專利名稱：：抗血管生長(zhǎng)組合物及使用方法抗血管生長(zhǎng)組合物及使用方法械明是申請(qǐng)日為1994年7月19日的中國(guó)專利申請(qǐng)200510082207.9的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的發(fā)明名稱為"^L管生長(zhǎng)組^及使用方法"。本發(fā)明涉及治療癌癥和其它血管生長(zhǎng)依賴疾病的組#及方法，更涉及含有fefiL管生長(zhǎng)因子和聚合載體的組合物、用這些組^包衣的斯坦特固定模，以及使用這些斯坦特固定模和組#的方法。癌癥是在美國(guó)引發(fā)死亡的第二種主要原因，并且占總死亡數(shù)的五分之一強(qiáng)。簡(jiǎn)而言之，癌癥以細(xì)胞群的分裂不可控制為特4正，其一般導(dǎo)致形成一種或幾種腫瘤。盡管癌癥一般比過(guò)去更易于診斷，甚至更早發(fā)現(xiàn)，但其仍然不能治愈。目前有i牛多方法用于治療癌癥，包括例如各種外科方法。如果單獨(dú)使用外科，很多患者(尤其是那些患有某些癌癥的患者，例如乳腺癌、腦癌、結(jié)腸癌和肝癌)會(huì)復(fù)發(fā)。除了外科，許多癌癥可以用聯(lián)合治療法治療，包括細(xì)胞毒性化療藥物(如長(zhǎng)春新^威、長(zhǎng)春堿、順氯氨鉤、甲氨喋呤、5-FU等)和/或放射療法。這種方法的困難在于，放療和化療藥物對(duì)正常組織也有毒性，并且經(jīng)常產(chǎn)生致命的副作用。此外，這些方法通常具有特別高的失對(duì)緩解率。除了外科、化學(xué)和放射療法，有人試圖用個(gè)人的自身免疫系統(tǒng)來(lái)消除癌細(xì)胞。例如，一些人建"i義用細(xì)菌或病毒成分作為佐劑來(lái)刺激免疫系統(tǒng)，從而破壞腫瘤細(xì)胞。(見(jiàn)"PirnciplesofCancerBiotherapy,"01dham(ed.),RavenPress，NewYork，1987。)這些藥物通常在動(dòng)物腫瘤模型中用作佐劑和非特異性刺激劑，但是還沒(méi)有證明其在人體中普遍有效。淋巴因子也用來(lái)治療癌癥。簡(jiǎn)而言之，淋巴因子通過(guò)各種細(xì)胞分泌，并且通常在產(chǎn)生免疫應(yīng)答中對(duì)特定細(xì)胞有作用。淋巴因子的例子有白細(xì)胞介素(IL)-1，-2，-3和-4，以及白細(xì)胞集落刺激因子如G-CSF、GM-CSF和M-CSF。近來(lái)，有人用IL-2刺激外周血細(xì)胞從而擴(kuò)大并產(chǎn)生大量對(duì)腫瘤細(xì)胞有胞毒性的細(xì)胞(Rosenbergetal.,N.Engl丄Med.313:1485-1492,1985)。另外有人建議用抗體治療癌癥。簡(jiǎn)而言之，抗體可以識(shí)別特定的細(xì)胞表面抗原(其可以是獨(dú)特的，或者與正常細(xì)胞相比在癌細(xì)胞中占多數(shù))。這些抗體，或者稱"魔術(shù)子彈"，可以單獨(dú)或與一種毒素聯(lián)合使用，從而特異識(shí)別并殺死腫瘤細(xì)胞(Dillman,"AntibodyThe啤y,"PriiidplesofCancerBiotherapy，01dham(ed.〉RavenPress,Ltd.,NewYork,1987)。但是，困難在于大多數(shù)單克隆抗體為鼠源，這樣對(duì)鼠抗體的高度敏感性限制了其的有效性，尤其是在重復(fù)治療后。常見(jiàn)的副作用包括發(fā)熱、出汗和寒戰(zhàn)、皮滲、關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)麻痹。現(xiàn)有方法的另外一個(gè)難點(diǎn)是，局部復(fù)發(fā)及局部疾病的控制仍然是治療惡性胂瘤的一個(gè)主要挑戰(zhàn)。特別地，每年有總數(shù)為630,000的患者(美國(guó))在疾病出現(xiàn)時(shí)疾病已定位(沒(méi)有遠(yuǎn)距離遷移傳4番的跡象)；其代表了64%所有被-珍斷為惡性腫瘤的患者(不包括非黑瘤皮膚癌或原位癌)。對(duì)這些患者的大多數(shù)而言，外科切除是治愈的最主要的機(jī)會(huì)，并且的確有428,000患者在最初治療后會(huì)治愈。不幸的是，202,000位患者(即32%的患者疾病已確定)在最初治療后會(huì)復(fù)發(fā)。在這些復(fù)發(fā)者中，每年有133，000人是由于疾病的局部復(fù)發(fā)而引起的(占所有定位疾病患者的21%)。每年因疾病遠(yuǎn)距離遷移引發(fā)的數(shù)目是68,000人(占所有定位疾病的11%)。另外102，139位患者每年將由于不能控制疾患的局部發(fā)展而死亡。這一問(wèn)題在乳腺癌中更明顯，其在美國(guó)每年影響186，000個(gè)婦女并且其的死亡率經(jīng)50年仍保持不變。通過(guò)乳房徹底切除術(shù)、〗務(wù)飾的基本乳房切除術(shù)或者腫塊切除術(shù)進(jìn)行外科切除疾患是這種疾病的主要治療方法。不幸的是，單獨(dú)施用腫塊切除術(shù)的39%的患者會(huì)局部復(fù)發(fā)疾病，令人吃驚的是，發(fā)現(xiàn)25%的患者在切除的邊緣清楚地留有原始腫瘤(組織學(xué)上)。局部復(fù)發(fā)的90%發(fā)生在先前切除位點(diǎn)2厘米之內(nèi)。類似地，1991年，單單在北美就報(bào)道了逾113,000例死亡和238,000例新型肝轉(zhuǎn)移?；加懈无D(zhuǎn)移患者在發(fā)生肝損害后的平均生存時(shí)間僅為6.6個(gè)月。對(duì)肝性轉(zhuǎn)移的非外科治療包括系統(tǒng)化療、放射化學(xué)栓塞、肝動(dòng)脈化療及動(dòng)脈內(nèi)化療。但是，盡管這些治療可以暫時(shí)減小肝損害灶的大小(例如，系統(tǒng)化療和肝動(dòng)脈化療最初分別減小了損害的15—20%和80%),損害在不同程度又復(fù)發(fā)。外科切除肝轉(zhuǎn)移僅代表了治愈的可能性，但是這種方法僅對(duì)5%患有癌轉(zhuǎn)移的患者以及15—20%患有原發(fā)肝癌的患者是可能的。一種試圖治療腫瘤的具有有限成功率的方法是治療性栓塞。簡(jiǎn)而言之，通過(guò)向血管注入一種栓塞物而將滋生腫瘤的血管完全堵塞。已嘗試了"i午多物質(zhì)，包括自身性物質(zhì)例如脂肪、血塊和切下的肌肉碎片以及人造物質(zhì)如棉、毛、鋼球、塑料或玻璃球、肽粉、硅酮化合物、放射性顆粒、無(wú)菌吸收性明膠海綿(Sterispon,Gelfo腿)、氧化纖維素(oxycel)、鋼圈、乙醇、凍干人硬腦脊膜(Lyodura)、微原纖維膠原蛋白(Avitene)、膠原纖維(Tachotop)、聚乙烯醇海綿(PVA;Ivalon)、充盈鋇劑的硅球(Biss)和可分離的氣嚢。通過(guò)使用這類物質(zhì)可暫時(shí)減小肝轉(zhuǎn)移的大小，但是腫瘤一般卻以引起新的血管生長(zhǎng)成腫瘤而作為應(yīng)答。與腫瘤形成有關(guān)的一個(gè)問(wèn)題是形成抑制物質(zhì)通過(guò)體內(nèi)通道(如膽管、氣管、食管、脈管系統(tǒng)和尿道)的癌性阻斷。已開(kāi)發(fā)了一種裝置—斯坦特固定模以固定已被腫瘤或其它物質(zhì)阻塞的開(kāi)放通道。普通斯坦特固定;f莫的代表性的例子包括Wall斯坦特固i;f莫、Streckers斯坦特固定模、Gianturco斯坦特固定模和Palmaz斯坦特固定模。然而斯坦特固定模的主要問(wèn)題是它們不能阻止胂瘤或炎性物質(zhì)通過(guò)斯坦特固定模的小間隙向內(nèi)生長(zhǎng)。如果這種物質(zhì)到達(dá)斯坦特固定模的內(nèi)部并且損害斯坦特固定模腔，其可以導(dǎo)致插入斯坦特固定模的體內(nèi)通道的阻塞。此外，體內(nèi)存在斯坦特固定?？梢哉T導(dǎo)反應(yīng)性或炎性組織(例如血管、成纖維細(xì)胞和白細(xì)胞)進(jìn)入斯坦特固定才莫腔，從而導(dǎo)致斯坦特固定才莫部分或全部阻塞。本發(fā)明提供了適用于治療癌癥及其它血管生長(zhǎng)依賴性疾病的組合物和方法，其致力于有關(guān)上述討論的問(wèn)題，并且進(jìn)一步提供了其它片目關(guān)的廿C點(diǎn)。簡(jiǎn)而言之，本發(fā)明提供了抗血管生長(zhǎng)組合物以及使用該組合物治療癌癥和其它血管生長(zhǎng)依賴性疾病的方法和裝置。本發(fā)明一方面提供了含有(a)—種抗血管生長(zhǎng)因子和(b)—種聚合物栽體的組合物(此后稱為"抗血管生長(zhǎng)組合物")。許許多多的分子可用作本發(fā)明范圍內(nèi)的抗血管生長(zhǎng)因子，包括例如抗侵襲因子、視黃酸及其衍生物、紅豆杉醇、紅豆杉醇類似物及紅豆杉醇衍生物、包括蘇拉明、金屬蛋白酶-l的組織抑制劑、金屬蛋白酶-2的組織抑制劑、纖溶酶原抑制物激活劑-l和纖溶酶原抑制物激活劑-2。類似地，也可使用許許多多的聚合物載體，代表性的例子有與40%乙烯乙酸酯交聯(lián)的聚(乙烯乙酸乙烯酯)、聚(乳酸-聯(lián)-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯聚乳酸、與40%乙烯乙酸酯交聯(lián)的聚(乙烯乙酸乙烯酯)及聚乳酸的共聚物和聚乳酸及聚己內(nèi)酯的共聚物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例是組合物的平均粒度為15至200^m。本發(fā)明另一方面提供了栓塞血管的方法，其包括將治療活性量的抗血管生長(zhǎng)組合物釋入血管中(如上所述)，這樣有效地堵塞了血管。其中一個(gè)實(shí)例是，將抗血管組合物釋入滋生腫瘤的血管中。本發(fā)明另外還提供了包括管狀結(jié)構(gòu)、表面用一種或多種抗血管生長(zhǎng)組合物的斯坦特固定模。本發(fā)明也提供了擴(kuò)充體內(nèi)通道腔的方法，其包括將斯坦特固定模插入通道，固定膜一般具有管狀結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)的表面包衣有如上所述的抗血管生長(zhǎng)組合物，這樣通道就4皮擴(kuò)充。本發(fā)明的各種實(shí)例中，提供了包括將膽斯坦特固定模插入膽管而消除膽梗阻的方法；將尿道斯坦特固定模插入尿道而消除尿道梗阻的方法；將食道斯坦特固定模插入食道而消除食道梗阻的方法；將氣管/支氣管斯坦特固定^f莫插入氣管或支氣管而消除氣管/支氣管梗阻的方法。在每一個(gè)實(shí)例中，斯坦特固定^f莫一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用如上所述的抗血管生長(zhǎng)組合物包衣。本發(fā)明另一方面還提供了治療腫瘤切除部位的方法，其包括將上述抗血管生長(zhǎng)組合物施于切除胂瘤后的切除邊緣，這樣就抑制了癌癥的局部復(fù)發(fā)及該部位新血管的形成。本發(fā)明還提供了治療角膜新血管形成的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)組合物施于上述角膜，這樣就抑制了血管的形成。其中一個(gè)實(shí)例中，抗血管組合物進(jìn)一步包括一種局部皮質(zhì)甾類化合物。本發(fā)明另一方面提供了抑制患有非致瘤性血管生長(zhǎng)依賴疾病患者血管生長(zhǎng)的方法，其包括對(duì)患有非致瘤性血管生長(zhǎng)依賴性疾病的患者給予治療有效量的含有紅豆杉醇的組合物，這樣就抑制了新的血管的形成。另一方面，本發(fā)明提供了在非致瘤性血管生長(zhǎng)依賴性疾病中使用栓塞血管的方法，其包括將治療有效量的含有紅豆杉醇的組合物轉(zhuǎn)運(yùn)至血管中，這樣就有效地阻塞了血管。本發(fā)明另一方面提供了擴(kuò)充體內(nèi)通道腔的方法，其包括將斯坦特固定模插入通道中，該斯坦特固定模一般具有管狀結(jié)構(gòu)，并且結(jié)構(gòu)的表面包衣有含紅豆杉醇的組合物，這樣通道就被擴(kuò)充。在本發(fā)明各種實(shí)例中，提供了包括將膽斯坦特固定模插入膽管而消除膽梗阻的方法；將尿道斯坦特固定才莫插入尿道而消除尿道梗阻的方法；將食道斯坦特固定模插入食道而消除食道梗阻的方法；將氣管/支氣管斯坦特固定模插入氣管或支氣管而消除氣管/支氣管梗阻的方法。在每一個(gè)實(shí)例中，斯坦特固定模一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用含有紅豆杉醇的組合物包衣。本發(fā)明另一方面還提供了治療腫瘤切除部位的方法，其包括將含紅豆杉醇的組合物施于切除腫瘤后的切除邊緣，這樣就抑制了癌癥的局部復(fù)發(fā)及該部位新血管的形成。本發(fā)明還提供了治療角膜新血管形成的方法，其包括將治療有效量的含紅豆杉醇的組合物施于上述角膜，這樣就抑制了新血管的形成。本發(fā)明另一方面還提供了藥用產(chǎn)品，其包括(a)紅豆杉醇(在容器中)及(b)與容器有關(guān)的一個(gè)由政府機(jī)構(gòu)許可的關(guān)于藥物的生產(chǎn)、使用和銷售的通告，該通告表明有關(guān)機(jī)構(gòu)同意將紅豆杉醇用于人用或獸用來(lái)治療非致瘤性血管生長(zhǎng)依賴性疾病。簡(jiǎn)而言之，聯(lián)邦法律要求一種用于治療人體的藥劑必須獲得聯(lián)邦政府機(jī)構(gòu)的許可。實(shí)施職責(zé)(美國(guó))由FoodandDmgAdministration決定，其頒布了保證這種許可的適當(dāng)規(guī)則，詳見(jiàn)21U.S.C.g§301-392。在42U.S.C.s262下也提供了含有來(lái)源于動(dòng)物組織產(chǎn)品的生物材料的規(guī)則。大多數(shù)國(guó)家要求類似的許可，盡管每個(gè)國(guó)家的規(guī)則有所不同。本發(fā)明的這些方面在參考了以下細(xì)節(jié)描述及附圖后會(huì)更明顯。此外，夢(mèng)比-物，并且其作為參考。圖1A表示第6天的無(wú)殼蛋培養(yǎng)物圖。圖1B是用立體顯微鏡對(duì)活的未染色毛細(xì)管的一個(gè)數(shù)字轉(zhuǎn)換計(jì)算機(jī)成^f象(1040x)。圖1C為一個(gè)腐蝕模型，其表示由較大的血管提供的CA]V^鼓脈管系統(tǒng)(箭頭；1300x)。圖lD是橫向切開(kāi)CAM的一個(gè)0.5mm厚的塑性部分(光學(xué)顯微鏡水平記錄)。本圖顯示了CAM的組成，包括外部的雙層外胚層(Ec)、具有毛細(xì)管(箭頭)和散在外膜細(xì)胞的中胚層(M)以及單層內(nèi)胚層(En)(400x)。圖1E是一個(gè)電子顯微鏡水平(3500x)圖，其中顯示出典型的毛細(xì)管結(jié)構(gòu)(薄壁內(nèi)皮細(xì)胞，箭頭)和相關(guān)的外膜細(xì)胞。圖2A、2B、2C及2D是4個(gè)不同的未染色CAM在接觸紅豆杉醇48小時(shí)后的系列數(shù)字化成像。圖3A、3B及3C是在無(wú)血管區(qū)于3個(gè)不同位置通過(guò)紅豆杉醇處理的CAM橫向切開(kāi)的0.5mm塑性部分系列圖。圖4A。4B及4C是電子顯微攝影拍攝到的分別類似于上述圖3A、3B及3C部位的系列圖。圖5是一個(gè)通過(guò)(10mg蘇拉明鈉結(jié)合到5%PVA中的5%ELVAX)個(gè)數(shù)表達(dá)的微球粒度條形分布圖。圖6是一個(gè)通過(guò)(10mg蘇拉明鈉結(jié)合到5%PVA中的5%ELVAX)重量表達(dá)的孩i球粒度條形分布圖。圖7表示蘇拉明鈉在lml5%ELVAX中的包嚢重量線性圖。圖8表示蘇拉明鈉在ELVAX中的包嚢百分比線性圖。圖9表示含有10mg蘇拉明鈉(在含有10%氯化鈉的5免PVA中制備)的5%ELVAX微球粒度分布條形圖。圖10表示含有10mg蘇拉明鈉(在含有10%氯化鈉的5%PVA中制備)的5y。重量的PLL微球粒度分布條形圖。圖ll表示含有10mg蘇拉明鈉(在含有10%氯化鈉的5呢PVA中制備)的5y。個(gè)數(shù)的PLL微球粒度分布條形圖。圖12表示蘇拉明鈉釋放時(shí)間線性圖。圖13表示肝腫瘤栓塞的代表性實(shí)例圖。圖14表示用本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物包衣的代表性斯坦特固定模插入圖。圖15A^示在微球聚集時(shí)EVA:PLA混合比例的影響圖。圖15B是一個(gè)掃描電子顯微;f聶影圖，其表示出"小"微球的大小。圖15C是一個(gè)掃描電子顯孩支攝影圖，其表示出"大"微球的大小。圖15D表示于在體外紅豆杉醇從0.6免w/v裝栽紅豆杉醇的50:50EVA:PLA聚合物混合物微球中釋放入于37r磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.4)中的時(shí)間圖。圓圈為"小"顆粒的微球，黑點(diǎn)是"大"顆粒的拔i球。圖15E是一個(gè)CAM圖，其表示紅豆杉醇從微球("MS")釋放的結(jié)果。圖15F是15E在放大倍數(shù)的類似圖。圖16表示從含有1%、2%、5%或10%紅豆杉醇的聚己內(nèi)酯微球到磷酸鹽緩沖鹽水中(的釋放速率圖。圖16B表示用對(duì)照組微球處理的CAM圖。圖16C表示用裝載5免紅豆杉醇的微球處理的CAM圖。圖17A及17B分別表示紅豆杉醇從EVA薄膜的釋放圖及殘留在同一薄膜中紅豆杉醇百分?jǐn)?shù)的時(shí)間圖。圖17C表示不含紅豆杉醇時(shí)EVA7F127薄膜膨脹的時(shí)間圖。圖17D表示不含紅豆杉醇時(shí)EVA/Span80薄膜膨脹的時(shí)間圖。圖17E表示不同EVA/F127混合物的應(yīng)力對(duì)張力曲線圖。圖18A和l犯表示PCL/MePEG聚合物混合物的熔點(diǎn)圖(MePEG在制劑中的％)(圖18A)，APCL糊劑在60^:開(kāi)始固化時(shí)所需時(shí)間的增加百分?jǐn)?shù)(MePEG在制劑中的重量)(l犯)。圖18C表示不同PCL/MePEG聚合物混合物的脆性圖。圖18D表示不同MePEG濃度的聚合物混合物百分重量變化時(shí)間圖。圖18E表示紅豆杉醇從裝栽l免紅豆杉醇的不同聚合物混合物中的釋放速率時(shí)間圖。圖18F和18G表示不同量紅豆杉醇對(duì)從20%MePEG/PCL聚合物中釋放紅豆杉醇總量的影響。圖18H表示MePEG對(duì)MePEG/PCL聚合物抗拉強(qiáng)度的影響。圖19A^示CAM上的對(duì)照組熱糊(未帶有)圖。圖19B表示CAM上的帶有20%紅豆杉醇的熱糊圖。圖20A和20B是兩個(gè)用對(duì)照組熱糊(未帶有)處理CAM腫瘤的圖。圖20C和20D表示兩個(gè)用帶有紅豆杉醇熱糊處理CAM腫瘤的圖。圖21A表示紅豆杉醇/PCL對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。圖21B和21C表示對(duì)照組、帶有10%及20%紅豆杉醇熱糊對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。圖22A表示注射PBS的關(guān)節(jié)滑膜。圖22B表示注射纟敫球的關(guān)節(jié)滑膜。圖22C表示注射PBS的關(guān)節(jié)軟骨，圖22D表示注射微球的關(guān)節(jié)軟骨。如上所述，本發(fā)明提供了使用抗血管生長(zhǎng)因子的方法及組合物。簡(jiǎn)而言之，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，抗血管生長(zhǎng)因子應(yīng)理解為包括任何蛋白質(zhì)、肽、可用于抑制血管生長(zhǎng)的化學(xué)或其它分子?？梢岳酶鞣N方法確定給定因子的抗血管生長(zhǎng)活性，包括例如雞絨毛膜尿囊膜("CAM")測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，如下述實(shí)施例2A和2C中所述，除去新鮮雞受精卵的部分蛋殼，將待檢測(cè)的含有抗血管生長(zhǎng)因子試樣的甲基纖維素盤(pán)置于膜上。幾天后(例如48小時(shí))，待測(cè)試樣的血管生長(zhǎng)抑制性即可通過(guò)包圍甲基纖維素盤(pán)區(qū)域的雞絨毛膜尿嚢膜的顯影來(lái)確定。血管生長(zhǎng)的抑制性也可以定量確定，例如通過(guò)將包圍甲基纖維素盤(pán)的血管的數(shù)量和大小與一個(gè)對(duì)照甲基纖維素盤(pán)比較。.明界測(cè)定中新血管的形成。也可使用各種測(cè)定方法來(lái)確定體內(nèi)抗血管生長(zhǎng)因子的有效性，包括例如已jUI用于此目的的鼠模型(見(jiàn)Roberstonetal.,Cancer.Res.51:1339-1344,1991)。此外，與本發(fā)明不同方面有關(guān)的各種代表性體內(nèi)測(cè)定詳細(xì)描述于下述實(shí)施例5至7及17至19。如上所述，本發(fā)明提供了含有抗血管生長(zhǎng)因子和聚合物載體的組合物。簡(jiǎn)而言之，在本發(fā)明范圍內(nèi)可使用許許多多的抗血管生長(zhǎng)因子。代表性的例子包括抗侵襲因子、視黃酸及其衍生物、紅豆杉醇、含有蘇拉明、金屬蛋白酶-l的組織抑制劑、金屬蛋白酶-2的組織抑制劑、纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑-I和纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑-2的物質(zhì)。這些以及其它抗血管生長(zhǎng)因子將在下面詳細(xì)討論。簡(jiǎn)而言之，已知了從軟骨萃取物中制備的抗侵襲因子或者"AIF"含有抗新血管生長(zhǎng)的成分。這些成分包括7種低分子量的蛋白質(zhì)(<50,000)(Kue加erandPauli,血管生長(zhǎng))"inDevelopmentoftheVascularSystem,PitmaiiBooks(CibaFoiindationSymposiuml00),第163-173頁(yè),1983)，其包括對(duì)各種蛋白酶有抑制作用的各種蛋白質(zhì)(Eisenteinetal,Am丄Patho1.81:337-346,1975;Langeretal.,Science193:70-72,1976;andHortonetal.,Sciencel99:1342-1345,1978)。適用于本發(fā)明范圍內(nèi)的AIF可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備(例如Eisenteinetal，supra;KuettnerandPauli,supra;andLangeretal.,supra)。AIF的純化成分例如軟骨來(lái)源的抑制劑("CDI")(見(jiàn)Mosesetal.,Science248:1408-1414,1990)在本發(fā)明范圍內(nèi)也易于制備和使用。視黃酸改變了細(xì)胞外基質(zhì)組分的代謝，從而抑制血管生長(zhǎng)。可以使用脯氨酸類似物的加成物、血管穩(wěn)定甾類化合物或肝素來(lái)協(xié)同增加轉(zhuǎn)視黃酸的抗血管生長(zhǎng)作用。在本發(fā)明范圍內(nèi)也可使用視黃酸及其4汙生物，其易于從商業(yè)途徑獲得，包括例如SigmaChemicalCo.