專利名稱：阿色納品馬來酸鹽的晶型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及阿色納品(asenapine)的新晶型，及其制備方法和含有所述晶型的藥物組合物。
阿色納品是用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，尤其是精神分裂癥的化合物。阿色納品的化學(xué)名稱是反式-5-氯-2-甲基-2，3，3a，12b-四氫-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯，其制備方法公開在USP No.4,145,434中。
阿色納品被開發(fā)成其馬來酸鹽2。根據(jù)實(shí)施例1，此鹽通過在阿色納品1的乙醇溶液中添加1摩爾當(dāng)量的馬來酸乙醇溶液來制備。為進(jìn)一步純化，如此獲得的阿色納品馬來酸鹽2可以從乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶。
方案1結(jié)晶阿色納品馬來酸鹽De Boer等人(Drugs of the Future 1993，18(12)，1117-1123)已經(jīng)綜述了反式-5-氯-2-甲基-2，3，3a，12b-四氫-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯的藥理學(xué)特征，其動(dòng)力學(xué)和代謝機(jī)制，以及在人類志愿者和精神分裂患者身上進(jìn)行的最初的安全和功效研究結(jié)果。已確定阿色納品是具有抗精神病活性的極具有效的多巴胺和5羥色胺拮抗劑。
Funke等人(Arzneim.-Forsch./Drug Res.40(1999)，536-539)已經(jīng)描述了阿色納品馬來酸鹽的物理化學(xué)性質(zhì)。這種已知的結(jié)晶阿色納品馬來酸鹽(H晶型或單斜晶型)的熔點(diǎn)為141-145℃，顯微圖中發(fā)現(xiàn)其典型地由大于100μm的結(jié)晶顆粒組成。
舌下或口腔給藥的含有阿色納品馬來酸鹽的藥物組合物公開在WO95/23600中。為了開發(fā)舌下制劑，需要小粒徑的藥物物質(zhì)。因此，為了降低結(jié)晶體的粒徑，應(yīng)用微粉化步驟。然而，如下面所述的，通過微粉化單斜晶型的阿色納品難以獲得高多晶純度的藥物物質(zhì)。
藥物物質(zhì)的粒徑影響藥物產(chǎn)品的生物制藥性能。例如，藥物物質(zhì)粒徑影響藥物產(chǎn)品制造和溶解，進(jìn)而影響到其生物可利用率。由于阿色納品溶解于唾液中，從而其粒徑很重要。當(dāng)藥物物質(zhì)顆粒微小時(shí)，僅需花費(fèi)短時(shí)間就可以達(dá)到高濃度水平。從這個(gè)角度來考慮，優(yōu)選微小顆粒。此外，較小的粒徑易于提高粉末混合物的均勻性，其可以使得藥物產(chǎn)品組分的均勻性得到改善。對(duì)于阿色納品馬來酸鹽來說，就d95而言其粒徑優(yōu)選約100μm或更小，更優(yōu)選約50μm或更小，最優(yōu)選約30μm或更小。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語d95表示95％的顆粒(以體積計(jì))小于或等于指定的尺寸。
較小的藥物物質(zhì)顆?？梢酝ㄟ^微粉化獲得。然而，當(dāng)對(duì)單斜晶型的結(jié)晶采用此方法時(shí)，微粉化加工的結(jié)果似乎具有極大地不可預(yù)知性。分析微粉化后的結(jié)晶揭示了除了起始物質(zhì)中已知的單斜晶型外還存在第二多晶型(斜方晶型L)。從單斜晶型起始進(jìn)行微粉化后得到或者是單斜晶型，或者是斜方晶型或是多晶型的混合物。即使起始物質(zhì)取自同一批次的阿色納品馬來酸鹽的單斜晶型，微粉化得到的產(chǎn)物也是不可再現(xiàn)的(參見實(shí)施例9和10)。此外，通過微粉化阿色納品馬來酸鹽的單斜晶型無法獲得高多晶純度的藥物物質(zhì)。
通常需要制備單一和組成確定的治療藥劑。與純多晶型相比，如果將多晶型混合物用作藥劑，會(huì)伴隨有很大的缺陷。晶體結(jié)構(gòu)上的差異可以導(dǎo)致物理化學(xué)參數(shù)的不同，如穩(wěn)定性，溶解速度，生物可利用率等等。因此，化合物的多晶型混合物通常具有與含有所述混合物的純晶型不同的物理化學(xué)參數(shù)。這一點(diǎn)是很重要的，因?yàn)?，?shí)際上難以使每一批化合物的多晶型混合物組成都相同。這些區(qū)別的結(jié)果是，通常不希望將化合物的多晶型混合物混入藥劑中，所述藥劑典型地要求只使用多晶型物中的一種。
