專利名稱：降血脂口服液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種保健制品，尤其涉及一種具有降低血脂功能的口服液及其制備方法，屬于保健品領域。
背景技術：
血脂為血液中所含脂類物質的總稱。如果血脂過多，容易造成血稠，在血管壁上沉積，逐漸形成小斑塊，這些斑塊增多、增大，逐漸堵塞血管，使血流變慢，嚴重時血流被中斷。這種情況如果發(fā)生在心臟，就引起冠心??；發(fā)生在腦，就會出現(xiàn)腦中風。
目前已經公認高脂血癥，包括高膽固醇血癥、高甘油三脂血癥及復合性高脂血癥是促進動脈粥樣硬化和危及人類健康的冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CHD)的主要危險因素之一，而降低血脂，可以降低冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生率。據(jù)統(tǒng)計資料顯示，每降低總膽固醇水平均1％，可以降低2％的心肌梗塞的發(fā)生率。另外，血脂的降低已被證實可以減慢已形成的粥樣硬化斑塊的進展，甚至使其消退，并有可能減低冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的病死率。
治療與控制高脂血癥的重要意義是改變異常血脂狀況及降低發(fā)生冠心病的風險，治療方法一般分成藥物治療與非藥物治療兩方面。高脂血癥的控制一般需要很長時間甚至終生進行，所需費用相當昂貴，而且目前所有降脂藥物均具有一定毒副作用，部分研究資料結果顯示，藥物干預(特別是非那汀類降脂藥)并不能使人群總死亡率降低。因此，提供一種無毒副作用、具有較好的輔助降血脂功能作用且口感和風味易為患者所接受的保健制品具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種無毒副作用、能夠有效降低血脂且口感和風味俱佳的口服液。
本發(fā)明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現(xiàn)的一種降血脂口服液，每100毫升該口服液含有以下重量的組分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，幾丁聚糖1-4g和維生素C0.1-0.5g；
優(yōu)選的，上述各組分的重量是低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，幾丁聚糖2.7g和維生素C0.3g。
為了從保健功能、口感和風味上達到更好的效果，本發(fā)明降血脂口服液每100毫升還可含有以下重量的組分麥芽糖2-6g，果葡萄漿2-6g，蜂蜜2-4g，檸檬酸0.5-2g，乳酸0.05-0.5g，葡萄柚香精0.05-0.5g。
優(yōu)選的，各組分的重量是麥芽糖4g，果葡萄漿4g，蜂蜜3g，檸檬酸1g，乳酸0.1g，葡萄柚香精0.1g。
本發(fā)明口服液以水溶性植物纖維(聚葡萄糖)加動物纖維(幾丁聚糖)與其它活性成分(維生素C，低聚木糖等)配合而成。
低聚木糖又稱寡木糖，是一種優(yōu)良的雙歧桿菌增值因子。低聚木糖增值雙歧桿菌的功能是其他聚和糖的20倍，且對于肝道有雙向調節(jié)作用，可使便秘或瀉痢狀況得到緩解。低聚木糖可改善腸內菌群，促進腸道蠕動，加劇食物通過腸道，抑制腸內有毒發(fā)酵產物生成，因而具有降低膽固醇的作用，低聚木糖有較好的降低血脂的功效。
聚葡萄糖聚葡萄糖是一種優(yōu)良的水溶性膳食纖維，是一種β-1，6葡聚糖。其生理保健功能為在大腸中發(fā)酵，產生短鏈脂肪酸，增加糞便體積，減少胃排空時間，聚葡萄糖能防止膽固醇和膽甾烷醇這類固醇的重吸收。聚葡萄糖在小腸形成粘膜層，有效阻礙甘油三酯和膽固醇在小腸的吸收；聚葡萄糖可以與膽酸結合，增加膽紅素排出，減少膽固醇的形成，還可通過形成凝膠吸附膽酸，使機體利用膽固醇合成膽酸，降低血清膽固醇。
幾丁聚糖又稱殼聚糖、脫乙酰甲殼素等。幾丁聚糖是帶正電荷的陽離子動物性食物纖維，又是自然界唯一存在的堿性多糖，因而決定了其具有重要的生理功能。血液中的總膽固醇和甘油三脂的含量過高，會誘發(fā)各種心血管病，直接威脅著人的生命。食物中脂類的消化需要膽汁酸作為乳化劑，正電性的幾丁聚糖與負電荷的膽汁酸結合后排出體外，使脂肪不被乳化，從而阻礙脂肪的消化吸收。因膽固醇主要在肝臟中轉化為膽汁酸減少，這就促進肝臟將膽固醇轉化成膽汁酸，從而使血膽固醇降低。在體外一定比例的幾丁聚糖可較好的絡合膽汁酸，干擾機體對脂肪的吸收，幾丁干擾脂肪吸收的功能。
維生素C維生素C(VC)是人體內重要的還原劑，參與多種氧化—還原過程。在正常人體內膽固醇約有80％轉化為膽酸排出體外，VC參與并促進其轉化過程。患有高膽固醇血癥時，膽固醇的代謝消耗大量的VC，因此及時補充適量的VC能有效降低總膽固醇。
聚葡萄糖可在小腸內形成一層膜，并纏裹部分食物脂肪，能有效限制消化道內脂肪的吸收，促進類脂化合物的排泄，并增加飽腹感，減少進食量，從而達到調節(jié)血脂，減少脂肪堆積，預防肥胖癥等功效。聚葡萄糖能吸附膽汁酸，膽固醇變異原等有機分子，抑制總膽固醇(TG)濃度升高，降低膽酸及其鹽類的合成與吸收，降低人體血漿和肝臟膽固醇水平，防治血液黏稠及預防心腦血管疾病。
幾丁聚糖是一種天然的多糖類物質，是存在于蝦蟹等甲殼類動物的殼中的甲殼素脫乙酰酰基而得到的可溶于酸性水溶液的聚氨基葡萄糖，具有較好的生物相容性，基本無毒副作用。服用幾丁聚糖能夠抑制血漿膽固醇的上升。
殼聚糖是一種弱的陰離子交換劑，殼聚糖衍生物對膽酸的結合能力隨著6-O-所聯(lián)的烷基碳鏈增長而增大。表明殼聚糖骨架上正電荷及殼聚糖6-O-烷基的疏水性在膽酸的結合能力方面起著重要的作用并且有一定的降血脂作用。殼聚糖也是一種粘性的多糖類纖維素，與燕麥膠等類似可以通過胃的排空延遲而起到降脂作用的特性。幾丁聚糖能夠減少膽固醇在小腸吸收，增加中性固醇的糞便排泄，同時能降低甘油三酯，膽固醇等脂溶性物質的吸收減少，隨之增加了排泄而達到調血脂作用。
維生素C與幾丁聚糖抑制脂肪的消化吸收有協(xié)同增效作用，通過試驗發(fā)現(xiàn)，如果在給予大鼠高脂飲食的同時持續(xù)大量給予幾丁聚糖和維生素C鈉鹽，大鼠在脂肪消化吸收方面明顯可受到抑制。
低聚木糖很難被人體內的消化酶分解，幾乎不產生能量，特別適宜肥胖癥，糖尿病，高血壓，動脈硬化患者服用。它具有雙歧因子的作用，其增殖雙歧桿菌的選擇性高于其他功能性低聚糖；它與食物的配合性良好，只需添加少許，即可促進鈣的吸收，達到保健效果；此外，低聚木糖還可以防止便秘。
本發(fā)明將低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖和維生素C按照一定比例配伍在一起后，相互之間具有協(xié)同增效作用，共同起到輔助降低血脂的顯著保健功效。
本發(fā)明所要解決的另一個技術問題是提供一種制備本發(fā)明口服液的方法。
本發(fā)明所要解決的另一個技術問題是通過以下技術方案來實現(xiàn)的一種制備本發(fā)明口服液的方法，包括以下步驟(1)按下述重量稱取各組分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，幾丁聚糖1-4g和維生素C0.1-0.5g；(2)將純凈水加熱到60-70℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，直至全部溶解；
(3)將步驟(2)所得到的溶液在80-90℃溫度下加熱10-20分鐘，冷卻至室溫，備用；(4)將維生素C用純凈水溶解后，加入到步驟(3)所制備的溶液中，攪拌均勻，補加純凈水至100ml，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，即得。
上述制備方法中，步驟(2)中優(yōu)選將純凈水加熱到65℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖；步驟(3)中優(yōu)選將步驟(2)所得到的溶液在85℃溫度下加熱15分鐘。
