專利名稱：：A3腺苷受體激動劑在骨關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用的制作方法A3腺苷受體激動劑在骨關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及治療，特別是骨關(guān)節(jié)炎的治療。
背景技術(shù)：
：骨關(guān)節(jié)炎，過去稱作變性關(guān)節(jié)炎，是關(guān)節(jié)炎最常見的形式。它是一種關(guān)節(jié)疾病，在關(guān)節(jié)異?；驌p傷后發(fā)生或在沒有關(guān)節(jié)損傷時即會發(fā)生。該疾病涉及關(guān)節(jié)中軟骨的退化。隨著時間的推移，覆蓋在關(guān)節(jié)中骨的末端的軟骨開始分解，并可能完全被磨損，骨頭將會在一起摩擦，導(dǎo)致疼痛。由于關(guān)節(jié)中的疼痛，會較少使用周圍的肌肉，因此肌肉強(qiáng)度將變?nèi)?。骨關(guān)節(jié)炎的常見癥狀是僵硬、活動受限、疼痛和關(guān)節(jié)變形，受影響的關(guān)節(jié)表現(xiàn)為浮腫、熱潮紅和關(guān)節(jié)的異常增大。男性和女性的骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病率類似。但是，在女性中受影響的關(guān)節(jié)數(shù)量較大，而男性的髖關(guān)節(jié)受疾病侵害的頻率更高。骨關(guān)節(jié)炎的危險因子包括年齡(發(fā)病卑隨著年齡顯著升高)、肥胖、臀部先天發(fā)育不良、意外或運動傷害、關(guān)節(jié)炎病史、藥物、特定的工作類型、手術(shù)和遺傳。骨關(guān)節(jié)炎本身不會對人的生活有很大的影響，但是長期存在的慢性骨關(guān)節(jié)炎會導(dǎo)致疼痛和關(guān)節(jié)變形，因此降低生活質(zhì)量。特別地，已知膝蓋的骨關(guān)節(jié)炎是慢性殘疾的主要原因。已經(jīng)發(fā)展出很多的藥物和治療方法，用于治療骨關(guān)節(jié)炎。治療的主要目的是緩解疼痛，維持關(guān)節(jié)的功能和預(yù)防由于關(guān)節(jié)的功能障礙導(dǎo)致的殘疾。當(dāng)前，還沒有已知的藥物治療能夠逆轉(zhuǎn)軟骨損傷的影響。骨關(guān)節(jié)炎治療主要是涉及治療癥狀。由此，使用皮質(zhì)類固醇類的抗炎物質(zhì)(例如氫化可的;l^和倍他米木》)和4艮多的非甾體抗炎藥(NSAIDs，例如雙氯芬酸、阿司匹林和布洛芬)來治療骨關(guān)節(jié)炎，皮質(zhì)類固醇類的功能是抑制前列腺素合成，非齒體抗炎藥具有止痛和抗炎的作用。但是，由于嚴(yán)重的副作用，這些藥物必須謹(jǐn)慎使用。因此，仍然需要探索和發(fā)展治療骨關(guān)節(jié)炎的新方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了A3腺苷受體激動劑(A3AR激動劑)在制備治療哺乳動物患者的骨關(guān)節(jié)炎的藥物組合物中的應(yīng)用。此外，本發(fā)明提供了一種治療哺乳動物患者的骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括向需要所述治療的患者施用一定量的A3AR激動劑，該量能夠有效地治療或預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。此外，本發(fā)明提供一種治療哺乳動物患者的藥物組合物，包含作為活性成分的A3AR激動劑和藥學(xué)可接受的栽體。A3AR激動劑的治療應(yīng)用可以是其本身，或有時與其他藥物例如甲氨蝶呤(MTX)、類固醇、NSAIDS及其他藥物聯(lián)用。附圖簡述為了理解本發(fā)明并明白如何在實踐中實施，現(xiàn)在將參考附屬的附圖來描述優(yōu)選的實施方案，這些僅僅是非限制性的例子，其中附圖1A-1B的條形圖顯示了如MTT分析所確定的IB-MECA(CF101)或IB-MECA和MTX的聯(lián)合治療對于人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(FLS)(附圖U)或大鼠FLS(附圖IB)增殖的作用。附圖2的圖顯示的是在相同動物內(nèi)注射MIA的膝蓋(右膝)的直徑和未注射MIA的膝蓋(左膝)的直徑之間的差異，在CF101治療(-翻-CFIOI)和未治療(-令-對照)的動物中其是引入MIA后的天數(shù)的函數(shù)。每組包含5只動物。附圖3A-3D是膝蓋的X線照相的圖像，其顯示了與栽體治療的動物(附圖3A和3B，分別為左和右膝)相比，在CFIOI治療的動物(附圖3C和3D,分別為左和右膝)中沒有硬化的正常動物的脛骨骺線。附圖4A-4E是來自CF101治療的(CF101)和未治療的(對照)的0A大鼠的膝關(guān)節(jié)的蛋白質(zhì)提取物的蛋白質(zhì)印跡分析；蛋白質(zhì)提取物是A3AR(附圖4A)、PI3K(附圖4B)、IKK(附圖4C)、NF-kB(附圖4D)、GSK-3P(附圖4E)。示例性實施方案的詳述本發(fā)明在下面的詳述中描述了治療骨關(guān)節(jié)炎的治療方法，包括給其需要的患者施用A3AR激動劑。