專利名稱：使用氨基嘧啶類激酶調節(jié)劑的flt3激酶協(xié)同調制的制作方法
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本申請要求2005年6月10日提交的美國臨時專利申請60/689,750的優(yōu)先權，所述申請被全文并入本文。
發(fā)明領域 本發(fā)明涉及使用與FLT3酪氨酸激酶抑制劑組合的法尼基轉移酶抑制劑治療細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥。

背景技術：
Fms樣酪氨酸激酶3(FLT3)配體(FLT3L)是影響多種造血譜系發(fā)育的細胞因子之一。這些作用通過FLT3L對FLT3受體(也稱為胎兒肝激酶-2(flk-2))和STK-1(在造血干細胞和祖細胞上表達的受體酪氨酸激酶(RTK))的結合而發(fā)生。在正常的造血作用過程中，F(xiàn)LT3基因編碼在細胞的增殖、分化和細胞程序死亡中起重要作用的跨膜III類RTK。FLT3基因主要由早脊髓祖細胞和淋巴祖細胞表達。參見McKenna，Hilary J.等人.Mice lacking flt3 ligand have deficient hematopoiesis affectinghematopoietic progenitor cells，dendritic cells，and natural killer cells.Blood.Jun 2000；953489-3497；Drexler，H.G.和H.Quentmeier(2004)″FLT3receptor and ligand.″Growth Factors 22(2)71-3。
FLT3的配體由骨髓基質細胞和其它細胞表達并且與其它生長因子協(xié)同作用以刺激干細胞、祖細胞、樹狀細胞、和天然殺傷細胞的增殖。
造血功能障礙是這些系統(tǒng)的惡化前病癥，包括例如骨髓增生異常，例如血小板增多、原發(fā)性血小板增多(ET)、特發(fā)性骨髓外化生、骨髓纖維化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纖維化(MMM)、慢性特發(fā)性骨髓纖維化(IMF)、真性紅細胞增多癥(PV)、血細胞減少癥、和惡化前脊髓發(fā)育不良綜合征。參見Stirewalt，D.L.和J.P.Radich(2003).″The role of FLT3 inhaematopoietic malignancies.″Nat Rev Cancer 3(9)650-65；Scheijen，B.和J.D.Griffin(2002).″Tyrosine kinase oncogenes in normal hematopoiesisand hematological disease.″Oncogene 21(21)3314-33。
血液學惡性腫瘤是身體的血液形成和免疫系統(tǒng)、骨髓和淋巴組織的癌癥。盡管在正常的骨髓中，F(xiàn)LT3表達只限于早祖細胞，而在血液學惡性腫瘤中，F(xiàn)LT3以高水平表達或者FLT3突變引起不受控制的FLT3受體和下游分子通道誘導，可能的Ras活化。血液學惡性腫瘤包括白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也稱為霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤——例如，急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性粒細胞白血病(AML)、急性旱幼粒細胞白血病(APL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性粒細胞白血病(CML)、慢性嗜中性粒細胞白血病(CNL)、急性未分化細胞白血病(AUL)、退行發(fā)育性大細胞性淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴細胞白血病(PML)、幼年型粒-單核細胞白血病(JMML)、成人T細胞ALL、伴有三譜系(trilineage)脊髓發(fā)育不良的AML(AML/TMDS)、混合型譜系白血病(MLL)、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDSs)、骨髓增生異常(MPD)、多發(fā)性骨髓瘤(MM)和脊髓肉瘤。參見Kottaridis，P.D.，R.E.Gale等人(2003).″Flt3 mutations and leukaemia.″Br J Haematol 122(4)523-38。脊髓肉瘤也與FLT3突變有關。參見Ansari-Lari，Ali等人，F(xiàn)LT3 mutations in myeloidsarcoma.British Journal of Haematology.2004年9月126(6)785-91。
急性粒細胞白血病(AML)是成人白血病的最普遍形式，并且占兒重期白血病的15-20％。在2002年，在美國，診斷了大約11,000AML新病例，并且估計有8,000名患者死于AML。參見National Cancer InstituteSEER database-http://seer.cancer.gov/。盡管AML的診斷傳統(tǒng)上基于組織學技術和血液白細胞計數(shù)，但是細胞遺傳和遺傳分析的最新進展顯示，AML是在遺傳學異常、臨床特征和對治療的響應方面有差異的不同疾病的混合。最近的努力開始針對AML的不同亞型(亞型是基于對疾病相關蛋白質表達的細胞遺傳學分析和免疫組織化學分析)定制化學治療并獲得一定的成功。AML的治療一般地分兩個階段進行誘導和誘導后治療。誘導治療一般地由三個劑量的蒽環(huán)類藥(例如柔紅霉素)和隨后用細胞毒藥物阿糖胞苷的i.v.濃集輸注7-10天組成。這種方案在70-80％的年齡小于60歲的患者和～50％的年齡大于60歲的患者中有效誘導癥狀緩解。參見Burnett，A.K.(2002).″Acute myeloid leukemiatreatment of adultsunder 60years.″Rev Clin Exp Hematol 6(1)26-45；Buchner T.，W.Hiddemann等人(2002).″Acute myeloid leukemiatreatment over 60.″Rev Clin Exp Hematol.6(1)46-59。在癥狀緩解誘導治療之后，有幾個誘導后治療的選擇，包括化學治療或骨髓移植的另外循環(huán)。誘導后治療的選擇和成功取決于患者的年齡和AML亞型。盡管在過去十年中在AML的診斷和治療方面取得了進步，但是小于65歲的患者的5年無病存活率只有40％，大于65歲的患者的5年無病存活率小于10％。因此，對于AML(特別是大于65歲的患者)仍有重大的未滿足的臨床需要。隨著對AML不同亞型的機制的認識增加，對該疾病的新的定制治療開始呈現(xiàn)某些前景。
在復發(fā)性和頑固性AML治療方面的一個最近的成功例是用于誘導后治療的法尼基轉移酶抑制劑(FTI)的開發(fā)和應用。法尼基轉移酶抑制劑是胞內法尼基蛋白質轉移酶(FPT)的有效的和選擇性的抑制劑類別。FPT催化許多胞內蛋白質的脂質修飾，包括Ras和Rho家族的小GTP酶和核纖層蛋白，引導它們對細胞內的質膜或膜區(qū)室的定位。
最初開發(fā)FTI用于預防Ras癌基因蛋白質翻譯后法尼基化和活化(Prendergast G.C.和Rane，N.(2001)“Farnesyl Transferase InhibtorsMechanism and Applications”Expert Opin Investig Drugs.10(12)2105-16)。最近的研究還證明，F(xiàn)TI誘導的Nf-κB活化的抑制通過抑制Ras-依賴性的Nf-κB活化，而引起對誘導細胞程序死亡和炎性基因表達的向下調節(jié)的敏感性增加。參見Takada，Y.等人(2004).“Proteinfarnesyltransferase inhibitor(SCH66336)abolishes NF-kappaB activationinduced by various carcinogens and inflammatory stimuli leading tosuppression of NF-kappaB-regulated gene expression and up-regulation ofapoptosis.”J Biol Chem 279，26287-99。
對于腫瘤學而言特別重要的是，Ras和Rho家族致癌基因的FTI抑制在體外和體內引起腫瘤細胞的生長抑制和細胞程序死亡。參見Haluska P.，G.K.Dy，A.A.Adjei.(2002)″Farnesyl transferase inhibitors asanticancer agents.″Eur J Cancer.38(13)1685-700。從臨床觀點看，脊髓惡性腫瘤，特別是AML，代表了FTI治療的重要機遇。
如前所述，AML是具有極低長期存活率和高比例的化療誘導的毒性和抗性(特別是在年齡大于60歲的患者中)的疾病。另外，AML細胞增殖的機制依賴Ras和Rho家族的小GTP酶類。在眾多支持FTI在AML治療中的功效的臨床前資料中，有幾個臨床試驗是用包括替比法尼(Tipifarnib)(ZarnestraTM，Johnson&Johnson)、BMS-214662、CP-60974(Pfizer)和Sch-6636(lonafarnib，Schering-Plough)的FTI啟動的。
ZARNESTRA(又名R115777或替比法尼)是FTI類化合物中最先進和最有前途的。在對復發(fā)性和頑固性AML的患者進行的臨床研究中，替比法尼治療產生～30％的反應率，有2名患者實現(xiàn)完全緩解。參見Lancet J.E.，J.D.Rosenblatt，J.E.Karp.(2003)“Farnesyltransferaseinhibitors and myeloid malignanciesphase I evidence of Zarnestra activityin high-risk leukemias.”Semin Hematol.39(3 Suppl 2)31-5。這些反應獨立于患者的Ras突變狀況出現(xiàn)，因為試驗中沒有一名患者具有時常在AML患者中發(fā)現(xiàn)的Ras突變。然而，在治療開始時，在患者反應與他們的MAP激酶活化水平(Ras和Rho蛋白活性的下游靶)之間有直接相關，表明由其它機制活化的Ras/MAP激酶通道的活動性可能是患者反應的可靠預報者。參見Lancet J.E.，J.D.Rosenblatt，J.E.Karp.(2003)“Farnesyltransferase inhibitors and myeloid malignanciesphase I evidenceof Zarnestra activity in high-risk leukemias.”Semin Hematol.39(3 Suppl 2)31-5。另外，新近在患有復發(fā)性AML的患者中的多中心II期試驗證明，在50名患者中的17名中有完全反應(骨髓損害＜5％)和在50名患者中的31名中有骨髓損害＞50％的減少。在Gotlib，J(2005)“Farnesyltransferaseinhibitor therapy in acute myelogenous leukemia.”Curr.Hematol.Rep.；4(1)77-84中綜述。對在該試驗中的反應者中通過FTI治療調節(jié)的基因的初步分析也證明在MAP激酶通道中對蛋白質的作用。這個有前途的結果蘊含著在期待不久的將來在臨床上應用替比法尼的方面的專門知識。
最近，出現(xiàn)了另一個靶，用于治療AML、和患有MDS和ALL的患者的子集。受體酪氨酸激酶、FLT3和FLT3的突變已經被確定為AML進展中的關鍵角色。關于將FLT3活性與疾病相關的許多研究的概述由Gilliland，D.G.和J.D.Griffin(2002)，″The roles of FLT3 in hematopoiesisand leukemia.″Blood 100(5)1532-42；和Stirewalt，D.L.和J.P.Radich(2003).″The role of FLT3 in haematopoietic malignancies.″Nat RevCancer 3(9)650-65進行了深入的綜述。超過90％的AML患者在胚細胞中有FLT3表達?，F(xiàn)在認識到大約30-40％的AML患者具有FLT3的活化突變，使得FLT3突變成為AML患者中最常見的突變。FLT3的活化突變有兩個已知的類型。一個是受體的近膜區(qū)域的4-40氨基酸的重復(ITD突變)(25-30％的患者)，另一個是在激酶結構域中的點突變(5-7％的患者)。這些受體突變引起多種信號轉導途徑的結構性活化，包括Ras/MAP激酶、PI3激酶/AKT和STAT通道。另外，F(xiàn)LT3ITD突變也已經表現(xiàn)出減少早期骨髓細胞的分化。更重要的是，患有ITD突變的患者具有癥狀緩解誘導比例降低、癥狀緩解時間縮短、和更差的總體預后。在具有MLL基因重排的ALL和在MDS患者的子群中也發(fā)現(xiàn)FLT3ITD突變。在MDS和ALL中，F(xiàn)LT3ITD突變的存在也與這些患者中加速的疾病進展和更差的預后有關。參見Shih L.Y.等人(2004)“Internal tandemduplication of fms-like tyrosine kinase 3 is associated with poor outcome inpatients with myelodysplastic syndrome.”Cancer，101；989-98；和Armstrong，S.A.等人(2004)“FLT3 mutations in childhood acutelymphoblastic leukemia.”Blood.1033544-6。迄今為止，仍沒有強有力的證據(jù)表明激酶結構域點突變或過度表達的野生型受體是疾病的成因，然而，F(xiàn)LT3表達可有助于疾病的進展。這種建立的臨床前和臨床證據(jù)引起了開發(fā)許多FLT3抑制劑，其目前正在臨床前和臨床環(huán)境中進行評價。
新興的治療AML的策略是在誘導和/或誘導后治療過程中將靶向治療劑一起或將其與傳統(tǒng)的細胞毒藥物組合。已經公布了概念數(shù)據(jù)的最新試驗，證明細胞毒藥物(例如阿糖胞苷或柔紅霉素)與FLT3抑制劑的組合抑制表達FLT3ITD的AML細胞的生長。參見Levis，M.，R.Pham等人(2004).″In vitro studies of a FLT3 inhibitor combined with chemotherapysequence of administration is important to achieve synergistic cytotoxiceffects.″Blood 104(4)1145-50；和Yee KW，Schittenhelm M，O′Farrell AM，Town AR，McGreevey L，Bainbridge T，Cherrington JM，HeinrichMC.(2004)“Synergistic effect of SU11248 with cytarabine or daunorubicinon FLT3ITD-positive leukemic cell.”Blood.104(13)4202-9。
因此，本發(fā)明提供了一種協(xié)同的治療方法，包括將本文中所述的新型的FLT3激酶抑制劑與法尼基轉移酶抑制劑共同給予(同時或順序)，用于治療FLT3表達細胞的增殖性病癥。
當前已知有多種FT酶抑制劑。適用于本發(fā)明的FTI如下WO-97/21701和美國專利6,037,350描述了某些抑制法尼基轉移酶的式(I)、(II)和(III)的(咪唑-5-基)甲基-2-喹啉酮衍生物的制備、制劑和藥學性質，以及在體內代謝為式(I)化合物的式(II)和(III)的中間體，所述文獻被全文并入本文。式(I)、(II)和(III)的化合物由下式表示
及其可藥用酸或堿加成鹽和立體化學異構形式，其中 虛線表示任選的鍵； X為氧或硫； R1為氫、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基， 或下式的基團-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9、其中Alk1為C1-6烷二基， R9為羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基； R2、R3和R16各自獨立地為氫、羥基、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基、4，4-二甲基唑基；或 當在相鄰的位置上時，R2和R3可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O-CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R4和R5各自獨立地為氫、鹵代、Ar1、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R6和R7各自獨立地為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar2氧基、三鹵代甲基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基，或 當在相鄰的位置上時，R6和R7可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(c-1)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(c-2)； R8為氫、C1-6烷基、氰基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、咪唑基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、或下式的基團 -O-R10(b-1)， -S-R10(b-2)， -N-R11R12(b-3)， 其中R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基團-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； R11為氫、C1-12烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R12為氫、C1-6烷基、C1-16烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、天然氨基酸、Ar1羰基、Ar2C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羥基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基團-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； 其中 Alk2為C1-6烷二基； R13為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R14為氫、C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R15為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R17為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、Ar1； R18為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵代； R19為氫或C1-6烷基； Ar1為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵代取代的苯基；和 Ar2為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵代取代的苯基。
WO-97/16443和美國專利5,968,952描述了式(IV)的法尼基轉移酶抑制化合物的制備、制劑、和藥學性質，以及在體內代謝為式(IV)化合物的式(V)和(VI)的中間體，所述文獻被全文并入本文。式(IV)、(V)和(VI)的化合物由下式表示
及其可藥用酸或堿加成鹽和立體化學異構形式，其中 虛線表示任選的鍵； X為氧或硫； R1為氫、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、 或下式的基團-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9， 其中Alk1為C1-6烷二基， R9為羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基； R2和R3各自獨立地為氫、羥基、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基；或 當在相鄰的位置上時，R2和R3可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O-CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R4和R5各自獨立地為氫、Ar1、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R6和R7各自獨立地為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或Ar2氧基； R8為氫、C1-6烷基、氰基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羥基羰基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、Ar1、Ar2C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基； R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵代； R11為氫或C1-6烷基； Ar1為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵代取代的苯基； Ar2為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵代取代的苯基。
WO-98/40383和美國專利6,187,786披露了式(VII)的法尼基轉移酶抑制化合物及其可藥用酸加成鹽和立體化學異構形式的制備、制劑和藥學性質，所述文獻被全文并入本文。

其中 虛線表示任選的鍵； X為氧或硫； -A-為下式的二價基團 -CH＝CH- (a-1)，-CH2-S- (a-6)， -CH2-CH2- (a-2)，-CH2-CH2-S- (a-7)， -CH2-CH2-CH2- (a-3)，-CH＝N- (a-8)， -CH2-O- (a-4)，-N＝N- (a-9)，或 -CH2-CH2-O- (a-5)，-CO-NH- (a-10)； 其中任選地，一個氫原子可被C1-4烷基或Ar1代替； R1和R2各自獨立地為氫、羥基、鹵代、氰基、C1-6烷基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基、氨基C1-6烷氧基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar2、Ar2-C1-6烷基、Ar2-氧基、Ar2-C1-6烷氧基；或當在相鄰的位置上時，R1和R2可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(b-1)， -O-CH2-CH2-O-(b-2)， -O-CH＝CH-(b-3)， -O-CH2-CH2-(b-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(b-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(b-6)； R3和R4各自獨立地為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar3-氧基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基，或當在相鄰的位置上時，R3和R4可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(c-1)， -O-CH2-CH2-O-(c-2)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(c-3)； R5為下式的基團
其中R13為氫、鹵代、Ar4、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R14為氫、C1-6烷基或二(C1-4烷基)氨基磺酰基； R6為氫、羥基、鹵代、C1-6烷基、氰基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、Ar5、Ar5-C1-6烷氧基C1-6烷基；或下式的基團 -O-R7(e-1)， -S-R7(e-2)， -N-R8R9(e-3)， 其中R7為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar6、Ar6-C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基團-Alk-OR10或-Alk-NR11R12； R8為氫、C1-6烷基、Ar7或Ar7-C1-6烷基； R9為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar8、Ar8-C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、Ar8-羰基、Ar8-C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羥基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基團-Alk-OR10或-Alk-NR11R12； 其中Alk為C1-6烷二基； R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、Ar9或Ar9-C1-6烷基； R11為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar10或Ar10-C1-6烷基； R12為氫、C1-6烷基、Ar11或Ar11-C1-6烷基；和 Ar1到Ar11各自獨立地選自苯基；或被鹵代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基取代的苯基。
WO-98/49157和美國專利6,117,432涉及式(VIII)的法尼基轉移酶抑制化合物及其可藥用酸加成鹽和立體化學異構形式的制備、制劑和藥學性質，所述文獻被全文并入本文。

其中 虛線表示任選的鍵； X為氧或硫； R1和R2各自獨立地為氫、羥基、鹵代、氰基、C1-6烷基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基、氨基C1-6烷氧基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar1C1-6烷基、Ar1氧基或Ar1C1-6烷氧基； R3和R4各自獨立地為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar1氧基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基、三鹵代甲基或三鹵代甲氧基； R5為氫、鹵代、C1-6烷基、氰基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、Ar1、Ar1C1-6烷氧基C1-6烷基；或下式的基團 -O-R10(a-1)， -S-R10(a-2)， -N-R11R12(a-3)， 其中R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar1C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基團-Alk-OR13或-Alk-NR14R15； R11為氫、C1-6烷基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R12為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar1C1-6烷基、C1-6烷基羰基-C1-6烷基、Ar1羰基、Ar1C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羥基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基團-Alk-OR13或-Alk-NR14R15； 其中Alk為C1-6烷二基； R13為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R14為氫、C1-6烷基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R15為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar1C1-6烷基； R6為下式的基團
其中R16為氫、鹵代、Ar1、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷硫基C1-6烷基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R17為氫、C1-6烷基或二(C1-4烷基)氨基磺酰基； R7為氫或C1-6烷基，條件是虛線不表示鍵； R8為氫、C1-6烷基或Ar2CH2或Het1CH2； R9為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵代；或 R8和R9一起形成下式的二價基團 -CH＝CH-(c-1)， -CH2-CH2-(c-2)， -CH2-CH2-CH2-(c-3)， -CH2-O-(c-4)，或 -CH2-CH2-O-(c-5)； Ar1為苯基；或被各自獨立地選自以下的1或2個取代基取代的苯基鹵代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基； Ar2為苯基；或被各自獨立地選自以下的1或2個取代基取代的苯基鹵代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基；和 Het1為吡啶基；被各自獨立地選自以下的1或2個取代基取代的吡啶基鹵代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基。
WO-00/39082和美國專利6,458,800描述式(IX)的法尼基轉移酶抑制化合物或其可藥用酸加成鹽和立體化學異構形式的制備、制劑和藥學性質，所述文獻被全文并入本文。

其中 ＝X1-X2-X3-為下式的三價基團 ＝N-CR6＝CR7- (x-1)， ＝CR6-CR7＝CR8- (x-6)， ＝N-N＝CR6-(x-2)， ＝CR6-N＝CR7-(x-7)， ＝N-NH-C(＝O)- (x-3)， ＝CR6-NH-C(＝O)- (x-8)，或 ＝N-N＝N- (x-4)， ＝CR6-N＝N- (x-9)； ＝N-CR6＝N-(x-5)， 其中每個R6、R7和R8獨立地為氫、C1-4烷基、羥基、C1-4烷氧基、芳基氧基、C1-4烷氧基羰基、羥基C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、單(C1-4烷基)氨基C1-4烷基或二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氰基、氨基、硫代(thio)、C1-4烷硫基、芳硫基或芳基； ＞Y1-Y2-為下式的三價基團 ＞CH-CHR9-(y-1)， ＞C＝N-(y-2)， ＞CH-NR9-(y-3)，或 ＞C＝CR9-(y-4)； 其中每個R9獨立地為氫、鹵代、鹵代羰基、氨基羰基、羥基C1-4烷基、氰基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基羰基、單(C1-4烷基)氨基或二(C1-4烷基)氨基、單(C1-4烷基)氨基C1-4烷基或二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、芳基； r和s各自獨立地為0、1、2、3、4或5； t為0、1、2或3； 每個R1和R2獨立地為羥基、鹵代、氰基、C1-6烷基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基、氨基C1-6烷氧基、單-或二(C1-6烷基)氨基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、芳基、芳基C1-6烷基、芳基氧基或芳基C1-6烷氧基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、氨基羰基、氨基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基羰基或二(C1-6烷基)氨基羰基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；或 苯基環(huán)上彼此相鄰的兩個R1或R2取代基可獨立地形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O＝CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R3為氫、鹵代、C1-6烷基、氰基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、羥基羰基、羥基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、芳基、芳基C1-6烷氧基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 或下式的基團 -O-R10(b-1)， -S-R10(b-2)， -NR11R12(b-3)， 其中R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、芳基、芳基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基團-Alk-OR13或-Alk-NR14R15； R11為氫、C1-6烷基、芳基或芳基C1-6烷基； R12為氫、C1-6烷基、芳基、羥基、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基羰基氨基、單(C1-6烷基)氨基或二(C1-6烷基)氨基、C1-6烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、鹵代C1-6烷基羰基、芳基C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、單(C1-6烷基)氨基羰基或二(C1-6烷基)氨基羰基，其中烷基部分可任選地被一個或多個獨立選自以下的取代基取代芳基或C1-3烷氧基羰基、氨基羰基羰基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、或下式的基團-A1k-OR13或-Alk-NR14R15； 其中Alk為C1-6烷二基； R13為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、芳基或芳基C1-6烷基； R14為氫、C1-6烷基、芳基或芳基C1-6烷基； R15為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、芳基或芳基C1-6烷基； R4為下式的基團
其中R16為氫、鹵代、芳基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、單(C1-4烷基)氨基或二(C1-4烷基)氨基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷硫基C1-6烷基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R16也可結合于式(c-1)或(c-2)的咪唑環(huán)中的一個氮原子，在上述情況下，當結合于氮時，R16限于氫、芳基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R17為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、芳基C1-6烷基、三氟甲基或二(C1-4烷基)氨基磺酰基； R5為C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵代； 芳基為苯基、萘基或被1或多個各自獨立地選自鹵代、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基的取代基取代的苯基。
