專利名稱：選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑及其合成方法和醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類(lèi)以雌激素受體為靶標(biāo)的化合物及其合成方法和醫(yī)藥用途。更具體而言，本發(fā)明涉及以預(yù)防和治療老年癡呆、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等與雌激素受體相關(guān)的疾病以及與年齡相關(guān)的神經(jīng)退化疾病為目的而開(kāi)發(fā)的選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑及其合成發(fā)法和其醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：
雌激素受體(estrogen receptor，ER)分為ERα和ERβ兩種亞型，它們?cè)贒NA結(jié)合區(qū)(DBD)有96％的同源性，因此這兩種亞型對(duì)DNA有相似的親和力；而在配體結(jié)合區(qū)(LBD)，兩種亞型只有60％的同源性，提示它們?cè)趨f(xié)同因子的識(shí)別和響應(yīng)上可能存在很大差別；在N末端的A/B區(qū)，兩種亞型只顯示了18％的同源性，而且ERβ的A/B區(qū)比ERα的A/B區(qū)短(分別為530和595個(gè)氨基酸殘基)；兩種亞型的組織分布也不相同，ERα在子宮、卵巢、睪丸、垂體、腎、附睪和腎上腺中有高度或中度表達(dá)，ERβ則主要分布在前列腺、卵巢、肺、膀胱、腦和血管中。ER兩種亞型存在的這些不同使得研究出只對(duì)某一種ER亞型有激動(dòng)作用而對(duì)另一亞型無(wú)作用或有拮抗作用的藥物成為可能，所以選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑(SERM)的研究也就應(yīng)運(yùn)而生。所謂“選擇性”是指SERM在某些組織(如骨、肝、心血管系統(tǒng))中表現(xiàn)為激動(dòng)劑，而在另外一些組織(如腦和乳腺)中表現(xiàn)為拮抗劑，且在子宮中可以是激動(dòng)劑，也可以是拮抗劑。SERM類(lèi)藥物主要用于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松、乳腺癌以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病。因此尋求有效的SERM是許多藥物化學(xué)家的興趣所在。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明的另一目的還提供該類(lèi)調(diào)節(jié)劑的合成方法。
本發(fā)明的再一目的是提供了該類(lèi)選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑在制備治療和/或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂及與年齡相關(guān)的神經(jīng)退化疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物具有如下的母體結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)通式如下

或
其中(I)和(II)中的R1為H、鹵素或硝基； (III)中的R1為H時(shí)，R2為H、C1～C12烷基、環(huán)烷基、?；蚧酋；?；或R1為鹵素或胺基時(shí)，R2為H。
其中優(yōu)選的化合物是 此 外還合成了以下四個(gè)類(lèi)似物IV1～I(xiàn)V4。

IV-1 IV-2 IV-3 IV-4 本發(fā)明還提供上述通式化合物(I)、(II)、(III)、(IV)的制備方法，包括如下步驟 一.通式化合物的制備 路線1
反應(yīng)條件(a)堿(b)還原；(c)催化氫化；(d)N-烷基化； (e)N-酰基化；(f)芳構(gòu)化；(g)脫保護(hù)基R 如路線1所示，通式化合物(I)、(II)、(III)及化合物(IV-1)的合成方法包括 在堿性條件下，取代的鄰硝基苯甲醛或鄰氨基苯甲醛與芳基乙腈衍生物縮合成丙烯腈類(lèi)化合物A，A經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后為生成(I)； 該丙烯腈類(lèi)化合物A經(jīng)雙鍵還原成丙腈類(lèi)化合物B，B經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(II)； B在催化氫化條件下關(guān)環(huán)生成3-取代的1，2，3，4-四氫喹啉衍生物C，C經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(III)； 對(duì)四氫喹啉衍生物C的氮進(jìn)行烷基化生成D，D經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(III)； 對(duì)四氫喹啉衍生物C的氮進(jìn)行?；蒃，E經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(III)； 對(duì)四氫喹啉衍生物C的氮進(jìn)行芳構(gòu)化生成F，F(xiàn)經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(IV-1)。
在本發(fā)明所提供的合成方法中，(a)～(c)步驟的合成方法參見(jiàn)申請(qǐng)?zhí)枮?00610024644.X的專利。
其中，(d)步驟中的條件NaBH4、羧酸/四氫呋喃、0℃-回流或鹵代烴、氫化鈉/DMF、室溫。
其中，(e)步驟中的條件酰氯、三乙胺/CH2Cl2，、室溫或酸酐、三乙胺/CH2Cl2、室溫。
其中，(f)步驟中的合成方法參見(jiàn)申請(qǐng)?zhí)枮?00610025014.4的專利。
其中，(g)步驟脫去保護(hù)基R可以用BBr3/CH2Cl2、EtSNa/DMF、48％HBr或AlCl3/EtSH。
路線2
(IV-2) (IV-3) (IV-3) 反應(yīng)條件(h)三乙胺，醋酸酐；(i)催化氫化；(j)勞維森試劑； (k)甲酰肼；(l)脫保護(hù)基R 如路線2所示，化合物(IV-2)、(IV-3)、(IV-4)的合成方法包括 由取代的鄰硝基苯甲醛與取代的苯乙酸在堿性條件下縮合，生成丙烯酸類(lèi)化合物中間體G； 丙烯酸類(lèi)化合物中間體G在催化氫化條件下關(guān)環(huán)生成環(huán)酰胺類(lèi)化合物H，H經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(IV-2)； 環(huán)酰胺類(lèi)化合物H經(jīng)勞維森試劑作用形成硫酰胺衍生物I，I經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R生成(IV-3)； 硫酰胺衍生物I經(jīng)甲酰肼在環(huán)己醇中回流合成了三氮唑類(lèi)似物J，J經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R生成(IV-4)。
其中(1)步驟脫去保護(hù)基的條件為BBr3/CH2Cl2、EtSNa/DMF、48％HBr或AlCl3/EtSH。
藥理實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑對(duì)ERβ有較強(qiáng)的選擇性，某些化合物對(duì)ERα表現(xiàn)為拮抗作用，而對(duì)ERβ表現(xiàn)為激動(dòng)作用。因此在治療各種炎癥及老年癡呆等方面有廣闊的前景。
有益效果 本發(fā)明設(shè)計(jì)及合成的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑結(jié)構(gòu)新穎，操作簡(jiǎn)便，易于工業(yè)生產(chǎn)。藥理實(shí)驗(yàn)表明是有效的ERβ選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，可用于治療與ERβ相關(guān)的疾病。

具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的結(jié)構(gòu)和制備方法作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。
制備實(shí)施例 (1).(Z)-2-(4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙烯腈(I)-1
a)(Z)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈 將0.23g(10mmol)鈉完全溶于50mL無(wú)水乙醇中，攪拌下加入1.81g(10mmol)2-硝基-4-甲氧基苯甲醛和1.47g(10mmol)4-甲氧基苯乙腈，室溫?cái)嚢?h，過(guò)濾，無(wú)水乙醇洗滌得亮黃色固體2.3g，產(chǎn)率77％。
