專利名稱：：用于纖維化的新顯像劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及診斷顯像且具體涉及纖維化的診斷顯像。描述了適合于這個(gè)目的，特別是用于肝、心臟、腎和肺中的纖維化診斷顯像的診斷顯像劑。相關(guān)領(lǐng)域的描述纖維化是特征在于細(xì)胞外基質(zhì)組分過量分泌的過程。這由基質(zhì)蛋白最顯著地膠原I和III型增加的合成和減少的降解引起，并且作為針對(duì)由炎癥、感染或損傷引起的組織損害的應(yīng)答而觸發(fā)。簡言之，纖維化是瘢痕組織且形成組織中的所有"修復(fù)"過程的部分。然而，因?yàn)檎谶M(jìn)行的炎癥、感染和反復(fù)損傷，纖維化瘢痕組織建立且不替代"功能，，細(xì)胞，從而導(dǎo)致異常的器官功能和最終地器官衰竭。纖維化是醫(yī)學(xué)中的主要、經(jīng)典病理過程之一。它是影響全世界數(shù)百萬人的多種疾病的關(guān)4定組分，所述疾病包括a)肺病，例如特發(fā)性肺纖維化(起源不明的肺纖維化)、哞喘和慢性阻塞性肺病b)硬皮病特征在于過量的細(xì)胞外基質(zhì)沉積在身體(即，皮膚和內(nèi)臟器官)的結(jié)締組織內(nèi)的異質(zhì)和威脅生命的疾病c)移植后的外科手術(shù)后瘢痕形成d)糖尿病性視網(wǎng)膜病和年齡相關(guān)性黃斑變性(眼睛的纖維化疾病和失明的主因)e)心血管疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化和易損斑塊。f)與糖尿病相關(guān)的腎纖維化-糖尿病腎病和腎小球硬化癥g)IgA腎病(腎衰竭的起因以及關(guān)于透析和再移植(retransplant)的需要)h)肝硬化和膽管閉鎖(肝纖維化和衰竭的主因)i)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎j)自身免疫疾病，例如皮肌炎k)充血性心力衰竭纖維化的臨床表現(xiàn)廣泛多樣。以肝硬化為例，臨床表現(xiàn)/人完全無癥狀到肝衰竭而變化，并且通過潛在的肝病的性質(zhì)和嚴(yán)重性以及肝纖維化的程度來確定。最高達(dá)40%的患有肝硬化的患者是無癥狀的，并且可能保持這樣超過10年，但一旦并發(fā)癥發(fā)展，進(jìn)行性惡化就是不可避免的，所述并發(fā)癥包括腹水、靜脈曲張性出血或腦病。纖維化和肝硬化因此代表針對(duì)來自多種原因的慢性肝損傷的持續(xù)傷口愈合應(yīng)答的后果，所述原因包括病毒、自身免疫、藥物誘導(dǎo)的、膽汁郁積和代謝疾病。肝纖維化和肝硬化的常見原因包括免疫介導(dǎo)的損害、遺傳異常和非酒精性脂肪性肝炎(steatohepatitis)(NASH),所述NASH特別與糖尿病和代謝綜合征(MS)有關(guān)。在西方人群中存在MS的高發(fā)病率。這種綜合征一般在肥胖、具有高脂血癥和高血壓的個(gè)體中發(fā)生，且通常導(dǎo)致II型糖尿病的發(fā)展。代謝綜合征的肝表現(xiàn)為非酒精性脂肪性肝病(NAFLD),在美國的估計(jì)流行率為人口總數(shù)的24%。脂肪肝代表一系列NAFLD的較不嚴(yán)重的結(jié)果，所述一系列NAFLD可以進(jìn)展至NASH且最終至肝硬化。纖維化的發(fā)展顯示了此類進(jìn)展的危險(xiǎn)，且目前借助于肝活組織檢查進(jìn)行評(píng)估。然而，肝活組織檢查引起明顯不適，并非沒有危險(xiǎn)且昂貴。此外，對(duì)于肝纖維化可用的血液測試在NAFLD方面不可靠。WO00/23113公開了包含肽和載體分子的化合物，其中肽靶向肝星狀細(xì)胞(HSC)。呈現(xiàn)的靶受體例子是對(duì)于HSC特異或在疾病(包括纖維化疾病)期間在HSC上上調(diào)的那些，例如血小板衍生生長因子受體、膠原VI受體、轉(zhuǎn)化生長因子卩受體、白細(xì)胞介素-l卩受體和腫瘤壞死因子a受體。在呈現(xiàn)的另一個(gè)方面，靶受體是陽離子非依賴性甘露糖-6-磷酸(M6P)受體，所述M6P受體已報(bào)道在肝纖維化中超表達(dá)。合適載體的例子是人血清清蛋白、蛋白質(zhì)、聚合載體和脂質(zhì)體。公開的化合物主要是可以用于耙向所有種類的治療劑的藥物載體。闡述了該載體適當(dāng)?shù)卮笥?000Da。還提及它們可以應(yīng)用于HSC顯影用于診斷目的，從而闡述該化合物可以進(jìn)一步包含診斷標(biāo)記。然而，沒有診斷標(biāo)記如何可以與公開的化合物附著的描述。EP1495769Al公開了用于在反義策略，特別是體內(nèi)反義策略中使用的糖苷-化合物綴合物。該綴合物包含與化合物連接的糖苷，其中糖苷是能夠與肌細(xì)胞的甘露糖-6-磷酸受體結(jié)合的配體。提及了用于體內(nèi)或體外診斷的被"標(biāo)記"以包括焚光、放射性、酶促或分子標(biāo)記的綴合物，但沒有如何獲得此種標(biāo)記的化合物的描述。因此需要用于檢測纖維化且特別是肝纖維化的可替代的非侵入性測試。發(fā)明概述本發(fā)明提供了適合于纖維化的非侵入性顯影的新顯像劑。本發(fā)明還提供了用于制備顯像劑的方法，以及用于在所述方法中使用的前體。本發(fā)明還提供了包含顯像劑的藥物組合物和用于制備藥物組合物的試劑盒。在進(jìn)一步的方面，提供了顯像劑用于其中甘露糖-6-磷酸受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)成像的用途和制備用于診斷其中甘露糖-6-磷酸受體上調(diào)的狀況的藥物中的用途。發(fā)明詳述在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了顯像劑，其包含(i)對(duì)于甘露糖-6-磷酸(M6P)受體具有親和力的載體；和(ii)成像部分其中成像部分作為載體的整合部分存在或成像部分經(jīng)由合適的化學(xué)基團(tuán)與載體綴合。在本發(fā)明的背景中，術(shù)語"M6P受體"具體涉及陽離子非依賴性M6P受體的胞外域。術(shù)語"顯像劑"意指設(shè)計(jì)為靶向哺乳動(dòng)物中的特定生理學(xué)或病理生如上所述，在本發(fā)明的顯像劑中，:;部分可以作為載體的整合部分存在，例如載體的原子之一可以是"C而不是12C。可替代地，成像部分可以經(jīng)由合適的化學(xué)基團(tuán)與載體綴合，例如可以絡(luò)合是金屬離子的成像部分的金屬螯合物。還可以存在使載體與合適的化學(xué)基團(tuán)或直接與成像部分自身連接的接頭。本發(fā)明的合適接頭具有式-(L1)n-，其中每個(gè)L1獨(dú)立地是-CO-、-CR2-、-CR=CR-、-OC-、-CR2C02-、-C02CR2-、■NR—、誦NRCO-、-CONR—、-NR(C=0)NR—、畫NR(C=S)NR-、—S02NR-、-NRS02-、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C4.8亞環(huán)雜烷基(cycloheteroalkylene)、C4-8亞環(huán)烷基(cycloalkylene)、C5-12亞芳基、Cm雜亞芳基、氨基酸殘基、聚(亞烷基)二醇、聚乳酸或聚乙醇酸部n是值0-20的整數(shù)；每個(gè)R基團(tuán)獨(dú)立地是H或d-u)烷基、Cwo烷基芳基、C2-K)烷氧基烷基、CMo羥烷基、Cwo氟烷基，或2個(gè)或更多R基團(tuán)，連同它們與之附著的原子一起形成碳環(huán)、雜環(huán)、飽和或不飽和的環(huán)。設(shè)想分支接頭基團(tuán)也是可能的，即由進(jìn)一步的接頭-(L2)。-R'取代的接頭基團(tuán)-(L1)n-，其中L2、o和R'分別如上文對(duì)于L1、n和R定義的。此種接頭在處理顯像劑的生物分布和/或排泄概況的背景中特別有用。例如，包含聚乙二醇基團(tuán)或乙酰基的接頭的包括可以改善顯像劑的血液滯留期。術(shù)語"氨基酸"意指丄-或D-氨基酸、氨基酸類似物(例如，萘基丙氨酸(napthylalanine)或氨基酸沖莫擬物(mimetic),其可以是天然存在的或具有純地合成起源，且可以是光學(xué)上純的，即單對(duì)映體和因此手性的，或是對(duì)映體混合物。優(yōu)選地本發(fā)明的氨基酸是光學(xué)上純的。此種接頭還具有與如下所述的本發(fā)明的其他部分相關(guān)的應(yīng)用。對(duì)于本申請(qǐng)，優(yōu)選的y和17基團(tuán)是-C0-、-CH2-、-NH-、-NHCO-、-CONH-、-CH20CHr和氨基酸殘基。本發(fā)明背景中的術(shù)語"親和力"用于意指在體外與M6P受體結(jié)合的Kd值小于100nM，優(yōu)選地小于50nM且最優(yōu)選地小于10nM?？商娲?，親和力可以被定義為抑制p-半乳糖苷酶在體外與M6P受體結(jié)合的能力[由Distler等人1991J.Biol.Chem.266(32)21687-92描述],其中IC50值小于l(HiM、優(yōu)選地小于ljxM,最優(yōu)選地小于O.l]tiM且特別優(yōu)選地小于0.01)iM。親和力還可以被定義為抑制胰島素樣生長因子-II(IGF-II)在體外與M6P受體結(jié)合的能力[MarronP.G.等人1998J.Biol.Chem.^21(35)22358-22366],其中1。5()值小于10pM、優(yōu)選地小于lpM,最優(yōu)選地小于O.lpM且特別優(yōu)選地小于O.OIjliM。本發(fā)明的顯像劑優(yōu)選地不在M6P載體上綴合寡核苷酸、RNA、DNA、肽核酸、生長因子、疫苗、維生素或抗體。最優(yōu)選地本發(fā)明的顯像劑只具有與M6P載體綴合的成像部分，即沒有任何進(jìn)一步物質(zhì)與M6P載體綴合。對(duì)于M6P受體的載體優(yōu)選地包含下述中的至少一種(i)67氨基酸的IGF-II序列，或其片段或肽類似物；(ii)M6P;(iii)二磷酸化糖肽；或(iv)視黃酸或其衍生物。IGF-II以高親和力(在pH7.4下Kd0.3-14nM)與M6P受體結(jié)合，且因此適合于在本發(fā)明中用作載體。IGF-II是如SEQIDNO.1中所示的67氨基酸(aa)殘基的非糖基化單鏈。優(yōu)選地，可以使用67aa序列的肽片段或肽類似物。本發(fā)明背景中的術(shù)語"肽片段"用于意指包含67aaIGF-II序列的分離的片段的天然或合成肽，所述分離的片段保留對(duì)于M6P受體的親和力。IGF-II序列的肽片段可以由5-60個(gè)aa殘基組成，優(yōu)選地8-60個(gè)aa殘基。優(yōu)選的肽片段是合成肽。本發(fā)明背景中的術(shù)語"肽類似物"用于意指包含67aaIGF-II序列的全部或分離的片段的天然或合成肽，其中一個(gè)或多個(gè)aa殘基已由可替代的aa殘基置換，且保留對(duì)于M6P受體的親和力。優(yōu)選的肽類似物是合成肽。為了使肽的改變降到最低，僅置換少數(shù)aa殘基且僅進(jìn)行保守置換是通常的實(shí)踐。下表概述了被視為保守的置換<table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table>然而，任何aa置換都是合適的，只要對(duì)于M6P受體的親和力被保留。此外，優(yōu)選的aa置換是導(dǎo)致對(duì)于M6P受體具有超過胰島素樣生長因子I(IGF-I)受體的增加的特異性的肽類似物的那些置換。例如，Tyr27由Leu的非保守置換使對(duì)于IGF-I受體的親和力減少，同時(shí)保留對(duì)于M6P受體的親和力。下述是最優(yōu)選的67aaIGF-II序列的肽片段和肽類似物的例子(i)包含氨基酸殘基48-55(SEQIDNO2)的肽或其肽類似物；(ii)包含直接連接或由式-(L3)p-的接頭隔開的氨基酸殘基8-28(SEQIDNO.3)和41-61(SEQIDNO.4)的肽或其肽類似物；(iii)包含氨基酸殘基8-67(SEQIDNO.5)的肽或其肽類似物；和(iv)如下的各種氨基酸殘基置換Phe26Ser(SEQIDNO.6);Phel9Ser(SEQIDNO.7);Glul2Lys(SEQIDNO.8);Tyr27Leu(SEQIDNO.9)其中1^如上文對(duì)于I^定義的且p是1-30。12本發(fā)明的優(yōu)選IGF-II片段的例子是IGF化合物1:"IGF化合物1"(合成在實(shí)施例1中描述)這些肽可以通過常規(guī)固相合成來獲得。Albericio提供了用于固相肽合成的方法的近期綜述[Curr.OpinionCellBiol.20048211-21]。IGF-II的2個(gè)或更多肽片段可以任選通過一個(gè)或多個(gè)接頭基團(tuán)-(L3)p-進(jìn)行連接。在IGF-II的2個(gè)肽片段連接的背景中，包含是氨基酸和/或PEG的！^基團(tuán)的接頭是優(yōu)選的。當(dāng)接頭是PEG接頭時(shí)，它優(yōu)選地由1-30個(gè)乙二醇單位組成。對(duì)于IGF-II肽及其片段或肽類似物，關(guān)于成像部分的合適位置包括肽的氨基末端和羧基末端。其他合適的位置是構(gòu)成肽的氨基酸的側(cè)鏈。優(yōu)選地，存在使IGF-II、或其片段或肽類似物與成像部分連接的接頭。例如，在上文的IGF化合物1的情況下，顯像劑優(yōu)選地位于接頭末端的氨基處。包含M6P的許多化合物適合于在本發(fā)明的顯像劑中用作載體。這些包括M6P、M6P裝飾的人血清清蛋白(HSA)和含M6P的寡甘露糖苷，例如如下由Distler等人[J.Biol.Chem.1991266(32)21687-92]報(bào)道的那些(其中Mar^甘露糖)(i)M6P(a1,2)-Man國O(CH2)8C02Me(al,2連接的二甘露糖苷)(ii)M6P(al,3)-Man誦O(CH2)8C02Me(al,3連接的二甘露糖苦)(iii)M6P(al,6)-Man陽O(CH2)8C02Me(al，6連才妄的二甘露糖苦)(iv)M6P(al,2)德n(al,2)-Man-O(CH2)8C〇2Me(al,2連接的三甘露糖苷)(v)雙觸角的寡甘露糖苷:(M6Pal,2)"Mcm(a1,6)^)Man-O(CH2)6CO2Me(M6Pal.2卜Manlal,3lZ上文的化合物(i)-(v)在本文中分別被稱為"M6P化合物1"至"M6P化合物5"。