除了上述式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的法尼基轉移酶抑制劑之外，本領域中已知的其它法尼基轉移酶抑制劑包括阿拉賓(Arglabin)(即，在WO-98/28303(NuOncology Labs)中描述的1(R)-10-環(huán)氧基-5(S)，7(S)-愈創(chuàng)木-3(4)，11(13)-二烯-6，12-內酯；在WO-99/45912(Wisconsin Genetics)中描述的perrilyl醇；SCH-66336，即在美國專利5874442(Schering)中描述的(+)-(R)-4-[2-[4-(3，10-二溴-8-氯-5，6-二氫-11H-苯并[5，6]環(huán)庚烷并[1，2-b]吡啶-11-基)哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-1-甲酰胺；L778123，即，在WO-00/01691(Merck)中描述的1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮；在WO-94/10138(Merck)中描述的化合物2(S)-[2(S)-[2(R)-氨基-3-巰基]丙基氨基-3(S)-甲基]-戊基氧基-3-苯基丙?；?甲硫氨酸砜；和BMS214662，即，在WO97/30992(Bristol Myers Squibb)中描述的(R)-2，3，4，5-四氫-1-(IH-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-甲腈；和在WO-00/12498和WO-00/12499中描述的Pfizer化合物(A)和(B)
本領域中已知的FLT3激酶抑制劑包括AG1295和AG1296；來他替尼(Lestaurtinib)(又名CEP701，原名KT-5555，Kyowa Hakko，許可給Cephalon)；CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；CHIR-258(ChironCorp.)；EB-10和IMC-EB10(ImClone Systems Inc.)；GTP14564(MerkBiosciences UK)；米哚妥林(Midostaurin)(又名PKC 412 Novartis AG)；MLN608(Millennium USA)；MLN-518(原名CT53518，COR TherapeuticsInc.，許可給Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(MillenniumPharmaceuticals Inc.)；SU-11248(Pfizer USA)；SU-11657(Pfizer USA)；SU-5416和SU5614；THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528和VX-680(Vertex PharmaceuticalsUSA，許可給Novartis(Switzerland)，Merck&Co USA)；和XL999(Exelixis USA)。
還參見Levis，M.，K.F.Tse等人(2001)″A FLT3 tyrosine kinaseinhibitor is selectively cytotoxic to acute myeloid leukemia blasts harboringFLT3 internal tandem duplication mutations.″Blood 98(3)885-7；Tse KF等人(2001)Inhibition of FLT3-mediated transformation by use of a tyrosinekinase inhibitor.Leukemia.Jul；15(7)1001-10；Smith，B.Douglas等人，Single-agent CEP-701，a novel FLT3inhibitor，shows biologic andclinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloidleukemia Blood，May 2004；1033669-3676；Griswold，Ian J.等人，Effects of MLN518，A Dual FLT3 and KIT Inhibitor，on Normal andMalignant Hematopoiesis.Blood，Jul 2004；[Epub ahead of print]；Yee，Kevin W.H.等人，SU5416和SU5614 inhibit kinase activity of wild-typeand mutant FLT3 receptor tyrosine kinase.Blood，2002年9月；1002941-294；O′Farrell，Anne-Marie等人，SU11248 is a novel FLT3tyrosinekinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo.Blood，May 2003；1013597-3605；Stone，R.M.等人，PKC 412FLT3 inhibitortherapy in AMLresults of a phase II trial.Ann Hematol.2004；83 Suppl 1S89-90；和Murata，K.等人，Selective cytotoxic mechanism ofGTP-14564，a novel tyrosine kinase inhibitor in leukemia cell expressing aconstitutively active Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3).J Biol Chem.2003 Aug 29；278(35)32892-8；Levis，Mark等人，Novel FLT3 tyrosinekinase inhibitors.Expert Opin.Investing.Drugs(2003)12(12)1951-1962；Levis，Mark等人，Small Molecule FLT3 Tyrosine kinase inhibitors.Current Pharmaceutical Design，2004，10，1183-1193。


發(fā)明內容
本發(fā)明包括一種抑制細胞或受試者中FLT3酪氨酸激酶活性或表達、或降低FLT3激酶活性或表達的方法，包括給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑。本發(fā)明包括預防學和治療學方法，用于治療處于形成細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥危險下(或對形成所述病癥敏感)的受試者，該方法一般地包括對該受試者給予預防有效量的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑。FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可以作為包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體的單一的藥物組合物給予，或者作為單獨的藥物組合物給予(1)第一藥物組合物，包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體。本發(fā)明另外包括用于治療或抑制受試者中細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的發(fā)病的多組份治療，包括對受試者給予治療或預防有效量的FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑、和一種或多種其它抗細胞增殖性治療，包括化學治療、放射治療、基因治療和免疫治療。
可以參考附圖從隨后的詳細說明顯而易見本發(fā)明其它的實施方式、特點、優(yōu)點和方面。



圖1.口服給予本發(fā)明的化合物對裸鼠中的MV4-11腫瘤異種移植物生長的影響。
圖2.口服給予本發(fā)明的化合物對裸鼠中的MV4-11腫瘤異種移植物的最終重量的影響。
圖3.在從用本發(fā)明化合物處理的小鼠獲得的MV4-11腫瘤中的FLT3磷酸化。
圖4圖4被刻意省略了。
圖5.用于抑制FLT3-依賴性增殖的試驗化合物。
圖6.1-6.8.單個藥物對FLT3依賴性AML細胞增殖的劑量應答。
圖7a-c.在FLT3依賴性細胞中低劑量的FLT3抑制劑顯著改變替比法尼的效力。
圖8a-d.FLT3抑制劑化合物(A)和替比法尼或阿糖胞苷的單劑量組合協(xié)同抑制FLT3-依賴性細胞系生長。
圖9a-b.FLT3抑制劑化合物B和D與替比法尼或阿糖胞苷的單劑量組合協(xié)同抑制MV4-11細胞生長。
圖10.1.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物A和替比法尼協(xié)同抑制FLT3依賴性細胞的增殖。
圖10.2.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物B和替比法尼協(xié)同抑制FLT3依賴性細胞的增殖。
圖10.3.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物C和替比法尼協(xié)同抑制FLT3依賴性細胞的增殖。
圖10.4.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物D和替比法尼協(xié)同抑制FLT3依賴性細胞的增殖。
圖10.5.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物H和替比法尼協(xié)同抑制MV4-11細胞的增殖。
圖10.6.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物E和Zarnestra協(xié)同抑制MV4-11細胞的增殖。
圖10.7.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物F和替比法尼協(xié)同抑制FLT3依賴性MV4-11細胞的增殖。
圖10.8.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物G和替比法尼協(xié)同地抑制FLT3依賴性MV4-11細胞的增殖。
圖11a-c.FLT3抑制劑與FTI的組合協(xié)同誘導MV4-11細胞的細胞程序死亡。
圖12a-d.單一藥物誘導半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3/7活化和FLT3依賴性MV4-11細胞的細胞程序死亡的劑量應答。
圖13.1.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物B和替比法尼在FLT3依賴性MV4-11細胞中協(xié)同誘導半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7的活化。
圖13.2.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物C和替比法尼在FLT3依賴性MV4-11細胞中協(xié)同誘導半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7的活化。
圖13.3.通過Chou-Talalay法測量的，F(xiàn)LT3抑制劑化合物D和替比法尼在FLT3依賴性MV4-11細胞中協(xié)同誘導半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7的活化。
圖14.在MV4-11細胞中，替比法尼增加FLT3抑制劑化合物A抑制FLT3和Map激酶磷酸化的效力。
圖15.單獨或組合口服給予FLT3抑制劑化合物B和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11腫瘤異種移植物生長中隨時間對腫瘤體積的影響。
圖16.單獨或組合口服給予FLT3抑制劑化合物B和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11腫瘤異種移植物的生長中對腫瘤體積的影響(研究的最后一天)。
圖17.單獨或組合口服給予FLT3抑制劑化合物B和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11腫瘤異種移植物的生長中對腫瘤重量的影響(研究的最后一天)。
圖18.口服給予本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D對裸鼠中的MV4-11腫瘤異種移植物的生長的影響。
圖19.口服給予本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D對裸鼠中的MV4-11腫瘤異種移植物的最終重量的影響。
圖20.口服給予本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D對小鼠體重的影響。
圖21.在從用本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D處理的小鼠獲得的MV4-11腫瘤中的FLT3磷酸化。
圖22.單獨和組合口服給予FLT3抑制劑化合物D和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11腫瘤異種移植物生長中隨時間對腫瘤體積的影響。
圖23.單獨或組合口服給予FLT3抑制劑化合物D和替比法尼在裸鼠中的MV-4-11腫瘤異種移植物生長中對腫瘤體積的影響。
圖24.單獨或組合口服給予FLT3抑制劑化合物D和替比法尼對裸鼠中的MV-4-11腫瘤異種移植物的最終重量的影響。
發(fā)明的詳細說明和優(yōu)選實施方案 術語“包括”、“包含”、和“含有”用在本文中表示其開放的、非限制性的意義。
本發(fā)明包括一種抑制細胞或受試者中FLT3酪氨酸激酶活性或表達、或降低細胞或受試者中FLT3激酶活性或表達的方法，包括給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑。
本發(fā)明的實施方案包括一種降低或抑制受試者中FLT3酪氨酸激酶活性的方法，包括對該受試者給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑。
本發(fā)明的實施方案包括一種治療受試者中與FLT3酪氨酸激酶活性或表達相關的病癥的方法，包括對該受試者給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑。
本發(fā)明的實施方案包括一種降低或抑制細胞中FLT3酪氨酸激酶活性的方法，包括使該細胞與FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑接觸的步驟。
本發(fā)明還提供降低一種或抑制受試者中FLT3酪氨酸激酶表達的方法，包括對該受試者給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑的步驟。
本發(fā)明另外提供一種抑制細胞中細胞增殖的方法，包括使該細胞與FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑接觸的步驟。
細胞或受試者中的FLT3激酶活性可以通過本領域中公知的方法測定，例如本文中所述的FLT3激酶試驗。
如本文中使用的，術語“受試者”是指已經成為治療、觀察或實驗對象的動物，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。
如本文中使用的，術語“接觸”是指向細胞加入化合物，使得化合物被細胞吸收。
在這個方面的其它實施方案中，本發(fā)明提供預防和治療學方法，用于治療處于形成細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥危險下(或對形成所述病癥敏感)的受試者。
在一個實施例中，本發(fā)明提供預防受試者中細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的方法，包括對受試者給予預防有效量的(1)第一藥物組合物，包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體。
在一個實施例中，本發(fā)明提供預防受試者中細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的方法，包括對該受試者給予預防有效量的藥物組合物，該藥物組合物包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體。
所述預防劑的給予可以在表現(xiàn)出細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的癥狀特征之前進行，使得疾病或病癥得到預防，或者做為選擇，延遲疾病或病癥的進展。
在另一個實施例中，本發(fā)明涉及治療受試者中細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的方法，包括對受試者給予治療有效量的(1)第一藥物組合物，包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體。
在另一個實施例中，本發(fā)明涉及治療受試者中細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的方法，包括對該受試者給予預防有效量的藥物組合物，該藥物組合物包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體。
所述治療劑的給予可以與表現(xiàn)出該病癥的癥狀特征同時進行，使得所述治療劑起到用于校正細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的治療的作用。
FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可以作為包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體的單一藥物組合物給予，或者作為單獨的藥物組合物給予(1)第一藥物組合物，包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體。在后一種情況中，兩種藥物組合物可以同時給予(盡管以單獨的組合物的形式)、順序地給予(在大約相同的時間給予，或根據(jù)單獨的給藥程序給予)。根據(jù)單獨的給藥程序，兩種組合物在足夠保證實現(xiàn)有利或協(xié)同的效應的時間段內并且以足夠保證實現(xiàn)有利或協(xié)同效應的量和方式給予。
應該理解，優(yōu)選的給予方法和順序以及組合的每種組份的各自劑量和方案根據(jù)要給予的藥物、它們的給藥途徑、要治療的特定的腫瘤和要治療的特定的受體而定。
如本領域普通技術人員所理解的，最佳給予方法和順序、以及FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑的劑量和方案可以由本領域技術人員使用常規(guī)方法并且考慮本文中提供的信息容易地確定。
一般地，F(xiàn)LT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑的劑量和方案將與已用于其中將這些藥物單獨、或與其它化療療法組合給予的臨床治療的那些相似或更小。
術語“預防有效量”是指由研究人員、獸醫(yī)、內科醫(yī)生、或其它臨床醫(yī)師所探求的在受試者中抑制或延遲病癥發(fā)作的活性化合物或藥物的量。
術語“治療有效量”是指由研究人員、獸醫(yī)、內科醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所探求的在受試者中引起生物學或醫(yī)學反應的活性化合物或藥物的量，所述反應包括減輕所治療的疾病或病癥的癥狀。
測定本發(fā)明的藥物組合物的治療和預防有效劑量的方法是本領域中已知的。
如本文中使用的，術語“組合物”意在包括包含特定量的特定組分的產物，以及由特定量的特定組分的組合直接或間接得到的任何產物。
如本文中使用的，術語“FLT3相關病癥”、或“與FLT3受體有關的病癥”、或“與FLT3受體酪氨酸激酶相關的病癥”包括與FLT3活性相關或涉及FLT3活性(例如FLT3的過分活動)的疾病、和伴隨有這些疾病的狀況。術語“FLT3的過分活動”是指下述之一，1)在通常不表達FLT3的細胞中的FLT3表達；2)由通常不表達FLT3的細胞進行的FLT3表達；3)引起不需要的細胞增殖的增加的FLT3表達；或4)引起FLT3結構性活化的突變?！癋LT3相關病癥”的例子包括由于FLT3的量異常高或FLT3突變引起FLT3過度刺激而產生的病癥、或由于FLT3的量異常高或FLT3突變引起FLT3活性異常高而產生的病癥。已知FLT3的過分活動在許多疾病的發(fā)病機理，包括下列的細胞增殖性病癥、腫瘤病癥和癌癥中被牽涉。
術語“細胞增殖性病癥”是指對多細胞機體產生損害(即，不適或縮短預期壽命)的在多細胞機體中一種或多種細胞亞型的有害的細胞增殖。細胞增殖性病癥可以在不同類型的動物和人中出現(xiàn)。例如，如本文中使用的，“細胞增殖性病癥”包括腫瘤病癥和其它細胞增殖性病癥。
如本文中使用的，“腫瘤病癥”是指由異?；虿皇芸刂频募毎L產生的腫瘤。腫瘤病癥的例子包括但不限于造血功能障礙，諸如例如，骨髓增生異常，例如血小板增多、原發(fā)性血小板增多(ET)、特發(fā)性骨髓外化生、骨髓纖維化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纖維化(MMM)、慢性特發(fā)性骨髓纖維化(IMF)、真性紅細胞增多(PV)、血細胞減少癥和惡化前脊髓發(fā)育不良綜合征；癌癥，例如神經膠質瘤癌、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌，和血液學惡性腫瘤，包括脊髓發(fā)育不良、多發(fā)性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。血液學惡性腫瘤的例子包括，例如白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也稱為霍奇金淋巴瘤)、和骨髓瘤——例如，急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性粒細胞白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性粒細胞白血病(CML)、慢性嗜中性粒細胞白血病(CNL)、急性未分化細胞白血病(AUL)、退行發(fā)育性大細胞性淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴細胞白血病(PML)、幼年型粒-單核細胞白血病(JMML)、成人T細胞ALL、伴有三譜系脊髓發(fā)育不良AML(AML/TMDS)、混合型譜系白血病(MLL)、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、骨髓增生異常(MPD)、和多發(fā)性骨髓瘤(MM)。
在這個方面的另一個實施方案中，本發(fā)明包括用于治療或抑制受試者中細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的發(fā)病的多組份治療，包括對受試者給予治療或預防有效量的FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑、和一種或多種其它抗細胞增殖性治療，包括化學治療、放射治療、基因治療和免疫治療。
如本文中使用的，“化學治療”是指涉及化療劑的治療。各種化療劑可用于本文中公開的多組份治療方法。被考慮作為示例性的化療劑包括但不限于鉑化合物(如順鉑，卡鉑，奧沙利鉑)；紫杉烷化合物(如，紫杉醇、多西他賽)；喜樹堿化合物(伊立替康、拓撲替康)；長春花生物堿(如，長春新堿、長春堿、長春瑞濱)；抗腫瘤核苷衍生物(如，5-氟尿嘧啶、亞葉酸、吉西他濱、卡培他濱)；烷化劑(如，環(huán)磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、塞替派)；表鬼臼毒素/鬼臼毒素(如依托泊苷、替尼泊苷)；芳香化酶抑制劑(如，阿那曲唑、來曲唑、依西美坦)；抗雌激素化合物(如，他莫昔芬、氟維司群)、抗葉酸劑(如，培美曲塞(pemetrexed)二鈉)；低甲基化藥物(如，阿扎胞苷)；生物制劑(如，吉姆單抗、西妥昔單抗、利妥西單抗、帕妥珠單抗(pertuzumab)、曲妥珠單抗、貝伐單抗、埃羅替尼)；抗生素/蒽環(huán)類(如伊達比星、放線菌素D、博來霉素、柔紅霉素、多柔比星、絲裂霉素C、放線菌素D、洋紅霉素、道諾霉素)；抗代謝物(如，氨基碟呤、氯法拉賓、阿糖胞苷、甲氨蝶呤)；微管蛋白粘合劑(如考布他汀、秋水仙堿、諾考達唑)；拓撲異構酶抑制劑(如，喜樹堿)。另外有用的藥物包括維拉帕米，一種鈣拮抗劑，被認為可用于與抗腫瘤劑組合以在對所接受的化療劑耐受的腫瘤細胞中建立化學敏感性和加強這種化合物在藥物敏感性惡性腫瘤中的效力。參見SimpsonWG，The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy.Cell Calcium.1985Dec；6(6)449-67。另外，仍有化療劑被考慮可用于與本發(fā)明的化合物組合。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，F(xiàn)LT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可與放射治療組合給予。如本文中使用的，“放射治療”是指包括使有需要的受試者暴露于輻射下的治療。這種治療是本領域技術人員已知的。放射治療的適當模式與已用于其中單獨使用放射治療或將放射治療與其它化療藥物組合的臨床治療的那些模式相似。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，F(xiàn)LT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可與基因治療組合給予。如本文中使用的，“基因治療”是指靶向腫瘤發(fā)展所涉及的特定基因的治療?？赡艿幕蛑委煵呗园ɑ謴腿毕菪桶┌Y抑制基因、用與編碼生長因子及其受體的基因對應的反義DNA進行細胞轉導或轉染、基于RNA的策略例如核酶、RNA誘餌、反義信使RNA和小干擾性RNA(siRNA)分子和所謂的“自殺基因”。
在本發(fā)明的其它實施方案中，F(xiàn)LT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可與免疫治療組合給予。如本文中使用的，“免疫治療”是指通過對腫瘤發(fā)展所涉及的特定蛋白質為特異性的抗體而靶向這種蛋白質的治療。例如，針對血管內皮細胞生長因子的單克隆抗體已經被用于治療癌癥。
在將一種或多種另外的化療劑與FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑結合應用時，另外的化療劑、FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可同時給予(如以單獨的或單一的組合物形式)、以任何順序、在大約相同的時間、或根據(jù)單獨的給藥方案連續(xù)給予。在后一種情況中，藥物在足夠保證實現(xiàn)有利和協(xié)同效應的時間段內并且以足夠保證實現(xiàn)有利和協(xié)同效應的量和方式給予。應該理解，優(yōu)選的給予方法和給予順序及另外的化療劑各自的劑量和方案根據(jù)要與FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑結合給予的特定的化療劑、它們的給藥途徑、所要治療的特定的腫瘤、和所要治療的特定的受體而定。如本領域普通技術人員理解的，另外的化療劑的適當劑量一般類似于或小于已經用于其中將化療藥物單獨給予或與其它化療藥物組合給予的臨床治療的那些劑量。
最佳的給藥方法和順序及劑量和給藥方案可由本領域技術人員使用常規(guī)方法并且考慮本文中所述的信息容易地確定。
只作為示例，鉑化合物有利地以每平方米體表面積1到500mg(mg/m2)的劑量給予，例如50到400mg/m2，具體地，順鉑為約75mg/m2劑量，卡鉑為約300mg/m2劑量每療程。順鉑口服不能吸收，因此必須通過靜脈內、皮下、腫瘤內或腹膜內注射遞送。
只作為示例，紫杉烷化合物有利地以每平方米體表面積50到400mg(mg/m2)的劑量給予，例如75到250mg/m2，具體地，紫杉醇為約175到250mg/m2劑量，多西他賽為約75到150mg/m2每療程。
只作為示例，喜樹堿化合物有利地以每平方米體表面積0.1到400mg(mg/m2)的劑量給予，例如1到300mg/m2，具體地，伊立替康為約100到350mg/m2劑量，拓撲替康為約1到2mg/m2每療程。
只作為示例，長春花生物堿可有利地以每平方米體表面積2到30mg(mg/m2)的劑量給予，具體地，長春堿為約3到12mg/m2，長春新堿為約1到2mg/m2劑量，長春瑞濱為約10到30mg/m2劑量每療程。
只作為示例，抗腫瘤核苷衍生物可有利地以每平方米體表面積200到2500mg(mg/m2)的劑量給予，例如，700到1500mg/m2。5-氟尿嘧啶(5-FU)通常以200到500mg/m2(優(yōu)選3到15mg/kg/天)的劑量通過靜脈內給予。吉西他濱有利地以約800到1200mg/m2的劑量給予，卡培他濱有利地以約1000到2500mg/m2每療程給予。
只作為示例，烷化劑可有利地以每平方米體表面積100到500mg(mg/m2)的劑量給予，例如，120到200mg/m2，具體地，環(huán)磷酰胺的劑量為約100到500mg/m2，苯丁酸氮芥的劑量為約0.1到0.2mg/kg體重，卡莫司汀的劑量為約150到200mg/m2，和洛莫司汀的劑量為約100到150mg/m2每療程。
只作為示例，鬼臼毒素衍生物可有利地以每平方米體表面積30到300mg(mg/m2)的劑量給予，例如50到250mg/m2，具體地，依托泊苷的劑量為約35到100mg/m2，替尼泊苷為約50到250mg/m2每療程。
只作為示例，蒽環(huán)類衍生物可有利地以每平方米體表面積10到75mg(mg/m2)的劑量給予，例如15到60mg/m2，具體地，多柔比星的劑量為約40到75mg/m2，柔紅霉素的劑量為約25到45mg/m2，伊達比星的劑量為約10到15mg/m2每療程。
只作為示例，抗雌激素化合物可有利地以每日約1到100mg的劑量給予，根據(jù)特定的藥物和要治療的狀況而定。他莫昔芬有利地以5到50mg的劑量口服給予，優(yōu)選10到20mg每天兩次，持續(xù)治療到充分的時間以實現(xiàn)和維持治療效果。托瑞米芬有利地以一天一次約60mg的劑量口服給予，持續(xù)治療到充分的時間以實現(xiàn)和維持治療效果。阿那曲唑有利地以一天一次約1mg的劑量口服給予。屈洛昔芬有利地以約20-100mg一天一次口服給予。雷洛昔芬有利地以一天一次約60mg的劑量口服給予。依西美坦有利地以一天一次約25mg的劑量口服給予。
只作為示例，生物制劑可有利地以約每平方米體表面積約1到5mg(mg/m2)的劑量給予，或者如果不同，如本領域中已知的。例如，曲妥珠單抗有利地以1到5mg/m2的劑量給予，具體地，為2到4mg/m2每療程。
劑量可每療程給予例如一次、兩次或多次，其可按例如每7、14、21或28天重復。
FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可以系統(tǒng)地對受試者給予，例如靜脈內、口服、皮下、肌內、皮內、或非胃腸給予。FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑也可局部給予受試者。局部遞送系統(tǒng)的非限制性例子包括使用腔內醫(yī)療裝置，包括血管內給藥導管、金屬絲、藥理學支架和腔內鋪面(endoluminal paving)。FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑還可與靶向劑組合給予受試者，以實現(xiàn)FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑在目標區(qū)域的高局部濃度。另外，F(xiàn)LT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可配制用于快速釋放或緩慢釋放，以維持藥物或藥劑與靶組織接觸幾小時到幾周的時間。
包括與可藥用載體結合的FLT3激酶抑制劑、和與可藥用載體結合的法尼基轉移酶抑制劑的單獨的藥物組合物可包含約0.1mg到1000mg，優(yōu)選約100到500mg的單獨藥物化合物，并且可構成為適合于所選給藥方式的任何形式。
包括與可藥用載體結合的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑的單一藥物組合物可包含約0.1mg到1000mg，優(yōu)選約100到500mg的化合物，并且可構成為適合于所選給藥方式的任何形式。
短語“可藥用”是指在對動物、或對人適當?shù)亟o予時，不會產生不利的、過敏的或其它不良反應的分子實體和組合物。獸醫(yī)學用途同樣地包括在本發(fā)明之內，并且“可藥用”制劑包括用于臨床和/或獸醫(yī)用途的制劑。
載體包括必要的和惰性的藥物賦形劑，包括但不限于粘合劑、助懸劑、潤滑劑、調味劑、甜味劑、防腐劑、染料、和包衣。適合于口服給予的組合物包括固體形式，例如丸劑、片劑、扁囊劑、膠囊(分別包括立即釋放、定時釋放和持續(xù)釋放制劑)、顆粒劑、和粉末劑，和液體形式，例如溶液劑、糖漿劑、酏劑、乳劑、和懸浮劑。用于非胃腸給予的形式包括無菌溶液劑、乳劑和懸浮劑。
本發(fā)明的藥物組合物，無論是單一的還是單獨的，可配制用于FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑的緩慢釋放。這種組合物，無論是單一組合物還是單獨組合物，包括緩釋載體(通常為聚合物載體)和FLT3激酶抑制劑及法尼基轉移酶抑制劑中的一種，或在單一組合物的情況中包括緩釋載體(通常為聚合物載體)和FLT3激酶抑制劑及法尼基轉移酶抑制劑兩者。
緩釋的生物可降解載體為本領域中公知的。這些是可以形成在其中俘獲活性化合物的粒子并且在適當?shù)沫h(huán)境(如，水性、酸性、堿性環(huán)境等)中緩慢降解/溶解并且從而在體液中降解/溶解和釋放活性化合物的那些材料。粒子優(yōu)選是納米粒子(即，直徑為約1到500nm，優(yōu)選直徑為約50-200nm，最優(yōu)選直徑為約100nm)。
法尼基轉移酶抑制劑 可用于本發(fā)明的方法或治療中的法尼基轉移酶抑制劑的例子包括上述式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的法尼基轉移酶抑制劑(“FTI”)。
優(yōu)選的FTI包括式(I)、(II)或(III)的化合物

及其可藥用酸或堿加成鹽和立體化學異構形式，其中 虛線表示任選的鍵； X為氧或硫； R1為氫、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、 或下式的基團-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9， 其中Alk1為C1-6烷二基， R9為羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基； R2、R3和R16各自獨立地為氫、羥基、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基、4，4-二甲基唑基；或 當在相鄰的位置上時，R2和R3可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(a-1)， -O-CH2-CH2-O-(a-2)， -O-CH＝CH-(a-3)， -O-CH2-CH2-(a-4)， -O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(a-6)； R4和R5各自獨立地為氫、鹵代、Ar1、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基； R6和R7各自獨立地為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar2氧基、三鹵代甲基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基，或 當在相鄰的位置上時，R6和R7可以一起形成下式的二價基團 -O-CH2-O-(c-1)，或 -CH＝CH-CH＝CH-(c-2)； R8為氫、C1-6烷基、氰基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、咪唑基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、或下式的基團 -O-R10(b-1)， -S-R10(b-2)， -N-R11R12(b-3)， 其中R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基團-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； R11為氫、C1-12烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R12為氫、C1-6烷基、C1-16烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、天然氨基酸、Ar1羰基、Ar2C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羥基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基團-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15； 其中Alk2為C1-6烷二基； R13為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R14為氫、C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R15為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar2C1-6烷基； R17為氫、鹵代、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、Ar1； R18為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵代； R19為氫或C1-6烷基； Ar1為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵代取代的苯基；和 Ar2為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵代取代的苯基。