M.p.143-144℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.86(s，3H)，3.94(s，3H)，6.97(d，J＝8.8Hz，2H)，7.28(m，1H)，7.64(d，J＝8.8Hz，2H)，7.85(s，1H)，7.91(d，J＝8.5Hz，1H).MS(EI)m/e(％)310(80 M+)，293(100)，149(65)，122(70)。
b)(Z)-2-(4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙烯腈(I)-1 將0.23g(0.75mmol)步驟(1)-(a)中制備的(Z)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈溶于5mL無(wú)水二氯甲烷中，冷卻至-10℃，滴加1.0g(0.4mL，4mmol)三溴化硼，室溫?cái)嚢?2小時(shí)，加水水解，加入2molL-1的氫氧化鈉溶液至不溶物完全溶解，再用2molL-1的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH＝7，用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱分離(乙酸乙酯/石油醚，體積比1/2)得淡黃色固體0.21g，收率99.2％。
M.p.269-270℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.89(d，J＝8.4Hz，2H)，7.28(dd，J＝2.6Hz，8.5Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，2H)，7.54(s，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.96(s，1H).MS(EI)m/e(％)282(62M+)，265(100)，135(65)，135(75)。
(2).(z)-2-(3-氟-4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙烯腈(I)-2
除使用2.5mmol 2-硝基-4-甲氧基苯甲醛和2.5mmol的3-氟-4-甲氧基苯乙腈代替10mmol 2-硝基-4-甲氧基苯甲醛和10mmol 4-甲氧基苯乙腈外，使用(I)-1中相同的制備方法合成(I)-2。
a)(z)-2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈 M.p.142-143℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ3.94(s，3H)，3.95(s，3H)，7.02(t，J＝8.6Hz，1H)，7.28(dd，J＝2.5Hz，8.6Hz，1H)，7.4 -7.44(m，1H)，7.45-7.47(m，1H)，7.71(d，J＝2.7Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.88(d，J＝8.7Hz，1H).MS(EI)m/e(％)328(97M+)，311(100)，149(88)，122(90)。
b)(z)-2-(3-氟-4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙烯腈(I)-2 M.p.256-257℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.08(t，J＝8.8Hz，1H)，7.27(dd，J＝2.7Hz，8.5Hz，1H)，7.34(dd，J＝2.2Hz，7.9 Hz，1H)，7.51(d，J＝2.5 Hz，1H)，7.55(d，J＝2.2Hz，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，8.05(s，1H).MS(EI)m/e(％)300(50 M+)，283(65)，149(100)。
(3).2-(4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙腈(II)-1
a)2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈 將0.31g(1mmol)(Z)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈溶于10mL無(wú)水四氫呋喃中，冰水浴下分批加入0.057g(1.5mmol)硼氫化鈉，室溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測(cè)無(wú)原料后，1mol L-1HCl淬滅，減壓濃縮除去四氫呋喃，而后乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮得黃色固體0.31g，產(chǎn)率100.0％。
M.p.107-109℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ3.15(dd，J＝10.3Hz，13.5Hz，1H)，3.43(dd，J＝5.2Hz，13.2Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.88(s，3H)，4.28(dd，J＝5.3Hz，10.1Hz，1H)，6.92(d，J＝8.7Hz，2H)，7.14(dd，J＝2.9Hz，8.6Hz，1H)，7.33(d，J＝8.3Hz，1H)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H)，7.57(d，J＝2.7Hz，1H).MS(EI)m/e(％)312(7 M+)，166(100)，146(85)。
b)2-(4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙腈(II)-1 M.p.21 5-216℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ3.26-3.28(m，2H)，4.31-4.37(m，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，2H)，7.09(dd，J＝2.4Hz，8.2Hz 1H)，7.16(d，J＝8.7Hz，2H)，7.3 1(d，J＝8.5Hz，1H)，7.39(d，J＝2.5Hz，1H).MS(EI)m/e(％)284(5 M+)，152(76)，133(100)。
(4).(Z)-2-(3-氟-4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙腈(II)-2
除使用2.0mmol(Z)-2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈代替1mmol(Z)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈外，使用(II)-1中相同的制備方法合成(II)-2。
a)2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈 M.p.118-119℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.12(dd，J＝10.4Hz，13.5Hz，1H)，3.43(dd，J＝5.3Hz，13.5，1H)，3.88(s，3H)，3.91(s，3H)，4.28(dd，J＝5.2Hz，10.3Hz，1H)，6.97(t，J＝8.6Hz，1H)，7.13-7.15(m，1H)，7.16(d，J＝2.6Hz，1H)，7.20(d，J＝2.1Hz，1H)，7.33(d，J＝8.6Hz，1H)，7.59(d，J＝2.7Hz，1H).MS(EI)m/e(％)330(5 M+)，166(100)。
b)2-(3-氟-4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙腈(II)-2 M.p.212-213℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.27-3.39(m，2H)，4.39(t，J＝7.8Hz，1H)，6.93-6.98(m，2H)，7.07-7.16(m，2H)，7.31(d，J＝8.5Hz，1H)，7.39(d，J＝2.4Hz，1H).MS(EI)m/e(％)302(5 M+)，152(100)。
(5).2-(3-硝基-4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙腈(II)-3
除用2.0mmol(Z)-2-(3-硝基-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈代替1mmol(Z)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙烯腈外，使用(II)-1中相同的制備方法合成(II)-3。