更優(yōu)選的，一種制備本發(fā)明口服液的方法，包括以下步驟(1)按下述重量稱取各組分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，幾丁聚糖1-4g和維生素C0.1-0.5g，麥芽糖2-6g，果葡萄漿2-6g，蜂蜜2-4g，檸檬酸0.5-2g，乳酸0.05-0.5g和葡萄柚香精0.05-0.5g；(2)將純凈水加熱到60-70℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，麥芽糖，果葡萄漿，蜂蜜，檸檬酸和乳酸，直至全部溶解；(3)將步驟(2)所得到的溶液在80-90℃溫度下加熱10-20分鐘，冷卻至室溫，備用；(4)將維生素C用純凈水溶解后，加入到步驟(3)所制備的溶液中，攪拌均勻，加入葡萄柚香精，補加純凈水至100ml，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，即得。
上述制備方法中，步驟(2)中優(yōu)選將純凈水加熱到65℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，麥芽糖，果葡萄漿，蜂蜜，檸檬酸和乳酸；步驟(3)中優(yōu)選將步驟(2)所得到的溶液在85℃溫度下加熱15分鐘。
具體實施例方式
以下通過實施例來進一步描述本發(fā)明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的范圍。
實施例1按下述重量稱取各組分低聚木糖6kg，聚葡萄糖4kg，幾丁聚糖2.7kg和維生素C0.3kg，麥芽糖4kg，果葡萄漿4kg，蜂蜜3kg，檸檬酸1kg，乳酸0.1kg，葡萄柚香精0.1kg；將純凈水加熱到65℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，麥芽糖，果葡萄漿，蜂蜜，檸檬酸和乳酸，直至全部溶解，接著在85℃溫度下加熱15分鐘，冷卻至室溫，備用；將維生素C用純凈水溶解后，加入到上述步驟所制備的溶液中，攪拌均勻，加入葡萄柚香精，補加純凈水至溶液的總重量達到100kg，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，分裝(規(guī)格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，幾丁聚糖2.7g和維生素C0.3g，麥芽糖4g，果葡萄漿4g，蜂蜜3g，檸檬酸1g，乳酸0.1g，葡萄柚香精0.1g)。
實施例2按下述重量稱取各組分低聚木糖4kg，聚葡萄糖2kg，幾丁聚糖1kg和維生素C0.1kg，麥芽糖2kg，果葡萄漿2kg，蜂蜜2kg，檸檬酸0.5kg，乳酸0.05kg，葡萄柚香精0.05kg；將純凈水加熱到60℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，麥芽糖，果葡萄漿，蜂蜜，檸檬酸和乳酸，直至全部溶解，接著在80℃溫度下加熱20分鐘，冷卻至室溫，備用；將維生素C用純凈水溶解后，加入到上述步驟所制備的溶液中，攪拌均勻，加入葡萄柚香精，補加純凈水至溶液的總重量達到100kg，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，分裝(規(guī)格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖4g，聚葡萄糖2g，幾丁聚糖1g和維生素C0.1g，麥芽糖2g，果葡萄漿2g，蜂蜜2g，檸檬酸0.5g，乳酸0.05g，葡萄柚香精0.05g)。
實施例3按下述重量稱取各組分低聚木糖8kg，聚葡萄糖6kg，幾丁聚糖4kg和維生素C0.5kg，麥芽糖6kg，果葡萄漿6kg，蜂蜜4kg，檸檬酸2kg，乳酸0.5kg，葡萄柚香精0.5kg；將純凈水加熱到75℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，麥芽糖，果葡萄漿，蜂蜜，檸檬酸和乳酸，直至全部溶解，接著在90℃溫度下加熱10分鐘，冷卻至室溫，備用；將維生素C用純凈水溶解后，加入到上述步驟所制備的溶液中，攪拌均勻，加入葡萄柚香精，補加純凈水至溶液的總重量達到100kg，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，分裝(規(guī)格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖8g，聚葡萄糖6g，幾丁聚糖4g，維生素C0.5g，麥芽糖6g，果葡萄漿6g，蜂蜜4g，檸檬酸2g，乳酸0.5g，葡萄柚香精0.5g)。
實施例4按下述重量稱取各組分低聚木糖6kg，聚葡萄糖4kg，幾丁聚糖2.7kg和維生素C0.3kg；將純凈水加熱到60℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，直至全部溶解，接著在85℃溫度下加熱15分鐘，冷卻至室溫，備用；將維生素C用純凈水溶解后，加入到上述步驟所制備的溶液中，攪拌均勻，補加純凈水至溶液的總重量達到100kg，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，分裝(規(guī)格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，幾丁聚糖2.7g和維生素C0.3g)。
實施例5按下述重量稱取各組分低聚木糖4kg，聚葡萄糖2kg，幾丁聚糖1kg和維生素C0.1kg；將純凈水加熱到65℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，直至全部溶解，接著在85℃溫度下加熱15分鐘，冷卻至室溫，備用；將維生素C用純凈水溶解后，加入到上述步驟所制備的溶液中，攪拌均勻，補加純凈水至溶液的總重量達到100kg，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，分裝(規(guī)格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖4g，聚葡萄糖2g，幾丁聚糖1g、維生素C0.1g)。
實施例6按下述重量稱取各組分低聚木糖8kg，聚葡萄糖6kg，幾丁聚糖4kg、維生素C0.5kg；將純凈水加熱到65℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖，幾丁聚糖，直至全部溶解，接著在85℃溫度下加熱15分鐘，冷卻至室溫，備用；將維生素C用純凈水溶解后，加入到上述步驟所制備的溶液中，攪拌均勻，補加純凈水至溶液的總重量達到100kg，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，分裝(規(guī)格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖8g，聚葡萄糖6g，幾丁聚糖4g和維生素C0.5g)。
試驗例1本發(fā)明口服液毒理學試驗1試驗材料1.1供試樣品本發(fā)明實施例1-6所制備的口服液。人體口服推薦劑量為50mL/次×1次/天，以每人60kg體重計算，折合劑量0.833mL/kg/天。取送檢的4.2倍濃縮液(比重1.2683g/mL)備用。
1.2實驗動物及環(huán)境湖南農業(yè)大學動物科技學院實驗動物養(yǎng)殖場提供的清潔級昆明種小鼠和SD大鼠，實驗動物生產許可證號為SCXK(湘)2003-0003。實驗動物使用許可證號為SYXK(湘)2003-0002。實驗期間動物房環(huán)境溫度為21℃-24℃，濕度56％-58％。
1.3急性經口毒性試驗采用最大耐受理試驗。選用體重為18g-22g的健康昆明種小鼠20只，雌雄各半。取本發(fā)明口服液4.2倍濃縮液(比重1.2683g/mL)給小鼠按20mL/kg.bw體積一次性經口灌胃，劑量達25366mg/kg.bw。灌胃前禁食16小時。灌胃后連續(xù)觀察兩周，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。試驗結果見表1。
表1本發(fā)明口服液對小鼠的急性經口毒性試驗結果