在式(I)、(II)和(III)中，R4或R5也可結合于咪唑環(huán)中的一個氮原子。在這種情況下氮上的氫被R4或R5代替，并且當結合于氮時，R4和R5的含義限于氫、Ar1、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基、C1-6烷基S(O)2C1-6烷基。
優(yōu)選地，式(I)、(II)和(III)中的取代基R18位于喹啉酮部分的5或7位，并且當R18在7-位上時，取代基R19位于8位。
FTI的優(yōu)選例子為其中X為氧的那些式(I)的化合物。
另外，優(yōu)選的FTI的例子為其中虛線表示鍵以形成雙鍵的那些式(I)的化合物。
優(yōu)選的FTI的另一個組為如下那些式(I)的化合物其中R1為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或下式的基團-Alk1-C(＝O)-R9，其中Alk1為亞甲基和R9為被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基。
優(yōu)選的FTI的又一個組為如下那些式(I)的化合物其中R3為氫或鹵代；和R2為鹵代、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、三鹵代甲氧基或羥基C1-6烷氧基。
優(yōu)選的FTI的另一個組為如下那些式(I)的化合物其中R2和R3處于相鄰的位置并且一起形成式(a-1)、(a-2)或(a-3)的二價基團。
優(yōu)選的FTI的又一個組為如下那些式(I)的化合物其中R5為氫和R4為氫或C1-6烷基。
優(yōu)選的FTI的又一個組為如下那些式(I)的化合物其中R7為氫；和R6為C1-6烷基或鹵代，優(yōu)選為氯，特別是4-氯。
優(yōu)選的FTI的另一個示例性組為如下那些式(I)的化合物其中R8為氫、羥基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、咪唑基、或下式的基團-NR11R12，其中R11為氫或C1-12烷基和R12為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、或下式的基團-Alk2-OR13，其中R13為氫或C1-6烷基。
優(yōu)選的化合物還包括如下那些式(I)的化合物其中R1為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或下式的基團-Alk1-C(＝O)-R9，其中Alk1為亞甲基和R9為被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基；R2為鹵代、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、三鹵代甲氧基、羥基C1-6烷氧基或Ar1；R3為氫；R4為結合于咪唑3位氮的甲基；R5為氫；R6為氯；R7為氫；R8為氫、羥基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、咪唑基、或下式的基團-NR11R12，其中R11為氫或C1-12烷基和R12為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、或下式的基團-Alk2-OR13，其中R13為C1-6烷基；R17為氫和R18為氫。
特別優(yōu)選的FTI為 4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)羥基(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-[氨基(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-[(4-氯苯基)羥基(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-乙氧基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-[(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-乙氧基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮一鹽酸鹽一水合物； 6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-乙氧基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮； 6-氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1-甲基-4-(3-丙基苯基)-2(1H)-喹啉酮；其立體異構形式或可藥用酸或堿加成鹽；和 (+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮(替比法尼；WO97/21701的表1中的化合物75)；及其可藥用酸加成鹽和立體化學異構形式。
替比法尼或ZARNESTRA為特別優(yōu)選的FTI。
另外優(yōu)選的FTI包括適用以下一條或多條的式(IX)的化合物 ·＝X1-X2-X3為下式的三價基團(x-1)、(x-2)、(x-3)、(x-4)或(x-9)，其中每個R6獨立地為氫、C1-4烷基、C1-4烷氧基羰基、氨基或芳基和R7為氫； ·＞Y1-Y2-為下式的三價基團(y-1)、(y-2)、(y-3)、或(y-4)，其中每個R9獨立地為氫、鹵代、羧基、C1-4烷基或C1-4烷氧基羰基； ·r為0、1或2； ·s為0或1； ·t為0； ·R1為鹵代、C1-6烷基或苯環(huán)上彼此鄰位的兩個R1取代基可獨立地一起形成式(a-1)的二價基團； ·R2為鹵代； ·R3為鹵代或式(b-1)或(b-3)的基團，其中 R10為氫或下式的基團-Alk-OR13； R11為氫； R12為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基、C1-6烷氧基或單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基； Alk為C1-6烷二基和R13為氫； ·R4為下式的基團(c-1)或(c-2)，其中 R16為氫、鹵代或單(C1-4烷基)氨基或二(C1-4烷基)氨基； R17為氫或C1-6烷基； ·芳基為苯基。
另一個優(yōu)選的FTI組為如下的式(IX)的化合物其中＝X1-X2-X3為式(x-1)、(x-2)、(x-3)、(x-4)或(x-9)的三價基團，＞Y1-Y2為式(y-2)、(y-3)或(y-4)的三價基團，r為0或1，s為1，t為0，R1為鹵代、C(1-4)烷基或形成式(a-1)的二價基團，R2為鹵代或C1-4烷基，R3為氫或式(b-1)或(b-3)的基團，R4為式(c-1)或(c-2)的基團，R6為氫、C1-4烷基或苯基，R7為氫，R9為氫或C1-4烷基，R10為氫或-Alk-OR13，R11為氫和R12為氫或C1-6烷基羰基和R13為氫； 優(yōu)選的FTI為如下那些式(Ix)的化合物其中＝X1-X2-X3為下式的三價基團(x-1)或(x-4)，＞Y1-Y2為下式的三價基團(y-4)，r為0或1，s為1，t為0，R1為鹵代、優(yōu)選為氯和最優(yōu)選為3-氯，R2為鹵代、優(yōu)選為4-氯或4-氟，R3為氫或式(b-1)或(b-3)的基團，R4為式(c-1)或(c-2)的基團，R6為氫，R7為氫，R9為氫，R10為氫，R11為氫和R12為氫。
其它優(yōu)選的FTI為如下那些式(IX)的化合物其中＝X1-X2-X3為式(x-2)、(x-3)或(x-4)的三價基團，＞Y1-Y2為式(y-2)、(y-3)或(y-4)的三價基團，r和s為1，t為0，R1為鹵代、優(yōu)選為氯、和最優(yōu)選3-氯或R1為C1-4烷基、優(yōu)選為3-甲基，R2為鹵代、優(yōu)選為氯、和最優(yōu)選4-氯，R3為式(b-1)或(b-3)的基團，R4為式(c-2)的基團，R6為C1-4烷基，R9為氫，R10和R11為氫和R12為氫或羥基。
特別優(yōu)選的式(IX)的FTI化合物為 7-[(4-氟苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-5-苯基咪唑并[1，2-a]喹啉； α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-苯基咪唑并[1，2-a]喹啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-咪唑并[1，2-a]喹啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)咪唑并[1，2-a]喹啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-1-甲基-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-1，2，4-三唑并[4，3-a]喹啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-4，5-二氫-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲醇； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲胺； 5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-N-羥基-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四氫[1，5-a]喹啉-7-甲胺；和 α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-(3-甲基苯基)四唑并[1，5-a]喹啉-7-甲胺；及其可藥用酸加成鹽和立體化學異構形式。
5-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)四唑并[1，5-a]喹唑啉-7-甲胺，特別是(-)對映體，及其可藥用酸加成鹽是特別優(yōu)選的FTI。
本文中前述的可藥用酸或堿加成鹽意在包括式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物能夠形成的治療活性的無毒的酸加成鹽和無毒的堿加成鹽形式。具有堿性性質的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物可以通過用適當?shù)乃崽幚砥鋲A的形式轉化為其可藥用酸加成鹽。適當?shù)乃岚ɡ鐭o機酸，例如氫鹵酸，如鹽酸或氫溴酸；硫酸；硝酸；磷酸等；或有機酸，例如乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、水楊酸、對氨基水楊酸、雙羥萘酸等。
具有酸性性質的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物可以通過用適當?shù)挠袡C或無機堿處理其酸的形式而轉化為它們的可藥用堿加成鹽。適當?shù)膲A鹽形式包括例如銨鹽、堿金屬和堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等，與有機堿的鹽，例如N，N’-二芐基乙二胺(benzathine)、N-甲基-D-葡糖胺、哈胺(hydrabamine)鹽，和與氨基酸的鹽，例如精氨酸、賴氨酸等。
酸和堿加成鹽也包括優(yōu)選的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物能夠形成的水合物和溶劑加成形式。這種形式的例子為例如水合物、醇化物等。
如本文中前述使用的，式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物包括所述結構式的所有立體化學異構形式(由通過相同鍵順序結合的相同原子組成但是具有不同的不可互換的三維結構的所有可能的化合物)。除非另外提及或指出，F(xiàn)TI化合物的化學命名應該理解為包括該化合物可能擁有的所有可能的立體化學異構形式的混合物。這種混合物可包含該化合物的基本分子結構的全部非對映體和/或對映體。式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物的全部立體化學異構形式，既包括純形式，又包括彼此的混合形式，都被包括在所述結構式的范圍內。
某些式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的FTI化合物也可以其互變異構形式存在。這種形式，雖然沒有明確地表示在上述式中，但是也意在被包括在其范圍內。
因此，除非在下文中另外指出，術語“式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的化合物”和“式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的法尼基轉移酶抑制劑”也意在包括可藥用酸或堿加成鹽和全部的立體異構和互變異構形式。
可用于本發(fā)明的其它法尼基轉移酶抑制劑包括如上所述的阿拉賓、perrilyl醇、SCH-66336、2(S)-[2(S)-[2(R)-氨基-3-巰基]丙基氨基-3(S)-甲基]-戊基氧基-3-苯基丙?；?甲硫氨酸砜(Merck)；L778123、BMS214662、Pfizer化合物A和B。對于化合物阿拉賓(WO98/28303)、perrilyl醇(WO99/45712)、SCH-66336(US5,874,442)、L778123(WO00/01691)、2(S)-[2(S)-[2(R)-氨基-3-巰基]丙基氨基-3(S)-甲基]-戊基氧基-3-苯基丙酰基-甲硫氨酸砜(WO94/10138)、BMS214662(WO97/30992)、Pfizer化合物A和B(WO00/12499和WO00/12498)的適當劑量或治療有效量在公布的專利說明書中給出或者是本領域技術人員已知或可以容易地確定的。
FLT3激酶抑制劑 本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體， 其中 q為0、1或2； p為0或1； Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵 Z為NH、N(烷基)、或CH2； B為苯基、雜芳基(其中所述雜芳基優(yōu)選為吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N氧化物，并且最優(yōu)選吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)、或9-10元的苯并稠合雜芳基(其中所述9-10元的苯并稠合雜芳基優(yōu)選為苯并噻唑基、苯并唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、或苯并[b]噻吩基)； R1為
其中n為1、2、3或4； Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基(其中所述雜芳基優(yōu)選為吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最優(yōu)選吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、或吡嗪基)、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基(其中所述雜環(huán)基優(yōu)選為吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、咪唑烷基、噻唑烷基、唑烷基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基-1，1-二氧化物、哌啶基、嗎啉基、或哌嗪基)、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)COR)y、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx； R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基(其中所述芳烷基的芳基部分優(yōu)選為苯基)、或雜芳烷基(其中所述雜芳烷基的雜芳基部分優(yōu)選為吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最優(yōu)選吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)，或Rw和Rx可任選地結合在一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分(heteromoiety)O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S，優(yōu)選選自
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基(其中所述環(huán)烷基優(yōu)選為環(huán)戊基或環(huán)己基)、苯基、芳烷基(其中所述芳烷基的芳基部分優(yōu)選為苯基)、雜芳烷基(其中所述雜芳烷基的雜芳基部分優(yōu)選為吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最優(yōu)選吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)、或雜芳基(其中所述雜芳基優(yōu)選為吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物，并且最優(yōu)選吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、或吡嗪基)；和 R3為一個或多個獨立選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代(thio)、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基(其中所述環(huán)烷基優(yōu)選為環(huán)戊基或環(huán)己基)、任選地被R4取代的雜芳基(其中所述雜芳基優(yōu)選為吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、噻喃基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、吡嗪基、吡啶基-N-氧化物、或吡咯基-N-氧化物；并且最優(yōu)選吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、或吡嗪基)、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基(其中所述雜環(huán)基優(yōu)選為四氫吡啶基四氫吡嗪基、二氫呋喃基、二氫嗪基、二氫吡咯基、二氫咪唑基、氮雜環(huán)庚烯基(azepenyl)、吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、咪唑烷基、噻唑烷基、唑烷基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、哌啶基、嗎啉基、或哌嗪基)、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基(thioalkyl)、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
如本文中隨后使用的，術語“式I′的化合物”還意在包括其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、和立體化學異構體。
式I′的FLT3抑制劑-縮寫和定義 如涉及式I′的FLT3抑制劑所用的，以下術語意在具有以下含義 ATP 三磷酸腺苷 Boc 叔-丁氧基羰基 DCM 二氯甲烷 DMF 二甲基甲酰胺 DMSO 二甲基亞砜 DIEA 二異丙基乙基胺 DTT 二硫蘇糖醇 EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 EDTA 乙二胺四乙酸 EtOAc 乙酸乙酯 FBS 胎牛血清 FP熒光偏振 GM-CSF粒細胞和巨噬細胞集落刺激因子 HBTU O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽 Hex 己烷 HOBT 1-羥基苯并三唑水合物 HPβCD羥基丙基β-環(huán)糊精 HRP 辣根過氧化物酶 i-PrOH異丙醇 LC/MS(ESI)液相色譜/質譜(電噴射離子化) MeOH 甲醇 NMM N-甲基嗎啉 NMR 核磁共振 PS聚苯乙烯 PBS 磷酸鹽緩沖鹽水 RPMI Rosewell Park MemorialInstitute RT室溫 RTK 受體酪氨酸激酶 NaHMDS六甲基二硅氮烷鈉 SDS-PAGE 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳 TEA 三乙胺 TFA 三氟乙酸 THF四氫呋喃 TLC薄層色譜法 (另外的縮寫在說明書中在需要時提供。) 定義 如涉及式I’的FLT3抑制劑時使用的，以下術語意在具有以下含義(另外的定義在說明書中在需要時提供) 術語“烯基”，無論是單獨使用還是作為取代基團的一部分，例如“C1-4烯基(芳基)”，是指具有至少一個碳碳雙鍵的部分不飽和的支鏈或直鏈一價烴基，其中雙鍵衍生自從母體烷基分子的兩個相鄰碳原子的每一個除去一個氫原子并且該基團衍生自從一個碳原子除去一個氫原子。各個原子相對于雙鍵可定位為順式(Z)或反式(E)構型。典型的烯基基團包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基(2-丙烯基)、丁烯基等。實例包括C2-8烯基或C2-4烯基。
術語“Ca-b”(其中a和b為表示碳原子的指定數(shù)目的整數(shù))是指烷基、烯基、炔基、烷氧基或環(huán)烷基基團，或是指基團的烷基部分，在基團中烷基為含有包含端值的a到b個碳原子的前綴詞根。例如，C1-4表示包含1、2、3或4個碳原子的基團。
術語“烷基”，無論是單獨使用還是作為取代基的一部分，是指飽和的支鏈或直鏈一價烴基，其中該基團衍生自從一個碳原子去除一個氫原子。除非明確地指出(例如通過利用限制性術語例如“末端碳原子”)，取代基變量可位于任何碳鏈原子上。典型的烷基基團包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基等。實例包括C1-8烷基、C1-6烷基和C1-4烷基。
術語“烷基氨基”是指通過從烷基胺(例如丁胺)的氮上去除一個氫原子形成的基團，并且術語“二烷基氨基”是指通過從仲胺(例如二丁胺)的氮上去除一個氫原子形成的基團。在兩種情況中，要求與分子的其余部分的連結點為氮原子。
術語“炔基”，無論是單獨使用還是作為取代基的一部分，是指具有至少一個碳碳三鍵的部分不飽和的支鏈或直鏈一價烴基，其中三鍵衍生自從母體烷基分子的兩個相鄰碳原子中的每一個去除兩個氫原子，并且該基團衍生自從一個碳原子去除一個氫原子。典型的炔基基團包括乙炔基、丙炔基、丁炔基等。實例包括C2-8炔基或C2-4炔基。
術語“烷氧基”是指通過從母體烷、烯或炔上的羥基氧(hydroxideoxygen)取代基去除氫原子衍生的飽和或部分不飽和的支鏈或直鏈一價烴基醇基團。在表示飽和的具體水平時，術語“烷氧基”、“烯基氧基”、和“炔基氧基”的使用和烷基、烯基和炔基的定義相一致。實例包括C1-8烷氧基或C1-4烷氧基。
術語“烷氧基醚”是指通過從羥基醚的羥基氧取代基上去除氫原子衍生的飽和的支鏈或直鏈單價烴基醇基團。實例包括1-羥基-2-甲氧基-乙烷和1-(2-羥基-乙氧基)-2-甲氧基-乙烷基團。
術語“芳烷基”是指包含芳基取代基的C1-6烷基。實例包括芐基、苯基乙基或2-萘基甲基。指定與分子其余部分的連結點為烷基。
術語“芳香的”是指具有不飽和的、共軛π電子系統(tǒng)的環(huán)烴環(huán)狀系統(tǒng)。
術語“芳基”是指通過從環(huán)系統(tǒng)的一個碳原子去除一個氫原子衍生的芳香環(huán)烴環(huán)狀基團。典型的芳基基團包括苯基、萘基、芴基、茚基、奧基、蒽基等。
術語“芳基氨基”是指被芳基(例如苯基)取代的氨基基團(例如氨)。要求與分子的其余部分的連結點為氮原子。
術語“芳基氧基”是指被芳基如苯基取代的氧原子基團。要求與分子的其余部分的連結點為氧原子。
術語“苯并稠合的環(huán)烷基”是指其中一個環(huán)為苯基和另一個為環(huán)烷基或環(huán)烯基環(huán)的二環(huán)稠環(huán)系統(tǒng)基團。典型的苯并稠合環(huán)烷基基團包括2，3-二氫化茚基、1，2，3，4-四氫-萘基、6，7，8，9，-四氫-5H-苯并環(huán)庚烯基、5，6，7，8，9，10-六氫-苯并環(huán)辛烯基等。苯并稠合的環(huán)烷基環(huán)狀系統(tǒng)為芳基的子集。
術語“苯并稠合的雜芳基”是指其中一個環(huán)為苯基和另一個環(huán)為雜芳基環(huán)的二環(huán)稠環(huán)系統(tǒng)基團。典型的苯并稠合雜芳基基團包括吲哚基、二氫吲哚基、異氮茚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、1，2-二氮雜萘基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基等。苯并稠合的雜芳基環(huán)為雜芳基的子集。
術語“苯并稠合的雜環(huán)基”是指其中一個環(huán)為苯基和另一個環(huán)為雜環(huán)基的二環(huán)稠環(huán)系統(tǒng)基團。典型的苯并稠合的雜環(huán)基團包括1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基(又名1，3-亞甲二氧基苯基)、2，3-二氫-1，4-苯并二氧雜環(huán)己烯基(又名1，4-亞乙基二氧基苯基)、苯并二氫呋喃基、苯并四氫吡喃基、苯并二氫-噻吩基等。
術語“羧基烷基”是指烷基化的羧基，例如叔丁氧基羰基，其中與分子的其余部分的連結點為羰基。
術語“環(huán)狀雜二酮基(cyclic heterodionyl)”是指帶有兩個氧代取代基的雜環(huán)化合物。實例包括噻唑烷二酮基、唑烷二酮基、和吡咯烷二酮基。
術語“環(huán)烯基”是指通過從包含至少一個碳-碳雙鍵的烴類環(huán)狀系統(tǒng)去除一個氫原子衍生的部分不飽和的環(huán)烷基。實例包括環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基和1，2，5，6-環(huán)辛二烯基。
術語“環(huán)烷基”是指通過從一個環(huán)碳原子去除一個氫原子衍生的飽和或部分不飽和的單環(huán)或二環(huán)烴環(huán)基。典型的環(huán)烷基基團包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。另外的實例包括C3-8環(huán)烷基、C5-8環(huán)烷基、C3-12環(huán)烷基、C3-20環(huán)烷基、十氫萘基、和2，3，4，5，6，7-六氫-1H-茚基。
術語“稠合的環(huán)狀系統(tǒng)”是指其中有兩個相鄰的原子存在于兩個環(huán)狀部分的每一個中的雙環(huán)分子。可任選地存在有雜原子。實例包括苯并噻唑、1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯和十氫化萘。
用作環(huán)狀系統(tǒng)前綴的術語“雜”是指用一個或多個獨立地選自N、S、O或P的原子代替至少一個環(huán)碳原子。實例包括其中1、2、3或4個環(huán)成員是氮原子的環(huán)，或者，0、1、2或3個環(huán)成員是氮原子和1個成員為氧或硫原子的環(huán)。
術語“雜芳烷基”是指包含雜芳基取代基的C1-6烷基。實例包括呋喃基甲基和吡啶基丙基。指定與分子其余部分的連結點為烷基。
術語“雜芳基”是指通過從雜芳環(huán)狀系統(tǒng)的環(huán)碳原子去除一個氫原子衍生的基團。典型的雜芳基基團包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異唑基、異噻唑基、二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、中氮茚基、吲哚基、異吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基，嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、異喹啉基、1，2-二氮雜萘基、酞嗪基(phthalzinyl)、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮雜萘基、蝶啶基等。
術語“雜芳基稠合的環(huán)烷基”是指其中一個環(huán)為環(huán)烷基和另一個環(huán)為雜芳基的二環(huán)稠環(huán)系統(tǒng)基團。典型的雜芳基稠合環(huán)烷基基團包括5，6，7，8-四氫-4H-環(huán)庚烷并(b)噻吩基、5，6，7-三氫-4H-環(huán)己烷并(b)噻吩基、5，6-二氫-4H-環(huán)戊烷并(b)噻吩基等。
術語“雜環(huán)基”是指通過從單個碳或氮環(huán)原子去除一個氫原子衍生的飽和或部分不飽和的單環(huán)基團。典型的雜環(huán)基基團包括2H-吡咯、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、1，3-二氧雜環(huán)戊烷基、2-咪唑啉基(也稱為4，5-二氫-1H-咪唑基)、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、四唑基、哌啶基、1，4-二氧雜環(huán)己烷基、嗎啉基、1，4-二硫雜環(huán)己烷基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基-1，1-二氧化物、哌嗪基、氮雜環(huán)庚烷基、六氫-1，4-二氮雜?；?。
術語“氧代”是指氧原子基團；所述氧原子具有兩個與同一原子最優(yōu)選碳原子結合的開放化學價。氧代基團是烷基的適當取代基。例如，具有氧代取代基的丙烷為丙酮或丙醛。雜環(huán)也可被氧代基團取代。例如，具有氧代取代基的唑烷為唑烷酮。
術語“取代的”是指核心分子的一個或多個氫原子已經被一個或多個官能基團部分代替。取代作用不限于核心分子，而是也可以在取代基上進行，從而該取代基變成連接基團。
術語“獨立地選自”是指一個或多個取代基選自一組取代基，其中各個取代基可相同或不同。
用于披露式I’的FLT3抑制劑的取代基命名法是首先指出具有連結點的原子，隨后是從左至右朝向末端鏈原子的連接基團原子，實質上如同以下 (C1-6)烷基C(O)NH(C1-6)烷基(Ph) 或者通過首先指出末端鏈原子，隨后是朝向具有連結點的原子的連接基團原子，實質上如同以下 Ph(C1-6)烷基酰胺基(C1-6)烷基 兩種情況都是指下式基團
另外，從取代基引入環(huán)狀系統(tǒng)的線表示該鍵可連接于任一個適當?shù)沫h(huán)原子。
當任何變量(例如R4)在式I’的FLT3抑制劑的任何實施方案中出現(xiàn)超過一次時，各自的定義是獨立的。
式I’的FLT3抑制劑的實施方案 在式I’的FLT3抑制劑的實施方案中，在一個或多個N-1或N-3上任選地存在有N-氧化物(環(huán)編號參見以下圖1a)。
圖1a
圖1a說明環(huán)原子編號1到6，作為在本說明書中使用。
式I’的FLT3抑制劑的優(yōu)選實施方案是其中存在有一個或多個以下限制的式I’的化合物 q為0、1或2； p為0或1； Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵； Z為NH、N(烷基)、或CH2； B為苯基或雜芳基； R1為
其中n為1、2、3或4； Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx； R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地結合在一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和 R3為一個或多個獨立選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代(thio)、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基(thioalkyl)、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
式I’的FLT3抑制劑的其它優(yōu)選實施方案是其中存在有一個或多個以下限制的式I’的化合物 q為1或2； p為0或1； Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵； Z為NH、N(烷基)、或CH2； B為苯基或雜芳基； R1為
其中n為1、2、3或4； Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx； R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地結合在一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和 R3為一個或多個選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的苯氧基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
式I’的FLT3抑制劑的其它優(yōu)選實施方案是其中存在有一個或多個以下限制的式I’的化合物 q為1或2； p為0或1； Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵； Z為NH或CH2； B為苯基或雜芳基； R1為
其中n為1、2、3或4； Ra為氫、烷氧基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-SO2NRwRx； R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基； Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地結合在一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和 R3為一個或多個選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的苯氧基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
式I’的FLT3抑制劑的特別優(yōu)選的實施方案是其中存在有一個或多個以下限制的式I’的化合物 q為1或2； p為0或1； Q為NH、O、或直接鍵； Z為NH或CH2； B為苯基或雜芳基； R1為
其中n為1、2、3或4； Ra為氫、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、雜芳基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-CONRwRx、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-N(Ry)CON(Rw)(Rx)； R5為一個選自以下的取代基-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或-C(1-4)烷基-OH； Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地結合在一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO、SO2、或S； Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和 R3為一個或兩個獨立地選自以下的取代基烷基、烷氧基、鹵素、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、苯氧基、或二烷基氨基。