a)2-(3-硝基-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈 M.p.217-219℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.17(dd，J＝10.6Hz，13.4Hz，1H)，3.45(dd，J＝5.3Hz，13.5Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.99(s，3H)，4.37(dd，J＝5.2Hz，10.6 Hz，1H)，7.13-7.19(m，2H)，7.35(d，J＝8.6Hz，1H)，7.60(d，J＝2.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝2.4Hz，8.7Hz，1H)，7.90(d，J＝2.1Hz，1H).MS(EI)m/e(％)357( 5 M+)，166(100)，108(37)。
b)2-(3-硝基-4-羥基-苯基)-3-(4-羥基-2-硝基-苯基)-丙腈(II)-3 M.p.255-256℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ3.27-3.39(m，2H)，4.51-4.56(m，1H)，7.08(dd，J＝2.8Hz，8.6Hz，1H)，7.16(d，J＝9.0Hz，1H)，7.31(d，J＝8.5Hz，1 H)，7.39(d，J＝2.8Hz，1H)7.52(dd，J＝2.2Hz，8.5Hz，1H)，7.84(d，J＝2.2Hz，1H).MS(EI)m/e(％)329(5 M+)，152(100)。
(6).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-1
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1，2，3，4-四氫喹啉 將4.50g(14.5mmol)2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈溶于5mL無(wú)水四氫呋喃中，加入1.36g 10％Pd/C，室溫催化氫化48h，過(guò)濾，減壓濃縮除去四氫呋喃，硅膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚，體積比1/10)得白色固體2.9g，產(chǎn)率74.3％。
M.p.146-147℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ2.92-2.97(m，2H)，3.26-3.31(m，2H)，3.59-3.61(m，1H)，3.75(s，3H)，3.81(s，3H)，6.53(dd，J＝2.4Hz，8.3Hz，1H)，6.6(d，J＝2.2Hz，1H)，6.89(d，J＝8.8Hz，2H)，7.00(d，J＝8.5Hz，1H)，7.19(d，J＝8.7Hz，2H).MS(EI)m/e(％)269(100M+)，148(55)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-1 M.p.228-229℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.61-2.83(m，3H)，3.0-3.07(m，1H)，3.15-3.21(m，1H)，5.87(dd，J＝2.2Hz，7.8Hz，1H)，5.92(d，J＝2.4Hz，1H)，6.63(d，J＝8.2Hz，1H)，6.69(d，J＝8.4Hz，2H)，7.04(d，J＝8.3Hz，2H).MS(EI)m/e(％)241(100 M+)，149(60)，134(65)。
(7).3-(3-氟-4-羥基-苯基)-7-羥基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-2
除用2.0mmol 2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈代替14.5mmol 2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈外，使用(III)-1中相同的制備方法合成(III)-2。
a)3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.136-137℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ2.87-2.91(m，2H)，3.06-3.16(m，1H)，3.26(t，J＝10.7Hz，1H)，3.43-3.48(m，1H)，3.75(s，3H)，3.88(s，3H)，6.20(d，J＝2.5Hz，1H)，6.3 1(dd，J＝2.5Hz，8.2Hz，1H)，6.88-6.92(m，1H)，6.94-6.99(m，3H).MS(EI)m/e(％)287(100M+)，148(50)。
b)3-(3-氟-4-羥基-苯基)-7-羥基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-2 M.p.221-222℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.67-2.71(m，2H)，2.77-2.88(m，1H)，3.05(t，J＝10.5Hz，1H)，5.88(dd，J＝2.3Hz，7.9Hz，1H)，5.92(d，J＝2.1Hz，1H)，6.64(d，J＝8.2Hz，1 H)，6.84-6.88(m，2H)，7.04(d，J＝13.1Hz，1H).MS(EI)m/e(％)259(95M+)，149(100)，57(90)。
(8).3-(3-胺基-4-羥基-苯基)-7-羥基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-3
除了使用2.0mmol 2-(3-硝基-4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈代替14.5mmol 2-(4-甲氧基-苯基)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙腈外，使用(III)-1中相同的制備方法合成(III)-3。
a)3-(3-胺基-4-甲氧基-苯基)-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.152-152.5℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.86-2.92(m，2H)，3.01-3.12(m，1H)，3.26(t，J＝11.0Hz，1H)，3.44-3.49(m，1H)，3.75(s，3H)，3.83(s，3H)，6.30(d，J＝2.4Hz，1H)，6.35(dd，J＝2.2Hz，8.2Hz，1H)，6.60-6，64(m，2H)，6.75(d，J＝7.9Hz，1H)6.93(d，J＝8.2Hz，1H).MS(EI)m/e(％)284(100M+)，149(60)，136(50)。
b)3-(3-胺基-4-羥基-苯基)-7-羥基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-3 M.p.236-238℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.61-2.66(m，3H)，2.93-3.00(m，1H)，3.11-3.15(m，1H)，5.85(dd，J＝2.5Hz，8.0Hz，1H)，5.88(d，J＝2.0Hz，1H)，6.27(dd，J＝2.0Hz，8.2Hz，1H)，6.46(d，J＝2.3Hz，1H)，6.54(d，J＝8.0Hz，1H)，6.60(d，J＝8.0Hz，1H).MS(EI)m/e(％)256(100M+)，122(65)。
(9).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-4
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-1，2，3，4-四氫喹啉 在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0.27g(1mmol)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1，2，3，4-四氫喹啉((III)-1a)溶于10mL無(wú)水四氫呋喃，冷卻至0℃，加入硼氫化鈉0.27g(7.5mmol)及3mL甲酸，升溫至70♀反應(yīng)12小時(shí)，減壓除去溶劑，殘余物加入水，用1molL-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至弱堿性，二氯甲烷萃取，有機(jī)相無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱分離(乙酸乙酯/石油醚，1/10)得淡白色固體0.25g，收率88％。