1.4Ames試驗采用經鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進行試驗。五個試驗劑量分別為5000、1000、200、40、8ug/皿，同時設自發(fā)回變、溶劑對照(蒸餾水)和陽性突變劑對照。樣品配制時，取1.49mL本發(fā)明口服液4.2倍濃縮液(含固形物1.25g)加蒸餾水定容至25mL，混勻，配成5000ug/皿濃度組受試液；從中取5.0mL加蒸餾水定容至25mL，混勻，配成1000ug/皿濃度組受試液；從1000ug/皿濃度組受試液中取5.0mL加蒸餾水定容至25mL，混勻，配成200ug/皿濃度受組試液；依此類推，配成40、8ug/皿濃度組受試液，滅菌后備用。試驗采用多氯聯(lián)苯(PCB)誘導的大鼠肝微粒體酶(S-9)作為體外代謝活化系統(tǒng)。在頂層瓊脂中加入0.1mL試驗菌株增菌液、0.1mL受試液和0.5ml S-9混合液(當需要代謝活化時)，混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。37℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)每皿菌落數(shù)。如果受試動物的回變菌落數(shù)超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上，并有劑量-反應關系者定為陽性。整套試驗在相同試驗條件下重復做兩次。試驗結果見表2和表3。
表2本發(fā)明口服液Ames試驗結果(第一次)