上述寡糖化合物的合成已由Distler等人[J.Biol.Chem1991266(32)21687-92]和Srivastava等人[J.Org.Chem.1987522869-75]報(bào)道。當(dāng)包含M6P的化合物是載體時(shí)，成像部分適當(dāng)?shù)亟?jīng)由所述載體的取代基進(jìn)行綴合，所述取代基不涉及與M6P受體的結(jié)合。優(yōu)選地，包含M6P的化合物是M6P化合物1-6之一，且成像部分經(jīng)由M6P化合物1-5的羧甲基基團(tuán)，或經(jīng)由M6P化合物6的賴氨酸殘基胺進(jìn)行綴合。在可替代的優(yōu)選實(shí)施方案中，包含M6P的化合物可以是上述化合物之一，但其中一個(gè)或多個(gè)磷酸酯基被膦酸酯基替換。適合于在本發(fā)明的顯像劑中用作載體的其他化合物是二磷酸化糖肽。WO95/014036公開了與M6P受體結(jié)合且在炎癥和其他疾病的治療中有用的此種化合物，并且其合成由Christensen等人(J.Chem.Soc.PerkinTrans.19941299-1310)描述。這些化合物中的任何一種都是用于本發(fā)明的合適載體。它們可以由式I表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中1^和112獨(dú)立地選自(i)選自下述的天然L-或D-單糖葡萄糖、甘露糖、半乳糖、巖藻糖、rhammanose、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺、果糖和N-乙酰神經(jīng)氨酸、或其磷酸化或硫酸化形式；或，(ii)由選自(i)的單糖組成的寡糖；AJ和A5獨(dú)立地選自-H、-OH、-NH2、-乙?；?、D-或L-氨基酸、肽、糖肽、肽才莫擬物(peptidomimetics)和寡核苦酸，八2和八4獨(dú)立地選自D-或L-羥基氨基酸，例如Ser、Thr、Hyl、Hyp、Tyr，或D-或L-酰胺氨基酸，例如Asn和Gln,且八3選自以其D-或L-形式的遺傳編碼或非編碼的氨基酸或肽模擬物或核苷酸，且其中m是l-30的整數(shù)且其中所述線性序列A1-A5中的任何殘基可以進(jìn)行共價(jià)連接以形成環(huán)狀化合物。優(yōu)選地，W和R^是M6P基團(tuán)，A'是乙?；野?是-NH2,八2和AA是Thr，且V是1-5個(gè)氨基酸殘基的鏈。本發(fā)明的最優(yōu)選的二磷酸化糖肽是(i)Ac-Thr[a-D-M6P-(1,2)-a-D-甘露糖]-Lys(氨基苯曱酰胺)-Thr[a-D-M6P-(1，2)-01-0-甘露糖]->^2("糖肽化合物1")(ii)Ac-Thr[a-D-M6P]-Gly-Lys-Gly-Thr[a-D-M6P]-NH2("糖肽化合物2")當(dāng)二磷酸化糖肽是對(duì)于M6P受體具有親和力的載體時(shí)，成像部分優(yōu)選地經(jīng)由基團(tuán)(A3)m中存在的氨基酸之一進(jìn)行綴合。在可替代的優(yōu)選實(shí)施方案中，二磷酸化糖肽可以是上述化合物之一，但其中一個(gè)或多個(gè)磷酸酯基被膦酸酯基替換。視黃酸與M6P受體上不同于IGF-II結(jié)合位點(diǎn)的位點(diǎn)且以高親和力(Kd2.4nM)結(jié)合。它以及它的衍生物因此作為本發(fā)明的顯像劑中的載體是合適的。視黃酸的結(jié)構(gòu)在下文舉例說明<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>適合于本發(fā)明的視黃酸衍生物包括通過添加式-(L4)q-R"的基團(tuán)修飾的一見黃酸，其中L4、q和R"如上文對(duì)于L1、n和R定義的。R"優(yōu)選是氨基、羧基和羥基，且L"優(yōu)選是氨基酸或PEG。當(dāng)接頭是PEG接頭時(shí)，它優(yōu)選由1-20個(gè)乙二醇單位組成，最優(yōu)選地1-15個(gè)乙二醇單位和特別優(yōu)選地1-12個(gè)乙二醇單位。這種類型的視黃酸的優(yōu)選衍生物包括PEG接頭加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。設(shè)想PEG接頭可以包括一個(gè)或多個(gè)帶電氨基酸基團(tuán)作為調(diào)整所得到的顯像劑的生物分布和/或排泄的手段。當(dāng)對(duì)于M6P受體的載體是視黃酸或其類似物時(shí)，成像部分優(yōu)選經(jīng)由視黃酸的羧基或經(jīng)由視黃酸類似物中存在的任何反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行綴合，所述反應(yīng)基團(tuán)例如上文視黃酸化合物1中的氨基或羧基。此外設(shè)想載體可以是使2種或更多種上述載體組合的多價(jià)靶向載體。由于M6P受體包含對(duì)于每種栽體獨(dú)立的結(jié)合位點(diǎn)的事實(shí)，包含此種載體的顯像劑預(yù)期顯示出對(duì)于M6P受體增加的親和力。此種多價(jià)載體的例子在下文舉例說明對(duì)于具有2個(gè)M6P基團(tuán)的多價(jià)載體，這些優(yōu)選由如前定義的分支PEG接頭基團(tuán)連接在一起。上圖中舉例說明的接頭具有式-(L5)r-,其中！/如前文對(duì)于1^定義的，且r是10-50。理想地，接頭用于使單獨(dú)的載體部分間隔開，從而使得它們?nèi)绱硕ㄎ灰耘c其在M6P受體上各自的結(jié)合位點(diǎn)最佳結(jié)合。包含氨基酸和/或PEG的接頭是優(yōu)選的。在顯像劑施用后，"成像部分，，可以在人身體外部進(jìn)行檢測或經(jīng)由使用設(shè)計(jì)用于在體內(nèi)使用的探測器進(jìn)行檢測，例如血管內(nèi)輻射或光學(xué)探測器例如內(nèi)窺鏡，或設(shè)計(jì)用于手術(shù)中(intra-operative)使用的輻射探測器。成像部分優(yōu)選選自(i)放射性金屬離子；(ii)順磁性金屬離子；(iii)，射線發(fā)射放射性鹵素；(iv)正電子發(fā)射放射性非金屬；(v)超極化NMR活性核；(vi)適合于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子；(vii)適合于血管內(nèi)檢測的p-射線發(fā)射體。當(dāng)成像部分是放射性金屬離子即射電金屬(radiometal)時(shí)，合適的射電金屬可以是正電子發(fā)射體例如64Cu、48V、52Fe、55Co、94mTc或68Ga;，射線發(fā)射體例如"mTc、mIn、113mIn或67Ga。優(yōu)選的射電金屬是99mTc、64Cu、"Ga和111111。最優(yōu)選的射電金屬是"射線發(fā)射體，特別是"，c。當(dāng)成像部分是順磁性金屬離子時(shí)，合適的此種金屬離子包括Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Cr(III)、Fe(III)、Co(II)、Er(II)、Ni(II)、Eu(III)或Dy(III)。優(yōu)選的順磁性金屬離子是Gd(III)、Mn(II)和Fe(III)，其中Gd(III)是特別優(yōu)選的。當(dāng)成像部分是Y-射線發(fā)射放射性囟素時(shí)，放射性卣素適當(dāng)?shù)剡x自123I、^I或"Br。1251被特別排除，因?yàn)樗贿m合于用作成像部分用于診斷顯像。優(yōu)選的"射線發(fā)射放射性卣素是1231。當(dāng)成像部分是正電子發(fā)射放射性非金屬時(shí)，合適的此種正電子發(fā)射體包括HC、13N、150、17F、18F、75Br、76Br或124I。優(yōu)選的正電子發(fā)射放射性非金屬是"C、13N、18F和124I,特別是"C和18F,最特別是18F。當(dāng)成像部分是超極化NMR活性核時(shí)，此種NMR活性核具有非零的核自旋，且包括"C、15N、19F、"Si和"P。在這些中，"C是優(yōu)選的。術(shù)語"超極化"意指NMR活性核的極化程度超過其平衡極化的增加。13C的天然豐度(相對(duì)于12C)為約1%,且在超極化之前合適的"C標(biāo)記的化合物適當(dāng)?shù)馗患林辽?%的豐度，優(yōu)選地至少50%,最優(yōu)選地至少90%。本發(fā)明的顯像劑的至少一個(gè)碳原子適當(dāng)?shù)赜?3C富集，所述13C隨后進(jìn)行超極化。當(dāng)成像部分是適合于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子時(shí)，報(bào)道分子是在光學(xué)成像程序中能夠直接或間接檢測的任何部分。報(bào)道分子可以是光散射體(例如有色或無色顆粒)、光吸收體或光發(fā)射體。更優(yōu)選地報(bào)道分子是染料例如發(fā)色團(tuán)或熒光化合物。染料可以是與在電磁譜中具有從紫外線到近紅外線的波長的光相互作用的任何染料。最優(yōu)選地報(bào)道分子具有熒光性質(zhì)。優(yōu)選的有機(jī)發(fā)色和熒磷光(fluorophoric)報(bào)道分子包括具有廣泛移位的電子系統(tǒng)的基團(tuán)，例如花菁、部花青、靛青、酞菁、萘酞菁(naphthalocyanines)、三苯基次曱基(triphenylmethines)、外啉、他喃鎩(pyrilium)染料、蓬喃錫(thiapyrilium)染料、squaryli訓(xùn)染料、croconium染料、azulenium染料、散苯胺(indoaniline)、benzophenoxazinium染料、benzothiaphenothiazinium染料、蒽職、萘酉昆(napthoquinones)、indathrenes、鄰苯二甲酰吖咬酮、三苯酚合苯醌(trisphenoquinones)、偶氮染料、分子內(nèi)和分子間電荷轉(zhuǎn)移染料和染料絡(luò)合物、環(huán)庚三烯酮、四。秦、雙(二硫綸)絡(luò)合物(bis(dithiolene)complexes)、雙(苯二石危醇鹽)絡(luò)合物、碘苯胺(iodoaniline)染料、雙(S，O-二硫綸)絡(luò)合物。焚光蛋白質(zhì)例如綠色熒光蛋白(GFP)和具有不同吸收/發(fā)射性質(zhì)的GFP修飾也是有用的。在某些背景中使用某些稀土金屬(例如，銪、釤、鋱或鏑)的絡(luò)合物，就像熒光納米晶體(nanocrystal)(量子點(diǎn))一樣?？梢允褂玫陌l(fā)色團(tuán)的具體例子包括焚光素、磺酰羅丹明101(sulforhodamine101)(德克薩斯紅(TexasRed))、羅丹明B、羅丹明6G、羅丹明19、靛青綠、Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、MarinaBlue、PacificBlue、OregonGreen88、OregonGreen514、四曱基羅丹明、和AlexaFluor350、AlexaFluor430、AlexaFluor532、AlexaFluor546、AlexaFluor555、AlexaFluor568、AlexaFluor594、AlexaFluor633、AlexaFluor647、AlexaFluor660、AlexaFluor680、AlexaFluor700、和AlexaFluor750。特別優(yōu)選的是在可見或近紅外線(NIR)區(qū)域，400nm-3pm,特別是600-1300nm中具有最大吸收的染料。光學(xué)成像形式和測量技術(shù)包括但不限于發(fā)光成像；內(nèi)窺鏡；熒光內(nèi)窺鏡；光相干斷層攝影術(shù)；透射成像；時(shí)間分辨透射成像；共焦成像；非線性顯微鏡術(shù)；光聲成像；聲光成像；光譜學(xué)；反射光鐠；干涉分析法；相干干涉分析法；擴(kuò)散光學(xué)斷層攝影術(shù)和熒光介導(dǎo)的擴(kuò)散光學(xué)斷層攝影術(shù)(連續(xù)波、時(shí)域和頻域系統(tǒng))以及光散射、吸收、極化、發(fā)光、熒光壽命、量子產(chǎn)率和猝滅測量。當(dāng)成像部分是適合于血管內(nèi)檢測的P-射線發(fā)射體時(shí)，合適的此種卩-射線發(fā)射體包括射電金屬67Cu、89Sr、9QY、153Sm、186Re、188Re或192Ir,和非金屬32p、33P、38S、38C1、39C1、82Br和83Br。優(yōu)選的成像部分是在體內(nèi)施用后可以以非侵入性方式外部檢測的那些。最優(yōu)選的成像部分是放射性的，特別是放射性金屬離子、y射線發(fā)射放射性卣素和正電子發(fā)射放射性非金屬，特別是適合于使用SPECT或PET成像的那些。這些成像部分可以通過其摻入每種載體類型內(nèi)的各種方法在下文本發(fā)明的進(jìn)一步方面的描述中概述。本發(fā)明的優(yōu)選顯像劑在體內(nèi)不經(jīng)歷易實(shí)現(xiàn)的代謝，且因此最優(yōu)選地在人中顯示出60-240分鐘的體內(nèi)半衰期。顯像劑優(yōu)選經(jīng)由腎排泄(即顯示出尿排泄)。顯像劑優(yōu)選在患病病灶處顯示出至少1.5的信號(hào)背景比，最優(yōu)選地至少5，而至少10是特別優(yōu)選的。當(dāng)顯像劑包含放射性同位素時(shí)，在體內(nèi)非特異性結(jié)合或游離的顯像劑峰水平一半的清除優(yōu)選地在小于或等于成像部分的放射性同位素的放射性衰變半衰期的時(shí)間段內(nèi)發(fā)生。此外，顯像劑的分子量適當(dāng)?shù)刈罡哌_(dá)5000道爾頓。優(yōu)選地，分子量為150-3000道爾頓，最優(yōu)選地200-1500道爾頓，而300-800道爾頓是特別優(yōu)選的。