應(yīng)當(dāng)注意的是，除了所述治療方法，A3AR激動劑在制備施用于患骨關(guān)節(jié)炎的患者的藥物組合物以及治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物組合物也包括在本發(fā)明內(nèi)，其中所述藥物組合物包含有效量的A3AR激動劑和藥學(xué)可接受的載體。在說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"一種"和"所述"，除非上下文另有明確的說明，包括單數(shù)和復(fù)數(shù)。例如，術(shù)語"一種A3AR激動劑"包括一種或多種激動劑。此外，本文使用的術(shù)語"包含"意欲是指方法或組合物包括所列舉的要素，但并不排除其他。類似地，"基本上由......組成"是用于定義包括所列舉的要素但排除對骨關(guān)節(jié)炎具有非常顯著的治療活性的其他要素的方法和組合物。例如，基本上由A3AR激動劑組成的組合物將不包括或僅僅包括輕微量(該量下對于骨關(guān)節(jié)炎沒有顯著的效果)的具有該活性的其他活性成分。同時，本文定義的基本上由A3AR激動劑組成的組合物將不排除分離和純化方法帶來的痕量污染物、藥學(xué)可接受的載體例如磷酸鹽緩沖鹽水、賦形劑、防腐劑等等。"由.......組成"是指排除超過痕量的其他藥物。這些可互換的術(shù)語的每一個所定義的實施方案在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此外，所有的數(shù)值，例如濃度或劑量或其范圍是近似值，可以在指定值的(+)或(-)高達(dá)20%，有時高達(dá)10%的范圍內(nèi)變化。應(yīng)當(dāng)理解的是，盡管并不總是明確指出，但所有的數(shù)值前面都是有術(shù)語"約"的。同時應(yīng)當(dāng)理解的是，盡管并不總是明確指出，但是本文所述的試劑都僅僅是示例性的，它們的等價物是本領(lǐng)域已知的。本發(fā)明提供了一種治療患骨關(guān)節(jié)炎的哺乳動物患者的骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給所述患者施用有效量的A3AR激動劑。在本發(fā)明的全文中，術(shù)語"治療，，包括治療骨關(guān)節(jié)炎以逆轉(zhuǎn)疾病的癥狀，預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生，以及控制和/或緩解骨關(guān)節(jié)炎或其一種或多種癥狀。因此，治療是指施用治療有效量的A3AR激動劑以達(dá)到所需的治療效果。所需的治療效果包括但不限于，改善患者的運動性，減輕關(guān)節(jié)的肺脹和觸痛，減緩或預(yù)防關(guān)節(jié)和周圍組織的退化，減緩由骨關(guān)節(jié)炎的慢性階段導(dǎo)致的任何不可逆損傷，增加疾病急性發(fā)作期間緩和的時間，減小骨關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度或治愈骨關(guān)節(jié)炎，或者使從骨關(guān)節(jié)炎中更快地恢復(fù)，以及減少任一的下列癥狀僵硬、疼痛和關(guān)節(jié)變形、關(guān)節(jié)浮腫、熱潮紅和關(guān)節(jié)異常增大，或者在它們發(fā)生之前預(yù)防出現(xiàn)這些癥狀。在本發(fā)明的全文中，治療也包括預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生(例如，在具有發(fā)生該疾病的高度傾向性的患者例如運動員中)，以及逆轉(zhuǎn)由該疾病引發(fā)的軟骨損傷。至于A3AR激動劑，這些化合物是本領(lǐng)域已知的，并且容易獲得。一般地，A3AR激動劑是能夠與腺苷As受體("A3R")特異性結(jié)合并由此完全或部分活化所述受體而獲得治療效果(在該特定情況下，為抗-骨關(guān)節(jié)炎效果)的任意化合物。因此A3AR激動劑是一種通過結(jié)合并活化A3AR而顯示其主要作用的分子。這就是說，在一定劑量下施用時，它基本上結(jié)合并僅活化A3R:在一個優(yōu)選的實施方案中，A3AR激動劑對人A3AR的親和力(U小于1000nM，需要地小于500nM，有利地小于200nM，甚至小于100nM，典型地小于50nM，優(yōu)選小于20nM，更優(yōu)選小于10nM，理想地小于5nM。Ki越低，有效活化A3R并由此達(dá)到治療效果的(可以使用的)A3AR激動劑的劑量就越低。應(yīng)當(dāng)注意的是，一些A3AR激動劑也會與其他受體以較低的親和力(即Ki較高)相互作用并活化所述受體。在本發(fā)明的全文中，如果其與A3R的親和力比與其他任何腺苷受體的親合力大至少3倍(即，其與A3RKi低至少3倍)，優(yōu)選10倍，希望地至少20倍，最優(yōu)選至少50倍，那么就認(rèn)為該分子是A3AR激動劑(即，通過結(jié)合并活化A3R來顯示其主要作用的分子)。A3AR激動劑與人A3R的親和力，以及與其他的人腺苷受體的相對親和力可以通過很多試驗例如結(jié)合試驗來測定。結(jié)合試驗的例子包括提供具有受體的膜或細(xì)胞，并測定A3AR激動劑置換結(jié)合的放射性激動劑的能力；在功能性試驗中，根據(jù)具體情況使用顯示各種人腺苷受體的細(xì)胞并測定A3AR激動劑活化或使下游信號事件失活的能力例如通過提高或降低cAMP水平來影響所測定的腺苷酸環(huán)化酶；等等。顯然，如果增加A3AR激動劑的施用水平使得其血液水平達(dá)到接近其他腺苷受體的Ki的施用水平，那么在這樣施用后除了會活化A3R，還會發(fā)生這些受體的活化。