式I’的FLT3抑制劑的最特別優(yōu)選的實施方案是其中存在有一個或多個以下限制的式I’的化合物 q為1或2； p為0或1； Q為NH、O、或直接鍵； Z為NH或CH2； B為苯基或吡啶基； R1為
其中n為1、2、3或4； Ra為氫、羥基、氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-CONRwRx、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、或-NRwSO2Ry； R5為一個選自以下的取代基-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或-C(1-4)烷基-OH； Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地結合在一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S； Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和 R3為一個獨立地選自以下的取代基烷基、烷氧基、-O(環(huán)烷基)、或苯氧基。
式I’的FLT3抑制劑也可作為可藥用鹽的形式存在。
為了用于藥物，式I’的FLT3抑制劑化合物的鹽是指無毒的“可藥用鹽”。FDA批準的可藥用鹽形式(參考International J.Pharm.1986，33，201-217；J.Pharm.Sci.，1977，Jan，66(1)，p1)包括可藥用酸式/陰離子型或堿式/陽離子型的鹽。
可藥用酸式/陰離子型鹽包括但不限于乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、glyceptate、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇?；鶎Π北交樗猁}、己基間苯二酚鹽、哈胺、氫溴化物、氫氯化物、羥基萘甲酸鹽、碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、異丙嗪荼氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽、和三乙基碘。有機或無機酸還包括但不限于氫碘酸、高氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羥基乙磺酸、草酸、2-萘磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、己糖酸或三氟乙酸。
可藥用堿式/陽離子型鹽包括但不限于鋁、2-氨基-2-羥基甲基-丙烷-1，3-二醇(又名三(羥基甲基)氨基甲烷、氨基丁三醇(tromethane)或“TRIS”)、氨、N，N’-二芐基乙二胺(benzathine)、叔丁胺、鈣、葡萄糖酸鈣、氫氧化鈣、氯普魯卡因、膽堿、膽堿碳酸氫鹽、氯化膽堿、環(huán)己胺、二乙醇胺、乙二胺、鋰、LiOMe、L-賴氨酸、鎂、葡甲胺、NH3、NH4OH、N-甲基-D-葡糖胺、哌啶、鉀、叔丁醇鉀、氫氧化鉀(含水的)、普魯卡因、奎寧、鈉、碳酸鈉、2-乙基己酸鈉(SEH)、氫氧化鈉、三乙醇胺(TEA)或鋅。
本發(fā)明的FLT3抑制劑在其范圍內包括式I’的化合物的前體藥物。通常，這種前體藥物為該化合物的功能衍生物，其可在體內容易地轉化為活性物質。因此，在本發(fā)明的治療方法中，術語“給予”包括用明確披露的式I’的FLT3抑制劑或其復合物或前體藥物治療、改善或預防本文中所述綜合癥、病癥或疾病的含義，其明顯地包括在本發(fā)明范圍內，雖然某些本發(fā)明的復合物沒有明確地披露。選擇和制備適當?shù)那绑w藥物衍生物的常規(guī)方法在例如“Design of Prodrugs”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述。
本領域技術人員知道，式I’的FLT3抑制劑可在其結構中具有一個或多個不對稱碳原子。本發(fā)明在其范圍內意在包括式I’的FLT3抑制劑的單個對映體形式、外消旋混合物、和其中存在對映體過量的對映體混合物。
如本文中使用的術語“單個對映體”定義了式I化合物及其N-氧化物、加成鹽、季銨類或生理學功能性衍生物可能具有的所有可能的純手性形式。
立體化學純的異構形式可通過應用已知技術原理得到。非對映異構體可通過物理分離方法分離，例如分步結晶和色譜技術，并且對映體可通過與光學活性的酸或堿形成的非對映體鹽的選擇結晶彼此分離，或者通過手性色譜法彼此分離。也可從適當?shù)牧Ⅲw化學純的原料、或通過使用立體選擇性反應合成制備純的立體異構體。
術語“異構體”是指具有相同組成和分子量但是物理和/或化學性質不同的化合物。這種物質具有相同的原子數(shù)和原子種類，但是在結構上不同。結構差異可以是構成方式(幾何異構體)或者在使偏振光平面旋轉的能力方面(對映體)不同。
術語“立體異構體”是指具有相同構造但是它們的原子空間排列不同的異構體。對映體和非對映體是立體異構體的實例。
術語“手性”是指分子的不能將其與其鏡象重疊的結構特性。
術語“對映體”是指彼此為鏡像但是不能重疊的一對分子之一。
術語“非對映體”是指彼此不是鏡像的立體異構體。
符號“R”和“S”表示手性碳原子上取代基的構型。
術語“外消旋物”或“外消旋混合物”是指由等摩爾量的兩種對映體組成的組合物，其中該組合物沒有旋光性。
術語“純手性的”是指對映體純狀態(tài)。
術語“旋光性”是指純手性分子或手性分子的非外消旋混合物旋轉偏振光平面的程度。
術語“幾何異構體”是指取代基原子就與碳-碳雙鍵、環(huán)烷基環(huán)或橋二環(huán)系統(tǒng)的關系而論定值不同的異構體。碳-碳雙鍵的每個側面上的取代基原子(非H)可為E或Z構型狀態(tài)。在“E”(相對側)構型中，取代基相對于碳-碳雙鍵在相對側；在“Z”(相同側)構型中，取代基相對于碳-碳雙鍵以相同側定位。連接于碳環(huán)的取代基原子(非氫)可為順式或反式構型。在“順式”構型中，取代基相對于環(huán)的平面在相同側；在“反式”構型中，取代基相對于環(huán)的平面在相對側。具有“順式”和“反式”物類混合物的化合物稱為“順/反”。
應該理解，用于制備本發(fā)明化合物的各種取代基立體異構體、幾何異構體及其混合物或者是市售的、可以從市售原料合成制備的，或者可以制備為異構混合物、然后使用本領域技術人員公知的技術拆分異構體得到。
異構描述符“R”、“S”、“E”、“Z”、“順式”、和“反式”在本文中用于描述相對于核心分子的原子構型，并且意在以在文獻中的定義使用(IUPAC Recommendations for FundamentalStereochemistry(Section E)，Pure Appl.Chem.，1976，4513-30)。
式I’的FLT3抑制劑可通過異構體特異性合成或從異構混合物拆分制備為單獨的異構體。常規(guī)的拆分技術包括使用光學活性的鹽形成異構體對的每種異構體的游離堿(隨后分步結晶和回收游離堿)、形成異構體對的每種異構體的酯或酰胺(隨后色譜分離和去除手性輔助劑)或使用制備型TLC(薄層色譜法)或手性HPLC柱拆分原始材料或最終產物的異構混合物。
此外，式I’的FLT3抑制劑可具有一種或多種多晶形物或無定形的結晶形式，因此意在被包括在本發(fā)明范圍內。另外，式I’的某些FLT3抑制劑可形成溶劑化物，例如與水(即，水合物)或常見的有機溶劑形成的溶劑化物。如本文中使用的，術語“溶劑化物”是指本發(fā)明的化合物與一種或多種溶劑分子的物理締合。這種物理締合包括不同程度的離子鍵合和共價鍵合，包括氫鍵。在某些情況中，溶劑化物能夠分離，例如當一個或多個溶劑分子結合到結晶固體的晶格中時。術語“溶劑化物”意在包括溶液相和可分離的溶劑化物。適當?shù)娜軇┗锏姆窍拗菩詫嵗ㄒ掖蓟铩⒓状蓟锏取?br> 本發(fā)明在其范圍內意在包括本發(fā)明的式I’的FLT3抑制劑的溶劑化物。因此，在本發(fā)明的治療方法中，術語“給予”包括用明確地披露的式I’的FLT3抑制劑或其復合物或溶劑化物治療、改善或預防本文中所述綜合癥、病癥或疾病的含義，其明顯的包括在本發(fā)明范圍內，雖然某些本發(fā)明的復合物沒有明確地披露。
式I’的FLT3抑制劑可根據(jù)技術上已知的用于將三價氮轉化為其N-氧化物形式的方法被轉化為相應的N-氧化物形式。所述N-氧化反應通?？赏ㄟ^使式I’的原始材料與適當?shù)挠袡C或無機過氧化物反應而進行。適當?shù)臒o機過氧化物包括例如過氧化氫、堿金屬或堿土金屬過氧化物，例如過氧化鈉、過氧化鉀；適當?shù)挠袡C過氧化物可包括過氧酸，諸如例如，過氧苯甲酸或鹵素取代的過氧苯甲酸(例如3-氯過氧苯甲酸)、過氧鏈烷酸(例如過氧乙酸)、烷基過氧化氫(例如叔丁基過氧化氫)。適當?shù)娜軇┦抢缢?、低級?例如乙醇等)、烴類(例如甲苯)、酮類(例如2-丁酮)、鹵代烴類(例如二氯甲烷)、以及這些溶劑的混合物。
某些式I’的FLT3抑制劑也可以它們的互變異構形式存在。這種形式雖然沒有在本申請中明確地指出，但是意在被包括在本發(fā)明的范圍內。
式I’的FLT3抑制劑的制備 在制備式I’的FLT3抑制劑的任何方法中，有必要和/或期望保護所涉及的任何分子上的敏感或活性基團。這可以通過常規(guī)的保護基實現(xiàn)，例如在Protecting Groups，P.Kocienski，Thieme Medical Publishers，2000；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd ed.Wiley Interscience，1999中所述的那些。保護基可以使用本領域中已知的方法在隨后的適當階段被除去。
式I’的FLT3抑制劑可通過本領域技術人員已知的方法制備。以下反應圖解只是意在表示本發(fā)明的實施例，而不意在以任何方式限制本發(fā)明。
一般反應圖解
式I’的FLT3抑制劑化合物可通過本領域技術人員已知的方法制備。以下反應圖解僅用于表示本發(fā)明的實施例，而不以任何方式限制本發(fā)明。
其中B、Z、Q、q、p、R1和R3的定義同式I’的式I’的FLT3抑制劑化合物可根據(jù)圖解1中所述的一般合成路線制備。在Vilsmeier反應條件(DMF/POCl3)下處理嘧啶-4，6二酚II′可得到4，6-二氯-嘧啶-5-甲醛III′，用氨處理III′時可以得到關鍵中間體4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛IV’。用適當?shù)沫h(huán)胺V’在溶劑例如DMSO中在25℃到150℃的溫度下在堿如二異丙基乙胺的存在下處理氯代嘧啶IV’可得到嘧啶VI’。用適當?shù)腞1ONH2在溶劑如甲醇中處理VI’可以得到最終產物I’。盡管只用圖表示出反式的式I’，但是可以預料在最終反應中既可以形成反式幾何異構體也可以形成順式幾何異構體。異構體可通過柱色譜法分離并且通過相應的肟的次甲基氫Ha的1H NMR化學位移進行清楚的圖譜解析(圖1b)。觀察到的主要的反式異構體的1H NMR圖譜顯示出，與順式異構體的Ha次
“反式”異構體 “順式”異構體 圖1b 甲基氫的化學位移相比，反式異構體的Ha次甲基氫特征性的進一步低磁場化學位移。觀察到的反式和順式肟異構體的Ha氫的1H化學位移之間的差別與本領域已知的文獻對應(Biorg.Med.Chem.Lett.2004，14，5827-5830)。
圖解1
其中Q為O、NH或N(烷基)，Z為NH或N(烷基)以及B、q、p和R3的定義同式I’的環(huán)胺試劑V’可以根據(jù)圖解2a中所述的反應順序制備。被保護的胺VII’(其中PG是適當?shù)陌繁Ｗo基，如N-Boc)與適當?shù)孽；噭￢III’(其中LG可為對硝基苯氧基、氯基或咪唑)進行?；傻玫锦；闹虚g體IX’。在適當?shù)拿摫Ｗo基條件下除去氨基保護基(PG)可得到所需的胺V’。被保護的環(huán)胺VII’可為市售的或者得自已知方法(JOC，1961，26，1519；EP314362；US4822895；EP401623)。?；噭￢III’為市售的或者可如圖解2a所示制備。用適當?shù)孽；噭┤玺驶溥蚧蚵燃姿釋ο趸交ピ趬A如三乙胺的存在下處理適當?shù)腞3BZH(其中Z為NH或N(烷基))可得到VIII’。許多R3BZH試劑為市售的并且可根據(jù)許多已知方法制備(例如Tet Lett 1995，36，2411-2414)?？晒┻x擇的獲得V’(其中Q為O、NH或N(烷基)，Z為CH2以及B、p、q和R3的定義同式I’)的方法如圖解2b所示。使用標準的偶合試劑如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)或1-羥基苯并三唑(HOBT)，使被保護的環(huán)胺VII’與適當?shù)腞3BCH2CO2H進行偶合，可以得到?；闹虚g體IX’。在酸性條件下除去N-Boc保護基可以得到所需的胺V’。
圖2a
R1ONH2試劑(其中R1的定義同式I’)為市售的或者可根據(jù)圖解3a所示的反應順序制備。芐叉X’與適當?shù)挠H電子試劑R1LG(其中LG可以是離去基團，如溴基和碘基)和堿如KOH在溶劑如DMSO中進行烷基化，可以得到芐叉中間體XI’，其在酸性條件如4N HCl下經過處理可以得到所需的R1ONH2試劑。制備R1ONH2試劑(其中n、R1和Ra的定義同式I)的有關方法如圖解3b所示。芐叉X’與適當?shù)挠H電子試劑PGO(CH2)nLG(其中PG為已知的醇保護基，LG為離去基團如溴基或碘基)和堿如KOH在溶劑如DMSO中進行烷基化可得到O-烷基化的芐叉。在標準條件下除去本領域技術人員已知的醇保護基，將醇轉化為本領域技術人員已知的適當?shù)碾x去基團如甲磺酸酯，隨后與適當?shù)挠H核性雜環(huán)、雜芳基、胺、醇、氨磺?；蛄虼歼M行SN2置換反應，然后通過酸介導的芐叉除去，可以得到R1ONH2試劑。如果Ra親核試劑為硫醇，則硫醇的進一步氧化可以得到相應的亞砜和砜。如果Ra親核試劑為氨基，則氮與適當?shù)孽；噭┗蚧腔噭┑孽；梢缘玫较鄳孽０?、氨基甲酸酯、脲和氨磺酰。如果所需的Ra為COORy或CONRwRx，則這些可得自相應的羥基。在本領域已知的條件下將羥基氧化成酸、然后形成酯或酰胺，可以得到其中Ra為COORy或CONRwRx的實施例。
圖解3a
圖解3b
其中 PG為保護基 LG為離去基團 Nuc為親核試劑 或者，其中Q為O、NH、或N(烷基)且B、Z、q、p、R1和R3的定義同式I’的式I’的FLT3抑制劑化合物可根據(jù)圖解4中所述的一般合成路線制備。用適當?shù)沫h(huán)胺XII’在溶劑如乙腈中在堿如二異丙基乙胺的存在下處理4-氯嘧啶IV’可以得到嘧啶XIII’。用適當?shù)腞1ONH2在溶劑如MeOH中處理5-甲醛嘧啶XIII’可以得到中間體XIV’，當通過本領域已知的標準脫保護條件將該中間體XIV’隨后脫去取代基Q上的保護基(PG)時可以得到嘧啶XV’。在堿如二異丙基乙胺存在下，XV’與適當?shù)脑噭￢III’(其中Z為NH或N(烷基)，LG可為氯基、咪唑或對硝基苯氧基)的?；?，或者，當Z為CH2時，使用標準偶合試劑如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)或1-羥基苯并三唑(HOBT)通過與適當?shù)腞3BCH2CO2H進行偶合，可以得到最終產物I’。盡管只用圖表示出反式的式I′，但是可以預料在反應順序中既可以形成反式幾何異構體又可以形成順式幾何異構體。所述異構體可以通過柱色譜法分離并且進行清楚的圖譜解析。
圖解4
或者，其中Z為NH，Q為O、NH或N(烷基)且B、q、p、R1和R3的定義同式I’的式I’的FLT3抑制劑化合物可根據(jù)圖解5中所述的一般合成路線制備。用適當?shù)沫h(huán)胺XII’在溶劑如乙腈中在堿如二異丙基乙胺的存在下處理4-氯嘧啶IV’可以得到嘧啶XIII’。用適當?shù)腞1ONH2在溶劑如MeOH中處理5-甲醛嘧啶XIII’可以得到中間體XIV’，當通過本領域已知的標準脫保護條件將該中間體XIV’隨后脫去取代基Q上的保護基(PG)時可以得到嘧啶XV’。用適當?shù)腞3BNCO處理XV’可以得到最終產物I’。盡管只用圖表示出反式的式I′，但是可以預料在反應順序中既可以形成反式幾何異構體又可以形成順式幾何異構體。所述異構體可以通過柱色譜法分離并且進行清楚的圖譜解析。
圖解5
其中Q為直接鍵，Z為NH或N(烷基)且B、q、p、R1和R3的定義同式I’的式I’的FLT3抑制劑化合物可根據(jù)圖解6中所述的一般合成路線制備。用適當?shù)沫h(huán)狀氨基酯XVI’(其中PG為本領域已知的酯保護基)在溶劑如乙腈中在堿如二異丙基乙胺的存在下處理4-氯嘧啶IV’可以得到嘧啶XVII’。用適當?shù)腞1ONH2在溶劑如MeOH中處理5-醛嘧啶XVII’可以得到中間體XVIII’，當通過本領域已知的標準脫保護條件隨后脫去保護基(PG)時可以得到嘧啶XIX’。使用本領域已知的標準偶合試劑如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二咪唑鹽酸鹽使適當?shù)脑噭㏑3BZH與XIX’進行偶合可以得到最終產物I’。盡管只用圖表示出反式的式I′，但是可以預料在反應順序中既可以形成反式幾何異構體又可以形成順式幾何異構體。所述異構體可以通過柱色譜法分離并且進行清楚的圖譜解析。
圖解6
典型的式I′的FLT3抑制劑 以下提供通過前述方法合成的典型的式I’的FLT3抑制劑。其后提供合成具體化合物的實例。優(yōu)選化合物的編號為2、5、6、7、8、11、12、15、19、21、23，特別優(yōu)選編號2、5、6、8和11者。







實施例1 (4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
a.(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯
在0℃向在CH2Cl2(5mL)中的1，1’-羰基二咪唑(CDI，1.64g，10mmol)中添加在CH2Cl2(10mL)中的4-異丙氧基-苯基胺(1.52g，10mmol)。在室溫攪拌1小時后，添加在CH2Cl2(5mL)中的4-羥基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(2.05g，10mmol)，混合物在室溫保持攪拌過夜，其用水猝滅，用CH2Cl2提取，有機提取物用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)，將一部分用BOC-保護的產物(0.35g，0.93mmol)再次溶于CH2Cl2(5mL)。向該溶液中添加1mL的三氟乙酸，得到的混合物在室溫攪拌1小時，真空除去有機溶劑，粗物質用2M在MeOH的NH3中和。在蒸發(fā)溶劑后，粗殘余物通過硅膠急驟柱色譜法純化(5％MeOH/CH2Cl2)，得到產物，為淺褐色固體(250mg，97％)。1H NMR(CDCl3)δ7.26(m，2H)，6.84(d，J＝8.70Hz，2H)，6.49(br，1H)，4.88(m，1H)，4.48(sep，J＝6.0Hz，1H)，3.12(m，2H)，2.83(m，2H)，2.04(m，2H)，1.71(m，2H)，1.31(d，J＝6.0Hz，6H)；LC/MS(ESI)C15H23N2O3(MH)+計算值279.2，實測值279.3。
b.4，6-二氯-嘧啶-5-甲醛
DMF(3.2mL)和POCl3(10mL)的混合物在0℃攪拌1小時，用4，6-二羥基嘧啶(2.5g，22.3mmol)處理，在環(huán)境溫度攪拌0.5小時，非均相混合物加熱回流3小時，減壓除去揮發(fā)性物質。殘余物被傾入到冰水中并用乙醚提取6次。有機相用NaHCO3水溶液洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮，得到黃色固體(3.7g，95％)。1H NMR(CDCl3)δ10.46(s，1H)，8.90(s，1H)。
c.4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛
將氨氣鼓泡通過4，6-二氯-嘧啶-5-甲醛(1g，5.68mmol)的甲苯(100mL)溶液10分鐘，該溶液在室溫攪拌過夜。過濾除去黃色沉淀物，用EOAc洗滌，真空干燥，得到純產物(880mg，99％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.23(s，1H)，8.72(br，1H)，8.54(br，1H)，8.38(s，1H)。
d.(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-哌啶-4-基酯
向4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(60.6mg，0.39mmol)和(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯(102.3mg，0.37mmol)的DMSO(1mL)溶液中添加DIEA(118.9mg，0.92mmol)。混合物在100℃攪拌4小時，冷卻到室溫，用水稀釋，其用EtOAc提取，有機提取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，得到的黃色固體用EtOAc洗滌，得到產物，為白色固體(93.7mg，63.5％)。1H NMR(CDCl3)δ9.77(s，1H)，9.16(br，1H)，9.07(br，1H)，8.08(s，1H)，7.26(m，2H)，6.86(d，J＝8.82Hz，2H)，6.51(br，1H)，5.13(m，1H)，4.50(sep，J＝6.01Hz，1H)，4.10(m，2H)，3.96(m，2H)，2.08-2.15(m，2H)，1.93-1.99(m，2H)，1.32(d，J＝6.06Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H26N5O4(MH)+計算值400.2，實測值400.3。
e.(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
向(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-哌啶-4-基酯(14mg，0.035mmol)的MeOH(1mL)溶液中添加MeONH2.HCl(8.8mg，0.11mmol)。混合物在100℃攪拌1小時，減壓除去溶劑。粗物質的急驟色譜法(EtOAc作為洗脫液)提供標題化合物，為白色固體(13mg，86.7％)。1H NMR(CDCl3)δ8.16(s，1H)，8.05(s，1H)，7.25(m，2H)，7.24(br，2H)，6.84(d，J＝8.97Hz，2H)，6.48(br，1H)，5.01(m，1H)，4.49(sep，J＝6.05Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.69(m，2H)，3.37(m，2H)，2.01-2.11(m，2H)，1.77-1.89(m，2H)，1.31(d，J＝6.06Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H29N6O4(MH)+，計算值429.2，實測值429.3。
實施例2 (4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(乙氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
基本如實施例1e所述制備，不同之處在于使用乙氧基胺鹽酸鹽(9.2mg，95％)。1H NMR(CDCl3)δ8.18(br，1H)，8.07(s，1H)，721-7.29(m，4H)，6.85(d，J＝8.97Hz，2H)，6.49(br，1H)，5.01(m，1H)，4.49(sep，J＝6.04Hz，1H)，4.20(q，J＝7.06Hz，2H)，3.70(m，2H)，3.39(m，2H)，2.01-2.11(m，2H)，1.77-1.89(m，2H)，1.32(t，J＝6.98Hz，3H)，1.31(d，J＝5.82Hz，6H)；LC/MS(ESI)C22H31N6O4(MH)+計算值443.2，實測值443.3。
實施例3 (4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(2-嗎啉-4-基-乙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
a.二苯基-甲酮O-(2-嗎啉-4-基-乙基)-肟
在室溫將N-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(2.10g，11mmol)分份添加到KOH粉末(1.24g，22mmol)和二苯甲酮肟(1.97g，10mmol)在DMSO(23mL)中的懸浮液中。反應混合物在室溫保持攪拌3天，用水稀釋，用乙醚提取。有機相用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，得到幾乎是純的產物。1H NMR(CDCl3)δ7.32-7.50(m，10H)，4.35(t，J＝5.59Hz，2H)，3.69(t，J＝4.52Hz，4H)，2.74(m，2H)，249(m，4H)；LC/MS(ESI)C19H23N2O2(MH)+計算值311.2，實測值311.2。
b.O-(2-嗎啉-4-基-乙基)-羥基胺二鹽酸鹽
二苯基-甲酮O-(2-嗎啉-4-基-乙基)-肟(2.5g，8.06mmol)在6N HCl(13.5mL)中的懸浮液在攪拌的同時加熱回流，2小時后，混合物被冷卻到室溫，用EtOAc提取幾次。水相真空蒸發(fā)至干，得到標題化合物(740mg，63％)。1H NMR(DMSO-d6)δ445(t，J＝4.49Hz，2H)，3.89(t，J＝4.48Hz，4H)，3.47(t，J＝4.64Hz，2H)，3.29(m，4H)；LC/MS(ESI)C6H15N2O2(MH)+計算值147.1，實測值147.1。
c.(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(2-嗎啉-4-基-乙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
基本如實施例1e所述制備，不同之處在于使用O-(2-嗎啉-4-基-乙基)-羥基胺鹽酸鹽(10.9mg，62.6％)。1H NMR(CD3OD)δ8.19(s，1H)，8.06(s，1H)，7.29(d，J＝8.36Hz，2H)，6.83(d，J＝9.02Hz，2H)，4.91(m，1H)，4.51(sep，J＝6.04Hz，1H)，4.40(t，J＝5.09Hz，2H)，3.77(t，J＝4.64Hz，4H)，3.70(t，J＝4.52Hz，2H)，3.63(m，2H)，3.35(m，2H)，2.99(m，2H)，2.81(m，4H)，2.05(m，2H)，1.81(m，2H)，1.27(d，J＝6.04Hz，6H)；LC/MS(ESI)C26H38N7O5(MH)+計算值528.3，實測值528.4。
實施例4 (4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(3-二甲基氨基-丙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
a.二苯基-甲酮O-(3-二甲基氨基-丙基)-肟
基本如實施例3a所述制備，不同之處在于使用(3-氯-丙基)-二甲基-胺代替N-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽。1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.50(m，10H)，4.22(t，J＝6.46Hz，2H)，2.33(t，J＝7.23Hz，2H)，2.21(s，6H)，1.88(m，2H)；LC/MS(ESI)C18H23N2O(MH)+計算值283.2，實測值283.2。
b.O-(3-二甲基氨基-丙基)-羥基胺二鹽酸鹽
基本如實施例3b所述制備，不同之處在于使用二苯基-甲酮O-(3-二甲基氨基-丙基)-肟代替二苯基-甲酮O-(2-嗎啉-4-基-乙基)-肟。1HNMR(CD3OD)δ4.21(t，J＝5.90Hz，2H)，3.30(t，J＝7.11Hz，2H)，2.92(s，6H)，2.18(m，2H)；LC/MS(ESI)C5H15N2O(MH)+計算值119.1，實測值119.2。
c.(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸1-{6-氨基-5-[(3-二甲基氨基-丙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌啶-4-基酯
基本如實施例1e所述制備，不同之處在于使用O-(3-二甲基氨基-丙基)-羥基胺鹽酸鹽(2.0mg，14.4％)。1H NMR(CD3OD)δ8.19(s，1H)，8.07(s，1H)，7.29(d，J＝8.79Hz，2H)，6.82(d，J＝9.05Hz，2H)，4.94(m，1H)，4.51(sep，J＝6.02Hz，1H)，4.28(t，J＝5.84Hz，2H)，3.66(m，2H)，3.36(m，2H)，3.28(m，2H)，2.91(s，6H)，2.11-2.22(m，2H)，2.01-2.10(m，2H)，1.76-1.86(m，2H)，1.28(d，J＝6.04Hz，6H)；LC/MS(ESI)C25H38N7O4(MH)+計算值500.3，實測值500.4。
實施例5 (4-異丙基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
a.(4-異丙基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯
向1，1’-羰基二咪唑(304mg，1.88mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中添加4-羥基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(350mg，1.74mmol)，在0℃攪拌30分鐘后，添加4-異丙基苯胺(251mg，1.86mmol)，混合物在室溫攪拌過夜。真空除去溶劑，得到粗固體，其用TFA(20mL)和CH2Cl2(20mL)處理并攪拌30分鐘。減壓除去溶劑，得到標題化合物，為固體(113mg，25％)。1H NMR(CDCl3)δ7.31(m，2H)，7.14(m，3H)，4.82(m，1H)，3.07(m，3H)，2.89-2.74(m，3H)，1.92(m，2H)，1.61(m，2H)，1.22(s，3H)，1.19(s，3H)；LC/MS(ESI)C15H22N2O2計算值262.35，實測值[M+1]+263.2。
b.(4-異丙基-苯基)-氨基甲酸1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基酯
向(4-異丙基-苯基)-氨基甲酸哌啶-4-基酯(67mg，0.26mmol)和4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(40.1mg，0.26mmol)在DMSO(1mL)的混合物中添加DIEA(165mg，1.28mmol)。溶液在100℃攪拌。2小時后，添加甲氧基胺鹽酸鹽(65.1mg，0.78mmol)，混合物在100℃保持攪拌1小時。其被冷卻到室溫，在CH2Cl2和水之間分配。有機相用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。粗物質通過硅膠急驟柱色譜法純化(EtOAc作為洗脫液)，得到所需產物，為白色固體(23mg，21.9％)。1H NMR(CDCl3)δ8.83(br，1H)，8.40(br，1H)，8.05(s，1H)，7.92(s，1H)，7.24-7.31(m，2H)，7.18(d，J＝8.62Hz，2H)，6.56(br，1H)，5.08(m，1H)，3.97(s，3H)，3.88-3.96(m，2H)，3.64-3.74(m，2H)，2.88(m，1H)，2.03-2.13(m，2H)，1.81-1.92(m，2H)，1.23(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H29N6O3(MH)+計算值413.2，實測值413.3。
實施例6 2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-N-(4-異丙基-苯基)-乙酰胺
a.3-[(4-異丙基-苯基氨基甲?；?-甲基]-吡啶烷-1-羧酸叔丁基酯
向3-羧甲基-吡啶烷-1-羧酸叔丁基酯(665.7mg，2.9mmol)和4-異丙基-苯基胺(435mg，3.19mmol)在無水THF(30mL)的混合物中添加HOBT(577.6mg，3.78mmol)，然后添加HBTU(1.43g，3.78mmol)和DIEA(1.13g，8.71mmol)?；旌衔镌谑覝財嚢柽^夜，減壓除去溶劑。殘余物在EtOAc和水之間分配，有機提取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。粗產物通過硅膠急驟柱色譜法純化(EtOAc/己烷，1∶1 v/v)，得到所需產物(558mg，56％)。1H NMR(CDCl3)δ7.56(br，1H)，7.42(m，2H)，7.16(m，2H)，3.60(dd，J＝10.72和7.25Hz，H)，3.44(m，1H)，3.29(m，1H)，2.99(m，1H)，2.86(m，1H)，2.69(m，1H)，2.30-2.49(m，2H)，2.09(m，1H)，1.59(m，1H)，1.44(s，9H)，1.21(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H31N2O3(MH)+計算值347.2，實測值347.4。
b.N-(4-異丙基-苯基)-2-吡咯烷-3-基-乙酰胺三氟乙酸鹽
將3-[(4-異丙基-苯基氨基甲?；?-甲基]-吡啶烷-1-羧酸叔丁基酯(558mg，1.61mmol)溶于50％TFA/CH2Cl2(10mL)，溶液在室溫攪拌4小時。減壓除去溶劑，得到標題化合物，為固體，其無需進一步純化用于后面步驟中。1H NMR(CDCl3)δ9.34(br，1H)，8.68(br，1H)，8.20(br，1H)，7.42(d，J＝8.77Hz，2H)，7.19(d，J＝8.50Hz，2H)，3.53(m，1H)，3.36(m，2H)，3.00(m，1H)，2.88(m，1H)，2.65(d，J＝6.75Hz，2H)，2.33(m，1H)，1.90(m，1H)，1.22(d，J＝6.91Hz，6H)；LC/MS(ESI)C15H23N2O(MH)+計算值247.2，實測值247.3。
c.2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-N-(4-異丙基-苯基)-乙酰胺
向N-(4-異丙基-苯基)-2-吡咯烷-3-基-乙酰胺三氟乙酸鹽(如前述步驟所述)和4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(252mg，1.61mmol)在DMSO(8mL)的混合物中添加DIEA(457mg，3.54mmol)。溶液在100℃攪拌。2小時后，添加甲氧基胺鹽酸鹽(538mg，6.44mmol)，混合物在100℃攪拌1小時。其被冷卻到室溫，在CH2Cl2和水之間分配。有機相用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。粗物質通過硅膠急驟柱色譜法純化(EtOAc作為洗脫液)，得到所需產物，為白色固體(200mg，31％)。1H NMR(CD3OD)δ8.41(s，1H)，7.88(s，1H)，7.43(d，J＝8.60Hz，2H)，7.17(d，J＝8.40Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.78(dd，J＝10.49和8.69Hz，1H)，3.69(m，2H)，3.42(dd，J＝10.61和9.30Hz，1H)，2.86(sep，J＝6.87Hz，1H)，2.65(m，1H)，2.48(d，J＝7.83Hz，2H)，2.15(m，1H)，1.70(m，1H)，1.22(d，J＝6.93Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H29N6O2(MH)+計算值397.2，實測值397.4；元素分析C21H28N6O2計算值C，63.61；H，7.12；N，21.20.實測值C，63.32；H，6.95；N，21.04。
實施例7 2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-N-(4-異丙基-苯基)-乙酰胺
a.N-(4-異丙基-苯基)-2-哌啶-4-基-乙酰胺
向4-羧甲基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(73mg，0.3mmol)的無水CH2Cl2溶液中添加PS-碳二亞胺(0.4mmol)，混合物在室溫振搖15分鐘。然后向混合物中添加4-異丙基苯胺(27mg，0.2mmol)，將其在室溫振搖過夜。然后過濾，樹脂用CH2Cl2洗滌兩次，合并的濾液和洗液經真空濃縮，得到粗物質4-[(4-異丙基-苯基氨基甲?；?-甲基]-哌啶-1-羧酸叔丁基酯，其用3M HCl/MeOH溶液(2mL)處理1小時。得到的混合物真空濃縮，得到粗物質N-(4-異丙基-苯基)-2-哌啶-4-基-乙酰胺，為其HCl鹽的形式。LC/MS(ESI)C16H25N2O(MH)+計算值261.2，實測值261.3。該物質無需進一步純化用于后面的步驟中。