(#R2625)。紅豆杉醇是一種高度衍生化的雙萜(WanietalJ.Am.Chem.Soc.93:2325,1971)，其從成熟干燥的TaxusBrevifolia(Pac迅cYew.)和Science60:214-216,1993)的樹(shù)皮獲得。一般地，紅豆杉醇的作用是通過(guò)結(jié)合微管蛋白形成異常有絲分裂紡錘體來(lái)穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu)。"紅豆杉醇"(在此應(yīng)理解為包括紅豆杉醇的類似物和衍生物，例如漿果赤霉素和taxotere也可以利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)制備(見(jiàn)WO94/07882,WO94/07881,WO94/07880,WO94/07876,WO93/23555,W093/10076，美國(guó)專利5294637,5283253,5279949,5274137,5202448,5200534,5229526和EP590267)或由各種商業(yè)途徑獲得，包括例如SigmaChemicalCo.，St.louis,Missouri(T7402-來(lái)自Taxusbrevifolia)。蘇拉明是一個(gè)聚磺化萘基脲化合物，其一般用作殺錐蟲(chóng)劑。簡(jiǎn)而言之，蘇拉明阻斷了結(jié)合各種生長(zhǎng)因子例如血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子("PDGF")、表皮生長(zhǎng)因子("EGF")、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子("TGF-e")、類胰島素生長(zhǎng)因子("IGF-1")、成纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子("eFGF")的特異細(xì)胞表面。蘇拉明可以按照已知技術(shù)制備，或者由各種商業(yè)途徑獲得，包括例如MobayChemicalCo.,NewYork(J^LGagliardietal.,CancerRes.52-5073-5075,1992;andCoffey,Jr.,etal.,J.ofCellPhys.l32:143-148,1987)。金屬蛋白膝-l組織抑制劑("TIMP-1")分泌MPT酶的內(nèi)皮細(xì)胞分泌。TIMP為糖基化，且分子量為28.5kDa。TIMP-1通過(guò)結(jié)合到活化的金屬蛋白酶上調(diào)節(jié)血管生長(zhǎng)，因此抑制了血管向細(xì)胞外基質(zhì)侵襲。金屬蛋白酶-2組織抑制劑("TIMP-2")也可用來(lái)抑制血管生長(zhǎng)。簡(jiǎn)而言之，TIMP-2是一個(gè)21kDa的非糖基化蛋白質(zhì)，其可以活化的或潛伏的酶原形式結(jié)合到金屬蛋白酶上。TIMP-〗和TIMP-2都可以從商業(yè)途徑例如Synergen、Boulder和Colorado獲得。纖溶酶原激活物抑制劑-l(PAI-1)是一個(gè)存在于血小板中的50kDa的糖蛋白，其可通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞和肌細(xì)胞合成。PAI-1在內(nèi)皮的嗜磁/f則抑制t-PA和尿激酶纖溶酶原激活物，并且還調(diào)節(jié)纖維蛋白溶解過(guò)程。纖溶酶原激活物抑制劑-2(PAI-2)—般僅發(fā)現(xiàn)于特定情況下的血液中，例如懷孕和腫瘤存在時(shí)。簡(jiǎn)而言之，PAI-2是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌的56kDa的蛋白質(zhì)。認(rèn)為其可調(diào)節(jié)纖維蛋白溶解活性，并且特別抑制尿激酶纖溶酶原激活物和組織纖溶酶原激活物，因此防止了纖維蛋白溶解。在本發(fā)明的范圍內(nèi)也可使用許許多多其它抗血管生長(zhǎng)因子。代表性的例子包括血小板因子4(SigmaChemicalCo.,弁F1358);硫酸魚(yú)精蛋白(緋精蛋白)(SigmaChemicalCo.，#P4504);硫酸殼多糖糸亍生物(由queencrabshells制備)(SigmaChemicalCo.，弁C3641;Murataetal.，CancerRes.51:22-26,1991);硫酸多糖肽聚糖配合物(SP-PG)(此化合物的功能可以通過(guò)甾類化合物如',激素和枸櫞酸三笨氧胺的存在而力口強(qiáng))；Staurosporine(SigmaChemicalCo"弁S4400);基質(zhì)代謝調(diào)節(jié)劑，包括例如脯氨酸類似物([(L氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸(1^0八)(31^加(:1^11^31(^0.,#A0760)),順羥基脯氨,使，d,L-3,4-去氫脯氨酸(SigmaChemicalCo.,弁D0265),硫脯氨酸(SigmaChemicalCo.:#T0631)],a,a陽(yáng)二吡p絲(SigmaChemicalCo.,弁D7505)，p-氨基丙腈富馬酸(SigmaChemicalCo.,弁A3134)]};MDL27032(4畫(huà)丙基-5-(4-吡啶基)-2(3H)-惡哇酮；MerionMerrelDowResearchlnstitute);—::丄甲p萊呤(SigmaChemicalCo.,弁A6770;Hirataetal.,ArthritisaiidRheuii、atism32:l-65-1073,1989);Mitoxantrone(PoliveriniandNovak,Biochem.Biophys.Res.Comm.140:901-907);肝素(Folkman,Bio.Phar.34:905-909，1985;SigmaChemicalCo.,弁P8754);干擾素(如SigmaChemicalCo.,弁13265);2巨球蛋白血清(SigmaChemicalCo.，弁M7151);ChIMP-3(Pavloffetal.，丄Bio.Chem.267:17321-17326,1992);抑糜蛋白酶素(SigmaChemicalCo.,#C7268;Tomkinsonetal.,BiochemJ.286:475-480,1992);p-環(huán)糊精十四硫酸酯(Tetradecasulfate)(SigmaChemicalCo.#C4767);Eponemycin;雌氮芥(可從Sigma得到;WangandStearnsCancerRes.48:6262-6271,1988);煙曲霉素(SigmaChemicalCo.,弁F6771;加拿大專利2024306號(hào)；Ingberetal:，nature348:555-557,1990);疏代蘋(píng)果酸金鈉("GST"，SigmaG4022;MatsubaraandZiff,J.Clin.Invest.79:1440-1446,1987);(D-青霉胺("CDPT";SigmaChemicalCo.,弁P4875orP5000(HCl));e-l-抗膠原蛋白酶-血清；a2-抗纖維蛋白溶酶(SigmaChem.Co.:A0914;Holmesetal.,J.Biol.Chem.262(4):1659-1664,1987);蒽雙。米月宗(NationalCancerlnstitute);Lobenzarit二鈉(N-(2)-羧笨基-4-氯代氨茴酸二鈉或"CCA";Takeuchietal.,AgentsActions36:312-316,1992);酞胺派咬酮，Angiostatic甾類化合物，AGM-1470，羧氨基咪喳，金屬蛋白酶抑制劑例如BB94和肽CDPGYIGSR-NH2(SEQUENCEIDNO.1)(IwakiGlass,Tokyo,Japan)。本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物可另外含有除抗血管生長(zhǎng)因子和聚合物載體以外的許多化合物。例如，本發(fā)明的抗血管組合物也可以(在本發(fā)明的某些實(shí)例中)含有一種或幾種抗生素、抗炎劑、抗病毒劑、抗真菌劑和/或抗原蟲(chóng)劑。在此所迷組合物中抗生素的代表性例子包括青霉素；頭孢菌素如頭孢羥氨芐、頭孢唑啉、頭孢氯；氨基糖甙類如慶大霉素和妥布霉素；磺胺類如新諾明；和滅滴靈?？寡讋┑拇硇岳影ㄧ揞惢衔锶鐝?qiáng)的松、強(qiáng)的申i^龍、氫化可的松、促腎上腺皮質(zhì)激素和柳氮磺胺吡啶；非甾類抗炎藥("NSAID")如阿司匹林、布洛芬、萘普生、笨氧苯丙酸、消炎痛和保泰杠、抗病毒劑的代表性例子包括無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷、ganciclovir和zidovudine,抗真菌劑的代表性例子包括致霉菌素、酮咪惡咪唑、氟胞嘧啶、雙氯苯咪唑和克霉唑。抗原蟲(chóng)劑的代表性例子包括羥乙磺酸戊烷脒、奎寧、氯喹和甲氟喹。本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物也可含有一種或幾種激素例如甲狀腺激素、雌激素、去氫表雄酮、可的松和/或生長(zhǎng)素，其它生物活性分子例如胰島素及TH2(如白細(xì)胞介素-2,-12和-15),7干擾素或TH2(如白細(xì)胞介素-4,和-10)細(xì)胞因子。本發(fā)明的抗血管組合物也可含有其它成分例如表面活性劑(親水或疏水，見(jiàn)實(shí)施例13)、抗腫瘤或化療藥物(例如5-氟^_嘧啶、長(zhǎng)春堿、doxymbicin、阿霉素和三笨氧胺)，放射性藥物(例如Cu-64,Ga-67,Ga-68,Zr-89,Ru-97,Tc-99m,Rh-105,Pd-109,In-lll,]-123,I-125,Re-186,Re-188,Au-198,Au-199,Pb-203，At-211,Pb-212和Bi-212)或者毒素(例如蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、白喉毒素、霍亂毒素、gelonin、美洲商陸抗病毒蛋白、tritin、志賀菌屬毒素和假單胞菌屬外毒素A)。如上所述，本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物包括一種抗血管生長(zhǎng)因子和一種聚合物載體。除了以上討論的許多抗血管生長(zhǎng)因子和其它化合物外，本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物還包括各種聚合物載體，例如包括生物可降解的和生物不可降解的組合物。生物可降解的組合物的代表性例子包括白蛋白、明膠、淀粉、纖維素、葡聚糖、多糖、血纖維蛋白原、聚(d,l丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-co-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(羥丁酸)、聚(碳酸烷基酯)和聚(原酸酯)(見(jiàn)Ilhim,L.,Davids,S.S.(eds.)"PolymersincontrolledDrugDelivery"Wright,Bristol,1987;Arshady,J.ControlledRelease4:155-0180,1986)。非降解聚合物的代表性例子包括EVA共聚物、硅氧烷橡膠和聚(甲基丙烯酸甲酯)。特別優(yōu)選的聚合物栽體包括EVA共聚物(例如ELVAX40,與40%乙烯基乙酸酯交聯(lián)的聚(乙晞乙酸乙烯酯)；DuPont)，聚(乳酸-聯(lián)-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚乳酸、與40%乙烯基乙酸酯和聚乳酸交聯(lián)的聚(乙烯乙酸乙烯酯)共聚物以及聚乳酸和聚己內(nèi)酯的共聚物。可以使用各種形式的聚合物載體，包括例如毫微球或微球、棒型裝置、丸、板或膠嚢(見(jiàn)如0000161^31.,六111丄1105.1101111.43:1454-1461,1986丄angeretal.,"大分子從聚合物中的控釋"，inBiomecicalpolymers,Polymericmaterialsandpharmaceuticalsforbimedicaluse,Goldberg,E.P.,Nakagim,A.(eds.)AcademicPress,pp.11-137,1980;RMneetal.,J.Pliarm.Sci.69:265-270,1980;Brownetal.,J.Pharai.Sci.72:I181-1185,1983;andBawaetal.,J.ControlledReleasel:259-267，1985)。優(yōu)選地，本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物(包括一種或多種抗血管生長(zhǎng)因子和聚合物載體)可以以適用于預(yù)想用途的方式使用。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)組合物應(yīng)是生物相容性的，并且經(jīng)幾周至月余的時(shí)期應(yīng)釋放一種或多種的抗血管生長(zhǎng)因子。此外，本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物優(yōu)選經(jīng)數(shù)月應(yīng)是穩(wěn)定的，并且能在無(wú)菌條件下生產(chǎn)和保留。在本發(fā)明某些方面，抗血管生長(zhǎng)組合物的粒度范圍可以按照特殊需要從毫微球到微球不等(例如從0.1(xm至500uim)。例如，當(dāng)用于肺瘤栓塞時(shí)(如下討論)，一般優(yōu)選抗血管生長(zhǎng)組合物為15至500jxm之間的毫微球，優(yōu)選15至200jxm，更優(yōu)選25至150(xm。這種毫微粒易用作"噴霧劑"，其固化為膜或包衣。毫微粒(也稱作"毫微球")可以制備成不同的粒度，例如從0.1uum至3(xm，從10,jlm至30(xm,以及乂人3(Vm至100jxm(見(jiàn)實(shí)施例8)。如本文所公開(kāi)的，抗血管生長(zhǎng)組合物也可以制備成其它用途。例如，為了將抗血管生長(zhǎng)組合物用于角膜，本發(fā)明的組合物可以結(jié)合到聚合物中成為毫微粒(見(jiàn)kreuterJ.ControlledRelease16:169-176,1991;CouweurandVauthier,J.ControlledReleasel7:187-198,1991)。這種毫微粒易用作"噴霧劑"，其固化為膜或包衣。毫微粒(也稱作"毫微球")可以制備成不同的粒度，例如從0.1wm至3,xm，從10^m至3(Vm,以及從30^m至100uim(見(jiàn)實(shí)施例8)。本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物也可以制備成各種"糊劑"或凝月交型。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例提供了在一定溫度(例如高于37t的溫度，如40r、45<c、50t、55t或60t)液化并且在另一溫度(如體溫或低于37r的任意溫度)固化或半固化的抗血管生長(zhǎng)組合物。這種"熱糊劑"可通過(guò)本文的公開(kāi)易于制備(見(jiàn)實(shí)施例10和14)。本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物可以形成膜。優(yōu)選地，這種膜的厚度一般小于5，4，3,2或lmm，更優(yōu)選厚度小于0.75mm或0.5mm，尤為優(yōu)選厚度小于50(Vm至100wm。這種膜優(yōu)選具有良好抗拉強(qiáng)度(如大于50，優(yōu)選大于IOO,更優(yōu)選大于150或200N/cm2)的柔韌性，良好的粘合性(即，易于粘合到潮濕或濕表面上)，并且可以控制滲透性。這種膜的代表性實(shí)例見(jiàn)下面的實(shí)施例(如實(shí)施例13)。將抗血管生長(zhǎng)組合物結(jié)合到聚合物載體上的代表性實(shí)例詳見(jiàn)下面的實(shí)施例3，4和8-15。動(dòng)樂(lè)jcf全塞除了上述的組合物，本發(fā)明還提供了使用上述抗血管生長(zhǎng)組合物的各種方法。特別地，本發(fā)明其中一方面提供了栓塞血管的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)組合物(如上所述)釋入血管中，這樣就有效地阻塞了血管。適于阻塞血管的治療有效劑量可以通過(guò)如下的7>開(kāi)確定，如實(shí)施例6所述。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)例中，將抗血管生長(zhǎng)組合物釋入滋養(yǎng)腫瘤的血管中(見(jiàn)圖13)。簡(jiǎn)而言之，有許多需要對(duì)器官或區(qū)域減少或切斷血液供給的臨床情況(如出血、腫瘤生長(zhǎng))。正如下面詳細(xì)描述的那樣，其通過(guò)一種選擇性定位導(dǎo)管將本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物注射到所需血管中而實(shí)現(xiàn)(見(jiàn)圖13)。組合物通過(guò)血流直到其楔入脈管系統(tǒng)，因此物理(或化學(xué))阻塞了血管。對(duì)選擇區(qū)域減少或切斷血流導(dǎo)致了梗塞(細(xì)胞由于氧和養(yǎng)料供應(yīng)不足而死亡)或者從受損血管減少血液流失。為了用于栓塞治療，本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物優(yōu)選為無(wú)毒、可形成血栓并易于沿血管導(dǎo)管注射、不透射線、迅速及持久的作用、無(wú)菌并在生產(chǎn)中可以是不同的形狀或大小。此外，組合物優(yōu)選可緩慢(理想為經(jīng)過(guò)幾周至月余的時(shí)間)釋放抗血管生長(zhǎng)因子。特別優(yōu)選的抗血管生長(zhǎng)組合物在注入血管后應(yīng)具有15—200jxm的粒度。優(yōu)選地，其在溶液中或注射時(shí)不應(yīng)聚結(jié)成大顆粒。此外，優(yōu)選的組合物在#_用前的貯存過(guò)壽呈中不應(yīng)改變形狀或物理性質(zhì)。栓塞治療以至少3種基本方式用于腫瘤的治療(1)腫瘤的絕對(duì)治療(通常為良性)；(2)術(shù)前栓塞；及(3)治標(biāo)栓塞。簡(jiǎn)而言之，良性胂瘤有時(shí)通過(guò)單獨(dú)栓塞治療即可成功治愈。這種腫瘤的例子包^"血管源的簡(jiǎn)單腫瘤(如血管瘤)，內(nèi)分泌腫瘤例如甲狀旁腺瘤和良性骨瘤。對(duì)于其它腫瘤而言(例如腎1|_癌)，在手術(shù)切除前^t小時(shí)或數(shù)天應(yīng)施用術(shù)前栓塞以減少手術(shù)性失血、縮短手術(shù)時(shí)間并且減少由于對(duì)腫瘤的外科手術(shù)而造成的活惡性細(xì)胞擴(kuò)散的危險(xiǎn)。許多腫瘤可以成功地進(jìn)行術(shù)前栓塞，例如鼻咽瘤、頸靜脈球瘤、腦脊膜瘤、化學(xué)感受器瘤和迷走神經(jīng)瘤。栓塞也可用作治療不宜手術(shù)惡性腫瘤的主要方式來(lái)延長(zhǎng)晚期患者的生命。栓塞可通過(guò)減輕不良癥狀如出血、靜脈阻塞和氣管壓迫而顯著改善惡性腫瘤患者的生活質(zhì)量。遭受惡性內(nèi)分泌瘤體液影響(其中來(lái)自類癌瘤及其它內(nèi)分泌瘤如胰島素瘤和胰高血糖素瘤的轉(zhuǎn)移瘤可緩慢生長(zhǎng)，從而導(dǎo)致由于其產(chǎn)生的內(nèi)分泌綜合癥的巨大痛苦)的患者最受益于治標(biāo)腫瘤栓塞。一般地，使用本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物的栓塞治療不論其部位通常以相似的方法進(jìn)行。簡(jiǎn)而言之，通過(guò)沿插入照射x射線的動(dòng)脈或靜脈(依栓塞部位而定)的導(dǎo)管注入不透射線的造影劑首先進(jìn)行預(yù)栓塞區(qū)域的血管造影術(shù)(血管圖)。導(dǎo)管可以經(jīng)皮或者手術(shù)插入。然后通過(guò)從導(dǎo)管回流本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物檢塞血管，直至觀察到停止流動(dòng)。通過(guò)重復(fù)血管造影照片確證閉塞。栓塞治療通常導(dǎo)致含抗血管生長(zhǎng)因子的組合物分布在待治療腫瘤或血管團(tuán)塊的小間隙。阻塞動(dòng)脈腔的栓塞顆粒塊導(dǎo)致了供血閉塞。除此之外，抗血管生長(zhǎng)因子的存在阻止了供給腫瘤或血管團(tuán)塊的新血管的形成，提高了切斷血液供應(yīng)的失活作用。因此，很明顯許許多多的腫瘤可用本發(fā)明組合物栓塞。簡(jiǎn)而言之，腫瘤一般可分為兩類良性和惡性。在良性腫瘤中，細(xì)胞保持其各自特征，并且不以完全不能控制的方式分化。而且，腫瘤可定位同時(shí)不遷徙。在惡性腫瘤中，細(xì)胞變得無(wú)差異，對(duì);f幾體生長(zhǎng)和激素信號(hào)不應(yīng)答，并且以不可控制的方式增殖；腫瘤具有侵害性而且可傳4番到遠(yuǎn)部位(遷徙)。本發(fā)明的一個(gè)方面，肝轉(zhuǎn)移瘤(繼發(fā)性纟中瘤)可利用栓塞療法治療。簡(jiǎn)而言之，導(dǎo)管經(jīng)骨肱動(dòng)脈插入并在熒光屏檢查下通過(guò)動(dòng)脈系統(tǒng)深入肝動(dòng)脈。導(dǎo)管盡可能地深入到肝動(dòng)脈樹(shù)中以完全阻斷供給腫瘤的血管，同時(shí)盡可能多地剩出供給正常結(jié)構(gòu)的動(dòng)脈分支。理想的是其為肝動(dòng)脈分支，但是需要阻斷的也可以是末端為胃十二指腸動(dòng)脈開(kāi)端的整個(gè)肝動(dòng)脈，或者甚至是許多分離的動(dòng)脈，其依腫瘤的大小及其單獨(dú)的血液供應(yīng)而定。當(dāng)達(dá)到了所需的導(dǎo)管位置，經(jīng)動(dòng)脈導(dǎo)管注入抗血管生長(zhǎng)組合物(如上所述)栓塞動(dòng)脈直至需阻斷動(dòng)脈的血流停止，優(yōu)選觀察5分鐘后。經(jīng)導(dǎo)管注入不透射線的造影劑確證動(dòng)脈閉塞，并通過(guò)焚光屏檢查或X射線膠片證明先前充滿造影劑的血管不再如此。如上所述，良性及惡性腫瘤都可以用本發(fā)明組合物栓塞。良性肝腫瘤的代表性例子包括肝細(xì)胞腺瘤、海綿狀血管瘤和灶性小結(jié)增生(FocalNodularHyperplasia)。其它少見(jiàn)的通常沒(méi)有臨床表現(xiàn)的良性腫瘤也可以治療。其包括膽管腺瘤、膽管嚢腺瘤、纖維瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、間皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤和小結(jié)退化性增生(NodularRegenerativeHyperplasia)。惡性腫瘤一般分支為兩類原發(fā)性和繼發(fā)性。原發(fā)性胂瘤直接產(chǎn)生于發(fā)現(xiàn)其的組織。