注以上結果為3個平皿的均值±標準差。陽性對照TA97+S9、TA98+S9、TA100+S9采用2-AF(劑量10.0μg/皿)TA97-S9、TA98-S9采用9-芴酮(劑量0.2μg/皿)TA100-S9采用NaN3(劑量1.5μg/皿)TA102+S9采用1，8-二羥蒽醌(劑量50.0μg/皿)TA102-S9采用MMC(劑量0.5μg/皿)，表3同。
表3本發(fā)明口服液Ames試驗結果(第二次)

由表2、3可見，對TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗菌株，加與不加S9，樣品各劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，亦無劑量一反應關系，提示受試物為誘變陰性。
1.5小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗采用間隔24小時兩次經口灌胃法。取體重為25-30g的健康昆明種小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。以40mg/kg·bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對照，蒸餾水為陰性對照。試驗組3個劑量分別為10000、5000、2500mg/kg·bw，試驗時分別取本發(fā)明口服液4.2倍濃縮液25.00g、12.50g、6.25g加蒸餾水定容50mL，環(huán)磷酰胺陽性對照取100mg環(huán)磷酰胺加蒸餾水定容至50mL，給小鼠按0.20mL/10g·bw體積間隔24小時灌胃2次。末次給樣后6小時頸椎脫臼處死動物，取胸骨骨髓用小牛血清稀釋涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光學顯微鏡下，每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞(PCE)，微核發(fā)生率以含微核的PCE千分率計，按X2檢驗統(tǒng)計處理。計數(shù)200個嗜多染紅細胞，計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例(PCE/NCE)。
試驗結果見表4，經x2檢驗，樣品各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)，而各劑量組和陰性對照組微核率顯著低于環(huán)磷酰胺組(P＞0.01)。各組PCE/NCE比值均在正常范圍內。提示樣品對小鼠骨髓細胞未見損傷作用。
表4本發(fā)明口服液對小鼠骨髓微核發(fā)生率的影響

1.6小鼠精子畸形試驗取體重25g-35g的雄性昆明種小鼠25只，隨機分為5組，每組5只。以40mg/kg·bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對照，蒸餾水為陰性對照。試驗組三個劑量分別為10000mg/kg·bw、5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，試驗時分別取本發(fā)明口服液4.2倍濃縮液25.00g、12.50g、6.25g加蒸餾水定容至50mL，環(huán)磷酰胺陽性對照取100mg環(huán)磷酰胺加蒸餾水定容到50mL，給小鼠按0.20mL/10g·bw體積灌胃，每次邊攪邊灌。每日一次，連續(xù)5天，于末次灌胃后的第30天處死動物，取兩側副睪，置于放有2mL生理鹽水的平皿中，用眼科剪將副睪縱向剪1-2刀，靜置3～5min，輕輕擺動，用四層擦鏡紙過濾，吸濾液涂片，干燥后甲醇固定5min，2％伊紅染色1h，用水輕沖、干燥。每只動物計數(shù)1000個結構完整的精子，計數(shù)畸變精子發(fā)生率。按x2檢驗統(tǒng)計處理。
試驗結果見表5。經x2檢驗，樣品各劑量組精子畸形率與陰性對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)，而各劑量組和陰性對照組精子畸形率顯著低于環(huán)磷酰胺組(P＜0.01)。華雨牌清雪清口服液對小鼠精子不產生畸變作用。
表5本發(fā)明口服液對小鼠精子畸形發(fā)生率的影響

