM lub 3000 nM)之間沒有觀察到 顯著的差異。精子游動性隨時間的減少(在實驗的第8和第24小時)取決 于精子細胞能量儲備的逐漸減少并且在所有的評估組中都是相當?shù)?。在統(tǒng) 計學分析(方差分析-ANOVA)中，沒有觀察到精子游動性參數(shù)的顯著差 異。圖例:活性％-活躍游動的精子細胞百分比；游動性％ -游動的精子細 胞的百分比；過強％-活動過強的游動精子細胞的百分比。
圖3，根據(jù)實施例2繪制，代表在對照樣品中和在實驗組樣品中(暴 露于3種濃度的阿托西班300nM, 1000 nM i 3000 nM)精子細胞的運動參 數(shù)(速率)的比較。圖3包括3張圖表A -表示與暴露于阿托西班(O nM, 300nM, 1000 nM i 3000 nM)和暴露時間相關的總的精子速率的變化的圖； B -代表與暴露于阿托西班(O nM， 300nM， 1000 nM i 3000 nM)和暴露時間 相關的直線精子速率的變化的圖；C -表示與暴露于阿托西班(O nM, 300nM, 1000 nM i 3000 nM)和暴露時間相關的在精子細胞的精子頭側(cè)擺 幅度((amplitude of lateral head displacements))中的變化的圖；圖例VSL — 直線速率，VCL-總速率，ALH-精子頭側(cè)擺幅度。在統(tǒng)計學分析(方差分 析-ANOVA)中，在對照(OnM)和實驗樣品(阿托西班300nM， 1000 nM, 3000 nM)之間沒有觀察到顯著差異。
在圖2和圖3中呈現(xiàn)以及在實施例2中進一步提及的人類精子游動性 生物評估研究的結(jié)果證實，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑-阿托西班并沒 有抑制人類精子的體外游動性，這證實了阿托西班缺乏胚胎毒性的潛力， 這是其用于輔助生殖所需要的。
圖4舉例說明了在子宮收縮活性和胚胎移植成功率之間的相關性。在 高收縮活動的情形(>5.0次收縮/分鐘)中，臨床妊娠率達到14%，在低子 宮收縮活性的患者中，其增加超過3倍，達到53% (根據(jù)Fanchin等出版 物的圖[Hum. Reprod. 1998;13(7):1968-74])。
圖5表示在生物中在不存在和存在催產(chǎn)素和血管升壓素拮抗劑瑞考
ii伐普坦的情況中在血管升壓素刺激的過程中，關于非妊娠人類的子宮收縮 活性的圖(使用在子宮內(nèi)壓力曲線下面積參數(shù)評估)。
圖示描述
安慰劑-參照子宮收縮活性(在接受安慰劑的患者中)； VAS-l,VAS-2，VAS-3-在給藥瑞考伐普坦的患者中的相對(于安慰劑)的 子宮收縮活性:各個數(shù)字對應于各種血管升壓素施用。
在該圖中呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)顯示血管升壓素和催產(chǎn)素受體抑制的作用(血管 升壓素和瑞考伐普坦還作用在催產(chǎn)素受體上)，降低了子宮收縮性?？紤]
到瑞考伐普坦的受體模式_與催產(chǎn)素受體比較，針對血管升壓素V,a受 體具有更大的親和力，以及與妊娠子宮相比，在非妊娠子宮中V^表達更
多的事實，瑞考伐普坦是在胚胎移植和人工授精之前應用的有前景的候選
物(根據(jù)Bossmar等的出版物的圖，[BJOG 1997， 104; 471-477])。
圖6 (根據(jù)Pierzyriski P等[JSGE 2004， 11(6): 384-387])舉例說明了在施
用催產(chǎn)素拮抗劑barusiban之前和之后，人妊娠子宮肌膜的收縮活動。 圖例P-參照氯化鉀(KC1)收縮W-洗滌
OT - —系列累積催產(chǎn)素注射用于刺激子宮收縮性(在施用催產(chǎn)素拮 抗劑之前和之后重復)，W-洗滌，BSB-施用催產(chǎn)素拮抗劑barusiban
在此項體外研究中，評估barusiban對催產(chǎn)素刺激的子宮平滑肌收縮 性的作用。在施用bamsiban后，顯著減少了子宮平滑肌(子宮肌膜)收縮活 動，并且在所述催產(chǎn)素濃度范圍內(nèi)觀察到對人中發(fā)生的收縮活動的總抑 制。在該研究中顯示，與阿托西班相比，barusiban是更有效的子宮收縮抑 制劑。盡管在妊娠和非妊娠子宮之間存在生理差異，考慮到barusiban的 延長的作用模式(單劑量估計的半衰期-7小時)，其是用于輔助生殖技術 的有前景的候選物。