因此，原發(fā)性肝瘤最初源于組成肝組織的細(xì)胞(如肝細(xì)胞和膽嚢細(xì)胞)?？捎脛?dòng)脈栓塞治療的原發(fā)性肝癌的代表性例子包括肝細(xì)胞癌、膽管癌、血管肉瘤、嚢腺癌、鱗狀細(xì)胞癌和肝胚細(xì)胞瘤。繼發(fā)性胂瘤或轉(zhuǎn)移瘤是一種起源于機(jī)體的其它部位但已擴(kuò)散到遠(yuǎn)器官的腫瘤。轉(zhuǎn)移瘤的一般路徑是直接生長(zhǎng)入鄰接結(jié)構(gòu)，通過(guò)血管或淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散并沿組織平面和體內(nèi)間隙(腹膜液、腦脊液等)行進(jìn)。繼發(fā)性肝癌是癌癥患者最常見(jiàn)的死因之一，也是最常見(jiàn)的肝月中瘤形式。盡管實(shí)質(zhì)上任何癌都可能遷徙到肝臟，最可能擴(kuò)散到肝臟的腫瘤包括胃癌、結(jié)腸癌、贖J^癌、黑素瘤、肺腫瘤、口咽瘤和膀胱瘤、何杰金及非何杰金淋巴瘤、乳腺瘤、卵巢瘤和前列腺瘤。上述每一種原發(fā)性腫瘤都具有許多不同的可以通過(guò)動(dòng)脈栓塞治療的腫瘤類型(例如，有超過(guò)32種不同類型的卵巢癌)。如上所述，利用本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物的^全塞療法也可用于各種其它需要阻塞血管的臨床情況。本發(fā)明其中一方面，通過(guò)給予上述組合物之一可以治療動(dòng)靜脈畸形。簡(jiǎn)而言之，動(dòng)靜脈畸形(血管畸形)是指至少一種(最常見(jiàn)的是許多)動(dòng)脈和靜脈之間異常聯(lián)系的一類疾病，其導(dǎo)致了主要由血管組成的局部腫瘤樣團(tuán)塊。這種疾病可以是天生的，也可以是后天的。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，通過(guò)將導(dǎo)管經(jīng)股動(dòng)脈或肱動(dòng)脈插入并在熒光指導(dǎo)下深入喂養(yǎng)(feeding)動(dòng)脈而治療動(dòng)靜脈畸形。優(yōu)選導(dǎo)管盡可能地深入以完全阻斷血管畸形的供給，同時(shí)盡可能多地剩出供給正常結(jié)構(gòu)的動(dòng)脈分支(理想的是其為單個(gè)動(dòng)脈，但是通常需要阻斷的是許多分離的動(dòng)脈，其依血管畸形的程度及其單獨(dú)的血液供應(yīng)而定)。當(dāng)達(dá)到了所需的導(dǎo)管位置，每支動(dòng)脈可以用本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物栓塞。本發(fā)明另一方面，栓塞可以處理過(guò)量出血的情況。例如，月經(jīng)過(guò)多(行經(jīng)過(guò)多出血)可以通過(guò)子宮動(dòng)脈的松塞治療。簡(jiǎn)而言之，子宮動(dòng)脈是雙側(cè)內(nèi)髂骨動(dòng)脈的分支。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，將導(dǎo)管經(jīng)股動(dòng)脈或肱動(dòng)脈插入并在熒光指引下通過(guò)動(dòng)脈系統(tǒng)深入每個(gè)子宮動(dòng)脈。導(dǎo)管盡可能地深入以完全阻斷至子宮的血管，同時(shí)盡可能多地剩出供給正常結(jié)構(gòu)的動(dòng)脈分支。理想的是將每側(cè)的子宮動(dòng)脈栓塞，但是偶爾需要阻斷的是許多分離的動(dòng)脈，其依單獨(dú)的血液供應(yīng)而定。當(dāng)達(dá)到了所需的導(dǎo)管位置，每支動(dòng)脈可以給予上述抗血管生長(zhǎng)組合物進(jìn)行栓塞。類似地，動(dòng)脈栓塞可以在其它許多情況下進(jìn)行，包括例如急性出血、血管畸形、中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙和脾機(jī)能亢進(jìn)。將抗血管生長(zhǎng)組合物用于包衣斯坦特固定才莫的用途如上所述，本發(fā)明也提供了斯坦特固定^莫，其包括普通的管狀結(jié)構(gòu)(包括例如螺旋型)，其表面用上述的組合物包衣。簡(jiǎn)而言之，斯坦特固定;f莫是一種腳手架，通常為圓筒型，其可插入到由于疾病(如腫瘤向內(nèi)生長(zhǎng))而變窄的體內(nèi)通道內(nèi)(如膽管)，從而防止了通道的閉合或再閉合。斯坦特固定才莫通過(guò)物理性維持插入其的體內(nèi)通道壁的開(kāi)放而發(fā)揮作用。在本發(fā)明的范圍內(nèi)可使用各種斯坦特固定模，包括例如食道斯坦特固定模、血管斯坦特固定;f莫、膽管斯坦特固定模、胰管斯坦特固定模、輸尿管和尿道斯坦特固定模、淚管斯坦特固定模、咽鼓管斯坦特固定模、輸卯管斯坦特固定片^f口氣管/支氣管斯坦特固定模。斯坦特固定^f莫易于從市售獲得，或者按照熟知的^L術(shù)制造。斯坦特固定才莫代表性的例子包括描述于美國(guó)專利4776337中，題為"擴(kuò)張性腔內(nèi)移植片，移植擴(kuò)張性腔內(nèi)移植片的方法和裝置"；美國(guó)專利5176626，題為"內(nèi)置斯坦特固定模"；美國(guó)專利5147370,題為"用于中空體內(nèi)導(dǎo)管的鎳鈥金屬互化物斯坦特固定模"；美國(guó)專利5064435，題為"具有穩(wěn)定軸長(zhǎng)的自.身擴(kuò)張性修復(fù)術(shù)"；美國(guó)專利5052998,題為"內(nèi)置斯坦特固定模及使用方法"以及美國(guó)專利5041126,題為"血管內(nèi)斯坦特固定模及轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)"，以上所有作為本文的參考文獻(xiàn)?？梢杂酶鞣N方法將斯坦特固定4莫用本發(fā)明抗血管生長(zhǎng)組合物或抗血管生長(zhǎng)因子包衣，包括例如(a)將抗血管生長(zhǎng)組合物直接粘附到斯坦特固定模上(如用聚合物/藥物膜噴霧斯坦特固定模，或者將斯坦特固定模滴入聚合物/藥物溶液)，(b)用水明膠等可吸收抗血管生長(zhǎng)組合物(或上述抗血管生長(zhǎng)因子)的物質(zhì)包衣斯坦特固定才莫，(c)將抗血管生長(zhǎng)組合物包衣的絲(或聚合物本身形成絲)織入斯坦特固定模結(jié)構(gòu)中，(d)將斯坦特固定模插入含有或用抗血管生長(zhǎng)組合物包衣的套筒或篩網(wǎng)中，或者(e)用抗血管生長(zhǎng)組合物制造斯坦特固定才莫。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例中，組合物在貯存及插入時(shí)應(yīng)牢固地粘附在斯坦特固定才莫上，同時(shí)在其直徑由皺縮擴(kuò)張至膨脹時(shí)不應(yīng)從斯坦特固定模上掉下?？寡苌L(zhǎng)組合物優(yōu)選在貯存過(guò)程中、插入前或者在體內(nèi)膨脹后升溫至體溫時(shí)不應(yīng)降解。此外，其應(yīng)光滑、平整地包衣斯坦特固定才莫(抗血管生長(zhǎng)抑制物均勻分布，同時(shí)不改變斯坦特固定模的外形)。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)組合物應(yīng)均勻、可預(yù)見(jiàn)的、持續(xù)地將抗血管生長(zhǎng)組合物釋放入放置斯坦特固定模周圍的組織中。對(duì)于血管斯坦特固定模而言，除了上述性質(zhì)外，組合物不應(yīng)使斯坦特固定模形成血檢(造成血檢形成)，或者在血流中引起明顯的湍流(比未包衣的斯坦特固定模更易于引起這些現(xiàn)象)。本發(fā)明的另一方面提供了擴(kuò)張?bào)w內(nèi)通道腔的方法，其包括將斯坦特固定模插入通道，斯坦特固定模一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用抗血管生長(zhǎng)組合物(或單獨(dú)的抗血管生長(zhǎng)因子)包衣，這樣就擴(kuò)張了通道。各種實(shí)例如下所述，其中體內(nèi)通道腔被擴(kuò)張從而消除了膽管、食道.、氣管/支氣管、尿道或血管的阻塞。另外，代表性的實(shí)施例詳述于實(shí)施例7。一般地，斯坦特固定模不論部位或待治療的疾病都以類似的方式插入。簡(jiǎn)而言之，一般首先進(jìn)行插入前的檢查，通常為一種診斷性成像-內(nèi)成像，或者外科手術(shù)時(shí)直接觀察以確定斯坦特固定^^插入的準(zhǔn)確位置。然后將一導(dǎo)線經(jīng)損傷或預(yù)插入部位深入，其上穿過(guò)一個(gè)可使斯坦特固定^:莫以皺縮形式插入的轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管。一^:地，斯坦特固定?？梢詨嚎s'這樣其可經(jīng)小導(dǎo)管從小腔插入，然后在其預(yù)計(jì)的位置膨脹至較大的直徑。一旦膨脹后，斯坦特固定才莫.物理性迫使通道壁分開(kāi)，并維持其張開(kāi)狀態(tài)。這樣，其能經(jīng)小孔插入，然而仍可以維持在較大直徑的腔或通道。斯坦特固定才莫可以是自身膨脹(例如Wallstent和Gianturcostent)、球膨脹(如Palmaz斯坦特固定模和Strecker斯坦特固定模)，或者通過(guò)溫度的變化移植(如鎳鈦金屬互化物斯坦特固定模)。斯坦特固定模一般在放射性或直接的視覺(jué)控制下置入，特別小心地將斯坦特固定模準(zhǔn)確穿過(guò)待治療器官的窄口。移去轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管，使斯坦特固定模作為腳手架。通常使用X射線進(jìn)行位點(diǎn)插入的檢查以確-〖正準(zhǔn)確的位置。本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)例中，提供了消除膽管阻塞的方法，其包括將膽管斯坦特固定模插入膽管中，斯坦特固定模一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用上述組合物包衣，這樣就消除了膽管阻塞。簡(jiǎn)而言之，腫瘤長(zhǎng)滿正常的膽管會(huì)導(dǎo)致危及生命的進(jìn)行性膽汁朽積性黃癥。一般地，將膽汁從肝臟引流入十二指腸的膽管體系^易被(1)由膽管細(xì)胞組成的肺瘤(膽管癌)，(2)侵入膽管的腫瘤(例如胰腺癌)或者(3)對(duì)膽管施加外部壓力并壓縮其的腫瘤(腫大的淋巴結(jié))。原發(fā)性膽管腫瘤和其它可引起膽管樹(shù)壓迫的腫瘤可以用本文所述的斯坦特固定模治療。一個(gè)原發(fā)性膽管腫瘤的例子是腺癌(當(dāng)其存在于正常肝管分支處時(shí)也稱Klatskin腫瘤)。這些胂瘤也稱作膽管癌、膽總管腺癌或者膽管系統(tǒng)腺癌。影響膽管的良性腫瘤(如膽管系統(tǒng)的腺瘤)以及少見(jiàn)的膽管鱗狀細(xì)胞腺癌和膽嚢腺癌也可以引起膽管樹(shù)的壓迫，從而導(dǎo)致膽管阻塞。壓迫并阻塞膽管的肝和胰腫瘤是壓迫膽管樹(shù)最常見(jiàn)的原因。胰腺的大多數(shù)肺瘤由胰管的細(xì)胞產(chǎn)生。這是一種致命的癌癥(占癌癥死亡的5%;在美國(guó)每年有26,000例新患者)，患者的平均生存時(shí)間為6個(gè)月，生存率為1年的只有10%。當(dāng)這些腫瘤位于胰腺的上端時(shí)，其經(jīng)常會(huì)引起膽管阻塞，因而顯著降低了患者的生活質(zhì)量。所有的胰腫瘤一般都稱作"胰腺癌"，一些組織學(xué)亞型包括腺鱗癌、嚢腺癌和acinar細(xì)胞癌。上述的肝腫瘤也可以引起膽管樹(shù)的壓迫，從而導(dǎo)致膽管阻塞。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，首先將膽管斯坦特固定模以幾種方式插入膽管中自頂端穿過(guò)腹壁和肝臟將針插入(經(jīng)皮肝穿刺膽道造影或"PTC");自低端通過(guò)從口腔、胃或十二指腸插入的內(nèi)窺鏡插入膽管套管(內(nèi)窺鏡逆行膽管造影或"ERCP");或者在外科手術(shù)過(guò)程中直接切開(kāi)。一般應(yīng)進(jìn)行PTC、ERCP或外科手術(shù)時(shí)直接觀察等插入前的檢查以確定斯坦特固定模插入的準(zhǔn)確位置。然后將一導(dǎo)線經(jīng)損傷部位深入，其上穿過(guò)一個(gè)可使斯坦特固定4莫以皺縮形式插入的轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管。如果診斷檢查為PTC，導(dǎo)線和轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管經(jīng)腹壁插入；如果初始檢查為ERCP，則經(jīng)口腔置入斯坦特固定模。接著在放射、內(nèi)窺鏡或直接觀察的控制下放置斯坦特固定模(特別小心地將其穿過(guò)導(dǎo)管窄口準(zhǔn)確放置)。移去轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管，使斯坦特固定才莫作為腳手架維持膽管的張開(kāi)狀態(tài)。再進(jìn)行一次膽道造影以確證斯坦特固定模準(zhǔn)確定位。本發(fā)明的另一實(shí)例中提供了消除食道阻塞的方法，其包括將食道斯坦特固定模插入食道中，斯坦特固定模一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用上述抗血管生長(zhǎng)組合物包衣，這樣就消除了食道阻塞。簡(jiǎn)而言之，食道是一個(gè)將食物和液體從口腔轉(zhuǎn)運(yùn)至胃的中空管道。食道癌或者^(guò)皮來(lái)自鄰接器官的癌(例如胃癌或肺癌)侵入會(huì)導(dǎo)致不能吞咽食物或唾液。在這一實(shí)例中，應(yīng)進(jìn)行插入前的檢查，通常是呑咽鋇或者內(nèi)窺鏡檢查以確定斯坦特固定模插入的準(zhǔn)確位置。然后通過(guò)口腔置入導(dǎo)管或內(nèi)窺鏡，經(jīng)阻塞處深入導(dǎo)線。在放射或內(nèi)窺鏡控制下將斯坦特固定才莫轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管穿過(guò)導(dǎo)線，經(jīng)食道中的窄口小心放置斯坦特固定模。插入后的檢查，通常為鋇餐x射線應(yīng)用于確證準(zhǔn)確的定位。本發(fā)明的另一實(shí)例中提供了消除氣管/支氣管阻塞的方法，其包括將氣管/支氣管斯坦特固定模插入氣管或支氣管中，斯坦特固定模一^:為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用上述抗血管生長(zhǎng)組合物包衣，這樣就消除了氣管/支氣管阻塞。簡(jiǎn)而言之，氣管和支氣管是將空氣從口鼻載入肺的通道。由于癌、被來(lái)自鄰接器官的癌(例如肺癌)侵入或者由于軟骨軟化(軟骨環(huán)削弱)導(dǎo)致的氣管或支氣管塌陷而引起的氣管阻塞會(huì)導(dǎo)致不能呼吸。本發(fā)明的這一實(shí)例中，應(yīng)進(jìn)行插入前的檢查，通常是內(nèi)窺鏡檢查以確定斯坦特固定模插入的準(zhǔn)確位置。然后通過(guò)口腔置入導(dǎo)管或內(nèi)窺鏡，經(jīng)阻塞處深入導(dǎo)線。然后將轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管穿過(guò)導(dǎo)線以插入皺縮的斯坦特固定模。在放射或內(nèi)窺鏡控制下放置斯坦特固定模以使其穿過(guò)窄口準(zhǔn)確放置。接著移去轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管，使斯坦特固定才莫作為腳手架。插入后的檢查，通常為支氣管鏡檢查應(yīng)用于確i正準(zhǔn)確的定位。本發(fā)明的另一實(shí)例中提供了消除尿道阻塞的方法，其包括將尿道斯坦特固定模插入尿道中，斯坦特固定模一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用上述抗血管生長(zhǎng)組合物包衣，這樣就消除了尿道阻塞。簡(jiǎn)而言之，尿道是將通過(guò)陰莖排空膀胱的通道。幾乎每個(gè)年過(guò)60的男人都會(huì)有由于前列腺肥大而導(dǎo)致的前列腺尿道外部狹窄，其可引起進(jìn)行性排尿困難。在這一實(shí)例中，首先應(yīng)進(jìn)行插入前的檢查，通常是內(nèi)窺鏡檢查或尿道內(nèi)徑掃描以確定斯坦特固定沖莫插入的準(zhǔn)確位置(其在下端的外尿道括約肌上，在上端接近充盈的膀胱頸)。然后通過(guò)陰莖口置入內(nèi)窺鏡或?qū)Ч埽瑢?dǎo)線深入膀胱。然后將轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管穿過(guò)導(dǎo)線以插入斯坦特固定模。接著移去轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管，斯坦特固定模膨脹定位。插入后的檢查，通常為內(nèi)窺鏡或逆行尿道內(nèi)徑掃描檢查應(yīng)用于確i正準(zhǔn)確的定位。本發(fā)明另一實(shí)例提供了消除血管阻塞的方法，其包括將血管斯坦特固定才莫插入血管中，斯坦特固定模一般為管狀結(jié)構(gòu)，其表面用上述抗血管生長(zhǎng)組合物包衣，這樣就消除了血管阻塞。簡(jiǎn)而言之，斯坦特固定才莫可置于各種血管(動(dòng)脈和靜脈)中用以防止在失敗的血管成形術(shù)處復(fù)發(fā)狹窄，治療用血管成形術(shù)處理可能失敗的狹窄以及治療術(shù)后狹窄(如透析移植狹窄)。適當(dāng)部位的代表性例子包括髂骨、腎和冠狀動(dòng)脈、上腔靜脈以及透析移植物中。其中一個(gè)實(shí)例，首先進(jìn)行血管造影術(shù)以確定斯坦特固定模插入的位置。這通常通過(guò)經(jīng)插入動(dòng)脈或靜脈(照射)的導(dǎo)管注射不透射線的造影劑而完成。然后經(jīng)皮或經(jīng)外科手術(shù)將導(dǎo)管插入股動(dòng)脈、膿動(dòng)脈、股靜脈或肱靜脈，并在熒光屏檢查下通過(guò)動(dòng)脈系統(tǒng)深入確定的血管中。然后穿過(guò)血管狹窄處定位斯坦特固定模。插入后的血管造影術(shù)也可以用以確i正準(zhǔn)確的定位?？寡苌L(zhǎng)組合物在外科手術(shù)過(guò)程中的用途如上所述，抗血管生長(zhǎng)組合物可用于各種外科手術(shù)過(guò)程中。例如，本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物(如噴霧劑或膜的形式)可在去除腫瘤前用以包衣或噴霧特定區(qū)域，從而將正常的周圍組織與惡性組織隔離開(kāi)來(lái)，并且/或者防止疾病向周圍組織擴(kuò)散。本發(fā)明的另一方面，抗血管生長(zhǎng)組合物(如噴霧劑形式)可以通過(guò)內(nèi)窺鏡檢查方式專爭(zhēng)運(yùn)以包衣腫瘤或者在預(yù)定部位抑制血管生長(zhǎng)。本發(fā)明的另一方過(guò)程。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，裝滿抗血管生長(zhǎng)組合物的外科手術(shù)用篩網(wǎng)可用于腹部癌切除手術(shù)(如結(jié)腸切除術(shù)后)以支持結(jié)構(gòu)，.同時(shí)釋放一些抗血管生長(zhǎng)因子。本發(fā)明另一方面提供了處理腫瘤切除部位的方法，其包括將上述抗血管生長(zhǎng)組合物施于切除后的腫瘤切除邊緣，從而抑制了癌癥復(fù)發(fā)以及該部位新血管的形成。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，將抗血管生長(zhǎng)組合物(或單獨(dú)的抗血管生長(zhǎng)因子)直接施于腫瘤切除部位(例如用拭抹、刷擦或其它方法用抗血管生長(zhǎng)組合物或因子包衣腫瘤的切除邊緣)。同樣，在給藥前也可將抗血管生長(zhǎng)組合物或因子制成已知的外科手術(shù)用糊劑。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)例中，在切除肝惡性胂瘤后及神經(jīng)外科術(shù)后施用抗血管生長(zhǎng)組合物。本發(fā)明的另一本方面，抗血管生長(zhǎng)組合物(如上所述)可用于各種胂瘤的切除邊緣，包括例如乳腺瘤、結(jié)腸腫瘤、腦和肝腫瘤。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)組合物可在切除后的神經(jīng)瘤部位施用，/人而抑制了該部位新血管的形成。簡(jiǎn)而言之，大腦是高度功能定位的，即每一特定的解剖區(qū)域執(zhí)行特定的功能。因此，大腦病理的部位通常比其類型更為重要。在關(guān)鍵區(qū)域中一個(gè)相對(duì)小的損傷比不太重要區(qū)域中較大的損傷更具有破壞性。類似地，大腦表面的損傷或許易于手術(shù)切除，但是位于大腦深層的相同腫瘤可能不能(預(yù)切除需通過(guò)太多的重要結(jié)構(gòu)才能到達(dá))。同樣，甚至良性胂瘤由于幾種原因也可以有危險(xiǎn)其可能長(zhǎng)在關(guān)鍵區(qū)域而引起顯著損傷；盡管其通過(guò)手術(shù)切除可能治愈這也是不可能的；最后，如果未控制，其可能引起顱內(nèi)壓的升高。頭顱骨是一個(gè)不能擴(kuò)充的封閉空間。因此，如果在某一部位有東西生長(zhǎng)，在另外的部位就會(huì)受壓-結(jié)果頭顱骨內(nèi)的壓力就升高或者是顱內(nèi)壓升高。如果不處理這種狀況，就會(huì)壓迫重要結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致死亡。cns(中樞神經(jīng)系統(tǒng))惡性腫瘤的發(fā)生率為每100,000人8-16。大腦早期惡性腫瘤的預(yù)后是致命的，存活中數(shù)少于一年，甚至在手術(shù)切除后。這些腫炎:；，特別是神經(jīng)膠質(zhì)瘤是主要的一種手術(shù)切除后在原始病灶2公分內(nèi)復(fù)發(fā)的局部疾病?？梢杂么怂鼋M合物及方法治療的腦腫瘤的代表性例子包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤(如多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、多態(tài)惡性膠質(zhì)瘤、汁維性星性細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、粘液乳頭室管膜射、亞室管膜瘤、脈絡(luò)叢乳頭瘤)；神經(jīng)瘤(例如成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤和成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)松果體腺瘤(如成松果體細(xì)胞瘤和;松果體瘤)；腦脊膜腫瘤(如腦脊膜瘤、腦脊膜血管外皮細(xì)胞瘤、腦脊膜肉瘤)神經(jīng)鞘細(xì)胞瘤(如神經(jīng)鞘瘤和神經(jīng)纖維瘤)；淋巴瘤(如何杰金及非何杰金淋巴瘤(包括各種亞型，原發(fā)性和繼發(fā)性))、變態(tài)瘤(如顱咽管瘤、表皮樣嚢胂、皮樣嚢腫和膠態(tài)嚢腫)以及轉(zhuǎn)移瘤(其可來(lái)源于任何腫瘤，最常見(jiàn)的來(lái)自肺、乳腺、黑素瘤、腎及胃腸道腫瘤)?？