因此，優(yōu)選以一定劑量施用A3AR激動劑，以使將獲得的血液水平僅僅主要使A3R活化。一些腺苷A3AR激動劑的性質(zhì)及它們的制備方法在文獻(xiàn)中有詳細(xì)描述，特別是US5，688，774;US5，773，423;US5，573，772;US5，443，836;US6，048，865;WO95/02604;WO99/20284;WO99/06053;WO97/27173和WO01/19360，將它們?nèi)客ㄟ^參考引入本文。下面的實例是在US5,688,774的第4欄，第67行-第6欄，第16行；第5欄第40-45行；第6欄，第21-42行；第7欄，第行；第7欄，第34-36行；和第7欄，第60-61行所指出的N6-(3-碘千基)-9-曱基腺嘌呤；N6-(3-碘千基)-9-羥基乙基腺噪呤；R-N6-(3-碘千基)-9-(2，3-二羥基丙基)腺嘌呤；S-N^(3-碘千基)-9-(2，3-二羥基丙基)腺噪呤；N6-(3-碘千基腺嘌呤-9-基)乙酸；N6-(3-碘千基)-9-(3-氰基丙基)腺噪呤；2-氯-N6-(3-碘節(jié)基)-9-甲基腺嘌呤；2-氨基-N6-(3-碘千基)-9-曱基腺嘌呤；2-酰肼基(hydrazido)-N6-(3-碘千基)-9-甲基腺嘌呤；N6-(3-碘千基)-2-甲氨基-9-曱基腺噤呤；2-二甲氨基-N6-(3-碘節(jié)基)-9-甲基腺嘌呤；N6-(3-碘節(jié)基)-9-甲基-2-丙基氨基腺嘌呤；2-己基氨基-N6-(3-碘千基)-9-曱基腺嘌呤；N6-(3-碘千基)-2-甲氧基-9-甲基腺嘌呤；N6-(3-碘節(jié)基)-9-甲基-2-甲基硫代腺嘌呤；N6-(3-碘節(jié)基)-9-甲基-2-(4-吡啶基硫代)腺嘌呤；(1S，2R，3S，4R)-4-(6-氨基-2-苯基乙基氨基-9H-嘌呤-9-基)環(huán)戊烷-l,2，3-三醇；(1S，2R,3S，4R)-4-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)環(huán)戊烷-1，2，3-三醇；(±)-9-[2oc，3oc-二羥基-4P-(N-甲基氨甲酰基)環(huán)戊-10—基)](3-碘千基)-腺噪呤；2-氯-9-(2'-氨基-2'，3'-二去氧-P-D-5'-甲基-阿糖-furonainido)-N6-(3-碘節(jié)基)腺噪呤；2-氯-9-(2'，3'-二去氧-2'-氟-P-D-5'-甲基-阿糖furonamido)-N6-(3-碘千基)腺噪呤；9-(2-乙?；?3-去氧-P-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基(ribofuronamido))-2-氯-『(3-碘千基)腺嘌呤；2-氯-9-(3-去氧-2-甲磺酰基-P-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-N6-(3-碘爺基)腺嘌呤；2-氯-9-(3-去氧-p-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-『-(3-碘芐基)腺噪呤；2-氯-9-(3，5-1,1,3，3-三異丙基二硅氧基-P-D-5-呋喃核糖基)-W-(3-碘節(jié)基)腺噪呤；2-氯-9-(，3'-0-硫代羰基-P-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-N6-(3-碘爺基)腺噪呤；9-(2-苯氧基硫代羰基-3-去氧-P-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-2-氯-N6-(3-碘節(jié)基)腺噪呤；1-(6-芐基氨基-9H-嘌呤-9-基)-l-去氧-N，4-二曱基-p-D-呋喃核糖普糖醛酰胺(ribofuranosiduronamide);2-氯-9-(2，3-二去氧-p-0-5-曱基-呋喃核糖酰氨基)^6芐基腺嘌呤；2-氯-9-(2'-疊氮基-2'，3'-二去氧-P-D-5'-甲基-阿糖-furo訓(xùn)ido)-N6-千基腺噤呤52-氯-9-(P-D-赤呋喃糖苷)-N6-(3-碘芐基)腺嘌呤；N6-(苯并二噁烷甲基)腺苷；1-(6-糠基氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-去氧-14-曱基-P-D-呋喃核糖苷糖醛酰胺；W-[3-(L-脯氨酰氨基)爺基]腺苷-5'-N-曱基糖醛酰胺(uronamide);N6-[3-(P-丙氨酰氨基)芐基]腺苷-5'-N-甲基糖醛酰胺；N6-[3-(N-T-Boc-P-丙氨酰氨基)爺基]腺苷-5'-N-甲基糖醛酰胺6-(N'-苯基肼基)嘌呤-9-P-呋喃核糖苷-5'-N-甲基糖醛酰胺；6-(0-苯基羥基氨基)嘌呤-9-p-呋喃核糖苷-5'4-甲基糖醛酰胺；9-(P-D-2'，3'-二去氧赤呋喃糖苷基)-N6-[(3-p-丙氨酰氨基)千基]腺苷；9-(P-D-赤呋喃糖苷)-2-甲基氨基-N6-(3-碘芐基)腺嘌呤；2-氯-N-(3-碘芐基)-9-(2-四氫呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺；2-氯-(2'-去氧-6'-硫代-L-阿糖胞苷基)腺嘌呤；和2-氯-(6'-硫代-L-阿糖胞苷基)腺嘌呤。在US5，773，423的第6欄第39行到第7欄的第l4行，具體公開了包括下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中1是RaRbNCH))，其中r和Rb可以相同或不同,選自氫、d-d。