本發(fā)明涉及催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升 壓素的拮抗劑，例如阿托西班,barusiban或瑞考伐普坦或它們的藥用鹽用 于制備藥物的應用，所述藥物以約0,01 mg直至約10 g之間的24小時劑 量包含活性物質(zhì)。這些藥物的應用改善子宮感受性，其通過減輕催產(chǎn)素和 /或血管升壓素對子宮肌膜和子宮內(nèi)膜(子宮的平滑肌和最內(nèi)層，其中發(fā)生移植)的影響而實現(xiàn)。這樣的作用導致子宮靜止期(就收縮性而言)并且另外 停止對子宮中前列腺素合成的刺激(前列腺素在正常情況下增加子宮的收 縮性并且減少子宮內(nèi)膜灌流)。隨后，子宮內(nèi)環(huán)境變得更"胚胎友好"，這 又增加胚胎移植成功率。在子宮收縮方向是從子宮底到子宮頸時，本發(fā)明 所述的藥物在人工授精前施用時將通過防止精子從子宮中排出到子宮頸 而增強該程序的功效。
本發(fā)明用于治療，提高在人和飼育動物中的胚胎移植中的子宮感受 性。用催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的拮 抗劑或它們的藥用鹽進行的治療可以使用肽藥物，其按照催產(chǎn)素和血管升
壓素的結(jié)構，如阿托西班或barusiban,以及非肽藥物，如瑞考伐普坦。由 于它們的消化作用，肽藥物可能不通過口服施用，然而，當應用用于藥物 釋放的專門系統(tǒng)時，這種施用也是可能的。催產(chǎn)素的肽拮抗劑，催產(chǎn)素和 血管升壓素的肽拮抗劑或血管升壓素的肽拮抗劑，例如阿托西班或 barusiban或它們的藥用鹽可以靜脈,內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或鼻內(nèi)施用。催產(chǎn)素的 非肽拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的非肽拮抗劑或血管升壓素的非肽拮抗 劑，例如瑞考伐普坦，或它們的藥用鹽也可以腸內(nèi)施用。包含肽或非肽藥 劑的本發(fā)明所述的藥物將以單劑量、重復劑量或作為連續(xù)/間歇輸注方式 以約O，Ol mg至約10g/24小時的劑量進行給藥。藥物施用將最多在胚胎移 植之前一周開始，并且將最多持續(xù)直到移植后一周。這將容許消除子宮收 縮反射反應從而引入移植導管，并且減少子宮收縮性同時改善子宮感受性 直到胚胎的植入，在人類中，所述植入在移植后約一周發(fā)生。
本發(fā)明的另一個方面涉及制備藥物，所述藥物用于在人工授精之前、 期間和之后調(diào)節(jié)子宮收縮性。在子宮收縮方向是從子宮底到子宮頸情形 中，該情形可以將精子通過子宮頸從子宮排出，施用催產(chǎn)素的拮抗劑，催 產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗劑或它們的藥用鹽。本發(fā) 明所述的藥物的應用將最多(maximally)在授精前一周開始并且將最多持 續(xù)直到所述程序后的一周。在進行一系列授精的情況中，所述治療可以以 最多持續(xù)直到最后一次授精后一周。催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓 素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗劑或它們的藥用鹽，如阿托西班， barusiban或瑞考伐普坦將以約0,01 mg到10 g/24小時的劑量，腸內(nèi)或鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給藥。用于這些藥物的施用的形式的實例是片劑、
dmgettes、膠囊、丸劑、混懸劑、糖漿劑、顆粒劑和溶液劑。每個給藥單 位，例如片劑或一匙溶液可以包含例如0,1 — 1000 mg的每種活性成分。
包含催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的 拮抗劑或它們的藥用鹽的藥物可以與其他藥物聯(lián)合施用，所述其他藥物可 以減少子宮收縮性，例如與氧化氮供體、氧化氮合酶底物、孕激素、前列 腺素的拮抗劑、甲基oxantines、 |3-激動劑、前列環(huán)素激動劑或孕激素聯(lián)合 施用。