本發(fā)明提供了一種阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型，其通過使用特定的結(jié)晶技術(shù)可以以高純度形式來制得。此外，非粉碎性的斜方晶型比阿色納品馬來酸鹽的非粉碎性單斜晶型具有相對(duì)更小的粒徑(基于d95)。此外，業(yè)已發(fā)現(xiàn)，微粉化阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型再現(xiàn)得到微晶的阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型。
因此本發(fā)明的一方面提供了一種阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型，其分別包含10％或更少的另一種晶型，5％或更少的另一種晶型，或不可檢測(cè)量的另一種晶型。
本發(fā)明的另一方面提供了一種微晶的阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型。這里術(shù)語“微晶”指所述晶型包含具有以d95為30μm或更小為特征的粒徑分布的顆粒。
本發(fā)明的另一方面提供了一種制備阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型的方法。該方法包括通過冷卻含有溶解了阿色納品馬來酸鹽的乙醇/水混合物來使阿色納品馬來酸鹽結(jié)晶。所述混合物優(yōu)選9∶1v/v的乙醇/水?？蛇x的，當(dāng)可得到斜方晶型的晶體時(shí)，可以在阿色納品馬來酸鹽的乙醇/水混合物溶液中加入所述晶體作為晶種。結(jié)晶物可以進(jìn)一步經(jīng)過解聚或過篩來去除微小結(jié)晶簇。
本發(fā)明制備的結(jié)晶阿色納品馬來酸鹽是熔點(diǎn)范圍為138-142℃的特定的多晶型。
本發(fā)明的斜方晶型的結(jié)晶可以通過本領(lǐng)域公知的幾種分析方法來表征，從而區(qū)別于單斜型晶型，例如紅外光譜法，拉曼光譜法，固態(tài)核磁共振光譜法，差示掃描量熱法，X-射線粉末衍射圖譜(XPRD)以及多種其它方法。所述方法可以單獨(dú)或聯(lián)合使用。


圖1描述了阿色納品馬來酸鹽的單斜晶型(上圖)和斜方晶型(下圖)的XRPD圖譜。各圖譜以在衍射角2θ處的某一特定值處的強(qiáng)峰為特征。單斜晶型在2-θ為9.6°，20.4°，22.0°，23.4°，25.2°，26.1°，26.7°，26.8°，29.1°和30.0°處具有特征峰。更具特征的峰在9.6°，20.4°，22.0°，23.4°，25.2°和26.8°處。最具特征的峰在9.6°和26.8°處。
斜方晶型在2-θ為10.5°，15.7°，18.3°，19.0°，20.3°，20.8°，22.2°，23.2°，25.6°和27.5°處具有特征峰，更具特征的峰在10.5°，15.7°，18.3°，19.0°，22.2°，23.2°和27.5°處。最具特征的峰在10.5°和15.7°處。
所示的2-θ值典型地指特定值±0.2。
斜方晶型還可以用其結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)來表征。已經(jīng)將通過單晶X-射線衍射獲得的斜方晶型和單斜晶型的結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)作過相互比較。結(jié)果表明屬于單斜晶型的晶體結(jié)構(gòu)由晶胞中的空間群P21/n和4個(gè)分子組成，而屬于斜方晶型的晶體結(jié)構(gòu)由晶胞中的空間群Pca21和8個(gè)分子組成。該數(shù)據(jù)示于表1a和1b中。表1a中的軸長(zhǎng)典型地表示特定值±0.2。表1a中晶角典型地表示數(shù)值±0.2°。表1b量(0.8，1.6，3.2g/kg體重)組，每組10只。灌胃給藥，1次/天，連續(xù)4天。第4天給藥后，將0.6％醋酸注射入小鼠腹腔內(nèi)，出現(xiàn)扭體反應(yīng)。以15min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)為疼痛定量指標(biāo)。按下式計(jì)算藥物對(duì)扭體反應(yīng)的抑制百分率，評(píng)判藥物鎮(zhèn)痛效果
試驗(yàn)結(jié)果見表二。
表二 本發(fā)明藥物對(duì)小鼠醋酸化學(xué)刺激痛的影響(X±S)
與對(duì)比組比較*p＜0.05，**p＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果用PEMS(《中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》)統(tǒng)計(jì)軟件包的方差分析方法進(jìn)行處理。