烷基、氨基、C「d。卣代烷基、d-d。氨基烷基和C3-d。環(huán)烷基；R2選自氫、鹵素、d-d。烷氧基、氨基、C廣d。烯基和C廣d。炔基;和Rs選自R-和S-l-苯乙基、未取代的卡基和在一個或多個位置被選自d-d。烷基、氨基、鹵素、d-d。鹵代烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、d-d。烷氧基和硫的取代基取代的節(jié)基。更具體的化合物包括上式中其中Ra和Rb可以相同或不同且選自氫和d-d。烷基的那些，特別是當(dāng)R2是氫或卣素，特別是氫時。其他具體的化合物是其中r是氫和R2是氫，特別是當(dāng)Rs是未取代的芐基時的那些化合物。更具體的化合物是那些化合物，其中Rb是d-d。烷基或C廠d。環(huán)烷基，特別是d-d。烷基，更特別地是甲基。特別具體的是那些化合物，其中r是氫，Rb是d-d。烷基或C「d。環(huán)烷基，Rs是R-或S-l-苯基乙基或在一個或多個位置被選自卣素、氨基、乙酰氨基、d-d。卣代烷基和硫的取代基取代的節(jié)基，其中硫衍生物是鹽，例如三乙基銨鹽。在US5,773,423中公開的特別優(yōu)選的化合物的例子是IB-MECA。此外，在這篇文獻(xiàn)中特別提到的那些化合物，其中Rs是式Rd-C-C-的C2-d。亞烯基，其中Rd是d-Cs烷基。同時具體公開了其中R2不是氫的那些化合物，特別是其中R2是囟素、d-d。烷基氨基、或d-d。烷基硫的那些，更特別地，另外當(dāng)Ra是氫時，Rb是d-d。烷基，和/或Rs是取代的節(jié)基。這些具體公開的化合物包括2-氯-N^(3-碘節(jié)基)-9-[5-(甲基氨基)-P-D-呋喃核糖基]-腺嘌呤、N6-(3-碘節(jié)基)-2-甲氨基-9-[5-(甲基氨基)-P-D-呋喃核糖基]-腺噪呤和N6-(3-碘爺基)-2-曱基硫代-9-[5-(甲基氨基)—P-D-呋喃核糖基]-腺噪呤。此外，US5，773，423在第7欄第60行到第8欄第6行公開了具有下式的作為修飾的黃噪呤-7-肌苷的A3AR激動劑其中X是O;R6是RaRbNC(=0)，其中IT和Rb可以相同或不同，選自氫、C廣d。烷基、氨基、C廣d。卣代烷基、d-d。氨基烷基和C廣d。環(huán)烷基；R7和Rs可以相同或不同，選自C廣d。烷基、R-和S-l-苯基乙基、未取代的千基和在一個或多個位置被選自d-d。烷基、氨基、鹵素、d-d。卣代烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、d-d。烷氧基和硫的取代基取代的芐基；和Rs選自面素、千基、苯基和C廠d。環(huán)烷基。WO99/06053在實施例中公開了化合物19-33:N6-(4-聯(lián)苯基-羰基氨基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(2，4-二氯爺基-羰基氨基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(4-甲氧基苯基-羰基氨基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(4-氯苯基-羰基氨基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(苯基-羰基氨基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(芐基氨甲?；被?-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(4-硫代氨基-苯基氨曱?；?-腺苷-5'乙基糖醛酰胺；N6-(4-乙?；?苯基氨甲酰基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-((R)-oc-苯基乙基氨甲?；?-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-((S)-ct-苯基乙基氨甲?；?-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；Ne-(5-甲基-異喁唑-3-基-氨甲酰基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(l，3，4-噻二唑-2-基-氨甲?；?-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；N6-(4-正丙氧基-苯基氨甲酰基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；If-二-(4-硝基苯基氨甲酰基)-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺；和Ns-二-(5-氯-吡啶-l-基-氨甲?；?-腺苷-5'-N-乙基糖醛酰胺。