專利名稱：Pth制劑和使用方法
專利說明PTH制劑和使用方法
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥可以被定義為全身性骨骼疾病，具有低骨量、骨組織微觀結(jié)構(gòu)退化以及增加的骨脆性和易于骨折的特征。它最常影響老年人群，主要為絕經(jīng)后的婦女。
骨質(zhì)疏松癥的患病引起了嚴(yán)重的健康問題。據(jù)國際骨質(zhì)疏松癥基金會(huì)估計(jì)，有44,000,000人正受到骨質(zhì)疏松或骨量減少的影響。至2010年，骨質(zhì)疏松癥將影響超過52,000,000人，至2020年，超過61,000,000人。白種人和亞洲人中骨質(zhì)疏松癥的患病率比非裔美國人高，可能由于非裔美國人具有更高的峰值骨量。因?yàn)槟行跃哂懈叩姆骞敲芏?，所以婦女受影響的人數(shù)比男性多。另外，婦女隨著年齡增長骨轉(zhuǎn)換率增高，由于絕經(jīng)后雌激素的缺乏而導(dǎo)致加速的骨丟失。
骨質(zhì)疏松癥藥理治療的目的是保持或增加骨強(qiáng)度，以防止在患者整個(gè)生命過程中的骨折并且通過安全地降低骨折風(fēng)險(xiǎn)使骨質(zhì)疏松癥相關(guān)的發(fā)病率和死亡率最小化。最常用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物包括鈣和維生素D、雌激素(有或沒有黃體酮)、二磷酸酐類(bisphonate)、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)以及降鈣素。
最近，甲狀旁腺激素(PTH)已經(jīng)作為流行的骨質(zhì)疏松癥治療物出現(xiàn)。不像其它減少骨吸收的治療，PTH增加骨量，這引起更高的骨礦物質(zhì)密度(BMD)。PTH對(duì)骨骼有多種作用，一些是直接的和一些是間接的。PTH增加鈣從骨骼釋放到血液的速率。PTH的慢性作用為增加骨細(xì)胞—成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞兩者的數(shù)量，并且增加重建骨。這些效果在PTH施藥后數(shù)小時(shí)內(nèi)是明顯的并且在PTH停藥后持續(xù)數(shù)小時(shí)。給骨質(zhì)疏松癥患者施予PTH導(dǎo)致骨骼形成的凈刺激(net stimulation)，尤其在脊柱和臀部的骨小梁內(nèi)引起非常顯著的骨折減少。認(rèn)為由于成骨細(xì)胞具有PTH受體，因而骨骼形成是通過利用PTH的成骨細(xì)胞的刺激而發(fā)生的。
甲狀旁腺激素(PTH)是分泌的、具有84個(gè)氨基酸殘基的多肽，其氨基酸序列為Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser GlnArg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu Lys Ser LeuGly Glu Ala Asp Lys Ala Asn Val Asp Val Leu Thr Lys Ala Lys Ser Gln(SEQID NO1)。人類體內(nèi)利用某些形式PTH的研究已經(jīng)證明對(duì)骨骼的合成作用，并且引起對(duì)其用于骨質(zhì)疏松癥和相關(guān)骨骼疾患治療的用途的顯著關(guān)注。
例如，利用根據(jù)所有發(fā)表的報(bào)告認(rèn)為在生物學(xué)上等價(jià)于全長激素的、牛和人類激素N-末端的34個(gè)氨基酸Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe(SEQ ID NO2)，已經(jīng)表明在人體內(nèi)尤其當(dāng)通過皮下途徑以脈沖的方式施予時(shí)甲狀旁腺激素促進(jìn)骨骼生長。PTH的細(xì)微差別形式、人類PTH(1-38)已經(jīng)顯示相似的結(jié)果。
PTH(1-34)，也被稱為特立帕肽，當(dāng)前在市場上的商品名為FORTEO

、Eli Lilly、Indianapolis、Indiana，其用于絕經(jīng)后患有骨質(zhì)疏松癥的骨折高危婦女的治療。這種藥通過一天一次皮下注射含醋酸鹽緩沖劑、甘露醇和間甲酚的pH為4的20μg水溶液被施予。然而，許多人反對(duì)注射，這樣就變得與所述PTH的處方給藥不相依從。因此，需要開發(fā)甲狀旁腺激素肽的鼻內(nèi)制劑，其具有合適的生物利用度這樣可以在血液中達(dá)到治療水平以有效治療骨質(zhì)疏松癥或骨量減少癥。利用大腸桿菌(Escherichia coli)菌株通過DNA重組技術(shù)生產(chǎn)FORTEO

(Eli Lilly，U.S.)或FORSTEO(Eli Lilly，UK)。PTH(1-34)分子量為4117.87道爾頓。發(fā)表了關(guān)于PTH(1-34)以及其臨床用途的評(píng)論，包括例如Brixen等，2004；Dobnig，2004；Eriksen和Robins，2004；Quattrocchi和Kourlas 2004，由此通過引用并入。FORTEO

目前在美國和歐洲被批準(zhǔn)(即FORSTEO)。在短期試驗(yàn)中在2800名以上的患者體內(nèi)以每天5到100μg的劑量范圍對(duì)特立帕肽的安全性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。在長期試驗(yàn)中每天施藥達(dá)40μg的劑量直至2年。FORSTEO相關(guān)的不良事件通常為輕微的并且通常不需要治療的中斷。最常報(bào)道的不良反應(yīng)為頭暈、腿痛性痙攣、惡心、嘔吐和頭痛。已經(jīng)有報(bào)道關(guān)于FORSTEO的輕度的暫時(shí)血鈣過多，其通常自我限定在6小時(shí)以內(nèi)。
目前以每天皮下注射施予FORTEO

。以下闡述針對(duì)各種劑量的FORTEO的Cmax和AUC值(20ug為商業(yè)許可劑量)。

如果可以非注射途徑施藥，包括鼻、口腔、胃腸和皮膚，對(duì)患者的可接受性較好。先前在一項(xiàng)研究中已經(jīng)給人類鼻內(nèi)施予每天達(dá)500μg劑量的特立帕肽7天(Suntory新聞發(fā)布)。Suntory實(shí)施了大規(guī)模的重組人PTH1-34生產(chǎn)并且1999年二月使用鼻制劑從1期臨床試驗(yàn)獲得了希望的結(jié)果。http://www.suntory.com/news/1999-02.html accessed 15 April 2004)和另一項(xiàng)研究中受治療者每天接受達(dá)1,000μg持續(xù)3個(gè)月(Matsumoto等，Daily NasalSpray of hPTH1-34 for 3 Months Increases Bone Mass in Osteoporotic Subjects(在骨質(zhì)疏松受治療者體內(nèi)每天鼻噴霧hPTH1-34持續(xù)3個(gè)月增加骨量)(ASBMR 2004 1171頁介紹，2004年10月4日，Seattle WA)，注意到這種途徑?jīng)]有安全方面的擔(dān)憂。
多數(shù)PTH制劑是根據(jù)新鮮的或低壓凍干的激素重新溶解(reconstituted)配成的，并且引入各種載體、賦形劑和媒介物。PTH制劑多在基于水的媒介物中制備，如鹽水或通常用醋酸酸化以增溶激素的水。許多報(bào)道的制劑也引入白蛋白作為穩(wěn)定劑(參見，如Reeve等人，Br.Med.J.，1980，2806228；Reeve等人，Lancet，1976，11035；Reeve等人，Calcif.Tissue Res.，1976，21469；Hodsman等人，Bone Miner 1990，9(2)137；Tsai等人，J.Clin.Endocrinol Metab.，1989，69(5)1024；Isaac等人，Horm.Metab.Res.，1980，12(9)487；Law等人，J.Clin Invest.，1983，72(3)1106；以及Hulter，J.Clin Hypertens，1986，2(4)360)。其它報(bào)道的制劑在低壓凍干的激素或重新溶解配成的媒介物中引入賦形劑如甘露醇。用于人類研究的一些制劑包括人類PTH(1-34)制劑，其由甘露醇、熱滅活的人血清白蛋白和作為吸收促進(jìn)劑的己酸(一種蛋白酶抑制劑)組成(參見Reeve等人，1976，Calcif.Tissue Res.，21，副刊469-477)；重新溶解到鹽水媒介物的人PTH(1-38)制品(參見Hodsman等人，1991，14(1)，67-83)；以及在含白蛋白的pH用醋酸調(diào)節(jié)的含水媒介物中的牛PTH(1-34)制品。人PTH(1-84)的國際參考制品由100ng激素與同一安瓿中的250μg人血清白蛋白和1.25mg乳糖(1981)組成，牛PTH(1-84)的國際參考制品由0.01M醋酸中10μg低壓凍干的激素和0.1％w/v的甘露醇組成(參見Martindale，The Extra Pharmacoepia，The PharmaceuticalPress，倫敦，第29版，1989，1338頁)。在EP 619 119中報(bào)道了一種致力于提高h(yuǎn)-PTH(1-34)的低壓凍干制品穩(wěn)定性的制劑，其利用了糖和氯化鈉的組合。5,496,801號(hào)美國專利闡述了天然激素PTH(1-84)的冷凍干燥組合物，其包括作為賦形劑的甘露醇和作為非揮發(fā)性緩沖劑的檸檬酸源。
6,770,623號(hào)美國專利闡述穩(wěn)定化的特立帕肽制劑。該′623制劑需要緩沖劑。該緩沖劑包括任何酸或鹽組合，其為藥學(xué)上可接受的且能夠維持含水溶液在3至7，優(yōu)選3-6的pH范圍，例如醋酸鹽、酒石酸鹽或檸檬酸鹽源。緩沖劑的濃度可以在約2mM至約500mM的范圍內(nèi)。
5,407,911號(hào)美國專利闡述了甘草酸二鉀作為乳化劑用于PTH鼻施藥的用途。當(dāng)用于鼻內(nèi)PTH制劑時(shí)認(rèn)定聚山梨酯80為劣等的，因?yàn)樗谥苿┲幸鸪恋砗筒环€(wěn)定。
甲狀旁腺激素的商業(yè)開發(fā)需要研制一種制劑，其在保存穩(wěn)定性和易于制備的方面是可接受的。因?yàn)榧谞钆韵偌に厥且环N蛋白并且比傳統(tǒng)小分子量藥物要不穩(wěn)定得多，所以甲狀旁腺激素制劑呈現(xiàn)出制藥業(yè)不常面臨的挑戰(zhàn)。此外，如其它已經(jīng)成功配制的蛋白一樣，PTH對(duì)氧化、脫酰胺作用和水解作用格外敏感，并且為了保持生物活性需要其N-末端和C-末端序列保持完整。
配制蛋白通常比配制小分子困難，因?yàn)榈鞍赘捉到?參見Arakawa等人，(2001)Adv.Drug Del.Rev.46307-26，由此將其整個(gè)通過引用并入)。因此，純化蛋白的穩(wěn)定性是難以在此之前預(yù)測的，且一般而言必須根據(jù)各個(gè)情況評(píng)價(jià)。FORTEO

為特立帕肽的液體藥物制劑，其穩(wěn)定需要緩沖劑。需要一種不需要緩沖劑的，且適合鼻內(nèi)施藥的儲(chǔ)存穩(wěn)定的特立帕肽制劑。
PTH或其類似物鼻內(nèi)遞送的一個(gè)潛在問題是對(duì)鼻組織的局部作用。例如，Tanako和合伙者已經(jīng)闡述了PTH局部施予對(duì)培養(yǎng)的鼻軟骨細(xì)胞的效果(參見Takano T等人，J Dent Res.，1987年1月，66(1)84-7；TakigawaM等人，J Dent Res.，1984年1月，63(1)19-22；Takano T等人，NipponKyosei Shika Gakkai Zasshi，1983年9月，42(3)314-21)。
因此，需要開發(fā)安全且有效的PTH或PTH類似物的鼻內(nèi)制劑，其將適合系統(tǒng)遞送，但不會(huì)引起鼻組織顯著的局部作用(即不會(huì)對(duì)鼻產(chǎn)生毒性影響)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)方面為用于PTH鼻內(nèi)遞送的含水藥物制劑，其包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑為聚山梨酯80。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨酯80在制劑中存在少于約50mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨酯80在制劑中存在少于約10mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨酯80在制劑中存在少于約1mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多元醇選自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖(gentibiose)、丙三醇和聚乙二醇組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多元醇為山梨醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，防腐劑選自由氯代丁醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲酸鈉、山梨酸、苯酚和鄰甲酚、間甲酚或?qū)追咏M成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑具有約3至約6的pH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑具有約5.0或更低的pH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑具有約4.0或更低的pH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，含水溶液為液滴的形式。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液滴具有約1微米到1000微米的平均體積中位顆粒尺寸(Dv，50)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液滴具有約5微米到500微米的平均體積中位顆粒尺寸(Dv，50)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液滴具有約10微米到100微米的平均體積中位顆粒尺寸(Dv，50)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)人受治療者施藥獲取PTH在給藥后的至少10pg/mL的最大血清濃度(Cmax)。
本發(fā)明的另一個(gè)方面為用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括給哺乳動(dòng)物鼻內(nèi)施予有效治療量的PTH制劑，其中所述的制劑包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑具有約3-6的pH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，含約1μg至約1000μg的PTH(1-34)的劑量被施予哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，含約20μg至約400μg的PTH(1-34)的劑量被施予哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物為人類。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH制劑的施藥引起鈣血漿水平的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鈣血漿水平的增加與PTH的合成作用相關(guān)聯(lián)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH制劑的施藥引起骨量增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH制劑的施藥引起骨強(qiáng)度增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH制劑的施藥引起骨折抗力的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH制劑的施藥不會(huì)產(chǎn)生鼻組織的組織學(xué)改變。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括給哺乳動(dòng)物鼻內(nèi)施予有效治療量的PTH制劑，其中所述的PTH制劑包含PTH(1-34)以及一種或多種從由增溶劑、螯合劑和一種或多種多元醇組成的組中選擇的賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑進(jìn)一步包含表面活性劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、膽汁鹽類、甘膽酸鈉、脫氧膽酸鹽、梭鏈孢酸衍生物、牛磺二氫梭鏈孢酸鈉、二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(L-α-phosphatidylcholine didecanoyl，DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脫水山梨糖醇單油酸酯組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑為DDPC。在另一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種多元醇選自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、丙三醇和聚乙二醇組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多元醇為山梨醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，螯合劑為EDTA。在另一個(gè)實(shí)施方案中，增溶劑選自由環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，增溶劑為環(huán)糊精。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括給哺乳動(dòng)物鼻內(nèi)施予有效治療量的PTH制劑，其中所述的PTH制劑包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑，并且其中所述制劑施藥于哺乳動(dòng)物后達(dá)到PTH(1-34)的最大血漿濃度的時(shí)間Tmax少于30分鐘。在一個(gè)實(shí)施方案中，Cmax大于約300pg/ml起因于所述制劑的單次施藥。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是PTH的劑型，其包含PTH和非離子去污劑的含水藥物制劑，用于霧化的具有約5％或更多的生物利用度的PTH的鼻內(nèi)遞送，其中所述制劑包含有效治療量的PTH(1-34)和聚山梨酯，并且其中在5℃下儲(chǔ)存24周后有至少90％的所述PTH可以被回收。