專利名稱：姜黃素用于制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及姜黃素用于制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用，具體涉及姜黃素用于制備治療卵巢癌等惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
化療是治療腫瘤的主要手段之一，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的多藥耐藥(multidrug-resistance，MDR)已成為當(dāng)前影響腫瘤化學(xué)治療療效的主要障礙，有關(guān)資料統(tǒng)計，90％以上腫瘤患者死因或多或少都與耐藥有關(guān)，因此尋找低毒有效的MDR逆轉(zhuǎn)劑是提高化療療效的一個重要方法。目前已有多種多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑處于基礎(chǔ)和臨床試驗階段。腫瘤細(xì)胞耐藥的原因是復(fù)雜的，但其多藥耐藥基因過度表達產(chǎn)生的耐藥蛋白是最主要的原因。其中P-gp蛋白是最常見的一種，它是一種能量依賴性藥物轉(zhuǎn)出泵，可使化療藥物從癌細(xì)胞內(nèi)泵出細(xì)胞外，從而使藥物在細(xì)胞內(nèi)積蓄濃度下降，藥物對細(xì)胞毒性降低。臨床上遇到這種情況通常以更換治療方案為對策，但因為多數(shù)患者是多藥耐藥，所以更換方案后往往效果亦不佳，最終導(dǎo)致化療失敗。
研發(fā)新的抗腫瘤藥物是克服耐藥的一個途徑，但難度大、周期長，相比之下尋找更具有現(xiàn)實性。異博定、環(huán)孢霉素A等藥物能增加細(xì)胞內(nèi)藥物的積累而逆轉(zhuǎn)耐藥，但毒副作用很大，很難廣泛用于臨床。因此，尋找高效、低毒、作用靶點廣、逆轉(zhuǎn)作用顯著的腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑刻不容緩。
姜黃素(curcumin)是姜黃、郁金、莪術(shù)的主要成分，是一種多酚性色素，可作為食品添加劑應(yīng)用，毒性非常低。具有利膽、降血脂、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、抗動脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)免疫等多種作用。姜黃素作為惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物，已有其作為制備治療白血病、膀胱癌和口腔上皮癌的的逆轉(zhuǎn)藥物應(yīng)用的報道。但是，姜黃素作為制備治療除以上三種之外的其它惡性腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用，還未見報道。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供姜黃素作為制備治療惡性腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用。
姜黃素作為制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用，所述的耐藥惡性腫瘤包括卵巢癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、肝癌、食道癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、皮膚癌、胰腺癌、惡性淋巴瘤。
其有效成分為姜黃素、去甲氧基姜黃素、二去甲氧基姜黃素或它們的混合物；其有效成分與助溶劑、穩(wěn)定劑及助溶劑構(gòu)成組合物。
所述的助溶劑為吐溫-20或吐溫-80； 穩(wěn)定劑兼助溶劑為β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精； 姜黃素在吐溫-20或吐溫-80中的溶解比例為10mg/1ml～5mg/2ml；姜黃素與β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精的重量比為5.5∶100。
姜黃素作為制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用，具體制備及使用方法，由制備實施例1和制備實施例2給出，其可以按已有的技術(shù)制成口服劑、混懸劑、注射劑、輸液劑。
姜黃素單獨作用或與順鉑等化療藥協(xié)同作用。姜黃素單獨逆轉(zhuǎn)耐藥的用藥的終濃度≥10μg/ml，起效時間≥12小時；姜黃素協(xié)同化療藥物的逆轉(zhuǎn)耐藥的用藥終濃度≥1.0μg/ml，起效時間≥12小時。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(a)與傳統(tǒng)惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物相比，具有安全高效的優(yōu)點，小劑量即可逆轉(zhuǎn)耐藥(見附圖1、2、3)，且未見有任何毒副作用。(b)與化療藥合用可明顯減少化療藥的用藥劑量和縮短化療藥的起效時間，從而明顯降低化療藥的毒副作用，減輕患者由化療帶來的痛苦。(c)藥材來源廣泛、易得，價格低廉。



圖1是未加藥卵巢癌耐藥細(xì)胞掃描電鏡圖。未加本發(fā)明的姜黃素的卵巢癌耐藥細(xì)胞，在高倍鏡下所見細(xì)胞情況。
圖2是加入順鉑及姜黃素后卵巢癌的耐藥細(xì)胞圖。
圖3是加入姜黃素后的卵巢癌耐藥細(xì)胞圖。