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，A3AR激動劑是通過結(jié)合并活化腺苷A3AR而發(fā)揮其主要作用的化合物，它是一種落在通式(I)的范圍內(nèi)的嘌呤衍生物-Ru代表烷基、羥基烷基、羧基烷基或氰基烷基或下列通式(II)的基團(tuán)其中-Y代表氧、硫或CH2;-Xu代表H、烷基、rRfNC卜0)-或H0Rg，其中-ir和Rf可以相同或不同，選自氫、烷基、氨基、卣代烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基，或者結(jié)合在一起形成包含2到5個碳其中，原子的雜環(huán)；和-R8選自烷基、氨基、卣代烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基；-X12是H、羥基、烷基氨基、垸基氨基或羥基烷基；-X13和X14獨立地代表氫、羥基、氨基、酰氨基、疊氮基、鹵素、烷基、烷氧基、羧基、三價氮基、硝基、三氟基、芳基、烷芳基、硫、硫酯、硫醚、-OCOPh、-OC(＝S)OPh或Xu和Xn都是與〉OS連接形成五元環(huán)的氧，或者X13和X14形成式(III)的環(huán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中R'和R〃獨立地代表烷基；-R12選自氫、卣素、烷基醚、氨基、酰胼基(hydrazido)、烷基氨基、烷氧基、硫代烷氧基、吡啶基硫(pyridylthio)、烯基；炔基、硫、和烷基》危；和-R13是式-NR15R16的基團(tuán)，其中-R15是氫原子或選自烷基、取代的烷基或芳基-NH-C(Z)-的基團(tuán)，其中Z是0、S、或NRa具有上述含義的Re;其中當(dāng)R15是氫時，那么-R16選自R-和S-1-苯基乙基、芐基、苯基乙基或者未取代或在一個或多個位置被選自烷基、氨基、S素、卣代烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、烷氧基和磺酸及其鹽的取代基取代的苯胺；苯并二喁烷甲基、糠基、L-丙基丙氨酰-氨基節(jié)基、p-丙氨酰氨基-芐基、T-B0C-fi-丙氨酰氨基千基、苯基氨基、氨甲酰基、苯氧基或環(huán)烷基；或R16是下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>或者當(dāng)R15是烷基或芳基-NH-C(Z)-時，那么R16選自雜芳基Z)-、烷芳基-NIT-C(Z)-、烷芳基-C(Z)-、芳基-NR-C(Z)-和芳基-C(Z)-;Z代表氧、硫或胺；或以上化合物的生理學(xué)可接受的鹽。根據(jù)一個優(yōu)選的實施方案，A3AR激動劑是通式(IV)的核苷衍生物其中t、R/和Rs如上定義，及所述化合物的生理學(xué)可接受的鹽。形成本發(fā)明的化合物的取代基的非環(huán)碳水化合物基團(tuán)(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳烷基、烷芳基、烷基胺等等)可以是有支鏈或無支鏈的，優(yōu)選包含1或2到12個碳原子。一個具體組的A3AR激動劑是N^千基腺苷-5'-糖醛酰胺的衍生物。一些優(yōu)選的N6-千基腺苷-5'-糖醛酰胺衍生物是N6-2-(4-氨基苯基)乙基腺苷(APNEA)、N6-(4-氨基-3-碘節(jié)基)腺苷-5'-(N-甲基糖醛酰胺)(AB-MECA)和l-去氧-l-{6-[({3-碘苯基}曱基)氨基]-9H-嘌呤-9-基)-N-甲基-p-D-呋喃核糖(ribofuran)糖醛酰胺(IB-MECA)和2-氯-N6-(3-碘節(jié)基)腺苷-5'-N-甲基糖醛酰胺(C1-IB-MECA)。根據(jù)另一個實施方案，A3AR激動劑可以是腺苷的氧化衍生物，例如N6-節(jié)基腺苷-5'-N-烷基糖醛酰胺-N^氧化物或NL節(jié)基腺苷-5'-N-二烷基糖醛酰胺-W-氧化物，其中2-噤呤位置可以被烷氧基、氨基、烯基、炔基或卣素取代。A3AR激動劑是以足以達(dá)到抗骨關(guān)節(jié)炎效果的量施用的?？梢岳斫獾氖?，A3AR激動劑的量將取決于疾病的嚴(yán)重度，預(yù)期的治療方案和期望的治療劑量決定的。例如，劑量是lmg/日，所期望的施用方案是一天施用1次，那么在藥物組合物中A3AR激動劑的量就是lmg。當(dāng)意欲將每日劑量分為每日施用2次時，在藥物組合物中活性劑的量將是0.5mg?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的考慮事項來確定有效達(dá)到期望的效果時的量。本文中為此目的的"抗骨關(guān)節(jié)炎的有效量"必須有效地達(dá)到治療效果，其中該治療效果如前文所定義。完全理解的是，有效量取決于各種因素，包括所選擇的A3AR激動劑與A3AR的親和力、它在體內(nèi)的分布曲線、各種藥理學(xué)參數(shù)例如體內(nèi)半衰期、不期望的副作用(如果有的話)、各種因素例如所要治療的患者的年齡和性別等等。可以在目標(biāo)為發(fā)現(xiàn)有效的劑量范圍、最大耐受劑量和最佳劑量的臨床研究中典型地研究有效量。進(jìn)行這些臨床研究的方式對于臨床研制領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員是公知的。有時候該量也可以根據(jù)在動物中顯示有效時的量來確定。眾所周知，可以通過使用本領(lǐng)域公知的一種可能的換算公式將施用于大鼠的Xmg/Kg的量轉(zhuǎn)換為在另一種物種(特別是人)中的等價量。換算公式的例子如下?lián)Q算I:<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>體表面積依賴性劑量換算大鼠(150g)相對于人(70Kg)是1/7大鼠劑量。這是指，在當(dāng)前情況下在大鼠中0.001-0.4mg/Kg相當(dāng)于在人中為約0.14-56微克/Kg，假定平均體重為70Kg，換算為絕對劑量為約0.01到約4mg。換算II:以下?lián)Q算系數(shù)為小鼠=3，大鼠=67。用換算系數(shù)乘以動物體重，將人的劑量當(dāng)量從mg/Kg轉(zhuǎn)變?yōu)檫~g/m2。