專利名稱：：快速起作用的口服肽藥品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及口服的肽藥物和當(dāng)口服給藥時快速提供這些肽活性化合物的良好的生物藥效率的方法，在所述的口服肽藥物中，活性化合物包括許多氨基酸并在它們的分子結(jié)構(gòu)中存在至少一個肽鍵。
背景技術(shù)：
：許多的人的激素、神經(jīng)遞質(zhì)和其它重要的生物化合物都以肽作為它們分子結(jié)構(gòu)的重要的部分。許多疾病對患者體內(nèi)的這些肽化合物濃度的升高作出陽性反應(yīng)?？梢酝ㄟ^多種方法給予患者治療有效量的這些生物相關(guān)的肽。然而，如下文所進一步討論的，作為優(yōu)選方法的口服給藥是很難適用于這種活性化合物。例如，鮭魚降鈣素是一種減少從骨骼中吸收鈣的肽激素。當(dāng)用于治療與骨骼相關(guān)的疾病和鈣失調(diào)(如骨質(zhì)疏松癥、佩吉特病(Paget'sdisease)、惡性高鈣血癥等)時，它有助于維持骨密度。已分離了多種降鈣素(人降鈣素、鮭魚降鈣素、鰻降鈣素、埃爾卡托尼(elkatonin)、豬降鈣素和雞降鈣素)。各種降鈣素具有顯著的結(jié)構(gòu)上的非同源性。例如，組成人降鈣素和組成鮭魚降鈣素的氨基酸之間只存在50%的同一性。盡管在分子結(jié)構(gòu)上存在差異，但鮭魚降鈣素仍可以用于治療上述討論的人類的降鈣素響應(yīng)疾病。本領(lǐng)域使用的肽藥物經(jīng)常通過注射給藥或者通過鼻給藥。胰島素是一種經(jīng)常通過注射給藥的肽藥物實例。然而，注射給藥或者通過鼻給藥顯然是不方便的，并且與例如通過口服相比，注射給藥或者通過鼻給藥給患者帶來了更多的不舒適。通常，這種不方便或不舒適實質(zhì)上使患者不服從這種治療方案。然而，更優(yōu)選的口服給藥也存在問題，因為肽活性化合物在胃和腸中非常易于降解。因此，在本領(lǐng)域中需要更有效和能再生的的口服給藥的肽藥物，如胰島素、鮭魚降轉(zhuǎn)素和在本文中詳細討論的其它肽藥物。胃和腸中的蛋白水解酶可以降解肽，使肽在能被吸收到血流中之前就沒有活性。未被胃蛋白酶(通常具有最佳的酸性pH)降解的任何量的肽隨后面臨小腸的蛋白酶和由胰腺分泌的酶(通常具有最佳的中性到堿性pH)的考驗。對于肽如鮭魚降鈣素的口服給藥來說，特別困難的是這種分子相當(dāng)大以及它攜帶的電荷分布。對于鮭魚降鈣素來說，更難沿著腸壁滲透黏液或者穿過腸刷狀緣膜進入血液。這些附加的問題會進一步限制生物藥效率。至少部分克服上述許多問題的口服劑型由分別在1999年6月15日和2000年7月11日出版的、Stern等人的美國專利No.5,912,014和6，086，918中公開并要求專利權(quán)保護，這兩篇專利的內(nèi)容并入本文作為參考。這兩篇專利描述了肽劑量制劑，該制劑定革巴到腸釋放肽并且提高以口服劑量制劑的形式給藥的肽的生物藥效率，所述口服劑量制劑除了肽還包括至少一種藥學(xué)上可以接受的pH降低試劑和至少一種能有效提高肽的生物藥效率的吸收促進劑。而且，所述劑量制劑被能使肽、吸收促進劑和pH降低試劑穿過患者的胃，同時保護肽不被胃蛋白酶降解的腸溶衣包覆。此后，所述腸溶衣溶解，且肽、吸收促進劑和pH降低試劑一起釋放到患者的腸。然而，在某些情況下，由口服肽治療的情況受益于比相對緩慢溶解腸溶衣并且活性成分在腸中的相關(guān)釋放所提供的更快速的治療。從這種快速治療獲益的情況的具體實例涉及緩解疼痛的范圍，其中，緩解疼痛的速度對患者來說，如果不是關(guān)鍵的因素那么顯然也是重要的因素。而且，活性試劑并不總需要穿過從胃到腸的所有路徑。也就是說，對于某些肽劑，包括但不限于各種疼痛緩解劑，在制劑進入腸之前，例如，物質(zhì)通過食道時或者在患者的胃中時，活性試劑被吸收可能是最有效的。在這種情況下，盡管口服生物藥效率仍然是一個考慮的因素，然而，如果而這種生物藥效率的降低通過吸收速度的相應(yīng)增加、并通過含在制劑內(nèi)的活性試劑的作用而得到平衡，那么患者和/或臨床醫(yī)生可能愿意接受生物藥效率的有限降低。因此，長期以來，需要一種具有更快速的治療作用但能提供所需要的生物藥效率的口服肽制劑，即與上述討論的'014和'918專利中描述的制劑相反。
發(fā)明內(nèi)容因此，如下文所述，本發(fā)明的目的是提供一種用于能經(jīng)口快速給予生理活性肽劑的藥物成品，該活性肽劑包括但不限于甲狀旁腺激素、肽H酪氨酸-0-精氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-皿2(DALDA)和它的衍生物(下文表示為"DALDA"衍生物)、胰島素、降f丐素、血管加壓素和本文討論的其它肽劑，DALDA的衍生物包括但不限于DMT-DALAD(即，11-2，6-二甲基酪氨酸-0-精氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-NH2)。本文使用的術(shù)語"制成的"和/或"完全制成的"定義為以給藥的最終形式提供的產(chǎn)品。本發(fā)明的另一個目的是提供一種用這種藥物成品治療時加速這種肽的輸送速度的治療方法。本發(fā)明的另一個目的是提供一種經(jīng)口給予本文描述的藥物成品，通過給予例如降鈣素或者一種或多種合成代謝試劑如甲狀旁腺激素治療與骨相關(guān)的疾病和鈣失調(diào)的方法。一方面，所述疾病或失調(diào)通過給予適于經(jīng)口給予生理活性肽試劑的藥物成品來治療，其中，該藥物成品包括(A)治療有效量的所述活性肽試劑；(B)至少一種藥學(xué)上可接受的pH降低試劑；和(C)至少一種有效提高所述活性試劑的生物藥效率的吸收促進劑；其中，如果將所述藥物成品加入到10毫升的0.1M的碳酸氫鈉的水溶液中，所述pH降低試劑在所述藥物成品中以足以使所述溶液的pH降低到不高于5.5的量存在，并且其中，所述藥物成品的外表面基本上沒有耐酸的保護性載體。優(yōu)選的肽活性試劑包括但不限于DALDA、DMT-DALDA、胰島素、甲狀旁腺激素、包括甲狀旁腺激素截短的激素片段、以游離酸或酰胺化形式的甲狀旁腺激素、血管加壓素、降鈣素如鮭魚降鈣素和下文討論的其它物質(zhì)。在另一方面，本發(fā)明提供一種促進經(jīng)口給予的治療的肽活性試劑的輸送速度的方法，該方法包括在患者的消化道中從上述種類的藥物成品中選擇性釋放肽活性試劑和至少一種pH降低試劑以及至少一種吸收促進劑，所述藥物成品適于輸送肽活性試劑；其中，所述藥物成品的外表面基本上沒有耐酸的保護性載體，且其中如果加入到10毫升的0.1M的碳酸氫鈉的水溶液中，所述pH降低試劑和其它釋放的化合物在所述藥物成品中以足以使所述溶液的pH降低到不高于5.5的量釋放。相對于相應(yīng)的腸溶衣藥物，認為所述藥物成品上缺乏外部的耐酸涂層導(dǎo)致了活性肽試劑被患者血漿吸收的速度顯著加快。本文所使用的詞"相應(yīng)的"，例如，相應(yīng)的組合物、相應(yīng)的藥物等應(yīng)當(dāng)被認為是指，例如與本發(fā)明制備的完全相同的組合物或藥物但具有腸溶衣，其中，本申請要求保護的制劑完全沒有這種腸溶衣。在本發(fā)明的另一方面中，所述治療肽活性試劑、所述至少一種pH降低試劑和所述至少一種吸收促進劑從所述藥物成品中釋放的速度遠遠大于這些成分從含有耐酸保護載體(例如，腸溶衣)的相應(yīng)的藥物組合物中釋放的速度。