本發(fā)明的顯像劑的例子在下文舉例說明IGF顯像劑1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>糖肽顯像劑1用于獲得上文化合物的合成途徑分別在實(shí)施例4、7、8和10中得到描述。本發(fā)明的這個(gè)方面的顯像劑由前體化合物制備，這具體體現(xiàn)了本發(fā)明的進(jìn)一步方面且在下文更詳細(xì)地描述。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了用于制備本發(fā)明的顯像劑的方法，所述方法包括使前體與合適來源的成像部分反應(yīng)，其中所述前體包含(i)對(duì)于M6P受體具有親和力的載體；和(ii)能夠與成像部分來源反應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，從而使得成像部分變得與化合物附著，以導(dǎo)致產(chǎn)生所述顯像劑；其中所述化學(xué)基團(tuán)是所述載體的整合部分或與所述載體綴合。"前體"包含這樣設(shè)計(jì)的載體衍生物，從而使得與方便化學(xué)形式的成像部分的化學(xué)反應(yīng)位點(diǎn)特異性發(fā)生；可以以最低限度數(shù)目的步驟(理想地單步)進(jìn)行；并且無需顯著純化(理想地沒有進(jìn)一步的純化)，以產(chǎn)生所需顯像劑。此種前體是合成的，并且可以以良好的化學(xué)純度方便地獲得。"前體"可以任選包含用于對(duì)于M6P受體具有親和力的載體的某些官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)。術(shù)語"保護(hù)基團(tuán)"意指基團(tuán)，其抑制或壓制不希望有的化學(xué)反應(yīng)，但設(shè)計(jì)為足夠反應(yīng)性的，從而使得它在不改變分子其余部分的足夠溫和的條件下可以與所討論中的官能團(tuán)切割開。脫保護(hù)后獲得所需產(chǎn)物。保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的并且適當(dāng)?shù)剡x自，對(duì)于胺基團(tuán)Boc(其中Boc是叔丁氧基羰基)、Fmoc(其中Fmoc是芴甲氧羰基)、三氟乙酰基、烯丙氧基羰基、Dde[即1-(4,4-二曱基-2,6-二氧代亞環(huán)己基)乙基]或Npys(即3-硝基-吡啶亞磺酰基)；和對(duì)于羧基曱酯、叔丁酯或苯甲酯。對(duì)于羥基，合適的保護(hù)基團(tuán)是曱基、乙基或叔丁基；烷氧基曱基或烷氧基乙基；苯曱基；乙?；?；苯曱?；蝗綍趸?Trt)或三烷基曱硅烷基例如四丁基二甲基甲硅烷基。對(duì)于硫醇基，合適的保護(hù)基團(tuán)是三苯甲基和4-甲氧苯曱基。進(jìn)一步的保護(hù)基團(tuán)的使用在'ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis',TheorodoraW.Greene禾口PeterG.M.Wuts,(第3版,JohnWiley&Sons,1999)中得到描述。優(yōu)選地，能夠與成像部分來源反應(yīng)的所述化學(xué)基團(tuán)包含(i)能夠使金屬成像部分絡(luò)合的螯合劑；(ii)有機(jī)金屬衍生物，例如三烷基錫烷或三烷基硅烷；(iii)含有烷基卣、對(duì)甲苯磺酸烷基酯或甲磺酸烷基酯用于親核取代的衍生物；(iv)含有朝向親核或親電子取代活化的芳環(huán)的衍生物；(v)含有經(jīng)歷易實(shí)現(xiàn)的烷化的官能團(tuán)的衍生物；或，(vi)使含硫醇化合物烷化以產(chǎn)生含硫醚產(chǎn)物的衍生物當(dāng)成像部分包含金屬離子時(shí)，前體包含能夠使金屬離子絡(luò)合以形成金屬絡(luò)合物的化學(xué)基團(tuán)。術(shù)語"金屬絡(luò)合物"意指金屬離子與一種或多種配體的配位絡(luò)合物。特別優(yōu)選金屬絡(luò)合物是"對(duì)轉(zhuǎn)螯合作用(transchelation)抗性的"，即對(duì)于金屬配位部位不容易經(jīng)歷與其他潛在地竟?fàn)幣潴w的配體交換。潛在地竟?fàn)幣潴w包括對(duì)于M6P受體自身的載體加體外制備中的其他賦形劑(例如在制備中使用的輻射防護(hù)劑或抗微生物性防腐劑)或體內(nèi)的內(nèi)源性化合物(例如谷胱甘肽、運(yùn)鐵蛋白或血漿蛋白質(zhì))。用于在本發(fā)明中使用的、形成對(duì)轉(zhuǎn)螯合作用抗性的金屬絡(luò)合物的合適配體包括螯合劑，其中2-6，優(yōu)選地2-4金屬供電子原子被這樣排列，從而使得產(chǎn)生5員或6員的螯合環(huán)(通過讓碳原子或非配位雜原子的非配位主鏈連接金屬供電子原子)；或包含與金屬離子強(qiáng)結(jié)合的供電子原子的單齒配體，例如異腈、膦或diazenides。作為螯合劑部分與金屬良好結(jié)合的供電子原子類型的例子是胺、硫醇、酰胺、將和膦。膦形成這樣強(qiáng)的金屬絡(luò)合物，從而使得甚至單齒或二齒膦都形成合適的金屬絡(luò)合物。異腈和diazenides的線性幾何學(xué)是這樣的，從而使得它們不易于容易地?fù)饺腧蟿﹥?nèi)，且因此一般用作單齒配體。合適的異腈例子包括簡單的烷基異腈例如叔丁基異腈，和醚取代的異腈例如mibi(即1-異氰基-2-甲氧基-2-曱基丙烷)。合適的膦例子包括替曲膦(Tetrofasmin)、和單齒膦例如三(3-甲氧基丙基)膦。合適的diazenides例子包括配體的HYNIC系列，即肼取4<的吡咬或煙酰胺。用于形成對(duì)轉(zhuǎn)螯合作用抗性的金屬絡(luò)合物的锝的合適螯合劑例子包括但不限于(i)二胺二肺；(ii)具有硫醇三酰胺供體組例如MAG3(巰基乙?；拾彼?的N3S配體和相關(guān)配體；或具有二酰胺吡咬石危醇供體組例如Pica;(iii)具有二胺二碌b醇供體組例如BAT或ECD(即雙半胱乙酯(ethylcysteinatedimer)),或酰胺胺二碌u醇供體組例如MAMA的N2S2配體；(iv)是開鏈的N4配體或具有四胺、酰胺三胺或二酰胺二胺供體組例如1,4,8,1l-四-吖環(huán)四脊火克(cyclam)、monoxocyclam或dioxocyclam的大環(huán)配體；或(V)具有二胺聯(lián)苯酚供體組的N2。2配體。用于锝的本發(fā)明的優(yōu)選螯合劑是二胺二肟和四胺，現(xiàn)在更詳細(xì)地描述其優(yōu)選形式。優(yōu)選的二胺二將具有式(X):其中E^EG各自獨(dú)立地是11*基團(tuán)；每個(gè)W是H或CwQ烷基、CwQ烷基芳基、C2-u)烷氧基烷基、Cwo羥烷基、Cwo氟烷基、Cwo羧基烷基或Cwo氨烷基，或2個(gè)或更多R*基團(tuán)連同它們與之附著的原子一起形成碳環(huán)、雜環(huán)、飽和或不飽和的環(huán)，并且其中一個(gè)或多個(gè)11*基團(tuán)與載體綴合；且(^是式-(J1)r的橋連基；其中f是3、4或5,且每個(gè)J'獨(dú)立地是-0-、^11*-或-C(R*)2-,前提是-(J1)r包含最多1個(gè)是-0-或-NR、的W基團(tuán)。優(yōu)選的(^基團(tuán)如下Q1=-(CH2)(CHR*)(CH2)-即丙二胺將或PnAO書亍生物；Q1=-(CH2)2(CHR*)(CH2)2-即戊二胺肝或PentAO書T生4勿；Q1=畫(CH2)2NR*(CH2)2畫。Ei-EM尤選地選自Cw烷基、烷基芳基烷氧基烷基、羥烷基、氟烷基、羧基烷基或氨烷基。最優(yōu)選地，每個(gè)E1-ES基團(tuán)是CH3。對(duì)于M6P受體的載體優(yōu)選地在Ei或E611*基團(tuán)，或(^部分的R*基團(tuán)處綴合。最優(yōu)選地，它與(^部分的W基團(tuán)綴合。當(dāng)它與(^部分的R承基團(tuán)綴合時(shí)，W基團(tuán)優(yōu)選地在橋頭位置處。在那種情況下，QN尤選地是-(CH2)(CHR*)(CH2)-、-(CH2)2(CHR*)(CH2)2-或-(CH2)2NR*(CH2)2-，最優(yōu)選地陽(CH2)2(CHR*)(CH2)2-。特別優(yōu)選的雙功能二胺二肟螯合劑具有式(Xa):其中E7-E2Q各自獨(dú)立地是如上定義的11*基團(tuán)；GlN或CR*;yi是-(L6)s-載體，其中1^和s如上文對(duì)于i;和n定義的，且'載體，代表如前定義的對(duì)于M6P受體具有親和力的載體。當(dāng)存在接頭基團(tuán)-(L"s-時(shí)，不存在使螯合物與載體連接的其他接頭基團(tuán)。式(Xa)的優(yōu)選螯合劑具有式(Xb):其中G如上文對(duì)于Gi定義的，且優(yōu)選地是CH(-"螯合物X",關(guān)于其的合成在實(shí)施例5中得到描述)；從而使得對(duì)于M6P受體的載體經(jīng)由橋頭-CH2CH2NH2基團(tuán)綴合。本發(fā)明的優(yōu)選四胺螯合劑具有式Z:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中(52是式-(J2)g-的橋連基；其中g(shù)是l-8,且每個(gè)j2獨(dú)立地是-0-、^^11*-或-C(R*)2-，優(yōu)選地-C(R*)2-和最優(yōu)選地-CHr,其中11*如前定義。YZ是基團(tuán)-(L)r載體，其中L和t如前文對(duì)于lJ和n定義的。當(dāng)存在接頭-(L7)t-時(shí)，不存在使螯合物與載體連接的其他接頭。優(yōu)選地對(duì)于這些四胺螯合物，接頭不包含芳基環(huán)。這幫助使絡(luò)合物的親脂性降到最低。E"-E"是如前定義的尺*基團(tuán)。本發(fā)明的最優(yōu)選的四胺螯合物具有式Za:其中丫3如上文對(duì)于丫2定義的。本發(fā)明的特別優(yōu)選的四胺螯合物具有式Za,其中丫3是-。0-載體("螯合物Z",沒有附著載體的螯合物的合成在實(shí)施例2中得到描述)。上述配體特別適合于使锝例如94mTc或99mTc絡(luò)合，并且由Jurisson等人[Chem.Rev.,絲，2205-2218(1999)]更充分地描述。配體對(duì)于其他金屬也是有用的，例如銅(64CU或67CU)、釩(例如48V)、鐵(例如"Fe)、或鈷(例如55Co)。其他合適的配體在SandozWO91/01144中得到描述，所述專利包括特別適合于銦、釔和釓的配體，特別是大環(huán)氨基羧酸酯和氨基膦酸配體。這種類型的合適螯合劑的例子包括1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)和二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)。形成釓的非離子(即中性)金屬絡(luò)合物的配體是已知的且在US4885363中得到描述。當(dāng)射電金屬離子是锝時(shí)，配體優(yōu)選是四齒的螯合劑。用于锝的優(yōu)選螯合劑是二胺二肟，或具有如前所述的N2S2或N3S供體組的那些。設(shè)想接頭基團(tuán)[上文定義為-(L6)s-或-(L7)r]的作用是使相對(duì)大的金屬絡(luò)合物遠(yuǎn)離，這在金屬配位后由載體對(duì)于M6P受體的活性位點(diǎn)產(chǎn)生，從而使得例如受體結(jié)合不受損害。這可以通過柔性(例如簡單的烷基鏈)組合來達(dá)到，從而使得大基團(tuán)具有使其本身定位遠(yuǎn)離活性位點(diǎn)的自由和/或剛性，例如使金屬絡(luò)合物遠(yuǎn)離活性位點(diǎn)定向的環(huán)烷基或芳基間隔基。接頭基團(tuán)的特性也可以用于修飾綴合物的所得到的金屬絡(luò)合物的生物分布和排泄性質(zhì)。因此，例如在接頭中引入醚基將幫助使血漿蛋白質(zhì)結(jié)合降到最低，或使用聚合接頭基團(tuán)例如聚(亞烷基)二醇，特別是PEG(聚乙二醇)可以幫助延長試劑在體內(nèi)血液中的壽命。優(yōu)選的接頭基團(tuán)-(L6)8-或-(L7)t-具有這樣的主鏈，其包含2-10個(gè)原子，最優(yōu)選地2-5個(gè)原子，而2或3個(gè)原子是特別優(yōu)選的。2個(gè)原子的最低限度接頭基團(tuán)主鏈賦予下述優(yōu)勢螯合劑與生物學(xué)靶向部分充分分開，從而使得任何相互作用降到最低。此外，載體不太可能與螯合劑的配位有效竟?fàn)幗饘匐x子。這樣，載體的生物學(xué)靶向特征和螯合劑的金屬絡(luò)合能力得到維持。特別優(yōu)選對(duì)于M6P受體的載體與螯合劑以這樣的方式結(jié)合，從而使得連接在血液中不經(jīng)歷易實(shí)現(xiàn)的代謝。這是因?yàn)榇朔N代謝將導(dǎo)致成像金屬絡(luò)合物在對(duì)于M6P受體的標(biāo)記的載體達(dá)到所需的體內(nèi)革巴位點(diǎn)前被切割掉。對(duì)于M6P受體的載體因此優(yōu)選經(jīng)由不容易被代謝的接頭基團(tuán)與本發(fā)明的金屬絡(luò)合物共價(jià)結(jié)合。合適的此種連接是碳-碳鍵、酰胺鍵、脲或硫脲鍵、或醚鍵。非肽接頭基團(tuán)例如亞烷基或亞芳基具有下述優(yōu)勢不存在與對(duì)于M6P受體的綴合載體的顯著氫鍵合相互作用，從而使得接頭不包纏在載體上。優(yōu)選的亞烷基間隔基是-(CH2)u-,其中u是值2-5的整數(shù)。優(yōu)選地q是2或3。優(yōu)選的亞芳基間隔基具有下式其中a和b各自獨(dú)立地是0、l或2。優(yōu)選的Y1-Y3基團(tuán)因此是—CH2CH2-(L8)v-,其中v是值0-3的整數(shù)。當(dāng)載體是肽時(shí)，Y1-YM尤選地是-CH2CH2-(L9)w-，其中l(wèi)/是-CO-或-NR"'-，且w是0-3,其中R"'如上文對(duì)于R定義的。當(dāng)G或GS是N,且-(L9)w-是-NH-時(shí)，這種基(grouping)具有它起源于對(duì)稱的中間體N(CH2CH2NH2)3的另外優(yōu)勢，所述中間體N(CH2CH2NH2)3是商購可得的。