在一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在5℃下儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約90％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在5℃下儲(chǔ)存1年后具有大于約90％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在5℃下儲(chǔ)存2年后具有大于約90％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在25℃下儲(chǔ)存24周后具有大于約80％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在25℃下儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約80％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在25℃下儲(chǔ)存1年后具有大于約80％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在25℃下儲(chǔ)存2年后具有大于約80％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在40℃下儲(chǔ)存至少4周后具有大于約65％的所述PTH可以被回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在大于約5天的使用后具有大于約90％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH劑型在所有噴霧劑處于30℃/65％的相對(duì)濕度下具有大于約90％的所述PTH的回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH為約5.0或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH為約4.5或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH為約4.0或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH為約3.5或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約1mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約2mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約6mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約10mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約2μg到約1000μg的所述PTH的劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約100μg到約600μg的所述PTH的劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨酯在制劑中存在至少約1mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨酯在制劑中存在至少約10mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨酯在制劑中存在至少約50mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，存在防腐劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，防腐劑為氯代丁醇。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是PTH的劑型，其包含含水藥物制劑，用于霧化的具有約10％或更多的生物利用度的PTH的鼻內(nèi)遞送，其中所述制劑包含有效治療量的PTH(1-34)、甲基-β-環(huán)糊精、二癸酰基磷脂酰膽堿以及乙二胺四乙酸，并且其中在5℃儲(chǔ)存24周后有至少90％的所述PTH可以被回收。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在5℃儲(chǔ)存至少6個(gè)月后有大于約90％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在5℃儲(chǔ)存1年后具有大于約90％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在5℃儲(chǔ)存2年后具有大于約90％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在25℃儲(chǔ)存24周后具有大于約80％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在25℃儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約80％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在25℃儲(chǔ)存1年后具有大于約80％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在25℃儲(chǔ)存2年后具有大于約80％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在40℃儲(chǔ)存至少4周后具有大于約65％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型使用大于約5天后具有大于約90％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH劑型在所有噴霧劑處于30℃/65％的相對(duì)濕度下具有大于約90％的PTH回收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述pH為約5.0或更少。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述pH為約4.5或更少。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述pH為約4.0或更少。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述pH為約3.5或更少。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約1mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約2mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約6mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH的濃度為至少約10mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約2μg到約1000μg的所述PTH的劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約100μg到約600μg的所述PTH的劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，存在防腐劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述防腐劑為氯代丁醇。
本發(fā)明的另一方面為遞送PTH給人類的方法，其包括將粘膜細(xì)胞層暴露于含PTH(1-34)和非離子表面活性劑的PTH溶液。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法使用非腸胃施藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述施藥方法選自由鼻內(nèi)、口腔、腸胃、陰道和經(jīng)皮組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法為鼻內(nèi)施藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鼻內(nèi)施藥包括遞送含尺寸約1微米至約700微米的小滴的氣溶膠。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鼻內(nèi)施藥包括遞送含約0.7μg至約25μg PTH每kg患者體重的氣溶膠。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鼻內(nèi)施藥包括遞送含約50μg至約800μg PTH的氣溶膠。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法為口服遞送。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述口服遞送為控制釋放遞送，其中Tmax距釋放時(shí)間小于約40分鐘。
本發(fā)明的另一個(gè)方面為通過鼻內(nèi)施藥遞送PTH給人類的系統(tǒng)，其包括瓶子中的含PTH(1-34)和非離子表面活性劑的含水PTH溶液，和連接到所述瓶子的且與容器中所述PTH溶液流體相通的小滴產(chǎn)生致動(dòng)器，其中當(dāng)啟動(dòng)(engaged)所述致動(dòng)器時(shí)所述致動(dòng)器通過致動(dòng)器頂端產(chǎn)生所述PTH溶液的噴霧，其中當(dāng)自所述致動(dòng)器頂端3.0cm高度測量時(shí)所述PTH噴霧具有從約1.0至約1.4的噴流型(spray pattern)橢圓率。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約5％的所述小滴尺寸小于10μm。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約1％的所述小滴尺寸小于10μm。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧具有分別為約25mm和約40mm的噴流型長軸和短軸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約90％的所述小滴尺寸為約250μm或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約90％的所述小滴尺寸為約120μm或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約50％的所述小滴尺寸為約75μm或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約50％的所述小滴尺寸為約50μm或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約10％的所述小滴尺寸為約30μm或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約10％的所述小滴尺寸為約20μm或更小。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑用于骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的治療。
本發(fā)明的另一個(gè)方面為，PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑具有約3-6的pH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，含1μg至1000μg的PTH(1-34)的劑量被施予哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，含20μg至400μg的PTH(1-34)的劑量被施予哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物為人類。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH制劑的施藥引起鈣血漿水平的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈣血漿水平的增加與PTH的合成作用相關(guān)聯(lián)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH制劑的施藥引起骨量增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH制劑的施藥引起骨強(qiáng)度的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PTH制劑的施藥引起骨折抗力的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PTH制劑的施藥不會(huì)產(chǎn)生鼻組織的組織學(xué)改變。
本發(fā)明的另一個(gè)方面為PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含有效治療量的PTH(1-34)和一種或多種從由增溶劑、螯合劑和一種或多種多元醇組成的組中選擇的賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑進(jìn)一步包含表面活性劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、膽汁鹽類、甘膽酸鈉、脫氧膽酸鹽、梭鏈孢酸衍生物、?；嵌渌箧滄咚徕c、二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脫水山梨糖醇單油酸酯組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述表面活性劑為DDPC。在另一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種多元醇選自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、丙三醇和乙二醇組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述多元醇為山梨醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述螯合劑為EDTA。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述增溶劑選自由環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述增溶劑為環(huán)糊精。
本發(fā)明的另一個(gè)方面為PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑，并且其中所述制劑施藥于哺乳動(dòng)物后達(dá)到PTH(1-34)的最大血漿濃度的時(shí)間Tmax小于30分鐘。在一個(gè)實(shí)施方案中，Cmax大于300pg/ml起因于所述制劑的單次施藥。



圖11-5各個(gè)時(shí)期的時(shí)間對(duì)應(yīng)的平均血漿濃度(線圖)。
圖2Cmax與平均值的比值，低劑量PTH制劑與FORTEO

相比較。
發(fā)明公開 優(yōu)選激素為甲狀旁腺激素并且哺乳動(dòng)物為人類。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，甲狀旁腺激素肽為PTH(1-34)，又稱為特立帕肽。Tregear的4,086,196號(hào)美國專利闡述了人類PTH類似物并聲明在體外細(xì)胞試驗(yàn)中前27到34個(gè)氨基酸對(duì)腺苷酸環(huán)化酶刺激是最有效的。通過兩個(gè)第二信使系統(tǒng)的激活，PTH操控激活Gs蛋白的腺苷酸環(huán)化酶(AC)和激活Gq蛋白的磷脂酶Cβ。后一個(gè)系統(tǒng)引起對(duì)膜結(jié)合蛋白激酶C(PKC)活性的刺激。已經(jīng)表明PKC的活性需要PTH的第29至32位殘基(Jouishomme等人，(1994)J.Bone Mineral Res.91179-1189)。已經(jīng)確定骨骼生長中的增加(即對(duì)骨質(zhì)疏松癥的治療有用的作用)，與肽序列提高AC活性的能力偶聯(lián)。已經(jīng)表明天然的PTH序列，PTH(1-84)(SEQ ID NO1)，具有所有這些活性。
這里通常使用的術(shù)語“甲狀旁腺激素”或“PTH”或“PTH肽”包含以上闡述的甲狀旁腺激素形式。甲狀旁腺激素可以通過已知的重組或合成方法獲得，如這里通過引用結(jié)合入本專利的4,086,196號(hào)美國專利所闡述的。
因此，本發(fā)明為用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的方法，其包括透粘膜施予含PTH肽的制劑，以便當(dāng)50μg PTH被透粘膜施予哺乳動(dòng)物時(shí)PTH肽在哺乳動(dòng)物血漿中的濃度增加至少5pmol/l血漿，優(yōu)選至少10pmol/l血漿。
增強(qiáng)PTH遞送至或通過鼻粘膜表面的鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑被應(yīng)用。對(duì)于被動(dòng)吸收的藥物，細(xì)胞旁通路和跨細(xì)胞通路對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的相對(duì)作用取決于藥物的pKa、分配平衡常數(shù)、分子半徑和電荷、遞送藥物的腔內(nèi)環(huán)境的pH以及吸收表面的面積。本發(fā)明的鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑可以為pH控制劑。本發(fā)明的藥物制劑的pH是影響通過藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的細(xì)胞旁通路和跨細(xì)胞通路的PTH吸收的因素。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物制劑pH被調(diào)整到約3.0至7.0之間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物制劑pH被調(diào)整到約3.0至6.0之間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物制劑pH被調(diào)整到約4.0至5.0之間。通常，所述pH為4.0±0.3。