在另一種實施方案中，在患者體內(nèi)所述肽活性試劑在60分鐘以內(nèi)達到最大血漿濃度。在另一方面，本發(fā)明提供了一種提高經(jīng)口給予上述的藥物成品的鮭魚降鈣素的生物藥效率的方法，該方法包括所述藥物成品在經(jīng)過患者的口后將所述鮭魚降,丐素和至少一種pH降低試劑以及至少一種吸收促進劑選擇性釋放到患者的消化道中；其中，如果將所述藥物成品加入到10毫升的0.1M的碳酸氫鈉的水溶液中，那么由該藥物成品所釋放的所述pH降低化合物的量足以使所述溶液的pH降低到不高于5.5。在本發(fā)明的另一方面中，所述鮭魚降鈣素、所述至少一種pH降低試劑和所述至少一種吸收促進劑從所述藥物成品中的釋放速度遠遠大于這些成分從含有耐酸保護載體的相應(yīng)的藥物組合物中的釋放速度。在另一種實施方案中，在患者體內(nèi)所述鮭魚降鈣素在60分鐘以內(nèi)達到最大血漿濃度。本發(fā)明被認為能降低所述肽活性化合物的蛋白水解降解的可能性。如果給予到患者的空腹中所述藥物成品沒有被完全排泄的話，一般在酸性pH的環(huán)境中具有最高活性的胃蛋白酶的效果也會最小化，其中，所述空腹含有很少量的蛋白酶。此后，所述肽被認為會進一步受到保護而不受到被腸蛋白酶或者胰腺蛋白酶水解的蛋白水解的侵襲，腸蛋白酶或者胰腺蛋白酶一般在堿性至中性的pH下具有最高活性。認為酸(肽活性試劑與酸相互混合)的量足以通過將pH降低到這些腸蛋白酶的最佳活性范圍以下來降低在腸中(如，腔內(nèi)蛋白酶(luminalprotease)或消化蛋白酶和刷狀緣膜的蛋白酶)的中性至堿性作用的蛋白酶的活性。在所述藥物成品中的吸收促進劑用于促進肽劑穿過腸黏膜層、穿過刷狀緣膜并進入血液。由此，本發(fā)明被認為促進了肽穿過腸刷狀緣膜進入血液的過程，同時繼續(xù)保護所述肽不被蛋白水解降解。根據(jù)本發(fā)明，相對于單獨使用吸收促進劑或者單獨使用pH降低化合物，同時使用吸收促進劑和PH降低試劑可以獲得意想不到的對生物藥效率的協(xié)同作用。比較表4(下文)的制劑I(單獨使用鮭魚降鈣素)，表3的制劑I(鮭魚降轉(zhuǎn)素和pH降低化合物)和表4的制劑II(鮭魚降鈣素和吸收促進劑)與表4的制劑m(鮭魚降鈣素、pH降低化合物和吸收促進劑)。通過下述對本發(fā)明的詳細描述，本發(fā)明的其它特點和優(yōu)點將會變得更明顯。具體實施例方式令人驚奇地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的沒有腸溶衣的藥物制劑增加了肽的吸收速度(相對于相應(yīng)的腸溶衣的藥物)而沒有降低生物藥效率至低于實際水平。盡管的確存在生物藥效率的一些降低，但并不期望這種降低排除了有效的醫(yī)療或者不適當(dāng)?shù)刭H低更快速度的優(yōu)點，尤其是在速度具有顯著的優(yōu)點的應(yīng)用中，即減緩疼痛的情況。由于減少了載體(如，膠囊或片劑)溶解和活性成分釋放所必需的時間，因此本發(fā)明能使活性肽更快速地吸收。本發(fā)明還能使在消化道的上游釋放活性肽，如在食道和/或胃中釋放，不需要等到所述物質(zhì)進入腸道后才釋放。根據(jù)本發(fā)明，給需要用肽活性成分治療的患者提供本發(fā)明的藥物成品，在制藥工業(yè)中，優(yōu)選但不必需以通常大小的片劑形式形成口服的藥物組合物，該藥物組合物含有一種或多種所述的肽活性成分(適當(dāng)?shù)膭┝?。如果需要的話，所述藥物成品也可以被制成(例如)膠囊形式。所述藥物成品的給藥劑量和次數(shù)將在下文詳細地討論?？梢垣@益的患者是對升高的含肽化合物水平有利地響應(yīng)的任何患者。例如，本發(fā)明的口服型鮭魚降鈣素可以用于治療患鈣失調(diào)或患骨病的患者。本發(fā)明可以通過口服型降鈣素，優(yōu)選鮭魚降鈣素而用于治療，例如骨質(zhì)疏松、佩吉特病、惡性高血鈣癥等。或者，所述肽活性試劑可以替代地含有骨合成代謝試劑如甲狀旁腺激素，該甲狀旁腺激素可以是全長的形式也可以是截短的形式，可以以游離酸的形式或者以酰胺化的形式給予。一個具體的實施方式是給予PHT[1-31]NH2，即截短的、酰胺化的甲狀旁腺激素。此外，通過給予肽可以獲得止痛和/或心血管保護作用，所述肽包括所謂的DALDA衍生物，如dmt-DALDA(H-2,6-二甲基酪氨酸-D醒精氨酸-苯丙胺酸-賴氨酸-NH2)。DALDA衍生物和其它有用的肽在2005年6月2日提交的申請?zhí)枮镹o.11/144,580中有詳細的描述，該申請被授予了本申請的擁有者，該申請的內(nèi)容明確地并入本文作為參考。鮭魚降鈣素是用于本發(fā)明的一種活性成分。例如，即使降鮭魚降鈣素作為用于人類患者的藥劑時，它仍能提供甚至超出人降鈣素的許多優(yōu)點。用鮭魚降鈣素代替人降鈣素治療人的骨質(zhì)疏松癥所獲得的優(yōu)點有增加力量、鎮(zhèn)痛和增加半衰期。由于鮭魚降鈣素需要的劑量比人降鈣素更低，因此在治療方面，鮭魚降鈣素比天然的人降鈣素更有效。鮭魚降鈣素與人降鈣素之間的非同源性很顯著，它們之間的氨基酸序列只有50%的相同。不局限于理論，含有本發(fā)明的藥物成品的藥物組合物被認為克服了一系列的針對于生物藥效率的不同的且不相干的天然的障礙。藥物組合物的不同的組成通過對各自適合的機制克服不同的障礙，從而對肽活性成分的生物藥效率產(chǎn)生協(xié)同效果。如下文所討論的，肽固有的物理和化學(xué)特性使某些吸收促進劑比其它的吸收促進劑在促進肽的生物藥效率方面更有效。在適于口服給藥的制劑中含有所述肽活性化合物。根據(jù)本發(fā)明，肽被胃蛋白酶(在酸性pH范圍內(nèi)，大多數(shù)的胃蛋白酶都是具有活性的)的蛋白水解降解優(yōu)選被減少，這是由于在空腹?fàn)顟B(tài)下(盡管為了獲得合適的結(jié)果不需要空腹?fàn)顟B(tài))給予患者所述制劑，而被腸蛋白酶或者胰腺蛋白酶的降解減少，是由于pH降低試劑將腸環(huán)境中的pH調(diào)節(jié)到低于最佳水平的作用。溶解促進劑輔助肽活性試劑穿過腸的上皮屏障。pH降低試劑被認為是將局部的pH(活性試劑釋放的部位)降低到對于許多腸蛋白酶為最佳范圍以下的水平。這種pH的降低減少了腸蛋白酶的蛋白水解活性，由此提供防止所述肽潛在降解的保護應(yīng)該是所述肽存在于腸中。通過本發(fā)明提供的暫時的酸性環(huán)境降低了這些蛋白酶的活性。優(yōu)選提供足夠的酸以將局部的腸的pH暫時降低到5.5以下，優(yōu)選4.7以下并且更優(yōu)選為3.5以下。下文描述的碳酸氫鈉的測試(在題為"pH降低試靴鄰部分)是表示所需要的酸量。優(yōu)選情況下，降低的pH的條件維持一段時間足以保護肽試劑不受到蛋白水解降解直到足以保證至少一些肽試劑有機會進入血流中。對于鮭魚降鈣素來說，實驗證明當(dāng)活性成分被直接注射到十二指腸、髂骨或結(jié)腸時，鮭魚降鈣素的血液濃度的Tm^為5-15分鐘。本發(fā)明的吸收促進劑協(xié)同地促進了肽被吸收到血液中，盡管降低蛋白水解活性的情況是占主要的。本發(fā)明實現(xiàn)增強的生物藥效率的目標(biāo)的機制是通過使藥物成品中的活性成分盡可能同時地釋放來輔助。所述吸收促進劑可以是溶解促進劑和/或運輸促進劑(在下文中將詳細描述)，它輔助所述肽試劑從消化道運輸?shù)窖褐?，并在降低的腸的pH和降低的腸的蛋白水解活性期間可以促進所述肽試劑運輸?shù)窖褐惺沟酶玫剡M行該過程。許多表面活性劑可以充當(dāng)溶解促進劑和運輸(吸收)促進劑。