當(dāng)成像金屬是锝時(shí)，通常的锝原材料是高锝酸鹽，即處于Tc(VII)氧化狀態(tài)的锝的TcCV。高锝酸鹽其本身不容易形成金屬絡(luò)合物，因此锝絡(luò)合物的制備通常需要添加合適的還原劑例如亞錫離子，以通過使锝的氧化狀態(tài)還原至較低的氧化狀態(tài)來促進(jìn)絡(luò)合，通常為Tc(I)至Tc(V)。溶劑可以是有機(jī)的或水性的，或其混合物。當(dāng)溶劑包含有機(jī)溶劑時(shí)，有機(jī)溶劑優(yōu)選地是生物相容性溶劑，例如乙醇或DMSO。優(yōu)選地溶劑是水性的，且最優(yōu)選地是等滲鹽水。當(dāng)成像部分是放射性捵時(shí)，優(yōu)選的前體是包含衍生物的那些，所述衍生物經(jīng)歷親電子或親核碘化或經(jīng)歷與標(biāo)記的醛或酮的縮合。第一類的例子是(a)有機(jī)金屬衍生物，例如三烷基錫烷(例如三甲基甲錫烷基或三丁基曱錫烷基)，或三烷基硅烷(例如三甲基曱硅烷基)，或有機(jī)硼化合物(例如硼酸酯(boronateester)或有機(jī)三氟硼酸鹽)；(b)用于卣素交換的非放射性烷基溴或用于親核碘化的對(duì)曱苯磺酸烷基酯、甲磺酸烷基酯或三氟曱磺酸烷基酯；(c)朝向親電子碘化活化的芳環(huán)(例如苯酚)和朝向親核碘化活化的芳環(huán)(例如芳基碘鋪鹽芳基重氮，芳基三烷基銨鹽或硝基芳基衍生物)。前體優(yōu)選包含非放射性卣素原子例如芳基碘或溴(以允許放射性捵交換)；活化的前體芳基環(huán)(例如苯酚基)；有機(jī)金屬前體化合物(例如三烷基錫、三烷基曱硅烷基或有機(jī)硼化物)；或有機(jī)前體例如三氮烯或用于親核取代的良好離去基團(tuán)例如碘f翁鹽。優(yōu)選地對(duì)于放射性碘化，前體包含有機(jī)金屬前體化合物，最優(yōu)選地三烷基錫。將放射性碘引入有機(jī)分子內(nèi)的前體和方法由Bolton[J丄ab.Comp.Radiopharm.,41，485-528(2002)]描述。將放射性碘引入蛋白質(zhì)內(nèi)的前體和方法由Wilbur[Bioconj.Chem.，2(6),433-470(1992)]描述。合適的硼酸酯有機(jī)硼化合物及其制備由Kabalaka等人[Nucl.Med.Biol.,841-843(2002)和369-373(2003)]描述。合適的有機(jī)三氟硼酸鹽及其制備由Kabalaka等人[Nucl.Med.Biol.，H,935-938(2004)]描述。放射性碘可以與之附著的芳基例子在下文給出兩者都包含允許在芳環(huán)上易實(shí)現(xiàn)的放射性碘取代的取代基。包含放放射性碘原子優(yōu)選地經(jīng)由直接的共價(jià)鍵與芳環(huán)例如苯環(huán)或乙烯基附著，因?yàn)橐阎c飽和脂族系統(tǒng)結(jié)合的碘原子易于在體內(nèi)代謝且因此失去放射性碘。當(dāng)成像部分是氟的放射性同位素時(shí)，放射性氟原子可以形成氟烷基或氟烷氧基的部分，因?yàn)橥榛鷮?duì)于體內(nèi)代謝有抗性?？商娲?，放射性氟原子可以經(jīng)由直接的共價(jià)鍵與芳環(huán)例如苯環(huán)附著。放射性卣化可以經(jīng)由直接標(biāo)記使用18F-氟化物與具有良好的離去基團(tuán)的前體中合適的化合成，例*學(xué)基團(tuán)的反應(yīng)來進(jìn)行，所述前體例如烷基溴、甲磺酸烷基酯或?qū)醣交撬嵬榛ァ?F還可以通過N-卣乙?；?8F(CH2)30H反應(yīng)劑的烷化而引入，以產(chǎn)生-NH(CO)CH20(CH2)3"F衍生物。對(duì)于芳基系統(tǒng)，來自芳基重氮鹽、芳基硝基化合物或芳基季銨鹽的"F-氟化物親核置換是到芳基"F衍生物的合適途徑。如WO03/080544中所述的用于放射性氟化的進(jìn)一步方法是使包含下述取代基之一的前體化合物其中丫3是具有式-(L1G)x-的接頭，其中L"如前文對(duì)于i;定義的，x是1-IO且任選包括1-6個(gè)雜原子；且，丫4是具有式-(L11)y-的接頭，其中L"如前文對(duì)于i;定義的，y是1-30且任選包括1-IO個(gè)雜原子；以分別產(chǎn)生式(Va)或(Vb)的放射性氟化顯像劑與式V的化合物反應(yīng):18F-Y4-SH(V)載體，是如上文相對(duì)于本發(fā)明顯像劑定義的對(duì)于M6P受體具有親和力的載體。到"F-標(biāo)記的衍生物的合成途徑的進(jìn)一步細(xì)節(jié)由Bolton，丄Lab.Comp.Radiopharm.,41,485-528(2002)描述。本發(fā)明的"F-標(biāo)記的化合物可以通過18F氟二烷基胺形成和隨后當(dāng)18F氟二烷基胺與包含例如氯、P(0)Ph3或活化酯的前體反應(yīng)時(shí)的酰胺形成來獲得。當(dāng)載體是IGF-II或其片段或類似物時(shí)，成像部分可以經(jīng)由其氨基或羧基末端摻入。當(dāng)存在接頭時(shí)，成像部分可以經(jīng)由其中的任何反應(yīng)基團(tuán)摻入。例如，可以給IGF-IIaa48-55的氨基末端添加接頭，其后添加適合于摻入成像部分的化學(xué)基團(tuán)，以產(chǎn)生例如如下的前體化合物〕嚴(yán)H^tCLXjj。0o。^^X^oJ^X^HY^、Hq,L》HN=(HQIGF前體1"(合成在實(shí)施例3中得到描述)"IGF前體2"(合成在實(shí)施例6中得到描述)當(dāng)載體包含M6P時(shí)，成像部分可以通過下述而摻入，使如上所述的優(yōu)選化合物的羧甲基衍生化，以產(chǎn)生前體化合物例如(瞪al,2卜Man(a1,6)、(M6Pcxl,2卜Man(al,3)Zr,當(dāng)載體是二磷酸化糖肽時(shí)，成像部分可以例如經(jīng)由肽中存在的氨基酸殘基之一摻入，所述肽連接M6P單位以形成前體化合物，例如(iii)Ac-Thr[a-D掘P誦(1,2)-a-D-甘露糖]-Lys(螯合物)-Thr[a畫D掘P-(1,2)《-0-甘露糖]-:^&("糖肽前體1")(iv)Ac-Thr[a-D-M6P]-Gly-Lys-(螯合物)-Gly-Thr[a-D-M6P]-NH2("糖肽前體2")當(dāng)載體是視黃酸或其衍生物時(shí)，成像部分可以經(jīng)由羧基直接或經(jīng)由接頭間接摻入。羧基是用于摻入成像部分的最優(yōu)選位點(diǎn)，因?yàn)樗鼘?duì)于與M6P受體的結(jié)合不是必需的。具有接頭和能夠與成像部分來源反應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)的視黃酸前體化合物的例子是"視黃酸前體1"(合成在實(shí)施例9中描述)視黃酸是親脂化合物且同樣地，當(dāng)它與金屬絡(luò)合螯合物綴合以形成前體化合物時(shí)，它應(yīng)當(dāng)與親水金屬絡(luò)合螯合物例如四胺綴合。在組合載體的情況下，任何元件都可以如上文討論的經(jīng)由合適的基團(tuán)進(jìn)行衍生化，所述合適的基團(tuán)對(duì)于衍生化以形成前體是可用的。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的前體是無菌、無熱原形式的。前體因此可以用于制備藥物組合物，且同樣適合于作為組分包括在用于制備藥物組合物的試劑盒中。這些方面在下文相對(duì)于本發(fā)明的另外方面更詳細(xì)地討論。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的前體與固相結(jié)合。優(yōu)選提供以這樣的方式與固體支持體基質(zhì)共價(jià)附著的前體，從而使得標(biāo)記反應(yīng)導(dǎo)致同時(shí)標(biāo)記和從固相切割。所需的顯像劑產(chǎn)物因此在溶液中形成，并且任何原材料和雜質(zhì)都保持與固相結(jié)合。作為此種系統(tǒng)的例子，對(duì)于由18F-氟化物進(jìn)行固相親電子氟化的前體在WO03/002489中得到描述，且對(duì)于由"F-氟化物進(jìn)行固相親核氟化的前體在WO03/002157中得到描述。可以提供藥液筒，優(yōu)選地作為試劑盒的部分，所述藥液筒可以插入合適地適應(yīng)的自動(dòng)化合成儀內(nèi)。除了固體支持體結(jié)合的前體外，藥液筒可以包含柱以去除不需要的氟化物離子，和連接的合適容器以便允許反應(yīng)混合物被蒸發(fā)且允許產(chǎn)物根據(jù)需要進(jìn)行配制。本發(fā)明的進(jìn)一步方面是如相對(duì)于顯像劑的制備方法定義的前體，其中所述化學(xué)基團(tuán)優(yōu)選地(i)包含能夠使金屬成像部分絡(luò)合的螯合劑；(ii)包含有機(jī)金屬衍生物，例如三烷基錫烷或三烷基硅烷；(iii)包含含有烷基卣、對(duì)曱苯磺酸烷基酯或曱磺酸烷基酯用于親核取代的衍生物；或，(iv)包含使含硫醇化合物烷化以產(chǎn)生含硫醚產(chǎn)物的衍生物。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了適合于哺乳動(dòng)物施用形式的包含如上所述的顯像劑連同生物相容性載體的藥物組合物。優(yōu)選地，藥物組合物是放射性藥物組合物。"生物相容性載體"是流體，特別是液體，其中顯像劑是懸浮或溶解的，從而使得組合物是生理學(xué)耐受的，即可以給哺乳動(dòng)物身體施用而無毒性或過度不適。生物相容性載體介質(zhì)適當(dāng)?shù)厥强勺⑸涞妮d體液體，例如無菌、無致熱原注射用水；水溶液例如鹽水(其可以有利地進(jìn)行平衡從而使得用于注射的最終產(chǎn)物是等滲或不是低滲的)；一種或多種張力調(diào)節(jié)物質(zhì)(例如血漿陽離子與生物相容性抗衡離子的鹽)、糖(例如葡萄糖或蔗糖)、糖醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)、甘醇(例如甘油)、或其他非離子多元醇材料(例如聚乙二醇、丙二醇等)的水溶液。生物相容性載體介質(zhì)還可以包含生物相容性有才;i溶劑例如乙醇。此種有才幾溶劑對(duì)于溶解更親脂的化合物或制劑是有用的。優(yōu)選地生物相容性載體介質(zhì)是無致熱原注射用水、等滲鹽水或乙醇水溶液。用于靜脈內(nèi)注射的生物相容性載體介質(zhì)的pH適當(dāng)?shù)厥?.0-10.5。此種藥物組合物適當(dāng)?shù)卦谌我谎b備封口的容器中提供，所述封口適合于用皮下注射針頭單次或多次穿刺(例如壓褶(crimped-on)隔膜封口密封)，同時(shí)維持無菌完整性。此種容器可以包含單份或多份患者劑量。優(yōu)選的多份劑量容器包含單體積小瓶(例如10-30cr^體積)，所述小瓶包含多份患者劑量，由此單份患者劑量因而可以在制備的可行使用期限以各種時(shí)間間隔抽取到臨床級(jí)別的注射器內(nèi)以適應(yīng)臨床情況。預(yù)裝填注射器被設(shè)計(jì)為包含單份人劑量，或"單位劑量，，且因此優(yōu)選是一次性的或適合于臨床使用的其他注射器。當(dāng)藥物組合物是放射性藥物組合物時(shí)，預(yù)裝填注射器可以任選地裝備注射器罩(shield)以保護(hù)操作者不受放射性劑量。合適的此種放射性藥物注射器罩是本領(lǐng)域已知的且優(yōu)選包含鉛或鵠。本發(fā)明的藥物組合物可以由試劑盒制備，如下文本發(fā)明的進(jìn)一步方面中描述的?？商娲?，藥物組合物可以在無菌制備條件下進(jìn)行制備以產(chǎn)生所需無菌產(chǎn)物。藥物組合物還可以在非無菌條件下進(jìn)行制備，隨后為使用例如y輻照、高壓滅菌、干熱或化學(xué)處理(例如用環(huán)氧乙烷)的最終滅菌。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物由試劑盒制備。如上文相對(duì)于本發(fā)明的顯像劑描述的，對(duì)于放射性藥物組合物本發(fā)明的最優(yōu)選的放射性成像部分是99mTc、1231和18F。在另外一個(gè)進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了用于制備本發(fā)明的藥物組合物的試劑盒。此種試劑盒包含本發(fā)明的合適前體，優(yōu)選為無菌非致熱原形式，從而使得以最低限度數(shù)目的操作與無菌來源的成像部分的反應(yīng)產(chǎn)生所需藥物組合物。此類考慮對(duì)于放射性藥物是特別重要的，特別是當(dāng)放射性同位素具有相對(duì)短的半衰期時(shí)，且為了易于操作和因此減少對(duì)于放射性藥物工作者的輻射劑量。因此，用于重構(gòu)此種試劑盒的反應(yīng)介質(zhì)優(yōu)選是如上定義的"生物相容性載體"，且最優(yōu)選是水性的。合適的試劑盒容器包含允許維持無菌完整性和/或放射性安全性的密封容器，任選地加上惰性頂空氣體(例如氮或氬)，同時(shí)允許通過注射器添加和抽取溶液。優(yōu)選的此種容器是隔膜密封的小瓶，其中氣密密封由頂封(overseal)(—般為鋁)壓褶。此種容器具有下述另外優(yōu)點(diǎn)若需要，密封可以經(jīng)得住真空，例如以改變頂空氣體或給溶液除氣。在試劑盒中使用時(shí)前體的優(yōu)選方面如上文相對(duì)于本發(fā)明的顯像劑的合成方法中所述的。用于在試劑盒中使用的前體可以在無菌制備條件下使用以產(chǎn)生所需無菌、非致熱原材料。前體還可以在非無菌條件下使用，隨后為使用例如Y輻照、高壓滅菌、干熱或化學(xué)處理(例如用環(huán)氧乙烷)的最終滅菌。優(yōu)選地，前體可以以無菌、非致熱原形式使用。最優(yōu)選地?zé)o菌、非致熱原前體在如上所述的密封容器中使用。優(yōu)選地提供與固體支持體基質(zhì)共價(jià)附著的試劑盒的前體，如上文相對(duì)于本發(fā)明的顯像劑的合成方法所述的。