如以上指出的，本發(fā)明提供改進(jìn)的方法和組合物，用于PTH肽粘膜遞送給哺乳動(dòng)物受治療者以治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥或骨量減少。根據(jù)本發(fā)明的方法用于治療和預(yù)防的合適的哺乳動(dòng)物受治療者的實(shí)例包括，但不限于人類和非人類的靈長類，家畜類如馬、牛、綿羊和山羊，以及包括狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠和兔在內(nèi)的研究種類和家養(yǎng)種類。
為了提供對(duì)本發(fā)明的更好的理解，提供以下定義 根據(jù)本發(fā)明，PTH肽還包括游離堿，酸加成鹽或金屬鹽如肽的鉀鹽或鈉鹽，以及通過如酰胺化、糖基化、?；?、硫酸化、磷酸化、乙酰化、環(huán)化和其它公知的共價(jià)修飾方法的過程修飾的PTH肽。
鼻噴霧產(chǎn)品的生產(chǎn)過程通常包括用于PTH(1-34)鼻噴霧的稀釋液的制備，所述稀釋液含～85％的水加無PTH的鼻噴霧制劑組分。然后測量所述稀釋液的pH，并且如果有必要時(shí)用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整pH至4.0±0.3。通過將～85％的終目標(biāo)體積的稀釋液非無菌地轉(zhuǎn)移到螺旋蓋瓶中制備PTH(1-34)鼻噴霧。加入適當(dāng)量的PTH(1-34)并混合至完全溶解。測量pH，并且如果有必要時(shí)用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整pH至4.0±0.3。加入足夠量的稀釋液至達(dá)到終目標(biāo)體積。螺旋蓋瓶被裝滿并附上蓋子。以上生產(chǎn)過程的闡述代表一種用于制備最初臨床批次的藥物產(chǎn)品的方法?？梢栽陂_發(fā)過程中改進(jìn)這種方法以優(yōu)化生產(chǎn)過程。
當(dāng)前市場化的PTH需要無菌生產(chǎn)條件以順應(yīng)FDA的規(guī)則。腸胃外施藥，包括用于注射或輸注的PTH，需要無菌(抗菌)生產(chǎn)過程。用于無菌藥物生產(chǎn)的現(xiàn)行藥品生產(chǎn)管理規(guī)范(GMP)包括設(shè)計(jì)和建立特征的標(biāo)準(zhǔn)(21CFR§211.42(2005年4月1日))；試驗(yàn)和批準(zhǔn)或組分排斥、藥品容器以及閉合的標(biāo)準(zhǔn)(§211.84)；微生物污染控制的標(biāo)準(zhǔn)(§211.113)；和其它特殊試驗(yàn)要求(§211.167)。非腸胃外(非無菌)產(chǎn)品，如本發(fā)明的鼻內(nèi)產(chǎn)品，不需要這些特殊的無菌生產(chǎn)條件。可以容易理解，與非無菌產(chǎn)品生產(chǎn)過程的那些要求相比，無菌生產(chǎn)過程的要求實(shí)質(zhì)上更高并且相應(yīng)地費(fèi)用更大。這些費(fèi)用包括用于設(shè)備的更多的資本成本費(fèi)用，以及更昂貴的生產(chǎn)費(fèi)用用于無菌生產(chǎn)的包括另外房間和通風(fēng)的額外設(shè)備；與無菌生產(chǎn)相關(guān)的包括更多人力、更廣的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證、以及管理的支持的額外費(fèi)用。因此，鼻內(nèi)PTH產(chǎn)品的生產(chǎn)費(fèi)用，例如本發(fā)明的生產(chǎn)費(fèi)用，遠(yuǎn)少于腸胃外施予的PTH產(chǎn)品的生產(chǎn)費(fèi)用。本發(fā)明滿足了PTH的非無菌生產(chǎn)過程的需要。
“粘膜遞送增強(qiáng)劑”被定義為化學(xué)試劑和其它賦形劑，當(dāng)它加入到含水PTH制劑時(shí)形成一種引起PTH肽穿過粘膜的轉(zhuǎn)運(yùn)顯著增加的制劑，所述PTH肽穿過粘膜的轉(zhuǎn)運(yùn)通過最大血液、血清或腦脊髓液濃度(Cmax)或者濃度相對(duì)于時(shí)間的曲線中曲線下的面積(AUC)來測量。粘膜包括鼻、口、腸、口腔、支氣管肺、陰道和直腸的粘膜的表面，并且實(shí)際上包括內(nèi)襯于所有體腔或與外界相通的通道中的所有分泌粘液的膜。粘膜遞送增強(qiáng)劑有時(shí)稱為載體。
正如這里所使用的，粘膜遞送增強(qiáng)劑包括一些試劑，它們增強(qiáng)PTH肽或其它生物活性化合物的釋放或溶解(如從制劑遞送媒介物)、擴(kuò)散速率、滲透能力和周期、攝取、停留時(shí)間、穩(wěn)定性、有效半衰期、峰濃度水平或持續(xù)濃度水平、清除和其它期望的粘膜遞送特征(如在遞送位置測量，或在所選的目標(biāo)活性位置測量如血液或中樞神經(jīng)系統(tǒng))。因此粘膜遞送的增強(qiáng)可以通過多種機(jī)制的任何一種發(fā)生，如通過增加PTH肽的擴(kuò)散、轉(zhuǎn)運(yùn)、持久性或穩(wěn)定性，增加膜流動(dòng)性，調(diào)整調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞旁滲透的鈣和其它離子的利用度或作用，增溶粘膜的膜組分(如脂質(zhì))，改變粘膜組織中非蛋白和蛋白巰基水平，增加穿過粘膜表面的水流量，調(diào)整上皮的結(jié)合生理學(xué)，減小粘膜上皮上的粘液的粘性，減小粘膜纖毛清除率，和其它機(jī)制。
正如這里所使用的，“PTH肽的粘膜有效量”關(guān)注于PTH肽至受治療者體內(nèi)的藥物活性目標(biāo)位置的有效粘膜遞送，所述有效粘膜遞送可能包括多種遞送或傳送途徑。例如給定的活性劑可以由粘膜細(xì)胞之間的清除找到它的通路并到達(dá)相鄰的血管壁，然而通過另一個(gè)通路所述試劑可以，或者被動(dòng)地或者主動(dòng)地，被吸收到粘膜細(xì)胞內(nèi)以在所述細(xì)胞中作用或者被卸載或轉(zhuǎn)運(yùn)出所述細(xì)胞以到達(dá)第二目標(biāo)位置，如體循環(huán)。本發(fā)明的方法和組合物可以促進(jìn)活性劑沿著一種或多種這些替代途徑移位，或者可以直接作用于粘膜組織或鄰近的血管組織以促進(jìn)所述活性劑的吸收或滲透。在本文中所述的吸收或滲透的促進(jìn)不限于這些機(jī)制。
如這里使用的“PTH肽的峰值血漿濃度(Cmax)”，“PTH肽血漿濃度相對(duì)于時(shí)間的曲線下面積(AUC)”，“到達(dá)PTH肽最大血漿濃度的時(shí)間(tmax)”為所屬領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員已知的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。Laursen等人，Eur.J.Endocrinology，135309-315(1996)。所述“濃度相對(duì)于時(shí)間的曲線”在一個(gè)劑量的PTH肽通過鼻內(nèi)、肌內(nèi)、或皮下的施藥途徑施藥給受治療者后，測量受治療者的血清中PTH肽相對(duì)于時(shí)間的濃度。“Cmax”為單個(gè)劑量的PTH肽施藥至受治療者后PTH肽在受治療者的血清中的最大濃度。“tmax”為單個(gè)劑量的PTH肽施藥給受治療者后達(dá)到PTH肽在受治療者的血清中最大濃度的時(shí)間。
通常使用“緩沖劑”來維持溶液的pH在一個(gè)近似恒定的值。即使當(dāng)少量的強(qiáng)酸或強(qiáng)堿加入到溶液時(shí)，緩沖劑通過阻止或中和氫離子或氫氧離子的濃度的巨大變化，來維持所述溶液的pH。緩沖劑通常由弱酸和它適當(dāng)?shù)柠}(或弱堿和它適當(dāng)?shù)柠})組成。弱酸的適當(dāng)?shù)柠}含有所述弱酸中存在的相同陰離子。(參見Lagowski，Macmillan Encyclopedia of Chemistry，第1冊，Simon & Schuster，New York，1997年第273-4頁)。Henderson-Hasselbach公式，pH＝pKa+log10[A-]/[HA]，用來描述緩沖劑，并且基于弱酸解離的標(biāo)準(zhǔn)方程HA≒H++A-。通常所用的緩沖劑源的實(shí)例包括以下醋酸鹽、酒石酸鹽或檸檬酸鹽。
“緩沖能力”表示在顯著pH變化即將發(fā)生前可以加入到緩沖溶液的酸或堿的量。如果pH位于弱酸的pK-1和pK+1的范圍內(nèi)那么緩沖能力是可以評(píng)估的，但是如果在所述范圍外緩沖能力就跌落至某種程度以至于起很小的作用。因此，一個(gè)給定的系統(tǒng)僅在弱酸(或弱堿)的pK任一側(cè)的一個(gè)pH單位范圍內(nèi)具有有用的緩沖作用。(參見Dawson，Data for BiochemicalResearch，第三版，牛津科學(xué)出版，1986年第419頁)。通常，選擇合適的濃度以便溶液的pH在弱酸(或弱堿)的pKa的附近。(參見Lide，CRCHandbook of Chemistry and Physics，第86版，Taylor & Francis Group，2005-2006，第2-41頁)。另外，強(qiáng)酸和強(qiáng)堿溶液通常不被歸類為緩沖溶液，并且它們在pH值2.4到11.6之間不呈現(xiàn)緩沖能力。
“非輸注施藥”表示不包括直接注射入動(dòng)脈或靜脈的任何遞送方法，所述注射為一種方法，該方法迫使或驅(qū)使(一般為流體)進(jìn)入某物并且尤其通過針、注射器或其它侵入法方式引入身體部分。非輸注施藥包括皮下注射、肌內(nèi)注射、腹腔內(nèi)(intraparitoneal)注射和遞送至粘膜的非注射方法。
骨質(zhì)疏松癥為系統(tǒng)性骨骼疾病，具有低骨量、骨組織微觀結(jié)構(gòu)退化、以及增加的骨脆性和易于骨折的特征。骨量減少為減少的骨鈣化或骨密度，是一個(gè)適用于所有發(fā)現(xiàn)病情的骨骼系統(tǒng)的描述術(shù)語。
骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的治療和醫(yī)學(xué)診斷包括施用臨床有效劑量的PTH用于骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的預(yù)防和/或治療。如以上所指出的，本發(fā)明提供改進(jìn)的和有用的方法和組合物，其用于PTH肽的鼻粘膜遞送以預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物受治療者的骨質(zhì)疏松癥或骨量減少。如這里所使用的，骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的預(yù)防和治療表示通過在患者體內(nèi)降低骨量的增加、減少骨骼吸收或降低骨折的發(fā)病率，從而抑制臨床骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病或降低臨床骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率或嚴(yán)重程度。
PTH肽也可以與其它治療劑如二磷酸酐類、鈣、維生素D、雌激素或雌激素-受體結(jié)合復(fù)合物、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白或降鈣素結(jié)合施予。
用于PTH肽至哺乳動(dòng)物受治療者的粘膜施藥的改進(jìn)的方法和組合物優(yōu)化了PTH肽給藥方案。本發(fā)明提供與一種或多種粘膜遞送增強(qiáng)劑如非離子表面活性劑一起配制的PTH肽的粘膜遞送，其中PTH肽劑量釋放在粘膜施藥后被大體標(biāo)準(zhǔn)化和/或在PTH肽釋放的一個(gè)有效遞送時(shí)期內(nèi)被維持，所述有效遞送時(shí)期的范圍從約0.1到2.0小時(shí)、0.4到1.5小時(shí)、0.7到1.5小時(shí)或0.8到1.0小時(shí)。可以利用本發(fā)明的方法和組合物通過外源PTH肽的重復(fù)施藥促進(jìn)PTH肽的持續(xù)釋放。
用于PTH肽至哺乳動(dòng)物受治療者的粘膜施藥的改進(jìn)的組合物和方法優(yōu)化了PTH肽給藥方案。本發(fā)明提供制劑的改善的粘膜(如鼻的)遞送，所述制劑包含與一種或多種粘膜遞送增強(qiáng)劑和任選一種或多種持續(xù)釋放增強(qiáng)劑結(jié)合的PTH肽。本發(fā)明的粘膜遞送增強(qiáng)劑產(chǎn)生遞送的有效增加，如最大血漿濃度的(Cmax)的增加以增強(qiáng)粘膜施藥PTH肽的治療活性。第二個(gè)影響PTH肽在血漿中和CNS中的治療作用的因素是停留時(shí)間(RT)。與鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑結(jié)合的持續(xù)釋放增強(qiáng)劑增加了PTH肽的Cmax并且延長了停留時(shí)間(RT)。這里公開了本發(fā)明獲得持續(xù)釋放的增強(qiáng)制劑的方法和聚合物遞送媒介物和其它試劑，例如聚乙二醇(PEG)。本發(fā)明提供了改進(jìn)的PTH肽遞送方法和劑型，用于哺乳動(dòng)物受治療者骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的治療或預(yù)防。
在本發(fā)明的粘膜遞送組合物和方法中，應(yīng)用各種增強(qiáng)PTH肽至或穿過粘膜表面的遞送的遞送增強(qiáng)劑。在這點(diǎn)上，PTH肽穿過粘膜上皮的遞送可以“跨細(xì)胞地”或“細(xì)胞旁地”發(fā)生。這些通路對(duì)PTH肽整個(gè)流量和生物利用度的貢獻(xiàn)程度取決于粘膜的環(huán)境、活性劑的理化性質(zhì)和粘膜上皮的性質(zhì)。細(xì)胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)僅包括被動(dòng)擴(kuò)散，而跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)通過被動(dòng)的、促進(jìn)的或主動(dòng)的過程發(fā)生。通常，親水的、被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的、極性的溶質(zhì)通過細(xì)胞旁路擴(kuò)散，而更親脂的溶質(zhì)利用跨細(xì)胞通路。吸收和生物利用度(如，通過滲透系數(shù)或生理測定反映)，針對(duì)不同的主動(dòng)或被動(dòng)吸收的溶質(zhì)，可以很容易得到評(píng)價(jià)，用于本發(fā)明中所選擇的任何PTH肽的胞旁或跨細(xì)胞兩種遞送的組分。對(duì)于被動(dòng)吸收藥物，藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的細(xì)胞旁和跨細(xì)胞通路的相對(duì)貢獻(xiàn)取決于藥物的pKa、分配系數(shù)、分子半徑和電荷，遞送藥物的腔內(nèi)環(huán)境的pH，以及吸收表面的面積。細(xì)胞旁通路代表鼻粘膜上皮的可進(jìn)入表面積的一個(gè)相對(duì)小的部分。概括地，已報(bào)道細(xì)胞膜占據(jù)的粘膜表面積比細(xì)胞旁空間占據(jù)的面積大一千倍。因此，較小的可進(jìn)入面積以及與大分子滲透相反的基于尺寸和電荷的區(qū)分提示與針對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的跨細(xì)胞遞送相比，細(xì)胞旁通路通常為作用較小的通路。令人驚訝的是，本發(fā)明的方法和組合物提供了生物治療物質(zhì)的經(jīng)過細(xì)胞旁通路進(jìn)入和穿過粘膜上皮的顯著增強(qiáng)的轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，本發(fā)明的方法和組合物可選擇地，或在單個(gè)方法或組合物中，成功地靶向細(xì)胞旁和跨細(xì)胞兩個(gè)通路。
盡管吸收促進(jìn)的機(jī)制可以隨著本發(fā)明的不同的粘膜遞送增強(qiáng)劑變化，但是本文中有用的試劑將大體不會(huì)不利地影響粘膜組織，并且根據(jù)特定PTH肽或其它活性劑或遞送增強(qiáng)劑的物理化學(xué)特性選擇。在本文中，增加粘膜組織的穿透或滲透性的遞送增強(qiáng)劑將常常引起粘膜的保護(hù)性滲透屏障的一些改變。針對(duì)本發(fā)明中這些有價(jià)值的遞送增強(qiáng)劑，通常期望粘膜滲透性的任何顯著變化在適合藥物遞送的期望期間的時(shí)限內(nèi)為可逆的。另外，伴隨長期使用，將沒有實(shí)質(zhì)的、累積毒性，粘膜的屏障性質(zhì)中也沒有任何誘導(dǎo)的持久的有害變化。
在本發(fā)明的某些方面中，用于協(xié)同施藥或與本發(fā)明的PTH肽組合制劑的遞送增強(qiáng)劑選自吸收促進(jìn)性親水小分子，包括但不限于二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺、乙醇、丙二醇和2-吡咯烷酮。可選地，長鏈兩親性分子，例如脫酰甲基亞砜(deacylmethyl sulfoxide)、氮酮、月桂硫酸鈉、油酸和膽汁鹽類，可以用于增強(qiáng)PTH肽的粘膜滲透。另外，表面活性物質(zhì)(例如，非離子表面活性劑如聚山梨酯)可以作為添加劑化合物、處理劑或制劑添加物被應(yīng)用以增強(qiáng)PTH肽的鼻內(nèi)遞送。試劑如DMSO、聚乙二醇和乙醇，如果以足夠高的濃度存在于遞送環(huán)境中(如，通過預(yù)施藥或在治療制劑中摻合)，可以進(jìn)入粘膜的水相并改變其溶解性質(zhì)，由此增強(qiáng)從媒介物進(jìn)入粘膜的PTH肽的分配。
另外在本發(fā)明的協(xié)同施藥和加工方法以及組合制劑中有用的粘膜遞送增強(qiáng)劑包括，但不限于混合膠束、烯胺、一氧化氮供體(如S-亞硝基-N-乙?；?DL-青霉胺、NOR1、NOR4-它優(yōu)選與NO清除劑如羧基-PITO或雙氯芬酸鈉(doclofenac sodium)共同施予)、水楊酸鈉、乙酰乙酸的甘油酯(如，甘油基-1，3-二乙酰乙酸酯或1，2-異亞丙基甘油-3-乙酰乙酸酯)，和其它生理上適合粘膜遞送的釋放-擴(kuò)散滲透促進(jìn)劑或者上皮內(nèi)或跨上皮滲透促進(jìn)劑。其它遞送增強(qiáng)劑選自增強(qiáng)PTH肽的粘膜遞送、穩(wěn)定性、活性或跨上皮滲透的各種載體、基質(zhì)和賦形劑。它們包括，尤其是環(huán)糊精和β-環(huán)糊精衍生物(如2-羥丙基-β-環(huán)糊精和七-(2，6-二-O-甲基-β-環(huán)糊精))。這些化合物任選地與一種或多種活性成分結(jié)合并進(jìn)一步任選地配制于油脂性基質(zhì)中，提高本發(fā)明的粘膜制劑的生物利用度。然而，另外的適合粘膜遞送的遞送增強(qiáng)劑包括中鏈脂肪酸，所述中鏈脂肪酸包括單-和甘油二酯(如，癸酸鈉—椰子油的提取物，Capmul)和甘油三酯(如，淀粉糊精，Estaram 299，Miglyol 810)。