寡苌L(zhǎng)組合物的其它治療性用途除了腫瘤，許多其它非致瘤性血管生長(zhǎng)依賴疾病(其的特征為血管的異常生長(zhǎng))也可以用本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物或抗血管生長(zhǎng)因子治療。這種非致傘性血管生長(zhǎng)依賴疾病的代表性例子包括角膜新生血管形成、肥大教痕和瘢痕瘤、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動(dòng)靜脈喻形(上面已討論)、動(dòng)脈粥樣硬化斑、傷口愈合延遲、血友病性關(guān)節(jié)、骨不連合骨折、Osler-Weber綜合癥、牛皮褲、生膿肉芽腫、硬皮病、沙眼、痛經(jīng)(上面已討論)以及血管粘連。'特別地，本發(fā)明的其中一方面提供了治療角膜新生血管形成(包括角膜移植物新生血管形成)的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)組合物(如上所述)給予角膜，從而抑制了血管的形成。簡(jiǎn)而言之，角膜是一種一般缺乏血管的組織。在特定的病理狀態(tài)下，毛細(xì)管可以從角膜緣的角膜周血管叢深入到角膜。當(dāng)角膜形成血管時(shí)，其也變得模糊不清，結(jié)果患者的視力敏銳性下降。如果角膜完全混濁，則視力喪失。血管可以以各種形式和深度進(jìn)入角膜，其取決于促成新生血管形成的過(guò)程。眼科學(xué)家將這些形式傳統(tǒng)地定義為以下幾類角膜翳沙眼、角膜翳leprosus、角膜翳phylctenulosus、角膜翳變性和青光眼角膜翳。角膜基質(zhì)也可以通過(guò)睫前動(dòng)脈分支而被侵襲(稱為間質(zhì)血管化)，其可引起幾種獨(dú)特的臨床損傷末端襻、刷子樣圖案、傘型、格子型、間質(zhì)連拱(從鞏膜外層血管)和迷行不規(guī)則血管。許許多多的疾病都可以導(dǎo)致角膜新生血管形成，包括例如角膜感染(如沙眼、單純皰滲性角膜炎、利什曼病和盤(pán)尾絲蟲(chóng)病)、免疫過(guò)程(如移植物排斥和Stevens-Johnxon's綜合癥)、堿灼傷、創(chuàng)傷、發(fā)炎(任何起因)、毒性和營(yíng)養(yǎng)不足狀態(tài)以及配戴隱形眼鏡引起的并發(fā)癥。盡管角膜新生血管形成的原因有很多，但是角膜對(duì)損傷的反應(yīng)以及隨后的血管向內(nèi)生長(zhǎng)不論什么原因都是類似的。簡(jiǎn)而言之，只有那些位于緣重要距離內(nèi)的受傷的部位似乎很重要，其會(huì)促發(fā)血管生長(zhǎng)應(yīng)答。這可能是由于激發(fā)血管侵襲的抗血管生長(zhǎng)因—'是在損傷部位產(chǎn)生的，其必然會(huì)擴(kuò)散到最鄰近的血管(緣)以發(fā)〗"其的作用。從緣越過(guò)一定距離，這就不可能發(fā)生，并且不會(huì)裔4緣內(nèi)皮長(zhǎng)入角膜。一些血管生長(zhǎng)因子可能與此過(guò)程有關(guān)，它們?cè)SJ',是炎性反應(yīng)的產(chǎn)物。的確，角膜新生血管的形成似乎僅發(fā)生在炎'j'l:細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程中，并且血管生長(zhǎng)的程度與炎性反應(yīng)的程度成正比。角膜水腫通過(guò)松弛角膜基質(zhì)韌帶及提供"最小阻力"的毛細(xì)管生長(zhǎng)通道而進(jìn)一步助長(zhǎng)了血管的向內(nèi)生長(zhǎng)。初期炎性反應(yīng)后，毛細(xì)管以其在其它組織中相同的方式長(zhǎng)入角膜。緣毛細(xì)管和小靜脈的通常靜止性內(nèi)皮細(xì)胞受到刺激而分化并遷移。內(nèi)皮細(xì)胞從其原來(lái)的血管突出，消化周圍的基膜及其將通過(guò)的組織，并且向血管生長(zhǎng)刺激源遷移。盲端的新芽具有了腔，然后吻合在一起形成毛細(xì)管襻。最后的結(jié)果是在角膜內(nèi)建立了血管叢。本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物通過(guò)阻斷血管生長(zhǎng)助催化劑的刺激作用、減少內(nèi)皮細(xì)胞分化、減少內(nèi)皮細(xì)胞遷移并且^皮壞內(nèi)皮分泌的蛋白水解酶的活性而發(fā)揮作用。本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)因子可以在鹽水中制備成局部用藥的形式(含有通常用于眼用制劑的任何防腐劑和抗菌劑)，并且以滴眼劑的形成給藥?？寡苌L(zhǎng)因子溶液可以其純凈形式制備，每天給藥數(shù)次。同樣，抗血管生長(zhǎng)組合物(如上制備)也可直接用于角膜。在優(yōu)選的實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)組合物用可結(jié)合到角膜的粘液附著性聚合物制備。在另外的實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)因子或抗血管生長(zhǎng)組合物可以用作常規(guī)甾類化合物治療的佐劑。局部治療也可用于角膜損傷，角膜損傷極有可能誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)應(yīng)答(如化學(xué)灼燒)。在這些情況下，立即進(jìn)行治療(可能與類固醇一起)可有助于防止隨后的并發(fā)癥。在其它實(shí)例中，上述抗血管生長(zhǎng)組合物可以在顯微鏡指引下由眼科醫(yī)生直接注射入角膜基質(zhì)。注射優(yōu)逸部位可隨患者個(gè)人損傷的形態(tài)學(xué)的不同而不同，但是用藥的目的是將組合物置于脈管系統(tǒng)的前方(即，散布在血管和正常角膜間)。在多數(shù)情況下，進(jìn)行角膜緣注射以"防止"角膜生長(zhǎng)血管。這一方法也可在角膜損傷后立刻施用以預(yù)防性防止角膜新生血管形成。在這種情況下，藥物應(yīng)注射入散布在角膜損傷及其不希望的？角膜緣中。在防止毛細(xì)管侵襲移植角.膜中也可類似使用這種方法。如果使用持續(xù)釋放的制劑，每年4又需注射2-3次。也可在注射液中加入類固醇以減少由注射劑本身導(dǎo)致的發(fā)炎。本發(fā)明另一方面提供了治療肥大瘢痕和瘢痕瘤的方法，其包括將上述一種抗血管生長(zhǎng)組合物用于肥大瘢痕或瘢痕瘤。簡(jiǎn)而言之，傷口的愈合及瘢痕的形成發(fā)生在三個(gè)階段中發(fā)炎，增殖和成熟。第一階^爻-發(fā)炎出現(xiàn)在對(duì)嚴(yán)重到？的應(yīng)答中。在這一階段(持續(xù)3到4天)，血液和組織液形成粘性凝塊和纖維網(wǎng)，其可將傷口表面連接到一起。然后是增殖階段，其中傷口邊緣的毛細(xì)管和結(jié)締組織向內(nèi)生長(zhǎng)，并且閉合皮膚的缺陷。最后，一旦毛細(xì)管和成纖維細(xì)胞的增殖停止，成熟階段就開(kāi)始，其中瘢痕收縮并且變得少細(xì)胞、少血管，并且看起來(lái)平坦和白凈。這一最后的階段要花費(fèi)6至12個(gè)月。如果產(chǎn)生了太多的結(jié)締組織并且傷口仍不斷地細(xì)胞化，瘢痕會(huì)變紅并且高出來(lái)。如果瘢痕保持在最初傷口的邊界內(nèi)，其是指肥大瘢痕，但是如果其延伸出最初的瘢痕并進(jìn)入周圍的組織，則損傷是指瘢痕瘤。肥大瘢痕和瘢痕瘤產(chǎn)生于瘢痕形成的第二和第三階段。一些傷口特別容易過(guò)度的內(nèi)皮和成纖維細(xì)胞增殖，包括灼燒、開(kāi)放傷口和感染傷口。隨肥大瘢痕一起，產(chǎn)生不同程度的成熟并且逐漸改善。在瘢痕瘤中，則產(chǎn)生一種能變得很大的實(shí)實(shí)在在的腫瘤。這種情況下少見(jiàn)自發(fā)性改善。因此，在本發(fā)明一個(gè)實(shí)例中，如上所述的單獨(dú)的抗血管生長(zhǎng)因子或者抗血管生長(zhǎng)組合物直接注射入肥大瘢痕或瘢痕瘤中以防止損傷的發(fā)展。注射的頻率取決于所用聚合物(如果有的話)的釋放動(dòng)力學(xué)及臨床應(yīng)答。這一治療在預(yù)防性治療(一些已知可導(dǎo)致肥大瘢痕和瘢痕瘤生長(zhǎng)的情況(如灼燒))中尤其有用，并且優(yōu)選在增殖階段有時(shí)間進(jìn)展后開(kāi)始(在最初損傷后約14天)。本發(fā)明另一方面才是供了治療新生血管性青光眼的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)組合物用于眼，這樣就抑制了血管的形成。簡(jiǎn)而言之，新生血管性青光眼是一種病理狀態(tài)，其中在眼虹膜中生長(zhǎng)新的毛細(xì)管。血管生長(zhǎng)一般源于瞳孔邊緣的血管，沿虹膜根生長(zhǎng)并進(jìn)入角膜濾簾。成纖維細(xì)胞及其它結(jié)締組織成分與毛細(xì)管的生長(zhǎng)有關(guān)，纖維血管膜沿虹膜的前表面生長(zhǎng)。最后，該組織到達(dá)前房角，并在此形成角膜粘連。角膜粘連依次連接、成瘢痕及收縮，直至最后閉合前房角。瘢痕的形成阻止了水樣液從前房/l')的充分排出及進(jìn)入角膜濾簾，從而導(dǎo)致眼內(nèi)壓升高而可能失明。新生血管性青光眼一般作為視網(wǎng)膜局部缺血為主的疾病的一種并發(fā)癥。特別地，患有這種疾病的約三分之一患者具有糖尿病視網(wǎng)膜疾病，28%的患者具有中心視網(wǎng)膜靜脈阻塞。其它的還有慢性視網(wǎng)膜脫落、晚期青光眼、頸動(dòng)脈阻塞性疾病、晶狀體后纖維組織化、鐮刀性細(xì)胞貧血、眼內(nèi)瘤和頸動(dòng)脈多孔瘺。在早期階段，新生血管性青光眼可以通過(guò)高倍縫燈生物顯凝:鏡診斷，即在虹膜表面出現(xiàn)了小的.、膨脹的混亂毛細(xì)管(漏熒光)。后來(lái)的前房角鏡通過(guò)纖維血管帶證實(shí)了前房角的進(jìn)行性閉塞。如果前房角仍是開(kāi)放狀態(tài)，保留性治療會(huì)有幫助。但是，一旦前房角關(guān)閉，就需要進(jìn)行手術(shù)以減輕眼內(nèi)壓。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)因子(單獨(dú)或者在抗血管生長(zhǎng)組合物中，如上所述)可局部用于眼以治療早期的新生血管性青光眼。本發(fā)明的另一實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)組合物可以通過(guò)將該組合物注入前房角部位而移植。其可提供一種持續(xù)集中增加的抗血管生長(zhǎng)因子，并防止血管長(zhǎng)入該區(qū)域。移植或注射的抗血管生長(zhǎng)組合物(置于虹膜的前毛細(xì)管和前房角之間)可以"保護(hù)"開(kāi)放的前房角不進(jìn)行新生血管化。當(dāng)毛細(xì)管不在抗血管生長(zhǎng)組合物的明顯半徑內(nèi)生長(zhǎng)時(shí)，即可維持前房角的開(kāi)放性。另一個(gè)實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)組合物也可置于任何地方，這樣抗血管生長(zhǎng)因子就連續(xù)地釋放入水樣液中。這可以增加水樣液中抗血管生長(zhǎng)因子的濃度，其反過(guò)來(lái)可浸泡虹膜表面及其異常的毛細(xì)管，從而提供了另一種轉(zhuǎn)運(yùn)藥物的機(jī)制。這些治療形式也可用于預(yù)防，并且可與現(xiàn)有的治療方法結(jié)合。本發(fā)明的另一方面提供了治療增生性糖尿病視網(wǎng)膜疾病的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)組合物用于眼，A^而抑制了血管的形成。簡(jiǎn)而言之，糖尿病視網(wǎng)膜疾病的病理學(xué)被認(rèn)為與上述新生血管性青光眼類似。特別地，認(rèn)為糖尿病視網(wǎng)膜疾病的背景是在視網(wǎng)膜缺氧的影響下轉(zhuǎn)化為增生性糖尿病視網(wǎng)膜疾病。一般地，新生血管組織從j見(jiàn)神經(jīng)(通常在邊緣的10mm內(nèi))長(zhǎng)出，以及/人組織灌注缺乏部位的視網(wǎng)膜表面長(zhǎng)出。最初，毛細(xì)管在視網(wǎng)膜內(nèi)部有限的膜及玻璃體的后表面之間生長(zhǎng)。最后，血管長(zhǎng)入玻璃體并穿過(guò)內(nèi)部有限的膜。當(dāng)玻璃體收縮時(shí)，牽引力施加在血管上，通常會(huì)導(dǎo)致血管斷裂并遮蔽玻璃體(由于出血)。視網(wǎng)膜中瘢痕的纖維牽引力也可產(chǎn)生:枧網(wǎng)膜脫落。選擇的常規(guī)治療是全視網(wǎng)膜光凝固以減少視網(wǎng)膜組織，從而降低視網(wǎng)膜的氧需求量。盡管其最初是有效的，但是會(huì)有高的復(fù)發(fā)率(新的損傷在視網(wǎng)膜其它部位形成)。這一治療的并發(fā)癥包括周圍視覺(jué)的下降(50%的患者)、角膜的WM生磨損、激光誘導(dǎo)的白內(nèi)障形成、急性青光眼及亞視網(wǎng)膜新生血管生長(zhǎng)的刺激(其會(huì)導(dǎo)致視力的喪失)。因此，這一方法只是在存在一些危險(xiǎn)因素并且危險(xiǎn)-有益的比例明顯有利于干涉治療時(shí)才進(jìn)行。因此，本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)例中，增生性糖尿病視網(wǎng)膜疾病可以通過(guò)將抗血管生長(zhǎng)因子(或抗血管生長(zhǎng)組合物)注射入水樣液或玻璃體中以增加視網(wǎng)膜內(nèi)抗血管生長(zhǎng)因子的濃度而進(jìn)行治療。優(yōu)逸地，這種治療應(yīng)在患上嚴(yán)重疾病(需要光凝固)之前開(kāi)始。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)例中，可以栓塞供給新生血管損傷的動(dòng)脈(使用如上所述的抗血管生長(zhǎng)組合物)。本發(fā)明的另一方面提供了治療晶狀體后纖維組織化的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)因子(或抗血管生長(zhǎng)組合物)用于眼，從而抑制血管的形成。簡(jiǎn)而言之，晶狀體后纖維組織化是一種發(fā)生在接受氧治療的早產(chǎn)嬰兒中的疾病。周圍視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)(特別是太陽(yáng)穴邊)直到胎兒生命末才完全形成。過(guò)量的氧氣(甚至在分娩期為生理性的水平)及氧游離基的形成被認(rèn)為是引起未成熟視網(wǎng)膜血管損傷的重要原因。這些血管收縮，然后由于暴露在氧氣中其變得結(jié)構(gòu)性阻塞。因此，周圍^f見(jiàn)網(wǎng)膜不能形成血管，結(jié)果產(chǎn)生視網(wǎng)膜局部缺血。由于局部缺血，在正常的及局部缺血的視網(wǎng)膜連接處產(chǎn)生新生血管形成。在75y。的病例中，這些血管自動(dòng)退化。但是，剩下的25免仍繼續(xù)毛細(xì)管生長(zhǎng)、纖維血管成分的收縮及血管和視網(wǎng)膜的牽引。這會(huì)導(dǎo)致玻璃體出血和/或視網(wǎng)膜脫落而引起失明。新生血管角閉合性青光眼也是這一疾病的并發(fā)癥。確定哪種疾病會(huì)自愈及哪種將更為嚴(yán)重通常是可能的，一般僅在患有確定疾病及具有充分發(fā)展的病理學(xué)的患者中進(jìn)行治療。這種"等候查看"的方法阻止了早期治療干涉，使得疾病進(jìn)一步發(fā)展(25%的患者病情復(fù)雜化)。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例中，可在嬰兒(其中該疾病的進(jìn)展具有高度的危險(xiǎn)性)中局部施用抗血管生長(zhǎng)因子(或抗血管生長(zhǎng)組合物，如上所述)以切斷晶狀體^纖維組織化進(jìn)展的影響。另一實(shí)例中，可以進(jìn)行玻璃體內(nèi)注射和/或眼內(nèi)移植抗血管生長(zhǎng)組合物。在已確定的疾病中這些方法尤為優(yōu)選，從而減少手術(shù)的需求。本發(fā)明的另一方面提供了治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，其包括將治療有效量的抗血管生長(zhǎng)組合物用于關(guān)節(jié)，從而抑制了血管的形成。簡(jiǎn)而言之，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，關(guān)節(jié)的損傷是由于炎癥(包括白細(xì)胞和白細(xì)胞產(chǎn)物)和關(guān)節(jié)翳組織(一種由新生血管組織、結(jié)締組織和炎癥細(xì)胞組成的組織)的發(fā)展。一般地，慢性炎癥其本身不足以導(dǎo)致關(guān)節(jié)表面的損傷，但是一旦纖維血管組織消化了軟骨組織就會(huì)產(chǎn)生永久的缺陷。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)例中，抗血管生長(zhǎng)因子(包括抗血管生長(zhǎng)組合物，如上所述)可以通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)注射、作為外科手術(shù)用糊劑或口服制劑(例如，含有抗血管生長(zhǎng)因子的反應(yīng)停)而應(yīng)用，從而抑制了關(guān)節(jié)內(nèi)血管的形成。這一方法代表性例子詳見(jiàn)下面的實(shí)施例9。如上所述，本發(fā)明另一方面提供了含有一個(gè)合成管(其表面包衣有如上所述的抗血管生長(zhǎng)組合物)的血管移植物。簡(jiǎn)而言之，血管移植物是一種合成管(通常由滌綸或Gortex制得)，經(jīng)手術(shù)插入而繞過(guò)動(dòng)脈阻塞，最常見(jiàn)的是從主動(dòng)脈至股動(dòng)脈，或者/人股動(dòng)脈至腿彎部動(dòng)脈。使股動(dòng)脈-腿彎部動(dòng)脈旁道移植物復(fù)雜化的一個(gè)主要問(wèn)題是血管壁中亞內(nèi)皮類瘢痕反應(yīng)的形成(稱為新生內(nèi)膜增生)，其可j吏鄰接移植物任一末端的管腔變窄，并且其可能為進(jìn)行性的。包衣有或含有抗血管生長(zhǎng)因子(或抗血管生長(zhǎng)組合物，如上所述)的移植物可用于在移植物任一末端限制新生內(nèi)膜增生的形成。然后可以通過(guò)常規(guī)的旁道技術(shù)將移植物手術(shù)置入。本發(fā)明的抗血管生長(zhǎng)組合物也可以各種其它方式應(yīng)用。例如，其可以結(jié)合到手術(shù)縫線中以防止縫線肉芽瘤；移植到子宮內(nèi)(像宮內(nèi)節(jié)育器那樣)來(lái)治療痛經(jīng)或者作為一種控制女性生育的方式；作為腹膜灌注液或在治療子宮內(nèi)膜異位時(shí)用于腹膜移植；作為一種系統(tǒng)化療形式附著在對(duì)抗活化內(nèi)皮細(xì)胞的單克隆抗體上；或者附著在放射性標(biāo)記的識(shí)別活化內(nèi)皮細(xì)胞的單克隆抗體上而用于診斷性成像。下述實(shí)施例用于說(shuō)明，而非限定。實(shí)施例實(shí)施例l:抗侵襲性因子的制備切開(kāi)角鯊的肩胛帶和顱骨，然后用手術(shù)刀刮以除去軟骨上所有的肌肉及相關(guān)的結(jié)締組織。然后用組織研磨機(jī)使軟骨均勻，在含有2.0M鹽M^和0.02MMES的溶液(pH6.0)中于室溫連續(xù)攪拌2至5天來(lái)萃取。2至5天后，將軟骨萃取物通過(guò)網(wǎng)狀絲布除去大的成分。然后將濾液通過(guò)使用螺旋形筒的Amicon超濾器(其可切去分子量100,000)。濾液(含有分子量小于100,000道爾頓的蛋白質(zhì))在0.02MMES緩沖液(pH6)中滲析，其用Amicon超濾器保留住分子量大于3,000道爾頓的蛋白質(zhì)。通過(guò)使用這一方法可除去低分子量的蛋白質(zhì)和成分，以及過(guò)量的鹽酸胍。將滲析液濃縮至終濃度9mg/ml。實(shí)施例2:各種藥物的抗血管生長(zhǎng)活性分析A:雞絨毛膜尿嚢膜("Cam")試驗(yàn)將受精的家養(yǎng)雞胚在無(wú)殼培養(yǎng)前孵育3天。在此過(guò)程中，通過(guò)除去位于空氣中的蛋殼而倒空蛋的內(nèi)容物。然后分離里面的蛋殼膜，'將蛋殼的另一末端穿孔以使蛋內(nèi)容物緩慢滑出鈍端。將蛋內(nèi)容物倒入圓底無(wú)菌玻璃碗中，用陪替氏培養(yǎng)皿蓋上。然后將其置于孵育箱(90%的相對(duì)濕度，3%C02)中孵育3天。將紅豆杉醇(Sigma,St丄ouis,MI)在濃度為l，5，10，30mg每10ml等分試樣的0.5免含水甲基纖維素中混合。由于紅豆杉醇不溶于水，所以使用玻璃珠來(lái)產(chǎn)生細(xì)顆粒。將該溶液的10微升等分試樣在間隔膜上干燥l小時(shí)形成直徑2mm的圓盤(pán)。然后將含有紅豆杉醇的干燥圓盤(pán)小心置于孵育6天的每一CAM的生長(zhǎng)邊緣。通過(guò)將不含紅豆杉醇的甲基纖維素圓盤(pán)放置在經(jīng)過(guò)相同時(shí)間的CAM上而獲得對(duì)照。;改置2天后(孵育的第8天)，用立體顯微鏡檢查脈管系統(tǒng)。將LiposynII-—種白色不透明溶液注入CAM中以增加血管細(xì)節(jié)的可見(jiàn)度。用一個(gè)與攝像機(jī)接口的Zeiss立體顯微鏡(Dage誦MTnnc.,MchiganCity,IN)將未染色的活4胚的脈管系統(tǒng)成像。然后將這些視頻信號(hào)放大160倍并用影像分析系統(tǒng)(Vidas，Kontron;Etching，Germany)捕捉。然后在圖形記:;t儀(Model3000;MatrixInstruments,Orangeburg，NY)上制作影4象底片。用2%戊二烯的0.1M二甲胂酸鈉緩沖液灌注8天的無(wú)殼雞胚膜；在CAM下注射另外的固定劑。IO分鐘后，除去CAM并置于室溫下新鮮的固定劑中2小時(shí)。將該組織在含有6%蔗糖的二甲胂酸鹽緩沖液中洗滌過(guò)夜。將待用區(qū)域在1%的四氧化俄中于4r再固定l.5小時(shí)。然后將該組織于分級(jí)乙醇中脫水，用氧化丙烯交換溶劑并包埋在Spurr樹(shù)脂中。用金剛刀切下薄的部分，置于銅柵上，染色，用Joell200EX電子顯微鏡檢查。類似地，將0.5mm部分切下，用甲苯蘭染色以用于光學(xué)顯微鏡檢查。進(jìn)行11天后，將雞胚用于腐蝕澆鑄技術(shù)。用30規(guī)皮下針將Mercox樹(shù)脂(TedPella,Inc.，Redding,CA)注入CAM脈管系統(tǒng)中。洗鑄材料由2.5克MercoxCL-2B聚合物及0.05克具有5分鐘聚合時(shí)間的催化劑(55%的過(guò)氧化笨甲酰)組成。注射后，將該塑料在室溫下放置1小時(shí)，然后在65^的烘箱中過(guò)夜。