催產(chǎn)素的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗 劑或它們的藥用鹽與其他上述提及的物質(zhì)的組合可以腸內(nèi)或腸胃外，以產(chǎn) 生適當功效的劑量進行施用，所述劑量減少子宮收縮性并且可能具有減少 不利藥物反應的另外的作用。
實施例1包含阿托西班-催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑的藥物用于在 IVF-ET(體外受精-胚胎移植)輔助生殖程序過程中增加胚胎移植時的子宮 感受性中的臨床應用。
臨床描述具有15年不育史的42歲女性，從未妊娠，伴隨臨床上需 要治療的被稱為不育的陰性產(chǎn)科/婦產(chǎn)科史。開始，在月經(jīng)過程中進行的 激素實驗室結(jié)果如下FSH — 5,1 IU/ml (正常范圍3,2 - 10,0)， LH — 1,8 mlU/ml (正常范圍1,2-12,5), PRL —23,4 ng/ml (正常范圍3,3-24,5), E2 95,7 pg/ml (正常范圍12,0-48,0), T- 0，43 (正常范圍0，l-0，96ng/ml)。在生理和超 聲檢查評估后，顯示肌瘤性子宮和左卵巢囊腫。在首次訪問后一個月以外 科手術治療患者，通過剖腹術和摘除子宮肌瘤并且摘除左卵巢囊腫，沒有 伴隨的并發(fā)癥。
手術后7個月，開始專門治療不育，并對患者進行IVF-ET程序。在 2003年9月進行第一個治療程序，應用長期的刺激排卵方案。在該治療 過程中，患者接受了總共44安瓿的重組FSH (Gonal 75 IU)和8安瓿的絕 經(jīng)促性腺素HMG (Menogon 75 IU)，這誘導了 3個Graaf濾泡生長。在經(jīng) 陰道吸出濾泡后，收集1個MII卵母細胞。由于發(fā)現(xiàn)患者的丈夫患有精子 無力(這進一步通過睪丸活組織檢查證實)，體外受精使用了匿名供體的精
14子。在卵母細胞收集后的第3天，將一個4卵裂球的胚胎移植到子宮，得 到了陰性結(jié)果。
3個月后進行下一個(第二次)IVF程序。在受控的卵巢刺激過程中， 施用了總共74安瓿的重組FSH (Gonal 75 IU)和3安瓿的人絕經(jīng)促性腺 素(Menogon75IU)。在該治療周期中，證實了 3個濾泡的生長。經(jīng)陰道吸 出濾泡，導致收集了3個MII卵母細胞，其隨后用匿名供體的精子進行受 精。在卵母細胞收集后的第三天，將2個2-卵裂球的胚胎移植到子宮，得 到陰性結(jié)果。
在6個月后進行的第三個IVF程序還使用長期卵巢刺激方案。在該治 療周期過程中，施用58 amp的重組FSH (Gonal 75 IU)和2 amp的絕經(jīng)促 性腺素HMG(Menogon75IU)。結(jié)果，觀察到8個濾泡的生長。在經(jīng)陰道 的濾泡吸出后，收集2個MII卵母細胞，其隨后用匿名供體的精子進行受 精。將2個4-卵裂球胚胎移植到子宮腔中，得到陰性結(jié)果。 一個月后，進 行了旨在提供關于可能的子宮腔病理學數(shù)據(jù)的宮腔鏡檢查，得到陰性結(jié) 果。
鑒于患者卵母細胞存在低發(fā)育潛力的高度可能性，再經(jīng)過兩個月后， 決定改變治療方式使用供體的卵母細胞。卵母細胞由另一個健康的患者匿 名捐贈，所述健康的患者是由于男性不育而在IVF程序中進行治療。在將 2個捐贈的卵母細胞與匿名供體的精子體外受精后，進行胚胎移植，得到 陰性結(jié)果。隨后在接下來的7個月中，進行了 3個連續(xù)的供體卵母細胞-供體精子胚胎的周期，得到陰性結(jié)果。