仍然不局限于理論，據(jù)認為促進溶解提供了(1)本發(fā)明的活性成分更同步地釋放到消化道的水性部分；(2)肽在黏膜層中并且輸送通過其中的更高的溶解性，所述黏膜層如沿著腸壁所發(fā)現(xiàn)的。一旦肽活性成分到達如腸壁時，通過跨細胞運輸或者旁細胞運輸(paracellulartransport),吸收促進劑對通過腸的刷狀緣膜進入血液中提供了更好地輸送。正如下文詳細討論的那樣，許多優(yōu)選的化合物能提供兩種功能。在那些實例中，利用這兩種功能的優(yōu)選實施方式可以通過在藥物組合物中僅加入一種額外的化合物來實現(xiàn)。在其它的實施方式中，另外的吸收促進劑可以分別提供這兩種功能。本發(fā)明的藥物成品中的每種優(yōu)選成分將在下文中分別討論。可以使用多種pH降低試劑的組合或者多種促進劑的組合，也可以使用單獨的pH降低試劑和/或者單獨的促進劑。在下文中將還討論一些優(yōu)選的組合。肽活性成分本發(fā)明的受益于經(jīng)口給予的肽活性成分包括具有生理活性的、并具有許多氨基酸且在其分子結(jié)構(gòu)中具有至少一個肽鍵的任何治療試劑。通過幾種機制，本發(fā)明抑制活性成分被蛋白酶降解，否則蛋白酶易于分裂所述活性成分中的一個或多個肽鍵。分子結(jié)構(gòu)可以進一步包括其它取代或改性。例如，本文中有用的肽活性試劑鮭魚降鈣素在其c末端被酰胺化。根據(jù)本發(fā)明，人造的和天然的肽都可以口服。本發(fā)明的肽活性化合物包括但不限于，胰島素、血管加壓素、降鈣素(包括但不限于鮭魚降鈣素，其它的降鈣素也可以使用)。其它實例包括但不局限于與降鈣素基因相關(guān)的肽、甲狀旁腺激素(全長的或截短的，酰胺化形式或游離酸形式，進一步改性的或沒有進一步改性的)、黃體激素釋放因子、紅細胞生成素、組織血纖維蛋白溶酶原激活物、人生長激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、各種白細胞介素、腦啡肽、DALDA衍生物如dmt-DALDA、等。本領(lǐng)域內(nèi)公知的其它許多物質(zhì)。可以預(yù)期的是具有在胃腸道中斷裂的肽鍵的任何藥物化合物都可以從本發(fā)明的口服中獲益，因為，本發(fā)明提供了那種斷裂作用的降低。當(dāng)使用鮭魚降鈣素時，相對于所有藥物組成的總重量，鮭魚降鈣素的含量優(yōu)選為0.02-0.2重量％。鮭魚降鈣素可以商購獲得(例如，從BACHEM、Torrance、CA)?；蛘?，降鈣素可以通過公知的方法合成，其中一些方法將在下文中簡單討論。其它肽活性試劑存在的濃度取決于活性化合物在血液中所需要的目標(biāo)濃度以及在本發(fā)明的口服體系中的生物藥效率應(yīng)當(dāng)更高或更低。(在表6中列出了幾種)。鮭魚降鈣素的前體可以通過本領(lǐng)域中已知的化學(xué)或者重組合成的方法制備。其它酰胺化的肽活性試劑的前體可以以相似的方式制備。認為重組產(chǎn)品具有更明顯的成本效率。通過也是本領(lǐng)域中公知的酰胺化反應(yīng)將前體轉(zhuǎn)化為活性鮭魚降鈣素。例如，在U.S.專利號為No.4，708,934和歐洲專利公開0308067和0382403中描述了酶酰胺化。對于前體和催化前體轉(zhuǎn)化為鮭魚降鈣素的酶來說，重組產(chǎn)品均是優(yōu)選的。在生物技術(shù)的第11巻(1993)的第64-70頁(Biotechnology,Vol.11(1993)pp.64-70)中討論了這種組合產(chǎn)品，并且還描述了將前體轉(zhuǎn)化為酰胺化的產(chǎn)品。所報道的重組產(chǎn)品與天然的鮭魚降鈣素以及用溶液和固相化學(xué)肽合成制備的鮭魚降鈣素產(chǎn)品相同。在酰胺化時，酮酸如a-酮酸或其鹽或其酯可以用于代替過氧化氫酶輔因子，其中所述a-酮酸的分子結(jié)構(gòu)為RC(O)C(O)OH，并且其中R選自由芳基、Cl-C4的烴基部分、鹵代的或羥基化的Cl-C4烴基部分和Cl-C4的羧酸組成的組中。這些酮酸的實例包括但不限于，丙酮酸乙酯、丙酮酸及其鹽、丙酮酸甲酯、苯甲酰甲酸及其鹽、2-酮基丁酸及其鹽、3-甲基-2-氧代丁酸及其鹽和2-酮基戊二酸及其鹽。優(yōu)選的重組鮭魚降鈣素(rsCT)可以通過例如在大腸桿菌中用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶生成甘氨酸延展的(glycine-extended)鮭魚降血鈣素作為水溶性融合蛋白而制備。如上述引用的Biotechnology文章中描述的，所述甘氨酸延展的前體的分子結(jié)構(gòu)除C末端(其中，鮭魚降轉(zhuǎn)素以-脯氨酸-NH2為末端，而前體以-脯氨酸-甘氨酸為末端。在上述出版物描述的a-酰胺化酶催化前體轉(zhuǎn)化為鮭魚降鈣素。這種酶優(yōu)選在例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中重組制備)外其余均與活性鮭魚降鈣素的結(jié)構(gòu)相同。其它前體至其它酰胺化的肽可以用類似的方式制備。不需要酰胺化或者附加的功能性的肽也可以用類似的方式制備。其它肽活性試劑可以商購或者用本領(lǐng)域內(nèi)公知的技術(shù)制備。pH降低試劑與每一次給予鮭魚降鈣素一起給予的pH降低化合物的總量應(yīng)該優(yōu)選為，例如，當(dāng)釋放到腸中時，該總量足以將局部腸的pH基本上降低到低于該處所發(fā)現(xiàn)的蛋白酶的最佳pH。所需要的量必需隨幾個因素變化，所述因素包括所用的pH降低試劑的類型(下文將有討論)以及由給定的pH降低試劑提供的質(zhì)子的等價物。實際上，提供良好的生物藥效率所需要的量為，將本發(fā)明的藥物成品加入到10毫升的0.1M的碳酸氫鈉溶液中時，所述pH降低試劑所需要的量足以使碳酸氫鈉溶液的pH降低到不高于5.5，優(yōu)選不高于4.7，更優(yōu)選不高于3.5。在上述的測試中，在一些實施方式中使用足夠的酸將pH降低到約2.8。在本發(fā)明的藥物組合物中，所使用的pH降低試劑的量優(yōu)選為至少300毫克，更優(yōu)選至少400毫克。上述優(yōu)先選擇涉及兩種或更多種該試劑組合使用時的所有pH降低試劑的總的組合的重量?？诜苿┎粦?yīng)當(dāng)含有任何的堿，當(dāng)堿與降低pH的化合物一起釋放時，將阻止上述碳酸氫鈉測試的pH降低到5.5以下。本發(fā)明的pH降低試劑可以是在胃腸道中沒有毒性并且能釋放氫離子(傳統(tǒng)的酸)或者在局部的環(huán)境中能誘導(dǎo)更高的氫離子含量的任何藥學(xué)上可接受的化合物。也可以是這些化合物的任意組合。在本發(fā)明優(yōu)選使用至少一種pKa不高于4.2的pH降低試劑，更優(yōu)選不高于3.0。還優(yōu)選所述pH降低試劑在室溫時在水中的溶解度為至少30克每100毫升水。誘導(dǎo)更高氫離子含量的化合物的實例包括氯化鋁和氯化鋅。藥學(xué)上可接受的傳統(tǒng)的酸包括但不限于，氨基酸的酸式鹽(例如，鹽酸氨基酸)或者其衍生物。它們的實例是乙酰谷氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甜菜堿、肉堿、肌肽、瓜氨酸、肌酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、羥賴氨酸、羥脯氨酸、亞?