b.2-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-N-(4-異丙基-苯基)-乙酰胺
如實施例6c所述制備，不同之處在于使用N-(4-異丙基-苯基)-2-哌啶-4-基-乙酰胺代替N-(4-異丙基-苯基)-2-吡咯烷-3-基-乙酰胺三氟乙酸鹽。1H NMR(CDCl3)δ8.13(s，1H)，8.03(s，1H)，7.42(d，J＝8.51Hz，2H)，7.18(d，J＝8.58Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.90(m，2H)，3.05(m，2H)，2.88(sep，J＝6.77Hz，1H)，2.30(d，J＝6.85Hz，2H)，2.19(m，1H)，1.90(m，2H)，1.39(m，2H)，1.22(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C22H31N6O3(MH)+計算值411.2，實測值411.4。
實施例8 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-異丙氧基-苯基)-脲
a.[1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁基酯
向4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(239mg，1.52mmol)在CH3CN(2mL)中的懸浮液中添加3-(叔丁氧羰基氨基)吡咯烷(312mg，1.67mmol)，隨后添加DIEA(392.9mg，3.04mmol)?；旌衔镌?0℃攪拌1小時。其被冷卻到室溫，過濾出沉淀物，用CH3CN洗滌并真空干燥，得到產物，為白色固體(290.6mg，62.2％)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.92(s，1H)，8.58(br，1H)，7.95(s，1H)，7.68(br，1H)，7.22(d，J＝6.16Hz，1H)，4.02(m，1H)，3.80(m，2H)，3.66(m，1H)，3.45(m，1H)，2.03(m，1H)，1.82(m，1H)，1.38(s，9H)；LC/MS(ESI)C14H22N5O3(MH)+計算值308.2，實測值308.3。
b.4-氨基-6-(3-氨基-吡咯烷-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸
向[1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁基酯(290.6mg，0.945mmol)的MeOH(1.5mL)溶液中添加MeONH2.HCl(197.2mg，2.36mmol)，混合物在95℃攪拌0.5小時。其經過減壓濃縮，殘余物在CH2Cl2和水之間分配。提取物經過干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)得到白色泡沫，其用50％TFA/CH2Cl2(10mL)處理4小時。真空除去溶劑得到標題化合物，其無需純化即可用于后面步驟反應。LC/MS(ESI)C10H16N6O(MH)+計算值237.1，實測值237.1。
c.(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
在攪拌下在約1分鐘內向4-異丙氧基苯胺(9.06g，60.0mmol)的CH2Cl2(120mL)和吡啶(30mL)溶液中分份添加氯甲酸4-硝基苯基酯(10.9g，54.0mmol)并進行短暫的冰浴冷卻。在室溫攪拌1小時后，均相溶液用CH2Cl2(300mL)稀釋，用0.6M HCl(1×750mL)和0.025MHCl(1×1L)洗滌。有機層經過干燥(Na2SO4)和濃縮，得到標題化合物，為淡紫色-白色固體(16.64g，98％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m，2H)，7.42-7.32(m，4H)，7.25-7.20(m，2H)，6.93(br s，1H)，2.90(sep，J＝6.9Hz，1H)，1.24(d，J＝6.9Hz，6H).LC/MS(ESI)C16H17N2O5(MH)+計算值317.1，實測值633.2(2MH)+。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-異丙氧基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(3-氨基-吡咯烷-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸(69.2mg，0.20mmol)在CH3CN(1.5mL)中的懸浮液中添加(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(62.4mg，0.20mmol)，隨后添加DIEA(102.4mg，0.79mmol)。混合物在95℃攪拌1小時并冷卻到室溫。沉淀物經過濾，用CH3CN洗滌并真空干燥，得到產物，為白色固體(54mg，66％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.11(s，1H)，7.93(s，1H)，7.35(br，2H)，7.23(d，J＝8.99Hz，2H)，6.77(d，J＝9.06Hz，2H)，6.36(d，J＝6.32Hz，1H)，4.47(m，1H)，4.15(m，1H)，3.86(s，3H)，3.75(m，1H)，3.51-3.69(m，2H)，3.33(m，1H)，2.06(m，1H)，1.81(m，1H)，1.21(d，J＝6.01Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H28N7O3(MH)+計算值414.2，實測值414.3。
實施例9 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-哌啶-1-基-苯基)-脲
a.(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
基本如實施例8c所述制備，不同之處在于使用4-哌啶子基苯胺和甲苯溶劑。硅膠急驟色譜法(5∶2 hex/EtOAc→EtOAc→9∶1 DCM/MeOH)得到目標化合物，為灰色粉末(1.416g，73％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m，2H)，7.42-7.36(m，2H)，7.34-7.28(m，2H)，6.97-6.90(m，2H)，6.82(br s，1H)，3.17-3.09(m，4H)，1.77-1.66(m，4H)，1.63-1.54(m，2H).LC/MS(ESI)C18H19N3O4(MH+)計算值342.1，實測值342.2。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-哌啶-1-基-苯基)-脲
如實施例8d所述制備，不同之處在于使用(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯，標題化合物為灰色固體。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.03(s，1H)，7.93(s，1H)，7.36(s，2H)，7.18(d，J＝8.98Hz，2H)，6.80(d，J＝9.08Hz，2H)，6.32(d，J＝6.93Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.86(s，3H)，3.76(m，1H)，3.62(m，2H)，3.38(m，1H)，2.98(t，J＝4.49Hz，4H)，2.07(m，1H)，1.81(m，1H)，1.60(m，4H)，1.48(m，2H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O2(MH)+計算值439.3，實測值439.3。
實施例10 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-嗎啉-4-基-苯基)-脲
a.(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
在空氣中在冰浴上將4-嗎啉代苯胺(1.01g，5.68mmol)和CaCO3(743mg，7.42mmol)(10微米粉末)的混合物用氯甲酸4-硝基苯基酯(1.49g，7.39mmol)的CH2Cl2(7.5mL)溶液處理。在冰浴上對稠厚易攪拌的反應漿料攪拌1-2分鐘，然后在室溫攪拌1小時。然后漿料用9∶1CH2Cl2/MeOH(7.5mL)稀釋，直接施用于急驟硅膠柱(95∶5CH2Cl2/MeOH)，得到0.7g物質。其進一步通過與熱甲苯(25mL)一起研磨進行純化得到標題化合物，為淺橄欖綠色粉末(444mg，23％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m，2H)，7.42-7.31(m，4H)，6.95-6.85(m，3H)，3.89-3.84(m，4H)，3.16-3.11(m，4H)。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-嗎啉-4-基-苯基)-脲
如實施例8d所述制備，不同之處在于使用(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯，標題化合物為淺褐色固體。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.07(s，1H)，7.93(s，1H)，7.35(s，2H)，7.21(d，J＝9.06Hz，2H)，6.82(d，J＝9.10Hz，2H)，6.33(d，J＝6.58Hz，1H)，4.15(m，1H)，3.86(s，3H)，3.75(m，1H)，3.71(t，J＝4.52Hz，4H)，3.52-3.69(m，2H)，3.33(m，1H)，2.98(t，J＝4.79Hz，4H)，2.06(m，1H)，1.81(m，1H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O3(MH)+計算值441.2，實測值441.2。
實施例11 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基)-脲
a.2-環(huán)丁氧基-5-硝基-吡啶
2-氯-5-硝基吡啶(7.12g，45.0mmol)和環(huán)丁醇(3.40g，47.2mmol)在THF(30mL)中的混合物在0℃劇烈攪拌，同時在空氣中在約10-20秒內分三份添加NaH(1.18g，46.7mmol)(警告氣體大范圍放出)。反應殘余物用另外的THF(5mL)漂洗，隨后在正氬氣氣壓下在冰浴中再攪拌1-2分鐘。然后除去冰浴，褐色的均相溶液攪拌1小時.反應混合物在80℃減壓濃縮，承載在0.75M EDTA(四鈉鹽)(150mL)中，用CH2Cl2(1×100mL，1×50mL)提取。合并的有機層經過干燥(Na2SO4)，濃縮，承載在MeOH(2×100mL)中，在60℃減壓濃縮，得到標題化合物，為濃稠的暗琥珀色油狀物，其在放置時結晶(7.01g，80％)。1H NMR(CDCl3)δ9.04(dd，J＝2.84和0.40Hz，1H)，8.33(dd，J＝9.11和2.85Hz，1H)，6.77(dd，J＝9.11和0.50Hz，1H)，5.28(m，1H)，2.48(m，2H)，2.17(m，2H)，1.87(m，1H)，1.72(m，1H)。
b.6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基胺
將含有10％ w/w Pd/C(485mg)的燒瓶用氬氣平緩地吹掃，同時沿著燒瓶壁慢慢添加MeOH(50mL)，隨后多批添加約～5mL的2-環(huán)丁氧基-5-硝基-吡啶(4.85g，25mmol)(如前述步驟制備)的MeOH(30mL)溶液(警告在空氣存在時，向Pd/C中大規(guī)模添加揮發(fā)性有機物可引起著火)。然后將燒瓶排空1次，并在室溫下在H2氣球壓力下攪拌2小時。然后將反應過濾，將透明的琥珀色濾液濃縮，承載在甲苯(2×50mL)中以除去殘余的MeOH，并減壓濃縮，得到粗的標題化合物，為半透明暗褐色油狀物，有輕微的甲苯氣味(4.41g)。1H NMR(CDCl3)δ7.65(d，J＝3.0Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.71和2.96Hz，1H)，6.55(d，J＝8.74Hz，1H)，5.04(m，1H)，2.42(m，2H)，2.10(m，2H)，1.80(m，1H)，1.66(m，1H).LC-MS(ESI)C9H13N2O(MH+)計算值165.1，實測值165.2。
c.(6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
在室溫下，6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基胺(4.41g，25mmol)(如前述步驟制備)和CaCO3(3.25g，32.5mmol)(10微米粉末)的混合物用氯甲酸4-硝基苯基酯(5.54g，27.5mmol)的甲苯(28mL)均相溶液一次性處理，并攪拌2小時。然后將反應混合物直接加載到急驟硅膠柱(95∶5DCM/MeOH→9∶1 DCM/MeOH)上，得到5.65g物質，其進一步通過與熱甲苯一起研磨進行純化(1×200mL)，得到標題化合物(4.45g，54％)。1H NMR(CDCl3)δ8.32-8.25(m，2H)，8.12(d，1H)，7.81(m，1H)，7.42-7.36(m，2H)，6.85(brs，1H)，6.72(d，1H)，5.19-5.10(m，1H)，2.50-2.40(m，2H)，2.19-2.07(m，2H)，1.89-1.79(m，1H)，1.75-1.61(m，1H).LC-MS(ESI)C16H15N3O5(MH+)計算值330.1，實測值330.1。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基)-脲
如實施例8d所述制備，不同之處在于使用(6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯，標題化合物為白色固體。1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.22(s，1H)，8.05(d，J＝2.75Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.72(dd，J＝8.92和2.74Hz，1H)，7.35(br，2H)，6.67(d，J＝8.80Hz，1H)，6.51(d，J＝6.79Hz，1H)，5.02(m，1H)，4.16(m，1H)，3.86(s，3H)，3.75(m，1H)，3.51-3.69(m，2H)，3.33(m，1H)，2.35(m，2H)，1.92-2.12(m，3H)，1.71-1.86(m，2H)，1.60(m，1H)；LC/MS(ESI)C20H27N8O3(MH)+計算值427.2，實測值427.2。
實施例12 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-異丙氧基-苯基)-脲
a.[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁基酯
向4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(226mg，1.44mmol)和4-(N-BOC氨基)-哌啶(318mg，1.59mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物中添加DIEA(372mg，2.88mmol)。混合物在攪拌的同時在90℃加熱1小時，冷卻到室溫。過濾出沉淀物，用CH3CN(3×5mL)洗滌并真空干燥，得到白色固體(400mg，86％)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.66(s，1H)，8.22(br，1H)，8.03(s，1H)，7.77(br，1H)，6.91(d，J＝790Hz，1H)，3.99(m，2H)，3.54(m，1H)，3.18-3.29(m，2H)，1.79(m，2H)，1.40(m，2H)，1.38(s，9H)；LC/MS(ESI)C15H24N5O3(MH)+計算值322.2，實測值322.2。
b.{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁基酯
向[1-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁基酯(231.2mg，0.72mmol)在MeOH(1.5mL)中的混合物中添加甲氧基胺鹽酸鹽(150.2mg，1.80mmol)。溶液在95℃攪拌0.5小時。其經過減壓濃縮，粗殘余物通過硅膠急驟柱色譜法純化(EtOAc作為洗脫液)，得到所需產物，為白色固體(180mg，72％)。1H NMR(CDCl3)δ8.10(br，2H)，8.09(s，1H)，8.06(s，1H)，6.95(br，1H)，4.07(m，2H)，3.96(s，3H)，3.74(m，1H)，3.23(td，J＝12.72和2.61Hz，2H)，2.08(m，2H)，1.49(m，2H)；LC/MS(ESI)C16H27N6O3(MH)+計算值351.2，實測值351.3。
c.4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸鹽
將1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.51mmol)溶于15mL的50％TFA/CH2Cl2。將其在室溫保持攪拌4小時，減壓蒸發(fā)有機溶劑。產物無需進一步純化用于后面的步驟。1H NMR(CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.06(s，1H)，4.32(m，2H)，3.99(s，3H)，3.47(m，1H)，3.36(m，2H)，2.12(m，2H)，1.69(m，2H)；LC/MS(ESI)C11H19N6O(MH)+計算值251.2，實測值251.2。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-異丙氧基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸鹽(51.7mg，0.14mmol)在CH3CN(2mL)中的懸浮液中添加(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(44.9mg，0.14mmol)，隨后添加DIEA(73.4mg，0.57mmol)?；旌衔镌?5℃攪拌1小時并冷卻到室溫。過濾出沉淀物，用CH3CN(3×1.5mL)洗滌并真空干燥，得到產物，為白色固體(36mg，59％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.12(s，1H)，8.07(s，1H)，8.06(s，1H)，7.42(br，2H)，7.24(d，J＝9.05Hz，2H)，6.78(d，J＝8.98Hz，2H)，6.09(d，J＝7.54Hz，1H)，4.47(sep，J＝5.96Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，3.60(m，2H)，3.06(t，J＝11.98Hz，2H)，1.86(m，2H)，1.43(m，2H)，1.21(d，J＝6.02Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H30N7O3(MH)+計算值428.2， 實測值428.3。
實施例13 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-哌啶-1-基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸鹽(41.4mg，0.12mmol)在CH3CN(2mL)中的懸浮液中添加(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(40.4mg，0.12mmol)，隨后添加DIEA(61mg，0.47mmol)。混合物在95℃攪拌1小時并冷卻到室溫。過濾出沉淀物，用CH3CN(3×1.5mL)洗滌并真空干燥，得到產物，為淺灰色固體(26.8mg，52％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.07(s，1H)，8.06(s，1H)，8.04(s，1H)，7.41(br，2H)，7.19(d，J＝9.04Hz，2H)，6.81(d，J＝9.11Hz，2H)，6.06(d，J＝7.14Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.68(m，1H)，3.61(m，2H)，3.06(t，J＝11.03Hz，2H)，2.98(t，J＝5.05Hz，4H)，1.87(m，2H)，1.60(m，4H)，1.48(m，2H)；LC/MS(ESI)C23H33N8O2(MH)+計算值453.3，實測值453.3。
實施例14 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-嗎啉-4-基-苯基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸鹽(44.5mg，0.13mmol)在CH3CN(2mL)中的懸浮液中添加(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(43.6mg，0.13mmol)，隨后添加DIEA(65.7mg，0.51mmol)?；旌衔镌?5℃攪拌1小時，減壓除去溶劑。粗殘余物通過制備TLC板純化(5％MeOH/EtOAc)，得到所需產物，為白色固體(7.5mg，13.4％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.08(s，1H)，8.07(s，1H)，8.06(s，1H)，7.42(br，2H)，7.23(d，J＝9.00Hz，2H)，6.83(d，J＝9.12Hz，2H)，6.07(d，J＝7.59Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.71(t，J＝4.22Hz，4H)，3.67(m，1H)，3.61(m，2H)，3.06(t，J＝1.31Hz，2H)，2.98(t，J＝4.70Hz，4H)，1.86(m，2H)，1.44(m，2H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O3(MH)+計算值455.2，實測值455.3。
實施例15 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基)-脲
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸鹽(50mg，0.14mmol)在CH3CN(2mL)中的懸浮液中添加(6-環(huán)丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(45.2mg，0.14mmol)，隨后添加DIEA(70.8mg，0.55mmol)?；旌衔镌?5℃攪拌1小時并冷卻到室溫。過濾出沉淀物，用EtOAc(3×3mL)洗滌并真空干燥，得到產物，為白色固體(31.5mg，52.3％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.24(s，1H)，8.07(s，1H)，8.06(d，J＝2.44Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.73(dd，J＝8.90和2.78Hz，1H)，7.42(br，2H)，6.67(d，J＝8.76Hz，1H)，6.25(d，J＝7.88Hz，1H)，5.03(m，1H)，3.89(s，3H)，3.70(m，1H)，3.61(m，2H)，3.05(m，2H)，2.35(m，2H)，1.99(m，2H)，1.86(m，2H)，1.75(m，1H)，1.60(m，1H)，1.46(m，2H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O3(MH)+計算值441.2，實測值441.3。
實施例16 N-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-2-(4-異丙基-苯基)-乙酰胺
向4-氨基-6-(4-氨基-哌啶-1-基)-嘧啶-5-甲醛O-甲基-肟三氟乙酸鹽(57.8mg，0.16mmol)在無水THF(2mL)中的懸浮液中添加(4-異丙基-苯基)-乙酸(0.21mmol)、HOBT(31.6mg，0.21mmol)，隨后添加HBTU(78.5mg，0.21mmol)和DIEA(102.8mg，0.80mmol)?；旌衔镌谑覝財嚢柽^夜，減壓除去有機溶劑。粗殘余物通過制備性TLC板(EtOAc作為洗脫液)純化，得到所需產物，為白色固體(21.3mg，32.6％)。1H NMR(CDCl3)δ8.14(s，1H)，8.01(s，1H)，7.22(d，J＝8.29Hz，2H)，7.15(d，J＝8.14Hz，2H)，4.00(m，1H)，3.94(s，3H)，3.71(m，2H)，3.54(s，2H)，3.06(td，J＝12.36和2.32Hz，2H)，2.91(sep，J＝7.07Hz，1H)，1.94(m，2H)，1.38(m，2H)，1.25(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C22H31N6O2(MH)+計算值411.2，實測值411.3。
實施例17 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-環(huán)己基-苯基)-脲
a.(4-環(huán)己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
基本上如實施例8c所述制備，不同之處在于使用4-環(huán)己基苯胺代替4-異丙氧基苯胺。1H NMR(DMSO-d6)δ10.37(br，1H)，8.30(d，J＝9.30Hz，2H)，7.52(d，J＝9.00Hz，2H)，7.41(d，J＝8.10Hz，2H)，7.18(d，J＝8.70Hz，2H)，1.18-1.82(11H)。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-環(huán)己基-苯基)-脲
基本上如實施例8d所述制備，不同之處在于使用(4-環(huán)己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(s，1H)，8.18(s，1H)，7.91(s，1H)，7.33(br，2H)，7.22(d，J＝8.58Hz，2H)，7.03(d，J＝8.56Hz，2H)，6.38(d，J＝6.58Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)，2.36(m，1H)，2.05(m，1H)，1.62-1.82(6H)，1.31(4H)，1.18(m，1H)；LC/MS(ESI)C23H32N7O2(MH)+計算值438.3，實測值438.3。
實施例18 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-氯-苯基)-脲
基本上如實施例8d所述制備，不同之處在于使用4-氯苯基異氰酸酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.45(s，1H)，8.35(s，1H)，7.91(s，1H)，7.37(d，J＝8.93Hz，2H)，7.33(br，2H)，7.23(d，J＝8.92Hz，2H)，6.49(d，J＝6.52Hz，1H)，4.15(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)，2.04(m，1H)，1.80(m，1H)；LC/MS(ESI)C17H21ClN7O2(MH)+計算值390.1，實測值390.2。
實施例19 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-苯氧基-苯基)-脲
基本上如實施例8d所述制備，不同之處在于使用4-苯氧基苯基異氰酸酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.36(s，1H)，8.32(s，1H)，7.91(s，1H)，7.29-7.38(6H)，7.04(m，1H)，6.90(m，4H)，6.43(d，J＝6.57Hz，1H)，4.15(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.55(m，1H)，3.41(m，1H)，2.06(m，1H)，1.82(m，1H)；LC/MS(ESI)C23H26N7O3(MH)+計算值448.2，實測值448.3。
實施例20 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-脲
a.(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯鹽酸鹽
在室溫下，向4.9g(30.4mmol)4-吡咯烷-1-基-苯基胺在70mL無水THF中的攪拌的溶液中滴加6.4g(32mmol)氯甲酸4-硝基苯基酯在16mL無水THF中的溶液。添加完成后，將混合物攪拌1小時然后過濾。沉淀物首先用無水THF(2×10mL)洗滌，然后用無水DCM(3×10mL)洗滌并真空干燥，得到10g的灰白色固體。1H-NMR(300MHz，CD3OD)10.39(s，1H)，8.32(d，2H)，7.73(d，2H)，7.60(d，2H)，7.48(d，2H)，3.86-3.68(bs，4H)，2.35-2.24(bs，4H).LC/MS(ESI)328(MH)+。
b.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-脲
基本上如實施例8d所述制備，不同之處在于使用(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(s，1H)，7.91(s，1H)，7.85(s，1H)，7.33(br，2H)，7.11(d，J＝8.96Hz，2H)，6.41(d，J＝9.02Hz，2H)，6.22(d，J＝6.62Hz，1H)，4.12(m，1H)，3.84(s，3H)，3.72(m，1H)，3.64(m，1H)，3.55(m，1H)，3.32(m，1H)，3.12(t，J＝6.54Hz，4H)，2.03(m，1H)，1.89(m，4H)，1.77(m，1H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O2(MH)+計算值425.2，實測值425.3。
實施例21 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基)-脲
a.2-環(huán)戊氧基-5-硝基-吡啶
在冰浴冷卻下，在0℃，在攪拌的同時，在～30秒內向2-氯-5-硝基吡啶(7.01g，44.4mmol)在THF(30mL)和環(huán)戊醇(3.9g，45.3mmol)中的溶液中分份添加氫化鈉(1.3g，54.2mmol)，在0℃攪拌5分鐘后，除去冰浴，將反應在室溫攪拌3小時。然后將其真空濃縮，將殘余物溶于DCM，用1M NaHCO3深入洗滌，然后用無水Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。粗產物通過急驟柱色譜法純化(硅膠，9∶1 己烷∶乙酸乙酯)，得到純2-環(huán)戊氧基-5-硝基-吡啶(0.4g，4％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.07(s，1H)，8.32(m，1H)，6.74(d，1H)，5.53(m，1H)，2.00(m，2H)，1.81(m，4H)，1.66(m，2H)。
b.6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基胺
向2-環(huán)戊氧基-5-硝基-吡啶(0.3099g，1.49mmol)的MeOH(2mL)溶液中添加10％ Pd/C(90mg)。溶液經過脫氣，并在氫氣氛下保持攪拌過夜。其通過硅藻土墊過濾并蒸發(fā)濾液，得到所需產物，為褐色油狀物(248mg，94％收率)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.69(d，1H)，7.04(m，1H)，6.56(d，1H)，5.25(m，1H)，1.93(m，2H)，1.78(m，4H)，1.60(m，2H).LC/MS(ESI)C10H14N2O計算值178.23，實測值[M+41+1]+220.0。
c.(6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
向6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基胺(0.248g，1.39mmol)的THF(2mL)溶液中分份添加氯甲酸4-硝基苯基酯(0.280g，1.39mmol)。在室溫攪拌1小時后，在有機層中形成重質沉淀物。過濾有機層，得到標題化合物，為淺粉色固體(0.368g，77％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.1(s，1H)，9.11(s，1H)，9.04(d，1H)，8.26(d，2H)，7.40(d，2H)，7.14(d，1H)，5.36(m，1H)，2.11(m，2H)，1.97(m，2H)，1.84(m，2H)，1.71(m，2H)。
d.1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基)-脲
基本上如實施例8d所述制備，不同之處在于使用(6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(CD3OD)δ8.40(s，1H)，8.05(d，J＝2.76Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.68(dd，J＝8.88和2.80Hz，1H)，6.68(d，J＝8.89Hz，1H)，5.22(m，1H)，4.31(m，1H)，3.92(s，3H)，3.88(m，1H)，3.78(m，1H)，3.68(m，1H)，3.50(dd，J＝11.12和4.45Hz，1H)，2.19(m，1H)，1.88-1.99(3H)，1.76(m，4H)，1.63(m，2H)；LC/MS(ESI)C21H29N8O3(MH)+計算值441.2，實測值441.3。
實施例22 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-環(huán)己基-苯基)-脲
基本上如實施例12d所述制備，不同之處在于使用(4-環(huán)己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(CDCl3)δ8.16(s，1H)，8.05(s，1H)，7.16(m，4H)，3.94(s，3H)，3.74(m，1H)，3.09(m，2H)，3.05(m，2H)，2.05(m，2H)，1.84(m，4H)，1.74(m，1H)，1.22-1.52(8H)；LC/MS(ESI)C24H34N7O2(MH)+計算值452.3，實測值452.3。
實施例23 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基)-脲
基本上如實施例12d所述制備，不同之處在于使用(6-環(huán)戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.21(br，1H)，8.07(m，1H)，8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.69(m，1H)，7.40(br，1H)，6.63(d，J＝8.84Hz，1H)，6.22(d，J＝7.58Hz，1H)，6.23(m，1H)，3.87(s，3H)，2.98-3.70(6H)，1.81-1.89(4H)，1.38-1.68(8H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O3(MH)+計算值455.2，實測值455.4。
實施例24 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-脲