對(duì)于"m丁c,試劑盒優(yōu)選是凍干的，且被設(shè)計(jì)為用來自""^c放射性同位素發(fā)生器的無菌"""Tc-高锝酸鹽(TC(V)重構(gòu)，以產(chǎn)生無需進(jìn)一步操作適合于人施用的溶液。合適的試劑盒包含容器(例如隔膜密封瓶)，其含有未絡(luò)合的螯合劑，連同藥學(xué)上可接受的還原劑，例如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、曱脒亞磺酸、亞錫離子、Fe(II)或Cu(I);連同至少一種弱有機(jī)酸與生物相容性陽離子的鹽。術(shù)語"生物相容性陽離子，，意指與離子化、帶負(fù)電荷基團(tuán)形成鹽的帶正電荷抗衡離子，其中所述帶正電荷抗衡離子也是無毒的且因此適合于給哺乳動(dòng)物身體，特別是人身體施用。合適的生物相容性陽離子的例子包括堿金屬鈉或鉀；堿土金屬鉤和鎂；和銨離子。優(yōu)選的生物相容性陽離子是鈉和鉀，最優(yōu)選鈉。用于制備99mTc顯像劑的試劑盒可以任選進(jìn)一步包含第二種、弱有機(jī)酸或其與生物相容性陽離子的鹽，其充當(dāng)轉(zhuǎn)螯合劑(transchelator)。轉(zhuǎn)螯合劑是這樣的化合物，其快速反應(yīng)以與锝形成弱絡(luò)合物，隨后由試劑盒的螯合劑取代。由于與锝絡(luò)合竟?fàn)幍母唢剿猁}的快速還原，這使形成還原的水解锝(RHT)的危險(xiǎn)降到最低。合適的此種轉(zhuǎn)螯合劑是上述弱有機(jī)酸及其鹽，優(yōu)選地酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯曱酸鹽或膦酸鹽，優(yōu)選地膦酸鹽，最優(yōu)選地二膦酸鹽。優(yōu)選的此種轉(zhuǎn)螯合劑是MDP,即亞曱基二膦酸，或其與生物相容性陽離子的鹽。作為使用游離形式的螯合劑的可替代方法，用于制備99mTc顯像劑的試劑盒可以任選地包含螯合劑的非放射性金屬絡(luò)合物，其在添加锝后經(jīng)歷產(chǎn)生所需產(chǎn)物的金屬轉(zhuǎn)移作用(即配體交換)。用于金屬轉(zhuǎn)移作用的合適的此種絡(luò)合物是銅或鋅絡(luò)合物。試劑盒中使用的藥學(xué)上可接受的還原劑優(yōu)選地是亞錫鹽例如氯化亞錫、氟化亞錫或酒石酸亞錫，且可以是無水或水合形式。亞錫鹽優(yōu)選地是氯化亞錫或氟化亞錫。試劑盒可以任選地進(jìn)一步包含另外組分例如輻射防護(hù)劑、抗微生物性防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑或充填劑。術(shù)語"輻射防護(hù)劑"意指通過捕獲高度反應(yīng)性的自由基，例如起于水的輻解作用的含氧自由基抑制降解反應(yīng)，例如氧化還原過程的化合物。本發(fā)明的輻射防護(hù)劑適當(dāng)?shù)剡x自抗壞血酸、對(duì)氨基苯曱酸(即4-氨基苯曱酸)、龍膽酸(即2,5-二羥基苯曱酸)及其與生物相容性陽離子的鹽。"生物相容性陽離子"及其優(yōu)選實(shí)施方案如上所述。術(shù)語"抗微生物性防腐劑，，意指抑制潛在有害的微生物例如細(xì)菌、酵母或霉菌的生長的試劑。取決于劑量，抗微生物性防腐劑也可以顯示某些殺細(xì)菌性質(zhì)。本發(fā)明的一種或多種抗微生物性防腐劑的主要作用是抑制重構(gòu)后的藥物組合物，即顯像劑產(chǎn)物本身中任何此種微生物的生長。然而，抗微生物性防腐劑還可以任選地用于抑制在重構(gòu)前試劑盒的一種或多種組分中潛在有害的微生物的生長。合適的一種或多種抗微生物性防腐劑包括對(duì)羥基苯曱酸酯，即對(duì)羥基苯甲酸曱、乙、丙或丁酯或其混合物；苯曱醇；苯酚；曱酚；溴棕三甲胺和硫柳汞。優(yōu)選的一種或多種抗微生物性防腐劑是對(duì)羥基苯曱酸酯。術(shù)語"pH調(diào)節(jié)劑"意指對(duì)確保重構(gòu)試劑盒的pH在用于人或哺乳動(dòng)物施用的可接受的限度(約pH4.0-10.5)內(nèi)有用的化合物或化合物混合物。合適的此種pH調(diào)節(jié)劑包括藥學(xué)上可接受的緩沖劑，例如A42-羥-1，1-二羥曱基乙基]甘氨酸(tricine)、磷酸鹽或TRIS[即三(羥甲基)氨基曱烷],和藥學(xué)上可接受的堿例如碳酸鈉、碳酸氫鈉或其混合物。當(dāng)綴合物以酸式鹽形式使用時(shí)，pH調(diào)節(jié)劑可以任選地在分開的小瓶或容器中提供，從而使得試劑盒的使用者可以作為多步驟程序的部分調(diào)整pH。術(shù)語"充填劑，，意指可以促進(jìn)生產(chǎn)和凍干過程中的材料處理的藥學(xué)上可接受的填充劑。合適的充填劑包括無機(jī)鹽例如氯化鈉，和水溶性糖或糖醇例如蔗糖、麥芽糖、甘露糖醇或海藻糖。本發(fā)明的顯像劑對(duì)于體內(nèi)成像是有用的。因此，在另外的方面，本發(fā)明提供了用于在體內(nèi)診斷或成像法例如SPECT或PET中使用的本發(fā)明的顯像劑。優(yōu)選地所述方法涉及其中M6P受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)成像，且因此在與纖維化相關(guān)的狀況診斷中有用，所述狀況例如肝纖維化、充血性心力衰竭、腎小球硬化癥和呼吸衰竭。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述狀況是肝纖維化，其中M6P受體已知在HSC上和在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞上是上調(diào)的。本發(fā)明的這個(gè)方面還提供了用于受試者中其中M6P受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)診斷或成像的方法，所述方法包括施用上述的本發(fā)明的藥物組合物。所述受試者優(yōu)選地是哺乳動(dòng)物且最優(yōu)選是人。在可替代的實(shí)施方案中，本發(fā)明的這個(gè)方面另外提供了本發(fā)明的顯像劑用于受試者中其中M6P受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)成像的用途，其中所述受試者先前施用本發(fā)明的藥物組合物。"先前施用"意指其中藥物例如靜脈內(nèi)注射給予患者的涉及臨床醫(yī)生的步驟先前已進(jìn)行。本發(fā)明的這個(gè)方面還包含本發(fā)明的顯像劑在制備用于其中M6P受體上調(diào)的狀況體內(nèi)診斷成像的藥物中的用途。在本發(fā)明的另一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供了監(jiān)控用藥物治療人或動(dòng)物身體以對(duì)抗其中M6P受體上調(diào)的狀況的作用的方法，所述方法包括給所述身體施用本發(fā)明的顯像劑且檢測所述顯像劑的攝取，所述施用和檢測任選但優(yōu)選重復(fù)實(shí)現(xiàn)，例如在用所述藥物治療之前、期間和之后。實(shí)施例簡述實(shí)施例1描述了與PEG接頭連接的IGF-II的aa48-55肽片段(IGF化合物1)的合成。實(shí)施例2描述了受保護(hù)的四胺螯合物化合物，四-Boc-四胺NHS酯(受保護(hù)的螯合物Z)的合成。實(shí)施例3描述了使螯合物Z與IGF-II的aa48-55肽片段連接所需的步驟，所述肽片段與PEG接頭連接，以生產(chǎn)適合于用""Tc標(biāo)記的本發(fā)明的前體(IGF前體1)。實(shí)施例4描述了如何用99mTc標(biāo)記IGF前體1以形成IGF顯像劑1。實(shí)施例5描述了二胺二肟螯合物，螯合物X(即式Xb其中G=C)的合成。實(shí)施例6描述了使螯合物X與IGF-II的aa48-55肽片段連接所需的步驟，所述肽片段與PEG接頭連接，以生產(chǎn)適合于用"m丁c標(biāo)記的本發(fā)明的前體(IGF前體2)。實(shí)施例7描述了如何用""^c標(biāo)記IGF前體2以形成IGF顯像劑2。實(shí)施例8描述了使碘化的Bolton-Hunter基團(tuán)與IGF-II的aa48-55肽片段連接所需的步驟，所述肽片段與PEG接頭連接，以生產(chǎn)非放射性形式的本發(fā)明的放射性碘化的顯像劑(非放射性IGF顯像劑3)。實(shí)施例9描述了視黃酸衍生物視黃酰(retinoyl)-PEG-Lys(視黃酸前體1)的合成。實(shí)施例IO描述了使碘化的Bolton-Hunter基團(tuán)與視黃酸衍生物視黃酰-PEG-Lys連接所需的步驟，以生產(chǎn)非放射性形式的本發(fā)明的放射性碘化的顯像劑(非放射性視黃酸顯像劑1)。實(shí)施例11提供了1231標(biāo)記的糖肽顯像劑1的合成。實(shí)施例《滋辨哞炎^AcOH乙酸C1818個(gè)碳原子的鏈DCM二氯曱烷Dde二氯二苯二氯乙歸DMF二曱基曱酰胺EMS乙基曱基硫化物FMoc9-芴甲氧羰基HATU(9-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-WMW-四甲基脲六氟磷酸酯HBTU(9-苯并三唑-l-基-WAA',A^'-四曱基脲六氟磷酸酯HPLC高效液相層析MBHA4-曱基二苯曱基胺NHSW-鞋基琥珀酰亞胺NMMW-曱基嗎啉OtBu叔丁基酯PEG聚乙二醇Pmc2,2,5,7,8-五曱基苯并二氬吡喃-6-磺酰基tBu^又丁基TFA三氟乙酸TFE四氟乙烯TIS三異丙基硅烷。實(shí)滋辨/.'/GF必合參//7Z-尸五G"人二^/^^-P/zg-Jrg-Ser-A/e^^p-Z^"-廟-丄e"-肌/W合^肽基-樹脂H-Phe-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Met-Asp(OtBu)隱Leu-Ala-Leu-R在AppliedBiosystems433A肽合成儀上使用Fmoc/tBu策略從0.25mmolFmoc-Rink酰胺MBHAResin開始裝配。使用HBTU的過量1mmol預(yù)活化氨基酸應(yīng)用于偶聯(lián)步驟中。將Fmoc陽氨基PEG二乙醇酸(1mmol)、HATU(1mmol)和N-曱基嗎啉(2mmol)溶解于DMF中且靜置5分鐘。將混合物加入來自上文的肽基-樹脂中，且使得反應(yīng)過夜。最終的Fmoc-脫保護(hù)使用溶于DMF的20%哌啶來完成。將肽基-樹脂(0.05mmol)用溶于TFA(10mL)的2,5%水、2.5%EMS和2.5。/。TIS溶液處理2小時(shí)。通過過濾去除樹脂且使濾液在真空中蒸發(fā)。將二乙醚加入殘?jiān)小Ｋ玫降某恋碛妹严礈烨绎L(fēng)干。通過制備型HPLC(梯度10-40。/。B經(jīng)過40分鐘，其中A=H2O/0.1%TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速10mL/分鐘，柱PhenomenexLuna5pC18(2)250x21.20mm,檢測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間31.5分鐘)純化粗材料提供6mg純產(chǎn)物。通過分析型HPLC(梯度10-40%B經(jīng)過IO分鐘，其中A=H2O/0.1。/。TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速0.3mL/分4中，才主PhenomenexLuna3(iC18(2)50x2mm，才企測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間7.89分鐘)分析純產(chǎn)物。進(jìn)一步的產(chǎn)物表征使用質(zhì)譜法進(jìn)行(計(jì)算的MH+:1241.7,發(fā)現(xiàn)的MH+:1247.7)。豸滋辨2.'M-^^-2-〃在G-炎蔬名^差-乙差,A爭差>>-G-炎7~歲^蔬^^^-乙名,-^名^^在T差游廣f沐步驟(a):2-(6-氯-己氧基)四氫吡喃。將6-氯己醇(6.85g,lOmmol)和對(duì)曱苯磺酸(500mg)溶解于干醚(75ml)中且在水浴中冷卻至0-5。C。在30分鐘的時(shí)間段內(nèi)伴隨不斷攪拌逐滴添加溶于干醚(25ml)的二氫吡喃(4.3g,lOmmol)。添加完成后，去除冷卻浴并繼續(xù)攪拌16小時(shí)。用水(50mlx2)萃取溶液，干燥(MgS04),過濾且在減壓下蒸發(fā)溶劑以留下淺黃色油。這種油經(jīng)由13CNMR光譜學(xué)顯示足夠純以無需純化而在后續(xù)反應(yīng)中使用。得率10.1g(91%)。!HNMR(CDCl3):51.30-1.71(14H,m,CH2x7)，3.24-3.32(1H3.41-3.48(3H,mCH牙口CH2)，3.60-3.67(1H,m,CH)，3.72-3.82(1H,bm，CH),4.44-4.49(1H,bm,OCHO)。步驟(b):2-「6-(四氫吡喃-2-基氧)-己基l-丙二酸二乙酯。在干氮?dú)鈱酉掳殡S不斷攪拌將少量鈉(1.13g,49mmo1)溶解于無水乙醇(100ml)中。加入一份丙二酸二乙酯(8.0g，50mmol)JM吏溶液在60。C下加熱1小時(shí)。加入一份2-(6-氯-己氧基)-四氫吡喃(9.3g,42.2mmol),并且使溫度升高至75-80。C且在這個(gè)水平上維持24小時(shí)。冷卻后，通過過濾去除無機(jī)酸且從濾液中蒸發(fā)溶劑。將殘?jiān)芙庥贑H2C12(50ml)中，用水(30mlx2)萃取，干燥(MgS04),過濾且去除揮發(fā)物以留下淺黃色油。在硅膠上對(duì)這種油實(shí)施層析，其中使用石油醚(petether)40:60/醚(200:40)作為洗脫液。所需產(chǎn)物以rf=0.15洗脫且作為無色油分離。得率8.7g(60%)。!HNMR(CDCbl:S1.10-1.25,,m,CH3x2,CH2x4},1.36-1.50{6H.bm,CHzx3).1.70-1.81(2H,bm,CH2}.3.17-328(2H,m,CH2>,3,56-3.66(1H,m,CH).3.70-3.80(1H,m,OCH),《04-《16(々H,m,OCH2x2>,403-4.08(1H,m,OCHO).