接著將CAM置于50免氫氧化鈉水溶液中以消化所有的有機(jī)成分。在蒸鎦水中徹底洗滌塑料模子，空氣中干燥，以金/把包衣，用Philips501B掃描電子顯微鏡觀察。上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果如圖l-4所示。簡(jiǎn)而言之，正常雞無(wú)殼蛋培養(yǎng)物的一般特征如圖1A所示。在孵育的第6天，在雞胚中心有一個(gè)徑向擴(kuò)展的血管網(wǎng)；CAM在雞胚旁發(fā)育。這些生長(zhǎng)的血管緊靠表面，并且用該系統(tǒng)易于觀察，其是一個(gè)研究血管生長(zhǎng)的理想模型?；畹奈慈旧腃AM毛細(xì)管網(wǎng)可以用立體顯微鏡非侵襲性成像。圖1B表明了一種血管區(qū)，其中毛細(xì)管內(nèi)的細(xì)胞性血液元素用視頻/計(jì)算機(jī)接口記錄。這種CAM毛細(xì)管網(wǎng)的三維構(gòu)造可通過(guò)腐蝕澆鑄法顯示，并且可用掃描電子顯微鏡觀察(圖1C)。這些澆鑄顯示了伸向CAM表面的下層血管，在CAM表面其可形成單層吻合毛細(xì)管。CAM的橫向部分顯示出由雙細(xì)胞層組成的外胚層、含有毛細(xì)管(位于外胚層下)的較寬的中胚層、外膜細(xì)胞及內(nèi)部的單內(nèi)胚層細(xì)胞層(圖1D)。在電子顯微鏡水平顯示CAM毛細(xì)管的典型結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。一般地，這些血管與外胚層的內(nèi)部細(xì)胞層緊密相連(圖1E)。置于濃度為l，5，10或30mg的紅豆杉醇48小時(shí)后，在生存條件下用配有視頻/計(jì)算機(jī)接口的立體顯微鏡檢查每一CA以評(píng)估血管生長(zhǎng)的效應(yīng)。在放大160倍下(目的是直接觀察毛細(xì)管內(nèi)的血細(xì)胞)使用這種成像設(shè)備；這樣待查區(qū)域的血流可易于評(píng)價(jià)和記錄。對(duì)于這一研究，將血管生長(zhǎng)的抑制定義為在直徑2-6mm的范圍內(nèi)缺少血管網(wǎng)的CAM區(qū)域。抑制區(qū)缺乏血管血流，因此只有在含有紅豆杉醇的甲基纖維素的實(shí)驗(yàn)條件下才能觀察到；在不含紅豆杉醇圓盤(pán)的對(duì)照條件下，對(duì)生長(zhǎng)的毛細(xì)管系統(tǒng)沒(méi)有作用。劑量依賴的、在不同濃度紅豆杉醇作用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表II所示。表n紅豆杉醇的血管生長(zhǎng)抑制作用紅豆杉醇濃度^g雞胚的評(píng)價(jià)％抑制(陽(yáng)性/總數(shù))3031/311001016/2176518/257216/1540對(duì)照0/300用中心放置有直徑為6mm的無(wú)血管區(qū)的透明的甲基纖維素圓盤(pán)中顯示典型的紅豆杉醇處理的CAM(圖2A和2B)。在稍高的倍數(shù)，這種無(wú)血管區(qū)的邊界非常明顯(圖2C);周圍的功能性血管通常從紅豆杉醇源改向(圖2C和2D)。在正常條件下從未觀察到這種血流的多角改向。紅豆杉醇作用的另一特征是在無(wú)血管區(qū)形成血液島，其表示血細(xì)胞的聚集。4艮明顯。為方便起見(jiàn)，顯示出從正常轉(zhuǎn)變到無(wú)血管狀態(tài)的3個(gè)不同階_歐。在靠近無(wú)血管區(qū)的邊緣，通過(guò)所有三個(gè)胚層內(nèi)的有絲分裂細(xì)胞將CAM標(biāo)記(圖3A和4A)。這種增加的有絲分裂也可連續(xù)觀察毛細(xì)管內(nèi)皮細(xì)胞。但是，內(nèi)皮細(xì)胞仍保持連接完整，沒(méi)有血細(xì)胞的外滲。進(jìn)一步降解后，CAM便以毛細(xì)管的破裂和溶解為特征(圖3B和4B)。假想的內(nèi)皮細(xì)胞(一般在有絲分裂中抑制)仍然保持與血細(xì)胞的緊密空間聯(lián)系，并且位于外胚層下；但是，這些細(xì)胞沒(méi)有連接。無(wú)血管區(qū)的最中心處為加厚的外胚層和內(nèi)胚層(圖3C和4C)。盡管這些層加厚了，細(xì)胞連接處仍保持完整，同時(shí)各層仍保持其結(jié)構(gòu)特征。在中胚層內(nèi)充滿散在的有絲分裂抑制的細(xì)胞，這些細(xì)胞沒(méi)有顯示出前一階^a觀察到的內(nèi)皮細(xì)胞極化作用。同時(shí)，在整個(gè)無(wú)血管區(qū)常見(jiàn)降解的細(xì)胞，其為電子密集的液泡和細(xì)胞碎片(圖4C)。概括而言，本項(xiàng)研究證實(shí)了對(duì)CAM使用紅豆杉醇48小時(shí)后抑制了血管生長(zhǎng)。血管抑制作用形成了一個(gè)無(wú)血管區(qū)，其由紅豆杉醇作用的3個(gè)轉(zhuǎn)變階段代表。無(wú)血管區(qū)中心最受影響的區(qū)域含有外滲紅細(xì)胞的破裂的毛細(xì)管；其表明在內(nèi)皮細(xì)胞間沒(méi)有了細(xì)胞內(nèi)的連接。內(nèi)胚層細(xì)胞和外胚層細(xì)胞保留了其的細(xì)胞內(nèi)連接，因此這些胚層是完整的；但是其稍微加厚了。接近正常血管區(qū)，血管保持了其連接復(fù)雜性，因此也是完整的。在紅豆杉醇處理區(qū)的邊緣，進(jìn)一步的血管生長(zhǎng)受到抑制，其特征是血管典型的改向或者是"彎頭"作用(圖24D)。紅豆杉醇處理的無(wú)血管區(qū)也呈現(xiàn)出CAM所有3個(gè)胚層的大量細(xì)胞在有絲分裂中的抑制；這是紅豆杉醇所特有的，因?yàn)橐郧暗难芯繘](méi)有說(shuō)明這一現(xiàn)象。由于在有絲分裂中受到抑制，內(nèi)皮細(xì)胞不能進(jìn)行其正常的血管生長(zhǎng)代謝功能。相比而言，由蘇拉明和醋酸可的+〉形成的無(wú)血管區(qū)在CAM中不產(chǎn)生有絲分裂抑制的細(xì)胞；其只是阻止了血管進(jìn)一步長(zhǎng)入處理過(guò)的區(qū)域。因此，盡管都是抗血管生長(zhǎng)的藥物，血管生長(zhǎng)過(guò)程的耙位有許多位點(diǎn)。同時(shí)也花費(fèi)了48小時(shí)的時(shí)間觀察紅豆杉醇的作用，并且注意到血管生長(zhǎng)的抑制發(fā)生在用藥后9小時(shí)。組織學(xué)部分表明了如48小時(shí)無(wú)血管區(qū)第一個(gè)轉(zhuǎn)變階段出現(xiàn)的類似的形態(tài)學(xué)(如圖3a和4a所示)。同樣，觀察到了先前觀察的無(wú)血管區(qū)重新血管化過(guò)程。已發(fā)現(xiàn)由肝素和血管穩(wěn)定性類固醇形成的無(wú)血管區(qū)在用藥后60小時(shí)重新血管化。本項(xiàng)研究中，用紅豆杉醇處理的無(wú)血管區(qū)在用藥后至少7天未發(fā)生重新血管化，其表明了一種更有力的長(zhǎng)期作用。實(shí)施例3:蘇拉明的包嚢將1毫升5免ELVAX(與5%乙烯基乙酸酯交聯(lián)的聚(乙烯乙酸乙烯酯))的二氯甲烷("DCM")與固定重量的蘇拉明鈉亞微細(xì)粒粉末混合。將該混合物注入30ml平底試管中的5ml5免聚乙K醇("PVP")水溶液中。然后將含有不同重量藥物的試管懸浮在40r自動(dòng)攪拌的多試樣水浴中90分鐘。移去混合物，將微球試樣用于粒度分析。將試管在1000g離心5分鐘。除去PVA上清液，留作分析(未包嚢藥物)。然后在5ml水中洗滌(漩渦)微球并重新離心。5ml洗液留作分析(表面結(jié)合的藥物)。然后在50ul甲醇中潤(rùn)濕微球，在lmlDCM中渦旋以溶解ELVAX。接著將微球升溫至40t，攪拌下緩緩加入5ml50T的水。此過(guò)程導(dǎo)致DCM迅速蒸發(fā)，因此使蘇拉明鈉釋放入5ml水中。然后將所有5ml試樣用于測(cè)定藥物含量。蘇拉明鈉在入max312nm吸收紫外/可見(jiàn)光。該吸收在O至100ug/ml的范圍內(nèi)(水及5y。PVA中)成線性。藥物在312nm的最大激發(fā)波長(zhǎng)處及400nm的最大發(fā)射波長(zhǎng)處有強(qiáng)烈的熒光。這種熒光在O至25ug/ml的范圍內(nèi)可定量。結(jié)果如圖5—IO所示。簡(jiǎn)而言之，微球的粒度分布似乎不受DCM中藥物內(nèi)含物的影響(見(jiàn)圖5和6)。在20至60um范圍內(nèi)可獲得很好的微球產(chǎn)率。蘇拉明的包嚢非常低(<1%)(見(jiàn)圖8)。但是，隨著DCM中藥物重量的增加，包囊藥物的總量也增加，盡管包嚢的百分?jǐn)?shù)下降。如圖7所示，在50mgELVAX中可包嚢50ug藥物。蘇拉明鈉在含有l(wèi)(HNaCl的5免PVA中的包嚢如圖9-IO所示。實(shí)施例4:紅豆杉醇的包嚢將500毫克的紅豆杉醇或漿果赤霉素(一種紅豆杉醇類似物，可從InflazymePharmaceuticalsInc.,Vancouver,BritishColumbia,Canada獲得)溶于lml50:50的ELVAX:聚乳酸混合物(dcm)中。然后在溶解器(六錠子溶解測(cè)試儀，VanKillIndustriesInc.，U.S.A.)中以200轉(zhuǎn)/分的速率于42T制備3份微球(3小時(shí))。所制得的微球在水中洗滌兩次，于顯微4竟上測(cè)定大小。在紫外/可見(jiàn)試驗(yàn)(紫外/可見(jiàn)入max237nm，在激發(fā)波長(zhǎng)237及發(fā)射波長(zhǎng)325nm處進(jìn)行熒光試驗(yàn)焚光結(jié)果用方括號(hào)[]表示)下確定紅豆杉醇的包囊。使用上述的方法，58叫(+/-12叫)[75叫(+/-25呢)]的紅豆杉醇可從500ug起始材料中包嚢。其表示12%(+/-2.4%)[15%(+/-5%)]的原始重量，或者1.2%(+/-0.25%)[1.5%(+/-0.5%)]重量的聚合物。在烘箱中于37t轉(zhuǎn)動(dòng)18小時(shí)后，10.3%(+/-10%)[6%(+/-5.6%)]總量的紅豆杉醇從微球中釋放出。對(duì)于漿果赤霉素而言，100+/-15叫[83+/-23叫]的漿果赤霉素可從500ug總量的起始材料中包囊。其表示20%(+/-3%)[17%(+/-5%)]的漿果原始重量，^2%(+/-0.3%)[1.7%(+/-0.5%)]重量的聚合物。在烘箱中于37r轉(zhuǎn)動(dòng)18小時(shí)后，55%(+/-13%)[60%(+/-23°/。)]的漿果赤霉素從微球中釋放出。實(shí)施例5:含有抗血管生長(zhǎng)組合物的手術(shù)用糊劑的分析將重量約為300克的Fisher大鼠麻醉，橫向切開(kāi)lcm的上腹部。將十分之二毫升含有l(wèi)x106活的9L神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤(在用于組織培養(yǎng)前立即洗脫)的鹽水注入2個(gè)肝葉中(共5個(gè)，通過(guò)將一個(gè)27規(guī)針穿入肝囊lcm處)。用6.0吸收縫線和皮膚鉗閉合腹部傷口，并用全身麻醉劑終止。2周后，腫瘤沉積處約有l(wèi)cm。這時(shí)，切除肝腫瘤，并且將止血藥施于肝暴露的邊緣。大鼠分為兩組一半單獨(dú)給予聚合物載體，另一半接受抗血管生長(zhǎng)組合物。肝切除后2，7，14，21及84天處死大鼠。特別地，將Euth肌yl注入尾背靜脈而使大鼠安樂(lè)死去。除去肝、脾及肺，進(jìn)行組織學(xué)分析以研究腫瘤作為抗血管生長(zhǎng)活性的i正據(jù)。實(shí)施例6:大鼠動(dòng)脈的栓塞將重量約為300克的Fisher大鼠麻醉。在無(wú)菌條件下，橫向切開(kāi)1cm的上腹部。將十分之二毫升含有一百萬(wàn)活的9L神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤(在用于組織培養(yǎng)前立即洗脫)的鹽水分別注入5個(gè)肝葉中(通過(guò)將一個(gè)27規(guī)針穿入肝囊lcm處)。在退出針時(shí)，將十分之一毫升普通鹽水注入針中以確保沒(méi)有溢出的細(xì)胞流入腹膜腔中。把一個(gè)明膠海綿小拭子置于每個(gè)穿針部位以止血。用6.0吸收縫線和皮膚鉗閉合腹部傷口，并用麻醉劑終止。使大鼠返回到動(dòng)物房，進(jìn)行14天標(biāo)準(zhǔn)飲食，此時(shí)測(cè)得腫瘤沉積處的直徑為lcm。用Wester大鼠及一種結(jié)腸癌細(xì)月包系(RadiologicOncologyLab,M.D.Anderson,Houston,Texas)重復(fù)同樣的步驟。在這種情況下，注射后需3周的時(shí)間測(cè)得每個(gè)胂瘤沉積處的直徑為lcm。2或3周后，進(jìn)行相同的全身麻醉并沿腹中線切開(kāi)(由大鼠的種類而定)。翻出十二指腸，識(shí)別胃十二指腸動(dòng)脈并使之活動(dòng)。在胃十二指腸動(dòng)脈(GDA)切口的上方和下方結(jié)扎，利用手術(shù)顯微鏡將0.038英寸的聚乙烯管逆行引入該動(dòng)脈。插入點(diǎn)下方的線會(huì)結(jié)扎動(dòng)脈，而上方的線可將導(dǎo)管固定住。經(jīng)導(dǎo)管注入0.5ml60。/。的不透射線的造影劑(X射線照射)施行血管造影術(shù)。然后通過(guò)從胃十二指腸動(dòng)脈導(dǎo)管回流15—200um的顆粒而栓塞肝動(dòng)脈，直到觀察(通過(guò)手術(shù)顯微鏡)到停止流動(dòng)至少30秒為止。通過(guò)GDA導(dǎo)管重復(fù)血管造影照片以確證肝動(dòng)脈的阻塞。使用這一方法，一半的大鼠接受單一的15-200um的聚合物顆粒，另一半接受15-200um的聚合物-抗血管生長(zhǎng)因子組合物顆粒。撤出導(dǎo)管時(shí)，系緊GDA上部的結(jié)扎線以阻塞GDA并止血，肝動(dòng)脈(盡管栓塞)仍是完整的。用6.0吸收縫線及手術(shù)鉗閉合腹部。栓塞后2，7，14，21及84天時(shí)處死大鼠以確定抗血管生長(zhǎng)因子的效應(yīng)。簡(jiǎn)而言之，進(jìn)行全身麻醉，使用無(wú)菌預(yù)防措施，施行中線切開(kāi)。再一次活動(dòng)GDA,在接近GDA與肝動(dòng)脈連接處(即，先前切口的正上方)放置一結(jié)扎線后，經(jīng)血管切口插入0.038英寸的聚乙烯管，施行血管造影術(shù)。然后通過(guò)將Euthanyl注入尾背靜脈^使大鼠安樂(lè)死去。確證安樂(lè)死后，除去整個(gè)肝臟，連同胃、脾和兩肺。在一個(gè)用蘇木紫和曙紅("H和E")染色的制備幻燈上進(jìn)行組織學(xué)分析。簡(jiǎn)而言之，將肺在lcm間隔處切開(kāi)以評(píng)價(jià)栓塞物質(zhì)通過(guò)肝靜脈進(jìn)入右側(cè)循環(huán)的通道。同樣也切開(kāi)胃和脾以評(píng)價(jià)從顆?；亓魅敫毖h(huán)的，入口的非特意固定術(shù)。實(shí)施例7:大鼠膽管斯坦特固定模移植術(shù)將300克Fisher大鼠進(jìn)行全身麻醉。在上腹部切開(kāi)一個(gè)橫向切口，識(shí)別肝臟。在其最上面的一葉，將0.2ml含有一百萬(wàn)活的9L神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤(在使用前立即從組織培養(yǎng)物中洗脫)的鹽水用一個(gè)27規(guī)針注入lcm深的肝囊處。在退出針后，將一個(gè)明膠海綿小拭子置于穿針部位以止血。在退出針時(shí)，注射鹽水以確保沒(méi)有溢出的細(xì)胞流入腹膜腔中或者沿針眼溢出。用全身麻醉終止，將動(dòng)物返回到動(dòng)物房，進(jìn)行正常飲食。2周后，施用全身麻醉，采用無(wú)菌預(yù)防措施，通過(guò)中線切口識(shí)別含有腫瘤的肝葉。然后將一個(gè)16規(guī)血管造影術(shù)用針經(jīng)肝嚢插入腫瘤，把一個(gè)0.038英寸的導(dǎo)線穿過(guò)針，在導(dǎo)線上方退出針。將一5號(hào)French擴(kuò)張器穿過(guò)導(dǎo)線進(jìn)入胂瘤并退出。然后再將一5號(hào)French轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管穿過(guò)含有自身膨脹性不銹鋼Wall斯坦特固定模(直徑5mm,長(zhǎng)lcm)的導(dǎo)線。將斯坦特固定7^莫深入腫瘤，除去導(dǎo)線轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)管。1/3的大鼠是將常規(guī)用不銹鋼斯坦特固定才莫插入腫瘤，1/3的大鼠是一包衣有聚合物的斯坦特固定沖莫，另外1/3的為一種用聚合物-抗血管生長(zhǎng)因子化合物包衣的斯坦特固定模。用全身麻醉終止，將大鼠返回到動(dòng)物房中。第2天用普通腹部X射線照射以評(píng)價(jià)斯坦特固定模張開(kāi)的程度。插入斯坦特固定模后第2，7，14,28及第56天時(shí)注射Euthanyl處死大鼠，一旦確證安樂(lè)死后，將肝臟整個(gè)移去。于福爾馬林中固定48小時(shí)后，在每0.5mm間隔處切開(kāi)肝臟(包括用一個(gè)新刀片橫向切開(kāi)斯坦特固定模)。然后分析H和E染色的組織學(xué)部分，評(píng)價(jià)腫瘤長(zhǎng)入斯坦特固定模腔的程度。實(shí)施例8:微球的制備生產(chǎn)微球的優(yōu)選設(shè)備如下所述200ml水夾套燒杯(Kimax或Pyrex)，Haake循環(huán)水浴，直徑為2英寸的架空攪拌器和控制器(4葉，螺旋槳型不銹鋼攪拌器-Fisher牌)，500ml玻璃燒杯，熱板/攪拌器(Coming牌)，4x50ml聚丙烯離心管(Nalgene)，塑料插入蓋的玻璃閃爍瓶，臺(tái)式離心機(jī)(GPRBeckman)，高速離心才兒-落地式(JS21Beckman),Mettler分析天平(AJ100，0.1mg),Mettler數(shù)字頂加載天平(AE163，O.Olmg),自動(dòng)吸量管(Gilson)。試劑包括聚己內(nèi)酯("PCL"-分子量10,000到20，000,Polyscience,WarringtonPennsylvania,USA)，"洗涂后"的乙烯乙酸乙烯("EVA"，洗滌是為了除去抗氧劑BHT)，聚(DL)乳酸("PLA"-分子量15,000到25,000,Polyscience)，聚乙烯醇("PVA"-分子量124,000到186,000,99%水解；AldrichChemicalCo.,MilwaukeeWI,USA),二氯甲烷("DCM";HPLCgradeFisherscentific)及蒸餾水。A:5%(重量/體積，w/v)聚合物溶液的制備依賴于預(yù)制備的聚合物溶液，稱重1.00g的PCL或PLA，或者0.50g的PLA及洗滌后的EVA，將其直接倒入20ml玻璃閃爍瓶中。然后加入20毫升DCM,蓋緊瓶。將此瓶于室溫下(25^)貯存l小時(shí)(可以偶爾振搖)，或者直至所有的聚合物都溶解了(溶液應(yīng)澄清)。將溶液于室溫貯存至少兩周。B:5%(重量/體積)儲(chǔ)備液的制備稱重25克PVA,直接倒入600ml玻璃燒杯中。加入500毫升蒸鎦水及涂有3英寸特氟隆的攪拌條。用玻璃罩蓋上燒杯以減少蒸發(fā)，并且放入盛有300ml水的2000ml玻璃燒杯中(作為水浴)。將PVA在300轉(zhuǎn)/分下于85t攪拌(Coraing熱板/攪拌器)2小時(shí)或者至完全溶解。PVA的溶解可以觀察確定，溶液應(yīng);登清。然后將溶液轉(zhuǎn)入一個(gè)玻璃螺旋塞的容器中，在4r最長(zhǎng)可貯存2個(gè)月。但是該溶液在使用或稀釋前應(yīng)升至室溫。C:生產(chǎn)^f鼓球的步驟基于預(yù)制備^:球的粒度(見(jiàn)表l)，將100mlPVA溶液(濃度如表ni所示)放入200ml的水夾套燒杯中。Haake循環(huán)水浴與該燒杯連接，將內(nèi)容物在27r(+/-10^)平衡10分鐘?；陬A(yù)制備微球的粒度(見(jiàn)表m)，調(diào)節(jié)架空攪拌器的初始速率，將架空攪拌器的槳葉置于PVA溶液的中間。然后開(kāi)啟攪拌器，接著用5ml自動(dòng)吸量管經(jīng)2分鐘將10ml聚合物溶液(使用的聚合物溶液基于預(yù)制備孩i球的類型)滴加到攪拌著的PVA中。3分鐘后，調(diào)整攪拌速率(見(jiàn)圖m)，繼續(xù)攪拌溶液2.5小時(shí)。然后從微球制劑溶液中移去攪拌;、'i葉，用10ml蒸餾水漂洗以使漂洗液并入微球制劑溶液中。然后(i'微球制劑液倒入500ml燒杯中，用70ml蒸餾水洗滌夾套水浴，將其乜并入微球制劑溶液中。然后用玻璃棒攪拌180ml的微球制劑溶液，分別等量倒入四個(gè)50ml聚丙烯離心管中。然后蓋好離心管，離心10分鐘(離心力見(jiàn)表l)。用5ml的自動(dòng)吸量管或者真空吸管將微球丸中45mi的PVA溶液吸掉。表IIIPVA濃度，攪拌速率及用于微球不同直徑范圍的離心力制備階段微球直徑范圍<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>將5毫升蒸餾水分別加入每個(gè)離心管中，然后將其渦旋以再懸浮微球。將四種微球懸浮液連同20ml蒸鎦水一起倒入一個(gè)g心管中，再離心10分鐘(離心力見(jiàn)表l)。另外重復(fù)兩次這一過(guò)程.總共洗滌3次。然后最后一次離心微球，于10ml蒸餾水中再懸浮。最后洗滌后，將微球制劑轉(zhuǎn)入一個(gè)事先稱重的玻璃閃爍瓶中。塞好瓶，于室溫(25r)放置過(guò)夜以使微球在重力作用下沉降。粒度范圍是0.1um至3um的微球不會(huì)在重力作用下沉降，因此其留在1Oml的懸浮液中。D:直徑為10um至30um或者30um至100um微球的干煤微球在室溫下放置過(guò)夜后，用5ml的自動(dòng)吸量管或真空吸管吸去沉降后微球的上清液。在抽屜中的一個(gè)敞口瓶中將微球干燥l星期或者直至其完全干燥(瓶恒重)。可以通過(guò)將敞口瓶放置在通風(fēng)櫥中緩慢流動(dòng)的氮?dú)饬?流速約為10ml/分鐘')下以加速干燥。當(dāng)完全干燥后(瓶恒重)，稱重瓶，蓋上塞。將標(biāo)記好的加塞瓶于室溫下存放在抽屜中。微球一般保存期不超過(guò)3個(gè)月。E:直徑為0.1um至3um微球的干燥這一范圍內(nèi)的拔i球不會(huì)沉降下來(lái)，因此其可以在4r懸浮4周。為確定10ml懸浮液中微球的濃度，將200ul懸浮液試樣吸入l.5ml事先稱重的微型離心管中。然后在10,000g離心(Eppendorf臺(tái)式微型離心管)，除去上清液，將離心管在50t放置過(guò)夜。然后再稱重離心管以確定管中干燥凝:球的重量。F:裝有紅豆杉醇微:球的制備為制備含有微球的紅豆杉醇，將適量的稱重紅豆杉f,M基于預(yù)包嚢紅豆杉醇的百分比)直接放入20ml玻璃閃爍瓶中。然后向含有紅豆杉醇的瓶中加入10毫升適當(dāng)?shù)木酆衔锶芤?，使之渦旋直至紅豆杉醇溶解。然后如上述步驟(C)至(E)制備含有紅豆杉醇的微球。實(shí)施例9:斯坦特固定才莫包衣的制備用于下述實(shí)驗(yàn)的試劑和設(shè)備包括(從許多生產(chǎn)商獲得的醫(yī)用級(jí)斯坦特固定^^莫，如"Stecker"斯坦特固定模)固定裝置，20ml帶塞玻璃閃爍瓶(塑料插入型)，TLC噴霧器，氮?dú)飧?