M.p.99-100℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.90-2.93(m，2H)，2.95(s，3H)，3.31(d，6.1，2H)，3.14-3.20(m，1H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，6.30(s，2H)，6.88(d，J＝8.6Hz，2H)，6.93(d，J＝8.1Hz，1H)，7.16(d，J＝8.9Hz，2H).MS(EI)m/e(％)283(100M+)，162(35)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-4 M.p.203-204℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.70-2.73(m，2H)，2.78(s，3H)，2.93(s，1H)，3.11-3.15(m，2H)，5.98-6.00(m，2H)，6.68-6.70(m，3H)，7.05(d，J＝8.0Hz，2H)，8.96(s，1H)，9.36(s，1H).MS(EI)m/e(％)255(100 M+)，148(75)。
(10).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-乙基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-5
除了使用3mL乙酸代替3mL甲酸外，使用(III)-4中相同的制備方法合成(III)-5。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-乙基-1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.77-78℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.15(t，J＝7.2，3H)，2.88-2.91(m，2H)，3.03-3.15(m，1H)，3.20-3.33(m，3H)，3.40-3.51(m，1H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，6.18(dd，J＝2.6 Hz，8.1Hz，1H)，6.23(d，J＝2.2Hz，1H)，6.89(d，J＝8.5Hz，2H)，6.91(d，J＝8.1Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，2H).MS(EI)m/e(％)297(100M+)，282(85)，121(60)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-乙基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-5 M.p.174-175℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ1.01(t，J＝6.6Hz，3H)，2.64-2.78(m，2H)，3.09-3.19(m，2H)，3.52-3.60(m，3H)，5.87-5.94(m，1H)，6.02(s，1H)，6.67-6.70(m，3H)，7.05(d，J＝8.2 Hz，2H)，8.91(s，1H)，9.36(s，1H).MS(EI)m/e(％)269(100 M+)，254(95)。
(11).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-丙基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-6
(III)-6 除了使用3mL丙酸代替3mL甲酸外，使用(III)-4中相同的制備方法合成(III)-6。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-丙基-1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.84-85℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.93(t，J＝7.3Hz，3H)，1.52-1.71(m，2H)，2.86-2.93(m，2H)，3.03-3.36(m，5H)，3.79(s，3H)，3.81(s，3H)，6.15-6.26(m，2H)，6.88(d，J＝8.5Hz，2H)，6.89(m，1H)，7.1 6(d，J＝8.7，2H).MS(EI)m/e(％)311(50 M+)，282(100)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-丙基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-6 M.p.144-145℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ0.84(t，J＝7.4Hz，3H)，1.43-1.55(m，2H)，2.60-2.78(m，2H)，2.80-2.90(m，1H)，2.99-3.09(m，1H)，3.14-3.25(m，3H)，5.88(dd，J＝1.8Hz，7.6Hz，1H)，5.99(d，J＝2.0Hz，1H)，6.64(m，1H)，6.67(d，J＝8.6Hz，2H)，7.03(d，J＝8.8Hz，2H).MS(EI)m/e(％)283(55 M+)，254(100)。
(12).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-環(huán)丙甲基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-7
除了使用3mL環(huán)丙甲酸代替3mL甲酸外，使用(III)-4中相同的制備方法合成(III)-7。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-環(huán)丙甲基-1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.97-98℃。
1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ0.20-0.25(m，2H)，0.52-0.55(m，2H)，0.92-0.94(m，1H)，2.91-3.07(m，3H)，3.08-3.20(br，1H)，3.41-3.45(br，3H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，6.20-6.46(m，2H)，6.89(d，J＝8.8Hz，2H)，6.93(m，1H)，7.17(d，J＝8.8 Hz，2H).MS(EI)m/e(％)323(100M+)，149(50)，121(50)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-環(huán)丙甲基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-7 M.p.124-125℃。
1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ0.17(m，2H)，0.41-0.43(m，2H)，0.75-0.80(m，1H)，2.60-2.75(m，2H)，2.75-2.89(m，2H)，3.24-3.29(m，3H)，5.88(m，1H)，6.11(s，1H)，6.67-6.70(m，3H)，7.05(d，J＝8.3Hz，2H)，8.92(s，1H)，9.36(s，1H).MS(EI)m/e(％)295(60 M+)，149(50)，115(100)。
(13).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲磺?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-8
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲磺酰基-1，2，3，4-四氫喹啉 0℃時(shí)，將0.095g(0.825mmol)甲磺酰氯滴加到0.209g(0.75mmol)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1，2，3，4-四氫喹啉((III)-1a)，0.085g(0.825mmol)三乙胺的四氫呋喃溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，減壓除去四氫呋喃，直接硅膠柱分離(乙酸乙酯/石油醚，1/5)得白色固體0.135g，收率51.9％。