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>根據(jù)這個等式，與在大鼠中0.001-0.4mg/Kg相當(dāng)?shù)娜说牧渴?.16-64Mg/Kg;即體重約70Kg的人的絕對劑量是約0.011到約4.4mg，與換算I中所示的范圍類似。換算III:另一個可選的換算是通過調(diào)節(jié)劑量得到與給動物施用后所達(dá)到的血漿水平或AUC相同的血漿水平或AUC。因此，根據(jù)口服IB-MECA(—種A3AR激動劑)后在小鼠中進(jìn)行的測定和根據(jù)在給健康男性志愿者的IB-MECA的臨床研究中的人所進(jìn)行的此類測定，可以推導(dǎo)出在小鼠中IB-MECA有效時1微克/Kg-400微克/Kg的劑量相當(dāng)于約0.14-57微克/Kg的人劑量，即對于70Kg的個體總劑量為0.01-4mg。此外，根據(jù)上述換算方法，IB-MECA和C1-IB-MECA(另一種AAR激動劑)的優(yōu)選劑量范圍小于4mg，典型地在約0.01到約2mg(分別為約0.14-28微克/Kg)的范圍內(nèi)，期望地在約0.1到1.5mg(分別為約1.4-21微克/Kg)的范圍內(nèi)。該劑量可以一天l次，2次或有時候數(shù)次施用。美國專利申請公開20050101560和Fishman等人[FishmanP.等人，Tolerability,pharmacokinetics,andconcentration—dependenthemodynamiceffectsoforalCF101(oralIB-MECA)，anA3adenosinereceptoragonist,inhealthyyoungmenIntJClinPharmacolTher.11:534-542，2004]所描述的人體研究表明，在每日多次施用的情況下，IB-MECA的水平在人體血漿中逐漸降低，半衰期為約8-10小時，與之相比，在小鼠中半衰期僅為1.5小時，有時需要進(jìn)行累計效果的劑量的校正(在前一個劑量的水平降低前施用后續(xù)劑量，這樣，產(chǎn)生了超過單一劑量的血漿水平的積累?；谒龅娜梭w試驗，每日2次施用看起來是優(yōu)選的施用方案。但是這并不排除其他的施用方案。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，優(yōu)選A3AR激動劑的施用是每日施用，每曰1次到數(shù)次，優(yōu)選每日1次或2次，每次施用的劑量范圍是約1到約1000jng/kg體重，優(yōu)選小于400Mg/kg體重，甚至小于200ng/kg體重。典型地，A3AR激動劑的劑量范圍是1到100Mg/kg體重。A3AR激動劑配制在藥物組合物中。本發(fā)明的上下文中的"組合物"意欲是指活性劑的組合，單獨地或與藥學(xué)可接受的載體以及其他添加劑一起。有時栽體具有改善活性成分遞送或滲透到靶組織、改善藥物的穩(wěn)定性、減緩清除率、給予緩釋性質(zhì)、減小不期望的副作用等等的效果。栽體也可以是穩(wěn)定制劑的物質(zhì)(例如，防腐劑)，以及用于提供含有可食用香味劑的制劑等等。載體的例子包括穩(wěn)定劑和佐劑，參見E.W.Martin,REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCES,MacKPubCo(June,1990)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語"藥學(xué)可接受的載體"是指任一的惰性、無毒性物質(zhì)，它不會與A3AR激動劑反應(yīng)，可以加入到制劑中作為稀釋劑、載體或使制劑成型或具有稠度。本發(fā)明的組合物可以根據(jù)良好的醫(yī)學(xué)實踐來施用和給藥，同時要考慮患者個體的臨床條件、施用位點和方法、施用安排、患,者的年齡、性別、體重和醫(yī)生已知的其他因素。栽體的選擇部分地是由具體的活性成分，以及用于施用組合物的具體方法決定的。因此，本發(fā)明有廣泛不同的適當(dāng)藥物組合物?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的很多遞送模式來將A3AR激動劑施用于患者。但是優(yōu)選口服施用A3AR激動劑。才艮據(jù)期望的制劑形式來選擇載體。適合口服的載體的典型例子包括(a)液體溶液，其中將有效量的A3AR激動劑溶解于稀釋劑例如水、鹽水、天然汁液、醇、糖漿等等中；(b)膠嚢(例如普通的硬或軟殼明膠型，包含例如表面活性劑、潤滑劑和惰性填充劑)、片劑、錠劑(其中A3AR激動劑在香味劑例如蔗糖中或A3AR激動劑在惰性基質(zhì)例如明膠和甘油中)和含片，分別包含預(yù)定量的固體或顆粒狀的A3AR激動劑；(c)粉末；(d)在適當(dāng)液體中的混懸液；(e)適當(dāng)?shù)娜閯?f)脂質(zhì)體制劑；及其他。也可以將A3AR激動劑配制成用于局部施用。為此目的，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知，將A3AR激動劑與生理學(xué)可接受的栽體混合以得到適合局部施用的乳骨、洗劑、軟骨、凝膠、水凝膠、油包水型乳劑等等。如上所述，治療性使用A3AR激動劑有時可以與其他藥物例如甲氨蝶呤(MTX)、類固醇、NSAIDS等等聯(lián)用。根據(jù)每種藥物的給藥方案，在這種聯(lián)合治療中，其他藥物和A3AR激動劑可以同時或在不同時間給予患者。