可以用任何合適的遞送增強(qiáng)劑補(bǔ)充本發(fā)明的粘膜治療的和預(yù)防的組合物，所述遞送增強(qiáng)劑促進(jìn)PTH肽穿過粘膜屏障的吸收、擴(kuò)散或滲透。滲透促進(jìn)劑可以為藥學(xué)上可接受的任何促進(jìn)劑。因此，在本發(fā)明的更詳細(xì)的方面中，提供了摻入一種或多種促進(jìn)滲透的遞送增強(qiáng)劑的組合物，所述遞送增強(qiáng)劑選自水楊酸鈉和水楊酸衍生物(乙酰水楊酸鹽、水楊酸膽堿、水楊酰胺)；氨基酸和其鹽(例如，單氨基羧酸如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸；羥氨基酸如絲氨酸；酸性氨基酸如門冬氨酸、谷氨酸；和堿性氨基酸如賴氨酸—包括其堿金屬或堿土金屬鹽在內(nèi))；和N-乙酰氨基酸(N-乙酰丙氨酸、N-乙酰苯丙氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-乙酰甘氨酸、N-乙酰賴氨酸、N-乙酰谷氨酸、N-乙酰脯氨酸、N-乙酰羥脯氨酸)和其鹽(堿金屬鹽和堿土金屬鹽)。也提供了在本發(fā)明的方法和組合物中作為促進(jìn)滲透的遞送增強(qiáng)劑的物質(zhì)，所述物質(zhì)通常為乳化劑(如油烯基磷酸鈉、月桂基磷酸鈉、月桂基硫酸鈉、十四烷基硫酸鈉、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基酯)，己酸、乳酸、蘋果酸、檸檬酸和其堿金屬鹽，吡咯烷酮羧酸，烷基吡咯烷酮羧酸酯，N-烷基吡咯烷酮，脯氨酸酰基酯，等等。
在本發(fā)明的各個(gè)方面中，提供改進(jìn)的鼻粘膜遞送制劑和方法，所述制劑和方法允許本發(fā)明中PTH肽和其它治療劑穿過施藥位置和所選目標(biāo)位置之間的粘膜屏障的遞送。某些制劑尤其適合所選的目標(biāo)細(xì)胞、組織或器官，或甚至特定的疾病狀況。
在其它方面，制劑和方法提供PTH肽的有效率的、選擇性的細(xì)胞內(nèi)作用或跨細(xì)胞作用，尤其是沿著一個(gè)確定的細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間通路。典型的，PTH肽以有效濃度水平被有效率地裝載于載體或其它遞送媒介物中，并且被遞送和以穩(wěn)定的形式保持在，如鼻粘膜處和/或在經(jīng)過期間通過細(xì)胞內(nèi)間隔和膜到達(dá)遙遠(yuǎn)的用于藥物作用的目標(biāo)位置(如，血流或確定的組織、器官或細(xì)胞外間隔)?？梢栽谶f送媒介物中或以其它方式修飾(如，以前藥的形式)提供PTH肽，其中PTH肽的釋放或激活通過生理學(xué)的刺激(如，pH變化、溶酶體酶類)被引發(fā)。常常，PTH肽為藥理學(xué)無活性的直到它到達(dá)目標(biāo)位置才有活性。在多數(shù)情況下，PTH肽和其它制劑組分都為無毒性的和非免疫原性的。本文中，通常選擇在生理?xiàng)l件下具有迅速被降解和排泄的能力的載體和其它制劑組分。同時(shí)，制劑在劑型中是化學(xué)和物理穩(wěn)定的以有效儲(chǔ)存。
這里提供了各種另外的制備組分和方法以及特定的制劑添加劑，它們產(chǎn)生用于易聚集肽和蛋白的粘膜遞送制劑，其中利用增溶劑以基本純凈的、未聚集的形式穩(wěn)定所述的肽或蛋白。關(guān)注多種組分和添加劑以在這些方法和制劑中使用。這些增溶劑的示范例為環(huán)糊精(CD)，所述環(huán)糊精選擇性地結(jié)合多肽的疏水側(cè)鏈。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些CD以顯著抑制聚集的方式結(jié)合到蛋白的疏水端。就CD和所包括的蛋白兩者而論，這種抑制為選擇性的。在本發(fā)明的鼻內(nèi)遞送方法和組合物中這種蛋白聚集的選擇性抑制提供了另外的優(yōu)勢。本文中使用的另外的試劑包括具有不同幾何形狀的CD二聚體、三聚體和四聚體，所述幾何形狀通過特異性阻止肽和蛋白聚集的連接體(linker)被控制。然而本發(fā)明中的增溶劑和摻入方法包括肽和模擬肽選擇性地阻止蛋白和蛋白相互作用的用途。一方面，通過使用同樣地阻止蛋白聚集的肽和模擬肽，報(bào)道CD多聚體的疏水側(cè)鏈的特異結(jié)合被擴(kuò)大范圍至蛋白?？梢缘玫揭粋€(gè)寬范圍的合適的方法和抗聚集劑用于組合物的摻入和本發(fā)明的過程。
通過鼻內(nèi)施藥的生物治療劑的有效遞送除了要考慮由于結(jié)合到粘液層的糖蛋白的藥物損失外，還必須考慮穿過鼻粘膜的保護(hù)粘液內(nèi)層所減少的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)速率。正常的粘液為由水、電解質(zhì)、粘蛋白、大分子和脫落的上皮細(xì)胞組成的粘彈性的、膠狀物質(zhì)。它主要作為細(xì)胞保護(hù)作用和潤滑作用的覆蓋物用于下面的粘膜組織。通過位于鼻上皮和其它粘膜上皮的隨機(jī)分布的分泌細(xì)胞分泌粘液。粘液的結(jié)構(gòu)單元為粘蛋白。糖蛋白主要負(fù)責(zé)粘液的粘彈性性質(zhì)，雖然其它大分子可能也促成這種性質(zhì)。在氣道粘液中，這種大分子包括局部產(chǎn)生的分泌型IgA、IgM、IgE、溶菌酶和支氣管轉(zhuǎn)鐵蛋白，它們在宿主防御機(jī)制中也起重要作用。
本發(fā)明的協(xié)同施藥方法任選地?fù)饺胗行У恼骋喝芙鈩┗蛘骋呵宄齽?，所述粘液溶解劑或粘液清除劑降解、變薄或清除來自鼻?nèi)粘膜表面的粘液以方便鼻內(nèi)施予的生物治療劑的吸收。在這些方法中，協(xié)同施予作為輔助化合物的粘液溶解劑或粘液清除劑以促進(jìn)PTH的鼻內(nèi)遞送?？蛇x擇地，有效量的粘液溶解劑或粘液清除劑作為處理性試劑摻入到本發(fā)明的多重處理方法中，或者作為添加劑摻入到本發(fā)明的組合制劑中，以提供改進(jìn)的制劑，所述改進(jìn)的制劑通過減少鼻內(nèi)粘液的屏障效應(yīng)促進(jìn)生物治療化合物的鼻內(nèi)遞送。
可得到多種粘液溶解劑或粘液清除劑用于摻入到本發(fā)明的方法和組合物中。根據(jù)它們的作用機(jī)制，粘液溶解劑和粘液清除劑常?？梢员环诸惓梢韵聨捉M蛋白酶(如，鏈霉蛋白酶、木瓜酶)，它裂解粘蛋白糖蛋白的蛋白核心；巰基化合物，它裂解粘蛋白二硫鍵；和去污劑(如，TritonX-100、吐溫20)，它打開粘液中的非共價(jià)鍵合。本文中另外的化合物包括，但不限于膽汁鹽類和表面活性物質(zhì)，例如，脫氧膽酸鈉、?；敲撗跄懰徕c、甘氨膽酸鈉和溶血磷脂酰膽堿。
膽汁鹽類在引起粘液結(jié)構(gòu)斷裂中的效果的順序?yàn)槊撗跄懰猁}＞牛磺膽酸鹽＞甘氨膽酸鹽。根據(jù)本發(fā)明的方法，其它減少粘液粘性或粘著力以促進(jìn)鼻內(nèi)遞送的有效試劑包括，如短鏈脂肪酸，和通過螯合作用起作用的溶粘蛋白劑如N-?；z原肽、膽汁酸和皂甙(后者的功能部分通過螯合對(duì)保持粘液層結(jié)構(gòu)起重要作用的Ca2+和/或Mg2+)。
在本發(fā)明的方法和組合物中使用的另外的溶粘蛋白劑包括N-乙酰基-L-半胱氨酸(ACS)，ACS為有效的溶粘蛋白劑，它減少支氣管肺粘液的粘性和粘連并且報(bào)道它在被麻醉大鼠中適度地增加人生長激素的鼻生物利用度(從7.5到12.2％)。這些以及其它粘液溶解劑或粘液清除劑與鼻粘膜接觸，典型的在約0.2到20mM的濃度范圍內(nèi)，與生物活性劑的施予協(xié)同，以減少鼻內(nèi)粘液的極性粘性和/或彈性。
還可以從一些糖苷酶中選擇其它粘液溶解劑或粘液清除劑，所述糖苷酶能夠裂解粘液糖蛋白中的糖苷鍵。α-淀粉酶和β-淀粉酶為這一類酶的代表，雖然它們的粘液溶解效果可能有限。相反，允許這些微生物滲透到它們宿主粘液層的細(xì)菌糖苷酶可能具有更強(qiáng)的效果。
對(duì)于與本發(fā)明中多數(shù)生物活性劑(包括肽和蛋白治療物)一起組合使用而言，非離子化去污劑作為粘液溶解劑或粘液清除劑通常也是有用的。典型地，這些試劑將不會(huì)改變或基本上不會(huì)削弱治療多肽的活性。
因?yàn)槟承┱衬そM織(如，鼻粘膜組織)利用粘膜纖毛清除的自清能力(如，除去灰塵、變應(yīng)原和細(xì)菌)作為保護(hù)功能是必需的，所以通常認(rèn)為這種功能基本上不會(huì)被粘膜藥物削弱。呼吸道中的粘膜纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)是對(duì)抗感染的獨(dú)特的重要防御機(jī)制。為了獲得這種功能，鼻內(nèi)和氣道通道中的纖毛顫動(dòng)沿著粘膜移動(dòng)粘液層以除去吸入的顆粒和微生物。
本發(fā)明的方法和組合物中的纖毛抑制劑增加粘膜(如鼻內(nèi))施予的PTH的停留時(shí)間。特別地，在本發(fā)明的方法和組合物中，通過一種或多種纖毛抑制劑的協(xié)同施藥或組合制劑，遞送在某些方面被顯著增強(qiáng)，所述纖毛抑制劑的功能可逆地抑制粘膜細(xì)胞纖毛的活動(dòng)，提供暫時(shí)地、可逆地增加粘膜施予的活性劑的停留時(shí)間。為了在本發(fā)明的這些方面中的使用，上述纖毛抑制因子，無論它們的活性為特異性的或間接的，都是以合適的量(根據(jù)遞送的濃度、持續(xù)時(shí)間和方式)作為纖毛抑制劑被成功應(yīng)用的候選者，這樣它們在施藥的粘膜位置產(chǎn)生粘膜纖毛清除的暫時(shí)(即可逆的)減少或停止，以增強(qiáng)PTH肽、類似物和模擬物以及這里公開的其它生物活性劑的遞送，而沒有不可接受的不利副作用。
某些表面活性劑(表面活性物質(zhì))作為遞送增強(qiáng)劑被容易地?fù)饺氲奖景l(fā)明的粘膜遞送制劑和方法中。這些試劑可以與PTH和這里公開的其它遞送增強(qiáng)劑協(xié)同施予或者組合配制，可以從一個(gè)寬集合的已知表面活性劑中選擇。表面活性劑的實(shí)例為非離子聚氧乙烯醚、膽汁鹽類、甘膽酸鈉、脫氧膽酸鹽、梭鏈孢酸衍生物、牛磺二氫梭鏈孢酸鈉、二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脫水山梨糖醇單油酸酯。這些不同類型的表面活性劑的作用機(jī)制典型地包括生物活性劑的增溶作用。對(duì)于常形成聚集體的蛋白和肽，這些遞送增強(qiáng)劑的表面活性性質(zhì)能夠允許與蛋白相互作用，以使較小的單元，如被表面活性物質(zhì)包被的單體，可以更容易地保持在溶液中。與聚集體相比這些單體大概為更可轉(zhuǎn)運(yùn)的單元。非離子表面活性劑在其頭部沒有電荷簇。非離子表面活性劑的實(shí)例為非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇。
表面活性劑的另一個(gè)潛在的機(jī)制為保護(hù)蛋白或肽免受粘膜環(huán)境中蛋白酶的蛋白水解降解。據(jù)報(bào)道，通過濃度小于或等于增強(qiáng)蛋白吸收所需要的濃度的鼻組織勻漿，膽汁鹽類和一些梭鏈孢酸衍生物兩者抑制蛋白的蛋白水解降解。這種蛋白酶抑制對(duì)生物半衰期短的肽可能尤為重要。
本發(fā)明提供了藥物組合物，其含有與這里所公開的遞送增強(qiáng)劑組合的PTH，所述遞送增強(qiáng)劑配制于粘膜遞送藥物制品中。
在本發(fā)明的某些方面，這里的組合制劑和/或協(xié)同施藥方法摻入有效量的PTH，所述PTH可能附著到帶電玻璃上從而減少容器中的有效濃度。硅烷化容器，例如硅烷化玻璃容器，用于儲(chǔ)存成品以減少PTH至玻璃容器的吸收。
然而在本發(fā)明的另外一些方面，用于治療哺乳動(dòng)物受治療者的試劑盒包括穩(wěn)定的PTH藥物組合物，所述藥物組合物經(jīng)配制用于哺乳動(dòng)物受治療者的粘膜遞送，其中所述組合物對(duì)于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥或骨量減少是有效的。所述試劑盒進(jìn)一步包括容納PTH的藥物試劑瓶。所述藥物試劑瓶由藥物級(jí)的聚合物、玻璃或其它合適的材料組成。所述藥物試劑瓶為，例如硅烷化玻璃瓶。試劑盒進(jìn)一步包括用于組合物遞送至受治療者鼻粘膜表面的孔。遞送孔由藥物級(jí)的聚合物、玻璃或其它合適的材料組成。遞送孔為，例如硅烷化玻璃。
硅烷化技術(shù)與特定的表面清潔技術(shù)組合用于在低壓力下利用硅烷化過程對(duì)表面硅烷化。硅烷為氣相并且其溫度為要被硅烷化的表面的增強(qiáng)溫度。本方法提供了具有穩(wěn)定、同質(zhì)和功能性硅烷層的可再制表面，所述硅烷層具有單層的特征。硅烷化表面防止本發(fā)明的多肽或粘膜遞送增強(qiáng)劑結(jié)合至玻璃上。
本過程對(duì)制備用于容納本發(fā)明的PTH肽組合物的硅烷化藥物試劑瓶是有用的。在使用前用雙蒸水(ddH2O)沖洗而清洗玻璃盤。然后用95％乙醇清洗硅烷盤，并且用丙酮清洗丙酮盤。藥物試劑瓶在丙酮中聲波處理10分鐘。丙酮聲波處理之后，在ddH2O盤中清洗試劑瓶至少兩次。試劑瓶在0.1M NaOH中聲波處理10分鐘。在試劑瓶在NaOH中聲波處理的同時(shí)，在防護(hù)罩下配制硅烷溶液。(硅烷溶液800ml 95％的乙醇；96L冰醋酸；25ml縮水甘油醚丙基三甲氧基硅烷)。NaOH聲波處理后，試劑瓶在ddH2O盤中清洗至少兩次。試劑瓶在硅烷溶液中聲波處理3到5分鐘。試劑瓶在100％的乙醇盤中清洗。在使用前試劑瓶用預(yù)純化的N2氣吹干并儲(chǔ)存在100℃烤箱中至少2小時(shí)。
在本發(fā)明的組合物和方法中，可以通過多種粘膜施藥的方式給受治療者施予PTH，包括口服、直腸、陰道、鼻內(nèi)、肺內(nèi)或經(jīng)皮遞送，或者通過局部遞送至眼睛、耳朵、皮膚或其它粘膜表面。
根據(jù)本發(fā)明的組合物常在含水溶液中以鼻或肺噴霧施予并且可以通過所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法以噴霧的形式分配。用于分配鼻噴霧的液體的首選系統(tǒng)公開于4,511,069號(hào)美國專利中，由此通過引用并入。制劑可以存在于多劑量容器中，例如4,511,069號(hào)美國專利所公開的封閉的分配系統(tǒng)中。另外的氣溶膠遞送方式可以包括，例如壓縮空氣噴霧器、噴嘴噴霧器、超聲噴霧器和壓電噴霧器，它們遞送藥物溶劑如水、乙醇或其混合物中溶解的或懸浮的生物活性劑。
本發(fā)明的鼻和肺噴霧溶液典型地包含與表面活性劑如非離子表面活性物質(zhì)(如聚山梨酯80)和水一起配制的PTH。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包含與甲基-β-環(huán)糊精、EDTA、二癸?；字Ｄ憠A(DDPC)和水一起配制的PTH。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，鼻噴霧溶液進(jìn)一步包含推進(jìn)劑。鼻噴霧溶液的pH任選的處于約3.0和6.0之間，優(yōu)選4.0±0.3?？梢约尤肫渌M分以加強(qiáng)或維持化學(xué)穩(wěn)定性，所述組分包括防腐劑、表面活性物質(zhì)、分散劑或氣體。合適的防腐劑包括，但不限于苯酚、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸、間甲酚、硫柳汞、氯代丁醇、苯扎氯銨(benzylalkonimumchloride)等。合適的表面活性物質(zhì)包括，但不限于油酸、脫水山梨糖醇三油酸酯、聚山梨酯、卵磷脂、磷脂酰膽堿以及各種長鏈的甘油二酯和磷脂。合適的分散劑包括，但不限于乙二胺四乙酸等等。合適的氣體包括，但不限于氮?dú)?、氦氣、含氯氟烴(CFC)、氫氟烷(HFC)、二氧化碳、空氣等等。
為了配制本發(fā)明中用于粘膜遞送的組合物，生物活性劑可以結(jié)合各種藥學(xué)上可接受的添加劑，以及基質(zhì)或載體用于活性劑的分散。另外，可以包括局部麻醉藥(如苯甲醇)，等滲劑(如氯化鈉、甘露醇、山梨醇)，吸收抑制劑(如吐溫80)，溶解增強(qiáng)劑(如環(huán)糊精和其衍生物)，穩(wěn)定劑(如血清白蛋白)，和還原劑(如谷胱甘肽)。當(dāng)用于粘膜遞送的組合物為液體時(shí)，制劑的張力，參考0.9％(w/v)的生理鹽水溶液的張力作為單位進(jìn)行測量，所述張力被典型地調(diào)整至一個(gè)值，處于所述值時(shí)不會(huì)在鼻粘膜的施藥位置誘導(dǎo)大量的、不可逆的組織損傷。通常，調(diào)整溶液的張力值至約1/3到3，更典型的1/2到2，和最經(jīng)常的3/4到1.7。
為了進(jìn)一步增強(qiáng)本發(fā)明中藥劑的粘膜遞送，PTH制劑也可以包含親水性低分子量化合物作為基質(zhì)或賦形劑。這種親水性低分子量化合物提供了通道媒介，通過所述媒介水溶性活性劑，如PTH，可以穿過基質(zhì)擴(kuò)散至體表面，在此PTH被吸收。親水性低分子量化合物任選地吸收來自粘膜或施藥環(huán)境的水分并溶解水溶性活性肽。親水性低分子量化合物的分子量通常不大于10000并優(yōu)選不大于3000。示范的親水性低分子量化合物包括多元醇化合物，例如寡糖、雙糖和單糖如蔗糖、甘露糖、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、丙三醇和聚乙二醇。在本發(fā)明中作為載體的其它有用的親水性低分子量化合物的實(shí)例包括N-甲基吡咯烷酮和醇類(如寡乙烯醇、乙醇、乙二醇和丙二醇)。這些親水性低分子量化合物可以單獨(dú)或相互組合或與鼻內(nèi)制劑的其他組分組合使用。
本發(fā)明的組合物可以根據(jù)需要可選地包含藥學(xué)上可接受的載體物質(zhì)以接近生理?xiàng)l件，如張力調(diào)整劑、濕潤劑等等，例如乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、脫水山梨醇單月桂酸酯和三乙醇胺油酸酯?？梢允褂贸Ｒ?guī)的無毒的藥學(xué)上可接受的載體，其包括如，藥物級(jí)別的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等等。
用于施予PTH的治療組合物也可以配制為溶液、微乳劑或其它適合于高濃度活性成分的有序結(jié)構(gòu)。所述載體可以為溶劑或分散介質(zhì)，包含如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)，和其合適的混合物?？梢员３秩芤旱暮线m的流動(dòng)性，例如，通過涂層如卵磷脂的使用，通過可分散制劑的期望顆粒尺寸的保持，和通過表面活性物質(zhì)的使用。多數(shù)情況下，組合物中需要包括等滲劑，如糖，多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化鈉。通過在組合物中包括延遲吸收劑，如單硬脂酸鹽和明膠，可以產(chǎn)生生物活性劑的延長的吸收。
根據(jù)本發(fā)明的粘膜施藥允許患者進(jìn)行有效的自施藥治療，前提是可獲取足夠的安全保護(hù)以控制和監(jiān)測給藥和副作用。粘膜施藥也克服了其它施藥形式的某些缺點(diǎn)，如注射，它疼痛且使患者暴露于可能的感染中并且可能有藥物生物利用度的問題。對(duì)于鼻和肺遞送而言，用于噴霧治療液體的受控氣溶膠分配的系統(tǒng)為所熟知的。在一個(gè)實(shí)施方案中，計(jì)量劑量的活性劑通過專門構(gòu)建的機(jī)械泵閥遞送，4,511,069號(hào)美國專利。
為了預(yù)防和治療的目的，可以一天一次地給受治療者鼻內(nèi)施予PTH。在本文中，PTH的有效治療劑量可以包括延長預(yù)防或治療方案中的重復(fù)劑量，所述重復(fù)劑量將產(chǎn)生顯著的臨床結(jié)果以減輕或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥或骨量減少。本文中有效劑量的確定典型地以人臨床試驗(yàn)之前的動(dòng)物模型研究為基礎(chǔ)，并且由確定的有效劑量和顯著減少受治療者體內(nèi)目標(biāo)疾病癥狀或病癥的發(fā)生或嚴(yán)重性的施藥方案指導(dǎo)。這方面的適合模型包括，例如鼠類、大鼠、豬、貓、狗、非人靈長類和所屬領(lǐng)域中已知的其它可接受的動(dòng)物模型受治療者。可選擇地，利用體外模型(如免疫和組織病理試驗(yàn))可以確定有效劑量。利用這些模型，典型地只需要普通計(jì)算和調(diào)整來確定施予有效治療量的生物活性劑的適當(dāng)濃度和劑量(例如，鼻內(nèi)有效、經(jīng)皮有效、靜脈內(nèi)有效或肌內(nèi)有效引起期望的反應(yīng)的劑量)。