M.p.135.5-136℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.83(s，3H)，2.87-3.20(m，3H)，3.50-3.60(m，1H)，4.22-4.30(m，1H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，6.68(dd，J＝2.3Hz，8.2Hz，1H)，6.88(d，J＝8.8Hz，2H)，7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，7.17(d，J＝8.7Hz，2H)，7.40(d，J＝2.4Hz，1H).MS(EI)m/e(％)347(60 M+)，214(80)，121(100)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲磺?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-8 M.p.23 1-232℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.69-2.89(m，2H)，2.98(s，3H)，3.36-3.50(m，2H)，3.92-4.05(m，1H)，6.51(dd，J＝2.5Hz，8.3Hz，1H)，6.72(d，J＝8.5Hz，2H)，7.00(d，J＝8.1Hz，1H)，7.12(d，J＝2.6Hz，1H)，7.13(d，J＝8.6 Hz，2H).MS(EI)m/e(％)319(5M+)，200(100)，121(75)。
(14).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-9
除了使用5mmol乙酸酐和15mmol甲酸代替0.825mmol甲磺酰氯外，使用(III)-8中相同的制備方法合成(III)-9。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.112-113℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ2.84-3.17(m，3H)，3.33-3.41(m，1H)，3.81(s，3H)，3.83(s，3H)，4.38-4.42(m，1H)，6，71(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H)， 6.74(d，J＝2.4Hz，1H)，6.88(d，J＝8.7Hz，2H)，7.12(d，J＝8.3Hz，1H)，7.17(d，J＝8.7Hz，2H).MS(EI)m/e(％)297(100M+)，134(70)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-9 M.p.238-239℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.78-2.95(m，2H)，3.23-3.33(m，1H)，3.97-4.06(m，2H)，4.07-4.15(m，1H)，6.55(dd，J＝2.4Hz，8.1Hz，1H)，6.71(d，J＝8.4Hz，2H)，6.78(d，J＝2.3Hz，1H)，7.03(d，J＝8.0Hz，1H)，7.10(d，J＝8.7Hz，2H)，8.78(s，1H).MS(EI)m/e(％)269(100M+)。
(15).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-乙酰基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-10
除了使用0.825mmol乙酰氯代替0.825mmol甲磺酰氯外，使用(III)-8中相同的制備方法合成(III)-10。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-乙?；?1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.102-103℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.21(s，3H)，2.80-2.89(m，1H)，2.99-3.14(m，2H)，3.56-3.64(m，1H)，3.79(s，3H)，3.81(s，3H)，4.11-4.22(m，1H)，6，71(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H)，6.74(d，J＝2.4Hz，1H)，6.86(d，J＝8.6Hz，2H)，7.08(d，J＝8.5Hz，1H)，7.14(d，J＝8.5Hz，2H).MS(EI)m/e(％)3 11(5 M+)，149(100)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-乙酰基-1，2，3，4-四氫喹啉(III)-10 M.p.201-202℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.09(s，3H)，2.68-2.78(m，1H)，2.82-3.04(m，2H)，3.40-3.52(m，1H)，3.98-4.06(m，1H)，6.53(dd，J＝2.4Hz，8.3Hz，1H)，6.70(d，J＝8.4Hz，2H)，6.78(d，J＝2.3Hz，1H)，7.03(d，J＝8.5Hz，1H)，7.07(d，J＝8.4Hz，2H).MS(EI)m/e(％)283(100 M+)，241(65)，134(55)。
(16).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-丙酰基-1，2，3，4-四氫喹啉的制備(III)-11
除了使用0.825mmol丙酰氯代替0.825mmol甲磺酰氯外，使用(III)-8中相同的制備方法合成(III)-11。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-丙酰基-1，2，3，4-四氫喹啉的制備 M.p.89-90℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ1.14(t，J＝7.4Hz，3H)，2.50(q，J＝7.2Hz，2H)，2.80-2.89(m，1H)，2.99-3.1 8(m，2H)，3.57-3.62(m，1H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，4.11-4.20(m，1H)，6，71(dd，J＝2.5Hz，8.5Hz，1H)，6.74(d，J＝2.4Hz，1H)，6.86(d，J＝8.7Hz，2H)，7.08(d，J＝8.4Hz，1H)，7.15(d，J＝8.6 Hz，2H).MS(EI)m/e(％)325(100M+)，269(100)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-丙?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-11 M.p.204-205℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ0.94(t，J＝7.4Hz，3H)，2.36-2.41(m，2H)，2.62-2.73(m，1H)，2.83-2.93(m，2H)，3.41-4.46(m，1H)，3.87-3.91(m，1H)，6.51(dd，J＝2.4Hz，8.3Hz，1H)，6.67(d，J＝8.5Hz，2H)，6.78(d，J＝2.3Hz，1H)，6.96(d，J＝8.4Hz，1H)，7.03(d，J＝8.5Hz，2H).MS(EI)m/e(％)297(70 M+)，241(100)，134(45)。
(17).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-環(huán)丙甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-12
除了使用0.825mmol環(huán)丙甲酰氯代替0.825mmol甲磺酰氯外，使用(III)-8中相同的制備方法合成(III)-12。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-環(huán)丙甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.106-107℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ0.80(m，2H)，1.12(m，2H)，2.00-2.09(m，1H)，2.80-2.91(m，1H)，2.99-3.18(m，2H)，3.57(dd，J＝10.0Hz，12.7Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.81(s，3H)，4.25(dd，J＝0.9Hz，5.4Hz，1H)，6.70(dd，J＝2.6Hz，8.3Hz，1H)，6.85(d，J＝8.9Hz，2H)，7.05(d，J＝2.5Hz，1H)，7.10(d，J＝8.3Hz，1H)，7.15(d，J＝8.8Hz，2H).MS(EI)m/e(％)337(95 M+)，269(100)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-環(huán)丙甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-12 M.p.267-268℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ0.81(m，4H)，1.97-2.01(m，1H)，2.62-2.78(m，1H)，2.86-2.93(m，2H)，3.41-4.46(m，1H)，4.00-4.08(m，1H)，6.55(dd，J＝2.4Hz，8.2Hz，1H)，6.68(d，J＝8.6Hz，2H)，6.91(d，J＝2.4Hz，1H)，7.02(d，J＝8.2Hz，1H)，7.06(d，J＝8.5Hz，2H).MS(EI)m/e(％)309(40 M+)，241(100)，84(75)。