例如，MTX典型地以每周1次5到25mg的劑量范圍每周1次給予患者，口服或胃腸外施用。A3AR激動劑典型地以更頻繁的給藥方案給予，例如每日l次或2次。上面已經(jīng)以說明性的方式描述了本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解的是，所使用的術(shù)語意欲是指所述詞語的性質(zhì)而不是進(jìn)行限定。顯然，根據(jù)上述教導(dǎo)，本發(fā)明的很多變更和改變都是可能的。因此，應(yīng)當(dāng)理解的是，在附屬的權(quán)利要求范圍內(nèi)，本發(fā)明可以以下文所述的具體方式以外的方式實施。示例性的實施方案實施例1研究了IB-MECA(本文有時作CF101)單獨或與MTX聯(lián)合對于人或大鼠成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(FLS)增殖的作用。對于FLS增殖的作用是骨關(guān)節(jié)炎中潛在治療效果的暗示。人FLS的培養(yǎng)從經(jīng)受穿刺術(shù)的骨關(guān)節(jié)炎(OA)患者中收集人滑液樣品。離心該液體并除去上清液。將細(xì)胞再懸浮于包含I型膠原酶(4mg/ml)的DMEM中2小時，并在37"下劇烈振蕩。離心收集上清液中釋放的細(xì)胞，并在37C的5%C02培養(yǎng)箱中在包含10%FBS、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100jag/ml鏈霉素、1%非必需氨基酸、1%丙酮酸鈉和20nMHEPES緩沖液的DMEM中培養(yǎng)。在培養(yǎng)過夜過后，除去未粘附的細(xì)胞。將粘附細(xì)胞(FLS)以1:2的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)，在該實驗中使用第4到第IO代的細(xì)胞。使用MTT試驗研究CF101單獨或與MTX聯(lián)合對于FLS增殖的作用。在生長培養(yǎng)基中，將細(xì)胞(5xlOVml細(xì)胞)培養(yǎng)于96-孔微量滴定板上72小時。在最后24小時，向培養(yǎng)基中加入CF101(10nM)。大鼠成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(FLS)的培養(yǎng)從佐劑引發(fā)關(guān)節(jié)炎的大鼠中收集滑液組織。切碎該組織并在4mg/mll型膠原酶和0.25w/v胰蛋白酶的DMEM中消化。將混合物在37X:下強(qiáng)烈振蕩4小時。離心分離上清液中釋放的細(xì)胞，并在37tl的5%C02培養(yǎng)箱中在包含15%FCS、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100pg/ml鏈霉素的DMEM中培養(yǎng)。在培養(yǎng)過夜過后，除去未粘附的細(xì)胞。將粘附細(xì)胞(FLS)以1:2的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)，在該實驗中使用第4到第IO代的細(xì)胞。使用MTT試驗研究CF101單獨或與MTX聯(lián)合對于FLS增殖的作用。在生長培養(yǎng)基中，將細(xì)胞(5xlOVml細(xì)胞)培養(yǎng)于96-孔微量滴定板上72小時。在最后24小時，向培養(yǎng)基中加入CF101(10nM)。結(jié)果附圖1A和1B分別表明了如MTT試驗所評價，單用CFIOI、單用MTX及CF101和MTX的組合分別對于人和大鼠FLS增殖的作用。如所示，與對照組相比，抑制的百分比是顯著的(比對照組高20%)?？梢郧宄乜闯?，單用CF101或CF101和MTX的組合對于FLS顯示出顯著的抑制作用。實施例2在下列的研究中，確定IB-MECA(本文有時作CF101)對于實驗性骨關(guān)節(jié)炎(OA)發(fā)展的作用。在該研究中，使用單-碘乙酸鹽(MIA)試驗?zāi)Ｐ?。MIA是快速再現(xiàn)OA的臨床和病理性質(zhì)的大鼠實驗?zāi)Ｐ?。MIA是在體外顯示出誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞死亡的糖酵解的抑制劑。MIA的關(guān)節(jié)內(nèi)注射誘導(dǎo)嚙齒動物的關(guān)節(jié)軟骨中軟骨細(xì)胞死亡。特別地，用異氟烷麻醉雄性Wistar大鼠(200gr)(Harlanlaboratories),彎曲右腿使膝蓋呈90°角。將MIA溶解于生理鹽水中，使用27-號，0.5-英寸的針頭將50pL體積的2mg藥物注射到每只動物的右腳的關(guān)節(jié)內(nèi)。在注射后第7天開始每日2次用CF101，100pg/kg，PerOz(P0)治療。用測定膝蓋直徑的通過增強(qiáng)頂端配裝的標(biāo)刻數(shù)字的測徑器測定膝蓋直徑。在附圖2中所示的結(jié)果顯示了相同動物中注射了MIA的膝蓋(右膝)和未注射MIA的膝蓋(左膝)的直徑之間的數(shù)值。將對照組與CF101治療組(每組5只動物)進(jìn)行比較。如附圖2所示，與對照組相比，CF101顯著抑制了組織腫脹的發(fā)展(P-9.48317E-06)。除了代表性的膝蓋的X線攝影檢查顯示了鄰近脛骨骺線的硬化區(qū)以外，在栽體治療的動物中骺和smallexophite變薄。在CF101治療的動物中，記錄沒有硬化的正常脛骨骺線(附圖3A-3D,其中附圖3A和3B代表未治療的對照組，附圖3C和3D代表CF101治療組)。