，玻璃試?lml以上的不同刻度)，玻璃燒杯(各種型號(hào))，Pasteur吸量管，鑷子，聚己內(nèi)酯("PCL"-分子量10,000到20,000,Polyscience)，紅豆杉醇(SigmaChemicalCo.,St.,Louis,Mo.,95o/。純度)，乙烯乙酸乙烯("EVA",洗滌，見(jiàn)前)，聚(DL)乳酸("PLA"—分子量15,000到25，000,Polysci畫(huà))，二氯甲烷("DCM";HPLCgradeFisherscentific)。A:噴霧斯坦特固定模的制備下面描述了使用長(zhǎng)約3cm的3mm巻曲直徑隔離金屬線斯坦特固定^t的典型方法。如果是較大直徑的斯坦特固定模，則用大容積的聚合物/藥物溶液。直接稱重足量聚合物到20ml玻璃閃爍瓶中，加入足量DCM而得到2。/。w/v的溶液。蓋好瓶，混合溶液以溶解聚合物(用手振搖)。用一塊尼龍并把斯坦特固定才莫放在曲頸瓶中而將其置于垂直方向。將此斯坦特固定^t固定裝置放在距通風(fēng)櫥底6至12英寸的一個(gè)適當(dāng)?shù)闹С治锷?例如，倒扣的2000ml玻璃燒杯)以進(jìn)行水平噴霧。用一自動(dòng)吸量管將適量(最少5ml)2免聚合物溶液轉(zhuǎn)入另外一個(gè)20ml玻璃閃爍瓶中。將適量紅豆杉醇加入溶液中，手搖帶塞瓶以溶解之。開(kāi)始噴霧時(shí)，拿下瓶蓋，將TLC噴霧器的吸管(僅此)浸入聚合物溶液中。注意在本過(guò)程中不需使用噴霧器的儲(chǔ)蓄器20ml的玻璃瓶作為儲(chǔ)蓄器。將氮?dú)飧走B接到噴霧器的氣體入口。逐漸增加壓力直至開(kāi)始噴霧。記錄這一壓力，并且在此整個(gè)過(guò)程中都使用該壓力。用5秒種振動(dòng)噴霧(每次噴霧間有15秒種的干燥時(shí)間)來(lái)噴霧斯坦特回定模。噴霧5次后，將斯坦特固定模旋轉(zhuǎn)90。后噴霧該部分。重復(fù)直至已噴霧斯坦特固定^莫所有的面。干燥期間，用手指巻曲氣體線以避免浪費(fèi)噴霧。繼續(xù)噴霧直至在斯坦特固定模上沉積了適量(基于用于體內(nèi)的特定斯坦特固定模)的聚合物。為確定該數(shù)量，完成噴霧及干燥斯坦特固定模后稱重斯坦特固定模。從終重減去斯坦特固定4莫的初始重量即為斯坦特固定4莫上聚合物的量(加紅豆杉醇)。在密封容器中貯存包衣好的斯坦特固定模。B:浸漬斯坦特固定才鄭々制備下面描述了使用長(zhǎng)約3cm的3mm巻曲直徑隔離金屬線斯坦特固定沖莫的典型方法。如果是較大直徑的斯坦特固定模，則用大號(hào)試管的聚合物/藥物溶液。直接稱重2gEVA到20ml玻璃閃爍瓶中，加入足量20mlDCM。蓋好瓶，放置2小時(shí)以溶解(不斷用手振搖瓶以幫助溶解)。直接稱重已知重量的紅豆杉醇到lml玻璃試管中，加入0.5ml聚合物溶液。用一個(gè)玻璃Pasteur吸量管輕輕抽吸聚合物溶液以溶解紅豆杉醇。紅豆杉醇溶解后，將試管放在近乎水平的地方(粘稠的聚合物溶液不會(huì)流出)。用鑷子將斯坦特固定模插入試管的底部。傾斜試管口于水平面下以使聚合物溶液幾乎流至管口，然后再將試管稍稍傾斜到水平面上。一邊緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)試管中的斯坦特固定沖莫，一邊緩緩移去斯坦特固定才莫(約30秒種)。在垂直位置干燥斯褲特固定模。一些封閉的孔可能會(huì)爆裂，因此在聚合物連續(xù)層中會(huì)有一個(gè)洞。其可以通過(guò)重復(fù)前面的浸漬步驟而<務(wù)復(fù)，但是重復(fù)步驟也可能導(dǎo)致進(jìn)一步爆裂及產(chǎn)生不平整的聚合物。一般地，最好就浸漬斯坦特固定模一次，切下沒(méi)有爆裂孔的斯坦特固定模。在密閉容器中貯存浸漬斯坦特固定模。實(shí)施例10:手術(shù)用"糊"的生產(chǎn)如上所述，本發(fā)明提供了各種含有聚合物的藥物組合物，其可用于各種臨床情況。例如，可以制備如下的組合物(1)作為"熱糊"以液態(tài)形式用于所需部位，在特定溫度下(如體溫)硬化成所需形狀的固態(tài)；(2)作為噴霧劑(即"毫微噴霧劑")直接或通過(guò)一個(gè)特殊裝置(如內(nèi)窺鏡)噴在所需部位，隨后硬化成FI體，其可以粘附在施用其的組織上；(3)作為一種粘附、柔韌、彈性的血管生長(zhǎng)抑制劑聚合物膜直接或通過(guò)一個(gè)特殊裝置施用于所需部位，并且其優(yōu)選粘附在施用其的部位上；及(4)作為一種在適當(dāng)栽體介質(zhì)中由凝:球懸浮液組成液體的直接或通過(guò)一個(gè)特殊裝置施用于所需部位，并且其可以在施用部位留下一微球?qū)?。上述?shí)例的代表性例子如下詳述oA:生產(chǎn)熱糊的方法用于下述實(shí)驗(yàn)的試劑和裝置包括無(wú)菌玻璃注射器(lml)，Coming熱豐l/攪拌器，20ml玻璃閃爍瓶，塑模(如50ulDSC盤(pán)或50ml離心管的塞內(nèi)部分)，手術(shù)刀和鑷子，聚己內(nèi)酯("PCL"-分子量10,000至20,000;Polysciences,Wa訂ington,PennsylvaniaUSA)，及鄉(xiāng)工豆杉醇(Sigma鄉(xiāng)及，至少95%的純度)。直接稱重5.00g聚己內(nèi)酯到20ml玻璃閃爍瓶中。將瓶放在一個(gè)含有50ml水的600ml燒杯中。緩緩加熱燒杯至65r,在此溫度下放置20分鐘。其可卩吏聚合物熔化。于65t徹底將已知重量的紅豆杉醇或其它血管生長(zhǎng)抑制劑混合到熔化的聚合物中。在傾倒過(guò)程中可借助一刮伊。冷卻塑模以使聚合物固化。將聚合物切成小塊(大小約為2mm)。這些小塊必須和lml玻璃注射器匹配。從lml玻璃注射器外抽柱塞(不要抽去塞頭)，使之平衡。調(diào)零。直接稱重0.5g小塊到注射器的開(kāi)口端。在65r(coming熱板)將玻璃注射器朝上放置(塞端朝下)在含有蒸餾水的500ml玻璃燒杯中，這樣水不會(huì)加入注射器。IO分鐘內(nèi)聚合物在該裝置中完全熔化。當(dāng)聚合物小塊熔化后，將注射器移出水浴，水平放)，，拔去塞。把柱塞插入注射器中，在注射器末端將熔化的聚合物壓成粘稠團(tuán)。塞好注射器，于室溫冷卻。當(dāng)使用時(shí)，需再將注射器加熱至60t，以液體形式川藥，其可在冷至體溫時(shí)固化。B:生產(chǎn)毫微噴霧劑的方法毫微噴霧劑是已知鹽水中的小微球。如果微球非常小(即直徑在lum以下)，其形成膠體，一次懸浮液在重力作用下不會(huì)沉降。正如下面的詳述，可以制備適用于通過(guò)指泵氣溶膠沉積在組織上的O.lum至lum卩徵粒的懸浮液。用于生產(chǎn)毫微噴霧劑的設(shè)備及材料包括200ml水夾套燒杯(Kimax或Pyrex)，Haake循環(huán)水浴，直徑為2英寸的架空攪拌器和控制器(4葉，螺旋槳型不銹鋼攬拌器-Fisher牌)，500ml玻璃燒杯，熱板/攪拌器(Coming牌)，4x50ml聚丙烯離心管(Nalgene)，塑料插入蓋的玻璃閃爍瓶，臺(tái)式離心機(jī)(GPRBeckman)，高速離心機(jī)-落地式(JS21Beckman)，Mettler分析天平(AJ100,0.1mg),Mettler數(shù)字頂加栽天平(AE163,O.Olmg)，自動(dòng)吸量管(Gilson)、無(wú)菌吸量管頭、泵氣溶膠(Pfe近erpharmaceuticals)20ml、層流通風(fēng)櫥、聚己內(nèi)酯("PCL"-分子量10,000到20,000,Polyscience,WarringtonPe廳ylvania,USA)，"洗滌后"(見(jiàn)前)的乙烯乙酸乙烯("EVA"),聚(DL)乳酸("PLA"-分子量15,000到25，000，Polyscience)，聚乙烯醇("PVA"-分子量124,000到186,000,99%水解；AldrichChemicalCo.'MilwaukeeWI,USA),二氯甲烷("DCM";HPLCgradeFisherscentific)、蒸餾水及無(wú)菌鹽水(BectonandDickensonorequivalent)。1.5%(w/v)聚合物溶液的制備依賴于預(yù)制備的聚合物溶液，稱重1.00g的PCL或PL/V，或者0.50g的PLA及洗滌后的EVA,將其直接倒入20ml玻璃閃^瓶中。然后用量筒加入20毫升DCM，蓋緊瓶。將此瓶于室溫下(放置l小時(shí)或者直至所有的聚合物都溶解(可以偶爾振搖)。聚合物的溶解可以，見(jiàn)察確定，溶液應(yīng)澄清。標(biāo)記溶液的名稱和生產(chǎn)日期。將溶液于室溫貯存，于兩周內(nèi)使用。2.3.5%(w/v)A者備、液的制備可以通過(guò)下述的步驟制備溶液，或者通過(guò)稀釋用于制備微球的5%(w/v)PVA儲(chǔ)備液(見(jiàn)實(shí)施例8)。簡(jiǎn)而言之，直接稱重17.5克PVA到600ml玻璃燒杯中，加入500毫升蒸餾水。在燒杯中放置一個(gè)涂有3英寸特氟隆的攪拌條。用玻璃罩蓋上燒杯以減少蒸發(fā)。將燒杯放入盛有300ml水的2000ml玻璃燒杯中(作為水浴)。將PVA在300轉(zhuǎn)/分下于85r攪拌(Coraing熱板/攪拌器)2小時(shí)或者至完全溶解。PVA的溶解可以觀察確定，溶液應(yīng)澄清。然后用吸量管將溶液轉(zhuǎn)入一個(gè)玻璃螺旋塞的容器中，在4^最長(zhǎng)可貯存2個(gè)月。該么.:液在使用或稀釋前應(yīng)升至室溫。3.毫微球的生產(chǎn)方法將攪拌裝置置于通風(fēng)櫥中。將100mlPVA溶液(濃度如表III所示)放入200ml的水夾套燒杯中。Haake循環(huán)水浴與該燒杯連接，將內(nèi)容物在27t(平衡10分鐘。將架空攪拌器的初始速率調(diào)節(jié)到3000轉(zhuǎn)/分(+/-200轉(zhuǎn)/分)。把架空攪拌器的槳葉置于PVA溶液的中間，開(kāi)啟攪拌器。用5ml自動(dòng)吸量管經(jīng)2分鐘將10ml聚合物溶液(使用的聚合物溶液基于預(yù)制備毫徵噴霧劑的類型)滴加到攪拌著的PVA中。3分鐘后，調(diào)整攪拌速率至2500轉(zhuǎn)/分(+/-200轉(zhuǎn)/分)，繼續(xù)攪拌2.5小時(shí)。然后從毫微噴霧劑制劑溶液中移去攪拌槳葉，用10ml蒸餾水漂洗。將漂洗液并入毫微噴霧劑制劑溶液中。將毫微噴霧劑制劑液倒入500ml燒杯中。用70ml蒸餾水洗涂夾套水浴，將其也并入毫微噴霧劑制劑溶液中。然后用玻璃棒攪拌180ml的毫微噴霧劑制劑溶液，分別等量倒入四個(gè)50ml聚丙烯離心管中。然后蓋好離心管，在1000(^(+/-100(^)離心10分鐘。用5ml的自動(dòng)吸量管或者真空吸管將毫微噴霧劑丸中45ml的PVA溶液吸出棄去。將5毫升蒸餾水分別加入每個(gè)離心管中，然后將其渦旋以再懸浮微球。用20ml蒸餾水將四種微球懸浮液沖入一個(gè)離心管中。為了洗滌微球，于10000g(+M000g)將毫微噴霧劑離心10分鐘。除去微球丸的上清液。加入40ml蒸餾水，用渦旋再懸浮微球。另外重復(fù)兩次這一過(guò)程，總共洗滌3次。進(jìn)行第四次洗滌，但是只用lOml(不是40ml)蒸餾水再懸浮微球。第四次洗滌后，將微球制劑轉(zhuǎn)入一個(gè)下先稱重的玻璃閃爍瓶中。塞好瓶，于室溫(25r)放置l小時(shí)以使直徑為2mn及3um的微球在重力作用下沉降。l小時(shí)后，用一5ml自動(dòng)吸量管吸士上部9ml的懸浮液。將此9ml放入無(wú)菌帶塞的50ml離心管中。在10000g(+A1000g)將懸浮液離心10分鐘。棄去上清液，在無(wú)菌鹽水中再懸浮球丸。所用鹽水的量取決于所需懸浮液的終濃度(通常為10免Wv'。在無(wú)菌鹽水中徹底漂洗氣溶膠裝置，將毫微噴霧劑懸浮液加入到氣溶膠中。C:裝有紅豆杉醇微球的制備為制備含有紅豆杉醇的毫微噴霧劑，使用紅豆杉醇(Sigma級(jí)95%純度)。為制備聚合物藥物儲(chǔ)備液，直接稱取適量的紅豆杉醇到20ml玻璃閃爍瓶中。直接放入20ml玻璃閃爍瓶中。適量的確定基于毫微噴霧劑中紅豆杉醇的百分比。例如，如果需要含有5%紅豆杉醇的毫微噴霧劑，則需稱取的紅豆杉醇量為25mg，因?yàn)樗尤氲木酆衔锏牧繛?0ml5免的聚合物DCM溶液(見(jiàn)下一步驟)。向含有紅豆杉醇的瓶中加入10毫升適當(dāng)?shù)?%聚合物溶液。蓋好塞并渦旋或者手振蕩以溶解紅豆杉醇(觀察確定紅豆杉醇的溶解)。標(biāo)記生產(chǎn)日期。當(dāng)天使用。按上述步驟，除了用聚合物/藥物(如紅豆杉醇)儲(chǔ)備液代替聚合物溶液。D:生產(chǎn)薄膜的方法術(shù)語(yǔ)"薄膜"是指可形成各種幾何形狀其中一種的聚合物。薄膜可以是薄的聚合彈性層或者2mm厚的聚合物圓盤(pán)。將g膜設(shè)計(jì)為可以放在暴露的組織上，因此任何包嚢的藥物在該組織部位可以經(jīng)過(guò)很長(zhǎng)的時(shí)間從聚合物釋放出?？梢酝ㄟ^(guò)幾種方法制備薄膜，包括例如澆鑄和噴霧。澆鑄技術(shù)中，將聚合物熔化并倒入塑模中，或者將其溶于二氯甲烷并倒入塑模中。然后將聚合物冷卻固化或者將溶劑蒸發(fā)而固化。噴霧技術(shù)中，將聚合物溶于溶劑中，噴霧到玻璃上，當(dāng)溶劑蒸發(fā)后，聚合物就固化在玻璃上。重復(fù)噴霧能使聚合物形成可從玻璃上剝離下來(lái)的薄膜。用于下述實(shí)驗(yàn)的試劑和設(shè)備包括小燒杯，coming熱板攪拌器，澆鑄塑模(如50ml離心管塞)及塑模支持裝置，20ml帶塞玻璃閃爍瓶(塑料插入型)，TLC噴霧器，氮?dú)飧?，聚己?nèi)酯("PCL"—分子量10,000到20,000，Polyscience)，紅豆杉醇(Sigma95免純度)，乙醇，"洗滌后"(見(jiàn)前)乙烯乙酸乙烯("EVA")，聚(DL)乳酸("P1A"-分子量15,000到25,000,Polyscience)，二氯甲烷(HPLCgradeFisherscentific)。l.生產(chǎn)薄膜的方法-熔融澆鑄直接稱取已知重量的PCL到一個(gè)小燒杯中。將該燒杯放在含有水的較大的燒杯中(作為水浴)，置于70r的熱板上15分鐘或者直至聚合物完全熔化。將已知重量的藥物加入熔化的聚合物中，充分?jǐn)嚢杌旌衔?。為了協(xié)助藥物在熔化PCL中的分散，可以將藥物懸浮/溶解在少量(〈1oy。體積的熔化PVL)的100%乙醇中。然后將乙醇懸浮液混合到熔化的聚合物中。將熔化的聚合物倒入塑模中，使其冷卻。冷卻后，在一個(gè)容器中貯存薄膜。2.生產(chǎn)薄膜的方法-溶劑澆鑄直接稱取已知重量的PCL到20ml玻璃閃爍瓶，加入足量的DCM得到10免w/v的溶液。蓋好瓶塞，混合溶液。將足量的紅豆杉醇加入溶液中以獲得所需的紅豆杉醇終濃度。用手振搖或者渦旋以溶解溶液中的紅豆杉醇。將溶液放置l小時(shí)(直至沒(méi)有氣泡)，然后緩緩倒入塑模中。所用的塑?；谒璧男螤?。在通風(fēng)櫥中將塑模放置過(guò)夜以蒸發(fā)DCM。將薄膜留在塑模中貯存或者刮下貯存在密閉的容器中。3.生產(chǎn)薄膜的方法-噴霧直接稱取足量的聚合物到20ml玻璃閃爍瓶中，加入足量的DCM，得到2免w/v的溶液。蓋好并瓦塞，混合溶液以溶解聚合物(手振搖)。在通風(fēng)櫥中于適當(dāng)?shù)乃苣ＶС盅b置中垂直方向放置塑模。將此塑模固定裝置放在距通風(fēng)櫥底6至12英寸的一個(gè)適當(dāng)?shù)闹С治锷?例如，倒扣的2000ml玻璃燒杯)以進(jìn)行水平噴霧。用一自動(dòng)吸量管將適量(最少5ml)2免聚合物溶液轉(zhuǎn)入另外一個(gè)20ml玻璃閃爍瓶中。將足量紅豆杉醇加入溶液中，手搖帶塞瓶以溶解之。開(kāi)始噴霧時(shí)，拿下瓶蓋，將TLC噴霧器的吸管(僅此)浸入聚合物溶液中。注意:在本過(guò)程中不需使用噴霧器的儲(chǔ)蓄器-20ml的玻璃瓶作為儲(chǔ)蓄器。將氮?dú)飧走B接到噴霧器的氣體入口。逐漸增加壓力直至開(kāi)始噴霧。記錄這一壓力，并且在此整個(gè)過(guò)程中都使用該壓力。用5秒種振動(dòng)噴霧(每次噴霧間有15秒種的干燥時(shí)間)來(lái)噴霧塑模。繼續(xù)噴霧直至適當(dāng)厚度的聚合物沉積在塑模上。厚度基于所需量。使噴霧薄膜留在塑模上，將其貯存在密閉容器中。E:毫微糊的制備過(guò)程毫微糊是一種懸浮在親水膠中的微球懸浮液。本發(fā)明的一方面，作為將裝有藥物的微球緊置于乾組織上的一種方法，可以將膠或糊涂敷在組織上。由于糊是水性的，其可以很快被體液稀釋，因此導(dǎo)致糊稠度的下降，橫:孩i球易于沉積在鄰近的組織上。因此賴:球包嚢的藥物池就定位在l巴組織周圍。用于本實(shí)驗(yàn)的試劑和燒杯包括玻璃燒杯、聚羧乙烯925(藥用級(jí)，GoodyerChemicalCo.)、蒸餾水、氮氧化鈉(1M)水溶液、氫氧化鈉(5M)水溶液、懸浮在水中的20y。w/v，0.1um至3um粒度范圍的凝:球(見(jiàn)前)。1.5%聚羧乙烯膠的制備將足量的聚羧乙烯加入1M的氫氧化鈉，得到5免w/v的溶液。為了溶解1M氫氧化鈉中的聚羧乙烯，放置混合液約l小時(shí)，在此期間，用玻璃棒攪拌混合物。l小時(shí)后，測(cè)定混合液的pH值。低pH值表示聚羧乙烯尚未完全溶解。所需達(dá)到的pH值應(yīng)為7.4。用5M的氬氧化鈉調(diào)節(jié)pH值(將5M氫氧化鈉緩緩滴加到混合液中.不斷攪拌混合液并測(cè)定混合液的pH值)。將pH值調(diào)至7.4通常要花約l個(gè)小時(shí)的時(shí)間。一旦pH值成為7.4，蓋好凝膠并放置2至3小時(shí)。然后，檢測(cè)pH值以確保其仍為7.4。重復(fù)該過(guò)程，直至達(dá)到了所需的穩(wěn)定的pH值。在容器上標(biāo)記凝膠名稱及日期。在下一周用此凝膠制備毫微糊。2.生產(chǎn)毫凝j胡的方法將足量0.1um至3um的微球加入水中，得到20%微球懸浮液。將8ml5呢w/v聚羧乙烯膠放在一個(gè)玻璃燒杯中。加入2ml20呢的微球懸浮液。用玻璃4奉或混合鏟攪拌混合液以充分分散凝膠中的凝:球。這需30夯鐘。一旦微球分散在凝膠中，將混合液放在一個(gè)儲(chǔ)存罐中。于4t貯存。其必須在一個(gè)月內(nèi)使用。實(shí)施例ll:紅豆杉醇從微球中(由乙烯乙酸乙烯酯共聚物及聚(D,L乳酸)混合組成)的控制性釋放。微球在CAM試驗(yàn)中的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)本實(shí)施例描述了制備裝有紅豆杉醇的微球(由生物降解性聚(d,l-乳酸)(PLA)聚合物及非生物降解性乙烯乙酸乙烯酯(EVA)共聚物組成)。此外，表明了紅豆杉醇從CAM上的微球中的體外釋放率及抗血管生長(zhǎng)活性。用于本實(shí)驗(yàn)的試劑包括紅豆杉醇(從.SigmaChemicalCo.(St丄ouis,MO)購(gòu)買)；PLA(分子量15,000-25,000)MVA(60%乙酸乙烯酯)(從Polyscience(Warrington,PA)購(gòu)買)；聚乙烯醇(PVA)(分子量124,000-186,000,99%水解掉，^^AkdrichChemicalCo.(Mihvaukee，WI)購(gòu)買)以及二氯曱烷(DCM)(HPLC級(jí)，來(lái)自FisherScientificCo.)。蒸餾水用于整個(gè)過(guò)程。A:微球的制備如實(shí)施例8用溶劑蒸發(fā)法制備微球。簡(jiǎn)而言之，用EVA:PLA為35:65至90:10之間的混合物制備5%w/v聚合物的20mlDCM溶液。向20ml玻璃瓶中5ml2.5。/。w/v的PVA水溶液中邊攪拌邊滴加lml的聚合物溶液。將6個(gè)類似的瓶放在架空攪拌器、溶解測(cè)試儀(Vanderkamp)的6個(gè)位置，在200轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?。將并瓦溫?jīng)15分鐘從室溫升至40r，并在40t保持2小時(shí)。于500xg離心瓶，在水中洗滌微球三次。在一些EVA:PLA聚合物的混合物中，由于除去了分散劑或乳化劑-PVA，微球試樣在洗滌過(guò)程中會(huì)聚集。可以半定量分析聚集作用，因?yàn)榫奂奈⑶驎?huì)熔融并且熔融后的聚合物團(tuán)塊漂浮在洗液的表面。在洗滌過(guò)程中棄去這層表面聚合物層，將剩下的丸狀孩爻球稱重。聚集百分?jǐn)?shù)(％)由下式得到聚集百分?jǐn)?shù)(％)=1-(丸狀微球的重量)x100初始聚合物重量將紅豆杉醇溶解在5%w/v聚合物的DCM溶液中制備裝有紅豆杉醇的微球(0.6。/。w/w紅豆杉醇)。所用的聚合物混合物為50:50的eva:pla。通過(guò)將紅豆杉醇/聚合物溶液分別滴力。到2.5y。w/vPVA及5。/ow/vPVA中而制備微球的"大"顆粒部分及"小"顆粒部分。在200轉(zhuǎn)/分于40r攪拌分散'^2小時(shí)，離心并在水中洗滌3次(如前所述)。空氣中干燥微球，用帶有分級(jí)測(cè)微計(jì)的光學(xué)顯微鏡測(cè)量試樣的粒度。每個(gè)試樣計(jì)數(shù)逾300個(gè)微球。制備對(duì)照組微球(不含紅豆杉醇)，如前測(cè)定大小。B:包嚢安丈率將已知重量的裝有紅豆杉醇的微J求溶于lmlDCM中，于50^加入20ml4(H的乙腈水溶液，渦旋直至DCM蒸發(fā)掉。用HPLC(流動(dòng)才目為水甲醇乙腈(37:5:58)，流速lml/分4中，(Beckmanisocratic泵)，C8反相柱(Beckman),232nmUV檢測(cè))測(cè)定4(H乙腈中紅豆杉醇的濃度。為確定提取過(guò)程的回收率，將已知重量(100-1000ug)的紅豆杉醇溶于lmlDCM中，如前再進(jìn)行相同的提取過(guò)程?；厥章士偞笥?5%,適當(dāng)校正包嚢率的數(shù)值。C:藥物釋放研究在15ml螺旋塞玻璃試管中放入1Oml1OmM磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)(pH7.4)及35mg裝有紅豆杉醇的微球。在37T轉(zhuǎn)動(dòng)試管，于給定間隔在1500xg離心5分鐘，留下上清液以作分析。于37t在新鮮的PBS(10ml)中再懸浮微球丸并保溫。將紅豆杉醇吸入lmlDCM中來(lái)確定其的濃度，隨后在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)干燥，在lml40。/。乙腈水溶液中再生，用如前所述的HPLC分析。D:掃描電子顯微鏡(SEM)將凝:球放在試樣架上，用金噴鍍包衣，用Philips501BSEM(在15kV搡作)進(jìn)行顯微攝影。E:CAM研究將受精的家養(yǎng)雞胚在無(wú)殼培養(yǎng)前孵育4天。在90%相對(duì)濕度及3免C02中孵育蛋內(nèi)容物。孵育的第6天，將lmg等分試樣的裝有0.60/0紅豆杉醇或?qū)φ战M微球(不含紅豆杉醇)直接置于CAM表面。暴露2天后，用一個(gè)與攝像機(jī)接口的立體顯微鏡檢查脈管系統(tǒng)；然后將視頻信號(hào)顯示在計(jì)算機(jī)上并打印。F:結(jié)果由10(HEVA制得的微球可自由懸浮在PVA溶液中，但是在隨后于水中洗滌以除去PVA的過(guò)程中則發(fā)生凝聚及結(jié)合或者徹底的熔融。與不斷增加比例的PVA混合的EVA所制得的孩支球，當(dāng)在水中洗滌時(shí)，則表現(xiàn)出下降的凝聚力及結(jié)合力(如圖15A所示)。由50:50混合的EVA:PLA形成的微球具有良好的物理穩(wěn)定性，即，微球可保持分離狀態(tài)，并且可以很好的懸浮而不發(fā)生聚集及結(jié)合(可忽略)。"