(18).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-(4-(2-(1-哌啶基)乙氧基))苯甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-13
除了使用0.825mmol4-(2-(1-哌啶基)乙氧基)苯甲酰氯代替0.825mmol甲磺酰氯外，使用(III)-8中相同的制備方法合成(III)-13。
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-(4-(2-(1-哌啶基)乙氧基))苯甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉 M.p.166-168℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ 1.63-1.71(m，4H)，1.82-1.97(m，4H)，2.20-2.37(m，2H)，2.71-2.84(m，2H)，2.91-3.02(m，1H)，3.07-3.25(m，2H)，3.54(s，3H)，3.71(dd，J＝9.1Hz，12.6Hz，1H)，3.79(s，3H)，4.24(dd，J＝4.7Hz，12.6Hz，1H)，4.54-4.60(m，2H)，6.45-6.46(m，1H)，6.63(dd，J＝2.2Hz，8.4Hz，1H)，6.79(d，J＝8.8Hz，2H)，6.86(d，J＝8.4Hz，2H)， 7.08(d，J＝8.3Hz，1H)，7.1 5(d，J＝8.6Hz，2H)，7.33(d，J＝8.9Hz，2H).MS(EI)m/e(％)500(10 M+)，98(100)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-1-(4-(2-(1-哌啶基)乙氧基))苯甲?；?1，2，3，4-四氫喹啉(III)-1 3 M.p.135-136℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ1.49-1.55(m，2H)，1.63-1.69(m，4H)，2.66-2.74(m，4H)，2.90-2.98(m，3H)，3.03-3.12(m，2H)，3.73(dd，J＝8.0Hz，12.4Hz，1H)，4.06(dd，J＝4.4Hz，12.7Hz，1H)，4.17(t，J＝5.6Hz，2H)，6.33-6.36(m，1H)，6.52(dd，J＝2.3Hz，8.1 Hz，1H)，6.70(d，J＝9.0Hz，2H)，6.88(d，J＝8.7Hz，2H)，7.02-7.06(m，3H)，7.25(d，J＝8.7Hz，2H).MS(EI)m/e(％)472(1 5 M+)，98(100)。
(19).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)喹啉(IV-1)
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)喹啉 氮?dú)獗Ｗo(hù)下，0.27g(1mmol)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-1，2，3，4-四氫喹啉及54mg 10％Pd/C加熱至270℃反應(yīng)3小時(shí)，冷卻，加入甲醇，過(guò)濾，減壓濃縮除去溶劑得白色固體，0.26g，收率100％。
M.p.142-143℃。1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ3.88(s，3H)，3.98(s，3H)，7.05(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22(dd，J＝2.4Hz，8.9Hz，1H)，7.47(d，J＝2.4Hz，1H)，7.63(d，J＝8.9 Hz，2H)，7.75(d，J＝9.0Hz，1H)，8.20(d，J＝2.3Hz，1H)，9.07(d，J＝2.3Hz，1H).MS(EI)m/e(％)265(100M+)，250(60)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)喹啉的制備 M.p.185-186℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)6.94(d，J＝8.8Hz，2H)，7.35(d J＝8.3Hz，2H)，7.71(d，J＝8.9Hz，2H)，8.03(d，J＝8.8Hz，21.7Hz，2H)，8.87(s，1H)，920(dd，J＝2.1Hz，16.0Hz，1H).MS(EI)m/e(％)236(25 M+)，208(65)。
(20).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-3，4-二氫-1H-喹啉-2-酮(IV-2)
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1 H-喹啉-2-酮 1.81g(10mmol)2-硝基-4-甲氧基苯甲醛，2.41g(14.5mmol)4-甲氧基苯乙酸，5mL乙酸酐(54mmol)及1g(10mmol)三乙胺的混合物回流15分鐘，冷卻到90℃，加入5mL水，冷卻至20℃，橙紅色固體析出，過(guò)濾，水洗，乙醇重結(jié)晶得橙色固體(E)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-2-(4-甲氧基-苯基)-丙烯酸.取1.65g(5mmol)(E)-3-(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-2-(4-甲氧基-苯基)-丙烯酸溶于50mL四氫呋喃及10mL甲醇的混和溶劑中，加入0.165g 10％Pd/C，室溫催化氫化12小時(shí)，過(guò)濾，濃縮至干得白色固體1.41g，收率100％. M.p.182-183℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ3.00-3.06(m，2H)，3.68(s，3H)，3.69(s，3H)，3.72-3.79(m，1H)，6.45-6.47(m，1H)，6.49-6.51(m，1H)，6.82(d，J＝9.0Hz，2H)，7.05(d，J＝8.1Hz，1H)，7.10(d，J＝8.5Hz，2H).MS(EI)m/e(％)283(100 M+)，149(55)，57(50)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-3，4-二氫-1H-喹啉-2-酮 M.p.＞300℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.91-3.10(m，2H)，3.57-3.62(m，1H)，6.30(dd，J＝2.4Hz，8.0Hz，1H)，6.34(d，J＝2.1Hz，1H)，6.65(d，J＝8.6Hz，2H)，6.92(d，J＝8.1Hz，1H)，6.97(d，J＝8.6Hz，2H).MS(EI)m/e(％)255(100M+)，122(50)。
(21).7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-3，4-二氫-1H-喹啉-2-硫酮(IV-3)
a)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-喹啉-2-硫酮 0.283g(1mmol)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-喹啉-2-酮和0.243g(0.6mmol)勞維森試劑懸浮于10mL無(wú)水甲苯中，回流5小時(shí)，濃縮至干，殘留物硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇，50/1)得黃色固體1.948g，產(chǎn)率96.4％。M.p.179-180℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.00(dd，J＝6.1Hz，16.1Hz，1H)，3.24(dd，J＝6.3Hz，15.9Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.78(s，3H)，4.27(t，J＝6.0Hz，1H)，6.44-6.47(m，1H)，6.60-6.62(m，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，2H)，7.04(d，J＝8.2Hz，1H)，7.13(d，J＝8.6Hz，2H).MS(EI)m/e(％)299(100M+)。