以上結(jié)果顯示與生理鹽水對(duì)照組比較，陽性對(duì)照阿司匹林組的扭體次數(shù)明顯減少，p＜0.01；與生理鹽水對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物各劑量組的扭體次數(shù)明顯減少，p＜0.01。
結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)醋酸化學(xué)刺激痛有明顯療效。與熱板法相比較，本發(fā)明藥物對(duì)扭體法的效果更為顯著，提示本發(fā)明藥物對(duì)化學(xué)性因素所至疼痛更為有效。
1.2本發(fā)明藥物的抗炎作用1.2.1本發(fā)明藥物對(duì)二硝基氟苯所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響取50只體重20～22g的雌性ICR小鼠隨機(jī)分成5組，即陰性對(duì)照組(生理鹽水)，陽性對(duì)照組(醋酸潑尼松龍，劑量0.1g/kg)和本發(fā)明藥物低、中、高劑量(0.8，1.6，3.2g/kg體重)組，每組10只。小鼠腹部去毛(3×3cm)，用1％DNFB丙酮麻油溶液(DNFB50mg加5ml丙酮麻油液。丙酮與麻油的比例為1∶1)均勻涂抹腹部致敏。致敏后灌胃給約，1次/天，連續(xù)6天。在
表1B阿色納品馬來酸鹽的單斜晶型和斜方晶型的部分原子位置的結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)各光譜以在某些特定波數(shù)(cm-1)值處的強(qiáng)峰為特征。單斜晶型在3070cm-1，3020cm-1，2900cm-1，2871cm-1，2829cm-1，1253cm-1，1238cm-1，849cm-1，743cm-1和711cm-1處有特征峰，更具特征的峰在3070cm-1，3020cm-1，2871cm-1，849cm-1和711cm-1處。
最具特征的峰在2871cm-1和849cm-1處。
斜方晶型的特征峰在3072cm-1，3051cm-1，3029cm-1，3011cm-1，2909cm-1，2888cm-1，1245cm-1，824cm-1，747cm-1，717cm-1和194cm-1處，更具特征的峰在3051cm-1，3029cm-1，3011cm-1，2888cm-1，824cm-1和717cm-1處。最具特征的峰在2888cm-1和824cm-1處。
所示的波數(shù)值典型的指特定值±2cm-1。
作為本發(fā)明另一方面，新發(fā)現(xiàn)的有利性能提供了所述斜方晶型的阿色納品馬來酸鹽在制備微晶體(fine crystal)懸浮液中應(yīng)用。
本發(fā)明另一個(gè)方面提供了包含阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型與一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑或賦形劑相結(jié)合的藥用制劑。除了斜方晶型，也可以存在無定形的阿色納品馬來酸鹽。
所述的藥用制劑通常采用劑量單元如片劑，膠囊或栓劑，但還包括其它固體或干藥用制劑。優(yōu)選片劑形式的藥用制劑。除以斜方晶型晶體的有效成分阿色納品馬來酸鹽外，片劑還可以含有一些賦形劑，如可以賦予片劑令人滿意的加工和壓制性能的稀釋劑，粘合劑，助流劑和潤(rùn)滑劑，以及可以給所得片劑帶來額外所需的物理性能的崩解劑和芳香劑。
制造所述劑量單元的方法是熟知的，如在標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)中所描述的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，Gennaro等，Remington’s Pharmaceutical Sciences，(第18期，MackPublishing Company，1990年，特別是Part 8藥物制劑及其制造)。
適于治療精神障礙如精神病，雙相性精神障礙和精神分裂癥的阿色納品馬來酸鹽的劑量單元可以包含約0.005至500mg活性成分。優(yōu)選的劑量單元可包含1-50mg的阿色納品馬來酸鹽斜方晶型。
附圖概述圖1表示反射測(cè)定的反式-5-氯-2-甲基-2，3，3a，12b-四氫-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽的單斜晶型(上圖)和斜方晶型(下圖)的XRPD圖譜圖2表示反式-5-氯-2-甲基-2，3，3a，12b-四氫-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽的單斜晶型(上圖)和斜方晶型(下圖)的拉曼光譜。
本發(fā)明用下述非限制性實(shí)例來說明。