通過圖1與圖2的和圖3比較可直觀看出未加本發(fā)明的姜黃素時，細(xì)胞數(shù)目多、排列緊密，形狀飽滿、圓潤、光鏡下觀察透光性好；加入順鉑及姜黃素或單獨加入姜黃素18小時后，細(xì)胞數(shù)目少，排列疏散，形狀不規(guī)則，光鏡下觀察細(xì)胞透光性差，且散布較多的細(xì)胞碎片。
下面提供的實施例用于進一步闡明本發(fā)明。

具體實施例方式 制備實施例1稱取姜黃素(純度≥95％)100mg，加40ml無水乙醇，使其溶解，55℃下，滴入60mL β-環(huán)糊精飽和水溶液(85.0g/l)中，攪拌1h，停止加熱，繼續(xù)攪拌5h，得橙黃色混懸物，室溫靜置12h，過80目篩，50℃烘干得橙黃色藥物粉末，即姜黃素-β-環(huán)糊精包合物。將包合物粉末與0.9％生理鹽水，按質(zhì)量比為3∶1溶解于0.9％生理鹽水(0.9g氯化鈉溶解于100ml蒸餾水)中，所得溶液過濾、殺菌，得到姜黃素的有效藥物組合物。使用時，根據(jù)所需濃度用0.9％生理鹽水適當(dāng)稀釋。
制備實施例2稱取姜黃素(純度≥95％)50mg，加5ml吐溫-80，研磨30min，加2ml無水乙醇及30ml 0.9％生理鹽水，繼續(xù)研磨2小時，得到姜黃素澄清藥液，過濾、除菌，得到姜黃素的有效藥物組合物。使用時，根據(jù)所需濃度用0.9％生理鹽水適當(dāng)稀釋。
應(yīng)用實施例1 取處于對數(shù)生長期的卵巢癌耐藥細(xì)胞CoCl/DDP，以5×104個/ml濃度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。實驗設(shè)5組，1個對照組，4個加藥組，每組設(shè)3個復(fù)孔。對照組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml，0.9％生理鹽水50ml，共200ml加藥組每孔加含細(xì)胞培養(yǎng)液150ml，藥液50ml(其中姜黃素是按照制備方法1制成的稀釋藥液)，共200ml。
置37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)18h后加MTT(噻唑藍)20μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心3500rpm，10min，棄上清，加二甲基亞砜(DMSO)200μl/孔，避光振蕩20min，用酶標(biāo)儀檢測OD515。結(jié)果見表1。
用到的公式如下
2、逆轉(zhuǎn)倍數(shù)＝逆轉(zhuǎn)前IC50/逆轉(zhuǎn)后IC50(半數(shù)抑制濃度) 表1不同處理因素對卵巢癌耐藥細(xì)胞株CoCl/DDP增殖的影響 注*表示藥物組合物藥液中的姜黃素 結(jié)果分析 通過表1證明了姜黃素協(xié)同順鉑抑制卵巢癌耐藥細(xì)胞增殖的作用，當(dāng)姜黃素的終濃度為5μg/ml時，基本達到了IC50，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約為6倍，其逆轉(zhuǎn)效果與傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)劑異博定相比基本相同，而姜黃素的用藥劑量僅為異博定的1/4。
應(yīng)用實施例2 取處于對數(shù)生長期的卵巢癌耐藥細(xì)胞CoCl/DDP，以5×104個/ml濃度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。實驗設(shè)4組，1個對照組，3個加藥組，每組設(shè)3個復(fù)孔。對照組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml、0.9％生理鹽水50ml，共200ml；加藥組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml，藥液50ml(其中的姜黃素是按照制備方法1制成的稀釋藥液)，共200ml。
置37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)18h后加MTT 20μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心3500rpm、10min，棄上清，加二甲基亞砜(DMSO)200μl/孔，避光振蕩30min，用酶標(biāo)儀檢測OD515。用到的公式同實施例1，結(jié)果見表2 表2不同處理因素卵巢癌耐藥細(xì)胞株CoCl/DDP的影響 注*表示藥物組合物藥液中的姜黃素 結(jié)果分析 通過表2證明了姜黃素單獨抑制卵巢癌耐藥細(xì)胞增殖的作用，當(dāng)姜黃素的終濃度為20μg/ml時，基本達到了IC50，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約為6倍，其抑制作用與單獨使用大劑量順鉑基本相同，而姜黃素的用藥量僅為順鉑的1/3。
應(yīng)用實施例3 取處于對數(shù)生長期的卵巢癌耐藥細(xì)胞CoCl/DDP，以5×104個/ml濃度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。實驗設(shè)5組，1個對照組，4個加藥組，每組設(shè)3個復(fù)孔。對照組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml、0.9％生理鹽水50ml，共200ml；加藥組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml、按照制備方法2制成的稀釋藥液25ml，順鉑藥液25ml，共200ml。