當(dāng)然，生物活性劑的實(shí)際劑量將根據(jù)一些影響因素變化，所述影響因素例如受治療者的疾病癥候和詳細(xì)狀況(如受治療者年齡、尺寸、適合度、癥狀的程度和敏感因素)、施藥的時(shí)間和途徑、同時(shí)被施予的其它藥物或治療，和用于在受治療者體內(nèi)引起期望活性或生物效應(yīng)的生物活性劑的特定藥理?？梢哉{(diào)整給藥方案以提供最佳預(yù)防或治療反應(yīng)。在臨床術(shù)語中，有效治療量也是一個(gè)治療有益作用勝過生物活性劑的任何有毒或有害副作用的術(shù)語。本發(fā)明的方法和制劑的PTH肽的有效治療量的不受限范圍為0.7μg/kg到約25μg/kg。為了治療骨質(zhì)疏松癥或骨量減少，施予PTH肽的鼻內(nèi)劑量足夠高以促進(jìn)骨量增加，但是也足夠低以不引起任何不必要的副作用如惡心。PTH(1-34)的優(yōu)選鼻內(nèi)劑量為約1至約10μg/kg患者體重，最優(yōu)選為約6μg/kg患者體重。在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的劑量中，患者將接受約1至約1000μg，更優(yōu)選約20至800μg之間，最優(yōu)選100μg到約600μg，認(rèn)為300μg為高效劑量。
可選擇地，本發(fā)明的方法和制劑中生物活性劑的有效治療量的不受限范圍為每kg體重約0.001pmol至約100pmol之間，每kg體重約0.01pmol至約10pmol之間，每kg體重約0.1pmol至約5pmol之間，或每kg體重約0.5pmol至約1.0pmol之間。每次施藥，需要施予平均人類受治療者至少1微克的PTH，更典型為約10μg到5.0mg之間，并且在某些實(shí)施方案中，約100μg至1.0或2.0mg之間。為了某些口服應(yīng)用，每kg體重0.5mg的劑量可能是必需的以獲得足夠的血漿水平。還需要進(jìn)一步注意的是對(duì)于每一個(gè)特別的受治療者，應(yīng)該評(píng)估特定的劑量方案并根據(jù)個(gè)體需要和施予或指導(dǎo)滲透肽和其它生物活性劑的施藥的人的專業(yè)判斷隨著時(shí)間調(diào)整。
甲狀旁腺激素的鼻內(nèi)劑量將在1μg至1000μg甲狀旁腺激素之間的范圍內(nèi)變化，優(yōu)選20μg至800μg，更優(yōu)選100μg至600μg，認(rèn)為300μg為高效劑量。利用本發(fā)明的制劑的重復(fù)鼻內(nèi)給藥，以劑量之間變化范圍為約0.1到24小時(shí)，優(yōu)選0.5至24小時(shí)的時(shí)間表，將保持PTH肽標(biāo)準(zhǔn)化的、持續(xù)的治療水平以最大化臨床效果同時(shí)最小化過量暴露和副作用的風(fēng)險(xiǎn)。目的是粘膜遞送PTH肽的量足夠提高個(gè)體的PTH肽的血漿濃度以促進(jìn)骨量增加。
如果自施予非處方劑型，臨床主治醫(yī)生或患者可以改變PTH激動(dòng)劑如甲狀旁腺激素的劑量，以在目標(biāo)位置維持期望的濃度。
在一個(gè)可選擇的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于PTH肽鼻內(nèi)遞送的組合物和方法，其中PTH肽通過鼻內(nèi)有效劑量的施藥方案被重復(fù)施予，所述施藥方案包括在每天或每周的時(shí)間表中PTH肽至受治療者的多次施藥，以在延長的給藥期間維持PTH肽的治療有效的提高或降低的脈動(dòng)水平。所述組合物和方法提供受治療者自施予的鼻內(nèi)制劑中的PTH肽，所述施予在每天一次至六次之間以在8小時(shí)至24小時(shí)的延長的給藥期間維持PTH肽的治療有效的提高或降低的脈動(dòng)水平。
本發(fā)明還包括含以上所闡述的藥物組合物、活性成分和/或用于哺乳動(dòng)物受治療者中疾病或其它疾患的預(yù)防和治療的器具的試劑盒、包裝和多容器單元。簡要地，這些試劑盒包括含PTH的容器或制劑，所述PTH與這里公開的配制于粘膜遞送藥物制品中的粘膜遞送增強(qiáng)劑組合。
可以利用任何噴霧瓶(即帶致動(dòng)器、噴霧泵的瓶)施予本發(fā)明的鼻內(nèi)制劑。鼻噴霧瓶的一個(gè)實(shí)例為“鼻噴霧泵w/安全夾(Nasal Spray Pump w/Safety Clip)”，所述瓶每噴一次遞送0.1mL劑量并且具有長36.05mm的汲取管(Pfeiffer of America，Princeton，NJ)。PTH肽如甲狀旁腺激素的鼻內(nèi)劑量可以在0.1μg/kg到約1500μg/kg范圍內(nèi)。當(dāng)鼻內(nèi)噴霧施予時(shí)，優(yōu)選情況是，噴霧的顆粒尺寸在10-100μm(微米)大小，優(yōu)選20-100μm大小。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以利用鼻噴霧或氣溶膠鼻內(nèi)施予甲狀旁腺激素肽。這令人驚奇，因?yàn)橐呀?jīng)表明由于在產(chǎn)生噴霧或氣溶膠的過程中致動(dòng)器產(chǎn)生的機(jī)械力，很多蛋白和肽被剪切或變性。在這個(gè)領(lǐng)域以下定義為有用的。
1.氣溶膠-在壓力下包裝并含治療活性成分的產(chǎn)品，一旦啟動(dòng)適當(dāng)?shù)拈y系統(tǒng)所述治療活性成分就被釋放。
2.計(jì)量氣溶膠—含計(jì)量劑量閥的加壓劑型，每次啟動(dòng)所述計(jì)量劑量閥允許均勻量的噴霧的遞送。
3.粉末氣溶膠—在壓力下包裝并含粉末形式的治療活性成分的產(chǎn)品，一旦啟動(dòng)適當(dāng)?shù)拈y系統(tǒng)就釋放所述產(chǎn)品。
4.噴霧氣溶膠—利用壓縮氣作為推進(jìn)劑的氣溶膠產(chǎn)品，所述推進(jìn)劑提供以濕噴霧排出產(chǎn)品所必需的力，所述氣溶膠產(chǎn)品通常適用于含水溶劑中藥用試劑的溶液。
5.噴霧劑—通過空氣噴射或蒸汽噴射被精密分開的液體。鼻噴霧藥物產(chǎn)品含溶解或懸浮在溶液或不加壓分配器中的賦形劑混合物中的治療活性成分。
6.計(jì)量噴霧劑-不加壓劑型，由每次一旦啟動(dòng)就允許指定量噴霧分配的閥組成。
7.懸浮噴霧劑—含固態(tài)顆粒的液體制品，所述固態(tài)顆粒分散在液態(tài)媒介物中并且理所當(dāng)然的以小滴的形式或?yàn)榫?xì)分開的固體。
流體動(dòng)力特征的氣溶膠噴霧通過作為藥物遞送裝置(“DDD”)的計(jì)量鼻噴霧泵發(fā)射。噴霧特征是法定申請(qǐng)文件的一個(gè)整體部分，對(duì)獲得食品與藥品監(jiān)督管理局(“FDA”)批準(zhǔn)研究和開發(fā)，和新的或正出現(xiàn)的鼻噴霧泵的質(zhì)量保證和穩(wěn)定性檢測過程都是必要的。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)噴霧幾何形狀的詳細(xì)特征是鼻噴霧泵整體性能的最佳指標(biāo)。特別地，當(dāng)噴霧從裝置噴出時(shí)噴霧的分散角(煙柱幾何形狀)的測量；噴霧的截面橢圓率，均勻度和顆粒/小滴分布(噴流型)；和產(chǎn)生噴霧的時(shí)間發(fā)展已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)是鼻噴霧泵的表征中最有代表性的性能值。在質(zhì)量保證和穩(wěn)定性檢測的過程中，煙柱幾何形狀和噴流型測量值是用于驗(yàn)證鼻噴霧泵與被認(rèn)可的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)一致和相符的關(guān)鍵標(biāo)識(shí)。
定義 煙柱高度—從致動(dòng)器頂端到由于線流中斷煙柱角變?yōu)榉蔷€性的點(diǎn)的距離測量值。根據(jù)數(shù)字圖像的目測，并且為了建立一個(gè)與噴流型的最遠(yuǎn)測量點(diǎn)一致寬度的測量點(diǎn)，為本研究界定的高度為30mm 長軸—能夠從橫跨基本單元的COMw的擬合的噴流型中拉出的最長弦(mm) 短軸—能夠從橫跨基本單元的COMw的擬合的噴流型中拉出的最短弦(mm) 橢圓率—長軸和短軸的比 D10-小滴的直徑，總液體體積10％的樣品由較小直徑(μm)的小滴組成 D50-小滴的直徑，總液體體積50％的樣品由較小直徑(μm)，也即質(zhì)量中位直徑的小滴組成 D90-小滴的直徑，總液體體積90％的樣品由較小直徑(μm)的小滴組成 跨度—分布寬度的測量值，值越小分布越窄，跨度計(jì)算為(D90-D10)/D50。
％RSD-相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差百分比，標(biāo)準(zhǔn)偏差除各組平均值并乘以100，也即％CV。
可以根據(jù)行業(yè)中慣常的或衛(wèi)生監(jiān)管局可接受的選擇鼻噴霧裝置。合適的裝置的一個(gè)實(shí)例在10/869,649號(hào)美國申請(qǐng)中闡述(S.Quay和G.BrandtCompositions and methods for enhanced mucosal delivery of Y2 receptor-binding peptides and methods for treating and preventing obesity(用于Y2受體-結(jié)合肽的增強(qiáng)的粘膜遞送的組合物和方法以及用于治療和預(yù)防肥胖癥的方法))。
為了治療骨質(zhì)疏松癥或骨量減少，施予鼻內(nèi)劑量的PTH肽甲狀旁腺激素，其劑量足夠高到促進(jìn)骨量增加，但是足夠低以不會(huì)引起任何不必要的副作用如惡心。PTH的優(yōu)選鼻內(nèi)劑量為約1μg-10μg/kg患者體重，最優(yōu)選約6μg/kg患者體重。在標(biāo)準(zhǔn)劑量中患者將接受1μg至1000μg，更優(yōu)選約20μg至800μg之間，最優(yōu)選100μg至約600μg，認(rèn)為300μg為高效劑量。優(yōu)選每天一次施予PTH肽如甲狀旁腺激素(1-34)。
以下實(shí)施例以示例而非限制的方式提供。
實(shí)施例實(shí)施例1 試劑和細(xì)胞 在MatTek細(xì)胞模型(MatTek，Corp.Ashland，MA)中測量了各種滲透促進(jìn)劑對(duì)PTH制劑的影響。單獨(dú)地或相互組合地評(píng)價(jià)了三種滲透促進(jìn)劑(EDTA、乙醇和聚山梨酯80(吐溫80))。每當(dāng)適用時(shí)利用山梨醇作為張力調(diào)節(jié)劑(tonicifier)調(diào)整制劑的克分子滲透壓濃度至220mOsm/kg。調(diào)整制劑pH至～4.0。45mg/ml M-β-CD、1mg/ml DDPC和1mg/ml EDTA的滲透促進(jìn)劑組合(pH為4.5)作為陽性對(duì)照。僅含山梨醇的制劑用作陰性對(duì)照。在有和沒有防腐劑存在的情況下評(píng)價(jià)每一個(gè)制劑。對(duì)于所有被試驗(yàn)的起始制劑，利用苯甲酸鈉作為防腐劑。
MatTek細(xì)胞系為正常的、人類來源的氣管/支氣管上皮細(xì)胞(EpiAirwayTM組織模型)。細(xì)胞在用于產(chǎn)生組織插入物之前培養(yǎng)24-48小時(shí)。
將每一個(gè)組織插入物放入含1ml培養(yǎng)基的單個(gè)孔中。在插入物的頂端表面，涂布100μl試驗(yàn)制劑，并且在37℃搖動(dòng)樣品1小時(shí)。在20、40和60分鐘時(shí)取出下面的培養(yǎng)基樣品并在4℃儲(chǔ)存至48小時(shí)，用于乳酸脫氫酶(LDH，細(xì)胞毒性)和樣品滲透(PTH HPLC評(píng)價(jià))。第60分鐘的樣品用于乳酸脫氫酶(LDH，細(xì)胞毒性)。在1h的孵育之前和之后測量跨上皮電阻(TER)。孵育之后，通過線粒體脫氫酶(MDH)的測定分析細(xì)胞插入物的細(xì)胞活性。
利用反相高壓液相色譜方法確定組織滲透測定中特立帕肽的濃度。實(shí)施例2 跨上皮電阻 使用Endohm-12組織電阻測量室完成TER的測量，所述Endohm-12組織電阻測量室通過電極導(dǎo)線連接至EVOM上皮伏歐表(World PrecisionInstruments，Sarasota，F(xiàn)L)。在MatTek培養(yǎng)基中平衡電極和組織培養(yǎng)空白插入物至少20分鐘，在核對(duì)校正前關(guān)閉電源。利用Endohm組織室中的1.5ml培養(yǎng)基和空白插入物中的300μl培養(yǎng)基測量背景電阻。調(diào)整頂部電極使其接近，但又不接觸插入物膜的上表面?？瞻撞迦胛锏谋尘半娮铻榧s5-20歐姆。對(duì)于每次TER測定，加入300μl的MatTek培養(yǎng)基至插入物中接著放入Endohm室。電阻以(測量的電阻-空白)×0.6cm2表示。
表1闡述了用于檢測TER減少的制劑。
表1.含GRAS滲透促進(jìn)劑的制劑的說明
結(jié)果表明所有制劑都觀察到TER減少。涂布于頂側(cè)的培養(yǎng)基沒有減少TER，然而Triton X處理組顯示預(yù)期的顯著的TER減少。
實(shí)施例3細(xì)胞活性和細(xì)胞毒性 利用MTT測定法(MTT-100，MatTek試劑盒)評(píng)價(jià)細(xì)胞活性。融化并稀釋的MTT濃縮液(300μl)被移入到24孔板中。輕柔地干燥組織插入物，放置于平板孔中，并在37℃孵育3小時(shí)。孵育之后，從平板中移出每個(gè)插入物，輕柔地吸干，并且放置于24孔提取平板中。細(xì)胞培養(yǎng)插入物被浸入到每個(gè)孔中的2.0ml的提取液中(完全覆蓋樣品)。覆蓋并密封提取平板以減少提取液的蒸發(fā)。在黑暗中室溫孵育過夜后，每個(gè)插入物含的液體被倒回至取出孔中，并丟棄插入物。提取液(200μl至少兩份)同提取空白被移至96孔微量板中。在平板讀取儀上測量550nm處樣品的吸光度。
利用CytoTox 96細(xì)胞毒性測定試劑盒(Promega Corp.，Madison，WI)通過測量細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)的損失測定細(xì)胞死亡的數(shù)量。評(píng)價(jià)頂部培養(yǎng)基的LDH分析。在頂部表面加入適當(dāng)量的培養(yǎng)基以達(dá)到總計(jì)250μL，將起始樣品上樣體積考慮在內(nèi)。搖動(dòng)插入物5分鐘。移出150μL頂部培養(yǎng)基到微量離心管中并以10000rpm離心3分鐘。移出2μL上清液并加入到96孔平板。使用48μL的培養(yǎng)基稀釋上清液以制成25x稀釋液。為了基底外側(cè)培養(yǎng)基的LDH分析，所述50μL樣品被上樣到96-孔測定平板中。新鮮的無細(xì)胞的培養(yǎng)基作為空白。每孔中加入50微升底物溶液并黑暗中室溫孵育平板30分鐘。孵育后，每孔中加入50μL終止溶液并在490nm處在吸光度平板讀取儀上讀取平板。
MTT測定的結(jié)果顯示當(dāng)用所有制劑處理細(xì)胞時(shí)細(xì)胞活性無顯著性減少。應(yīng)用于頂面的培養(yǎng)基不顯示對(duì)細(xì)胞活性的影響，然而同期望一樣TritonX處理組顯示細(xì)胞活性的顯著減少。LDH測定的結(jié)果顯示當(dāng)用所有制劑處理細(xì)胞時(shí)，沒有觀察到顯著的細(xì)胞毒性。應(yīng)用于頂面的培養(yǎng)基對(duì)照不顯示細(xì)胞毒性，然而同期望一樣Triton X處理組顯示顯著的細(xì)胞毒性。實(shí)施例4滲透性 檢測各種滲透促進(jìn)劑提高PTH跨粘膜遞送的能力。為此，7.5mg/mlPTH與各種滲透促進(jìn)劑在pH～4.0組合且克分子滲透壓濃度為220-280mOsm/kg。
在滲透促進(jìn)劑存在下PTH滲透的測量結(jié)果顯示，在45mg/ml M-β-CD、1mg/ml DDPC和1mg/ml EDTA存在下PTH滲透性顯著增加。在滲透促進(jìn)賦形劑存在下觀察到各種程度的PTH滲透增強(qiáng)。防腐劑對(duì)PTH滲透性沒有顯著影響。
通過與45mg/ml M-β-CD、1mg/ml DDPC和1mg/ml EDTA組合舉例說明含非GRAS促進(jìn)劑的優(yōu)選制劑。也優(yōu)選含合適溶劑如水，防腐劑如苯甲酸鈉、氯代丁醇或苯扎氯銨，和張力調(diào)節(jié)劑如蔗糖或多元醇如海藻糖或鹽如氯化鈉的制劑。可選地，制劑可以含其它的促進(jìn)劑，包括選擇的增溶劑、表面活性劑和螯合劑。
通過與1mg/mL吐溫-80、100mg/mL乙醇和1mg/ml EDTA組合舉例說明含GRAS促進(jìn)劑的優(yōu)選制劑。也優(yōu)選含合適共溶劑如水，防腐劑如苯甲酸鈉、氯代丁醇或苯扎氯銨，和張力調(diào)節(jié)劑如蔗糖或多元醇如海藻糖或鹽如氯化鈉的制劑?？蛇x地，制劑可以含其它的GRAS促進(jìn)劑，包括選擇的表面活性劑、共溶劑和螯合劑。
然而通過包含1mg/mL吐溫-80(聚山梨酯80)舉例說明含GRAS促進(jìn)劑的另一個(gè)優(yōu)選制劑。也優(yōu)選含合適共溶劑如水，防腐劑如苯甲酸鈉、氯代丁醇或苯扎氯銨，和張力調(diào)節(jié)劑如蔗糖或多元醇如海藻糖或鹽如氯化鈉的制劑?？蛇x地，制劑可以含其它GRAS促進(jìn)劑，如選擇的表面活性劑。實(shí)施例5穩(wěn)定性 PTH制劑將以瓶裝液體的形式被提供用于通過致動(dòng)器的鼻內(nèi)施藥。檢測pH處于4.0-4.5的含1-10mg/mL PTH的制劑的“售出”(“as-sold”)穩(wěn)定性。“售出”穩(wěn)定性研究被定義為包括以下的那些研究將制劑儲(chǔ)存于閉合的(即蓋上的)瓶中，放置于特定儲(chǔ)存條件或加溫條件下達(dá)特定數(shù)量的時(shí)間。制劑賦形劑選自由PTH、甲基-β-環(huán)糊精(M-β-CD)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二癸酰基磷脂酰膽堿(DDPC)、氯代丁醇(CB)、苯甲酸鈉(NaBZ)、聚山梨酯80和山梨醇組成的組。如果有必要，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整制劑的起始pH至4.0或4.5。表2中顯示被檢測的制劑。表2.各種鼻內(nèi)PTH制劑的組成 據(jù)報(bào)道，可注射FORTEO

(成分特立帕肽、冰醋酸、醋酸鈉、甘露醇、間甲酚和水)的儲(chǔ)存條件為2-8℃達(dá)28天(4周)。在固定的時(shí)間間隔通過利用HPLC測定所剩PTH相對(duì)于起始PTH的百分比，來監(jiān)測PTH制劑#1、#3、#4和#7的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。在穩(wěn)定性研究中使用的所有四種制劑包括作為防腐劑的CB且pH為4.0。表3和表4的結(jié)果表明PTH鼻內(nèi)制劑#1、#3、#4和#7可以安全地儲(chǔ)存在5℃和25℃至少4周而沒有穩(wěn)定性的顯著下降。制劑#1、#3、#4和#7在5℃儲(chǔ)存時(shí)保持穩(wěn)定至少24周。制劑#7為在5℃和25℃所檢測的制劑中最穩(wěn)定。PTH鼻內(nèi)制劑在5℃至少24周的儲(chǔ)存條件比可注射FORTEO的當(dāng)前所推薦的儲(chǔ)存條件長。