；撬?、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲基組氨酸、正亮氨酸、鳥氨酸、苯丙胺酸、脯氨酸、肌氮酸、絲氨酸、?；撬帷⑻K氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸的酸式鹽。有用的PH降低化合物的其它實例包括二羧基羧酸和三羧基羧酸。酸如乙酰水楊酸、乙酸、抗壞血酸、檸檬酸、富馬酸、葡萄糖醛酸、戊二酸、甘油酸、乙醇酸(glycocolic)、二羥乙酸、異檸檬酸、異戊酸、乳酸、馬來酸、草酰乙酸、草酰琥珀酸、丙酸、丙酮酸、琥珀酸、酒石酸、戊酸等都發(fā)現(xiàn)是有用的。在本領(lǐng)域中通常不被稱為"酸"，但對本發(fā)明可能是有用的其它有用的pH降低試劑是磷酸酯(如，果糖-l，6-二磷酸，葡萄糖-l,6-二磷酸，磷酸甘油酸和二磷酸甘油酸)。CARBOPOL.RTM.(BFGoodrich的商品名)和聚合物如聚卡波菲(polycarbophil)也可以用于降低pH。可以使用pH降低試劑的任何組合，只要該組合能獲得使上述討論的碳酸氫鈉測試中所需要的pH值不高于5.5即可。作為在藥物成品中的至少一種pH降低試劑，一個優(yōu)選的實施方式使用選自由檸檬酸、酒石酸和氨基酸的酸式鹽組成的組中的酸。當(dāng)鮭魚降鈣素為肽活性試劑時，pH降低試劑與鮭魚降鈣素的一定比例被證明是尤其有效的。優(yōu)選情況下，pH降低試劑與鮭魚降鈣素的重量比超過200:1，優(yōu)選為800:1，更優(yōu)選為2000:1。吸收促進劑相對于藥物組合物的總重量，所述吸收促進劑的含量優(yōu)選為0.1-20.0重量％。優(yōu)選的吸收促進劑為作為溶解促進劑和吸收促進劑的表面活性劑。一般來說，"溶解促進劑"改善本發(fā)明各組分溶解在它們最初釋放的水性環(huán)境中，或者溶解在如排列在腸壁的黏膜層的親脂性的環(huán)境中，或者它們二者中的能力。"運輸(吸收)促進劑"(它們通常與作為溶解促進劑所使用的表面活性劑相同)是那些促進肽試劑更容易穿過腸壁的物質(zhì)。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，一種或多種吸收促進劑可以僅實現(xiàn)一種功能(例如，溶解性)，或者一種或多種吸收促進劑可以僅實現(xiàn)另一種功能(例如，吸收)。還可以是幾種化合物的混合物，其中，一些化合物提供改善的溶解性，一些化合物提供改善的吸收和/或一些化合物既能提供改善的溶解性又能提供改善的吸收。不局限于理論，認為吸收促進劑可以通過以下方式起作用(1)考慮到增加的跨細胞運輸，增加了細胞膜外部疏水區(qū)域的混亂程度；或者(2)瀝濾膜蛋白導(dǎo)致增加的跨細胞運輸；或者(3)擴大細胞間的孔半徑以增加的旁細胞運輸。據(jù)認為表面活性劑可以用作溶解促進劑和吸收促進劑。例如，洗滌劑在如下方面是有用的，(1)使所有活性成分快速溶解到它們最初釋放的水性環(huán)境中；(2)增加本發(fā)明的成分尤其是肽活性試劑的親脂性，輔助它們進入并穿過腸黏膜；(3)增強正常的極性肽活性試劑穿過刷狀緣膜的上皮屏障的能力；(4)增強上述的跨細胞運輸或者旁細胞運輸。當(dāng)表面活性劑用作吸收促進劑時，表面活性劑優(yōu)選為自由流動的粉末以促進制備過程中的混合和膠囊的裝填。由于鮭魚降鈣素和其它肽固有的性能(例如，它們的等電點、分子量、氨基酸組成等)，某些表面活性劑與某些肽非常容易互相作用。事實上，一些能與鮭魚的降鈣素的帶電荷部分發(fā)生不需要的相互作用并阻止了其吸收，因此，導(dǎo)致了生物藥效率的降低。當(dāng)試圖增加鮭魚降鈣素或者其它肽的生物藥效率時，用作吸收促進劑的任何表面活性劑優(yōu)選選自由(i)為膽固醇衍生物(例如，膽汁酸)的陰離子表面活性劑；(ii)陽離子表面活性劑(例如，?；鈮A，磷脂等)；(iii)非離子表面活性劑和(iv)陰離子表面活性劑(尤其是具有線性烴基區(qū)域的)和負電荷中和劑的混合物組成的組中。負電荷中和劑包括但不限于酰基肉堿、十六垸基氯化吡啶鎗等。還優(yōu)選所述吸收促進劑在酸性pH下，尤其在3.0-5.0是可溶解的。與鮭魚降鈣素配合良好的一個尤其優(yōu)選的組合是陽離子表面活性劑和為膽固醇衍生物的陰離子表面活性劑混合，這兩種表面活性劑在酸性PH下都是可溶的。尤其優(yōu)選的組合是酸溶性的膽汁酸與陽離子表面活性劑。?；鈮A和蔗糖酯是很好的組合。當(dāng)單獨使用特定的吸收促進劑時，優(yōu)選為陽離子表面活性劑。酰基肉堿(例如月桂酰肉堿)、磷脂和膽汁酸是特別好的吸收促進劑，尤其是?；鈮A。為膽固醇衍生物的陰離子表面活性劑也用于一些實施方式中。優(yōu)選這些表面活性劑是為了避免與肽試劑相互作用從而干擾該肽試劑吸收入血液中。為了減少副作用的可能性，當(dāng)用作本發(fā)明的吸收促進劑時，優(yōu)選的洗滌劑為可生物降解的或者可再吸收的(例如，生物上可再循環(huán)的化合物，如膽汁酸、磷脂和/或酰基肉堿)，更優(yōu)選為可生物降解的。認為?；鈮A在促進旁細胞運輸方面尤其有用。將膽汁酸(或者不具有線性烴的另一種陰離子洗滌劑)與陽離子洗滌劑結(jié)合使用時，鮭魚降鈣素更好地輸送至并穿過腸壁。優(yōu)選的吸收促進劑包括(a)水楊酸鹽，如水楊酸鈉、3-甲氧基水楊酸鹽、5-甲氧基水楊酸鹽和高香草酸鹽(homovanilate);(b)膽汁酸，如?；悄懰?、?；撬崦撗跄懰帷⒚撗跄懰?、膽酸、甘氨膽酸(glycholic)、石膽酸、鵝膽酸、熊去氧膽酸、熊膽酸(ursocholic)、脫氫膽酸、梭鏈孢酸等；(c)非離子表面活性劑，如聚氧乙烯酯(如，Brij36T、Brij52、Brij56、Brij76、Brij96、TexaphorA6、TexaphorA14、TexaphorA60等)、對叔辛基酚聚氧乙烯(TritonX-45、TritonX-IOO、TritonX-114、TritonX-305等)、壬基苯氧基聚氧乙烯(如，IgepalCO系列)、聚氧乙烯山梨糖醇酐酯(如，Tween-20、Tween-80等)；(d)陰離子表面活性劑，如二辛基磺基琥珀酸鈉；(e)溶血磷脂，如溶血卵磷脂和溶血磷脂酰乙醇胺；(f)?；鈮A、?；憠A和?；被幔缭鹿瘐Ｈ鈮A、肉豆蔻酰肉堿、棕櫚酰肉堿、月桂酰膽堿、肉豆蔻酰膽堿、棕櫚酰膽堿、十六烷基賴氨酸(hexadecyllysine)、N-?；奖彼?、N-?；拾彼岬?；(g)水溶性磷脂，如二庚酰磷脂酰膽堿、二辛基磷脂酰膽堿等；(h)為含有中鏈長度脂肪酸(辛酸、癸酸和月桂酸)的甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯的混合物的中鏈甘油酯；(i)乙二胺四乙酸；(j)陽離子表面活性劑，如十六垸基氯化吡啶鎿；(k)聚乙二醇的脂肪酸衍生物，如Labrasol、Labrafac等；禾卩(1)烷基糖，如月桂基麥芽糖苷(laurylmaltoside)、月桂酰蔗糖、肉豆蔻酰蔗糖和棕櫚酰蔗糖等。不局限于理論，在一些優(yōu)選的實施方式中，還含有陽離子交換劑(例如，洗滌劑)通過另一種可能的機制來提供溶解性的增加。尤其是，它們能阻止鮭魚降鈣素或其它肽活性試劑與黏液的結(jié)合。優(yōu)選的陽離子交換試劑包括氯化魚精蛋白或任何其它聚陽離子。