步驟(c):N,N'-雙-(2-氨乙基)-2-『6-(四氫吡喃-2-基氣)-己基l-丙二酰胺。將2-[6-(四氫吡喃-2-基氧)-己基]-丙二酸二乙酯(5.1g，14.8mmol)溶解于1,2-二氨基乙烷(10g,167mmol)中且在室溫下攪拌16小時(shí)。在真空(在O.OlmmHg下40-50°C)中去除揮發(fā)物以留下淺綠色粘性殘?jiān)?，?duì)所述殘?jiān)鼘?shí)施柱層析，其用CH2Cl2/MeOH/NH4OH(50:50:5)洗脫。標(biāo)題(title)化合物以rf0.2洗脫且作為淺綠色粘性油收集，所述油經(jīng)靜置固化。(得率3.9g,71%)。iH隨ICDCW:S1.15-1.28舊H,bs,CH2x31,1.39-l力4(6H,bm.CH2x3),1.69-州,bm,CH2X2),2.64bs,NH2x21,2.73AH,t,J=6Hz,CH2x2),3.08-3.2916H,m,CH2x3),3.35-3.41(IH,mCH>,3.55-3.63(1H,m,CH),3.70-3.78(1H,m,CHI,4.43(1H,bt.J-4H2,OCHOI.7.7812H.bt,J-5Hz,OCNHx2>IR(薄膜>cm-i:-3417.3082.2936,2862.1663.1558.1439.1354,1323.1261.1200.1189,1076,1026,956,907,867,8:10.歩驟(d):N,N'-雙(2-氨乙基)-2-(6-羥基-己基)-丙二酰胺。在回流下使N,N'-雙(2-氨乙基)-2-[6-(四氫吡喃-2-基氧)-己基]-丙二酰胺(3.9g,10.6mmol)、對(duì)甲苯石黃酸一水合物(8.5g,3mmol)和乙醇(50ml)于70-75。C加熱16小時(shí)。冷卻后，逐滴加入濃縮的氬氧化銨(.880)直至達(dá)到持久的pH9。經(jīng)由Celite通過過濾去除沉淀的白色固體，且用乙醇(30ml)洗滌濾餅。在減壓(15mmHg,40°C)下去除乙醇以留下半固體蠟。在硅膠上對(duì)這種殘?jiān)鼘?shí)施層析，其中使用CH2Cl2/MeOH/NH4OH(100:50:IO)洗脫，且發(fā)現(xiàn)標(biāo)題化合物具有rf=0.2。收集這種產(chǎn)物且與乙醇(100mlx3)共蒸發(fā)(co-evaporate)以去除任何殘留水。獲得經(jīng)靜置固化的淺綠色粘性殘?jiān)?得率2.1g,69%)。W隨(CD3OD}:S1.28-1.38(6H,bs,CH2X3),l.站-1.5512H,bm.CH2),179-1.87(2H,bm,CH2>,2.73(4H,t,J=6Hz,H2NCH2x2},3.13UHt,J=7Hz,CHI,3.27dt,J-6和2Hz,HNCH2x2),3.53(2Ht,J-7HzOCH2).Massspec(Fabs)m/e:畫對(duì)于C13H29N403(M+H)計(jì)算的289發(fā)現(xiàn)的289。步驟(e):(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基-2一『叔丁氧基羰基-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-氨基l-曱基U-羥基-辛基)-碳酸叔丁基酯。在干氮?dú)鈱酉?，?jīng)由注射器向溶于二哺烷(50ml)的N,N'-雙(2-氨乙基)-2-(6-輕基己基)丙二酰胺(2.1g，7.3mmol)的攪拌混合物中逐滴加入純硼烷-二曱基硫化物加合物(15ml,150mmol)。完全添加后，在回流下于110。CM吏混合物輕輕加熱5天。在這個(gè)時(shí)間^殳期間殘留某些白色固體。冷卻后，在減壓下去除揮發(fā)物以留下白色固體，向所迷白色固體中逐滴加入曱醇(50ml)從而產(chǎn)生無色溶液。使這種溶液在回流下加熱3小時(shí)，冷卻，加入濃HC1(5ml)且在回流下于70-75°C連續(xù)加熱48小時(shí)。去除溶劑以留下粘性綠色殘?jiān)顾鰵堅(jiān)c曱醇(100mlx3)共蒸發(fā)以留下淺綠色固體。將這種固體再溶解于無水曱醇中且加入無水碳酸鉀(4.0g,30mmol)隨后為二石友酸二^又丁基酯(7.0g，32mmol)。使混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。經(jīng)由Celite通過過濾去除無機(jī)固體且從濾液中蒸發(fā)溶劑以留下粘性殘?jiān)?。使這種殘?jiān)c水(50ml)混合且用CH2C12(50mlx3)萃取。將有機(jī)級(jí)分組合，干燥(MgS04),過濾且蒸發(fā)溶劑以留下淺黃色殘?jiān)?。注在這一點(diǎn)上，通過"CNMR監(jiān)控反應(yīng)是很方便的。在硅膠上對(duì)殘?jiān)鼘?shí)施層析，其中使用CH2Cl2/MeOH(95:5)作為洗脫液。標(biāo)題化合物以rf=0.41洗脫且作為無色粘性油分離(得率2.5g，52%)。13CNMRICDCW:52，.6(CH2),26.4(CH2>,28A(CH3x12}.29.8(CH2X2),32.6{CH2I,36,5(非常寬，CH),39.2WCH2x2,鄰近的CH),46.9(寬單峰，HNCH2X2).50,0(寬單峰，NCH2x2L62.4(HOOU79,0(OCX2h79.9{OCx2},156.41寬單峰"0x4>1H隨1CDCI3):S1.0S-1,188H,bs.CH2x4).1.27(18h,S.CH3x6,叔丁基1，1.31(18H,S.CH3x6,叔丁擬"1(2H,m.CH2).1,81(1Hbs,CH),2.63(1H,bs,OH).2.98(今H,bs,NCH2x2),3.11(8H.bs.NCH2x4},3.44(2H，t,J=8Hz,C5.2(2H,bs,NHx2)MassSpec(Fabs)m/e:-對(duì)于C33H65N409(M+H)計(jì)算的661發(fā)現(xiàn)的661。步驟(f):曱苯-4-磺酸8-『叔丁氧基羰基-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基-氨基1-7-〃叔丁氧基羰基-(2-叔丁氣基羰基氨基-乙基)-氨基l-曱基卜辛酯。在室溫下使(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基-2-{[叔丁氧基羰基-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)氨基]-曱基}-8-羥基辛基)-碳酸叔丁基酯(2.52g，3.82mmo1)、對(duì)曱苯石黃酰氯(1.0g,5.2mmol)、三乙胺(1.3g,12.8mmol)和CH2C12(30ml)攪拌，伴隨溶劑的緩慢蒸發(fā)。通過碳NMR監(jiān)控反應(yīng)且在3天后殘留少許原材料。用CH2Cl2將反應(yīng)體積補(bǔ)足至30ml，用水(50mlx3)萃取，干燥(MgS04),過濾且使溶劑蒸發(fā)以留下褐色殘?jiān)Ｔ诠枘z上對(duì)殘?jiān)鼘?shí)施層析，其中使用CH2Cl2/MeOH(100:5)作為洗脫液。要洗脫的第一種化合物是rf=0.95的未反應(yīng)的曱苯磺酰氯。標(biāo)題化合物以rf=0.2洗脫且作為淺黃色粘性油分離。得率(1.20g，39%)。1H隨ICDCW:S1.16但HI,bs,CH2X4),1.35(18H,s,CH3X6),1.39U8H.s.CH3x6),1,88(1H.bs,CH),2.38(3H,s,CH3甲笨磺酰基1,3.10—3.12bs.NCH2x2>,3.19舊H,bs,NCH2X械3.93(2H,t,J=7H2,CH2OTs),5.0:LH,bs,NH).5.08{1H.bs,NH),7.29(2H,d.J-8Hz,CHx2,Ar),7.72(2H.d,J8HzCHx2,Ar)MassSpec(Fabs)m/e:-對(duì)于C4oH"即nS(M+H)計(jì)算的815發(fā)現(xiàn)的815。步驟(g):(8-疊氮基-24『叔丁氧基羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基l-甲基)-辛基)-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯。在回流下于70-75。C使甲苯-4-磺酸8-[叔丁氧基羰基-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基-氨基]-7-{[叔丁氧基羰基-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)氨基]曱基)-辛酯(1.105g,1.36mmo1)、疊氮化鈉(350mg,5.4mmol)和曱醇(10ml)加熱16小時(shí)。冷卻后，在減壓下于室溫去除曱醇直至殘留約1-2ml。用水(25ml)稀釋這種殘?jiān)矣肅H2C12(25mlx4)萃取。將有機(jī)萃取液組合，干燥(MgSOj,過濾且在室溫下蒸發(fā)揮發(fā)物(注疊氮化物是有可能爆炸的，并且這個(gè)步驟應(yīng)在安全罩后進(jìn)行)以留下淺黃色粘性殘?jiān)鰵堅(jiān)羌儜B(tài)的所需化合物。(得率820mg，88%)。!H隨(CDCW:51.16(8H,bs,CH2x械1.29(18H,SCH3X6),1.33(18H,S,CH3X6>,1A7I2H,bt,J-6.5HzCH2鄰近的CH).1.8611H,bs,00,2.95-3.05l州,bs,NCH2x2),3.0S-3.20(10H,bs.NCH2x4和CH2N3},5.0912H,bs,NHx2>IR(薄膜)cm一1:-3350,2974,2932,2860,2097(強(qiáng)帶N3),1694,1520,1470,1418,1391,1366，1250,1167,1069,870,777。步驟(h):(8-氨基-2-(『叔丁氧基羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基l-曱基i-辛基)-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-氨基曱酸叔丁基酯(化合物2)。在30個(gè)大氣壓的壓力下于室溫用氬氣處理(8-疊氮基-2-{[叔丁氧基羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基]-曱基}-辛基)-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-氨基曱酸叔丁基酯(820mg,1.20mmol)、在木炭上的10%鈀(100mg)和甲醇(10ml)16小時(shí)。經(jīng)由Celite通過過濾去除固體，且用曱醇(50ml)洗滌濾餅。從濾液中去除揮發(fā)物以留下粘性油，所述油是純態(tài)的所需材料。(得率700mg,89%)。iH隨ICDCb):S1.08(8H,bs,CH2x械1,23(18H,s,CH3x6>,1.27(20H,bs,CH3x6和ChU1,77(1H,bs,CH),2.40(2H,b;;.,,2.50(2H.t,J=7Hz,CH2,.2.97(4H.bm,NCH2x2),3.00-3.16(8H,bm,NCHZx4),5.2:L{1H,bs,NH),5.30(1H,bs，酬.MassSpec(Fabs)m/e:畫對(duì)于C33H66N508(M+H)計(jì)算的660發(fā)現(xiàn)的660。豸滋夢(mèng)/丄.A歐麼隱尸EG隱二乙雜瘋-尸/^e-jrg-Sgr-M^-Ayp-丄e"-^4/a-丄e"-j\A//:/村^S^'將肽基-樹脂H-PEG(4)-二乙醇酰-Phe-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Met-Asp(OtBu)-Leu-Ala-Leu陽R(0.05mmol)用溶解于DMF(5mL)中的四誦Boc-四胺NHS酯(0.05mmol)和NMM(0.2mmol)的溶液處理3天。通過過濾取出試劑且用DMF和DCM洗滌樹脂。將肽基-樹脂(0.05mmol)用溶于TFA(10mL)的2.5%水、2.5%EMS和2.5。/。TIS溶液處理2小時(shí)。通過過濾去除樹脂且使濾液在真空中蒸發(fā)。將二乙醚加入殘?jiān)小Ｋ玫降某恋碛妹严礈烨绎L(fēng)干。通過制備型HPLC(梯度10-40%B經(jīng)過40分鐘，其中A=H2O/0.1%TFA且B=ACN/0.1%TFA，流速10mL/分鐘，柱PhenomenexLuna5pC18(2)250x21.20mm,才企測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間25分鐘)純化粗材料提供38mg純產(chǎn)物。通過分析型HPLC(梯度10-40%B經(jīng)過IO分鐘，其中A=H2O/0.1q/。TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速0.3mL/分鐘，柱PhenomenexL腿3|liCI8(2)50x2mm,檢測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間7.05分鐘)分析純產(chǎn)物。進(jìn)一步的產(chǎn)物表征4吏用質(zhì)譜法進(jìn)行(計(jì)算的MH+:1441.8，發(fā)現(xiàn)的MH+:1441.7)。實(shí)滋辨心/GF#沐/W99ffTc放射'/i標(biāo)記",ji/GF/通過向氮清洗的P46小瓶中添加下述制備"mTc絡(luò)合物溶于MeOH的100|tigIGF前體1或2,0.5mlNa2C03/NaHC03緩沖液(pH9.2),來自99mTc發(fā)生器的0.5mlTcCV,0.1mlSnCl2/MDP溶液，(溶液包含溶于100mlN2清洗鹽水的10.2mgSnCl2和101mg亞甲基二膦酸)。ITLC(瞬間薄層層析)用于測定RCP。