1.7 30天喂養(yǎng)試驗1.7.1劑量組選擇與受試物給予方式SD大鼠80只，雌雄各半，雄鼠體重72.3±5.5g，雄鼠體重73.4±5.5g。隨機分為四組，即對照組及三個受試物組，每組20只，雌雄各半。本發(fā)明口服液低、中、高劑量分別為41.67mL/Kg·bw、62.50mL/Kg·bw、83.33mL/Kg·bw，分別相當于人體推薦劑量的50、75、100倍。低、中劑量受試液配制時分別取本發(fā)明口服液4.2倍濃縮液99.2mL、148.8mL加蒸餾水定容至200ml，給大鼠按2.0mL/100g·bw體積灌胃，高劑量組大鼠采用4.2倍濃縮液直接給大鼠按2.0mL/100g·bw體積灌胃，對照組灌胃給予等體積蒸餾水，每日一次，連續(xù)30天。
1.7.2主要儀器與試劑主要儀器雅培CD3700全自動血球計數(shù)儀，OLYMPUSAU400全自動生化分析儀，TD5A-WS臺式低速離心機等。主要試劑總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)購自上海復星長征醫(yī)學科學有限公司肌酐(Cr)購自上海申能一德賽診斷技術有限公司；膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)購自浙江東甌生物工程有限公司。
1.7.3實驗方法實驗期間所有動物給予普通飼料，單籠飼養(yǎng)，自由攝食飲水，每天觀察動物的活動和生長情況，每周加食2次，記錄給食量和剩食量，每周稱一次體重，計算每周進食量和食物利用率，實驗末計算總食物利用率。實驗末期，禁食14小時后，每只大鼠摘眼球采集兩份血抗凝血用雅培CD3700全自動血球計數(shù)儀測定血紅蛋白(Hb)、紅細胞壓積(HCT)，進行紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)計數(shù)及WBC分類；非抗凝血靜置后分離血清，用OLYMPUSAU400全自動生化分儀測定TP、ALB、ALT、Cr、BUN、AST、CHOL、TG和GLU。采血后頸椎脫臼處死動物作大體解剖，稱肝、腎、脾、睪丸重量，計算臟/體比值，取肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢作病理切片檢查。在對各劑量組動物作大體檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變和生化指標改變時，只進行最高劑量組及對照組動物主要臟器的組織病理學檢查，如發(fā)現(xiàn)病變則對較低劑量組相應器官及組織進行檢查。
1.7.4實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計用Excel、Spss、Instat軟件進行數(shù)據(jù)轉化和統(tǒng)計分析。用Spss軟件分析時，先對數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進行多個劑量組與一個對照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對原始數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D換，滿足方差齊性檢驗后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉換后仍未達到方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhan’esT2檢驗進行兩兩比較。30天喂養(yǎng)期間，各動物生長發(fā)育良好，無異常行為和中毒癥狀，無死亡。試驗結果見表6-20。
1.7.5實驗結果1.7.5.1本發(fā)明口服液對大鼠體重及體重增長的影響表6本發(fā)明口服液對大鼠體重及體重增長的影響

經方差齊性校檢驗，雌、雄鼠各時點體重及試驗期間體重增長值方差齊，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計，結果未見各劑量組與對照組之間有顯著性差異(P＞0.05)。
1.7.5.2本發(fā)明口服液對大鼠進食量及食物利用率的影響試驗結果見表7。經方差齊性檢驗，雄鼠第2、4周進食量、雌雄鼠第1周食物利用率方差不齊，采用秩和檢驗，雌、雄鼠其他周及總進食量、其他周及總食物利用率方差齊，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計，結果顯示各劑量組與對照之間各周及總進食量、食物利用率無顯著性差異(P＞0.05)。
表7本發(fā)明口服液對大鼠進食量的影響

1.7.5.3本發(fā)明口服液對大鼠食物利用率的影響表8本發(fā)明口服液對大鼠食物利用率的影響

1.7.5.4本發(fā)明口服液對大鼠血液學指標的影響試驗結果見表9-10。方差齊性檢驗示雌鼠血紅蛋白、紅細胞壓積方差不齊，采用秩和檢驗，各組雌雄大鼠白細胞、紅細胞、血小板總數(shù)、白細胞分類方差齊，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計，結果顯示各劑量組與對照組上述各項指標無顯著性差異(P＞0.05)。
表9本發(fā)明口服液30天喂養(yǎng)試驗血液學檢查結果

表10本發(fā)明口服液30天喂養(yǎng)試驗對白細胞分類的影響

1.7.5.5本發(fā)明口服液對大鼠生化指標的影響試驗結果見表11和表12。方差齊性檢驗示雌雄鼠各項生化指標均方差齊，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計處理，結果顯示各劑量組與對照組之間各項生化指標無顯著性差異(P＞0.05)。
表11本發(fā)明口服液30天喂養(yǎng)試驗末期生化檢驗結果

表12本發(fā)明口服液30天喂養(yǎng)試驗末期生化檢驗結果

1.7.5.6本發(fā)明口服液對大鼠臟器絕對重量和臟器/體重比值的影響試驗結果見表13-14。經方差齊性檢驗，各組雌雄大鼠肝臟、脾臟、腎臟、雄鼠睪丸絕對重量和及肝/體、脾/體、腎/體比值及雄鼠的睪丸/體重比值方差齊，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計分析，結果顯示各劑量組與相應對照組之間各臟器絕對重量及臟體比值較無顯著性差異(P＞0.05)。
表13本發(fā)明口服液對大鼠臟器絕對重量的影響

表14本發(fā)明口服液對大鼠臟體比的影響

1.7.5.7大體解剖及組織學檢查結果在對各劑量組動物作大體解剖檢查時，未發(fā)現(xiàn)明顯病變，只進行高劑量組及對照組動物主要臟器的組織病理學檢查。組織病理切片檢查結果見表15-21。
表15肝臟組織病理學檢查結果