b)7-羥基-3-(4-羥基-苯基)-3，4-二氫-1 H-喹啉-2-硫酮 M.p.262-264℃。1HNMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.81(dd，J＝4.1Hz，16.2Hz，1H)，3.08(dd，J＝6.3Hz，16.1Hz，1H)，4.11(dd，J＝4.0Hz，5.9Hz，1H)，6.41(dd，J＝2.4 Hz，7.9Hz，1H)，6.57-6.59(m，2H)，6.60(s，1H)，6.90-6.94(m，3H).MS(EI)m/e(％)271(25 M+)，149(30)，61(100)。
(22).8-羥基-4-(4-羥基-苯基)-4，5-二氫-[1，2，4]三唑[4，3-a]喹啉(IV-4)
a)8-甲氧基-4-(4-甲氧基-苯基)-4，5-二氫-[1，2，4]三唑[4，3-a]喹啉 在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，0.299g(1mmol)7-甲氧基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-喹啉-2-硫酮，0.079g(1.2mmmol)甲酰肼溶于5mL環(huán)己醇中，回流5小時(shí)，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇，50/1)得淺棕色固體，0.277g，產(chǎn)率90.2％。M.p.90-92.5℃。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.16-3.31(m，2H)，3.75(s，3H)，3.86(s，3H)，4.51(t，J＝7.1Hz，1H)，6.78(d，J＝2.5Hz，1H)，6.82(d，J＝8.8Hz，2H)6.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.16(d，J＝8.5Hz，2H)，7.25(d，J＝8.6Hz，1H)，8.71(s，1H).MS(EI)m/e(％)307(5M+)，84(100)。
b)8-羥基-4-(4-羥基-苯基)-4，5-二氫-[1，2，4]三唑[4，3-a]喹啉 M.p.205℃分解。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.05-3.18(m，2H)，4.44(t，J＝6.8Hz，1H)，6.65(d，J＝8.9Hz，2H)，6.68(d，J＝2.2，1H)6.95(d，J＝8.6Hz，2H)，7.16-7.19(m，2H)，9.24(s，1H).MS(EI)m/e(％)278(25M-1+)，210(100)。
試驗(yàn)實(shí)施例 (1)受體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 應(yīng)用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)體外表達(dá)人源ER-β，在合適條件下分離制備ER-β?；诜派湫允荏w-配基競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合原理，加入一定濃度[3H]標(biāo)記的雌二醇(Estradiol)作為陽(yáng)性對(duì)照物，篩選與該受體具有結(jié)合活性的小分子配基。
化合物濃度梯度均用DMSO稀釋。實(shí)驗(yàn)在96孔板中進(jìn)行，每孔中加入Assay buffer(由ER binding buffer，ERα或ERβ，[3H]17β-estradiol配制而成)225μL和25μL轉(zhuǎn)板后的被測(cè)化合物，振蕩混勻，在4℃孵育12h。然后每孔加入200μL6.25％HA混合液，振蕩混勻，4℃孵育10min。將混合物離心終止反應(yīng)(2500rpm，3-5min)，棄去上清，加入閃爍液，用Wallac MicroBeta Trilux 1450-023液閃儀測(cè)定。該試驗(yàn)重復(fù)了三次。
表1體外雌激素受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn) 表1結(jié)果表明該類(lèi)選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑在nM濃度下與ER受體有較強(qiáng)的結(jié)合力，其中I-2與Genistein相比對(duì)ERβ有較強(qiáng)的選擇性?？捎糜谥委熍c選擇性ERβ相關(guān)的疾病，是潛在的預(yù)防治療與年齡相關(guān)的神經(jīng)退化疾病，如老年癡呆等疾病的藥物。[Zhao，L.and Brinton，R.D.J.Med.Chem.2005，48，3463-3466] (2)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn) 酵母雙雜交法是利用核激素受體和輔激活蛋白之間的配體依賴作用而建立起來(lái)的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)?；诖嗽?，將ER-LBD與DNA-BD融合，輔激活蛋白SRC-I與DNA-AD融合，利用分子克隆手段來(lái)構(gòu)建質(zhì)粒；ER-LBD與輔激活蛋白SRC-I相互作用，導(dǎo)致BD與AD在空間上接近，從而激活UAS(酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4效應(yīng)基因的上游激活序列)調(diào)節(jié)下游的lac-z報(bào)告基因表達(dá)，產(chǎn)生α-半乳糖苷酶。因此，α-半乳糖苷酶的活性大小就和ER與輔激活蛋白SRC-I之間的相互作用強(qiáng)度大小一致。而ER與輔激活蛋白之間的相互作用則取決配體的出現(xiàn)。只有在激動(dòng)劑存在的條件下，ER才能與輔激活蛋白結(jié)合，引起B(yǎng)D與AD在空間上接近，從而激活lac-z報(bào)告基因表達(dá)，產(chǎn)生α-半乳糖苷酶。
酵母轉(zhuǎn)化采用乙酸鋰法。經(jīng)乙酸鋰法處理后的雙雜交酵母(酵母菌株選用AH109)接種到SD(亮氨酸和色氨酸缺陷型)液體培養(yǎng)基中，于30℃，250rpm搖船中培養(yǎng)，當(dāng)其OD600吸光值達(dá)到1.0左右時(shí)，用亮氨酸和色氨酸缺陷型培養(yǎng)基將酵母菌稀釋50倍，然后將配體(1μL，DMSO溶解)或DMSO(1μL，做為對(duì)照)加到稀釋后的酵母液中(999μL)；另外做拮抗劑是將1μL的配體和1μL的雌激素同時(shí)加到稀釋后的酵母中(998μL)。振蕩搖勻后，在30℃孵育16h。取200μL于96孔酶標(biāo)板中，600nm處測(cè)吸光值，以加入樣品溶液的培養(yǎng)液作為空白對(duì)照，然后3000rpm離心30min，取上清液16μL，加到另一個(gè)含有assay buffer(48μL，16μL 100mM PNP-α-Gal+32μL 0.5M醋酸鈉，pH4.5)的96孔酶標(biāo)板中，在30℃孵育60min后，加入136μL，1M Na2CO3溶液終止反應(yīng)。在410nm處測(cè)吸光值，最后用下式計(jì)算出相對(duì)的α-半乳糖苷酶的活性[milliunits/(ml×cell)]。
α-半乳糖苷酶的活性＝OD410×Vf×1000/[(ξ×b)×t×Vi×OD600] t＝加入assay bufferfu孵育的時(shí)間(min) Vf＝最后測(cè)定的體積(200) Vi＝離心后取的上清的體積(16) OD600＝過(guò)夜培養(yǎng)后菌的600nm處的吸光值 ξ×b＝對(duì)硝基酚-α-D-吡喃半乳糖在410nm每摩爾的吸光值×光程＝10.5(ml mol-1；Yeast Protocols Handbook PT3024-1，Clontech). 以下是通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)方法來(lái)測(cè)定各化合物對(duì)ER-LBD兩種亞型和SRC-I相互作用的不同影響。
表2酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明該類(lèi)選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑對(duì)ERβ有一定的選擇性，其中III-6和III-7對(duì)ERα表現(xiàn)為拮抗作用，而對(duì)ERβ表現(xiàn)為激動(dòng)作用，III-1和IV-1中“---”表示對(duì)ERα作用很弱。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果至少重復(fù)三次。進(jìn)一步說(shuō)明該類(lèi)選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑作為ERβ激動(dòng)劑是潛在的用于治療由于子宮內(nèi)膜癌及乳腺癌的刺激導(dǎo)致的情緒、認(rèn)知及記憶方面的副作用引起的疾病的藥物。[Schopfer，U.；Schoeffter，P.；Bischoff，S.；etal.J.Med.Chem.2002，45，1399.]