表3.PTH制劑在5℃時(shí)的穩(wěn)定性百分比
表4.PTH制劑在25℃時(shí)的穩(wěn)定性百分比
沒有緩沖劑的PTH制劑的穩(wěn)定性的另外表征在30℃(表5)、40℃(表6)和50℃(表7)下進(jìn)行。在第1周、第2周、第3周和第4周時(shí)間點(diǎn)測定從開始到現(xiàn)在剩余PTH的百分比。沒有緩沖劑的30℃的數(shù)據(jù)和來自6,770,623號(hào)美國專利的含緩沖劑的可注射制劑(′623制劑)的數(shù)據(jù)相比較。所述′623制劑含0.1mg/mL rhPTH(1-34)、50mg/mL甘露醇、2.5mg/mL間甲酚、0.52mg/mL醋酸和0.12mg/mL醋酸鈉。沒有緩沖劑的制劑#1和#4在30℃具有與沒有緩沖劑的′623制劑30℃時(shí)相似的穩(wěn)定性。處于50℃時(shí)，制劑#1、#3、#4和#7具有比′623制劑更強(qiáng)的穩(wěn)定性。40℃和50℃下與其它測試的制劑相比制劑#7最穩(wěn)定。
表5.有和沒有緩沖劑在30℃時(shí)的穩(wěn)定性百分比
表6.PTH制劑在40℃時(shí)的穩(wěn)定性百分比
表7.有和沒有緩沖劑在50℃時(shí)的穩(wěn)定性百分比
還檢測了5℃和30℃的儲(chǔ)存溫度下儲(chǔ)存29天時(shí)PTH制劑#1和#4的使用中(in-use)和噴射穩(wěn)定性。結(jié)果包括肽回收百分?jǐn)?shù)和總肽雜質(zhì)百分?jǐn)?shù)?！笆褂弥小毖芯恐写嬖谥聞?dòng)器且最初瓶子被預(yù)啟動(dòng)(primed)5次，然后在經(jīng)受儲(chǔ)存溫度后每天用手致動(dòng)一次。所有瓶子在室溫下暴露30分鐘后被送回5℃和30℃穩(wěn)定室。每天致動(dòng)所有瓶子，收集驅(qū)出的樣品并保存在-20℃直至被安排用于HPLC測量。在第0、8、15、22、29天為使用中(即有致動(dòng)器的瓶中)和噴射(即測量通過致動(dòng)器從瓶中產(chǎn)生的噴霧)樣品安排HPLC測量。穩(wěn)定性的HPLC測量值在表8(肽回收百分?jǐn)?shù))和表9(總雜質(zhì)百分?jǐn)?shù))顯示。
表8.5℃和30℃時(shí)使用中的和噴射的肽回收百分?jǐn)?shù)
表9.5℃和30℃時(shí)使用中的和噴射的總肽雜質(zhì)
售出、使用中和噴射穩(wěn)定性研究表明制劑#4(含聚山梨酯80)比制劑#1(含EDTA)更穩(wěn)定。進(jìn)一步研究確認(rèn)EDTA獨(dú)自或與聚山梨酯80組合劣于無EDTA的PTH制劑。僅有EDTA的制劑引起沉淀和膠凝。當(dāng)EDTA與其它賦形劑組合加入時(shí)，觀察到穩(wěn)定性的提高。穩(wěn)定性研究表明聚山梨酯80獨(dú)自以及與其它賦形劑組合增強(qiáng)穩(wěn)定性。PTH制劑中乙醇的加入不增強(qiáng)穩(wěn)定性。NaBz促使PTH制劑混濁，同時(shí)結(jié)果表明CB是穩(wěn)定PTH制劑的優(yōu)選防腐劑。實(shí)施例6pH穩(wěn)定性 檢測以下制劑的pH穩(wěn)定性(表10)。
表10.pH穩(wěn)定性制劑
首先利用pH滴定檢測無PTH的溶液。在pH滴定前所有三個(gè)稀釋液的pH值都為4.0。pH波動(dòng)起因于含1-4mg/mL PTH的FORTEO

、MBCD和吐溫制劑中堿的加入，并且所儲(chǔ)存的無緩沖劑的所述FORTEO

、MBCD和吐溫制劑在5℃和25℃儲(chǔ)存至少8周(表11)后保持PH 4.0至4.2。這些數(shù)據(jù)表明沒有緩沖劑時(shí)的PTH制劑組合物穩(wěn)定保持pH。
表11.MBCD和吐溫制劑在5℃和25℃的pH穩(wěn)定性
*CB為2.5mg/mL實(shí)施例7 人受治療者中的藥代動(dòng)力學(xué)(PK) 在兩個(gè)劑量水平評(píng)價(jià)本發(fā)明的PTH鼻噴霧制劑(參見實(shí)施例5，表2)的吸收和安全性。在兩個(gè)劑量水平比較皮下給藥的FORSTEO(Eli Lilly UK)與本發(fā)明的兩個(gè)PTH鼻噴霧制劑的生物利用度。PTH鼻噴霧將以經(jīng)過致動(dòng)器的鼻內(nèi)施藥的瓶裝液體提供給臨床。含NaBz作為防腐劑的制劑#3、#6和#7用于PK研究。制劑#3pH為4.5，而其它所有制劑pH為4.0。
PTH溶液提供在多單元?jiǎng)┝咳萜髦幸悦看沃聞?dòng)遞送0.1mL計(jì)量劑量的藥物產(chǎn)品。加入鹽酸用于pH調(diào)整以達(dá)到適當(dāng)?shù)?.0±0.2或4.5±0.2的目標(biāo)pH。在固定的時(shí)間間隔處監(jiān)測制劑的穩(wěn)定性。
本研究為單一場所的、標(biāo)簽公開的、活性受控制的、5期交叉的、劑量變化的研究，所述研究含6名健康男性志愿者和6名健康女性志愿者。商業(yè)可得到的制劑特立帕肽、FORSTEO為活性對(duì)照。5個(gè)研究時(shí)期如下 第1期所有受治療者皮下接受20μg FORSTEO(注射)。
第2期所有受治療者接受500μg鼻內(nèi)劑量的特立帕肽，100微升如實(shí)施例5的表2中描述的制劑#6的鼻內(nèi)制劑的噴霧。
第3期所有受治療者接受200μg鼻內(nèi)劑量的特立帕肽，100微升如實(shí)施例5的表2中描述的制劑#3的鼻內(nèi)制劑的噴霧。
第4期所有受治療者接受1000μg鼻內(nèi)劑量的特立帕肽，100微升如實(shí)施例5的表2中描述的制劑#7的鼻內(nèi)制劑的噴霧。
第5期所有受治療者接受400μg鼻內(nèi)劑量的特立帕肽，100微升如實(shí)施例5的表2中描述的制劑#3的鼻內(nèi)制劑的噴霧兩次。
在給藥后0(即給藥前)、5、10、15、30、45、60、90分鐘和2、3和4小時(shí)收集用于PK的血液樣品并利用有效的方法分析。由于生物測定與內(nèi)源性PTH(1-84)完全交叉的反應(yīng)性，所有數(shù)據(jù)用給藥前的值進(jìn)行校正。當(dāng)所述校正引起負(fù)的給藥后值時(shí)，設(shè)定所有這些負(fù)值為“缺失”。為了評(píng)價(jià)PK和從基線的變化，以＜LLOQ報(bào)道的值被設(shè)定至二分之一LLOQ。利用WinNonlin計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括AUClast、AUCinf、Cmax、t1/2、tmax和Ke。利用方差分析的方法評(píng)價(jià)受治療者之間的藥物代謝性能的差異，用于檢測物和參照物的比較。在2期設(shè)計(jì)以及為所考慮的兩個(gè)產(chǎn)品的每一個(gè)引入主效應(yīng)期的基礎(chǔ)上，進(jìn)行方差分析(ANOVA)(Snedecor GW和Cochran WG，單向分類---方差分析，在統(tǒng)計(jì)方法中(One-WayClassifications～Analysis of Variance.InStatistical Methods)第6版，IowaState University Press，Ames，IA，(1967)第258-98頁)。(在模型中固定其它，受治療者(順序)為隨機(jī)結(jié)果)。為每一個(gè)劑量的特立帕肽鼻噴霧與參照的比較創(chuàng)建一個(gè)單獨(dú)的模型。就Cmax、AUClast和AUCinf而言，試驗(yàn)劑量/參照的比產(chǎn)生90％的置信區(qū)間。這些值在分析前轉(zhuǎn)化為自然對(duì)數(shù)log(ln)。通過取所述90％的置信區(qū)間的反對(duì)數(shù)獲得這些幾何平均比相應(yīng)的90％的置信區(qū)間，以得到對(duì)數(shù)尺度上所述平均值的差異。進(jìn)行這些分析不是為了證明生物等效性而是僅為信息的目的。因此，為了說明多因素分析，不調(diào)整每一個(gè)配對(duì)比較的置信水平。本研究為僅產(chǎn)生假設(shè)性的。對(duì)于tmax，利用Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)(Steinijans VW和Diletti E(1983)Eur JClin Pharmacol，24127-36)進(jìn)行分析以確定在給定的試驗(yàn)組和參照組之間是否有差異存在。
可能時(shí)，根據(jù)每一個(gè)檢品特立帕肽的血漿濃度，依照模型獨(dú)立方法，針對(duì)每一名受治療者，計(jì)算以下PK參數(shù) Cmax最大觀察濃度 tmax達(dá)到最大濃度的時(shí)間 AUClast濃度—時(shí)間曲線下面積，所述時(shí)間從0開始至最后可測量濃度的時(shí)間，所述面積根據(jù)線性梯形法則計(jì)算。
當(dāng)數(shù)據(jù)允許這些參數(shù)的精確的估算時(shí)，計(jì)算以下參數(shù) AUCinf外推濃度—時(shí)間曲線下面積至無限大，利用以下公式計(jì)算 AUCinf＝AUClast+Ct/Ke，其中Ct為最后可測量濃度，Ke為表觀末端相速率常數(shù)。
Ke表觀末端相速率常數(shù)，其中Ke為末端相中濃度的自然對(duì)數(shù)與時(shí)間的曲線的線性回歸的斜率大小。
t1/2表觀末端相半衰期(可能存在時(shí))，其中t1/2＝(ln2)/Ke。
所有數(shù)據(jù)用施藥前的值進(jìn)行校正。當(dāng)所述校正引起負(fù)的施藥后值時(shí)，設(shè)定所有這些負(fù)值為“缺失”。為了評(píng)價(jià)pK和從基線的變化，以＜LLOQ報(bào)道的值被設(shè)定至二分之一LLOQ。在所有PK參數(shù)的計(jì)算中使用實(shí)際的(而非名義上的)取樣次數(shù)。
圖1和圖2分別顯示1-5期平均血漿濃度相對(duì)時(shí)間的曲線，和Cmax與平均值的比，低劑量制劑對(duì)Forsteo的曲線。
表12顯示了每一種制劑和特立帕肽劑量的算術(shù)平均藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)的總括。FORSTEO、制劑#6和#3的低劑量鼻制劑的平均tmax分別為0.68、0.57和0.17小時(shí)。每個(gè)低劑量制劑的Cmax分別比FORSTEO的Cmax高1.6和2.4倍。每個(gè)低劑量制劑的AUClast分別比FORSTEO的AUClast高1.23和1.45倍。
表12.制劑和劑量的算術(shù)平均藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù) 另外，利用單Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)對(duì)每種制劑的tmax結(jié)果與FORSTEO對(duì)照進(jìn)行比較。結(jié)果(即p值)如表13所示。
表13.FORSTEO和鼻制劑的Tmax比較 因此，相對(duì)于FORSTEO而論制劑之間的tmax值沒有差異。
為了比較所述給定制劑和FORSTEO對(duì)照，計(jì)算了Cmax、AUClast和AUCinf的比值的90％的置信區(qū)間。在配對(duì)的基礎(chǔ)上進(jìn)行每種產(chǎn)品和FORSTEO的比較，但是因?yàn)楸狙芯康男再|(zhì)，多個(gè)檢驗(yàn)不包括校正。
表14顯示利用非房室模型的清除率概要 表14.清除率概要 表15顯示每種制劑和特立帕肽劑量的變異系數(shù)百分比的概要。根據(jù)Cmax和AUClast，制劑#3的％CV比制劑#6、制劑#7或FORSTEO的％CV低。
表15.制劑和劑量的變異系數(shù)百分比 表16顯示基于AUClast的每種制劑與FORSTEO產(chǎn)品比較的相對(duì)生物利用度百分比的概要。制劑#3(低和高劑量)的生物利用度為12-15％，而制劑#6和制劑#7為約5-8％。
表16.與FORSTEO相比較，制劑和劑量的相對(duì)生物利用度 利用WinNonLin 5.0進(jìn)行試探的隔室分析以比較每種制劑的吸收系數(shù)和清除系數(shù)。進(jìn)行Ka和Ke數(shù)據(jù)的混合模型方差分析，其中包括作為隨機(jī)變量的受治療者，并且利用Tukey-Kramer多重比較過程對(duì)這些結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步分析。表17顯示單個(gè)Ka和Ke數(shù)據(jù)。與FORSTEO相比鼻吸收率沒有顯著差異(p＝0.50)，然而高劑量鼻制劑#3的清除率顯著快于FORSTEO(p＝0.02)。當(dāng)看每個(gè)單一時(shí)間點(diǎn)每低劑量制劑的平均Cmax的比值時(shí)，也能觀察到上述情況。
表17.每個(gè)制劑的吸收系數(shù)和消除系數(shù) 根據(jù)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，與FORSTEO相比兩個(gè)鼻制劑都有較大的Cmax和AUC。鼻制劑給藥后不久就出現(xiàn)tmax，尤其是制劑#3。吸收率在鼻和皮下制劑之間沒有顯著性差異(p＝0.5)，但是消除速率較快尤其是低劑量的制劑#3(p＝0.02)。然而與FORSTEO相比，除了低劑量的制劑#3外，鼻制劑之間約為1小時(shí)的t1/2非常相似，其中編號(hào)1和5的受治療者可能具有表觀溢出值。如果除去這兩名受治療者，t1/2為1.5小時(shí)，與FORSTEO相同。清除率的明顯差異可能反映與制劑#3相比皮下產(chǎn)品以及制劑#6和#7較慢的洗入(wash-in)。
與FORSTEO相比，兩個(gè)鼻制劑具有極其相似的t1/2。根據(jù)清除率和回歸分析，制劑#3從200μg至400μg劑量也顯示良好的劑量線性。另外，根據(jù)變異系數(shù)百分比，制劑#3的變化比制劑#6和#7以及FORSTEO少。因此，本發(fā)明的鼻內(nèi)制劑的Cmax和AUC值超過了當(dāng)前市場化的皮下產(chǎn)品。這表明市場化產(chǎn)品的水平可以被鼻施予產(chǎn)品超越，并且如果需要更接近當(dāng)前所批準(zhǔn)的產(chǎn)品的血漿濃度時(shí)，也可以降低鼻制劑中PTH的濃度。
實(shí)施例8 小滴尺寸和噴霧特征 利用帶有36mm汲取管的Pfeiffer 0.1ml鼻噴霧泵65550評(píng)價(jià)兩種特立帕肽鼻內(nèi)制劑(參見實(shí)施例5，表2)的小滴尺寸和噴霧特征。通過激光衍射利用Malvern MasterSizer S組件顆粒尺寸分析儀和MightyRunt自動(dòng)啟動(dòng)臺(tái)表征小滴尺寸分布。單個(gè)噴霧小滴分布為容重測量。利用噴霧VIEWNSP高速光學(xué)噴霧鑒定系統(tǒng)(Spray VIEW NSP High Speed Optical SprayCharacterization System)和噴霧VIEW NSx自動(dòng)啟動(dòng)系統(tǒng)表征噴流型。數(shù)據(jù)在表18中顯示。制劑#5和#2的樣品50％的總液體體積的小滴的直徑分別由30微米和294微米的小滴組成。制劑#5和#2分別有3％和1％的總液體體積，其中小滴尺寸小于10微米。制劑#5和#2的橢圓率分別為1.3和1.4。
表18.特立帕肽鼻內(nèi)制劑的小滴尺寸和橢圓率 PTH制劑從兩個(gè)由兩家生產(chǎn)商生產(chǎn)的鼻泵模型[Pfeiffer(SAP#65550)與Valois(Model EquadelTM 100)比較]驅(qū)出時(shí)，比較了PTH的噴霧特征和藥物純度。本研究中試驗(yàn)了兩種制劑，制劑#5和#2(實(shí)施例5，表2)。在所有噴霧試驗(yàn)中引入一組安慰劑(不含藥)作為對(duì)照。為每組提供6個(gè)瓶子用于噴霧表征試驗(yàn)。準(zhǔn)備這些瓶子并放置在5℃直至用于試驗(yàn)。針對(duì)小滴尺寸分布和泵遞送參數(shù)，同時(shí)檢測每組六個(gè)瓶子中的三個(gè)并進(jìn)行評(píng)價(jià)。
表19和20顯示比較的結(jié)果。表19.不同致動(dòng)器小滴尺寸的比較
*致動(dòng)產(chǎn)生了干擾測量的泡沫表20.不同致動(dòng)器的橢圓率比較 實(shí)施例9合成和重組PTH1-34在大鼠中的施藥增加骨量 在雄性大鼠中研究合成的人類PTH1-34和重組的PTH1-34(Forteo

，EliLilly U.S.)的合成作用。將普通的媒介物(由冰醋酸、間甲酚、無菌水、醋酸鈉和甘露醇組成)用于每一個(gè)治療組和媒介物對(duì)照。
首次用于試驗(yàn)的5周齡實(shí)驗(yàn)性雄性Sprague Dawley大鼠通過皮下(SQ)施藥接受媒介物或兩個(gè)劑量水平(16μg/kg/d或80μg/kg/d)中的一個(gè)劑量的合成或重組PTH1-34。動(dòng)物根據(jù)體重被隨機(jī)分入治療組(10只大鼠/組)。一天一次地給每只動(dòng)物皮下注射媒介物或施予試驗(yàn)PTH1-34處理，從第1天開始并連續(xù)持續(xù)21天。研究過程中，一天進(jìn)行兩次籠側(cè)觀察，一周進(jìn)行一次體重測量。動(dòng)物被施予總共兩個(gè)劑量的鈣黃綠素，一個(gè)劑量在預(yù)定解剖前6天，一個(gè)劑量在預(yù)定解剖前2天。在第21天，在選擇的處理組中收集來自動(dòng)物的血液樣品用于藥代動(dòng)力學(xué)分析。在治療期結(jié)尾和血液收集后第21天，動(dòng)物被處安樂死并收集骨骼標(biāo)本。表21顯示處理組。表21.用于骨量研究的處理組 利用外周定量計(jì)算體層攝影術(shù)(pQCT)分析右股骨遠(yuǎn)側(cè)和干體中間區(qū)域中的骨骼，并且通過在骨股中段和骨股遠(yuǎn)端的骨髓腔處的三點(diǎn)彎曲(three-point bending)確定骨強(qiáng)度。整個(gè)左脛骨經(jīng)受雙重X-射線吸收掃描(DXA)。
在研究過程中所有動(dòng)物的體重都增加。治療組之間的體重沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。利用DXA單獨(dú)分析脛骨的四個(gè)區(qū)域(整個(gè)脛骨和遠(yuǎn)端、中間、近端脛骨)的骨礦物質(zhì)含量、面積和密度。
與媒介物對(duì)照相比，兩種形式的人類PTH1-34的施藥在所觀察的每個(gè)位置引起骨礦物質(zhì)含量和密度的顯著增加。骨礦物質(zhì)密度的增加伴隨著在股骨干和股骨遠(yuǎn)端的骨髓腔中骨小梁處骨強(qiáng)度的增加。骨量和強(qiáng)度的增加是劑量依賴的。在合成和重組型PTH1-34之間，在兩個(gè)所試驗(yàn)的劑量16和80μg/kg/d處骨骼應(yīng)答沒有顯著差異。
這些研究證實(shí)合成和重組型人類PTH1-34對(duì)骨骼顯示可比較的合成作用。實(shí)施例10在大鼠中PTH1-34鼻內(nèi)給藥的合成作用和毒性結(jié)果 在雄性和雌性Crl:CD(SD)大鼠中評(píng)價(jià)PTH1-34制劑的毒性和毒物代謝動(dòng)力學(xué)。通過鼻內(nèi)滴注每天一次地施予大鼠PTH1-34(合成型)，持續(xù)至少13周。為了比較，一組通過皮下注射接受商業(yè)可得的重組PTH1-34。毒性的評(píng)估基于死亡率、臨床觀察、眼科檢查(ophthalmic examination)、體重、食物消耗、臨床和解剖病理學(xué)，以及毒物代謝動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)進(jìn)行。本研究中使用兩種合成的PTH1-34制劑，低濃度和高濃度的PTH-072-1和PTH-074(如表22所示制劑)。