注1/10表示10只動物中1只動物出現(xiàn)病變(以下同)，以上病變出現(xiàn)在同一只大鼠表16脾臟組織病理學檢查結果

表17腎臟組織病理學檢查結果

表18胃組織病理學檢查結果

表19十二指腸組織病理學檢查結果

表20雌鼠卵巢組織病理學檢查結果

表21雄鼠睪丸組織病理學檢查結果

3 試驗結論3.1 急性經口毒性試驗以25366mg/kg·bw劑量的本發(fā)明口服液4.2倍濃縮液給兩種性別的昆明種小鼠灌胃后未見明顯中毒癥狀，觀察14天無死亡。本發(fā)明口服液對雌、雄昆明種小鼠的急性經口毒性試驗最大耐受劑量(MTD)大于25366mg/kg·bw(見表1)。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》(2003年版)中的急性毒性分級標準，屬無毒物。
3.2 遺傳毒性試驗三項遺傳毒性試驗(Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗及小鼠精子畸形試驗)結果均為陰性。
3.3 30天喂養(yǎng)試驗以41.67mL/kg·bw、62.50mL/kg·bw、83.33mL/kg·bw劑量(分別相當于人體推薦量的50、75、100倍)的本發(fā)明口服液給大鼠經口灌胃30天，實驗期間，各組動物生長發(fā)育良好，樣品各劑量對大鼠體重、體重增長、平均進食量及食物利用率無顯著影響(P＞0.05)。實驗末，各劑量組血液學指標(血紅蛋白、紅細胞總數(shù)、紅細胞壓積、血小板總數(shù)，白細胞總數(shù)及分類)、血生化指標(血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總蛋白、白蛋白、膽固醇、苷油三酯、尿素氦、肌酐、血糖)、臟體比值(肝/體、脾/體、腎/體比值及雄鼠的睪九/體重比值)與相應對照組比較，無顯著性差異(P＞0.05)。大體解剖和組織病理檢查未見與樣品有關的異常改變。試驗結果說明本發(fā)明口服液30天喂養(yǎng)對大鼠無毒副作用。
試驗例2本發(fā)明口服液輔助降血脂作用動物實驗1、材料和方法11受試樣品本發(fā)明實施例1-6所制備的口服液。人體口服推薦劑量為50mL/次×1次/天，以每人60kg體重計算，折合劑量0.833mL/kg/天。
1.2實驗動物湖南農業(yè)大學動物科技學院實驗動物養(yǎng)殖場(實驗動物生產許可證號為SCXK(湘)2003-0003)提供的清潔級雄性SD大鼠40只，體重187.7±28.9g。實驗期間環(huán)境溫度為21℃-24℃，濕度56％～58％，實驗動物使用許可證號為SYXK(湘)2003-0002。
1.3劑量選擇試驗分四組高脂對照組和低、中、高劑量組。低、中、高劑量分別為4.17、8.33、16.66mL/kg.bw(分別相當于人體推薦量的5、10、20倍)，試驗時分別取本發(fā)明口服液原液41.7mL、83.3mL、166.6mL加蒸餾水定容至200mL，配制成相應濃度的受試液，按2.0mL/100g.bw體積給大鼠灌胃，每日一次，連續(xù)30天。對照組灌胃給予等體積蒸餾水。
1.4主要儀器與試劑OLYMPUSAU400全自動生化分析儀；膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司提供。
1.5高脂飼料基礎飼料78.8％，膽固醇1％，蛋黃粉10％，豬油10％，膽鹽0.2％。
1.6實驗方法以基礎飼料喂飼大鼠一周后，禁食14小時，取尾血，用OLYMPUSAU400全自動生化分析儀測定血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，根據(jù)TC水平兼頤TG將動物隨機分為4組高脂對照組和三個受試物組。自正式試驗開始，各組動物換用高脂飼料，受試物組按1.3中劑量設計灌胃給予不同劑量的本發(fā)明口服液，高脂對照組灌胃給予同體積的蒸餾水，連續(xù)30天后，禁食14小時，拔眼球采血測定各項血脂指標。
1.7效據(jù)處理用Excel、Spss軟件進行數(shù)據(jù)轉換和統(tǒng)計分析。用Spss軟件進行統(tǒng)計分析時，先對數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進行多個劑量組與一個對照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊，則對原始數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D換，滿足方差齊性檢驗后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計若變量轉換后仍未達到方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane′sT2檢驗進行兩兩比較。試驗前后血清總膽固醇。甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醉比較采用配對比較的t檢驗。
1.8結果判定1.8.1輔助降血脂功能結果判定在血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇檢測中，血清總膽固醇、甘油三酯二項指標陽性，可判定該受試樣品輔助降血脂功能動物實驗結果陽性。
1.8.2輔助降低甘油三酯結果判定①甘油三酯二個劑量組結果陽性；②甘油三酯一個劑量組結果陽性，同時高密度脂蛋白膽固醇顯著高于對照組，可判定該受試樣品輔助降低甘油三酯動物實驗結果陽性。
1.8.3輔助降低血清總膽固醇結果判定①血清總膽固醇二個劑量組結果陽性②血清膽固醇一個劑量組結果陽性，同時高密度脂蛋白膽固醇顯著高于對照組，可判定該受試樣品輔助降低血清總膽固醇動物實驗結果陽性。
2試驗結果2.1本發(fā)明口服液對大鼠體重的影響試驗期間，各組動物生長正常。各劑量組動物初始體重、中期體重、終末體重及增重與高脂對照組比較，無顯著性差異(P＞0.05，見表22)。
表22本發(fā)明口服液對大鼠體重的影響