其它任選成分在一些優(yōu)選的實施方式中，含有另一種肽(如，白蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、其它動物蛋白或者植物蛋白等)以減少非特異性吸收(如肽結(jié)合到腸黏膜屏障上)，從而降低昂貴的肽活性試劑的必需的濃度。當(dāng)加入時，相對于全部藥物組合物的總重量，肽的含量優(yōu)選為1.0-10.0重量％。優(yōu)選情況下，此第二種肽不具有生理活性并且最優(yōu)選為食物肽如大豆肽等。不局限于理論，此第二種肽通過作為蛋白酶清除劑還可增加生物藥效率，所述蛋白酶清除劑與用于蛋白酶相互作用的肽活性試劑競爭。該第二種肽還可以輔助活性化合物通過肝。本發(fā)明的所有藥物組合物還可以任選地含有普通的藥物稀釋劑、聚糖(glycant)、潤滑劑、膠囊、防腐劑、著色劑等并以它們公知的尺寸和量使用。其它優(yōu)選優(yōu)選情況下，pH降低試劑與吸收促進劑的重量比選為3:l至20:1，優(yōu)選為4:1至12:1，更優(yōu)選為5:1至10:1。在給定的藥物組合物中，所有pH降低試劑的總重量與所有吸收促進劑的總重量在上述優(yōu)選的比例內(nèi)。例如，如果藥物組合物含有兩種pH降低試劑與三種吸收促進劑，上述的比例將根據(jù)兩種pH降低試劑的總重量與三種吸收促進劑的總重量計算。優(yōu)選情況下，pH降低試劑、肽活性試劑與吸收促進劑(在各種類中或者一種化合物或者多種化合物)應(yīng)當(dāng)均勻分散在藥物成品中。在一個實施方式中，所述藥物成品可以制成兩層或更多層的層壓形式，其中，肽活性試劑被包括在第一層中，并且pH降低試劑與吸收促進劑被包括在與所述第一層層壓的第二層中。在另一個實施方式中，藥物成品的組合物包括含有藥物粘合劑的顆粒，在該粘合劑中均勻分散有肽活性試劑、pH降低試劑與吸收促進劑。優(yōu)選的顆粒還可以由被有機酸均勻?qū)影鼑乃岷?、促進劑層和被有機酸外層包圍的肽層組成。顆?？梢詮挠伤幬镎澈蟿┡cpH降低試劑、吸收促進劑和用在本發(fā)明中的肽活性試劑組成的水性混合物而制備，所述藥物粘合劑如聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素。制備方法在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的劑量形式包括具有至少兩層的層壓結(jié)構(gòu)的片劑。本文中使用的術(shù)語"層壓結(jié)構(gòu)"具有其常規(guī)意義，它是指由牢固結(jié)合的材料層組成的物體，但如果有，層之間也僅有很小的相互作用。第一層的主要成分通常為上述pH降低試劑。第二層的主要成分通常為肽和吸收促進劑。當(dāng)以下述方式組合時，這些組分形成具有至少兩層的片劑。所述層互相相鄰設(shè)置，如第一層位于藥物成品的上部時，第二層就位于底部，或者可選擇地，第一層可以位于內(nèi)部并被第二層包圍。盡管具有兩層的片劑由于相對容易制備而優(yōu)選，但該片劑還可以具有三層或者更多層，其中，第二層基本上由肽組成，且第三層含有表面活性劑。第一層通過將至少一種pH降低試劑造粒以形成第一層材料而制備。當(dāng)檸檬酸為優(yōu)選的pH降低試劑時，單獨的檸檬酸不提供所需要的可壓縮性特性。因此，在造粒過程中或者造粒后，可以將其它材料加入到pH降低試劑中以改善其機械特性。尤其是，在流化床中造粒時，填料材料如微晶纖維素和聚維酮(povidone)粘合劑可以以本領(lǐng)域公知的量加入。接著，將得到的顆粒狀干燥并在研磨機中以本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的任何方式制成任意的尺寸。此外，如上所述，顆粒狀可以與如滑石和硬脂酸鎂的助流劑(glidants)和潤滑劑組合，以進一步改善顆粒狀的可壓縮性和流動性，從而形成第一層材料。第二層材料通過將肽與至少一種吸收促進劑(如表面活性劑)組合而形成。第二層也可以在流化床中制備。由于很少量的肽就顯示相對較高的生物活性，因此，第二層可以通過將肽和如聚維酮的粘合劑噴霧到表面活性劑或者至少一種賦形劑和表面活性劑的混合物上而制備。如上所述，所述表面活性劑通常為?；鈮A，本發(fā)明優(yōu)選月桂酰肉堿。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所了解的，任選的賦形劑通常包括如微晶纖維素的填充物，其用量足以提供層之間合適的粘合。然后將得到的顆粒狀干燥并在研磨機中以本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的任何方式制成任意的尺寸。最后，將顆粒任選地轉(zhuǎn)移到摻合器中，在摻合器中將顆粒與如交聯(lián)羥甲纖維素鈉(croscarmellosesodium)的崩解劑或一種或多種其它合適的崩解劑摻混，所述崩解劑的最大用量為顆粒重量的約10.0重量％，優(yōu)選為約2.0重量％。盡管為任選的，但由于認為崩解劑通過促進肽與pH降低試劑幾乎同時更完全地釋放，因此崩解劑是優(yōu)選的。也可以加入其它的潤滑劑和添加劑如硬脂酸鎂和硬脂酸以及其它的如膠狀二氧化硅和聚維酮的賦形劑以本領(lǐng)域公知的方式改善第二層材料的性接著，將一部分第一層材料加入到標(biāo)準(zhǔn)的兩層壓片機中，然后加入到?jīng)_?；蛩苣Ｖ?。然后將第一層材料部分地壓縮以形成第一層。通常，部分壓縮是必須的，為了防止將第二層材料加入到?jīng)_模時第一層材料和第二層材料之間實質(zhì)性的混合。在部分壓縮第一層材料后，將第二層材料加入到含有第一層的沖模中。接著第一層和第二層材料一起壓縮以形成具有兩層的片劑。通常，第一層材料構(gòu)成最終片劑總重量的約50重量％到約90重量％。優(yōu)選地，第一層材料構(gòu)成片劑總重量的約70重量％。第二層材料通常構(gòu)成最終片劑總重量的約50重量％到約10重量％。優(yōu)選地，第二層材料為最終片劑總重量的約30重量％。由于第一層材料預(yù)先被部分壓縮成層，因此避免了第二層材料與第一層材料之間實質(zhì)性的混合。本發(fā)明的兩層結(jié)構(gòu)基本上防止了pH降低試劑與肽和表面活性劑之間的接觸。尤其是在兩層之間的界面，通常小于0.1%的肽接觸pH降低試劑。在可供選擇的實施方式中，本發(fā)明的藥物成品(例如鮭魚降鈣素)可以包括號碼為00的膠囊，該膠囊中填充有0.25mg的肽、400mg的粒狀檸檬酸(例如，從ArcherDanielsMidlandCorp得到)、50mg的?；撬崦撗跄懰?taurodeoxycholicacid)(例如，從SIGMA獲得)和50mg的月桂酰肉堿(SIGMA)。所有的成分優(yōu)選適于最后嵌入到膠囊中，并且優(yōu)選可以以任何順序加入到摻合器中的粉末。接著運行摻合器約5分鐘直到粉末完全地混合。然后將混合的粉末裝填入膠囊的大端。膠囊的另一端增加，且將膠囊快速封閉。由于本發(fā)明提供的增強的生物藥效率，因此在本發(fā)明的藥物制備中，相對昂貴的肽活性試劑(例如，鮭魚降鈣素，PTH(甲狀旁腺激素)，血管加壓素、DALDA、DMT-DALDA、胰島素等)的濃度可以保持相對較低。具體的制劑實施例如下文所提供的實施例所述?；颊叩闹委煯?dāng)選擇鮭魚降*丐素作為治療骨質(zhì)疏松的活性成分時，推薦定期給藥。鮭魚降鈣素代謝迅速，通過皮下給藥的方式，其在男性體內(nèi)的半衰期僅為20-40分鐘。盡管鮭魚降鈣素在血液中的濃度降低很快，然而它對破骨細胞的有益作用可以持續(xù)更長，并可以持續(xù)超過24小時。