在治療的第8個周期，決定應用包含阿托西班(催產(chǎn)素和血管升壓素 的拮抗劑)的藥物，旨在改善子宮感受性。將所述藥物通過靜脈內(nèi)輸注給 藥，所述給藥在移植前60分鐘開始，并且在移植后持續(xù)2小時。在開始 施用前10分鐘(在移植前70分鐘)，進行經(jīng)陰道超聲檢查，伴隨子宮收縮 的5分鐘的數(shù)字記錄。在移植前60分鐘，靜脈內(nèi)給藥6,75mg的阿托西班 的快速推注(bolus)劑量，沒有不利反應。緊隨其后，使用輸注泵進行18mg/ 小時的阿托西班的連續(xù)輸注，并且在整個接下來的60分鐘持續(xù)。在開始 輸注后的45分鐘，重復經(jīng)陰道的超聲檢查，伴隨數(shù)字圖像記錄。在輸注 的第55和第60分鐘之間，進行超聲檢查引導的2個胚胎的移植。移植后，將阿托西班的劑量改變?yōu)? mg/小時。在移植后2小時結(jié)束輸注，施用的 總劑量是37,5 mg。上述應用阿托西班的模式在胚胎移植時提供了最大效果(證實了在開 始輸注后約1小時達到穩(wěn)定的阿托西班濃度)?；颊弑３炙轿恢弥钡皆?終止輸注后一小時，并且在當天限制她的活動。在胚胎移植后2周進行的 監(jiān)督訪問，進行了妊娠測試，顯示為陽性結(jié)果。在下一次訪問(移植后4 周)，通過經(jīng)陰道的超聲檢查證實了子宮內(nèi)正常雙胎妊娠，在兩個胎囊中 均觀察到胎心跳動。在該患者中治療不育的陽性結(jié)果證實催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑 在胚胎移植時改善子宮感受性的有利作用。因為不可能證實在移植過程中 阿托西班的另外方面的作用(其在子宮內(nèi)膜灌流或局部前列腺素生產(chǎn)方面 的作用)，所述作用的證據(jù)是基于其在減少子宮收縮活性上的作用，這在 阿托西班顯示最大作用的時刻進行非侵入性地顯示。使用超聲圖像序列通 過兩種方法進行子宮收縮性的分析通過在加速的膠片序列(accelerated film sequence)上檢查和人工記錄收縮(方法1)，和通過數(shù)字分析子宮內(nèi)膜 輪廓的移動(方法II，與由R. Fanchin等所述方法[Fanchin R i wsp. Hum Reprod(人類生殖)1998;13(7):1968-74]類似地進行)。在沒有作用的情況下 和在穩(wěn)定血液水平的阿托西班的情況下進行子宮收縮活性的分析證實其 顯著的減少(方法I:在施用阿托西班前的15次收縮/5分鐘對比在施用阿 托西班后的8次收縮/5分鐘。方法II:在施用阿托西班前的11次收縮/4 分鐘對比在施用阿托西班后的7次收縮/4分鐘)。方法II在圖1中進行了 舉例說明。應用包含阿托西班的藥物以數(shù)種途徑改善了子宮感受性直接 地_通過減少子宮收縮活性，以及間接地-通過減少子宮收縮性的刺激 和減緩減少子宮內(nèi)膜灌流的作用，這是由抑制子宮腔中前列腺素的生產(chǎn)/ 分泌導致的。扼要重述，該病例證實了將包含催產(chǎn)素的拮抗劑，催產(chǎn)素和血管升壓 素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗劑或它們的藥用鹽的藥物在輔助生殖中， 尤其是在胚胎移植的程序中用于治療改善子宮感受性的原理。此外，在具 有相似臨床特征的第二個患者中也實現(xiàn)了妊娠。實施例2.催產(chǎn)素拮抗劑在輔助生殖中的安全性到目前為止，包含阿托西班的藥物是被注冊用于人的唯一的一種催產(chǎn) 素和血管升壓素的拮抗劑。其是一種肽物質(zhì)，注冊用于在完全不同于輔助 生殖的情況-在早產(chǎn)中用于靜脈內(nèi)應用，在早產(chǎn)中其用于延長妊娠。阿 托西班的臨床安全性在注冊前的研究中已經(jīng)得到了完全的證實。阿托西班 被認為是唯一安全的，導致最小的副作用。然而，在輔助生殖中沒有膽敢 應用，因為尚未進行關于阿托西班的胚胎毒性研究。為了證實阿托西班的胚胎毒性，進行了關于阿托西班對于人類精子游 動性參數(shù)的影響的研究(人精子游動性生物測定)。在所述研究中所用的技 術是在IVF實驗室中進行質(zhì)量控制和評估胚胎毒性的標準技術。顯示該技 術與小鼠或兔胚胎生物測定相當，所述小鼠或兔胚胎是用于胚胎毒性的動 物模型[Miller, JW等FertilSteril 2001:76(3)，增刊;S104]。人精子游動性 生物測定的特異性和敏感性與在胚胎上進行的測試相當并且目前其由于 低成本和復雜性而成為最普遍的。據(jù)顯示，當在人精子環(huán)境中的某因子限 制其游動性時，所述因子將也是胚胎毒性的。所述研究在取自15個健康供體的新鮮人精子樣品上進行，所述供體 具有理想的精液學參數(shù)。