對(duì)于IGF前體I,SG板和MeOH/(NH4OAc0.1M)1:1的流動(dòng)相顯示在原點(diǎn)處的RHT(還原的水解Tc),在溶劑前面的高锝酸鹽和在中間Rf處的锝絡(luò)合物。通過反相HPLC(Xterra柱RP183.5pg,150mmx4.6mm)分析反應(yīng)混合物。關(guān)于IGF前體I的HPLC條件溶劑A-溶于H20的0.07%氨溶劑B-MeCN0分4中—90。/。溶劑A,10。/。溶劑B10分鐘-40%溶劑八，60。/。溶劑B15分鐘-40。/。溶劑A，60。/。溶劑B17分鐘-90。/。溶劑A，10。/。溶劑B20分鐘-90。/。溶劑A,10。/。溶劑B實(shí)滋辨5:^^^AT^AjV-〃./-二f^-2-^身亞麼^^"-^乙差/-G-(歩驟a):三(甲氧基羰基曱基)甲烷的制備在氬氣氣氛(3.5巴)下使溶于曱醇(200ml)的3-(甲氧基羰基亞曱基)戊二酸二曱酯(89g,267mmo1)與(在木炭上的10%鈀50%水)(9g)—起搖動(dòng)(30小時(shí))。通過硅藻土過濾溶液且在真空中進(jìn)行濃縮以產(chǎn)生作為油的3-(曱氧基羰基曱基)戊二酸二甲酯，得率(84.9g，94%)。畫R!H(CDC13)，S2.48(6H,d，J=8Hz,3xCH2)，2.78(1H,hextet,J=8HzCH,)3.7(9H,s,3xCH3)。(步驟b):三甲酯用對(duì)曱氧基-爺胺的酰胺化將三(甲氧基羰基曱基)曱烷[2g，8.4mmol]溶解于對(duì)甲氧基-芐胺(25g,178.6mmol)中。設(shè)立用于蒸餾的裝置且在氮流下加熱至120°C24小時(shí)。通過收集的曱醇量監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)展。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度且添加30ml乙酸乙酯，隨后將沉淀的三酰胺(triamide)產(chǎn)物攪拌30分鐘。通過過濾分離三酰胺且用足量乙酸乙酯將濾餅洗滌幾次，以去除過量對(duì)甲氧基-節(jié)胺。干燥后獲得4.6g,100%的白色粉末。高度不溶性的產(chǎn)物無需進(jìn)一步的純化或表征直接在下一個(gè)步驟中使用。(歩驟c):1丄1-三『2-(對(duì)甲氧基芐氨基)乙基l甲烷的制備。向在水水浴中冷卻的1000ml3頸圓底瓶中，將來自步驟2(a)的三酰胺(10g,17.89mmol)小心地加入250ml1M硼烷溶液(3.5g,244.3mmol)硼烷中。完全添加后，去除冰水浴且將反應(yīng)混合物緩慢加熱至60。C。于6(TC將反應(yīng)混合物攪拌20小時(shí)。取出反應(yīng)混合物的樣品(lml),并且與0.5ml5NHCl混合且靜置30分鐘。向樣品中加入0.5ml50NaOH，隨后為2ml水，并且將溶液攪拌直至所有白色沉淀溶解。用醚(5ml)萃取溶液且進(jìn)行蒸發(fā)。以1mg/ml的濃度將殘?jiān)芙庥谝译嬷星彝ㄟ^MS進(jìn)行分析。如果在MS譜中可見單和二酰胺(M+H/z=520和534)，那么反應(yīng)不完全。為了完成反應(yīng)，添加另夕卜100ml1M硼烷THF溶液，且于60。C將反應(yīng)混合物再攪拌6小時(shí)，并且遵循先前的取樣程序取出新樣品。必要時(shí)繼續(xù)溶于THF溶液的1M硼烷的進(jìn)一步添加直至完全轉(zhuǎn)變至三胺。使反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度且緩慢加入5NHC1,[注意發(fā)生劇烈的泡沫形成！]。添加HC1直至沒有觀察到更多的氣體發(fā)生。將混合物攪拌30分鐘且隨后進(jìn)行蒸發(fā)。將餅懸浮于NaOH水溶液(20-40%;1:2w/v)中且攪拌30分鐘。隨后用水(3體積)稀釋混合物。隨后用二乙醚(2x150ml)萃取混合物[注意不使用卣化溶劑]。隨后用水(lx200ml)、鹽水(150ml)洗滌組合的有機(jī)相且在硫酸鎂上進(jìn)行干燥。蒸發(fā)后的得率作為油7.6g,84°/。。NMR!H(CDCl3).5:1.45.16H,m,3xCH2:1.5《(1H,s印tet,CH):2.6016H,t,3xCHUN):3.68(6H,s,ArCH2>:3.78|9H,s,3xCH30);6.94(6H.d,6xAr).7,20(6H,d.6xAr).(步驟d):l丄l-三(2-氨乙基)曱烷的制備。將1,1,1-三[2-(對(duì)甲氧基千氨基)乙基]甲烷(20.0克,0.036mol)溶解于曱醇(100ml)中且添加Pd(OH)2(5.0克)。使混合物氬化(3巴，IO(TC,在高壓滅菌器中)且攪拌5小時(shí)。在10和15小時(shí)后分別添加另外2份(2x5克)Pd(OH)2。使反應(yīng)混合物過濾且用曱醇洗滌濾液。使組合的有機(jī)相蒸發(fā)且在真空(1x10-2,110。C)下蒸餾殘?jiān)?，以產(chǎn)生2.60克(50%)的1,1,1-三(2-氨乙基)甲烷。NMR!H(CDC13),52.72(6H,t,3xCH2N),1.41(H,septet,CH)，1.39(6H,q,3xCH2)。NMR13C(CDC13),539.8(CH2NH2),38.2(CH2.)，31.0(CH)。(步驟e):螯合物X(即式Za其中G=C)的制備在氮?dú)夥障掳殡S劇烈攪拌于室溫向溶于無水乙醇(30ml)的三(2-氨乙基)曱烷(4.047g,27.9mmol)溶液中添加無水碳酸鉀(7.7g,55.8mmol，2eq)。將3誦氯-3-曱基-2-亞硝基丁烷(7.56g，55.8mol,2當(dāng)量)溶液溶解于無水曱醇(100ml)中，且將75ml這種溶液緩慢滴入反應(yīng)混合物內(nèi)。反應(yīng)隨后為在硅石上的TLC[板在二氯甲烷、曱醇、濃縮的(0.88sg)氨；100/30/5中運(yùn)行且TLC板通過用茚三酮噴霧且加熱顯色]。以那種順序用漸增的RFs可見單、二和三烷基化產(chǎn)物。使用RPR反相柱以溶于3%氨水的7.5-75%乙腈梯度運(yùn)行分析型HPLC。反應(yīng)在真空中進(jìn)行濃縮以去除乙醇且重懸浮于水(110ml)中。用醚(100ml)萃取含水漿以去除一些三烷基化化合物和親脂性雜質(zhì)，從而在水層中留下單和所需二烷基化產(chǎn)物。水溶液用乙酸銨(2當(dāng)量，4.3g,55.8mmo1)進(jìn)行緩沖以確保良好的層析。在通過自動(dòng)化制備型HPLC純化前將水溶液貯存于4。C過夜。得率(2.2g,6.4mmo1,23%)。Massspec;陽離子10V錐電壓(conevoltage)。發(fā)現(xiàn)的344;計(jì)算的M+H=344。NMR1H(CDCI化S1.24(6H,S,2xCH3),1.3(6H.s,2xCH3),1.25-1.75I7H,m,3xCH2,CH>,(3H,s,2xCH2),2.58(4H,m,CH2N1.2.88(2H,tCH2N2>.5.0(6H,s,NHZ,2xNH,2xOH>.NMR"cl(CD3)2SO).S9.0(4xCH3),25.8(2xCH3),31.02xCH2,346CH2,56.82xCH2N;160.3,C-N.HPLC條件流速8ml/分鐘，其中使用25mmPRP柱八=3%氨溶液(sp.gr=0.88)沐；B=乙腈時(shí)間％B07.51575.02075.0227.5307.5每次運(yùn)行裝載3ml水溶液，且在12.5-13.5分鐘的時(shí)間窗中收集。,滋伊/6;/GF#沐2廠齊合務(wù)Z-zt'二瘋-尸EG"人二乙雜瘋畫尸/ze-y^g-Ser-將肽基國樹脂H誦PEG(4)國二乙醇酰國Phe國Arg(Pmc)畫Ser(tBu)畫Met國Asp(OtBu)-Leu-Ala國Leu-R(0.05mmol)用溶解于DMF(5mL)中的螯合物X-戊二酰四氟苯石危酚酯(0.1mmol)和NMM(0.2mmol)的溶液處理3天。通過過濾取出試劑且用DMF和DCM洗滌樹脂。46將肽基-樹脂(0.05mmol)用溶于TFA(10mL)的2.5%水、2.5%EMS和2.5%TIS溶液處理2小時(shí)。通過過濾去除樹脂且使濾液在真空中蒸發(fā)。將二乙醚加入殘?jiān)?。所得到的沉淀用醚洗滌且風(fēng)干。通過制備型HPLC(梯度20-40%B經(jīng)過60分鐘，其中A=H2O/0.1%TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速10mL/分鐘，柱PhenomenexLuna5pC18(2)250x21.20mm，沖全測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間13分鐘)純化粗材料提供35mg純產(chǎn)物。通過分析型HPLC(梯度10-50%B經(jīng)過10分鐘，其中A=H2O/0.1oZ)TFA且B-ACN/0.1%TFA,流速0.3mL/分鐘，柱PhenomenexLuna3pC18(2)50x2mm，檢測UV214nm，產(chǎn)物保留時(shí)間5.60分鐘)分析純產(chǎn)物。進(jìn)一步的產(chǎn)物表征使用質(zhì)譜法進(jìn)行(計(jì)算的MH+:1681.0,發(fā)現(xiàn)的MH+:1681.1)。-滋*7,/GF2W,3M^/i^^記"多4/GF殺*2使用上文實(shí)施例4中描述的方法進(jìn)行"m丁c標(biāo)記，但使用下述HPLC和TLC條件HPLC。溶劑A-溶于H20的0.1%TFA溶劑B-溶于MeCN的0.1%TFAl分鐘-90。/o溶劑A,10。/o溶劑B60%溶劑A,40%溶劑B60%溶劑A,40%溶劑B90%溶劑A，10%溶劑B90%溶劑A,10%溶劑BTLCSG板和鹽水的流動(dòng)相顯示在溶劑前面的高锝酸鹽。Whatman1板和MeCN:H201:1的流動(dòng)相顯示在原點(diǎn)處的RHT。^^^'^/G^^錄^/3AJ-"-趁差-3-^,差J丙凝銜-尸EG"-二乙摩瘋-尸/^匿y4rg畫Ser-^fef-J^畫丄ew畫J/a-Le"-A^>/W合4'將肽基-樹脂H-PEG(4)-二乙醇酰-Phe-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Met-Asp(OtBu)陽Leu畫Ala-Leu陽R(0.05mmol)用溶解于DMF(5mL)中的N-琥珀酰亞胺基-3-(4-羥基-3-碘苯基)丙酸酯(0.1mmol)和NMM(0.2mmol)的溶液處理3天。通過過濾取出試劑且用DMF和DCM洗滌樹10分鐘-15分鐘-17分鐘-20分鐘-脂。將肽基-樹脂(0.05mmol)用溶于TFA(10mL)的2.5%水、2.5%EMS和2.5。/。TIS溶液處理2小時(shí)。通過過濾去除樹脂且^f吏濾液在真空中蒸發(fā)。將二乙醚加入殘?jiān)?。所得到的沉淀用醚洗滌且風(fēng)干。通過制備型HPLC(梯度10-50。/。B經(jīng)過60分鐘，其中A=H2O/0.1%TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速10mL/分鐘，柱PhenomenexLuna5pC18(2)250x21.20mm,才企測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間27分鐘)純化粗材料提供5mg純產(chǎn)物。通過分析型HPLC(梯度10-50%B經(jīng)過IO分鐘，其中A=H2O/0.1。/。TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速0.3mL/分鐘，柱PhenomenexLuna3pC18(2)50x2mm，檢測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間7.03分鐘)分析純產(chǎn)物。進(jìn)一步的產(chǎn)物表征使用質(zhì)譜法進(jìn)行(計(jì)算的MH+:1515.6,發(fā)現(xiàn)的MH+:1515.8)。^滋辨義'/《,凝券傳/A^g斧瘋-尸五G"2,-丙瘋-/^-6>///^合4使用二異丙基乙胺(1.4mmol)作為堿，通過標(biāo)準(zhǔn)程序在無水二氯甲烷中使Fmoc誦Lys(Dde)-OH(Novabiochem,0.4mmol)與過量的2-氯三苯曱基氯樹脂(Novabiochem)附著。樹脂用二氯曱烷/甲醇/二異丙基乙胺(17:2:1)混合物、二氯甲烷和DMF洗滌。Fmoc基團(tuán)通過標(biāo)準(zhǔn)咪，定處理進(jìn)行切割且使用HATU(0.6mmol)和二異丙基乙胺(1.2mmol)使Fmoc畫氨基PEG(12)-丙酸(PolypureAS,0.6mmol)偶聯(lián)。通過標(biāo)準(zhǔn)Kaiser測試檢查反應(yīng)的完全。Fmoc基團(tuán)切割后，使用相同的偶聯(lián)條件使視黃酸(Fluka,0.6mmol)偶聯(lián)。通過用溶于DMF(3x2分鐘)的2%水合肼處理去除Dde保護(hù)基團(tuán)。將來自上文的樹脂(0.05mmol)用AcOH/TFE/DCM(2:2:6,10mL)溶液處理45分鐘。通過過濾去除樹脂，向?yàn)V液中加入己烷(200mL)且在真空中蒸發(fā)混合物。通過制備型HPLC(梯度30-80%B經(jīng)過40分鐘，其中A=H2O/0.1%TFA且B=ACN/0.1%TFA,流速10mL/分鐘，柱PhenomenexLuna5|liC18(2)250x21.20mm，才全測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間33分鐘)純化粗材料提供17mg純產(chǎn)物。通過分析型HPLC(梯度30-80%B經(jīng)過10分鐘，其中A=H2O/0.1。/。TFA且B二ACN/0.1%TFA,流速0.3mL/分4中，4主PhenomenexLuna3pC18(2)50x2mm,才企測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間7.11分鐘)分析純產(chǎn)物。進(jìn)一步的產(chǎn)物表征使用質(zhì)語法進(jìn)行(計(jì)算的MH+:1028.7，發(fā)現(xiàn)的MH+:1028.7)。