以常規(guī)的劑量注射鮭魚降鈣素2小時后，通常在血液中不能檢測到。因此，優(yōu)選每周定期給藥一個劑量約5天。皮下給藥鮭魚降鈣素(IOO國際單位)通常產(chǎn)生約250皮克每毫升的峰值血清濃度。通過鼻給藥鮭魚降鈣素(200國際單位)證明對骨質(zhì)疏松有效，其峰值濃度僅為IO皮克每毫升。一些患者報告在很高的峰值濃度(例如，在200皮克每毫升或者高于該值)時腸胃有些不適。因此，優(yōu)選血清中鮭魚降鈣素的峰值濃度為10-150皮克每毫升，更優(yōu)選為10-50皮克每毫升。血清濃度可以通過本領(lǐng)域公知的放射免疫測定技術(shù)測定。主治醫(yī)師可以監(jiān)控患者的反應(yīng)、鮭魚降鈣素的血清濃度或者骨疾病的替代品標(biāo)志(例如尿的吡啶啉或者脫氧吡啶啉)，尤其在治療的最初階段(1-6個月)。然后主治醫(yī)師可以考慮個體患者的代謝和反應(yīng)一定程度地改變劑量。本發(fā)明所能獲得的生物藥效率允許以上述確定的優(yōu)選濃度水平通過口服將鮭魚降鈣素輸送至血液中，并且每個膠囊僅使用300-3000毫克鮭魚降鈣素，優(yōu)選為300-1200毫克，尤其為300-600毫克。優(yōu)選每次給藥使用一個藥片或者一個膠囊，因為單劑量的產(chǎn)品可以最好地提供多肽、pH降低試劑和吸收促進劑的同時釋放。這是非常需要的，因為當(dāng)酸與多肽以相近的時間釋放時，能最好地降低對多肽的不需要的蛋白水解的侵襲。而以一個藥片或者膠囊的形式給予本發(fā)明的所有成分，能最好地實現(xiàn)幾乎同時釋放。然而，本發(fā)明還包括，例如將所需要量的酸和促進劑在兩個或者更多個藥片或者膠囊中分開，這些藥片或膠囊可以一起給予從而使它們一起提供所有成分的必需用量。本文中使用的術(shù)語"藥物組合物"包括適于特定給予人患者的完整的劑量，只要實質(zhì)上是同時給藥即可，而不考慮它如何細分。下面列出了變化的某些參數(shù)產(chǎn)生對生物藥效率的影響的一系列片劑。除了此處報告的針對人的研究，考慮到人與動物模型中使用的動物之間的區(qū)別，成分的用量可以與本文要求保護的那些不同。表l在大鼠的十二指腸中緩沖液pH對鮭魚降鈣素吸收的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>"爰沖液pH方法在頸動脈中插入插管前，用氯胺酮(ketamine)和甲苯噻嗪(xylazine)麻醉雌性威斯塔大鼠(Wistarrat)(250-270g)(n=3，對于每一制劑)。在插管上安裝一個三通閥門，通過該閥門取血樣并替換入生理鹽水。在腹腔中切開中線切口，并將0.5ml的制劑直接注射入暴露的十二指腸中。通過混合變化量的等摩爾濃度的檸檬酸和檸檬酸鈉調(diào)節(jié)制劑的pH。在給予制劑前以及給予制劑5、15、30、60和120分鐘后收集血樣(0.5ml)。將血樣在2600g下離心10分鐘并將得到的血漿上清液在-2(TC下儲存。用競爭性放射免疫測定檢測血漿中降鈣素的濃度。絕對生物藥效率由降鈣素的血槳濃度對時間的函數(shù)的圖所得到的曲線下的面積來計算。結(jié)果與討論當(dāng)緩沖液的pH從5(制劑I)降到4(制劑11)，絕對生物藥效率從0.02%至0.1%增力卩5倍。當(dāng)pH降至3時，絕對生物藥效率又增加了6.4倍。當(dāng)pH降至2時，降鈣素的絕對生物藥效率幾乎沒有增加。當(dāng)緩沖液的pH從5降到3時，降鈣素的總生物藥效率增加32倍。表2在大鼠十二指腸中檸檬酸的濃度對鮭魚降鈣素生物藥效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>方法如圖例至表1所述，將由恒定量的?；撬崦撗跄懰岷蛢煞N不同量的檸檬酸組成的總體積為0.5ml的制劑給藥至麻醉大鼠的十二指腸中。制劑中含有的甘露糖醇是檢測旁細胞運輸?shù)臉?biāo)記。在不同的時間取血樣并按照前述的方法分析降鈣素。結(jié)果與討論當(dāng)存在9.6mg的檸檬酸(I)時給予的鮭魚降鈣素的生物藥效率為0.25%，而當(dāng)存在48mg的檸檬酸(II)時，該生物藥效率為2.43%。當(dāng)存在固定量的牛磺酸脫氧膽酸時，鮭魚降鈣素的生物藥效率增加接近10倍，而這時制劑中檸檬酸的量僅僅增加5倍。表3在大鼠十二指腸中檸檬酸存在下促進劑對鮭魚降鈣素吸收的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>方法如圖例至表l所述，將由檸檬酸、降鈣素和不同種的促進劑組成的總體積為0.5ml的制劑給藥至麻醉大鼠的十二指腸中。制劑V中含有的甘露糖醇作為檢測旁細胞運輸?shù)臉?biāo)記。在不同的時間取血樣并按照前述的方法分析降鈣素。結(jié)果與討論當(dāng)不存在促進劑時，降鈣素的絕對生物藥效率為0.69%。當(dāng)制劑中含有水溶性磷脂(制劑VII)時，生物藥效率增加4.3倍為2.97%。最有效的促進劑為蔗糖酯類(制劑V)，其中降鈣素的生物藥效率為5.83%。使用膽汁酸和陽離子洗滌劑(制劑III)、非離子洗滌劑(制劑IV)和酰基肉堿(制劑VI)產(chǎn)生3.03-4.53%的中等的生物藥效率。與制劑中只含有檸檬酸并且不含促進劑所觀察到的相比，存在各種促進劑的制劑中降鈣素的生物藥效率的差別很小。表4在大鼠的十二指腸中在各種添加劑存在下月桂酰肉堿對鮭魚降鈣素吸收的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>方法如圖例至表l所述，將由月桂酰肉堿、降鈣素和各種其它化合物組成的總體積為0.5ml的制劑給藥至麻醉大鼠的十二指腸中。在不同的時間取血樣并按照前述的方法分析降鈣素。結(jié)果與討論當(dāng)不存在檸檬酸或者任何促進劑時(制劑I)，降鈣素的絕對生物藥效率為0.096%。當(dāng)存在5mg的氯化月桂酰肉堿(制劑II)時，生物藥效率增加1.8倍達到0.17。％。當(dāng)含有檸檬酸和月桂酰肉堿(制劑m)時，降鈣素的生物藥效率再增加27倍達到4.53%。當(dāng)月桂酰肉堿的用量減少5倍而檸檬酸的用量保持不變時(制劑IV)，鮭魚降鈣素的生物藥效率沒有明顯降低。當(dāng)在制劑III中加入二庚酰磷脂酰膽堿產(chǎn)生制劑V時生物藥效率稍有增加(1.4倍)。用25mg的牛血清白蛋白代替檸檬酸(制劑VI)時生物藥效率從4.53%(制劑III)降低到0.42%。這些結(jié)果一起顯示了如擰檬酸的pH降低物質(zhì)與如月桂酰肉堿的促進劑的協(xié)同作用。與只含有檸檬酸并不含促進劑的制劑相比，存在不同種促進劑的制劑中降鈣素的生物藥效率的區(qū)別較小。將這些結(jié)果結(jié)合起來可以表示出在如檸檬酸的pH降低試劑和如月桂酰肉毒堿的促進劑之間存在協(xié)同作用。表5在狗的十二指腸中制劑對鮭魚降鈣素吸收的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>方法將改良的埋入式介入藥盒(vascularaccessport)用外科手術(shù)移植入雄性比格犬的十二指腸、回腸和結(jié)腸中。所述藥盒的隔膜(septum)/儲血體(reservoirbody)移植在皮膚下并用作降鈣素制劑的給藥部位。在給予清醒的狗降鈣素制劑之前和之后，用2ml的不含降鈣素的制劑沖洗所述藥盒。