2.2對大鼠血清TC、TG、HDL-C的影響方差齊性檢驗示各組動物試驗前后血清TC、TG、HDL-C方差齊，配對t檢驗顯示高脂對照組動物試驗后血清TC、TG顯著高于試驗前(均P＝0.001)，提示造模成功.以不同劑量的本發(fā)明口服液給大鼠灌胃30天，與高脂對照組相比，4.17ml/kg.bw劑量可顯著降低飼高脂飼料大鼠血清TC、TG水平(P＜0.05)(表23、24)；4.17、8.33、16.66mL/kg.bw，劑量組血清TC分別下降24.3％、14.2％和12.7％(表23)，TG分別下降41.2％、31.1％和22.0％(表25).樣品對血清HDL-C水平無顯著影響；(P＞0.05)(表23-25)。
表23實驗前后各組血清TC水平

表24實驗前后各組血清TC水平

表25實驗前后各組血清HDL-C水平

3小結以4.17、8.33、16.66mL/kg.bw劑量的受試樣品給大鼠灌胃30天，與高脂對照組比較，4.17mL/kg.bw劑量可顯著降低飼高脂飼料大鼠血清TC、TG水平(P＜0.05＝，各劑量對大鼠血清HDL-C水平無顯著影響(P＞0.05)。提示受試樣品輔助降低血脂動物實驗結果陽性。
采用自身對照及組間對照法，選擇符合試驗條件的志愿受試者服用受試樣品45天后，結果表明服用受試樣品試食組自身配對比較，試驗組試食后CHOL、TG與試食前比較，差異有顯著意義(P＜0.05或P＜0.01>，試食后試食組CHOL、TG與對照組比較，差異有顯著意義(P＜0.05或P＜0.01>。且試食后試食組HDL-C與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。實驗結果表明受試樣品具有良好的輔助降血脂功能。
試驗例3本發(fā)明口服液降血脂作用人體試食實驗1材料和方法1.1樣品1.1.1供試樣品本發(fā)明實施例所制備的口服液(50.0mL/支)。
1.1.2對照樣品安慰劑(由蒸餾水所制備而成)(50.0mL/支)。
1.2受試者選擇1.2.1納入標準，受試者選自湖南省長沙市岳麓區(qū)咸家湖社區(qū)，性別不限。年齡18-65歲，身體健康狀況良好，無明顯腦、心、肝、肺、腎、血液疾患，無長期服藥史，志愿受試保證配合。
1.2.2受試者排除標準妊娠或哺乳期婦女，對保健食品過敏者；合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重疾病患者短期內服用與受試功能有關的物品，影響到對結果判斷者；不符合納入標準，未按規(guī)定食用受試樣品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判定者。
1.3實驗設計與分組采用自身和組間兩種對照設計。按受試者血脂水平隨機分為供試樣品試食組和安慰劑對照組，盡可能考慮影響結果的主要因素如年齡、性別等，進行均衡性檢驗，以保證組間的可比性。按雙盲法進行試食試驗。
1.4試驗方法受試者于2004年10月16日第一次采血測血脂，血脂異常者于2005年01月18日第二次采血測血脂，兩次均異常者納入試驗，試驗于2005年01月20日開始，受試者每天服用供試樣品1次，每次1支，連續(xù)服用45天。試驗期間不改變原來的飲食習慣，正常飲食。
2.觀察指標各項觀察指標于試食試驗開始及結束時各測定一次。
2.1安全性指標2.1.1一般體格檢查試驗前詳細詢問并了解受試者的精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等情況。
2.1.2血常規(guī)紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)及分類、血紅蛋白含量測定等。
2.1.3尿常規(guī)pH值、白細胞、尿糖等。
2.1.4糞便常規(guī)。
2.1.5腹部B超、心電圖、X線胸部透視檢查。
2.1.6肝功能檢查血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)測定。
2.1.7腎功能檢查血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)測定。
2.2功效指標膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)3.結果判定3.1CHOL降低＞10％；TG降低＞15％；HDLC上升＞0.104mmol/L；各功效觀察指標試驗前后自身比較和試食后組間比較均有統(tǒng)計學意義，方可判定該指標陽性；3.2血清膽固醇、甘油三脂二項指標陽性，高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于對照組，可判定受試樣品具有輔助降血脂功能作用；血清膽固醇、甘油三脂二項指標中一項陽性，高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于對照組，可判定受試樣品具有輔助降低血清膽固醇或輔助降低甘油三脂作用。
4.統(tǒng)計學處理資料結果用均數(shù)±標準差表示，自身配對資料采用配對t檢驗，試驗組和對照組之間在方差齊性的前提下，均數(shù)比較采用成組t檢驗，否則進行變量轉化后滿足方差齊性后采用t檢驗，如果方差仍然不齊，采用秩和檢驗。
5.結果雙盲法觀察結束揭曉；服食2號者為華雨牌清雪清口服液，服食1號者為安慰劑。
5.1安全性觀察5.1.1一般情況試食組54例，對照組54例。經過45天試驗后，試驗組有4例受試者因無法判斷療效被篩除，對照組有2例受試者因間斷服用受試品被篩除。最后有效試驗人群試驗組50例，對照組52例。試食前后，受試者精神狀況、睡眠狀況、大小便狀況未見異常；試食前后尿常規(guī)、大便常規(guī)均未見異常，試食組男/女為26/24，年齡40.52±8.76；對照組男/女為25/27，年齡為41.12±8.36。
5.1.2腹部B超、心電圖、X線胸部透視檢測均在正常范圍。
5.1.3試食試驗前后血常規(guī)指標變化情況試食樣品前、后試食組及對照組血常規(guī)變化值均在正常范圍內(表26)。
表26試食試驗前后血常規(guī)指標變化情況