表22.PTH-072-1和PTH-074的鼻內(nèi)制劑 根據(jù)體重、體表面積和鼻表面區(qū)域確定大鼠中的劑量。用于臨床研究的PTH1-34的代表濃度被認(rèn)為是1.5mg/mL和3.0mg/mL(且劑量體積為100μL)。對(duì)于較低濃度，70kg的人根據(jù)體重將接受2.1μg/kg的劑量。較高濃度時(shí)，人根據(jù)體重將接受4.3μg/kg的劑量。大鼠研究組如表23所示。
表23.大鼠毒性和毒物代謝動(dòng)力學(xué)研究研究組



安慰劑為0.9％氯化鈉，USP(無菌鹽水)。


在第86和第90天第7和第8組的四只動(dòng)物/性別以及第9組中的四只雌性接受鈣黃綠素(經(jīng)腹腔內(nèi)注射10mg/kg)。
當(dāng)在雄性和雌性大鼠中施予PTH-072-1制劑時(shí)，PTH1-34的t1/2范圍為14至21分鐘；雄性和雌性兩者的Tmax范圍為5至15分鐘。雄性大鼠Cmax范圍為5,041pg/mL至12,911pg/mL，在雌性大鼠中范圍為3,044pg/mL至5106pg/mL。AUClast在雄性中范圍為100,038pg·min/mL至457,644pg·-min/mL，在雌性中范圍為58,890pg·-min/mL至73,444pg·-min/mL。與PTH-072-1制劑的臨床研究相比，雄性和雌性大鼠的AUQlast值分別超過人AUClast值80倍和13倍。
當(dāng)施予PTH-074-1制劑時(shí)，PTH1-34的t1/2范圍為12至24分鐘；雄性和雌性兩者的Tmax范圍為5至30分鐘。雄性大鼠Cmax范圍為12,251pg/mL至35,964pg/mL，在雌性大鼠范圍中為3,679pg/mL至17,175pg/mL。AUClast在雄性中范圍為252,790pg·-mim/mL至1,010,348pg·-min/mL，在雌性中范圍為78,059pg·-min/mL至377,278pg·-min/mL。與PTH-074-1制劑的臨床研究相比，雄性和雌性大鼠的AUClast值分別超過人AUClast值71倍和27倍。
當(dāng)通過注射施予時(shí)，PTH1-34的t1/2范圍為15至23分鐘；雌性大鼠的Tmax為5分鐘。Cmax和AUClast范圍分別為7,721pg/mL至12,200pg/mL，和140,945pg·-min/mL至296,908pg·-min/mL。
鼻內(nèi)組和皮下給藥組中PTH1-34的t1/2和Tmax相似。雄性大鼠Cmax和AUClast比雌性大鼠高，這是PTH1-34的期望的結(jié)果。PTH-072-1制劑的生物利用度顯示稍高。每個(gè)制劑的最高劑量超過在人中通過鼻內(nèi)施藥PTH1-34進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)所期望的劑量。對(duì)于鼻表面區(qū)域，大鼠中劑量倍數(shù)為約5倍或更高。根據(jù)體表面積或體重，大鼠中劑量倍數(shù)分別約為17倍或95倍或更高。這些藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果證實(shí)所選擇的劑量足以評(píng)價(jià)通過鼻內(nèi)滴注施予時(shí)PTH1-34的鼻毒性和全身毒性。
不考慮施藥途徑、劑量水平或制劑，沒有發(fā)現(xiàn)PTH1-34相關(guān)的臨床體征、眼科檢查、體重變化或食物消耗變化。研究中的任何動(dòng)物的鼻甲組織中沒有發(fā)現(xiàn)被認(rèn)為是歸因于PTH1-34的鼻內(nèi)施藥的變化。切開鼻腔以使鼻腔的有意義的區(qū)域呈現(xiàn)出來，檢查鼻腔的軟組織(粘膜上皮)或硬組織(基于骨和軟骨的結(jié)構(gòu))。
胸骨和股骨中骨小梁的評(píng)價(jià)沒有顯示任何被認(rèn)為是不利的影響。相反地，骨小梁的變化顯示觀察與PTH1-34的合成作用相一致。針對(duì)鼻內(nèi)給藥25μg/kg/天SQ和200μg/kg/天PTH-072-1或500μg/kg/天PTH-074-1的雌性，注意觀察胸骨和股骨中增厚的骨小梁。低劑量鼻內(nèi)PTH1-34組中的雌性，100和200μg/kg/天PTH-072-1和PTH-074-1與對(duì)照雌性相似。在鼻內(nèi)施予任一PTH1-34制劑的雄性動(dòng)物中，胸骨和股骨中的骨小梁增厚。在PTH-074-1制劑中被施予500μg/kg/天和200μg/kg/天PTH1-34的雄性，以及PTH-072-1制劑中施予200μg/kg/天的雄性中觀察到所述增厚。PTH-072-1的低劑量(100μg/kg/天)雄性與對(duì)照相似。在相應(yīng)的鼻內(nèi)施予劑量，雄性中的合成作用比雌性中大。
總結(jié) 發(fā)現(xiàn)沒有觀察到動(dòng)物健康、臨床病理學(xué)或組織/器官形態(tài)，這些表明鼻內(nèi)滴注PTH1-34沒有預(yù)見的毒性結(jié)果。與通過皮下注射給藥的動(dòng)物相比，通過鼻內(nèi)滴注接受PTH1-34的動(dòng)物之間沒有觀察到差異。檢查多個(gè)代表整個(gè)鼻腔和代表組織類型的切片表明每天一次鼻內(nèi)高劑量(和濃度)PTH1-34的施藥被很好的耐受。另外，鼻內(nèi)PTH1-34施藥后骨小梁的變化顯示觀察與PTH1-34的合成作用一致。
實(shí)施例11 狗中鼻內(nèi)施藥PTH1-34的合成作用和毒性結(jié)果 通過對(duì)狗每天一次鼻內(nèi)滴注PTH1-34的施藥，持續(xù)至少13周后，研究PTH1-34毒性和毒物代謝動(dòng)力學(xué)。為了比較，另外一個(gè)組通過皮下注射接受重組PTH1-34。
雄性和雌性比格犬被分成6個(gè)研究組。分到第1至第5組的動(dòng)物分別接受鼻內(nèi)滴注陰性對(duì)照(0.9％注射用氯化鈉，USP)、PTH-072制劑(實(shí)施例10，表22)中40或80μg/kg體重/天(μg/kg/天)的PTH1-34(合成型)、或PTH-074-1制劑(實(shí)施例10，表22)中80或200μg/kg/天的PTH1-34(合成型)。表24顯示了狗研究組。
表24.用于狗毒性和毒物代謝動(dòng)力學(xué)研究的研究組 對(duì)于PTH-072-1制劑，PTH1-34的Tmax范圍為8到26分鐘。Cmax和AUClast呈現(xiàn)劑量依賴性。對(duì)于PTH-074-1制劑，PTH1-34的Tmax范圍為8到24分鐘。皮下注射PTH1-34后，PTH1-34的Tmax范圍為13到26分鐘。鼻內(nèi)施藥之后，由Cmax、AUClast和AUCinf確定的皮下注射的全身暴露處于PTH1-34的低劑量和高劑量中間。
兩種鼻內(nèi)制劑處于較高濃度劑量時(shí)PTH1-34的相對(duì)生物利用度較高。PTH-072-1制劑中PTH1-34的生物利用度更高。每種制劑中PTH1-34的Tmax、Cmax和AUClast與峰水平相一致，所述峰水平在給藥后不久獲得并在給藥后幾個(gè)小時(shí)內(nèi)返回至基線；這種一般的特性對(duì)于誘導(dǎo)PTH1-34的合成作用是期望的。
與臨床劑量相比較，對(duì)于低劑量鼻內(nèi)制劑，鼻表面劑量第一天約為0.9倍和研究結(jié)束時(shí)至少為1.5倍。對(duì)于高劑量鼻內(nèi)制劑，鼻表面區(qū)域劑量第1天至少為1.0倍和研究結(jié)束時(shí)至少為3.8倍或更高。以代表性劑量，PTH1-34的Cmax和AUClast分別為至少7倍和10倍，狗中比人中所發(fā)現(xiàn)的值高。
收集死亡率、臨床體征、大體上的鼻道觀察、肉眼所見、心電圖測量、血壓和心率差異、體重、食物消耗、臨床和解剖病理學(xué)，和毒物代謝動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)的結(jié)果。研究中的所有動(dòng)物都存活至預(yù)定解剖時(shí)。沒有注意到PTH1-34相關(guān)臨床體征、肉眼所見、心電圖差異、血壓和心率差異、體重或食物消耗的變化。切開鼻腔以使鼻腔有意義的區(qū)域呈現(xiàn)出來，檢查鼻腔的軟組織(如粘膜上皮)或硬組織(如基于骨和軟骨的結(jié)構(gòu))。鼻組織沒有組織學(xué)變化，認(rèn)為這歸因于PTH1-34的鼻內(nèi)施藥。
在鼻內(nèi)或皮下施予PTH1-34的狗中報(bào)道了被認(rèn)為與PTH1-34的施藥相關(guān)的合成作用。雄性和雌性的平均總血清鈣在表25中顯示。PTH-072-1制劑、PTH-074-1制劑中PTH1-34的鼻內(nèi)施藥和皮下注射引起血清鈣最小至適度的增加(＞12mg/dL)，所述增加是所期望的PTH1-34的生理作用。在給藥后2、4和6小時(shí)注意到血清鈣的增加，在第2或第4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)達(dá)到峰水平。在給藥時(shí)間點(diǎn)前注射PTH1-34，而不是鼻內(nèi)制劑，產(chǎn)生提高的血清鈣水平。注射組和兩個(gè)高劑量鼻內(nèi)制劑組的組平均血清鈣的絕對(duì)水平和具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性提高的頻率是相似的，但注射組稍高。鼻內(nèi)制劑的變化大小為劑量依賴的。血離子鈣同總鈣一樣遵循同樣的一般模式。
所觀察的結(jié)果的時(shí)間和強(qiáng)度排除了分解代謝作用的可能性。相反，生物動(dòng)力學(xué)作用是合成代謝藥物作用之一。動(dòng)物中的這種合成作用可預(yù)測人類骨折抗力并被FDA用作預(yù)測器。
短暫提高的血清鈣是PTH1-34的預(yù)期作用，并且沒有注意到與血清鈣的短暫提高相關(guān)的不利的臨床觀察。
表25.平均總血清鈣*P＜或＝0.05
(大體上的)鼻道檢查表明，與安慰劑對(duì)照相比，在PTH1-34治療的動(dòng)物中(皮下和鼻內(nèi)施藥兩者)均呈現(xiàn)紅斑發(fā)生率增加。已知PTH1-34對(duì)血管緊張度有作用，并且紅斑可能是PTH1-34藥理的反映。
正常的與年齡相關(guān)的血清堿性磷酸酶活性的減弱是PTH1-34的另一個(gè)作用。在第93天安慰劑對(duì)照的雄性和雌性狗平均血清堿性磷酸酶活性分別下降約47％和48％。PTH1-34治療組(皮下和鼻內(nèi)施藥兩者)都不顯示堿性磷酸酶活性大于30％的下降。高劑量鼻內(nèi)組中雄性和注射組中雄性狗血清堿性磷酸酶活性的減弱具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。
胸骨和股骨中骨小梁的評(píng)價(jià)沒有顯示任何被認(rèn)為是不利的影響。相反地，骨小梁的變化顯示觀察與PTH1-34的合成作用相一致。以高劑量PTH-072-1和PTH-074-1皮下或鼻內(nèi)給藥的狗中，觀察到胸骨和股骨中與PTH1-34相關(guān)的最小程度的增厚的骨小梁的變化。
總結(jié) 利用制劑PTH-072-1或PTH-074-1的PTH1-34的鼻內(nèi)滴注沒有觀察到動(dòng)物健康、臨床病理或組織/器官形態(tài)指征的毒性結(jié)果。
利用PTH1-34的鼻內(nèi)劑量觀察到血清鈣濃度的提高。提高的血清鈣濃度是PTH的合成代謝的結(jié)果。鼻內(nèi)和皮下PTH1-34治療的動(dòng)物中更高的堿性磷酸酶活性暗示成骨細(xì)胞的活性。在PTH1-34治療的動(dòng)物的股骨和胸骨中注意到最小程度增厚的骨小梁的更高的發(fā)生率。
在大鼠和狗中的合成作用和毒性研究表明鼻內(nèi)施用途徑為一種有效施用PTH1-34的方式。這些結(jié)果表明所述PTH1-34制劑的安全性和有效性。另外，血清鈣的瞬間增加、更高的堿性磷酸酶活性以及骨小梁的增厚預(yù)示在鼻內(nèi)PTH增加人的骨量、增加骨強(qiáng)度和降低骨折發(fā)病率的能力。
雖然為了達(dá)到清楚理解的目的，本發(fā)明前述已經(jīng)通過實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)地描述，但是對(duì)專業(yè)人員來說顯然通過所公開的內(nèi)容能夠理解某些變化和修飾，并且在附加的權(quán)利要求的范圍內(nèi)不需要過度的試驗(yàn)即可實(shí)踐，所述實(shí)施例以例證而非限制的方式呈現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種用于PTH鼻內(nèi)遞送的含水藥物制劑，其包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇組成的組。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物制劑，其中所述表面活性劑為聚山梨酯80。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其中聚山梨酯80在所述制劑中存在少于約50mg/mL。
5.如權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其中聚山梨酯80在所述制劑中存在少于約10mg/mL。
6.如權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其中聚山梨酯80在所述制劑中存在少于約1mg/mL。
7.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述的多元醇選自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、丙三醇和聚乙二醇組成的組。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物制劑，其中所述多元醇為山梨醇。
9.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其進(jìn)一步包含從由氯代丁醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲酸鈉、山梨酸、苯酚和鄰甲酚、間甲酚或?qū)追咏M成的組中選擇的防腐劑。
10.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述制劑具有約3至約6的pH。
11.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述制劑具有約5.0或更低的pH。
12.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述制劑具有約4.0或更低的pH。
13.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述含水溶液為液滴的形式。
14.如權(quán)利要求13所述的藥物制劑，其中所述液滴具有約1微米到1000微米的平均體積中位顆粒尺寸(Dv，50)。
15.如權(quán)利要求13所述的藥物制劑，其中所述液滴具有約5微米到500微米的平均體積中位顆粒尺寸(Dv，50)。
16.如權(quán)利要求13所述的藥物制劑，其中所述液滴具有約10微米到100微米的平均體積中位顆粒尺寸(Dv，50)。
17.如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中對(duì)人受治療者施藥獲取PTH在給藥后的至少10pg/mL的最大血清濃度(Cmax)。
18.一種用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括給所述哺乳動(dòng)物鼻內(nèi)施予有效治療量的PTH制劑，其中所述制劑包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇組成的組。
20.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述制劑具有約3至約6的pH。
21.如權(quán)利要求18所述的方法，其中給所述哺乳動(dòng)物施予含約1μg至約1000μg的PTH(1-34)的劑量。
22.如權(quán)利要求18所述的方法，其中給所述哺乳動(dòng)物施予含約20μg至約400μg的PTH(1-34)的劑量。
23.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人類。
24.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述PTH制劑的施藥引起鈣血漿水平的增加。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述鈣血漿水平的增加與PTH的合成作用相關(guān)聯(lián)。
26.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。
27.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。
28.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述PTH制劑的施藥引起骨量增加。
29.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述PTH制劑的施藥引起骨強(qiáng)度的增加。
30.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述PTH制劑的施藥引起骨折抗力的增加。
31.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述PTH制劑的施藥不會(huì)產(chǎn)生鼻組織的組織學(xué)改變。
32.一種用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括給所述哺乳動(dòng)物鼻內(nèi)施予有效治療量的PTH制劑，其中所述PTH制劑包含PTH(1-34)以及一種或多種從由增溶劑、螯合劑和一種或多種多元醇組成的組中選擇的賦形劑。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述制劑進(jìn)一步包含表面活性劑。
34.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、膽汁鹽類、甘膽酸鈉、脫氧膽酸鹽、梭鏈孢酸衍生物、?；嵌渌箧滄咚徕c、二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脫水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述表面活性劑為DDPC。
36.如權(quán)利要求34所述的方法，其中一種或多種多元醇選自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、丙三醇和聚乙二醇組成的組。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述多元醇為山梨醇。
38.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述螯合劑為EDTA。