小"顆粒部分微球的粒度范圍確定為>95%的微沐試樣(重量)在IO-30mm之間，而"大"顆粒部分的拔&泉?jiǎng)t為>95%的微球試樣(重量)在30—100mm之間。裝有紅豆杉醇的50:50EVA:PLA微球的"小"和"大"粒度范圍的代表性掃描電子昆微攝影分別如圖15B及15C所示。微球?yàn)楸砻婀饣那蝮w，并且在微球的表面沒(méi)有固體藥物。將紅豆杉醇裝入50:50EVA:PLA孩i球的效率在95-100%之間(紅豆杉醇的初始濃度為每50mg聚合物100-1000mg的紅豆杉醇)。在"小"或"大"微球的包囊效率之間沒(méi)有顯著的差異(Studentt-檢驗(yàn)，p<0.05)。紅豆杉醇從0.6o/ow/v裝載的50:50EVA:PLA微球中釋放的時(shí)間如圖15D所示("小"顆粒微球是圓圈，"大"顆粒微球是黑點(diǎn))。在三個(gè)試管中用3項(xiàng)不同的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行釋放速率的研究。釋放圖為雙相，即紅豆杉醇最初的快速釋放或"突發(fā)"相(發(fā)生在兩種粒度范圍微球的最初4天)。隨后是一個(gè)非常慢的釋放相。在"小"或"大"微球的釋放速率之間沒(méi)有顯著的差異。在含有10-13%紅豆杉醇的微球中，紅豆杉醇在50天釋放完。用CAM試驗(yàn)測(cè)試裝有紅豆杉醇的微球(0.6。/。w/v的裝載量)，結(jié)果示于圖15E中。紅豆杉醇微球?qū)⒆懔康乃幬镝尫懦?，從而在周圍組織中產(chǎn)生一個(gè)無(wú)血管區(qū)(圖15F)。注意緊接微球(圖15E及15F中的"MS")的是一個(gè)完全沒(méi)有血管的區(qū)域(區(qū)l);離微球再遠(yuǎn)一些的地方是一個(gè)萎縮的無(wú)功能毛細(xì)管區(qū)(區(qū)2);只有在離微球約6mm遠(yuǎn)的地方毛細(xì)管才恢復(fù)正常。在用對(duì)照組微球(不奮紅豆杉醇)處理的CAM中,血管網(wǎng)為正常。討論動(dòng)脈化學(xué)性栓塞是一種侵襲性外科技術(shù)。因此，理想地，抗血管生長(zhǎng)藥物及抗癌藥物(如紅豆杉醇)化學(xué)性栓塞的形成可以在腫瘤部位以長(zhǎng)時(shí)間(幾個(gè)月)發(fā)揮活性的足夠濃度釋放藥物。EVA是一種組織相容性非降解聚合物，其已用于長(zhǎng)期(>100天)控制釋放大分子。最初選擇EVA作為制備微球的聚合物生物材料，其中紅豆杉醇分散在聚合物基質(zhì)中。但是，用10(HEVA制備的微球在洗滌過(guò)程中幾乎會(huì)全部聚集及結(jié)合。以乳酸和幾基乙酸為基礎(chǔ)的聚合物及共聚物是生理惰性和生物相容性的，并且可以通過(guò)水解而降解為毒理學(xué)上可接受的產(chǎn)物。乳酸及羥基乙酸的共聚物比PLA具有更快的降解率，用這些共聚物制備的藥物裝載微球不適于幾個(gè)月的長(zhǎng)期控制性釋放。Dollinger和的增加而增加。他們?cè)O(shè)想EVA與PLA的混合可以提供給聚合物基質(zhì)比PLA更好的機(jī)械穩(wěn)定性及更好的藥物釋放速率的控制。圖15A扭VA:PLA^質(zhì)中混合50%或更少的EVA可生產(chǎn)出在水或PBS中物理穩(wěn)定的微球懸浮液。選擇50:50EVA:PIA的混合用于隨后所有的研究。不同粒度范圍的微球可以通過(guò)改變?nèi)榛瘎?PVA在水相中的濃度而制備。"小"微球在5免w/v的高PLA濃度制備，而"大"微球在2.5%w/v的PVA中制備。所有其它生產(chǎn)變量對(duì)千兩種粒度微球都相同。高濃度的乳化劑得到稍粘稠的水性分散介質(zhì)，并且制得乳化在水相中的聚合物/紅豆杉醇/DCM小滴，這樣即為小微球。將含有95-100%初始紅豆杉醇的微球加入有機(jī)相中在固態(tài)微球中包嚢。紅豆杉醇低的水溶性有利于其分散到含有聚合物的有機(jī)相中。紅豆杉醇從50:50EVA:PLA微球中的釋放速率非常慢，在50天中釋放出少于15%的裝載紅豆杉醇。藥物釋放的最初突發(fā)相是由于微球表層(靠近微球的表面)藥物的分散。藥物從非降解性聚合物基質(zhì)(如EVA)的釋放機(jī)制認(rèn)為是水通過(guò)聚合物中分散的藥物相而擴(kuò)散，藥物的溶解及溶質(zhì)通過(guò)一系列中間連接(充滿液體的孔)而擴(kuò)散。EVA和PLA的混合物在PLA中30-70%EVA的范圍內(nèi)是不混溶的或者是雙連續(xù)的。37T在PBS緩沖液中進(jìn)行的降解研究中(在誘導(dǎo)或滯后期后)，PLA進(jìn)行水解性降解并且/AEVA:PLA聚合物混合基質(zhì)中浸蝕下來(lái)，殘留下一個(gè)惰性海綿狀空架。盡管誘導(dǎo)期APLA降解的速率以及從混合基質(zhì)的浸蝕取決于PLA在基質(zhì)中的比例及所經(jīng)歷的過(guò)程，但是直至40-50天后幾乎沒(méi)有或沒(méi)有PLA的損失。盡管在50天的體外釋放速率研究中可能發(fā)生PLA從50:50EVA:PLA微球的某些浸蝕(圖15C)，但是很可能藥物從聚合物混合體釋放的原始機(jī)制是溶質(zhì)通過(guò)聚合物基質(zhì)中多孔網(wǎng)的擴(kuò)散。在總結(jié)釋放速率的研究時(shí)，分析微球中殘留的藥物量。保留在厶；("犬"微球)和89%+/-12%("小"微球)。裝栽6mg每mg聚合物(0.6%)的微球當(dāng)其置于雞胚CAM上時(shí)顯示出強(qiáng)烈的血管生長(zhǎng)抑制作用(圖15E和15F)。實(shí)施例12:紅豆杉醇在聚(E-己內(nèi)酯)微球中的包嚢。裝栽紅豆杉醇微球在CAM試驗(yàn)中的血管生長(zhǎng)抑制作用本實(shí)施例闡述了聚(e-己內(nèi)酯)的生物可降解微球中紅豆杉醇的體外釋放速率，并且表明了在CAM上從這些微球中釋放出的紅豆杉醇的抗血管生長(zhǎng)活性。用于本實(shí)驗(yàn)的試劑包括聚(e-己內(nèi)酯)("PCL")(分子量35,000-45,000;/APolysciences(Warrington,PA)購(gòu)買)；二氯甲烷("DCM")(購(gòu)自FisherScientificCo.,加拿大；聚乙烯醇(PVA)(分子量12,000-18,000，99%水解掉，從AkdrichChemicalCo.(Milwaukee,Wis.)購(gòu)買)以及來(lái)自SigmaChemicalCo.(St丄ouis,MO)的紅豆杉醇。除非另有說(shuō)明，所用的化學(xué)試劑都使用所提供的。蒸餾水用于整個(gè)過(guò)程。A:微球的制備如實(shí)施例8用溶劑蒸發(fā)法制備微球。簡(jiǎn)而言之，通過(guò)將10mg紅豆杉醇及190mgPCL溶于2mlDCM中、加入100mll免PVP水溶液并在1000轉(zhuǎn)/分于25^攪拌2小時(shí)而制備裝載5免w/w紅豆杉醇的微球。將微球懸浮液在1000xg離心10分鐘(BeckmanGPR)，除去上清液，用水洗滌微球3次。洗滌后的微球空氣干燥過(guò)夜，在室溫下儲(chǔ)存。對(duì)照組微球(不含紅豆杉醇)如上制備。用一個(gè)帶有分級(jí)測(cè)微計(jì)的光學(xué)顯微鏡測(cè)定微球的粒度。B:包囊效率將已知重量的裝栽藥物微球(約5mg)溶于8ml乙腈中，加入2ml蒸餾水沉淀聚合物?；旌衔镌?000g離心10分鐘，包嚢的紅豆杉醇量從上清液中的吸收計(jì)算(用UV分光光度計(jì)(Hewlett-Packard8452ADiodeArraySpectrophotometer)在232nm'測(cè)定)。C:藥物釋放研究將約10ml裝載紅豆杉醇的微球懸浮在一個(gè)螺旋塞玻璃試管中l(wèi)OmllOmM磷酸鹽緩沖鹽水中(PBS)(pH7.4)。在37t轉(zhuǎn)動(dòng)(開(kāi)口及管底方向)試管，于給定間隔除去19.5ml上清液(微球沉積在管底后)，通過(guò)0.45mm的膜濾器過(guò)濾后留作紅豆杉醇分析。在每個(gè)試管中放入等體積的PBS以在整個(gè)研究中保持下降的狀態(tài)。用3xlmlDCM萃取濾液，將DCM萃取物于氮?dú)饬飨抡舭l(fā)干燥，再溶于lml乙腈中，用HPLC(流動(dòng)相為水甲醇乙腈(37:5:58)，流速lml/分鐘，(Beckmanisocratic泵)，C8反相柱(Beckman),232nmUV檢測(cè)(ShimadzuSPDA))分析。D:CAM研究將受精的家養(yǎng)雞胚在無(wú)殼培養(yǎng)前孵育4天。將育的^6天，將lmg等分試樣的裝載5y。紅豆杉醇或?qū)φ战M微球(不含紅豆杉醇)直接置于CAM表面。暴露2天后，用一個(gè)與攝像機(jī)接口的A體顯微鏡檢查脈管系統(tǒng)；然后將視頻信號(hào)顯示在計(jì)算機(jī)上并打印jE:掃描電子顯微鏡(SEM)將微球放在試樣架上，用金噴鍍包衣，用Philips50IB掃描電子顯微鏡(在15kV搡作)進(jìn)行顯微攝影。F:結(jié)果微球試樣的粒度范圍在30—100mm之間，盡管在所有裝載紅豆杉醇或者對(duì)照組微球中發(fā)現(xiàn)一些微球落在此范圍外。P('L微球裝載紅豆杉醇的效率在所有裝載藥物的微球中通常大于95%,掃描電子顯微鏡檢查表明所有的微球都是球體，形態(tài)上許多為粗糙或紋孔表面。在孩i球表面沒(méi)有發(fā)現(xiàn)固體藥物。紅豆杉醇從裝載1%、2%及5%紅豆杉醇PCL微球中的釋放時(shí)間如圖16A所示。釋放圖為雙相。在所有裝載的藥物中有一個(gè)紅豆杉醇最初的快速釋;^t或"突發(fā)"相。突發(fā)相在1%和2%紅豆杉醇的裝栽中發(fā)生l-2天，在5%裝栽的微球中發(fā)生3-4天。繼最初的快速釋放相后是一個(gè)非常慢的藥物釋放相。含有1%或2%紅豆杉醇的微球在21天后就沒(méi)有更多的藥物釋放了。在裝載5%紅豆杉醇的微球中，21天后微球已釋放出全部藥量的20%。圖16B表明用對(duì)照組PCL微球處理的CAM，圖16C表明用裝栽5%紅豆杉醇微球處理的CAM。用對(duì)照組微球處理的CAM具有正常的毛細(xì)管網(wǎng)。用紅豆杉醇-PCL農(nóng)i球處理的CAM顯示出明顯的血管退化及缺乏血管網(wǎng)的區(qū)域。G:討論制備裝載紅豆杉醇微球的溶劑蒸發(fā)法具有很高的紅豆杉醇包囊效率—95-100%。這是由于紅豆杉醇難溶于水，其的憎水特性有利于其在含有聚合物的有機(jī)溶劑相中分配。紅豆杉醇的雙相釋放圖是許多藥物從生物可降解聚合物基質(zhì)中釋放的典型方式。聚(e-己內(nèi)酯)是一個(gè)酯族聚酯，其在生理?xiàng)l件下通過(guò)水解而降解，無(wú)毒，同時(shí)其是組織相容性的。PCL的降解比已4故過(guò)詳細(xì)研究的乳酸和祭基乙酸的聚合物及共聚物的降)lf^慢的多，因此其適用于長(zhǎng)期藥物釋放體系。紅豆杉醇釋放的最初快速或突發(fā)相認(rèn)為是由于微球表層(靠近微球的表面)藥物的分散。紅豆杉醇在第二相(慢)的辯，放方式不可能歸因于PCL的降解或浸蝕，因?yàn)檠芯勘砻髟隗w外的條件下，經(jīng)過(guò)7.5星期的時(shí)間，PCL在水中沒(méi)有明顯的重量損失或表面浸蝕。紅豆杉醇釋放的慢相可能是由于藥物溶解在聚合物基質(zhì)充滿液體的孔隙中以及在孔隙中的擴(kuò)散。在裝載紅豆杉醇較多的微球中較高的釋放速率可能是聚合物基質(zhì)中更多孔隙網(wǎng)的結(jié)果。已表明含有5%紅豆杉醇的微球當(dāng)置于CAM上時(shí)能釋放出足量的可產(chǎn)生血管生長(zhǎng)強(qiáng)烈抑制作用的藥物。對(duì)血管生長(zhǎng)的抑制導(dǎo)致了圖16C中所示的無(wú)血管區(qū)。實(shí)施例13:由乙烯乙酸乙烯酯及表面活性劑組成的裝栽紅豆杉醇的聚合物薄膜如實(shí)施例IO制備兩種類型的薄膜裝栽紅豆杉醇的純EVA薄膜及裝載紅豆杉醇的EVA/表面活性劑混合薄膜(即，PluronicF127,Span80和PhironicL101)。檢測(cè)的表面活性劑是兩種憎水表面活性劑(Span80和PluronicLlOl)和一種親水表面活性劑(PluronicF127)。Pluronic表面活性劑本身是聚合物，這一點(diǎn)很吸引人，因?yàn)槠淇膳cEVA混合而使各種因?yàn)獒尫判再|(zhì)最佳化。Span80的分子稍小，其可以某種方式分散在聚合物基質(zhì)中，但是不形成混合物。表面活性劑可以用于調(diào)節(jié)紅豆杉醇從薄膜的釋放速率，并且可以優(yōu)化薄膜的某些物理參數(shù)。表面活性劑混合的薄膜(其表明藥物釋放速率可以控制)具有改變速率及化合物在水中膨脹程度的能力。水在聚合物-藥物基質(zhì)中的擴(kuò)散對(duì)藥物從載體中的釋放很重要。圖17C和17D表明了當(dāng)表面活性劑水平在混合物中改變時(shí)薄膜膨脹的程度。純EVA薄膜在2個(gè)月內(nèi)沒(méi)有顯著程度的膨脹。但是，當(dāng)增加加入EVA中表面活性劑的水平時(shí)，可以增加混合物的膨脹程度，增加親水性也可以增加膨脹。這些薄膜的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖17A-E所示。簡(jiǎn)而言之，圖17A表明紅豆杉醇從純EVA薄膜中的釋放量(mg)與時(shí)間。圖17B表明留在同一薄膜中的藥物百分?jǐn)?shù)。從這兩個(gè)圖中可看出，當(dāng)裝栽紅豆杉醇的量增加時(shí)(即紅豆杉醇的重量百分?jǐn)?shù)增加)，藥物的釋放速率也增加，其表明了預(yù)計(jì)的濃度依賴性。當(dāng)裝栽紅豆杉醇的量增加時(shí)，保留在薄膜中的紅豆杉醇百分?jǐn)?shù)也增加，這表明高裝載量更適用于長(zhǎng)期釋放的制劑。薄膜物理強(qiáng)度和彈性的評(píng)價(jià)如圖17E所示。簡(jiǎn)而言之，圖17E表示純EVA和EVA-表面活性劑混合膜的應(yīng)力/張力曲線。這一應(yīng)力的粗測(cè)量表明，表明的彈性隨PluronicF127的加入而增加，抗拉強(qiáng)度(斷裂時(shí)的應(yīng)力)隨PluronicF127的加入而增加(濃度依賴性)。在設(shè)計(jì)薄膜時(shí)彈性和強(qiáng)度是重要的考慮因素，薄膜可設(shè)計(jì)為特殊的臨床應(yīng)用形式而不引起化合物的形變。上述數(shù)據(jù)表明了一些表面活性劑添加劑控制藥物釋放速率的能力，以及改變賦形劑物理性質(zhì)的能力。實(shí)施例14:結(jié)合甲氧基聚乙二醇350(MEPEG)到聚(E-己內(nèi)酯)中以制備紅豆杉醇糊劑的控制釋^:制劑用于本實(shí)驗(yàn)的試劑和設(shè)備包括曱氧基聚乙二醇350("MePEG"-UnkmCarbide,Danbury，CT)。MePEG在室溫下呈液態(tài)，凝固點(diǎn)為10到-5T。A:含有紅豆杉醇的MePEG/PCL糊劑的制備MePEG/PCL糊劑的制備首先將定量的紅豆杉醇溶于MePEG，然后將其結(jié)合到熔化的PCL中。這一方法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要DCM。B:熔點(diǎn)分析PCL/MePEG聚合物混合物的熔點(diǎn)通過(guò)差示掃描量熱法從30^到70t以每分鐘2.5T的加熱速率來(lái)確定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖18A和18B所示。簡(jiǎn)而言之，圖18A中所示的聚合物混合物熔點(diǎn)(熱分析確定)以一種MePEG濃度依賴的方式而降低。MePEG濃度對(duì)聚合物混合物的熔點(diǎn)的作用如圖18A所示。這種低熔點(diǎn)也可平移到聚合物混合物由熔化到固化的增加時(shí)間中(如圖18B所示)。30:70混合的MePEG:PCL從液態(tài)熔化物到固化所需的時(shí)間比單獨(dú)的PCL從液態(tài)熔化物到固化所需的時(shí)間長(zhǎng)兩倍多。C:脆性測(cè)定將MePEG結(jié)合到PCL中與單獨(dú)的PCL相比似乎可產(chǎn)生脆性低的固體。作為一種"粗"定量方法，將已稱重的針從相同的高度落入含有0%至3(HMePEG的PCL聚合物混合物中，然后測(cè)量針穿入固體的距離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖如圖18C所示。實(shí)驗(yàn)點(diǎn)是4次測(cè)量的平均值+/-1標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.)。D.紅豆杉醇釋放的測(cè)試將聚合物丸(含有(H，5%，1(H或2(HMePEG的PCL)在磷酸鹽緩沖鹽水中(PBS，pH7.4)保溫，隨時(shí)間測(cè)量聚合物重量的百分?jǐn)?shù)(％)變化。從圖18D中可看出，當(dāng)MePEG開(kāi)始出現(xiàn)在混合物中時(shí)，重量損失的量即增加。這種重量的損失可能是由于MePEG從聚合物基質(zhì)釋放入保溫液。這表明紅豆杉醇易于從MePi':G/PCL混合物中釋放，因?yàn)榧t豆杉醇在結(jié)合到PCL前首先溶于MeP':G中。E:不同量MePEG對(duì)紅豆杉醇釋^:的影響制備在PCL中含有0.8免—2(HMePEG的熱糊。其用1%的紅豆杉醇裝載。用HPLC監(jiān)測(cè)37t在PBS緩沖液中紅豆杉醇從lOmg丸的釋放。如圖18E所示，制劑中MePEG的量不影響釋放出的紅豆杉醇量。F:不同量紅豆杉醇對(duì)紅豆杉醇AA20免MePEG/PCL混合物中釋放總量的影響制備在PCL中含有0.8。/?！?0免MePEG的熱糊。紅豆杉醇的釋放量如上測(cè)量。如圖18F所示，紅豆杉醇的釋放量隨裝栽紅豆杉醇量的增加而增加。但是當(dāng)繪制為總紅豆杉醇釋放量的百分?jǐn)?shù)時(shí)，順序則反過(guò)來(lái)(圖18G)。這表明在糊劑中仍殘留有紅豆杉醇(如果假設(shè)外推這些數(shù)據(jù)是有效的)，其也可延長(zhǎng)一段時(shí)間，期間紅豆杉醇將從20%MePEG熱糊中釋放出。G:不同MePEG/PCL混合物的強(qiáng)度分析用CT-40機(jī)械強(qiáng)度檢測(cè)儀測(cè)量直徑為0.88cm、平均厚度為0.560cm的固態(tài)聚合物"片"的強(qiáng)度。聚合物片是濃度為0%，5%，10%或2(H的MePEG在PCL中的混合物。試驗(yàn)結(jié)果如圖18H所示，其中抗拉強(qiáng)度和斷裂時(shí)間繪制為％MePEG在混合物中的功能。單一變量ANOVA表明每組中的片厚是相同的。從圖18H可看出，PCL中MePEG的加入降低了所得固體的硬度。實(shí)施例15:裝栽紅豆杉醇的熱糊對(duì)體內(nèi)血管生長(zhǎng)的作用將受精的家養(yǎng)雞胚在無(wú)殼培養(yǎng)前孵育4天(如實(shí)施例2所述)。將蛋內(nèi)容物A^殼中倒入圓底無(wú)菌玻璃碗中，用陪替氏培養(yǎng)孤蓋好。將如上所述(見(jiàn)實(shí)施例IO)的5%、10免及2(H(w/v)濃度的紅豆杉醇結(jié)合到熱糊中用于下述實(shí)驗(yàn)。然后將干燥后切下的熱糊加熱至60t，并且在兩層parafilm中擠壓成扁平狀，冷卻。6個(gè)胚胎接受20%的裝載紅豆杉醇熱糊，6個(gè)胚胎接受用此方法制備的無(wú)裝栽熱糊。每組中都有一個(gè)胚胎死去，因此在每個(gè)對(duì)照組及處理組中留下5個(gè)胚胎。將無(wú)裝載熱糊及含有20%紅豆杉醇的熱糊加熱至60^，直接放在孵育6天的CAM生長(zhǎng)邊緣；以此方式每次處理兩個(gè)胚胎。采用不同方法所得到的結(jié)果中沒(méi)有明顯的不同，這表明糊劑在施用時(shí)的溫度對(duì)所得結(jié)果不是一個(gè)原因。將含有1(H紅豆杉醇的熱糊置于11個(gè)CAM上，無(wú)裝載熱糊置于另外11個(gè)CAM上，同時(shí)將裝載5%紅豆杉醇的熱糊置于10個(gè)CAM上，無(wú)裝載熱糊置于另外10個(gè)CAM上。暴露2天后(孵育的第8天)，在立體顯微鏡的協(xié)助下檢查脈管系統(tǒng)。將Liposyn]:I(—種白色不透明溶液)注入CAM中以增加血管細(xì)節(jié)的可見(jiàn)度。裝栽20%紅豆杉醇的熱糊在所有接受此處理的5個(gè)CAM中顯示出廣泛的無(wú)血管區(qū)(見(jiàn)圖19B)。抑制作用的最高程度定義為6mmx6mm的無(wú)血管區(qū)域。用裝栽20%紅豆杉醇熱糊處理的所有CAM都顯示出這一程度的血管生長(zhǎng)抑制作用。相比而言，對(duì)照組(無(wú)裝栽)熱糊不抑制CAM的血管生長(zhǎng)(見(jiàn)圖19A);這一高倍影像(注意在影像的頂部可看到熱糊的邊緣)說(shuō)明鄰接糊劑的血管不受熱糊的影響。其表明所觀察到的作用歸因.于紅豆杉醇的持續(xù)釋放，而不是由于聚合物本身或者是糊劑對(duì)生長(zhǎng)中的脈管系統(tǒng)的輔助壓力。本項(xiàng)研究證實(shí)了熱糊能釋放出可以抑制CAM脈管系統(tǒng)正常生長(zhǎng)的足量血管生長(zhǎng)抑制劑(本實(shí)驗(yàn)中為紅豆杉醇)。實(shí)施例16:裝栽紅豆杉醇的熱糊對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)及腫瘤血管生長(zhǎng)的作用將受精的家養(yǎng)雞胚在除去期蛋殼前孵育3天。通過(guò)除去位于空氣中的蛋殼而倒空蛋的內(nèi)容物，分離里面的蛋殼膜，將蛋殼的另一末端穿孔以使蛋內(nèi)容物緩慢滑出鈍端。將蛋內(nèi)容物倒入圓底無(wú)菌玻璃碗中，用陪替氏培養(yǎng)貝蓋上。于9(H的相對(duì)濕度及3免C02的條件下孵育(見(jiàn)實(shí)施例2)。將MDAY-D2細(xì)胞(一種鼠淋巴瘤)注入鼠中使其長(zhǎng)成重量為0.5-1.0g的腫瘤。處死鼠，用酒精擦拭腫瘤部位，切開(kāi)，置于無(wú)菌組織培養(yǎng)基中，在層流通風(fēng)櫥中切成lmm見(jiàn)方的小塊。在將切好的腫瘤放到9天大的雞胚之前，用30規(guī)的針輕刮CAM表面以限證腫瘤的移植。然后將腫瘤置于孵育8天(脫殼后4天)的CAM上，使其在CAM上生長(zhǎng)4天用以建立血管供給。用此方法制備4個(gè)胚胎，每個(gè)胚胎接種3個(gè)胂瘤。在這些胚胎中，一個(gè)腫瘤接受裝栽20%紅豆杉醇的熱糊，一個(gè)接受無(wú)裝栽的熱糊，另一個(gè)沒(méi)有任何處理。處理持續(xù)2天后，記錄結(jié)果。移植的MDAY-D2腫瘤分泌血管生長(zhǎng)因子，其誘專毛細(xì)管(來(lái)自CAM)向腫瘤塊內(nèi)的生長(zhǎng)，并且使其的大小繼續(xù)長(zhǎng)大。由于胂瘤所有的血管都來(lái)自CAM，同時(shí)所有的腫瘤細(xì)胞都來(lái)自移植物，因此可以獨(dú)立評(píng)價(jià)兩個(gè)過(guò)程中的治療效果。本試驗(yàn)已用于確定裝載紅豆杉醇的熱糊在(a)抑制腫瘤血管化及(b)抑制腫瘤本身生長(zhǎng)的效果。本實(shí)驗(yàn)中直接進(jìn)行的體內(nèi)立體顯微鏡檢查及組織固定后的組織學(xué)檢查如下闡述。在用裝載20%紅豆杉醇的熱糊處理的腫瘤中，與對(duì)照組腫瘤相比，供給腫瘤的血管數(shù)量有所下降(見(jiàn)圖20C和20D)，腫瘤內(nèi)血管的數(shù)量也有所下降，同時(shí)腫瘤周圍的血管(該區(qū)域在實(shí)心瘤中具有最多的血管)數(shù)量有所下降。