基本上如實施例12d所述制備，不同之處在于使用(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.87(br，1H)，7.40(br，2H)，7.12(d，J＝9.10Hz，2H)，6.42(d，J＝9.19Hz，2H)，5.96(m，1H)，3.87(s，3H)，2.80-3.68(9H)，1.90(m，4H)，1.84(m，2H)，1.41(m，2H)；LC/MS(ESI)C22H31N8O2(MH)+計算值439.3，實測值439.3。
實施例25 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-氯-苯基)-脲
基本上如實施例12d所述制備，不同之處在于使用4-氯苯基異氰酸酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.48(br，2H)，8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.38(d，J＝9.00Hz，2H)，7.23(d，J＝9.00Hz，2H)，6.25(m，1H)，6.23(m，1H)，3.87(s，3H)，3.22-3.60(3H)，3.05(m，2H)，1.85(m，2H)，1.44(m，2H)；LC/MS(ESI)C18H23ClN7O2(MH)+計算值404.2，實測值404.3。
實施例26 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌啶-4-基}-3-(4-苯氧基-苯基)-脲
基本上如實施例12d所述制備，不同之處在于使用4-苯氧基苯基異氰酸酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(br，2H)，8.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.45(m，1H)，7.38(d，J＝8.94Hz，2H)，7.32(m，2H)，7.05(m，2H)，6.90(m，2H)，6.17(m，2H)，3.88(s，3H)，3.25-3.62(3H)，3.05(m，2H)，1.86(m，2H)，1.44(m，2H)；LC/MS(ESI)C24H28N7O3(MH)+計算值462.2，實測值462.3。
實施例27 1-(1-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-異丙基-苯基)-脲
(a).1-[1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-3-(4-異丙基-苯基)-脲
將[1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.65mmol)溶于3mL的50％TFA/CH2Cl2，將反應混合物攪拌1小時。除去溶劑，將殘余物再次溶于CH3CN。向上述溶液中添加4-異丙基苯基異氰酸酯(125.7mg，0.78mmol)和DIEA(336mg，2.6mmol)。1小時后，過濾出沉淀物，用EtOAc洗滌并真空干燥，得到白色固體，為所需產物。1H NMR(DMSO-d6)δ9.94(s，1H)，8.57(br，1H)，8.21(s，1H)，7.97(s，1H)，7.70(br，1H)，7.24(d，J＝8.56Hz，2H)，7.06(d，J＝8.54Hz，2H)，6.42(d，J＝6.39Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.88(m，1H)，3.66-3.80(m，2H)，3.48(m，1H)，2.77(m，1H)，2.10(m，1H)，1.86(m，1H)，1.13(d，J＝6.91Hz，6H)；LC/MS(ESI)C19H25N6O2(MH)+計算值369.2，實測值369.3。
(b).1-(1-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-異丙基-苯基)-脲
基本如實施例1e所述制備，使用1-[1-(6-氨基-5-甲?；?嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-3-(4-異丙基-苯基)-脲和2-(銨氧基(ammoniooxy))-1-乙銨二氯化物。1H NMR(CD3OD)δ8.48(s，1H)，7.91(s，1H)，7.23(d，J＝8.55Hz，2H)，7.11(d，J＝8.68Hz，2H)，4.31(m，1H)，4.17(m，2H)，3.90(m，1H)，3.80(m，1H)，3.70(m，1H)，3.51(m，1H)，3.30(m，2H)，2.83(m，1H)，2.20(m，1H)，1.95(m，1H)，1.20(d，J＝6.93Hz，6H)；LC/MS(ESI)C21H31N8O2(MH)+計算值427.3，實測值427.3。
實施例28 1-[1-(6-氨基-5-{[2-(3-乙基-脲基)-乙氧基亞胺基]-甲基}-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-基]-3-(4-異丙基-苯基)-脲
向1-(1-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-異丙基-苯基)-脲(14.5mg，0.034mmol)的CH2Cl2(1.5mL)溶液中添加乙基異氰酸酯(4.8mg，0.068mmol)。過濾出沉淀物，用水、CH2Cl2洗滌，真空干燥，得到所需產物。1H NMR(DMSO-d6)δ8.38(s，1H)，8.20(s，1H)，7.92(s，1H)，7.33(br，1H)，7.24(d，J＝8.58Hz，2H)，7.06(d，J＝8.52Hz，2H)，6.40(d，J＝6.66Hz，1H)，5.90(t，J＝5.58Hz，1H)，5.85(t，J＝5.45Hz，1H)，4.16(m，1H)，4.02(m，2H)，3.75(m，1H)，3.66(m，1H)，3.57(m，1H)，3.24-3.37(3H)，3.12(m，1H)，2.96(m，2H)，2.76(m，1H)，2.04(m，1H)，1.80(m，1H)，1.13(d，J＝6.91Hz，6H)，0.94(t，J＝7.15Hz，3H)；LC/MS(ESI)C24H36N9O3(MH)+計算值498.3，實測值498.4。
實施例29 1-(1-{6-氨基-5-[(2-嗎啉-4-基-2-氧代-乙氧基亞胺基)-甲基]-嘧啶-4-基}-吡咯烷-3-基)-3-(4-異丙基-苯基)-脲
基本上如實施例27b所述制備，不同之處在于使用4-[2-(銨氧基)乙?；鵠嗎啉氯化物代替2-(銨氧基)-1-乙銨二氯化物。1H NMR(CD3OD)δ8.51(s，1H)，7.92(br，1H)，7.23(d，J＝8.65Hz，2H)，7.11(d，J＝8.45Hz，2H)，4.87(s，2H)，4.31(m，1H)，3.89(m，1H)，3.78(m，1H)，3.48-3.75(10H)，2.83(m，1H)，2.19(m，1H)，1.95(m，1H)，1.20(d，J＝6.92Hz，6H)；LC/MS(ESI)C25H35N8O4(MH)+計算值511.3，實測值511.3。
實施例30 1-{1-[6-氨基-5-(甲氧基亞胺基-甲基)-嘧啶-4-基]-吡咯烷-3-基}-3-(4-異丙基-苯基)-脲
基本上如實施例8d所述制備，不同之處在于使用4-異丙基苯基異氰酸酯代替(4-異丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯基酯。1H NMR(DMSO-d6)δ8.35(s，1H)，8.19(br，1H)，7.91(s，1H)，7.33(br，2H)，7.23(d，J＝8.59Hz，2H)，7.06(d，J＝8.49Hz，2H)，6.38(d，J＝6.54Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.84(s，3H)，3.74(m，1H)，3.64(m，1H)，3.28-3.58(2H)，2.77(m，1H)，2.04(m，1H)，1.80(m，1H)，1.13(d，J＝6.91Hz，6H)；LC/MS(ESI)C20H28N7O2(MH)+計算值398.2，實測值398.3。
式I’的FLT3抑制劑的生物活性 進行以下典型試驗以測定式I’的FLT3抑制劑的生物學活性。以非限制性方式給出它們用于說明本發(fā)明。
體外試驗 進行以下典型的體外試驗，測定本發(fā)明范圍內的式I’作為FLT3抑制劑的生物學活性。以非限制性方式給出它們用于說明本發(fā)明。
FLT3酶活性、MV4-11增殖和Baf3-FLT3磷酸化的抑制示例了FLT3酶和依賴于FLT3活性的細胞過程的特異性抑制。使用Baf3細胞增殖的抑制試驗檢驗本發(fā)明范圍內化合物的FLT3、c-Kit和TrkB非依賴性細胞毒性。本文中所有實施例表現(xiàn)出對FLT3激酶和FLT3依賴性細胞反應的顯著的和特異性的抑制。本文中的實施例還在酶活性試驗中表現(xiàn)出對TrkB和c-kit激酶的特異性抑制。FLT3抑制劑化合物還可透過細胞。
FLT3熒光偏振激酶試驗 為了在體外激酶試驗中測定式I’作為FLT3抑制劑的活性，使用以下熒光偏振(FP)規(guī)程進行對分離的人FLT3受體激酶結構域(a.a.571-993)的抑制。FLT3FP試驗利用了在由Invitrogen提供的PanveraPhospho-Tyrosine Kinase Kit(Green)中包含的熒光素標記的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗體。當FLT3使多聚Glu4Tyr磷酸化時，在抗磷酸酪氨酸抗體中，熒光素標記的磷酸肽被磷酸化的多聚Glu4Tyr取代，從而降低FP值。將FLT3激酶反應在以下條件下在室溫下培養(yǎng)30分鐘10nM FLT3571-993、20ug/mL poly Glu4Tyr、150uM ATP、5mM MgCl2、1％化合物含在DMSO中。通過加入EDTA使激酶反應終止。加入熒光素標記的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗體并且在室溫下培養(yǎng)30分鐘。
所有的數(shù)據(jù)點是一式三份樣品的平均值。使用GraphPad Prism進行抑制和IC50數(shù)據(jù)分析，使用非線性回歸，與多參數(shù)、S形劑量-應答(可變斜率)方程擬合。激酶抑制的IC50表示與DMSO媒介物對照相比，產生激酶活性50％抑制的化合物劑量。
MV4-11和Baf3細胞增殖的抑制 為了評價式I’作為FLT3抑制劑的細胞效力，在白血病細胞系MV4-11(ATCC保藏號CRL-9591)中測量FLT3特異性生長抑制。MV4-11細胞得自患有幼年型急性粒-單核細胞白血病的患者，所述患者具有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含F(xiàn)LT3-ITD突變(AML亞型M4)(參見Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook.Academic PresSan Diego，CA，2000和Quentmeier H、Reinhardt J、Zaborski M、Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloid leukemia celllines.Leukemia. 2003 Jan；17120-124.)。MV4-11細胞在沒有活性FLT3ITD的情況下不能生長和存活。
使用IL-3依賴性的鼠B細胞淋巴瘤細胞系Baf3作為對照，通過測量由FLT3抑制劑化合物引起的非特異性生長抑制證實FLT3抑制劑的選擇性。
為了測量由試驗化合物引起的增殖抑制，使用基于熒光素酶的CellTiterGlo試劑(Promega)，其基于總的細胞ATP濃度測量總細胞數(shù)。將細胞以每孔10,000個細胞鋪板在100ul的RPMI培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基包含penn/strep、10％FBS和對于MV4-11和Baf3細胞分別為1ng/ml的GM-CSF或1ng/ml的IL-3。
將化合物稀釋物或0.1％DMSO(媒介物對照)加入到細胞中并且允許細胞在標準細胞生長條件(37℃、5％CO2)下生長72小時。對于在50％血漿中生長的MV4-11細胞的活性測量，將細胞以每孔10,000個細胞鋪板在生長培養(yǎng)基和人血漿為1∶1的混合物中(最終容積100μL)。為了測量總的細胞生長，根據(jù)生產商的說明書，將等體積的CellTiterGlo試劑加入到每個孔中，并且測定發(fā)光量?？偟募毎L被量化為，與第3天的總細胞數(shù)(72小時生長和/或化合物處理)相比的第0天細胞數(shù)的發(fā)光計數(shù)(相對光單位，RLU)的差。百分之百的生長抑制率被定義為等于第0天讀數(shù)的RLU。零抑制百分率被定義為生長第三天DMSO媒介物對照的RLU信號。所有的數(shù)據(jù)點是一式三份樣品的平均值。生長抑制的IC50表示在第三天引起DMSO媒介物對照的總細胞生長發(fā)生50％抑制的化合物的劑量。使用GraphPad Prism進行抑制和IC50數(shù)據(jù)分析，使用非線性回歸，與多參數(shù)、S形劑量-應答(可變斜率)方程擬合。
MV4-11細胞表達FLT3內部串聯(lián)重復突變，因此其生長完全依賴于FLT3活性。期望針對MV4-11細胞的強活性是本發(fā)明所期望的性質。相比之下，Baf3細胞增殖由細胞因子IL-3驅動，因此將Baf3細胞增殖用作試驗化合物的非特異性毒性對照。本發(fā)明所有的化合物實施例在3uM的劑量下表現(xiàn)出＜50％抑制(未包括數(shù)據(jù))，表明該化合物不具有細胞毒性，并且具有良好的FLT3選擇性。
基于細胞的FLT3受體酶聯(lián)免疫吸附測定(Elisa) FLT配體誘導的野生型FLT3磷酸化的特異性細胞抑制根據(jù)以下方式測量過度表達FLT3受體的Baf3 FLT3細胞得自Dr.MichaelHeinrich(Oregon Health and Sciences University)。通過用野生型FLT3對親代Baf3細胞(生長依賴于細胞因子IL-3的鼠B細胞淋巴瘤細胞系)穩(wěn)定轉染產生Baf3FLT3細胞系。根據(jù)細胞在不存在IL-3和存在FLT3配體的條件下的生長能力選擇細胞。
在37℃、5％CO2條件下，將Baf3細胞保存在具有10％FBS、penn/strep和10ng/ml FLT配體的RPMI1640中。為了測量對野生型FLT3受體活性和磷酸化的直接抑制，開發(fā)了三明治ELISA方法，其類似于用于其它RTK而開發(fā)的那些(參見Sadick，MD，Sliwkowski，MX，Nuijens，A，Bald，L，Chiang，N，Lofgren，JA，Wong WLT.Analysis ofHeregulin-Induced ErbB2 Phosphorylation with a High-Throughput KinaseReceptor Activation Enzyme-Linked Immunsorbent Assay，AnalyticalBiochemistry.1996；235207-214和Baumann CA，Zeng L，Donatelli RR，Maroney AC.Development of a quantitative，high-throughput cell-basedenzyme-linked immunosorbent assay for detection of colony-stimulatingfactor-1 receptor tyrosine kinease inhibitors.J Biochem Biophys Methods.2004；6069-79.)。將200μL的Baf3FLT3細胞(1×106/mL)鋪板在96孔皿中，在含0.5％血清和0.01ng/mL IL-3的RPMI1640中培養(yǎng)16小時，隨后與化合物或DMSO媒介物培養(yǎng)1小時。在37℃將細胞用100ng/mLFlt配體(R&D Systems Cat# 308-FK)處理10分鐘。將細胞制成團粒(pelleted)，洗滌并在補充有磷酸酶(Sigma Cat# P2850)和蛋白酶抑制劑(Sigma Cat #P8340)的100ul細胞裂解緩沖液(50mM Hepes、150mMNaCl、10％甘油、1％Triton-X-100、10mM NaF、1mM EDTA、1.5mMMgCl2、10mM焦磷酸鈉)中裂解。然后通過在4℃下以1000xg離心5分鐘使裂解產物澄清。將細胞裂解產物轉移到涂有50ng/孔的抗FLT3抗體(Santa Cruz Cat#sc-480)的白色壁96孔微量滴定板(Costar#9018)中并且用SeaBlock試劑(Pierce Cat#37527)封閉。將裂解產物在4℃培養(yǎng)2小時。將板用200ul/孔的PBS/0.1％Triton-X-100洗滌3次。然后在室溫下將板與HRP-結合型抗磷酸酪氨酸抗體(Clone 4G10、UpstateBiotechnology Cat#16-105)的1∶8000稀釋物培養(yǎng)1小時。將板用200ul/孔的PBS/0.1％ Triton-X-100洗滌3次。根據(jù)生產商的說明書用Berthold微板光度計進行信號檢測，使用Super Signal Pico試劑((PierceCat#37070)。所有的數(shù)據(jù)點是一式三份樣品的平均值。在存在0.1％DMSO對照條件下的Flt配體刺激的FLT3磷酸化的總的相對光單位(RLU)被定義為0％抑制百分率，100％抑制百分率是在基礎狀態(tài)下的裂解產物中的總的RLU。使用GraphPad Prism進行抑制和IC50數(shù)據(jù)分析，使用非線性回歸，與多參數(shù)、S形劑量-應答(可變斜率)方程擬合。
生物學數(shù)據(jù) FLT3的生物學數(shù)據(jù) 代表性的FLT3抑制劑化合物的活性在下表中表示。所有的活性以μM為單位，并且具有以下不確定性FLT3激酶±10％；MV4-11和Baf3-FLT3±20％。
*除非另外指出，化合物名稱來自本領域技術人員公知的命名規(guī)則，或者得自標準IUPAC命名法參考文獻，例如Nomenclature ofOrganic Chemistry，Sections A，B，C，D，E，F(xiàn)和H，(Pergamon Press，Oxford，1979，Copyright 1979 IUPAC)和A Guide to IUPACNomenclature of Organic Compounds(Recommendations 1993)，(BlackwellScientific Publications，1993，Copyright 1993 IUPAC)；或者得自市售的軟件包例如Autonom(由CambridgeSoft.com銷售的ChemDraw Ultra辦公程序組中提供的命名軟件品牌)；和ACD/Index NameTM(由AdvancedChemistry Development，Inc.，Toronto，Ontario銷售的商業(yè)命名軟件品牌)。
其它FLT3抑制劑 可用于本發(fā)明的其它FLT3激酶抑制劑包括AG1295和AG1296；來他替尼(又名CEP701，原名KT-5555，Kyowa Hakko，授權給Cephalon)；CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；CHIR-258(ChironCorp.)；EB-10和IMC-EB10(ImClone Systems Inc.)；GTP14564(MerkBiosciences UK)；米哚妥林(又名PKC412 Novartis AG)；MLN608(Millennium USA)；MLN-518(原名CT53518，COR TherapeuticsInc.，授權給Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(MillenniumPharmaceuticals Inc.)；SU-11248(Pfizer USA)；SU-11657(Pfizer USA)；SU-5416和SU5614；THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528和VX-680(Vertex PharmaceuticalsUSA，授權給Novartis(Switzerland)，Merck&Co USA)；和XL999(Exelixis USA)。
制劑 本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可以通過本領域中已知的和如本文中所述的方法制備和配制制劑。除了本文中所述的制備方法和制劑之外，本發(fā)明的法尼基轉移酶抑制劑可以通過本領域描述的方法(例如本文中引用的出版物)制備和配制為藥物組合物。例如，對于式(I)、(II)和(III)的法尼基轉移酶抑制劑，適當?shù)膶嵗梢栽赪O-97/21701中找到。分別地，式(IV)、(V)和(VI)的法尼基轉移酶抑制劑可以使用WO97/16443中所述的方法制備和配制制劑，式(VII)和(VIII)的法尼基轉移酶抑制劑根據(jù)WO98/40383和WO98/49157中所述的方法，以及式(IX)的法尼基轉移酶抑制劑根據(jù)WO00/39082中所述的方法。替比法尼(ZarnestraTM，又名R115777)及其活性較低的對映體可以通過WO97/21701中所述的方法合成。替比法尼被期待在不久的將來作為ZARNESTRATM上市，目前可根據(jù)要求(通過合同)得自Johnson&Johnson Pharmaceutical Research&Development，L.L.C.(Titusville，NJ)。
當使用單獨的藥物組合物時，根據(jù)常規(guī)的藥物配制技術，將作為活性成分的FLT3激酶抑制劑或法尼基轉移酶抑制劑與藥物載體緊密地混合，載體可為各種形式，根據(jù)期望用于給藥的制劑形式而定，例如，口服或胃腸外給予如肌內途徑。同時具有FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑作為活性成分的單一藥物組合物可以類似地進行制備。
在制備口服劑型的單獨的組合物或者單一組合物時，可以利用任何通常的藥物介質。因此，對于液體口服制劑，諸如例如，懸浮劑、酏劑和溶液劑，適當?shù)妮d體和添加劑包括水、二醇類、油類、醇類、調味劑、防腐劑、著色劑等；對于固體口服制劑，諸如例如，粉末劑、膠囊、膠囊形片劑、軟膠囊和片劑，適當?shù)妮d體和添加劑包括淀粉、糖、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于易于給予，片劑和膠囊代表了最有利的口服劑量單元形式，在這些情況中，顯然要利用固體藥物載體。如果期望，片劑可通過標準技術進行包糖衣或包腸溶衣。對于胃腸外給予，載體通常包括無菌水，但是可包括其它成分，例如用于諸如有助于溶解度或便于保存的目的。也可制備可注射的懸浮劑，在該種情況下，可采用適當?shù)囊后w載體、助懸劑等。在用于緩慢釋放的制劑中，首先將緩釋載體(典型地為聚合物載體)和本發(fā)明的化合物溶解或分散在有機溶劑中。然后將得到的有機溶液加入到水溶液中，得到水包油型乳液。優(yōu)選地，水溶液包括表面活性劑。隨后，將有機溶劑從水包油型乳液中蒸發(fā)掉，得到包含緩釋載體和本發(fā)明化合物的粒子的膠態(tài)懸浮劑。
本文中的藥物組合物，每劑量單位例如片劑、膠囊、粉末劑、注射劑、茶匙劑等將包含遞送如上所述有效劑量所需量的活性成分。本文中的藥物組合物每單位劑量(例如片劑、膠囊、粉末劑、注射劑、栓劑、荼匙劑等)包含每天約0.01mg到200mg/kg體重的范圍。優(yōu)選地，該范圍為每天約0.03到約100mg/kg體重，最優(yōu)選地，為每天約0.05到約10mg/kg體重?；衔锟梢园凑彰刻?-5次的方案給予。然而，劑量可根據(jù)患者的需要、所治療狀況的嚴重程度和所采用的化合物而定?？梢圆捎妹刻旖o藥或一定時間間隔后給予(post-periodic dosing)。
優(yōu)選地，這些組合物為單位劑量形式，例如片劑、丸劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑、無菌的胃腸外溶液劑或懸浮劑、計量式氣霧劑或液體噴霧劑、滴劑、安瓿劑、自噴射裝置或栓劑；用于口服腸胃外、鼻內、舌下或直腸方式給予，或用于通過吸入或吹入方式給予?；蛘撸M合物可為每周一次或每月一次給予的形式；例如活性化合物的不溶性鹽(例如癸酸鹽)可配置為提供用于肌肉內注射的儲庫型制劑。對于制備固體組合物例如片劑，將主要活性成分與藥物載體(例如常規(guī)的壓片劑成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸氫鈣、或樹膠)和其它藥物稀釋劑(例如水)混合，形成包含本發(fā)明化合物及其可藥用鹽的均勻混合物的固體預制劑組合物。當提及這些預制劑組合物為均勻的時候，意指活性成分均勻地分散在組合物中，使得組合物可以容易地被再分成相等的有效劑量形式，例如片劑、丸劑和膠囊。然后將這種固體預制劑組合物再分成上述類型的單位劑量形式，包含0.1到約500mg的本發(fā)明的活性成分。新型的組合物的片劑或丸劑可以包衣，或者以另外方式配制，以提供具有延長作用優(yōu)點的劑型。例如，片劑或丸劑可包括內部劑量組份和外部劑量組份，后者為前者的包膜的形式。兩種組分可以由足以抵抗在胃中崩解并且允許內部組份完整進入十二指腸或延遲釋放的腸溶層隔開。有多種材料可用于這種腸溶層或包衣，這種材料包括多種聚合物酸類以及蟲膠、乙?；?acetyl alcohol)和醋酸纖維素等物質。
其中可單獨混合FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑用于口服或注射給予的液體形式包括水溶液、適當調味的糖漿、水或油懸浮劑、和用食用油(例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油)調味的乳劑，以及酏劑和類似的藥物媒介物。用于水懸浮劑的適當?shù)姆稚┗蛑鷳覄┌ê铣傻暮吞烊坏臉淠z，例如黃蓍膠、阿拉伯膠、藻酸鹽、右旋糖酐、羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。適當調味的助懸劑或分散劑的液體形式也可包括合成和天然的樹膠，例如黃蓍膠、阿拉伯膠、甲基纖維素等。對于胃腸外給藥，期望無菌的懸浮劑和溶液。在期望靜脈內給予時，采用通常包含適當防腐劑的等滲制劑。
有利地，F(xiàn)LT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑可以單次日劑量(分別地或在單一的組合物中)給予，或者可將總的日劑量分成每天二、三或四次給予。此外，本發(fā)明的化合物(分別地或在單一的組合物中)可通過局部使用的適當?shù)谋莾冉橘|以鼻內形式給予，或者通過本領域技術人員公知的透皮的皮膚用貼片形式給予。為了以透皮遞送系統(tǒng)的形式給予，在整個給藥方案中劑量給藥當然總是持續(xù)的而不是間斷的。
例如，對于以片劑或膠囊形式口服給予，可以將活性藥物組份(FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑分別地，或者在單一組合物的情況中一起)與口服的無毒可藥用惰性載體例如乙醇、甘油、水等合并。此外，當期望或必要時，也可將適當?shù)恼澈蟿櫥瑒?、崩解劑和著色劑混合在混合物中。適當?shù)恼澈蟿┌ǖ幌抻诘矸?、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然和合成樹膠(例如阿拉伯膠、黃蓍膠)或油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。
本發(fā)明的產物的日劑量可以在每名成年人每天1到5000mg的寬范圍內變化。對于口服給予，優(yōu)選組合物以片劑形式提供，包含0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250和500毫克活性成分，對所治療患者進行對癥劑量調整。藥物的有效量通常以每天約0.01mg/kg到約200mg/kg體重的劑量提供。具體地，該范圍為每天約0.03到約15mg/kg體重，更優(yōu)選地，為每天約0.05到約10mg/kg體重。FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑(單獨的，或者在單一組合物的情況中一起)可根據(jù)每天最多四次或更多次的方案給予，優(yōu)選每天1到2次。
給予的最佳劑量可以容易地由本領域技術人員確定，并且隨使用的具體化合物、給予方式、制劑的濃度、給予方式、和疾病狀況的進展而變化。另外，與治療的具體患者有關的因素，包括患者年齡、重量、膳食和給予時間，將導致需要調整劑量。
本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑也可以脂質體遞送系統(tǒng)(例如小單層脂質體、大單層脂質體、和多層脂質體)的形式給予(分別地或在單一組合物中)。脂質體可以由各種脂質形成，包括但不限于兩親性脂質，例如卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、心磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸類、磷脂酰肌醇、二?；卒@丙烷、二?；卒@丙烷和硬脂酰胺，中性類脂(例如甘油三酯)，及其組合。它們可包含膽固醇，或者不含膽固醇。
本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑也可局部給予(分別地、或在單一組合物中)?？梢岳萌魏芜f送裝置，例如血管內給藥的導管、金屬絲、藥理學支架和腔內鋪面。用于這種裝置的遞送系統(tǒng)可包括以投藥者控制的速度遞送化合物的局部用輸注導管。
本發(fā)明提供包括腔內醫(yī)療裝置(優(yōu)選支架)、治療劑量的本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑的給藥裝置?；蛘?，本發(fā)明提供通過包括腔內醫(yī)療裝置(優(yōu)選支架)的給藥裝置單獨給予本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑中的一種或其兩者的治療劑量。
術語“支架”是指能夠通過導管遞送的任何裝置。支架通常用于預防由于物理反常事件(例如由于外科創(chuàng)傷引起的不希望的血管組織向內生長)起的血管栓塞。其通常為適合于留置于管腔內以減輕阻塞的管狀張開的網格型結構。支架具有與腔壁接觸的表面和暴露于腔的表面。與腔壁接觸的表面為管的外表面，暴露于腔的表面為管的內表面。支架由聚合物、金屬或聚合物和金屬制成，并且可任選為生物可降解的。
本發(fā)明的FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑(分別地、或在單一組合物中)可以多種方式和利用任何的許多生物相容材料結合在支架中或者固定于支架上。在一個示例性實施方案中，將化合物直接結合到聚合物基質(例如聚合物聚吡咯)中，并且隨后涂覆在支架的外表面上。憑借化合物通過聚合物的擴散從基質被洗脫。支架和在支架涂覆藥物的方法在本領域中有詳細描述。在另一個示例性實施方案中，將支架首先用乙烯-共聚-乙酸乙烯酯和聚甲基丙烯酸丁酯涂覆，作為包括化合物溶液的基礎層。然后，將支架另外涂覆只包括聚甲基丙烯酸丁酯的外層。外層作為阻止化合物太快洗脫和進入周圍組織的擴散障礙。外層或頂層的厚度決定化合物從基質被洗脫的速率。支架和涂覆方法在WIPO出版物WO9632907、美國公開號2002/0016625及其中披露的參考文獻中詳細論述。
為了更好地理解和說明本發(fā)明及其示例性實施方案和優(yōu)點，參考以下實驗部分。
實驗 試驗了FTI和FLT3抑制劑的組合對AML細胞生長的抑制。使用兩種FTI(替比法尼和FTI化合物176(FTI-176))和八種新型的FLT3抑制劑(化合物A、B、C、D、E、F、G和H)在體外抑制FLT3依賴性細胞類型的生長(參見描述試驗化合物的圖5)。
試驗的細胞系包括生長依賴于FLT3ITD突變活性的那些(MV4-11和Baf3-FLT3ITD)、生長依賴于FLT3wt活性的那些(Baf3FLT3)，以及生長獨立于FLT3活性的那些(THP-1)。MV4-11(ATCC保藏號CRL-9591)細胞得自患有幼年型急性粒-單核細胞白血病的患者，所述患者具有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含F(xiàn)LT3-ITD突變(AML亞型M4)(參見Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook.AcademicPresSan Diego，CA，2000和Quentmeier H，Reinhardt J，Zaborski M，Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloid leukemia cell lines.Leukemia.2003 Jan；17120-124.)。Baf3-FLT3和Baf3-FLT3ITD細胞系得自Dr.Michael Henrich和the Oregon Health Sciences University。Baf3FLT3細胞系通過用野生型FLT3或在受體的近膜結構域包含引起結構活化的ITD插入物的FLT3對親代Baf3細胞(生長依賴于細胞因子IL-3的鼠B細胞淋巴瘤細胞系)進行穩(wěn)定轉染而產生。根據(jù)細胞在IL-3不存在和FLT3配體(Baf3-FLT3)存在或獨立于任何生長因子(Baf3-ITD)的條件下的生長能力選擇細胞。THP-1(ATCC保藏號TIB-202)細胞分離得自具有N-Ras突變并且沒有FLT3異常的幼年AML患者。雖然該細胞表達功能性FLT3受體，但是THP-1細胞的生存能力和生長不依賴于FLT3活性(數(shù)據(jù)未顯示)。
使用標準的72小時細胞增殖試驗測定單個化合物單獨對于每個細胞系的劑量應答(參見圖6.1-6.8)。在所有的試驗中使用標準化療劑-阿糖胞苷-作為對照細胞毒藥物。FTI替比法尼根據(jù)細胞類型而定具有較高納摩爾到較高皮摩爾的效力范圍。FLT3抑制劑化合物(A、B、C、D、E、F、G和H)在生長依靠于FLT3的細胞中對抑制FLT3驅動的增殖(與第一線細胞毒藥物阿糖胞苷和替比法尼相比)分別具有好的效力(亞微摩爾)。這些化學上不同的化合物中的每一個單獨具有治療FLT3相關病癥(例如FLT3陽性的AML)的可能性。阿糖胞苷抑制的增殖與先前報道的其在MV4-11細胞中的體外活性不相上下(1-2μM)(Levis、M.、et al.(2004)“In vitro studies of a FLT3 inhibitor combined with chemotherapysequence of administration is important to achieve synergistic cytotoxiceffects.”Blood.104(4)1145-50)。試驗的FLT3抑制劑對THP-1增殖沒有影響。將每種化合物在每種細胞系中的IC50計算值用于隨后的組合實驗，以計算化合物組合對細胞增殖的協(xié)同效應。(參見以下的圖10.1-10.8和表1-3) 然后檢查FLT3抑制劑化合物A的單(亞IC50)劑量對替比法尼效力的影響。每個細胞系同時用一個劑量的FLT3抑制劑化合物A和改變劑量的替比法尼處理，根據(jù)標準72小時細胞增殖規(guī)程評價細胞的增殖。然后根據(jù)后文的生物活性部分中所述的方法計算替比法尼的IC50(參見描述FLT3抑制劑化合物A和替比法尼組合的結果的圖7a-c)。試驗的細胞系包括生長依賴于FLT3ITD突變活性的細胞系(MV4-11和Baf3-FLT3ITD)、生長依賴于FLT3M活性的細胞系(Baf3FLT3)，以及生長獨立于FLT3活性的細胞系(THP-1)。
FLT3抑制劑化合物A顯著增加FTI替比法尼抑制AML(MV4-11)和FLT3依賴性(Baf3-ITD和Baf3-FLT3)細胞增殖的效力。在(a)MV4-11(50nM)；(b)Baf3-ITD(50nM)和(c)Baf3-FLT3(100nM)中使用單一亞IC50劑量的FLT3抑制劑化合物A，在試驗的每種細胞系中，替比法尼效力增加超過3倍。這表明有顯著的協(xié)同作用。
然后，在MV4-11、Baf3-ITD和Baf3-FLT3細胞系中評價FTI替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的單劑量給藥組合。這種單劑量給藥組合方案更接近地代表了臨床中使用的化學治療組合的劑量給藥策略。使用這種方法，將細胞同時用單一亞IC50劑量的每種化合物、或化合物的組合處理，并且監(jiān)測增殖抑制。使用這種方法，觀察到亞IC50劑量的FTI替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的組合在抑制AML細胞系MV4-11和其它FLT3依賴性細胞的生長方面超過了其相加的效力(參見圖8a-d)。在增殖不依賴FLT3的細胞(THP-1)中沒有觀察到這種與替比法尼的協(xié)同效應。在FLT3抑制劑化合物A和阿糖胞苷的組合中也發(fā)現(xiàn)這種協(xié)同效應。
另外，考察FLT3抑制劑和FTI的單劑量給藥組合，以測定這些活性是否是化合物特異性的或基于機理的。試驗了單一亞IC50劑量的FLT3抑制劑化合物B或D與替比法尼對MV4-11增殖的抑制。觀察到，與替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的組合相似，F(xiàn)LT3抑制劑化合物B或D與替比法尼的組合以大于相加的效力抑制FLT3依賴性MV4-11細胞的增殖。這樣我們就可以假定，任何FLT3抑制劑和FTI的組合都可以協(xié)同地抑制FLT3依賴性AML細胞的增殖。這種觀察結果是新穎的并且是本領域技術人員非顯而易見的。使用FLT3抑制劑化合物B或D與阿糖胞苷的組合也觀察到協(xié)同作用。