5.1.4試食試驗前后肝功能指標變化情況試食樣品前、后試食組及對照組血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)均在正常值范圍內(表27)。
表27試食試驗前后肝功能指標變化情況

5.1.5試食試驗前后腎功能指標變化情況試食樣品前、后試食組及對照組血清肌酐(Cr)、血糖(GLU)、血清尿素氮(BUN)均在正常值范圍內(表28)。
表28試食試驗前后腎功能指標變化情況

5.1.6功效觀察試食試驗前后血清CHOL、TG、HDL-C水平變化情況見表29、表30和表31。試驗前，對照組和試食組血清CHOL、TG、HDL-C水平比較，無統(tǒng)計學意義，提示兩組之間具有可比性。試驗后，自身比較，試食組試食后CHOL、TG與試食前比較，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01>，對照組試食后CHOL、TG與試食前比較差異無顯著性(P＞0.05)。試食后試食組CHOL、TG與對照組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01>。且試驗后試食組HDL-C與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。提示供試樣品具有較好的輔助降血脂功能。
表29試食試驗前血清CHOL、TG、HDL-C水平情況

表30試食試驗前后血清CHOL、TG、HDL-C水平變化情況

注*與試食前比較P＜0.05**與試食前比較P＜0.01#與對照組比較P＜0.05##與對照組比較P＜0.01
表31試食前后血清CHOL、TG、HDL-C變化率

6.小結采用自身對照及組間對照法，選擇符合試驗條件的志愿受試者服用供試物45天后，結果表明服用供試樣品試食組自身配對比較，試驗組試食后CHOL、TG與試食前比較，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01>，試食后試食組CHOL、TG與對照組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01>。且試食后試食組HDL-C與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。試驗結果表明，本發(fā)明口服液具有確切的降血脂功效。
權利要求
1.一種降血脂口服液，其特征在于每100毫升該口服液含有以下重量的各組分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，幾丁聚糖1-4g和維生素C 0.1-0.5g。
2.按照權利要求1的降血脂口服液，其特征在于每100毫升該口服液含有以下重量的各組分低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，幾丁聚糖2.7g，維生素C 0.3g。
3.按照權利要求1的降血脂口服液，其特征在于每100毫升該口服液還含有以下重量的各組分麥芽糖2-6g，果葡萄漿2-6g，蜂蜜2-4g，檸檬酸0.5-2g，乳酸0.05-0.5g和葡萄柚香精0.05-0.5g。
4.按照權利要求3的降血脂口服液，其特征在于每100毫升該口服液含有以下重量的各組分麥芽糖4g，果葡萄漿4g，蜂蜜3g，檸檬酸1g，乳酸0.1g，葡萄柚香精0.1g。
5.一種制備權利要求1降血脂口服液的方法，包括以下步驟(1)按下述重量稱取各組分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，幾丁聚糖1-4g和維生素C 0.1-0.5g；(2)將純凈水加熱到60-70℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖和幾丁聚糖，直至全部溶解；(3)將步驟(2)所得到的溶液在80-90℃溫度下加熱10-20分鐘，冷卻至室溫，備用；(4)將維生素C用純凈水溶解后，加入到步驟(3)所制備的溶液中，攪拌均勻，補加純凈水至100ml，攪拌均勻，過濾，濾液灌裝、滅菌，即得。
6.按照權利要求5的方法，其特征在于步驟(2)中將純凈水加熱到65℃后，邊攪拌邊加入低聚木糖，聚葡萄糖和幾丁聚糖。
7.按照權利要求5的方法，其特征在于步驟(3)中將步驟(2)所得到的溶液在85℃溫度下加熱15分鐘，再冷卻至室溫，備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種無毒副作用、能夠有效降低血脂且口感和風味俱佳的口服液及其制備方法。本發(fā)明口服液每100毫升含有以下重量的各組分低聚木糖4－8g，聚葡萄糖2－6g，幾丁聚糖1－4g和維生素C 0.1－0.5g。動物和人體試食實驗表明，本發(fā)明口服液無毒副作用、降血脂功效顯著。
文檔編號A61K9/10GK1985845SQ20061017047
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月30日 優(yōu)先權日2006年12月30日
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