進(jìn)行研究?jī)商熘心[瘤開(kāi)始減小其的大小及質(zhì)量。另外，觀察到許多內(nèi)皮細(xì)胞在細(xì)胞分裂中受到抑制，其表明內(nèi)皮細(xì)胞的增殖受到影響。也不斷發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在有絲分裂中的抑制。所有4個(gè)胚胎都表明裝載紅豆杉醇的熱糊可以抑制腫瘤血管生長(zhǎng)，而無(wú)裝載的熱糊沒(méi)有作用。相比而言，在用無(wú)裝栽熱糊處理的CAM中，腫瘤高度血管化，即與正常的周圍組織相比，在數(shù)量及密度上增加，同時(shí)與用裝栽紅豆杉醇的糊劑處理的腫瘤相比，可觀察到明顯增多的血管。新形成的血管從各種角度進(jìn)入腫瘤，就象輻條連接到輪子的中心(見(jiàn)圖20A和20B)。在研究過(guò)程中，對(duì)照組腫瘤繼續(xù)在大小和質(zhì)量上增加。從組織學(xué)而言，在質(zhì)量周圍觀察到許多膨脹的薄壁毛細(xì)管，并且在細(xì)胞分裂中幾乎沒(méi)有發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞。腫瘤組織在整個(gè)過(guò)程中高度血管化并且是活動(dòng)的。作為一個(gè)例子，在置于相同CAM上的兩個(gè)近似大小(最初移植時(shí))的腫瘤中，得到下述數(shù)據(jù)。對(duì)于用裝栽20%紅豆杉醇的熱糊處理的胂瘤而言，測(cè)得胂瘤為330mmx597mm;腫瘤最鄰近的四周有14條血管，腫瘤塊中只有3-4條小毛細(xì)管。對(duì)于用無(wú)裝栽熱糊處理的腫瘤而言，腫瘤大小為623mmx678mm;胂瘤最鄰近的四周有54條血管，而腫瘤塊中有12-14條小毛細(xì)管。此外，與紅豆杉醇處理的肺瘤四周區(qū)域相比，CAM的四周含有更多的血管。本項(xiàng)研究證實(shí)了熱糊能釋放出可以抑制伴有肺瘤生長(zhǎng)及先艮的病理性血管生長(zhǎng)的足量血管生長(zhǎng)抑制劑(本實(shí)驗(yàn)中為紅豆杉醇)。在這種情況下，血管生長(zhǎng)通過(guò)腫瘤細(xì)胞被最大程度地激化，該胂瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生^l"導(dǎo)毛細(xì)管從四周組織向腫瘤塊內(nèi)生長(zhǎng)的血管生長(zhǎng)因子。裝載紅豆杉醇的熱糊可以阻滯這一過(guò)程，并且限制了腫瘤組織維持足量血液供給的能力。其導(dǎo)致了通過(guò)藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用以及通過(guò)剝奪組織生長(zhǎng)和擴(kuò)大的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而使腫瘤塊減小。實(shí)施例17:血管生長(zhǎng)抑制物對(duì)鼠胂瘤模型體內(nèi)胂瘤生長(zhǎng)的作用-用鼠MDAY-D2腫瘤模型檢查化療用以及抗血管生長(zhǎng)化合物(如紅豆杉醇)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤遷徙及動(dòng)物存活率的局部慢釋放作用。MDAY-D2細(xì)胞系在含有5免小牛血清的amem培養(yǎng)基的細(xì)胞懸浮液中生長(zhǎng)。細(xì)胞在37^于含有5%二氧化碳的潮濕氣中孵育，每隔3天用因子15稀釋直至得到足夠數(shù)目的細(xì)胞，孵育期后，用光學(xué)顯微鏡檢查細(xì)胞的生活性，然后在1500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。將PBS加入到細(xì)胞中，得到每毫升1,000,000個(gè)細(xì)胞的稀釋液。使新到的10周大的DBA/2j雌性鼠適應(yīng)環(huán)境3-4天。然后在每只鼠的后側(cè)肋腹皮下注射100,000MDAY-D2細(xì)胞的100mlPBS溶液。先前的研究已表明這一過(guò)程可在3-4天內(nèi)于注射部位產(chǎn)生可見(jiàn)的腫瘤，14天后肺瘤大小達(dá)1.0-1.7g;并且在注射后19到25天可在肝臟產(chǎn)生可見(jiàn)的遷移瘤。基于本研究的目的，可以在疾病進(jìn)展中的任何時(shí)候進(jìn)行治療性干預(yù)。使用上述動(dòng)物模型，將140,000相同的MDAY-D2細(xì)胞注射到20只鼠中，使腫瘤生長(zhǎng)。在第5天將鼠分成5組。麻醉下手術(shù)切開(kāi)腫瘤，用裝載藥物的熱糊或者對(duì)照組熱糊處理局部區(qū)域而不干擾現(xiàn)存的腫瘤組織，縫合傷口。5個(gè)組或者不接受任何處理(只是縫合了傷口)，或者只接受聚合物(PCL)，或者是裝載10%的熱糊，亦或是植入到腫瘤附近的裝載20%紅豆杉醇的熱糊(只注射4只)。在第16天處死鼠，切開(kāi)腫瘤并檢查(總體及組織學(xué))腫瘤的生長(zhǎng)、遷徙、由于該處理所導(dǎo)致的局部及全身毒性、傷口的愈合作用、腫瘤血管化作用以及殘留在切開(kāi)處的糊劑的狀況。每只動(dòng)物中腫瘤的重量如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table>裝栽20%紅豆杉醇的熱糊與對(duì)照組動(dòng)物(平均重量為0.618)相比降低了腫瘤生長(zhǎng)的85%(平均重量為0.105)。單獨(dú)用熱糊或者含有IO%紅豆杉醇的熱糊處理的動(dòng)物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)只有中度的作用；腫瘤的重量分別僅減少了10%和35%(圖21A)。因此，含有20%紅豆杉醇的熱糊比含有10%紅豆杉醇的熱糊在減少肺瘤生長(zhǎng)中更有效(見(jiàn)圖21C及圖21B)。在一些動(dòng)物的用藥部位檢測(cè)到了熱糊。15至鼠中有8只檢測(cè)到了重量在0.026g至0.078g不等的聚合物。實(shí)驗(yàn)組中每只含有裝載20%紅豆杉醇熱糊的動(dòng)物都含有殘留的聚合物，表明其不易于溶解。在組織學(xué)上，用裝載紅豆杉醇熱糊處理的腫瘤比對(duì)照組胂瘤含有更少的細(xì)胞構(gòu)成及更多的組織壞死。脈管系統(tǒng)減少并且不斷觀察到細(xì)胞分裂中內(nèi)皮細(xì)胞的抑制。裝栽紅豆杉醇的熱糊沒(méi)有表現(xiàn)出影響腫瘤四周皮膚或組織的完整性或細(xì)胞構(gòu)成。總體上看，傷口的愈合未受到影響。實(shí)施例18:裝栽血管生長(zhǎng)抑制物的手術(shù)用薄膜在癌切除手術(shù)中用于防止腫瘤細(xì)胞的醫(yī)源性遷移作為一種無(wú)菌、柔韌、可伸展的藥物-聚合物化合物，其可用于癌切除過(guò)程。在切除手術(shù)中通常希望將正常的周圍組織與惡性組織隔離以防止疾病向鄰近器官的醫(yī)源性擴(kuò)展(通過(guò)癌細(xì)胞的不經(jīng)意污染)。裝栽藥物的parafilm可以在腫瘤控制前伸展到正常組織。如果在腸癌切除術(shù)中將其置于肝臟及其它腹部?jī)?nèi)臟周圍會(huì)特別有用，因?yàn)槠淇煞乐辜膊〗?jīng)腹膜擴(kuò)散到肝臟。將生物可降解性薄膜置于該部位可以提供持續(xù)的防護(hù)。切口處也是一種常見(jiàn)的術(shù)后惡性腫瘤復(fù)發(fā)部位。認(rèn)為其是由于手術(shù)過(guò)程中腫瘤細(xì)胞對(duì)傷口的污染。為闡明這些問(wèn)題，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)確定裝栽血管生長(zhǎng)抑制物薄膜阻止這一現(xiàn)象發(fā)生的能力。A:材料和方法手術(shù)用薄膜的制備。如實(shí)施例10制備手術(shù)用薄膜。制備測(cè)得約lcmxlcm的薄膜，其含有單獨(dú)的聚合物(PCL)或用5%紅豆杉醇裝載的PCL。大鼠肝腫瘤模型。在初始研究中，將體重約為300g的Wistar大鼠進(jìn)行全身庥醉，沿腹中線切開(kāi)一個(gè)3-5cm的切口。在最大的肝葉的肝實(shí)質(zhì)中切開(kāi)一個(gè)lcm的切口，切下肝臟邊緣部分。將懸浮在100ml磷酸鹽緩沖鹽水中的一百萬(wàn)活的9L神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤(在使用前立即從組織培養(yǎng)物中洗脫)用一個(gè)30規(guī)針沉積在切下的肝臟邊緣。然后在含有腫瘤細(xì)胞的切下的肝臟邊緣施行手術(shù)，用明膠海綿固定。兩只動(dòng)物接受含有5y。紅豆杉醇PCL薄膜，另外兩只動(dòng)物接受僅含有PVL的薄膜。用3.0Dexon及皮膚鉗閉合腹壁。用全身麻醉終止，使動(dòng)物恢復(fù)。IO天后，處死動(dòng)物，組織學(xué)檢查肝臟。B:結(jié)果在用單獨(dú)聚合物處理的2個(gè)肝臟中觀察到了局部腫瘤的生長(zhǎng)。用聚合物加紅豆杉醇處理的2個(gè)肝臟當(dāng)進(jìn)行組織學(xué)檢查時(shí)完全沒(méi)有腫瘤。同樣重要的是，肝囊已退化并且完全生長(zhǎng)在聚合物薄膜及肝臟的切口表面上，這表明其對(duì)傷口的愈合沒(méi)有明顯的作用。在任何手術(shù)薄膜(裝載藥物的及不含藥物的)周圍都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)局部肝毒性。C:討論本項(xiàng)研究表明，手術(shù)中置于正常組織及切口部位的手術(shù)用薄膜可以降低惡性胂瘤切除術(shù)中肺瘤細(xì)胞意外移植入正常周圍組織的發(fā)生率。這有助于降低術(shù)后疾病局部復(fù)發(fā)的重要問(wèn)題。實(shí)施例19:在治療關(guān)節(jié)炎時(shí)向關(guān)節(jié)內(nèi)注射裝栽血管生長(zhǎng)抑制物的生物可降解性的微球關(guān)節(jié)在關(guān)節(jié)炎中的損傷是由于炎癥(包括白細(xì)胞及白細(xì)胞產(chǎn)物)和關(guān)節(jié)翳組織的進(jìn)展(一種由新生血管組織、結(jié)締組織和炎性細(xì)胞組成的組織)。已選擇紅豆杉醇用于初始研究，因?yàn)槠涫且环N新生血管形成的強(qiáng)烈抑制劑。就此而言，紅豆杉醇的局部高濃度將是一種關(guān)節(jié)炎中的病癥減緩劑。為了確定是否微球?qū)﹃P(guān)節(jié)具有有害作用，進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)。簡(jiǎn)而言之，如前述實(shí)施例8制備普通的PCL和裝栽紅豆杉醇的微球。將3只兔子關(guān)節(jié)內(nèi)注射總量為0.2ml的0.5-5.0um，10-3011111或30-80um的微球(含有0.5mg微球)。每日觀察(臨床)評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)。兩周后，處死動(dòng)物，組織學(xué)檢查關(guān)節(jié)的發(fā)炎跡象及蛋白多糖的虧空。使用兔子炎性關(guān)節(jié)炎及骨關(guān)節(jié)炎模型來(lái)評(píng)價(jià)微球在減輕滑膜炎及軟骨降解中的作用。退化性關(guān)節(jié)炎是由于十字性韌帶AJ漆關(guān)節(jié)半月板的部分裂縫引起的。4到6周后，兔子發(fā)生了與在人骨關(guān)節(jié)中觀察到的類似的軟骨浸蝕。炎性關(guān)節(jié)炎是通過(guò)弗氏完全佐劑中用小牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行免疫而引起的。3周后，將含有高滴度抗-BSA抗體的兔子進(jìn)行關(guān)節(jié)內(nèi)注射BSA(5mg)。7天后，發(fā)生明顯的關(guān)節(jié)腫脹及滑膜炎，7_14天可觀察到蛋白多糖的虧空，4—6周可觀察到軟骨浸蝕。如上所述誘導(dǎo)炎性關(guān)節(jié)炎。4天后，用含有5%紅豆杉醇或賦形劑的拔&求注射關(guān)節(jié)。在14天時(shí)處死一組動(dòng)物，第28天時(shí)處死另一組。進(jìn)行組織學(xué)檢查關(guān)節(jié)的炎癥及軟骨降解。該實(shí)驗(yàn)被設(shè)計(jì)為確定紅豆杉醇微球是否能影響關(guān)節(jié)的發(fā)炎及軟骨基質(zhì)的降解。在骨關(guān)節(jié)炎模型中進(jìn)一步檢查含血管生長(zhǎng)抑制劑的孩史球。簡(jiǎn)而言之，如上所述誘導(dǎo)兔子的降解性關(guān)節(jié)炎，第4天時(shí)，關(guān)節(jié)內(nèi)注射微球(含有5%紅豆杉醇或只有賦形劑)。在21天及42天時(shí)處死動(dòng)物，進(jìn)行組織學(xué)檢查軟骨降解的跡象。進(jìn)行研究以評(píng)價(jià)作為軟骨保護(hù)劑的經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)微球釋放的血管生長(zhǎng)抑制劑。結(jié)果將不同粒度的無(wú)裝栽PCL微球(0.5-5.0um，10-30um或30—80um)關(guān)節(jié)內(nèi)注射到兔子的膝關(guān)節(jié)中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖22A至D所示。簡(jiǎn)而言之，圖22A是注射PBS的關(guān)節(jié)滑膜圖。圖22B是注射微球的關(guān)節(jié)圖。圖22C是注射PBS的關(guān)節(jié)軟骨圖。圖22D是注射微球的關(guān)節(jié)軟骨圖。從這些圖中可看出，在組織學(xué)上，注射微球的關(guān)節(jié)與沒(méi)有注射其的關(guān)節(jié)無(wú)差異。在臨床上，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的14天中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)發(fā)炎的跡象?？傮w上，與未處理的正常關(guān)節(jié)相比，在注射微球的關(guān)節(jié)中沒(méi)有關(guān)節(jié)發(fā)炎或軟骨損傷的跡象。結(jié)論表明該方法是一種將把向的、持續(xù)釋放的病癥減緩劑轉(zhuǎn)運(yùn)到患病關(guān)節(jié)的有效的有效方式，同時(shí)使與這種生物活性化合物全身給藥有關(guān)的毒性降為最低。如上所述，可以將微球制成具有給定藥物釋放動(dòng)力學(xué)的特殊粒度。同時(shí)也證實(shí)了紅豆杉醇是一種強(qiáng)烈的血管生長(zhǎng)抑制劑，其以足以阻滯CAM試驗(yàn)中新生血管形成的量從微球中釋放出。因此，關(guān)節(jié)內(nèi)給予裝栽血管生長(zhǎng)抑制劑(如裝載紅豆杉醇)的微球可以阻滯出現(xiàn)在諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病中的新生血管形成及其導(dǎo)致的關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨的毀壞。就此而言，裝載藥物的微球可以作為一種"軟骨保護(hù)"劑而防止軟骨的不可逆損壞(由于侵入的新生血管關(guān)節(jié)蓊組織)。由上可得，盡管本文為了闡明已描述了特殊的實(shí)例，在不偏離本發(fā)明的宗旨及范圍下可以進(jìn)行各種修飾。因此，本發(fā)明除了權(quán)利要求書(shū)以外并無(wú)限定。序列表(1)總的信息(i)申請(qǐng)人:Hunter,WilliamL.Machan,LindsayS.Arsenault，A.LarryBurt,HelenM,(ii)發(fā)明題目抗血管生長(zhǎng)組合物及使用方法(iii)序列數(shù)1(iv)有關(guān)地址(A)收信人SEEDandBERRY(B)街道701FifthAvenue,6300ColumbiaCenter(C)城市Seattle(D)少卜l:Washington(E)國(guó)家USA(F)ZIP:98104(v)計(jì)算機(jī)類型(A)介質(zhì)類型軟盤(pán)(B)計(jì)算機(jī)IBMPC兼容機(jī)(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentInRelease#1.0,Version#1.25(vi)目前的申請(qǐng)數(shù)據(jù)(A)申請(qǐng)?zhí)?B)申請(qǐng)目(C)分類(viii)律師/代理人信息(A)姓名McMasters,DavidD(B)登記號(hào)33,963(C)對(duì)照/存檔號(hào)110129,401(ix)通訊4言息(A)電話(206)622-4900(B)傳真(206)682-6031(C)電傳3723836(2)SEQIDNO:l的信息(i)序列特;f正(A)長(zhǎng)度9個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)股單股(D)拓樸線性(ii)分子類型肽(v)片段類型N-末端(xi)序列描述SEQIDNO:l:CysAspProGlyTyrlieGlySerArg1權(quán)利要求1.組合物，其包含(a)破壞微管功能的化合物；以及(b)聚合物，條件是所述的聚合物不是膠囊或聚酐。2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的組合物形成具有平均粒徑為0.5-200pm的微球。3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的組合物形成厚度為100nm-2mm的薄膜。4.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為乳酸和羥基乙酸的共聚物。5.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為聚己內(nèi)酯。6.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為聚乳酸。7.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為聚乳酸和聚己內(nèi)酯的共聚物。8.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的破壞微管功能的化合物為紅豆杉醇或其同類物或書(shū)f生物。9.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的破壞微管功能的化合物選自雌莫司汀、秋水仙堿、curacin—A、epothilone、長(zhǎng)^U^和t-BCEU。10.權(quán)利要求8的組合物，其中所述的紅豆杉醇或其同類物或衍生物為紅豆杉醇。11.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為聚(烷基碳酸酯)、聚(原酸酯)或聚乙交酯。12.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為粘膜粘著聚合物。13.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為水凝膠。14.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的聚合物為甲基纖維素。15.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的聚合物為fj^苯二甲酸乙二酯。16.權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)的組合物，其中所述的組合物是無(wú)菌的。17.權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)的組合物，其中所述的聚合物是生物可降解的。18.權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)的組合物，其中所述的聚合物是白蛋白。19.權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)的組合物，其中所述的聚合物是非生物可降解的。20.組合物，包含紅豆杉醇或其同類物或衍生物以及一種聚合物，其中所述的組合物是無(wú)菌的，條件是所迷聚合物不為聚酐。21.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的組合物形成平均粒徑為0.5-200nm的微球。22.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的組合物形成厚度為100nm-2mm的薄膜。23.權(quán)利要求20的組合物，其中所迷的聚合物為乳酸和鞋基乙酸的共聚物。24.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為聚己內(nèi)酯。25.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為聚乳酸。26.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為聚乳酸和聚己內(nèi)酯的共聚物。27.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物是生物可降解的。28.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物是白蛋白。29.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為聚(烷基碳酸酯)、聚(原酸酯)或聚乙交酯。30.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為粘膜粘著聚合物。31.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為水凝膠。32.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為甲基纖維素。33權(quán)利要求20的組合物，其中所述的聚合物為聚對(duì)^i甲酸乙二酯。34權(quán)利要求20的組合物，其中所述的紅豆杉醇或其同類物或衍生物為紅豆杉醇。全文摘要本發(fā)明提供了含有抗血管生長(zhǎng)因子及聚合物載體的組合物?？寡苌L(zhǎng)因子的代表性例子包括抗侵襲性因子、視黃酸及其衍生物以及紅豆杉醇。同時(shí)也提供了用于栓塞血管、消除膽管、尿道、食管及氣管/支氣管阻塞的方法。文檔編號(hào)A61F2/06GK101185759SQ200610099888公開(kāi)日2008年5月28日申請(qǐng)日期1994年7月19日優(yōu)先權(quán)日1993年7月19日發(fā)明者A·L·阿森奧特,J·K·約翰,L·S·馬單,W·L·亨特申請(qǐng)人:血管技術(shù)藥物公司;不列顛哥倫比亞大學(xué)