在給予降鈣素前1=30、15和0分鐘以及給予降鈣素后的5、10、20、30、40、50和60分鐘并在其后每隔15分鐘直到給予降鈣素后2小時，通過在腿靜脈中的血管導(dǎo)管(angiocathetertube)收集血液(2ml)。在2600g下離心血樣10分鐘并將獲得的血漿上清液在-20'C下儲存。用競爭性放射免疫測定檢測血漿中降鈣素的濃度。絕對生物藥效率(即相對于降鈣素的靜脈內(nèi)劑量)由血漿濃度對時間的函數(shù)的圖所得到的曲線下的面積來計算。結(jié)果與討論當(dāng)給予存在于水中的降鈣素(制劑I)時，其絕對生物藥效率為0.015%.當(dāng)存在192mg的檸檬酸(制劑II)時，降鈣素的生物藥效率增加25倍。當(dāng)制劑中含有?；撬崦撗跄懰?制劑III)時，生物藥效率再增加2.2倍達到0.81%。組合使用pH降低化合物、檸檬酸、促進劑和?；撬崦撗跄懰崾辊q魚降鈣素的絕對生物藥效率總增加54倍。表6檸檬酸和月桂酰肉堿對大鼠中血管加壓素、降鈣素和胰島素的生物藥效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>方法如圖例至表l所述，將由[Arg(精氨酸)8]-血管加壓素、重組的鮭魚降鈣素或者人胰島素和指出的添加劑組成的總體積為0.5ml的制劑給藥至麻醉大鼠的十二指腸中。在不同的時間取血樣并按照前述的方法分析指出的肽。結(jié)果與討論當(dāng)不存在任何添加劑時，通過十二指腸內(nèi)給予[argS]-血管加壓素時的絕對生物藥效率為0.38%;當(dāng)在制劑中加入檸檬酸和月桂酰肉堿時，血管加壓素的絕對生物藥效率增加到8.1%。當(dāng)不存在酸和促進劑時，降鈣素的生物藥效率為0.096%，這比非制劑型血管加壓素的生物藥效率低。然而當(dāng)在制劑中含有檸檬酸和月桂酰肉堿時，絕對生物藥效率增加50倍達到4.53%。當(dāng)不存在檸檬酸時，人胰島素甚至不能溶解在水中。當(dāng)含有檸檬酸時，所有的肽都很容易溶解，且通過十二指腸內(nèi)給予人胰島素的絕對生物藥效率為0.07%。當(dāng)在制劑中含有月桂酰肉堿時，胰島素的絕對生物藥效率增加10倍。這些結(jié)果表明非制劑型肽的生物藥效率最高為0.38%，而當(dāng)含有如檸檬酸的有機酸和如月桂酰肉堿的促進劑時，肽的生物藥效率增加到高達8.1%。表7在狗中腸溶衣對膠囊中sCT(鮭魚降鈣素)的吸收的影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>*sCT最大血漿濃度校正到lmg劑量。**當(dāng)檢測到sCT最大血漿濃度的時間。各將號碼為00的HPMC(羥丙基甲基纖維素)膠囊填滿由檸檬酸、月桂酰肉堿和鮭魚降鈣素(sCT)組成的粉末狀摻合物。一半的這種膠囊用腸溶衣溶液EUDRAGITL30D-55(甲基丙烯酸與甲基丙烯酸甲酯的共聚物，腸溶衣可以從ROHMTechlnc.，Maidan,Mass.獲得)涂敷，剩下的膠囊不涂敷腸溶衣。涂敷方法按照USP6086918第11欄第50行到第12欄第11行所教導(dǎo)的進行。含有腸溶衣的膠囊和不含腸溶衣的膠囊中內(nèi)含物的平均量列在表中。8只禁食的狗每只口服一個無涂層的膠囊并在2周后它們分別口服一個有腸溶衣的膠囊。在給予每個膠囊后，每隔15分鐘從留置導(dǎo)管中取血樣，一直持續(xù)4小時。離心血樣將獲得的血漿上清液在-2(TC下冷凍儲存。隨后用直接酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)分析血漿樣品中的sCT。當(dāng)sCT最大血漿濃度標(biāo)準(zhǔn)化到lmg劑量時，概括在表中的結(jié)果表示在口服有腸溶衣的膠囊和沒有腸溶衣的膠囊的狗中檢測SCT。在給予有腸溶衣的膠囊的狗的血漿中檢測到的sCT的量幾乎是給予沒有腸溶衣的膠囊的3倍。在口服沒有腸溶衣的膠囊的狗中，sCT的最大濃度在給藥后30分鐘內(nèi)出現(xiàn)。在口服有腸溶衣的膠囊的狗中，sCT的最大濃度在給藥后98分鐘出現(xiàn)。這些結(jié)果表明治療有效量的sCT可以從沒有腸溶衣的膠囊中且在非常快速的時間范圍內(nèi)吸收，而在血液中檢測的sCT的量少于從有腸溶衣膠囊中所見到的sCT的量。增加的速度是有益的，尤其在速度比總的生物藥效率更重要的肽的情況(例如去痛劑(painreliever))。當(dāng)不需要腸溶涂覆步驟時在生產(chǎn)效率上也可以是有利的。表8在狗中制劑對沒有腸溶衣的膠囊中的sCT吸收的影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>*sCT最大血漿濃度校正到lmg劑量。**當(dāng)檢測到sCT最大血漿濃度的時間。***501僅在8只狗中的1只中檢測到。各將號碼為00的HPMC(羥丙基甲基纖維素)膠囊填滿由指示的量的檸檬酸、月桂酰肉堿、蔗糖和鮭魚降鈣素(sCT)組成的粉末狀摻合物。膠囊的平均膠囊內(nèi)含物含量列在表中。每周8只禁食的狗每只口服一個無涂層的膠囊。在給予膠囊后，每隔15分鐘從留置導(dǎo)管中取血樣，一直持續(xù)4小時。離心血樣將獲得的血漿上清液在-2(TC下冷凍儲存。隨后用直接ELISA分析血漿樣品中的sCT。當(dāng)sCT最大血漿濃度標(biāo)準(zhǔn)化到lmg劑量時，概括在表中的結(jié)果表示在口服沒有腸溶衣的含有檸檬酸的膠囊的狗中檢測到sCT的最高濃度。在不含有檸檬酸而含有月桂酰肉堿的情況下，在狗的血漿中sCT的最大濃度減少了80%。在不含有檸檬酸和月桂酰肉堿的情況下，在狗中sCT的最大濃度減少了99%。這些結(jié)果表明酸和吸收促進劑都是很重要的。表9在狗中來自無腸溶衣膠囊的非-sCT肽的吸收<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>*sCT最大血漿濃度校正到lmg劑量。**當(dāng)檢測到sCT最大血漿濃度的時間。各將號碼為00的HPMC膠囊填滿由至少500mg的檸檬酸、50mg的月桂酰肉堿和1種所述的肽所組成的粉末狀摻合物。每周8只禁食的狗每只口服一個無涂層的膠囊。在給予膠囊后，每隔15分鐘從留置導(dǎo)管中取血樣，一直持續(xù)4小時。離心血樣將獲得的血漿上清液在-2(TC下冷凍儲存。隨后分別分析血漿樣品中的Dmt-DALDA、PTH(1-31)NH2或者胰島素。概括在表中的結(jié)果表明以允許治療使用的足夠的濃度時在狗的血漿中可以檢測到所有3種肽。然而，檢測到的肽的最大濃度看來依賴于尺寸、序列和/或結(jié)構(gòu)。盡管本發(fā)明描述了與之有關(guān)的具體的實施方式，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，許多其它的變化和改變以及其它的用途是顯而易見的。因此，本發(fā)明不限于本文中具體公開的內(nèi)容，而僅受限于權(quán)利要求書。權(quán)利要求1、一種適于經(jīng)口給予生理活性肽試劑的藥物成品，所述藥物成品含有(a)治療有效量的所述活性肽試劑；(b)至少一種藥學(xué)上可接受的pH降低試劑；和(c)至少一種有效提高所述活性試劑的生物藥效率的吸收促進劑；其中，如果將所述藥物成品加入到10毫升0.1M的碳酸氫鈉水溶液中，所述pH降低試劑在所述藥物成品中以足以使所述溶液的pH降低到不高于5.5的量存在，并且其中，所述藥物成品的外表面基本上沒有耐酸的保護性載體。