權(quán)利要求
1.一類(lèi)具有如下結(jié)構(gòu)通式(I)、(II)或(III)或具有結(jié)構(gòu)式(IV-1)、(IV-2)、(IV-3)或(IV-4)的選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑
其中(I)和(II)中的R1為H、鹵素或硝基；
(III)中的R1為H時(shí)，R2為H、C1～C12烷基、環(huán)烷基、?；蚧酋；?；或R1為鹵素或胺基時(shí)，R2為H。
2.如權(quán)利要求1所述的選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑，其特征在于，所述的選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑為具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
3.一種權(quán)利要求1或2所述的選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑的合成方法，其中結(jié)構(gòu)通式為(I)、(II)或(III)或結(jié)構(gòu)式為(IV-1)的化合物的合成路線如下
反應(yīng)條件(a)堿；(b)還原；(c)催化氫化；(d)N-烷基化；
(e)N-?；?；(f)芳構(gòu)化；(g)脫保護(hù)基R
該合成方法包括在堿性條件下，取代的鄰硝基苯甲醛或鄰氨基苯甲醛與芳基乙腈衍生物縮合成丙烯腈類(lèi)化合物A，A經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后為生成(I)；該丙烯腈類(lèi)化合物A經(jīng)雙鍵還原成丙腈類(lèi)化合物B，B經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(II)；B在催化氫化條件下關(guān)環(huán)生成3-取代的1，2，3，4-四氫喹啉衍生物C，C經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(III)；對(duì)四氫喹啉衍生物C的氮進(jìn)行烷基化生成D，D經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(III)；對(duì)四氫喹啉衍生物C的氮進(jìn)行?；蒃，E經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(III)；對(duì)四氫喹啉衍生物C的氮進(jìn)行芳構(gòu)化生成F，F(xiàn)經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(IV-1)；
其中，(d)步驟中的條件為NaBH4，羧酸/四氫呋喃，0℃-回流或鹵代烴，氫化鈉/DMF，室溫；
其中，(e)步驟中的條件為酰氯、三乙胺/CH2Cl2、室溫或酸酐、三乙胺/CH2Cl2、室溫；
其中，(g)步驟脫去保護(hù)基R的條件為BBr3/CH2Cl2、EtSNa/DMF、48％HBr或AlCl3/EtSH；
(IV-2)、(IV-3)或(IV-4)的合成路線為
反應(yīng)條件(h)三乙胺，醋酸酐；(i)催化氫化；(j)勞維森試劑；
(k)甲酰肼；(l)脫保護(hù)基R
該合成方法包括由取代的鄰硝基苯甲醛與取代的苯乙酸在堿性條件下縮合，生成丙烯酸類(lèi)化合物中間體G；丙烯酸類(lèi)化合物中間體G在催化氫化條件下關(guān)環(huán)生成環(huán)酰胺類(lèi)化合物H，H經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R后生成(IV-2)；環(huán)酰胺類(lèi)化合物H經(jīng)勞維森試劑作用形成硫酰胺衍生物I，I經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R生成(IV-3)；硫酰胺衍生物I經(jīng)甲酰肼在環(huán)己醇中回流合成了三氮唑類(lèi)似物J，J經(jīng)過(guò)脫保護(hù)基R生成(IV-4)；
其中(l)步驟脫去保護(hù)基的條件為BBr3/CH2Cl2，、EtSNa/DMF、48％HBr或AlCl3/EtSH。
4.一種如權(quán)利要求1或2所述的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑在制備治療和/或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂及與年齡相關(guān)的神經(jīng)退化疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類(lèi)選擇性雌激素受體亞型調(diào)節(jié)劑及其合成方法和用途。本發(fā)明設(shè)計(jì)及合成的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑結(jié)構(gòu)新穎，制備工藝操作簡(jiǎn)便，易于工業(yè)生產(chǎn)。藥理實(shí)驗(yàn)表明是有效的ERβ選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，可用于治療與ERβ相關(guān)的疾病，因此在治療各種炎癥及老年癡呆等方面有廣闊的前景。
文檔編號(hào)A61K31/277GK101147737SQ20061011642
公開(kāi)日2008年3月26日 申請(qǐng)日期2006年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月22日
發(fā)明者陳五紅, 楊春皓, 謝毓元, 旭 沈, 王明偉 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所