#放^^視#凝^諒浙/A挽,瘋-尸gG"2，-丙瘋-AwG-"一在差^-4^:i,^瘋J將樹脂視黃酰-PEG(12)-丙酰-Lys-R(0.05mmol)用溶解于DMF(5mL)中的N-琥珀酰亞胺基-3-(4-羥基-3-碘苯基)丙酸酯(0.1mmol)和NMM(0.2mmol)的溶液處理20小時(shí)。通過過濾取出試劑且用DMF和DCM洗滌樹脂。將來自上文的樹脂(0.05mmo1)用AcOH/TFE/DCM(2:2:6，10mL)溶液處理2小時(shí)。通過過濾去除樹脂，向?yàn)V液中加入己烷(200mL)且在真空中蒸發(fā)混合物。通過制備型HPLC(梯度50-100%B經(jīng)過40分鐘，其中A=H2O/0.1%TFAJLB=ACN/0.1Q/。TFA,流速10mL/分鐘，柱PhenomenexLuna5pC18(2)250x21.20mm,檢測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間31分鐘)純化粗材料提供17mg純產(chǎn)物。通過分析型HPLC(梯度50-95%B經(jīng)過IO分鐘，其中A=H2O/0.1%??？八且8=ACN/0.1%TFA,流速0.3mL/分鐘，柱PhenomenexL腿C18(2)50x2mm，檢測UV214nm,產(chǎn)物保留時(shí)間5.24分鐘)分析純產(chǎn)物。進(jìn)一步的產(chǎn)物表征使用質(zhì)譜法進(jìn)行(計(jì)算的MH+:1302.6，發(fā)現(xiàn)的MH+:1302.6)。豸滋鄉(xiāng)77:7"/-標(biāo)記^潛應(yīng)貞^浙/的合A'。糖肽顯像劑1的前體如上所示，且如下進(jìn)行放射性殃化最初向在微量離心管中的200|iil乙酸銨緩沖液(0.2M,pH4)中加入10127NaI(溶于0.01MNaOH的15mg/100ml)溶液(包含1xl(T8摩爾127NaI)。隨后向溶于0.05MNaOH(來自GEHealthcare)、包含lOmCi(364mCi/ml)放射性的123I-NaI中加入127NaI/NH4OAc溶液且使溶液充分混合。將5^過乙酸(溶于乙酸的36-40重量％溶液)加入5mlH20中，充分混合且將10^稀釋溶液加入123/127I-NaI反應(yīng)混合物中。將100pi前體(溶于H20的0.74mM溶液)加入反應(yīng)混合物中，用移液管混合且在5分鐘后分析反應(yīng)。通過HPLC使用PhenomenexLuna柱5u,C18(2)100A,150x4.6mm分析或純化產(chǎn)物。溶劑A-溶于H20的0.1%TFA溶劑B-溶于乙腈的O.l%TFA2分4中一100%溶劑A,0。/。溶劑B20分鐘-50。/。溶劑A,50%溶劑B25分鐘-10%溶劑A,90%溶劑B35分鐘-10。/。溶劑A,90。/。溶劑B36分4中一100%溶劑A,(T/o溶劑B43分4中一100%溶劑A,0%溶劑8在這些條件下M6P顯像劑1的保留時(shí)間是9.9分鐘。權(quán)利要求1.一種顯像劑，其包含(i)對(duì)于甘露糖-6-磷酸(M6P)受體具有親和力的載體；和(ii)成像部分其中所述成像部分作為所述載體的整合部分存在或所述成像部分經(jīng)由合適的化學(xué)基團(tuán)與所述載體綴合。2.權(quán)利要求l的顯像劑，其中所述載體包含下述中的至少一種(i)67氨基酸的IGF-II序列，或其片段或類似物；(ii)甘露糖-6-磷酸(M6P);(iii)二磷酸化糖肽；或(iv)視黃酸或其衍生物。3.權(quán)利要求2的顯像劑，其中所述載體是67氨基酸的IGF-II序列，或是選自下述的其8-60氨基酸片段或肽類似物(i)包含氨基酸殘基48-55(SEQIDN02)的肽或其肽類似物；(ii)包含直接連接或由式-(L3)p-的接頭隔開的氨基酸殘基8-28(SEQIDN0.3)和41-61(SEQIDNO.4)的肽或其肽類似物；(iii)包含氨基酸殘基8-67(SEQIDNO.5)的肽或其肽類似物；和(iv)如下的各種氨基酸殘基置換Phe26Ser(SEQIDNO.6);Phel9Ser(SEQIDNO.7);Glul2Lys(SEQIDNO.8);Tyr27Leu(SEQIDNO.9)其中對(duì)于-(L3)p-，每個(gè)L3獨(dú)立地是-CO-、-CR2-、-CR=CR-、-OC誦、-CR2C02-、-C02CR2-、-NR-、畫NRCO-、-CONR-、-NR(C=0)NR-、畫NR(C=S)NR隱、-SO鋒-、-NRSCV、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C4-8亞環(huán)雜烷基、C4-S亞環(huán)烷基、Cw2亞芳基、Cw2雜亞芳基、氨基酸殘基、聚(亞烷基)二醇、聚乳酸或聚乙醇酸部分；p是值0-30的整數(shù)；每個(gè)R基團(tuán)獨(dú)立地是H或Cw。烷基、Cwo烷基芳基、C2-u)烷氧基烷基、Cwo羥烷基、Cw()氟烷基，或2個(gè)或更多R基團(tuán)，連同它們與之附著的原子一起形成碳環(huán)、雜環(huán)、飽和或不飽和的環(huán)。4.權(quán)利要求2的顯像劑，其中所述載體包含M6P且選自(i)M6P(al,2)-Man-0(CH2)8C02Me(al,2連接的二甘露糖苷)(ii)M6P(al,3)-Man-0(CH2)8C02Me(al,3連接的二甘露糖苷)(iii)M6P(al,6)國Man陽O(CH2)8C02Me(al,6連接的二甘露糖苷)(iv)M6P(al,2)-Man(al，2)-Man-0(CH2)8C02Me(al,2連接的三甘露糖苷)(v)雙觸角的寡甘露糖苷(M6Pal,2)-Man(a1,、)Man-O(CH^CO2Me(M6Pal.2>-Man(al,3)Z其中Man是甘露糖。5.權(quán)利要求2的顯像劑，其中所述載體是二磷酸化糖肽且具有式I:aW乂，Ju^aV(I)其中1^和112獨(dú)立地選自(i)選自下述的天然L-或D-單糖葡萄糖、甘露糖、半乳糖、巖藻糖、rhammanose、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺、果糖和N-乙酰神經(jīng)氨酸、或其磷酸化或硫酸化形式；或，(ii)由選自(i)的單糖組成的寡糖；A和八5獨(dú)立地選自-H、-OH、-NH2、-乙?；?、D-或L-氨基酸、肽、糖肽、肽模擬物和寡核苷酸，八2和八4獨(dú)立地選自D-或L-羥基氨基酸，例如Ser、Thr、Hyl、Hyp、Tyr，或D-或L-酰胺氨基酸，例如Asn和Gln,且A選自以其D-或L-形式的遺傳編碼或非編碼的氨基酸或肽模擬物或核苷酸，且其中m是l-30的整數(shù)；且其中所述線性序列A1-A5中的任何殘基可以進(jìn)行共價(jià)連接以形成環(huán)狀化合物。6.權(quán)利要求5的顯像劑，其中所述二磷酸化糖肽是(i)Ac-Thr[a誦D掘P-(1,2)-a-D-甘露糖]-Lys(氨基苯曱酰胺)-Thr[a-D-M6P-U,2)-"-0-甘露糖]-:^&(ii)Ac-Thr[a-D-M6P]-Gly-Lys-Gly-Thr[a-D-M6P]-NH2。7.權(quán)利要求2的顯像劑，其中所述載體是視黃酸，或具有式II的其類似物其中L4、q和R"分別如權(quán)利要求3中對(duì)于lAp和R定義的。8.權(quán)利要求2的顯像劑，其中所述載體是使2種或更多種權(quán)利要求2-7的載體組合的多價(jià)靶向載體。9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的顯像劑，其中所述成像部分選自(i)放射性金屬離子；(ii)順磁性金屬離子；(m)Y-射線發(fā)射放射性囟素;(iv)正電子發(fā)射放射性非金屬；(v)超纟及化NMR活性核；(vi)適合于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子；和(vii)適合于血管內(nèi)檢測的(3-射線發(fā)射體。10.權(quán)利要求9的顯像劑，其中所述成像部分是放射性金屬離子。11.權(quán)利要求10的顯像劑，其中所述放射性金屬離子是"mTc。12.權(quán)利要求9的顯像劑，其中所述成像部分是Y-射線發(fā)射放射性鹵素。13.權(quán)利要求12的顯像劑，其中所述Y-射線發(fā)射放射性卣素選自14.權(quán)利要求9的顯像劑，其中所述成像部分是正電子發(fā)射放射性非金屬。15.權(quán)利要求14的顯像劑，其中所述正電子發(fā)射放射性非金屬是，16.—種用于制備權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的顯像劑的方法，其包括使前體與合適來源的成像部分反應(yīng)，其中所述前體包含(i)如權(quán)利要求1-7中定義的對(duì)于M6P受體具有親和力的載體；和(ii)能夠與所述成像部分來源反應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，從而使得所述成像部分變得與所迷化合物附著，以導(dǎo)致產(chǎn)生所述顯像劑；其中所述化學(xué)基團(tuán)是所述載體的整合部分或與所述載體綴合。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述化學(xué)基團(tuán)(i)包含能夠使金屬成像部分絡(luò)合的螯合劑；(ii)包含有機(jī)金屬衍生物，例如三烷基錫烷或三烷基硅烷；(iii)包含含有烷基閨、對(duì)曱苯磺酸烷基酯或甲磺酸烷基酯用于親核取4戈的衍生物；(iv)包含含有朝向親核或親電子取代活化的芳環(huán)的衍生物；(v)包含含有經(jīng)歷易實(shí)現(xiàn)的烷化的官能團(tuán)的衍生物；(vi)包含使含硫醇化合物烷化以產(chǎn)生含硫醚產(chǎn)物的衍生物；或18.權(quán)利要求16或17任一項(xiàng)的方法，其中所述前體是無菌、無熱原形式的。19.根據(jù)權(quán)利要求16-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述前體與固相結(jié)合。20.如權(quán)利要求16-19中任一項(xiàng)的方法中定義的前體，其中所述化學(xué)基團(tuán)(i)包含能夠使金屬成像部分絡(luò)合的螯合劑；(ii)包含有機(jī)金屬衍生物，例如三烷基錫烷或三烷基硅烷；(iii)包含含有烷基卣、對(duì)曱苯磺酸烷基酯或曱磺酸烷基酯用于親核取代的衍生物；(iv)包含使含硫醇化合物烷化以產(chǎn)生含硫醚產(chǎn)物的衍生物。21.—種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的顯像劑連同生物相容性載體，為適合于哺乳動(dòng)物施用形式的。22.權(quán)利要求21的藥物組合物，其中所述顯像劑包含放射性成像部分。23.權(quán)利要求22的藥物組合物，其具有適合于單個(gè)患者的放射性劑量且在合適的注射器或容器中提供。24.—種試劑盒，其用于制備權(quán)利要求21-23中任一項(xiàng)的藥物組合物。25.權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的顯像劑，其用于在體內(nèi)診斷或成像法中。26.權(quán)利要求25的顯像劑，其中所述方法涉及其中M6P受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)成像。27.權(quán)利要求26的顯像劑，其中M6P受體上調(diào)的所述狀況是與纖維化相關(guān)的狀況。28.權(quán)利要求27的顯像劑，其中與纖維化相關(guān)的所述狀況是肝纖維化、充血性心力衰竭、腎小球硬化癥或呼吸衰竭。29.權(quán)利要求28的顯像劑，其中與纖維化相關(guān)的所述狀況是肝纖維化。30.權(quán)利要求29的顯像劑，其中所述M6P受體在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞上是上調(diào)的。31.—種用于受試者中其中M6P受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)診斷或成像的方法，其包括施用權(quán)利要求21-23的藥物組合物。32.權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的顯像劑用于受試者中其中M6P受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)成像的用途，其中所述受試者先前施用權(quán)利要求21-23的藥物組合物。33.權(quán)利要求l-15中任一項(xiàng)的顯像劑在制備用于其中M6P受體上調(diào)的狀況體內(nèi)成像的藥物中的用途。34.—種監(jiān)控用藥物治療人或動(dòng)物身體以對(duì)抗其中M6P受體上調(diào)的狀況的作用的方法，所述方法包括給所述身體施用權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的顯像劑且檢測所述顯像劑的攝取。全文摘要本發(fā)明提供了適合于纖維化的非侵入性顯影的新顯像劑，其靶向甘露糖-6-磷酸(M6P)。本發(fā)明還提供了用于制備顯像劑的方法，以及用于在所述方法中使用的前體。本發(fā)明還提供了包含顯像劑的藥物組合物和用于制備藥物組合物的試劑盒。在進(jìn)一步的方面，提供了顯像劑用于其中甘露糖-6-磷酸受體上調(diào)的狀況的體內(nèi)成像的用途和制備用于診斷其中甘露糖-6-磷酸受體上調(diào)的狀況的藥物中的用途。文檔編號(hào)A61K49/14GK101325978SQ200680046191公開日2008年12月17日申請(qǐng)日期2006年12月7日優(yōu)先權(quán)日2005年12月8日發(fā)明者B·吉爾貝,B·紐頓,H·托爾斯豪格,M·索爾貝肯,S·切蒂比申請(qǐng)人:通用電氣健康護(hù)理有限公司