置37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)18h后加MTT 2μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心3500rpm、10min，棄上清，加二甲基亞砜(DMSO)20μl/孔，避光振蕩20min，用酶標(biāo)儀檢測OD515。用到的公式同實施例1，結(jié)果見表3 表3姜黃素增加卵巢癌耐藥細(xì)胞CoCl/DDP對化療藥敏感性的研究 注*表示藥物組合物藥液中的姜黃素 結(jié)果分析； 通過表3可以看出加入姜黃素后，盡管順鉑的濃度在逐漸下降，但抑制率基本都穩(wěn)定在50％左右，與單獨大劑量使用順鉑效果一致。證明了姜黃素能增加卵巢癌耐藥細(xì)胞對化療藥敏感性，從而大大減少了化療藥的用量，降低了化療藥帶來的毒副作用。
應(yīng)用實施例4 取處于對數(shù)生長期的卵巢癌耐藥細(xì)胞CoCl/DDP，以5×104個/ml濃度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，實驗設(shè)5組，1個對照組，4個加藥組，每組設(shè)3個復(fù)孔。對照組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml、0.9％生理鹽水50ml，共200ml；加藥組每孔加含細(xì)胞的培養(yǎng)液150ml，藥液50ml(其中的姜黃素有效藥液按照按照制備方法2制成)，共200ml。
置37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)，分別于6、12、18小時后加MTT 20μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，離心3500rpm、10min，棄上清，加二甲基亞砜(DMSO)200μl/孔，避光振蕩30min，至紫藍色沉淀完全溶解，用酶標(biāo)儀檢測OD515。用到的公式同實施例1，結(jié)果見表4 表4加藥時間對卵巢癌耐藥細(xì)胞株CoCl/DDP增殖的影響 注*表示藥物組合物藥液中的姜黃素 結(jié)果分析 通過表4可以看出單獨使用小劑量化療藥時，加藥時間對細(xì)胞增殖沒有影響；加入逆轉(zhuǎn)劑12小時后，細(xì)胞增殖受到明顯抑制。證明逆轉(zhuǎn)劑可使小劑量化療藥在短期內(nèi)起效，從而提高藥效，且以姜黃素作為逆轉(zhuǎn)劑的抑制作用與傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)劑異博定相當(dāng)。
權(quán)利要求
1、姜黃素用于制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述的耐藥惡性腫瘤為卵巢癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、肝癌、食道癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、皮膚癌、胰腺癌、惡性淋巴瘤。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的姜黃素用于制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用，其特征在于，其有效成分為姜黃素、去甲氧基姜黃素、二去甲氧基姜黃素或它們的混合物；其有效成分與助溶劑、穩(wěn)定劑及助溶劑構(gòu)成組合物；
所述的助溶劑為吐溫-20或吐溫-80；
穩(wěn)定劑兼助溶劑為β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精；
姜黃素在吐溫-20或吐溫-80中的溶解比例為10mg/1ml～5mg/2ml；姜黃素與β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精的重量比為5.5∶100。
全文摘要
本發(fā)明涉及姜黃素用于制備治療惡性腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)藥物的應(yīng)用。所述的耐藥惡性腫瘤為卵巢癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、肝癌、食道癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、皮膚癌、胰腺癌、惡性淋巴瘤。其有效成分為姜黃素、去甲氧基姜黃素、二去甲氧基姜黃素或它們的混合物；其有效成分與助溶劑、穩(wěn)定劑及助溶劑構(gòu)成組合物；姜黃素單獨作用或與順鉑等化療藥協(xié)同作用于卵巢癌耐藥細(xì)胞。該藥物克服了以往對耐藥性惡性腫瘤的治療方法用藥量大，治療方案復(fù)雜，或使用傳統(tǒng)毒副作用大的逆轉(zhuǎn)劑等的缺陷。通過減少化療藥的用藥劑量及縮短藥物的起效時間，可降低化療藥的毒副作用；與傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)劑相比，具有安全、高效的優(yōu)點，小劑量即可逆轉(zhuǎn)耐藥。
文檔編號A61K47/40GK1973834SQ20061016326
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月15日
發(fā)明者劉志強, 關(guān)松磊, 宋鳳瑞, 劉忠英, 胡秀麗 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所