為了統(tǒng)計學評價FLT3抑制劑與FTI在FLT3依賴性細胞系中的協(xié)同作用，通過Chou-Talalay法評價劑量給藥組合。參見Chou TC、TalalayP.(1984)“Quantitative analysis of dose-effect relationshipsthe combinedeffects of multiple drugs or enzyme inhibitors.”Adv Enzyme Regul.2227-55。使用這種方法，將抑制劑以各自化合物單獨時的IC50劑量的比率同時加入到細胞中。收集數(shù)據(jù)并且如Chou-Talalay法所述對固定比率劑量組合進行等效劑量(isobolar)分析。這種分析用于產生組合指數(shù)即CI。CI值＝1相當于化合物的相加作用，CI值＜0.9認為是協(xié)同作用，CI值＞1.1認為是拮抗作用。使用這種方法，評價了多種FTI和FLT3組合。對于每種實驗組合，在每種FLT3依賴性細胞系中計算每種單獨化合物的IC50(參見圖6.1-6.8)，然后在標準細胞增殖試驗中進行固定比率劑量給藥(在包括9、3、1、1/3、1/9×單獨化合物IC50的劑量范圍下)。圖10.1-10.8總結了使用Calcusyn軟件(Biosoft)得到的，自根據(jù)Chou-Talalay法進行等效劑量分析固定比率劑量給藥的原始數(shù)據(jù)。使用等效劑量分析方法(isobologram)，可以用圖示方式表示協(xié)同作用。相加作用的組合的數(shù)據(jù)點沿著所給劑量作用的等效劑量線(isobolarline)(CI＝1)布置。協(xié)同作用的組合的數(shù)據(jù)點落在所給劑量作用的等效劑量線的左側，或者下方(CI＜0.9)。拮抗作用的組合的數(shù)據(jù)點落在所給劑量作用的等效劑量線的右側，或者上方(CI＞1.1)。圖10.1a-c總結了對FLT3抑制劑化合物A與替比法尼在MV4-11、Baf3-ITD和Baf3-wtFLT3細胞系中的組合進行的等效劑量分析。從等效劑量分析可見，在所有用實驗方法確定的數(shù)據(jù)點都觀察到協(xié)同作用，包括引起細胞增殖50％抑制的組合劑量(ED50)、細胞增殖75％抑制的組合劑量(ED75)和細胞增殖90％抑制的組合劑量(ED90)。這些點中的每一個都顯著地落在等效劑量(或相加)線的左側，顯示出顯著的協(xié)同作用。FLT3抑制劑化合物A和替比法尼的組合在試驗的每種FLT3依賴性細胞系中都產生顯著的增殖抑制協(xié)同作用。在圖10.1a-c中描述的等效劑量分析方法的組合指數(shù)在以下的表1-3中表示。
另外，圖10.2a-b總結了使用化學上不同的FLT3抑制劑、FLT3抑制劑化合物B和替比法尼的組合進行的等效劑量分析。與FLT3抑制劑化合物A和替比法尼的組合相似，F(xiàn)LT3抑制劑化合物H和替比法尼的組合在所有試驗劑量下和在試驗的所有FLT3依賴性細胞系中對細胞增殖的抑制具有協(xié)同作用。在圖5.2a-c中描述的等效劑量分析方法的組合指數(shù)在以下的表1-3中表示。此外，圖5.3a-c總結了使用替比法尼和另一種化學上不同的FLT3抑制劑(FLT3抑制劑化合物E)的組合進行的等效劑量分析。與其它組合試驗的情況一樣，F(xiàn)LT3抑制劑化合物E和替比法尼的組合在試驗的所有劑量下在三種不同的細胞系中都協(xié)同抑制FLT3依賴性增殖。在圖5.3a-c中描述的等效劑量分析方法的組合指數(shù)在以下的表1-3中表示。
為了進一步擴展組合研究，還試驗了與替比法尼表現(xiàn)出協(xié)同作用的每種FLT3抑制劑與另一種法尼基轉移酶抑制劑FTI-176的組合。表1-3總結了在上述三種FLT3依賴性細胞系中試驗的所有組合中得到的結果。每種組合的組合指數(shù)包含在表1-3中。
表1 表1FLT3抑制劑和FTI的組合(試驗的所有組合)協(xié)同抑制MV4-11AML細胞的增殖，這通過組合指數(shù)(CI)測量。如隨后在生物活性測量部分中所總結的，在單獨化合物的增殖IC50的固定比率下進行組合。通過Chou-Talalay法并且使用Calcusyn軟件(Biosoft)計算IC50和CI值。CI和IC50值是每個數(shù)據(jù)點重復三次的三次獨立實驗的平均值。
表2 表2FLT3抑制劑和FTI的組合(試驗的所有組合)協(xié)同抑制用100ng/ml FLT配體刺激的Baf3-FLT3細胞的增殖，這通過組合指數(shù)(CI)測量。如隨后在生物活性測量部分中所總結的，在單獨化合物的增殖IC50的固定比率下進行組合。通過Chou-Talalay法并且使用Calcusyn軟件(Biosoft)計算IC50和CI值。CI和IC50值是每個數(shù)據(jù)點重復三次的三次獨立實驗的平均值。
表3 表3FLT3抑制劑和FTI的組合(試驗的所有組合)協(xié)同抑制Baf3-ITD細胞的增殖，這通過組合指數(shù)(CI)測量。如隨后在生物活性測量部分中所總結的，在單獨化合物的增殖IC50的固定比率下進行組合。通過Chou-Talalay法并且使用Calcusyn軟件(Biosoft)計算IC50和CI值。CI和IC50值是每個數(shù)據(jù)點重復三次的三次獨立實驗的平均值。
在使用的所有FLT3依賴性細胞系中觀察到，試驗的所有FTI和FLT3的組合都具有組合給藥的協(xié)同作用。FTI和FLT3抑制劑的組合簡化單獨化合物抗增殖作用平均3-4倍?？梢酝茢嗨^察到的FLT3抑制劑和FTI的組合的協(xié)同作用是基于機理的現(xiàn)象，而與單獨的FTI或FLT3抑制劑的具體化學結構無關。因此，對于FLT3抑制劑和替比法尼或任何其它FTI的任何組合，都會觀察到協(xié)同生長抑制作用。
治療FLT3相關病癥的最終目標是殺死致病性細胞和引起疾病消退。為了考查FTI/FLT3抑制劑的組合對FLT3依賴性的致病性細胞(特別是AML、ALL和MDS細胞)的細胞死亡是否具有協(xié)同作用，試驗了替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的組合誘導MV4-11細胞中熒光標記的膜聯(lián)蛋白V染色增加的能力。膜聯(lián)蛋白V結合于已從質膜內部小葉移位到質膜外部小葉的磷脂酰絲氨酸并且是測量細胞的細胞程序死亡沿用已久的方法。參見van Engeland M.，L.J.Nieland等人(1998)“Annexin V-affinity assaya review on an apoptosis detection system basedon phosphatidylserine exposure.”Cytometry.31(1)1-9。
在標準細胞培養(yǎng)條件下將替比法尼和FLT3抑制劑化合物A單獨、或以固定比率(4∶1，基于每種藥物單獨計算的EC50)對MV4-11細胞進行培養(yǎng)48小時。在化合物培養(yǎng)之后，收獲處理的細胞并且根據(jù)隨后的生物活性測量部分中的規(guī)程使用Guava Nexin細胞程序死亡試劑盒用膜聯(lián)蛋白V-PE和7-AAD染色。膜聯(lián)蛋白V染色在60％達峰，因為細胞在細胞程序死亡末期開始瓦解并且認為是碎片。然而，由于這種數(shù)據(jù)的穩(wěn)定S形動力學，可以從這種數(shù)據(jù)計算EC50。從圖11a中總結的數(shù)據(jù)，推斷替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的組合比任一種藥物單獨誘導MV4-11細胞程序死亡更顯著有效。對于FLT3抑制劑(FLT3抑制劑)化合物A，誘導膜聯(lián)蛋白V染色的EC50改變超過4倍。對于FTI(替比法尼)，誘導膜聯(lián)蛋白V染色的EC50改變超過八倍。還進行了使用上述Chou-Talalay法進行的統(tǒng)計分析以測定組合的協(xié)同作用。圖11b描述替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的組合在誘導膜聯(lián)蛋白V染色中的等效劑量分析。所有的數(shù)據(jù)點顯著地落在等效劑量線的左側。組合的CI值列在圖11c中的表中。在膜聯(lián)蛋白V染色(和誘導細胞程序死亡)時觀察到的協(xié)同作用比觀察到的FLT3抑制劑和FTI的組合對于增殖的協(xié)同作用更顯著。由FTI和FLT3抑制劑的組合協(xié)同誘導的MV4-11細胞程序死亡的程度不能由本領域技術人員預見。因此，基于得自增殖的數(shù)據(jù)，F(xiàn)LT3抑制劑和FTI的任何組合對于誘導FLT3依賴性細胞(即，F(xiàn)LT3病癥的致病性細胞，特別是AML、ALL和MDS細胞)的細胞程序死亡也都具有協(xié)同作用。
為了證實FLT3抑制劑和FTI的組合協(xié)同活化FLT3依賴性細胞的細胞程序死亡，試驗了幾種FLT3抑制劑和FTI替比法尼的組合在MV4-11細胞中誘導半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活性的能力。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化(細胞程序死亡細胞死亡過程的最終完成中的關鍵步驟)可以由各種多種細胞刺激物誘導，細胞刺激物包括生長因子撤回(withdrawal)或生長因子受體抑制，參見Hengartner，MO.(2000)“Thebiochemistry of apoptosis.”Nature 407770-76和Nunez G，Benedict MA，Hu Y，Inohara N.(1998)“Caspasesthe proteases of the apoptoticpathway.”O(jiān)ncogene 173237-45。細胞的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化可以使用合成的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7底物(所述底物裂解釋放熒光素酶的底物)進行監(jiān)測，其可將底物轉化為發(fā)光產物。參見Lovborg H，Gullbo J，Larsson R.(2005)“Screening for apoptosis-classical andemerging techniques.”Anticancer Drugs 16593-9。根據(jù)隨后的生物活性測量部分中的規(guī)程使用得自Promega(Madison，WI)的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo技術監(jiān)測半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化。
進行單獨的EC50測定以建立用于協(xié)同作用組合分析的劑量比率。圖12a-d總結了每種單獨藥物的EC50測定。對于組合實驗，在標準細胞培養(yǎng)條件下，將替比法尼和FLT3抑制劑化合物B、C和D以固定比率(基于單獨每種藥物計算的EC50)在不同劑量下(范圍包括9、3、1、1/3、1/9×單獨化合物EC50)與MV4-11細胞一起培養(yǎng)24小時。在24小時之后，根據(jù)生產商的說明書和在隨后生物活性測量部分中的詳述測量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活性。圖13.1-13.3總結了在MV4-11細胞中使用替比法尼和FLT3抑制劑化合物B、C和D的組合觀察到的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化的協(xié)同作用(通過前述的Chou-Talalay法)。在試驗的所有劑量下和試驗的所有組合中都觀察到協(xié)同作用。在MV4-11細胞中所觀察到的FLT3抑制劑和FTI的組合對半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化(和誘導細胞程序死亡)的協(xié)同作用比對增殖的協(xié)同作用更顯著。由FTI和FLT3抑制劑的組合協(xié)同誘導的MV4-11細胞程序死亡的程度不能由本領域技術人員預見。因此，基于得自增殖的數(shù)據(jù)，F(xiàn)LT3抑制劑和FTI的任何組合對于誘導FLT3依賴性細胞(即，F(xiàn)LT3病癥的致病性細胞，特別是AML、ALL和MDS細胞)的細胞程序死亡也都具有協(xié)同作用。
已經確定FLT3受體和下游激酶例如MAP激酶的磷酸化是FLT3受體增殖作用所需的。參見Scheijen，B.和J.D.Griffin(2002)″Tyrosinekinase oncogenes in normal hematopoiesis and hematological disease.″Oncogene 21(21)3314-33。我們假定使用FLT3抑制劑和FTI觀察到的協(xié)同作用的分子機制與化合物誘導的FLT3受體信號(其為AML細胞增殖和存活所需的)降低相關。為了對其進行試驗，我們根據(jù)在隨后生物活性測量部分中詳述的規(guī)程使用市售試劑在MV4-11細胞中考察FLT3-ITD受體和FLT3受體活性的下游靶的磷酸化狀態(tài)、MAP激酶(erk1/2)磷酸化。在標準細胞生長條件下，將MV4-11細胞用所示濃度的FLT3抑制劑化合物A(單獨的、或與替比法尼的組合)處理48小時。對于FLT3磷酸化的分析，收獲細胞并將FLT3免疫沉淀并且通過SDS-PAGE分離。對于MAP激酶(erk1/2)磷酸化的分析，收獲細胞，進行裂解，通過SDS-Page分離并且轉移到硝化纖維進行免疫印跡分析。為了定量分析FLT3磷酸化，使用磷酸酪氨酸抗體對免疫印跡進行探測并且使用Molecular Dynamics Typhoon Image Analysis對phophoFLT3信號定量。然后將免疫印跡剝離并且再次探測以對總的FLT3蛋白質信號定量。使用磷酸化與總蛋白信號的這一比率計算化合物劑量應答的近似IC50。為了定量分析MAP激酶(ERK1/2)磷酸化，使用磷酸特異性ERK1/2抗體探測免疫印跡并且使用Molecular Dynamics Typhoon Image Analysis對phophoERK1/2信號定量。然后將免疫印跡剝離并且再次探測以對總的ERK1/2蛋白質信號定量。使用磷酸化與總蛋白信號的這一比率計算化合物劑量應答的近似IC50。使用GraphPad Prism軟件計算IC50值。這項工作的結果總結在圖14中。
觀察到替比法尼和FLT3抑制劑化合物A的組合使得FLT3抑制劑化合物A的抑制FLT3磷酸化和MAP激酶磷酸化的效力增加一到二倍。這與化合物抗增殖作用效力的增加相符。使用FTI/FLT3抑制劑的組合所觀察到的FLT3磷酸化作用在以前沒有報導。這種影響FLT3磷酸化的機理是未知的，但是從基于上述對增殖抑制所收集的試驗數(shù)據(jù)來看，可以預言對于任何FTI/FLT3抑制劑的組合都會如此。
體外生物活性測量 試劑和抗體細胞Titerglo增殖試劑得自Promega Corporation。蛋白酶抑制劑雞尾酒(cocktails)和磷酸酶抑制劑雞尾酒II購自Sigma(St.Louis，MO)。GuavaNexin細胞程序死亡試劑購自Guava technologies(Hayward，CA)。Superblock緩沖液和SuperSignal Pico試劑購自PierceBiotechnology(Rockford，IL)。熒光偏振酪氨酸激酶試劑盒(Green)得自Invitrogen。小鼠抗磷酸酪氨酸(4G10)抗體購自Upstate Biotechnology，Inc(Charlottesville，VA)?？谷薋LT3(兔IgG)購自Santa Cruzbiotechnology(Santa Cruz，CA)?？沽姿酠ap激酶和總p42/44 Map激酶抗體購自Cell Signaling Technologies(Beverly，MA)。堿性磷酸酶結合型山羊抗兔IgG、和山羊抗小鼠IgG抗體購自Novagen(San Diego，CA)。DDAO磷酸鹽購自Molecular Probes(Eugene，OR)。所有的組織培養(yǎng)試劑購自BioWhitaker(Walkersville，MD)。
細胞系THP-1(Ras突變型，F(xiàn)LT3野生型)和人MV4-11(結構性表達FLT3-內部串聯(lián)重復或從具有t15；17易位AML患者分離的ITD突變型)AML細胞(參見Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell LineFactsbook.Academic PresSan Diego，CA，2000and Quentmeier H，Reinhardt J，Zaborski M，Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloidleukemia cell lines.Leukemia.2003年1月；17120-124.)得自ATCC(Rockville，MD)。表達人野生型FLT3(Baf3-FLT3)和ITD-突變的FLT3(Baf3-ITD)的IL-3依賴性鼠B細胞祖細胞系Baf3得自Dr.MichaelHeinrich(Oregon Health Sciences University)。將細胞保持在包含penn/strep、10％FBS(單獨)(THP-1、Baf3-ITD)、以及2ng/ml GM-CSF(MV4-11)或10ng/ml FLT配體(Baf3-FLT3)的RPMI培養(yǎng)基中。MV4-11、Baf3-ITD和Baf3-FLT3細胞的生長都完全依賴于FLT3活性。GM-CSF在MV4-11細胞中增強FLT3-ITD受體的活性。
對MV4-11、Baf3-ITD、Baf3-FLT3和THP-1細胞進行的細胞增殖試驗為了測量試驗化合物的增殖抑制，使用基于熒光素酶的CellTiterGlo試劑(Promega)。將細胞以每孔10,000個細胞鋪板在包含penn/strep、10％FBS(單獨)(THP-1、Baf3-ITD)、以及0.2ng/ml GM-CSF(MV4-11)或10ng/ml FLT配體(Baf3-FLT3)的100ul的RPMI培養(yǎng)基中。將化合物稀釋物或0.1％DMSO(介質對照)加入到細胞中并且允許細胞在標準細胞生長條件(37℃，5％CO2)下生長72小時。在組合實驗中，將試驗藥物同時加入到細胞中。將總的細胞生長量化為與第3天總細胞數(shù)(72小時生長和/或化合物處理)相比的第0天細胞數(shù)的發(fā)光計數(shù)(相對光單位，RLU)的差。百分之百的生長抑制率被定義為等于第0天讀數(shù)的RLU。零抑制百分率被定義為在生長第三天DMSO媒介物對照的RLU信號。所有的數(shù)據(jù)點是一式三份樣品的平均值。生長抑制的IC50表示在第三天引起DMSO媒介物對照的總細胞生長50％抑制的化合物的劑量。使用GraphPad Prism進行IC50數(shù)據(jù)分析，使用非線性回歸，與多參數(shù)、S形劑量-應答(可變斜率)方程擬合。
免疫沉淀反應和定量免疫印跡分析使MV4-11細胞在補充有10％胎牛血清、2ng/ml GM-CSF的DMEM中生長并且保持為1×105和1×106個細胞/毫升之間。對于Map激酶磷酸化的蛋白質印跡分析，在每種條件下使用1×106個MV4-11細胞。對于考查FLT3-ITD磷酸化的免疫沉淀實驗，在每種實驗條件下使用1×107個細胞。在化合物處理之后，將MV4-11細胞用冷的1xPBS洗滌一次并且用HNTG裂解緩沖液(50mMHepes，150mM NaCl，10％甘油，1％ Triton-X-100，10mM NaF，1mMEDTA，1.5mM MgCl2，10mM焦磷酸鈉)+4ul/ml蛋白酶抑制劑雞尾酒(Sigma cat.#P8340)+4ul/ml磷酸酶抑制劑雞尾酒(Sigma Cat#P2850)裂解。通過離心(5000rpm，5分鐘，4℃)從細胞裂解產物除去細胞核和碎片。將用于免疫沉淀的細胞裂解產物在4℃下用瓊脂糖-蛋白A/G澄清30分鐘，并且在4℃下使用3ug的FLT3抗體進行免疫沉淀1小時。然后將免疫復合物在4℃下與瓊脂糖-蛋白A/G一起培養(yǎng)1小時。將蛋白A/G免疫沉淀物在1.0ml HNTG裂解緩沖液中洗滌三次。將免疫沉淀物和細胞裂解產物(40ug總蛋白)在10％SDS-PAGE凝膠上解析，并且將蛋白質轉移到硝化纖維膜上。對于抗磷酸酪氨酸免疫印跡分析，將膜用SuperBlock(Pierce)封閉并且用抗磷酸酪氨酸(克隆4G10，UpstateBiotechnologies)、隨后用堿性磷酸酶結合型山羊抗小鼠抗體印跡2小時。對于抗磷酸MAP激酶蛋白質印跡分析，將膜用Super block封閉1小時并且在初次抗體中印跡過夜，隨后與AP結合型山羊抗兔二次抗體一起培養(yǎng)。通過使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging system(MolecularDynamics，Sunyvale，CA)測量堿性磷酸酶與底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二銨鹽(DDAO磷酸鹽)(Molecular Probes)的反應的熒光產物進行蛋白質的檢測。將印跡剝離并且用抗FLT3抗體再次探測，用于磷酸化信號的歸一化。使用Molecular Dynamics ImageQuant和GraphPad Prism軟件進行DDAO磷酸鹽信號的定量和IC50測定。
膜聯(lián)蛋白V染色為了考查白血病MV4-11細胞系的細胞程序死亡，將細胞用替比法尼和/或FLT3抑制劑化合物A處理，并且使用GuavaNexin檢測試劑和Guava personal流式細胞計系統(tǒng)(GuavaTechnologies；Hayward，CA)監(jiān)測細胞程序死亡細胞質膜外部小葉上的與磷脂酰絲氨酸結合的膜聯(lián)蛋白V。將MV4-11細胞以每毫升200,000個細胞鋪板在包含不同濃度的替比法尼和/或FLT3抑制劑化合物A的組織培養(yǎng)基中，并且在37℃、5％CO2中培養(yǎng)48小時。通過在4℃下在400×g離心10分鐘收獲細胞。然后將細胞用1xPBS洗滌并且以1×106細胞/ml再懸浮在1×Nexin緩沖液中。將5μl膜聯(lián)蛋白V-PE和5μl 7-AAD加入到40μl的細胞懸浮液中并且在冰上避光培養(yǎng)20分鐘。將450ml的冷的1×Nexin緩沖液加入到每個樣品中，然后在Guava細胞計上根據(jù)生產商的說明書對細胞計數(shù)。認為所有的膜聯(lián)蛋白陽性細胞的細胞程序死亡，并計算膜聯(lián)蛋白陽性細胞的百分比。
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活化試驗使MV4-11細胞在包含pen/strep、10％FBS和1ng/mL GM-CSF的RPMI培養(yǎng)基中生長。通過每2-3天進行給料/分裂使細胞維持在2×105個/mL到8×105個細胞/mL之間。細胞離心并且以2×105個細胞/mL再懸浮在包含Penn/Strep、10％FBS和0.1ng/mL GM-CSF的RPMI培養(yǎng)基中。在不同濃度的試驗化合物或DMSO存在條件下，將MV4-11細胞以每孔20,000個細胞在100μL包含penn/strep、10％FBS(單獨)，和0.1ng/mL GM-CSF(Corning CostarCat#3610)的RPMI培養(yǎng)基中鋪板。在組合實驗中，將試驗藥物同時加入到細胞中。將細胞在37℃、5％CO2下培養(yǎng)24小時。在24小時培養(yǎng)之后，根據(jù)生產商的說明書使用Promega半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo試劑(Cat#G8090)測量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性。簡而言之，將半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo底物用10mL半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo緩沖液稀釋。將一體積的稀釋半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Glo試劑加入到一體積組織培養(yǎng)基中并且在旋轉定軌振蕩器上混合2分鐘。在室溫下培養(yǎng)60分鐘之后，在Berthold光度計使用1秒程序測量光發(fā)射。基線半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性被定義為等于用DMSO媒介物(0.1％DMSO)處理的細胞的RLU。使用GraphPad Prism完成EC50數(shù)據(jù)分析，使用非線性回歸，與多參數(shù)、S形劑量-應答(可變斜率)方程擬合。
組合指數(shù)分析為了根據(jù)Chou-Talalay法(Chou and Talalay.參見Chou TC，Talalay P.(1984)“Quantitative analysis of dose-effectrelationshipsthe combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors.”Adv Enzyme Regul.2227-55.)測定FTI和FLT3抑制劑組合的生長抑制協(xié)同作用，使用等效劑量統(tǒng)計分析進行固定比率組合給予。將試驗藥物在每種細胞系的單個增殖IC50的固定比率下合并并且在包括9、3、1、1/3、1/9倍于所測定的IC50劑量的不同濃度下給予。為了測量試驗組合的增殖抑制，使用基于熒光素酶的CellTiterGlo試劑(Promega)。將細胞以每孔10,000個細胞鋪板在包含penn/strep、10％FBS(單獨)(THP-1，Baf3-ITD)、以及0.1ng/ml GM-CSF(MV4-11)或100ng/ml FLT配體(Baf3-FLT3)的100ul的RPMI培養(yǎng)基中?？偟募毎L被量化為與第3天總細胞數(shù)(72小時生長和/或化合物處理)相比的第0天細胞數(shù)的發(fā)光計數(shù)(相對光單位，RLU)的差。所有的數(shù)據(jù)點是一式三份樣品的平均值。百分之百的生長抑制率被定義為等于第0天讀數(shù)的RLU。零抑制百分率被定義為在生長第三天DMSO媒介物對照的RLU信號。使用Calcsyn(BioSoft，F(xiàn)erguson，MO)分析抑制數(shù)據(jù)并且計算組合指數(shù)(C.I.)。C.I.值＜0.9認為具有協(xié)同作用。
體內組合研究 使用FLT3抑制劑化合物B和D檢測FLT3抑制劑(FLT3抑制劑化合物)和替比法尼(ZarnestraTM)的組合治療對裸鼠中MV-4-11人AML腫瘤異種移植物生長的影響。設計體內試驗用于擴展體外觀察結果，以評價FLT3抑制劑化合物B和D各自與替比法尼一起口服給予對帶有確立MV-4-11腫瘤異種移植物的裸鼠的協(xié)同抗腫瘤作用的潛力。
FLT3抑制劑化合物B單獨的抗腫瘤作用 雌性無胸腺裸鼠(CD-1，nu/nu，9-10周齡)得自Charles RiverLaboratories(Wilmington，MA)并且根據(jù)NIH標準護養(yǎng)。在潔凈的室內條件下，所有小鼠分組被安置(5只小鼠/籠)在無菌的微型隔離籠中，以12小時照明/黑暗循環(huán)，室內保持21-22℃和40-50％的濕度。給小鼠喂養(yǎng)經輻射的標準嚙齒動物飲食并且不限量供應水。將所有的動物安置在完全由the American Association for Assessment and Accreditation ofLaboratory Animal Care(AAALAC)認可的Laboratory Animal Medicine設備中。涉及動物的所有操作依照the NIH Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals進行，并且所有的規(guī)程由Internal Animal Care andUse Committee(IACUC)審定。
人白血病MV4-11細胞系得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(theAmerican Type Culture Collection)(ATCC保藏號CRL-9591)并且在包含10％FBS(胎牛血清)和5ng/mL GM-CSF(R&D Systems)的RPMI培養(yǎng)基中繁殖。MV4-11細胞得自患有幼年型急性粒-單核細胞白血病的患者，該患者帶有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含F(xiàn)LT3-ITD突變(AML亞型M4)(1，2)。由于自然發(fā)生的FLT3/ITD突變，MV4-11細胞結構性表達活性的磷酸化FLT3受體。期望在裸鼠腫瘤異種移植物模型中針對MV4-11瘤生長的強抗腫瘤活性是本發(fā)明合乎需要的性質。
在先導生長研究中，確定以下條件允許在裸鼠中作為皮下實體瘤異種移植物的MV4-11細胞生長在即將注射之前，將細胞在PBS中洗滌并且計數(shù)，懸浮在1∶1的PBSMatrigel混合物(BD Biosciences)中，然后加載到預先冷卻的裝備25號針頭的1cc注射器中。通過在0.2mL的遞送量中包含5×106個腫瘤細胞在大腿左側腹股溝區(qū)對重量不低于20-21克的雌性無胸腺裸鼠進行皮下接種。對于退化研究，在開始給藥之前讓腫瘤生長到預定尺寸。在腫瘤細胞接種之后約3周，將帶有從106到439mm3大小(有60只小鼠在此范圍內)皮下腫瘤的小鼠隨機分為處理組，使得所有處理組具有相似的起始平均腫瘤體積(～200mm3)。通過在一周除周末外的日子每天兩次(b.i.d.)和在周未每天一次(q.d.)管飼媒介物(對照組)或不同劑量的化合物對小鼠進行口服給藥。給藥持續(xù)11個連續(xù)日，根據(jù)用媒介物處理的對照小鼠中的瘤生長的動力學和腫瘤大小而定。如果對照小鼠中的腫瘤達到體重的～10％(～2.0克)，研究終止。每天新制備FLT3抑制劑化合物，其為在20％ HPβCD/2％NMP/10mM磷酸鈉，pH3-4(NMP＝Pharmasolve，ISP Technologies，Inc.)或者其它適當?shù)拿浇槲镏械耐该魅芤?1、3和10mg/mL)，并且如上所述口服給藥。在研究過程中，使用電子游標卡尺每周三次(M，W，F(xiàn))測量腫瘤生長。使用式(L×W)2/2計算腫瘤體積(mm3)，其中L＝腫瘤的長度(mm)和W＝腫瘤的寬度(最短距離，mm)。每周測量三次體重，并且將體重減輕超過10％用作缺乏化合物耐受性(tolerability)的指示。不可接受的毒性被定義為在研究過程中體重損失超過20％。每天在每次給藥時仔細檢查小鼠是否有有害的、與藥物相關的副作用的明顯臨床征兆。
在研究終止的當天，測量每只動物的最終腫瘤體積和最終體重。將小鼠用100％CO2安樂死，并且立即將腫瘤完整切除和稱重，最終腫瘤濕重(克)作為初級效力終點。
FLT3抑制劑化合物對MV4-11腫瘤生長的抑制效果隨時間的變化在圖1中說明。數(shù)值表示每個處理組中15只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天，相對于用媒介物處理的對照組中的腫瘤生長計算腫瘤生長的抑制百分率(％I)。通過方差分析(ANOVA)隨后進行Dunnett’s t-檢驗確定相對于對照的統(tǒng)計顯著性*p＜0.05；**p＜0.01。
在研究終止時觀察到相似的最終腫瘤重量降低(參見圖2)。數(shù)值表示每個處理組15只小鼠的平均值(±sem)，除了高劑量組之外，在高劑量組中在15只小鼠中只有5只在研究終止的當天被處死。相對于用媒介物處理的對照組中的平均腫瘤重量計算抑制百分率。通過ANOVA、隨后進行Dunnett’s t-檢驗確定相對于對照的統(tǒng)計顯著性**p＜0.01。
圖1通過管飼法b.i.d.口服給予10、30和100mg/kg FLT3抑制劑化合物B連續(xù)11天，對裸鼠中皮下生長的MV4-11腫瘤產生統(tǒng)計顯著的、劑量依賴性的生長抑制。在處理的最后一天(第11天)，與用媒介物處理的組中的平均腫瘤體積相比，在10、30和100mg/kg劑量下的平均腫瘤體積劑量依賴性地分別減小44％、84％(p＜0.01)和94％(p＜0.01)。相對于第一天的起始平均腫瘤體積，在30mg/kg和100mg/kg劑量下觀察到腫瘤退化，分別為42％和77％的統(tǒng)計顯著性降低。在10mg/kg的最低試驗劑量下，觀察到適度的生長延遲(相對于對照為44％I)，然而這個效果沒有達到統(tǒng)計顯著性。
圖2在口服給藥11個連續(xù)日之后，與用媒介物處理組的平均腫瘤重量相比，F(xiàn)LT3抑制劑化合物B產生最終腫瘤重量的統(tǒng)計顯著的、劑量依賴性的降低，在10、30和100mg/kg劑量下分別為48％、85％(p＜0.01)和99％(p＜0.01)降低。在一些小鼠中，在高劑量的FLT3抑制劑化合物B的情況下，最終的腫瘤退化為不可觸知的、不能檢測的腫瘤。
在研究過程中小鼠每周稱重三次(M、W、F)，并且每天在給藥時檢查任何有害的、與藥物相關的副作用的明顯臨床征兆。對于FLT3抑制劑化合物B，沒有觀察到明顯的毒性，并且在高達200mg/kg/天的劑量下在11天的治療時期過程中沒有觀察到對體重的顯著不利影響?？偟卣f來，對于FLT3抑制劑化合物B的所有劑量組，平均體重減輕小于最初體重的3％，表明FLT3抑制劑化合物被良好耐受。
為了進一步確立FLT3抑制劑化合物到達腫瘤組織中的期望靶，測量了得自用媒介物處理的小鼠和用化合物處理的小鼠的腫瘤組織中的FLT3磷酸化水平。FLT3抑制劑化合物B的結果表示在圖3中。對于這項藥效動力學研究，將來自用媒介物處理的對照組的10只小鼠的亞組隨機分為兩組，每組5只小鼠，然后用另一劑量的媒介物或化合物(100mg/kg，po)處理。在2小時后收獲腫瘤，并且快速凍結，用于通過免疫印跡評價FLT3磷酸化。
處理收獲的腫瘤用于以如下方式進行FLT3磷酸化的免疫印跡分析100mg腫瘤組織在補充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和蛋白酶抑制劑(Sigma Cat#P8340)的裂解緩沖液(50mM Hepes，150mM NaCl，10％甘油，1％ Triton-X-100，10mM NaF，1mM EDTA，1.5mM MgCl2，10mM焦磷酸鈉)中杜恩斯(dounce)勻漿。通過在4℃下在1000×g離心5分鐘除去不溶性碎片。將澄清的裂解液(15mg總蛋白，10mg/ml，在裂解緩沖液中)與10μg的與瓊脂糖結合的抗FLT3抗體，克隆C-20(Santa Cruzcat#sc-479ac)在和緩攪拌下在4℃培養(yǎng)2小時。然后將得自腫瘤裂解產物的經免疫沉淀的FLT3用裂解緩沖液洗滌四次，并且通過SDS-PAGE分離。將SDS-PAGE凝膠轉移到硝化纖維，并且用抗磷酸酪氨酸抗體(clone-4G10，UBI cat.#05-777)、隨后用堿性磷酸酶結合型山羊抗小鼠二次抗體(Novagen cat.#401212)進行免疫印跡。蛋白質的檢測通過使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging系統(tǒng)(Molecular Dynamics，Sunyvale，CA)測量堿性磷酸酶與底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二銨鹽(DDAO磷酸鹽)(Molecular Probes cat.#D 6487)反應的熒光產物進行。然后將印跡剝離并且用抗FLT3抗體再次探測，用于磷酸化信號的歸一化。
如圖3中說明的，與得自用媒介物處理的小鼠的腫瘤相比，在100mg/kg下的單劑量FLT3抑制劑化合物B在MV4-11腫瘤中引起FLT3磷酸化水平的生物學顯著降低。(總的FLT3表示在下方圖中)。這些結果進一步證明，本發(fā)明的化合物事實上與腫瘤中期望的FLT3靶相互作用。
如上所述(在前述體內評價FLT3抑制劑化合物B的口服抗腫瘤效力中)準備帶有MV-4-11腫瘤的裸鼠。
與替比法尼一起給藥的FLT3抑制劑化合物B的抗腫瘤作用 如上所述(在前述體內評價單獨的FLT3抑制劑化合物B的口服抗腫瘤效力中)準備帶有MV-4-11腫瘤的裸鼠。
將帶有MV-4-11腫瘤的裸鼠隨機分為五個處理組，每組15只小鼠，在每個處理組中平均腫瘤大小相等。使用式(L×W)2/2計算腫瘤體積(mm3)，其中L＝腫瘤的長度(mm)和W＝腫瘤的寬度(最短距離，mm)。每個處理組的起始平均腫瘤體積為約250mm3。
對小鼠在一周除周末外的日子內每天兩次(bid)和在每周末每天一次(qd)口服劑量給予媒介物(20％ HPβCD/2％NMP/10mM磷酸鈉，pH3-4(NMP＝Pharmasolve，ISP Technologies，Inc.)、亞有效劑量的FLT3抑制劑化合物B(10mg/kg)、有效劑量的FLT3抑制劑化合物B(20mg/kg)、和單獨的或與每個劑量的FLT3抑制劑化合物B組合的替比法尼(50mg/kg)。給藥持續(xù)9個連續(xù)日。在研究過程中使用電子游標卡尺測量腫瘤生長三次。在研究過程中測量體重三次，并且將體重減輕超過10％用作缺乏化合物耐受性(tolerability)的指示。
用FLT3抑制劑化合物B和替比法尼單獨和組合治療對MV-4-11腫瘤生長的影響隨時間的變化在圖15中說明。如所示，與腫瘤體積達到約800mm3的媒介物處理組相比，以10mg/kg劑量bid給予的FLT3抑制劑化合物B產生輕微顯著的腫瘤生長抑制。與媒介物處理組相比，以20mg/kg劑量bid給予的FLT3抑制劑化合物B產生顯著的腫瘤生長抑制，與對照相比提供腫瘤生長的完全受控。觀察到這個劑量導致腫瘤生長停滯，但是沒能誘導腫瘤退化(定義為腫瘤尺寸比研究開始時的腫瘤尺寸更小)。如圖15中說明的，在治療的最后一天(第9天)，當與對照進行比較時，單獨的替比法尼(50mg/kg)不顯著降低腫瘤體積。數(shù)值表示每個處理組中15只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天，相對于用媒介物處理的對照組中的腫瘤生長計算腫瘤生長的抑制百分率。通過ANOVA、隨后進行Dunnett’s t-檢驗測定相對于對照的統(tǒng)計顯著性*p＜0.01。