為了研究A3AR和參與NF-kB和Wnt信號途徑下游關(guān)鍵信號蛋白質(zhì)的命運，將對照和CFIOI治療的動物的膝關(guān)節(jié)蛋白質(zhì)提取物進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。在從OA大鼠的大鼠膝關(guān)節(jié)中提取的細(xì)胞中，A3AR高度表達(dá)，而在CFIOI治療時向下調(diào)節(jié)，表明發(fā)生了受體活化。然后向下調(diào)節(jié)PI3K、IKK和NF-kB的表達(dá)水平，表明用CF101治療時，抑制了NF-kB信號途徑。此外，當(dāng)用CF101治療時，向上調(diào)節(jié)GSK-3P,Wnt信號途徑的關(guān)鍵要素的表達(dá)水平(附圖4A-4E)。該數(shù)據(jù)清楚地表明，CF101作為口服生物可利用的小分子I，能夠緩解0A患者的膝關(guān)節(jié)中的炎癥過程。CF101治療誘導(dǎo)的OA大鼠的高度A3AR表達(dá)水平以及NF-kB和Wnt信號途徑失控，這強(qiáng)化了使用A3AR戰(zhàn)勝OA的建議。權(quán)利要求1.A3AR激動劑在制備指示用于治療患骨關(guān)節(jié)炎的哺乳動物患者的藥物組合物中的應(yīng)用。2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述A3AR激動劑選自IB-MECA和C1-IB-MECA。3.權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，用于制備指示用于治療患骨關(guān)節(jié)炎的哺乳動物患者并與其他藥物一起治療的藥物組合物。4.權(quán)利要求3的應(yīng)用，其中所述其他藥物是甲氨蝶呤(MTX)。5.—種治療哺乳動物患者的骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給需要所述治療的所述患者施用一定量的A3腺苷受體激動劑(A3AR激動劑)，該量可以有效地治療或預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。6.權(quán)利要求5的方法，其中所哺乳動物是人類患者。7.權(quán)利要求5或6的方法，其中所述治療包括對所述需要的患者口服施用A3AR激動劑。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述治療包括對所述患者一天一次或兩次施用A3RA激動劑。9.權(quán)利要求5到8任一項的方法，其中所述A3AR激動劑選自IB-MECA和C1-IB-MECA。10.權(quán)利要求5到9任一項的方法，其中所述A3AR激動劑施用的范圍是約1到約1000lig/kg體重。11.權(quán)利要求11的方法，其中所述A3AR激動劑的施用劑量是小于400pg/kg體重。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述A3AR激動劑的施用劑量是小于200pg/kg體重。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述A3AR激動劑的施用劑量范圍是約1到約100pg/kg體重。14.權(quán)利要求5到13任一項的方法，包括與其他藥物聯(lián)合施用A3AR激動劑。15.權(quán)利要求14的方法，其中其他藥物是甲氨蝶呤。16.—種治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，包含一定量的A3AR激動劑作為活性成分，該量可以有效地治療骨關(guān)節(jié)炎。17.權(quán)利要求16的藥物組合物，其中所述哺乳動物是人類患者。18.權(quán)利要求16或17的藥物組合物，為適合口服施用的形式。19.權(quán)利要求16到18任一項的藥物組合物，其中所述A3AR激動劑選自IB-MECA和C1-IB-MECA。20.權(quán)利要求19的藥物組合物，包含施用劑量范圍是約1到約1000jLig/kg體重的所述A3AR激動劑。21.權(quán)利要求19的藥物組合物，包含施用劑量小于400pg/kg體重的所述A3AR激動劑。22.權(quán)利要求19的藥物組合物，包含施用劑量小于200pg/kg體重的所述A3AR激動劑。23.權(quán)利要求19的藥物組合物，包含施用劑量范圍是約1到約100jLig/kg體重的所述A3AR激動劑。全文摘要本發(fā)明提供了A₃腺苷受體激動劑(A₃AR激動劑)在制備用于治療患骨關(guān)節(jié)炎(OA)的哺乳動物的藥物組合物中的應(yīng)用，A₃AR激動劑的量可以有效地治療或預(yù)防OA的發(fā)展。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的A₃AR激動劑是IB-MECA和CI-IB-MECA。該A₃AR激動劑可以與其他藥物例如甲氨蝶呤(MTX)聯(lián)合施用；本發(fā)明也提供了治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，包含一定量的A₃AR激動劑。文檔編號A61K31/00GK101330909SQ200680044808公開日2008年12月24日申請日期2006年11月29日優(yōu)先權(quán)日2005年11月30日發(fā)明者P·菲什曼申請人:坎-菲特生物藥物有限公司