在選擇活性的和游動群體(精子上游遷移方法 (swim-up ascending migration method))后，將精子樣品轉(zhuǎn)移到包含單獨的人 精子制備培養(yǎng)基或還有300nM, 1000nM， 3000nM濃度的阿托西班的無菌 Eppendorf管中，最后的濃度是在治療早產(chǎn)過程中在人中獲得的最大濃度 的10倍。在暴露于阿托西班的第l，第8和第24小時，用計算機輔助的 精子分析器Hobson精子追蹤器(Hobson Sperm Tracker)進行精子游動性評 估。分析下列參數(shù)a)活躍游動的精子細胞的百分比(活性％); b)游動精子細胞的百分比(游 動性％); c)活動過強的游動精子細胞的百分比(過強％)， d)VSL-直線速 率，e)VCL-總速率,f)ALH-精子頭側(cè)擺幅度。結(jié)果顯示在圖2和圖3 中。在統(tǒng)計學分析中，應用方差分析(ANOVA)。然而，在對照樣品和暴露 于阿托西班的樣品之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著差異。證實了不存在阿托西班的胚胎 毒性，這是其用于輔助生殖所需要的。1權利要求
1.催產(chǎn)素的拮抗劑、或催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑、或它們的藥用鹽用于制備用于輔助生殖的藥物的應用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中所述制備的藥物在胚胎移植之前、期間和之后被應用于子宮腔并且它改善子宮感受性。
3. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中制備的藥物被應用于改善子宮感 受性，所述子宮感受性的改善是通過調(diào)節(jié)子宮收縮活性和改善子宮內(nèi)膜狀 態(tài)而實現(xiàn)的，其增加人工授精的成功率。
4. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中催產(chǎn)素的拮抗劑、或催產(chǎn)素和血 管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑、或它們的藥用鹽以約0.01 直至約10g的24小時劑量應用。
5. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中催產(chǎn)素的拮抗劑、或催產(chǎn)素和血 管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑、或它們的藥用鹽是肽或非肽。
6. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中催產(chǎn)素的拮抗劑、或催產(chǎn)素和血 管升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑是選自如下列出的組的物質(zhì)-阿托西班、barusiban 、 瑞考伐普坦、TT-235 (ANTAG III， l-PMP(S)-2-Trp-6-Pen-8-Arg-催產(chǎn)素)、L-365,209 [環(huán)(L-異亮氨酰 -0-2,3,4，5-四氫-3-噠嗪羰基丄-2，3,4，5-四氫-3-噠嗪羰基-^甲基-0-苯基丙 氨酰-L-脯氨酰-D-苯基丙氨酰]、L-366,509 [2-羥基-7，7-二甲基-l-((螺(lH-茚-l,4'-哌啶)-l'-基磺?；?甲基)二環(huán)(2.2.1)庚垸-2-乙酸]、L-371，257 [1-(1-(4-((^乙?；?4-哌啶基)氧基)-2-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-411-3,1-苯并噁嗪-2(lH)-酮]、L-372，662 [l-(l-4-(l-(2-甲基-l-氧吡啶-3-基甲基)哌啶 -4-基氧基-2-甲氧基苯甲?；?哌啶-4-基)-1 ，4-二氫苯并(d)( 1,3)噁嗪-2-酮]、 L 368,899 [1-(((7，7-二甲基-2-(2-氨基-4-(甲基磺?；?丁酰氨基)二環(huán)(2.2.1) 庚-1-基)甲基)磺?；?