再如圖15所示，作為單獨藥物以50mg/kg劑量給藥的替比法尼無效。然而，當兩種藥物組合口服給藥時，當FLT3抑制劑化合物B以10或20mg/kg劑量給予時，在第1天就有腫瘤體積與平均起始腫瘤體積相比的統(tǒng)計顯著退化。在第9天，該組的平均腫瘤體積與用媒介物處理的對照組相比抑制95％。因此，組合治療與單獨給予的藥物相比產生大得多的抑制效果(即，腫瘤退化)。實際上，單獨的替比法尼(50mg/kg)和10mg/kg的FLT3抑制劑化合物B基本上是無活性的，而它們的組合顯著地提供腫瘤的基本完全退化。
圖15說明了單獨、或組合口服給予FLT3抑制劑化合物B和替比法尼對裸鼠中MV-4-11腫瘤異種移植物生長的腫瘤體積的影響。
圖16說明了單獨、或組合口服給予FLT3抑制劑化合物B和替比法尼對裸鼠中MV-4-11腫瘤異種移植物的最終體積的影響(研究的最后一天)。如圖16中所示，在研究終止時，當比較每個處理組的最終腫瘤體積時(最終腫瘤重量達到統(tǒng)計顯著性的除外)，觀察到組合治療具有協(xié)同作用。
圖17說明了單獨、或組合口服給予FLT3抑制劑化合物B和替比法尼對裸鼠中MV-4-11腫瘤異種移植物的最終腫瘤重量的影響(研究終止的當天)。如圖17所示，在研究終止時，與FLT3抑制劑化合物B和替比法尼單獨給予的適當?shù)奶幚斫M的最終腫瘤重量相比，通過對10mg/kgFLT3抑制劑化合物B/50mg/kg替比法尼組合處理組的腫瘤重量的測量證實協(xié)同作用。
單獨或組合使用任一藥物在9天治療過程中沒有觀察到明顯的毒性并且對體重沒有顯著不利的影響?？偟貋碚f，與單獨給予的FLT3抑制劑化合物B或替比法尼相比，F(xiàn)LT3抑制劑化合物B和替比法尼的組合治療產生腫瘤生長的顯著更大抑制。
單獨的FLT3抑制劑化合物D的抗腫瘤作用 使用如上所述(在前述的體內評價FLT3抑制劑化合物B的口服抗腫瘤效力中)方法在無胸腺裸鼠中用裸鼠MV4-11人腫瘤異種移植物退化模型體內評價本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D的口服抗腫瘤效力。
如上所述(在前述體內評價單獨的FLT3抑制劑化合物B的口服抗腫瘤效力中)準備帶有MV-4-11腫瘤的裸鼠。
通過在0.2mL的遞送量中包含5×106個腫瘤細胞在大腿左側腹股溝區(qū)對重量不低于20-21克的雌性無胸腺裸鼠進行皮下接種。對于退化研究，在開始給藥之前讓腫瘤生長到預定尺寸。在腫瘤細胞接種之后約3周，將帶有尺寸為100到586mm3(在該范圍內有60只小鼠，平均288±133mm3(SD))的皮下腫瘤的小鼠隨機分為處理組，使得所有的處理組都具有統(tǒng)計學相似的起始平均腫瘤體積(mm3)。通過管飼法對小鼠在一周除周末外的日子中每天兩次(b.i.d.)和在周末每天一次(qd)口服給予媒介物(對照組)或不同劑量的化合物。給藥持續(xù)11個連續(xù)日，根據(jù)用媒介物處理的對照小鼠中的瘤生長的動力學和腫瘤大小而定。如果對照小鼠中的腫瘤達到體重的～10％(～2.0克)，研究終止。每天新制備FLT3抑制劑化合物D，其為在20％ HPβCD/D5W(pH3-4)或其它適當?shù)拿浇槲镏械耐该魅芤?在1、5和10mg/mL)，并且如上所述口服給予。在研究過程中，使用電子游標卡尺每周三次(M，W，F(xiàn))測量腫瘤生長。使用式(L×W)2/2計算腫瘤體積(mm3)，其中L＝腫瘤的長度(mm)和W＝腫瘤的寬度(最短距離，mm)。每周測量三次體重，并且將體重減輕大于10％用作缺乏化合物耐受性(tolerability)的指示。不可接受的毒性被定義為在研究過程中體重損失＞20％。每天在每次劑量給藥時仔細檢查小鼠是否有有害的、與藥物相關的副作用的明顯臨床征兆。
在研究終止的當天(第12天)，測量每只動物的最終腫瘤體積和最終體重。將小鼠用100％CO2安樂死，并且立即將腫瘤完整切除和稱重，最終腫瘤濕重(克)作為初級效力終點。
本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D對MV4-11腫瘤生長的抑制效果隨時間的變化在圖18中說明。數(shù)值表示每個處理組中15只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天，相對于用媒介物處理的對照組中的腫瘤生長計算腫瘤生長的抑制百分率(％I)。通過方差分析(ANOVA)隨后進行Dunnett’s t-檢驗測定相對于對照的統(tǒng)計顯著性*p＜0.05；**p＜0.01。
如圖18中所示，通過管飼法b.i.d.口服給予10、50和100mg/kg的本發(fā)明FLT3抑制劑化合物D持續(xù)11個連續(xù)日對裸鼠中皮下生長的MV4-11腫瘤產生統(tǒng)計顯著的、劑量依賴性的生長抑制。在處理的最后一天(第11天1)，與用媒介物處理組的平均腫瘤體積相比，平均腫瘤體積劑量依賴性降低，在50和100mg/kg劑量下為幾乎100％抑制(p＜0.001)。本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D在50mg/kg和100mg/kg劑量下產生腫瘤消退，相對于第1天的起始平均腫瘤體積分別為98％和93％的統(tǒng)計顯著性降低。在10mg/kg的最低試驗劑量下，相對于用媒介物處理的對照組，沒有觀察到顯著的生長延遲。當在100mg/kg處理劑量組中在第12天停止給藥并且允許腫瘤再生長時，只有6/12只小鼠在第34天表現(xiàn)出可觸知的、可測量的腫瘤。
本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D產生實質上完全的腫瘤質量消退，如在研究終止時沒有可測量的殘余腫瘤所示的。(參見圖19)。圖19中的條形圖表示每個處理組中15只小鼠的平均值(±sem)。如所示，在10mg/kg劑量時沒有最終腫瘤重量的顯著降低，與圖18中的腫瘤體積數(shù)據(jù)一致。在50mg/kg的劑量下，在圖上沒有表示為條形圖，這是因為在終止時在這些小鼠中沒有可測量的腫瘤質量可被檢測到，這與圖18中所示的完全的腫瘤體積退化一致。在這個圖中沒有表示100mg/kg劑量組，這是因為這些小鼠被停藥并且如上所述允許殘余的腫瘤繼續(xù)生長。
在口服給藥11個連續(xù)日之后，本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D與用媒介物處理組的平均腫瘤重量相比產生最終腫瘤重量的劑量依賴性降低，在50mg/kg劑量下觀察到腫瘤質量的完全消退。(參見圖19)。
在研究過程中小鼠每周稱重三次(M、W、F)，并且每天在給藥時檢查任何有害的、與藥物相關的副作用的明顯臨床征兆。對于本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D，沒有觀察到明顯的毒性，并且在高達200mg/kg/天的劑量下在11天的治療時期過程中沒有觀察到對體重的顯著不利影響(參見圖20)?？偟卣f來，在所有的劑量組中，相對于起始體重，沒有顯著的體重減輕，表明本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D被良好耐受。
為了進一步確立本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D到達腫瘤組織中的期望靶，測量了得自用媒介物處理小鼠和用化合物處理的小鼠的腫瘤組織中的FLT3磷酸化水平。本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D的結果表示在圖21中。對于這項藥效動力學研究，將來自用媒介物處理的對照組的6只小鼠的亞組隨機分為三組，每組2只小鼠，然后用另一劑量的媒介物或化合物(10和100mg/kg，po)處理。在6小時后收獲腫瘤，并且快速凍結，用于通過蛋白質印跡評價FLT3磷酸化。
將收獲的腫瘤凍結并以如下方式進行處理用于進行FLT3磷酸化的免疫印跡分析200mg腫瘤組織在補充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和蛋白酶抑制劑(Sigma Cat#P8340)的裂解緩沖液(50mM Hepes，150mMNaCl，10％甘油，1％Triton-X-200，10mM NaF，1mM EDTA，1.5mMMgCl2，10mM焦磷酸鈉)中杜恩斯勻漿。通過在4℃下在1000×g離心5分鐘除去不溶性碎片。將澄清的裂解液(15mg總蛋白，10mg/ml，在裂解緩沖液中)與10μg的與瓊脂糖結合的抗FLT3抗體，克隆C-20(SantaCruz cat#sc-479ac)在和緩攪拌下在4℃培養(yǎng)2小時。
然后將得自腫瘤裂解產物的經免疫沉淀的FLT3用裂解緩沖液洗滌四次，并且通過SDS-PAGE進行分離。將SDS-PAGE凝膠轉移到硝化纖維，并且用抗磷酸酪氨酸抗體(克隆-4G10，UBI cat.#05-777)、然后用堿性磷酸酶結合型山羊抗小鼠二次抗體(Novagen cat.#401212)進行免疫印跡。蛋白質的檢測通過使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging系統(tǒng)(Molecular Dynamics，Sunyvale，CA)測量堿性磷酸酶與底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二銨鹽(DDAO磷酸鹽)(MolecularProbes cat.#D 6487)反應的熒光產物進行。然后將印跡剝離并且用抗FLT3抗體再次探測，用于磷酸化信號的歸一化。
如圖21中說明的，在100mg/kg下的單劑量的本發(fā)明的FLT3抑制劑化合物D在MV4-11腫瘤中，與用媒介物處理的小鼠腫瘤(腫瘤1和2)相比，產生FLT3磷酸化水平的生物學顯著降低(上圖，腫瘤5和6)。(總的FLT3表示在下方圖中)。在用10mg/kg化合物處理的動物(腫瘤3-4)中也發(fā)生磷酸化的部分降低。這些結果進一步證明，本發(fā)明的化合物事實上與期望的腫瘤中FLT3靶相互作用。
與替比法尼一起給藥的FLT3抑制劑化合物D的抗腫瘤作用 為了證明FLT3抑制劑化合物D和替比法尼的組合在MV-4-11異種移植物模型中的體內協(xié)同作用，如上所述(在前述的體內評價單獨的FLT3抑制劑化合物B的口服抗腫瘤效力時)準備帶有腫瘤的裸鼠。
將帶有MV-4-11腫瘤的裸鼠隨機分為四個處理組，每組10只小鼠，每個處理組中的平均腫瘤大小相等。使用式(L×W)2/2計算腫瘤體積(mm3)，其中L＝腫瘤的長度(mm)和W＝腫瘤的寬度(最短距離，mm)。每個處理組的起始平均腫瘤體積為約250mm3。
在一周除周末外的日子內每天兩次(bid)和在周末每天一次(qd)對小鼠口服給予媒介物(20％ HPβ-CD，pH3-4)或者單獨或組合的亞有效劑量的FLT3抑制劑化合物D(25mg/kg)或替比法尼(50mg/kg)。給藥持續(xù)十六個連續(xù)日。使用電子游標卡尺每周三次(星期一、星期三、星期五)測量腫瘤生長。每周測量三次體重，并且將體重損失＞10％用作缺乏化合物耐受性的指示。
用FLT3抑制劑化合物D和替比法尼單獨和組合的治療對MV-4-11腫瘤生長的影響隨時間的變化在圖22中說明。如所示，以25mg/kg劑量bid給予的FLT3抑制劑化合物D，與達到約1500mm3的腫瘤體積的媒介物處理組相比，產生腫瘤生長停滯。如圖22中說明的，在處理的最后一天(第16天)，與用媒介物處理的對照組相比，腫瘤體積被顯著抑制76％。數(shù)值表示每個處理組中10只小鼠的平均值(±sem)。在研究的最后一天相對于用媒介物處理的對照組中的腫瘤生長計算腫瘤生長的抑制百分率。通過ANOVA、隨后進行Dunnett’s t-檢驗測定相對于對照的統(tǒng)計顯著性*p＜0.01。
如圖22所示，作為單獨藥物以50mg/kg劑量給藥的替比法尼無效。然而，當將兩種藥物口服組合給予時，腫瘤體積與第1天的平均起始腫瘤體積相比有統(tǒng)計顯著的退化。在第16天，該組的平均腫瘤體積與用媒介物處理的對照組相比抑制95％。因此，組合治療產生的抑制效果(即，腫瘤退化)為每種藥物單獨給予的相加作用的約1.3倍，表現(xiàn)出協(xié)同作用(參見圖22)。
圖23說明了單獨、或組合口服給予FLT3抑制劑化合物D和替比法尼對裸鼠中MV-4-11腫瘤異種移植物生長的腫瘤體積的影響。圖24說明了單獨、或組合口服給予FLT3抑制劑化合物D和替比法尼對裸鼠中MV-4-11腫瘤異種移植物的最終重量的影響。如圖24所示，在研究終止時，當比較每個處理組的最終腫瘤重量時，觀察到組合治療有相似的協(xié)同作用。
單獨或組合使用任何藥物在16天治療過程中沒有觀察到明顯的毒性并且對體重沒有顯著不利的影響。在最后給藥化合物之后二小時收集血漿和腫瘤樣品，用于測定藥物濃度?？偟貋碚f，與給予單獨的FLT3抑制劑化合物D或替比法尼相比，F(xiàn)LT3抑制劑化合物D和替比法尼的組合治療產生腫瘤生長的顯著更大抑制。
結論 在這里我們提供了顯著的證據(jù)，證明FTI和FLT3抑制劑的組合在體外和體內協(xié)同抑制FLT3依賴性細胞(例如得自具有FLT3-ITD突變的患者的AML細胞)的生長和誘導其死亡。在體外研究中，在多種FLT3依賴性細胞系中，使用單一亞最佳劑量的每種化合物的組合通過Chou-Talalay法的組合指數(shù)方法和中效方法(median effect method)證明FTI/FLT3抑制劑組合對AML細胞增殖的協(xié)同抑制。另外，F(xiàn)TI和FLT3抑制劑的組合在FLT3依賴性AML細胞中誘導顯著的細胞死亡。這種細胞程序死亡誘導作用顯著地大于任何單獨的藥物。對于多種結構上不同的FLT3抑制劑和兩種不同的FTI而言觀察到FTI/FLT3抑制劑組合的這種協(xié)同效應。因此，作為任何FLT3抑制劑/FTI組合都會發(fā)生這種協(xié)同的增殖抑制和細胞程序死亡誘導。有趣的是，F(xiàn)TI替比法尼與FLT3抑制劑的組合顯著地增加FLT3抑制劑介導的FLT3受體信號降低的效力。此外，用FTI替比法尼和兩種化學上不同的FLT3抑制劑(FLT3抑制劑化合物B和D)的組合，使用體外方法觀察到的協(xié)同作用在使用FLT3依賴性AML細胞(MV4-11)的體內腫瘤模型中得以重現(xiàn)。因此，會在任何FLT3抑制劑/FTI組合中觀察到這種作用。據(jù)我們所知，這是首次觀察到FTI和FLT3抑制劑的組合具有殺死AML細胞的協(xié)同作用。另外，基于以前的數(shù)據(jù)，在組合時觀察到的協(xié)同作用對于本領域技術人員來說是非顯而易見的。觀察到的協(xié)同作用可能與FTI已知的抑制小GTP酶(Ras和Rho)和NfkB驅動的增殖和存活、以及FLT3抑制劑通過FLT3受體降低增殖和存活信號的能力有關。另外，F(xiàn)TI/FLT3抑制劑組合對FLT3受體本身的活性有明顯的影響。盡管作用機制目前未知，但是其似乎在使用FLT3抑制劑/FTI組合所觀察到的抑制細胞增殖和活化細胞死亡中都有顯著的作用。總而言之，這些研究代表了新的治療范例，用于FLT3病癥，特別是表達野生型或突變型FLT3的血液學惡性腫瘤，并且代表了試驗FTI和FLT3抑制劑組合用于治療FLT3病癥(特別是AML、ALL和MDS)的臨床試驗設計的基礎。
盡管前述說明書教導了本發(fā)明的原則，提供實施例用于示例性目的，但是應該理解，本發(fā)明的實踐包括所有通常的變體、改進和/或修改，其都落在權利要求及其等價物的范圍內。
權利要求
1.一種降低或抑制受試者中FLT3酪氨酸激酶表達或活性的方法，包括對受試者給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑，其中FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
2.一種治療受試者中與FLT3酪氨酸激酶表達或活性相關的病癥的方法，包括對受試者給予FLT3激酶抑制劑和法尼基轉移酶抑制劑，其中FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
3.一種預防受試者中的細胞增殖性病癥的方法，包括對受試者給予預防有效量的(1)第一藥物組合物，其包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，其包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中所述FLT3-激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
4.權利要求3的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的化學治療。
5.權利要求3的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的放射治療。
6.權利要求3的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的基因治療。
7.權利要求3的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的免疫治療。
8.一種預防受試者中的細胞增殖性病癥的方法，包括對受試者給予預防有效量的藥物組合物，該藥物組合物包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
9.權利要求8的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的化學治療。
10.權利要求8的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的放射治療。
11.權利要求8的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的基因治療。
12.權利要求8的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的免疫治療。
13.一種預防受試者中FLT3相關病癥的方法，包括對受試者給予預防有效量的(1)第一藥物組合物，其包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，其包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
14.權利要求13的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的化學治療。
15.權利要求13的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的放射治療。
16.權利要求13的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的基因治療。
17.權利要求13的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的免疫治療。
18.一種預防受試者中FLT3相關病癥的方法，包括對受試者給予預防有效量的藥物組合物，該藥物組合物包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(14)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
19.權利要求18的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的化學治療。
20.權利要求18的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的放射治療。
21.權利要求18的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的基因治療。
22.權利要求18的方法，其另外包括對受試者給予預防有效量的免疫治療。
23.一種治療受試者中細胞增殖性病癥的方法，包括對受試者給予治療有效量的(1)第一藥物組合物，其包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，其包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
24.權利要求23的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的化學治療。
25.權利要求23的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的放射治療。
26.權利要求23的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的基因治療。
27.權利要求23的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的免疫治療。
28.一種治療受試者中細胞增殖性病癥的方法，包括對受試者給予治療有效量的藥物組合物，該藥物組合物包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
29.權利要求28的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的化學治療。
30.權利要求28的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的放射治療。
31.權利要求28的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的基因治療。
32.權利要求28的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的免疫治療。
33.一種治療受試者中FLT3相關病癥的方法，包括對受試者給予治療有效量的(1)第一藥物組合物，其包括FLT3激酶抑制劑和可藥用載體，和(2)第二藥物組合物，其包括法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基.
34.權利要求33的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的化學治療。
35.權利要求33的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的放射治療。
36.權利要求33的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的基因治療。
37.權利要求33的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的免疫治療。
38.一種治療受試者中FLT3相關病癥的方法，包括對受試者給予治療有效量的藥物組合物，該藥物組合物包括FLT3激酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑和可藥用載體，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物
及其N-氧化物、可藥用鹽、溶劑化物、幾何異構體和立體化學異構體，其中
q為0、1或2；
p為0或1；
Q為NH、N(烷基)、O、或直接鍵；
Z為NH、N(烷基)、或CH2；
B為苯基、雜芳基、或9-10元苯并稠合雜芳基；
R1為
其中n為1、2、3或4；
Ra為氫、烷氧基、苯氧基、苯基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的哌啶酮基、任選地被R5取代的環(huán)狀雜二酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx、或-SO2NRwRx；
R5為一個、兩個或三個獨立地選自以下的取代基鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH、或烷基氨基；
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成5-7元環(huán)，所述環(huán)任選地包含選自以下的雜部分O、NH、N(烷基)、SO2、SO、或S；
Ry選自氫、烷基、烯基、環(huán)烷基、苯基、芳烷基、雜芳烷基、或雜芳基；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、硫代、硝基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、烷基氨基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的吡咯烷酮基、任選地被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、鹵代烷基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫烷基、或-SO2烷基；其中R4獨立地選自鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、羥基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或烷基氨基。
39.權利要求38的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的化學治療。
40.權利要求38的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的放射治療。
41.權利要求38的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的基因治療。
42.權利要求38的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的免疫治療。
43.權利要求38的方法，其另外包括對受試者給予治療有效量的化學治療。
44.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑包括式(I)的化合物
其立體異構形式、可藥用酸或堿加成鹽，其中
虛線表示任選的鍵；
X為氧或硫；
R1為氫、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、或下式的基團-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9，其中Alk1為C1-6烷二基，R9為羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基或被C1-6烷氧基羰基取代的C1-8烷基氨基；
R2、R3和R16各自獨立地為氫、羥基、鹵基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6烯基、4，4-二甲基唑基；或
當在相鄰的位置上時R2和R3可以一起形成下式的二價基團
-O-CH2-O-(a-1)，
-O-CH2-CH2-O-(a-2)，
-O-CH＝CH-(a-3)，
-O-CH2-CH2-(a-4)，
-O-CH2-CH2-CH2-(a-5)，或
-CH＝CH-CH＝CH-(a-6)；
R4和R5各自獨立地為氫、鹵基、Ar1、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基；
R6和R7各自獨立地為氫、鹵基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、Ar2氧基、三鹵代甲基、C1-6烷硫基、二(C1-6烷基)氨基，或當在相鄰的位置上時R6和R7可以一起形成下式的二價基團
-O-CH2-O-(c-1)，或
-CH＝CH-CH＝CH-(c-2)；
R8為氫、C1-6烷基、氰基、羥基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、咪唑基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、或下式的基團
-O-R10(b-1)，
-S-R10(b-2)，
-N-R11R12(b-3)，
其中R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、或下式的基團-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15；
R11為氫、C1-12烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基；
R12為氫、C1-6烷基、C1-16烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基氨基羰基、Ar1、Ar2C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、天然氨基酸、Ar1羰基、Ar2C1-6烷基羰基、氨基羰基羰基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羥基、C1-6烷氧基、氨基羰基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基羰基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氨基、或下式的基團-Alk2-OR13或-Alk2-NR14R15；其中Alk2為C1-6烷二基；R13為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基；R14為氫、C1-6烷基、Ar1或Ar2C1-6烷基；R15為氫、C1-6烷基、C1-6烷基羰基、Ar1或Ar2C1-6烷基；
R17為氫、鹵基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、Ar1；
R18為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵基；
R19為氫或C1-6烷基；
Ar1為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵基取代的苯基；和
Ar2為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵基取代的苯基。
45.權利要求44的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑包括式(I)的化合物，其中X為氧并且虛線表示鍵。
46.權利要求44的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑包括式(I)的化合物，其中R1為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、單(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；R2為鹵基、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、三鹵代甲氧基、或羥基C1-6烷氧基；和R3為氫。
47.權利要求44的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑包括式(I)的化合物，其中R8為氫、羥基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、咪唑基、或下式的基團-NR11R12，其中R11為氫或C1-12烷基，和R12為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基羰基、羥基、或下式的基團-Alk2-OR13，其中R13為氫或C1-6烷基。
48.權利要求44的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
49.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中
Rw和Rx獨立地選自氫、烷基、烯基、芳烷基、或雜芳烷基，或Rw和Rx可任選地一起形成選自以下組的5-7元環(huán)
50.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中B為苯基或雜芳基。
51.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中
q為1或2；和
R3為一個或多個獨立地選自以下的取代基氫、烷基、烷氧基、鹵素、烷氧基醚、羥基、任選地被R4取代的環(huán)烷基、任選地被R4取代的雜芳基、任選地被R4取代的雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、任選地被R4取代的苯氧基、任選地被R4取代的雜芳基氧基、二烷基氨基、或-SO2烷基。
52.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中
Z為NH或CH2；和
Ra為氫、烷氧基、任選地被R5取代的雜芳基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的唑烷酮基、任選地被R5取代的吡咯烷酮基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-SO2NRwRx。
53.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中
Q為NH、O、或直接鍵；
Ra為氫、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、雜芳基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-CONRwRx、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、或-N(Ry)CON(Rw)(Rx)；
R5為一個選自以下的取代基-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、或-C(1-4)烷基-OH；和
R3為一個或兩個獨立地選自以下的取代基烷基、烷氧基、鹵素、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-O(環(huán)烷基)、苯氧基、或二烷基氨基。
54.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中
B為苯基或吡啶基；
Ra為氫、羥基、氨基、二烷基氨基、任選地被R5取代的雜環(huán)基、-CONRwRx、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、或-NRwSO2Ry；和
R3為一個獨立地選自以下的取代基烷基、烷氧基、-O(環(huán)烷基)、或苯氧基。
55.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括式I’的化合物，其中
Rw和Rx可任選地一起形成選自以下的5-7元環(huán)
56.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括選自下列的式I’化合物
57.權利要求1-43中任一項的方法，其中所述FLT3激酶抑制劑包括選自下列的式I’化合物
58.權利要求49的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
59.權利要求50的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
60.權利要求51的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
61.權利要求52的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
62.權利要求53的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
63.權利要求54的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
64.權利要求55的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
65.權利要求56的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
66.權利要求57的方法，其中所述法尼基轉移酶抑制劑為(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；或其可藥用酸加成鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及在細胞或受試者中抑制FLT3酪氨酸激酶活性或表達、或降低FLT3激酶活性或表達的方法，包括給予法尼基轉移酶抑制劑和選自式I’的氨基嘧啶類化合物的FLT3激酶抑制劑，其中R3、B、Z、Q、p、q和R1如本文中定義。本發(fā)明包括預防和治療學方法，用于治療處于形成細胞增殖性病癥或FLT3相關病癥的危險中(或對形成所述病癥敏感)的受試者。
文檔編號A61K31/517GK101242847SQ200680029459
公開日2008年8月13日 申請日期2006年6月7日 優(yōu)先權日2005年6月10日
發(fā)明者C·A·鮑曼, M·D·高爾 申請人:詹森藥業(yè)有限公司