40.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述增溶劑選自由環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述增溶劑為環(huán)糊精。
42.一種用于治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括給所述哺乳動(dòng)物鼻內(nèi)施予有效治療量的PTH制劑，其中所述PTH制劑包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑，并且其中所述制劑施藥于所述哺乳動(dòng)物后達(dá)到PTH(1-34)的最大血漿濃度的時(shí)間Tmax小于30分鐘。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中Cmax大于約300pg/ml起因于所述制劑的單次施藥。
44.一種PTH劑型，其包含PTH和非離子去污劑的含水藥物制劑，用于霧化的具有約5％或更多的生物利用度的PTH的鼻內(nèi)遞送，其中所述制劑包含有效治療量的PTH(1-34)和聚山梨酯，并且其中在5℃儲(chǔ)存24周后有至少90％的PTH被回收。
45.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在5℃儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約90％的PTH回收。
46.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在5℃儲(chǔ)存1年后具有大于約90％的PTH回收。
47.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在5℃儲(chǔ)存2年后具有大于約90％的PTH回收。
48.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存24周后具有大于約80％的PTH回收。
49.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約80％的PTH回收。
50.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存1年后具有大于約80％的PTH回收。
51.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存2年后具有大于約80％的PTH回收。
52.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在40℃儲(chǔ)存至少4周后具有大于約65％的可以被回收的PTH回收。
53.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其在使用大于約5天后具有大于約90％的PTH回收。
54.如權(quán)利要求53所述的PTH劑型，其在所有噴霧劑處于30℃/65％的相對(duì)濕度下具有大于約90％的PTH回收。
55.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述pH為約5.0或更小。
56.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述pH為約4.5或更小。
57.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述pH為約4.0或更小。
58.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述pH為約3.5或更小。
59.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約1mg/ml。
60.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約2mg/ml。
61.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約6mg/ml。
62.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約10mg/ml。
63.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約2μg到約1000μg的所述PTH的劑量。
64.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約100μg到約600μg的所述PTH的劑量。
65.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述聚山梨酯在所述制劑中存在至少約1mg/mL。
66.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述聚山梨酯在所述制劑中存在至少約10mg/mL。
67.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其中所述聚山梨酯在所述制劑中存在至少約50mg/mL。
68.如權(quán)利要求44所述的PTH劑型，其進(jìn)一步包含防腐劑。
69.如權(quán)利要求68所述的PTH劑型，其中所述防腐劑為氯代丁醇。
70.一種PTH劑型，其包含含水藥物制劑，用于霧化的具有約10％或更多的生物利用度的PTH的鼻內(nèi)遞送，其中所述制劑包含有效治療量的PTH(1-34)、甲基-β-環(huán)糊精、二癸?；字Ｄ憠A以及乙二胺四乙酸，并且其中在5℃儲(chǔ)存24周后有至少90％的PTH被回收。
71.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在5℃儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約90％的PTH回收。
72.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在5℃儲(chǔ)存1年后具有大于約90％的PTH回收。
73.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在5℃儲(chǔ)存2年后具有大于約90％的PTH回收。
74.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存24周后具有大于約80％的PTH回收。
75.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存至少6個(gè)月后具有大于約80％的PTH回收。
76.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存1年后具有大于約80％的PTH回收。
77.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在25℃儲(chǔ)存2年后具有大于約80％的PTH回收。
78.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其在40℃儲(chǔ)存至少4周后具有大于約65％的PTH回收。
79.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其使用大于約5天后具有大于約90％的PTH回收。
80.如權(quán)利要求79所述的PTH劑型，其在所有噴霧劑處于30℃/65％的相對(duì)濕度下具有大于約90％的PTH回收。
81.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中所述pH為約5.0或更少。
82.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中所述pH為約4.5或更少。
83.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中所述pH為約4.0或更少。
84.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中所述pH為約3.5或更少。
85.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約1mg/ml。
86.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約2mg/ml。
87.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約6mg/ml。
88.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中PTH的濃度為至少約10mg/ml。
89.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中所述劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約2μg到約1000μg的所述PTH的劑量。
90.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其中所述劑型適合鼻內(nèi)施藥以獲取從約100μg到約600μg的所述PTH的劑量。
91.如權(quán)利要求70所述的PTH劑型，其進(jìn)一步包含防腐劑。
92.如權(quán)利要求91所述的PTH劑型，其中所述防腐劑為氯代丁醇。
93.一種對(duì)人類遞送PTH的方法，其包括將粘膜細(xì)胞層暴露于含PTH(1-34)和非離子表面活性劑的PTH溶液。
94.如權(quán)利要求93所述的遞送PTH的方法，其中所述方法使用非腸胃施藥。
95.如權(quán)利要求94所述的遞送PTH的方法，其中所述施藥方法選自由鼻內(nèi)、口腔、腸胃、陰道和經(jīng)皮組成的組。
96.如權(quán)利要求95所述的遞送PTH的方法，其中所述方法為鼻內(nèi)施藥。
97.如權(quán)利要求96所述的遞送PTH的方法，其中所述鼻內(nèi)施藥包括遞送含尺寸約1微米至約700微米的小滴的氣溶膠。
98.如權(quán)利要求96所述的遞送PTH的方法，其中所述鼻內(nèi)施藥包括遞送含約0.7μg至約25μg PTH每kg患者體重的氣溶膠。
99.如權(quán)利要求96所述的遞送PTH的方法，其中所述鼻內(nèi)施藥包括遞送含約50μg至約800μg PTH的氣溶膠。
100.如權(quán)利要求94所述的遞送PTH的方法，其中所述方法為口服遞送。
101.如權(quán)利要求100所述的遞送PTH的方法，其中所述口服遞送為控制釋放遞送，其中Tmax距釋放時(shí)間小于約40分鐘。
102.一種通過鼻內(nèi)施藥遞送PTH給人類的系統(tǒng)，其包括瓶子中的含PTH(1-34)和非離子表面活性劑的含水PTH溶液，和連接到所述瓶子的且與容器中所述PTH溶液流體相通的小滴產(chǎn)生致動(dòng)器，其中當(dāng)啟動(dòng)所述致動(dòng)器時(shí)所述致動(dòng)器通過致動(dòng)器頂端產(chǎn)生所述PTH溶液的噴霧，其中當(dāng)自所述致動(dòng)器頂端3.0cm高度測量時(shí)所述PTH噴霧具有從約1.0至約1.4的噴流型橢圓率。
103.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約5％的所述小滴尺寸小于10μm。
104.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約1％的所述小滴尺寸小于10μm。
105.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧具有分別為約25mm和約40mm的噴流型長軸和短軸。
106.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約90％的所述小滴尺寸為約250μm或更小。
107.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約90％的所述小滴尺寸為約120μm或更小。
108.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約50％的所述小滴尺寸為約75μm或更小。
109.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約50％的所述小滴尺寸為約50μm或更小。
110.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約10％的所述小滴尺寸為約30μm或更小。
111.如權(quán)利要求102所述的系統(tǒng)，其中所述PTH噴霧包含所述PTH溶液的小滴，其中少于約10％的所述小滴尺寸為約20μm或更小。
112.如權(quán)利要求1所述的制劑用于骨質(zhì)疏松癥或骨量減少的治療。
113.PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。
114.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇組成的組。
115.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述制劑具有約3-6的pH。
116.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中含1μg至1000μg的PTH(1-34)的劑量被施予所述哺乳動(dòng)物。
117.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中含20μg至400μg的PTH(1-34)的劑量被施予所述哺乳動(dòng)物。
118.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述哺乳動(dòng)物為人類。
119.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制劑的施藥引起鈣血漿水平的增加。
120.如權(quán)利要求119所述的PTH的用途，其中所述鈣血漿水平的增加與PTH的合成作用相關(guān)聯(lián)。
121.如權(quán)利要求120所述的PTH的用途，其中所述鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。
122.如權(quán)利要求120所述的PTH的用途，其中所述鈣血漿水平的增加不是骨分解代謝增加的結(jié)果。
123.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制劑的施藥引起骨量增加。
124.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制劑的施藥引起骨強(qiáng)度的增加。
125.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制劑的施藥引起骨折抗力的增加。
126.如權(quán)利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制劑的施藥不會(huì)產(chǎn)生鼻組織的組織學(xué)改變。
127.PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含有效治療量的PTH(1-34)和一種或多種從由增溶劑、螯合劑和一種或多種多元醇組成的組中選擇的賦形劑。
128.如權(quán)利要求127所述的PTH制劑的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包含表面活性劑。
129.如權(quán)利要求128所述的PTH制劑的用途，其中所述表面活性劑選自由非離子聚氧乙烯醚、膽汁鹽類、甘膽酸鈉、脫氧膽酸鹽、梭鏈孢酸衍生物、?；嵌渌箧滄咚徕c、二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脫水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
130.如權(quán)利要求129所述的PTH制劑的用途，其中所述表面活性劑為DDPC。
131.如權(quán)利要求127所述的PTH制劑的用途，其中一種或多種多元醇選自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、丙三醇和乙二醇組成的組。
132.如權(quán)利要求131所述的PTH制劑的用途，其中所述多元醇為山梨醇。
133.如權(quán)利要求127所述的PTH制劑的用途，其中所述螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。
134.如權(quán)利要求133所述的PTH制劑的用途，其中所述螯合劑為EDTA。
135.如權(quán)利要求127所述的PTH制劑的用途，其中所述增溶劑選自由環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
136.如權(quán)利要求135所述的PTH制劑的用途，其中所述增溶劑為環(huán)糊精。
137.PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑，并且其中所述制劑施藥于所述哺乳動(dòng)物后達(dá)到PTH(1-34)的最大血漿濃度的時(shí)間Tmax小于30分鐘。
138.如權(quán)利要求137所述的PTH制劑的用途，其中Cmax大于300pg/ml起因于所述制劑的單次施藥。
全文摘要
所闡述的為一種含PTH(I-34)和非離子表面活性劑的PTH含水藥物制劑、一種含所述制劑的劑型、一種包括將粘膜細(xì)胞層暴露于所述制劑的遞送PTH至人類的系統(tǒng)，和一種使用所述制劑治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，優(yōu)選其中PTH(I-34)施藥之后達(dá)到最大血漿濃度的時(shí)間Tmax小于30分鐘。還闡述了一種治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的方法，其包括鼻內(nèi)施予PTH制劑，所述PTH制劑包含有效治療量的PTH(I-34)以及一種或多種從由增溶劑、螯合劑和一種或多種多元醇組成的組中選擇的賦形劑。包含PTH(1-34)和非離子表面活性劑。還闡述了PTH(1-34)在制備治療哺乳動(dòng)物骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途，其中所述藥物包含有效治療量的PTH(I-34)以及一種或多種從由非離子表面活性劑、增溶劑、螯合劑和一種或多種多元醇組成的組中選擇的賦形劑。
文檔編號(hào)A61K31/716GK101610784SQ200680045726
公開日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2006年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月6日
發(fā)明者亨利·R·康斯坦丁諾, 史蒂文·C·夸伊, 邁克爾·V·泰姆普林, 李靜媛, 安東尼·昔雷諾 申請(qǐng)人:Mdrna有限公司