-4-(2-甲基苯基)哌嗪]、 desGly(NH2)9d(CH2)5(Tyr(Me)2Thr4]OVT、化合物PA1-6酸、ANTAG II (l-PMP-2-Trp-8-Arg-催產(chǎn)素)、ANTAG I (l-PMP-2-Trp-3-Phe-4-Ile-8-Arg-催產(chǎn)素)、L-366,948 (環(huán)(3-(2-萘基)-D-丙氨酰-L-異亮氨酰-D-2-哌啶羰基 丄-2-哌啶羰基-0-組氨酰丄-脯氨酰)、L-366，682 (環(huán)(D-組氨酰-L-脯氨酰-D-色氨酰-L-異亮氨酰-D-2-哌啶羰基-L-2-哌啶羰基)、OTA (d(CH2)5[Tyr(Me)2Thr4,Tyr- NH2(9)]鳥氨酸加壓催產(chǎn)素)、SSR126768A (4-氯-3-[(311)-(+)-5-氯-1 -(2,4-二甲氧基芐基)-3-甲基-2-氧代-2，3-二氫-1H-吲哚 -3-基]-仆乙基-^(34匕啶基甲基)-苯甲酰胺，鹽酸鹽)，編碼為GW405212X 的物質(zhì)和編碼為OPC-21268的物質(zhì)[l-(l-(4-(3-乙?；被趸?苯甲酰 基)-4-哌啶基)-3,4-二氫-2(lH)-喹啉酮]。
7. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其中制備的藥物用于治療人不育，或 用于動物的輔助生殖，其涉及胚胎移植和/或人工授精。
8. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中胚胎移植是新鮮或冷凍/解凍的 胚胎的移植。
9. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中它涉及體外受精-胚胎移植 (IVF-ET)的程序。
10. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中卵母細胞或/和精子取自供體。
11. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中它涉及在飼育動物中的輔助生殖 的程序，在所述輔助生殖中進行胚胎移植或人工授精。
12. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中詞育動物選自如下的組牛、豬、 羊和馬。
13. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中它涉及將其它藥物應用于輔助生 殖的治療中，所述其它藥物選自如下的組氧化氮供體、氧化氮合酶底物、 孕激素、前列腺素拮抗劑、甲基oxanthines、 p激動劑、前列環(huán)素激動劑。
14. 用于輔助生殖的藥物，其包含活性物質(zhì)和藥用基質(zhì)，其中所述藥物 包含選自如下的組的物質(zhì)作為活性物質(zhì)催產(chǎn)素的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管 升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑、或它們的藥用鹽。
15. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中指定所述藥物在胚胎移植之前、期 間和之后應用并且它改善子宮感受性。
16. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中指定所述藥物用于子宮感受性的改 善，所述子宮感受性的改善是通過調(diào)節(jié)子宮收縮活性和改善子宮內(nèi)膜狀態(tài) 來實現(xiàn)，其增加人工授精的成功率。
17. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中活性物質(zhì)的量表現(xiàn)為約0，01mg直 至約10g的24小時劑量。
18. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中活性物質(zhì)是肽或非肽。
19. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中催產(chǎn)素的拮抗劑、或催產(chǎn)素和血管 升壓素的拮抗劑、或血管升壓素的拮抗劑是選自如下列出的組的物質(zhì)阿 托西班、barusiban 、 瑞考伐普坦、TT-235 (ANTAG III, l-PMP(S)-2-Trp-6-Pen-8-Arg-催產(chǎn)素)、L-365，209 [環(huán)(L-異亮氨酰 -0-2,3,4，5-四氫-3-噠嗪羰基七-2,3，4,5-四氫-3-噠嗪羰基-^甲基-0-苯基丙 氨酰-L-脯氨酰-D-苯基丙氨酰]、L-366，509 [2-羥基-7，7-二甲基-1-((螺(111-茚-l，4'-哌啶)-l'-基磺?；?甲基)二環(huán)(2,2.1)庚烷-2-乙酸]、L-371,257 [1_(1_(4_((^乙?；鵢4_哌啶基)氧基)_2-甲氧基苯甲?；?哌啶-4-基)-犯-3，1-苯并噁嗪-2(lH)-酮]、L-372，662 [l-(l-4-(l-(2-甲基-l-氧吡啶-3-基甲基)哌啶 -4-基氧基-2-甲氧基苯甲?；?哌啶-4-基)-1 ，4-二氫苯并(d)(1,3)噁嗪-2-酮]、 L 368,899 [l-(((7,7-二甲基-2-(2-氨基-4-(甲基磺?；?丁酰氨基)二環(huán)(2.2.1) 庚-1-基)甲基)磺酰基)-4-(2-甲基苯基)哌嗪]、 desGly(NH2)9d(CH2)5(Tyr(Me)2Thr4]OVT、化合物PA1-6酸、ANTAG II (l-PMP-2-Trp-8-Arg-催產(chǎn)素)、ANTAG I (l-PMP-2曙Trp-3-Phe-4-Ile-8-Arg-催產(chǎn)素)、L-366,948 (環(huán)(3-(2-萘基)-D-丙氨酰-L-異亮氨酰-D-2-哌啶羰基 丄-2-哌啶羰基-0-組氨酰丄-脯氨酰)、L-366,682 (環(huán)(D-組氨酰-L-脯氨酰-D-色氨酰-L-異亮氨酰-D-2-哌啶羰基-L-2-哌啶羰基)、OTA (d(CH2)5[Tyr(Me)2Thr4，Tyr- NH2(9)]鳥氨酸加壓催產(chǎn)素)、SSR126768A(4-氯-3-[(3R)-(+)-5-氯-l-(2，4-二甲氧基芐基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-lH』引哚 -3-基]-^乙基-^(3-吡啶基甲基)-苯甲酰胺，鹽酸鹽)，編碼為GW405212X 的物質(zhì)和編碼為OPC-21268的物質(zhì)[l-(l-(4-(3-乙?；被趸?苯甲酰 基)-4-哌啶基)-3,4-二氫-2(lH)-喹啉酮]。
20. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中指定所述藥物用于治療人不育或用 于動物中的輔助生殖，其包括胚胎移植或人工授精。
21. 根據(jù)權利要求20的藥物，其中所述胚胎移植是移植新鮮或冷凍/ 解凍的胚胎。
22. 根據(jù)權利要求20的藥物，其中指定它用于通過體外受精-胚胎移植 (IVF-ET)方法來治療不育。
23. 根據(jù)權利要求20的藥物，其中卵母細胞或/和精子取自供體。
24. 根據(jù)權利要求20的藥物，其中指定它用于在飼育動物中的輔助生 殖，所述動物通過胚胎移植或人工授精進行治療。
25. 根據(jù)權利要求24的藥物，其中詞育動物來自如下列出的組牛、豬、羊、馬。
26. 根據(jù)權利要求14的藥物，其中它另外包含其它用于輔助生殖治療 的物質(zhì)，所述物質(zhì)選自如下的組氧化氮供體、氧化氮合酶底物、孕激素、 前列腺素拮抗劑、甲基oxanthines、 P激動劑、前列環(huán)素激動劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及催產(chǎn)素的拮抗劑、催產(chǎn)素和血管升壓素的拮抗劑或血管升壓素的拮抗劑、或它們的藥用鹽、或它們與其它藥劑的組合用于制備藥物的應用，所述藥物在哺乳動物的非妊娠子宮中的主要作用模式是抑制催產(chǎn)素和/或血管升壓素受體，這導致在胚胎移植中子宮感受性的改善。本發(fā)明進一步涉及將這些物質(zhì)用于制備藥物的應用，所述藥物用于在人工授精的情形中調(diào)節(jié)子宮收縮活性。
文檔編號A61K31/404GK101646436SQ200680056836
公開日2010年2月10日 申請日期2006年5月10日 優(yōu)先權日2005年5月10日
發(fā)明者彼得·彼任斯基, 沃爾德馬·庫琴斯基 申請人:輝凌國際制藥(瑞士)有限公司