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，其中，如果將所藥物述成品加入到10毫升0.1M的碳酸氫鈉水溶液中，所述pH降低試劑在所述藥物成品中以足以使所述溶液的pH降低到不高于3.5的量存在。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，其中，所述吸收促進劑為可吸收的表面活性劑或者可生物降解的表面活性劑。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物成品，其中，所述表面活性劑選自由?；鈮A、磷脂、膽汁酸和蔗糖酯所組成的組中。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，其中，所述吸收促進劑為選自由(a)為膽固醇衍生物的陰離子表面活性劑，(b)負電荷中和劑與陰離子表面活性劑的混合物，(c)非離子表面活性劑，和(d)陽離子表面活性劑所組成的組中的表面活性劑。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，該藥物成品還含有一定量的不是生理活性肽的另一種肽，以有效提高所述肽活性試劑的生物藥效率。7、根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物成品，其中，至少一種所述pH降低試劑在室溫下在水中的溶解度為至少30克每100毫升水。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，其中，所述成品包括含有藥物粘合劑的顆粒，并且在所述粘合劑中均勻分散有所述pH降低試劑、所述吸收促進劑和所述肽活性試劑。9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，其中，所述成品包括具有第一層和第二層的層壓結(jié)構(gòu)，所述第一層含有至少一種藥學(xué)上可接受的pH降低試劑，所述第二層含有治療有效量的所述活性肽；所述成品還含有至少一種所述吸收促進劑以有效提高所述活性試劑的生物藥效率，其中，所述第一層與第二層相互結(jié)合，但是至少一種所述pH降低試劑與所述肽在所述層壓結(jié)構(gòu)中基本上分開，使得少于約0.1。X的所述肽與所述pH降低試劑接觸以防止所述第一層的材料與所述第二層的材料之間實質(zhì)的混合，從而避免在所述層壓結(jié)構(gòu)中所述pH降低試劑與所述肽之間的相互作用。10、根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物成品，其中，所述pH降低試劑選自由檸檬酸、酒石酸和氨基酸的酸式鹽所組成的組中。11、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物成品，其中，所述pH降低試劑選自由二羧酸和三羧酸所組成的組中。12、根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物成品，其中，所述pH降低試劑以不少于300毫克的量存在。13、根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物成品，其中，所述肽試劑選自由降鈣素和甲狀旁腺激素所組成的組中。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物成品，其中，所述甲狀旁腺激素選自由全長的甲狀旁腺激素和酰胺化的甲狀旁腺激素所組成的組中。15、根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物成品，其中，所述甲狀旁腺激素以它的游離酸形式存在，或者作為酰胺化的衍生物存在。16、根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物成品，其中，所述甲狀旁腺激素為PTH[1-31]NH2。17、根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物成品，其中，所述肽試劑選自由血管加壓素、胰島素和DALDA衍生物所組成的組中。18、根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物成品，其中，所述肽試劑為固T-DALDA。19、一種提高經(jīng)口給予的治療肽活性試劑的生物藥效率的方法，該方法在需要這種提高的受治療者中使用，所述方法包括將所述肽活性試劑與至少一種pH降低試劑和至少一種吸收促進劑一起從適于給予所述肽活性試劑的藥物成品中選擇性地釋放到受治療者的消化道中，其中，所述藥物成品的外表面基本上沒有耐酸的保護性載體；其中，如果將所述藥物成品加入到10毫升0.1M的碳酸氫鈉水溶液中，所述藥物成品以足以使所述溶液的pH降低到不高于5.5的量被釋放到消化道中。20、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述治療肽活性試劑、所述至少一種pH降低試劑和所述至少一種吸收促進劑從所述藥物成品中釋放的速度比從含有耐酸的保護性載體的相應(yīng)藥物組合物中釋放的速度更快。21、根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，在患者體內(nèi)所述肽活性試劑在60分鐘以內(nèi)達到最大血漿濃度。22、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，如果將所有成分都加入到10毫升0.1M的碳酸氫鈉水溶液中，所述pH降低試劑以足以使所述溶液的pH降低到不高于3.5的量存在。23、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述吸收促進劑選自由陽離子表面活性劑和為膽固醇衍生物的陰離子表面活性劑所組成的組中。24、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述pH降低試劑的pKa不高于4.2，并且在室溫下它在水中的溶解度為至少30克每100毫升水。25、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述pH降低試劑以不少于300毫克的量存在。26、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述肽試劑選自由降鈣素、甲狀旁腺激素和DALDA衍生物所組成的組中。全文摘要一種適于經(jīng)口給予生理活性肽試劑的藥物成品，其中，該藥物成品含有治療有效量的所述活性肽試劑；至少一種藥學(xué)上可接受的pH降低試劑；和至少一種有效提高所述活性試劑的生物藥效率的吸收促進劑；其中，如果將所述藥物成品加入到10毫升0.1M的碳酸氫鈉水溶液中，所述pH降低試劑以足以使所述溶液的pH降低到不高于5.5的量存在于所述藥物成品中，并且其中，所述藥物成品的外表面基本上沒有耐酸的保護性載體。所述藥物成品適合用于提高經(jīng)口給予的治療肽活性試劑的生物藥效率的方法中。文檔編號A61K9/48GK101394841SQ200680046022公開日2009年3月25日申請日期2006年12月8日優(yōu)先權(quán)日2005年12月9日發(fā)明者W·斯特恩申請人:尤尼金實驗室公司