實(shí)施例通用方法X-射線粉末衍射(XRPD)圖譜是在XPert pro Panalytical反射衍射儀器上獲得的，配置Bragg-Brantano組件，銅-Kα射線，設(shè)定為45kV和40mA以及X’celerator檢測(cè)器。使用的狹縫為防散射狹縫1°，發(fā)散狹縫1/2°，索勒(soller)狹縫0.02rad。測(cè)定條件掃描范圍5-40°2-θ，步長(zhǎng)0.0167°2-θ。樣品在旋轉(zhuǎn)速度為15rpm的硅制樣品盤上測(cè)定。純單斜晶型和純斜方晶型的結(jié)晶的XRPD圖譜描述于圖1中。
單晶結(jié)構(gòu)測(cè)定。將測(cè)定的晶體用惰性全氟-油固定到林德曼玻璃(Lindemann-glass)毛細(xì)管的頂端，接著轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)陽極上的Nonius KappaCCD上的冷氮?dú)饬髦?。將該結(jié)構(gòu)用直接法(SHELX86)溶解，通過滿矩陣最小二乘方技術(shù)(SHELXL-97-2)進(jìn)行基于F2求精(refinement)；在求精過程中沒有采用觀察標(biāo)準(zhǔn)。中性原子散射因數(shù)和不規(guī)則色散校正采用結(jié)晶學(xué)國(guó)際表。幾何計(jì)算和圖表用PLATON來完成。所有的計(jì)算在Transtec 3.0 GHz Xeon PC的DebianLinux操作系統(tǒng)下完成。
FT-拉曼光譜用配有最大功率為1550mW的1064nm Adlas DPY 421 NdYAG激光器和液氮冷卻Ge檢測(cè)器的Bruker RFS 100/S FT-拉曼分光光度計(jì)來紀(jì)錄。對(duì)于每個(gè)樣品，利用聚焦光束(激光斑100μm)、150mW的激光功率和2cm-1的分辨率來收集128次掃描。
LDS方法。將分散液制成由(0.7mg/ml)卵磷脂(用作表面活性劑)的用阿色納品馬來酸鹽飽和的異辛烷溶液組成。將溶液攪拌過夜。接下來將溶液用0.22μm過濾器過濾。稱量約30mg阿色納品馬來酸鹽于離心管中，并且加入2ml分散液來制備樣品。將樣品在超聲波浴(Transsonic 310)中進(jìn)行2分鐘的超聲處理。隨后，用激光衍射(Malvern Mastersizer S，UK)來分析樣品的粒徑分布。樣品粒徑分布用夫瑯和費(fèi)(Fraunhofer)算法來計(jì)算。
DSC方法。用差示掃描量熱法(DSC)來測(cè)定阿色納品馬來酸鹽的熔點(diǎn)(起始溫度℃)。DSC儀包括具有陶瓷傳感器的基于熱流原理的測(cè)量池和可以在溫度范圍為0-300℃下使用的供熱裝置。加熱速率至少為1-20℃/min。凈化氣是控制流速為50mL/min的氮?dú)?N2)。用鋁制樣品盤精確稱量阿色納品馬來酸鹽藥物物質(zhì)(2-5mg)。使用的加熱速率為5℃/min，以及0-250℃的線性升溫程序。
實(shí)施例1由阿色納品和馬來酸合成阿色納品馬來酸鹽將游離堿化合物(1)，反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(30kg)溶于60L乙醇，并在65℃真空蒸發(fā)。于60℃下，將乙醇(90L)添加到殘余物中，并向溶液中添加1.8kg木炭。接著在60℃下連續(xù)攪拌30分鐘，再將溶液在助濾劑上進(jìn)行無塵過濾。將助濾劑用60℃的30L乙醇進(jìn)行洗滌。于60℃下，將13.5kg馬來酸的于90L乙醇中的溶液添加到合并的濾液中，連續(xù)攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻到20℃，并攪拌2小時(shí)。接著將反應(yīng)混合物冷卻到-10℃(±2℃)，并攪拌2小時(shí)，過濾結(jié)晶。用5L乙醇(-10℃)洗滌結(jié)晶并收集。將濕結(jié)晶物直接用實(shí)施例2-8描述的重結(jié)晶方法進(jìn)行重結(jié)晶。
實(shí)施例2C1批結(jié)晶(單斜多晶型)將根據(jù)實(shí)施例1描述的方法制備獲得的阿色納品馬來酸鹽(10kg)在沸騰溫度下溶解于24L乙醇中。于20℃下冷卻后將溶液攪拌1小時(shí)，并冷卻到-10℃(±2℃)。繼續(xù)攪拌2小時(shí)，收集結(jié)晶，并用3.5L冷(-10℃)乙醇洗滌兩次。用GLC分析來測(cè)定產(chǎn)品的雜質(zhì)特性。將所述結(jié)晶在60℃下真空干燥。
產(chǎn)率10kg＝100％(m/m)反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)(阿色納品馬來酸鹽2)。
DSC140.6℃XRPD符合單斜多晶型的鑒定多晶純度～90％單斜晶型和10％斜方晶型LDS測(cè)定的粒徑d95＜199μm實(shí)施例3結(jié)晶斜方多晶型通過加熱到57℃，將實(shí)施例1制得的阿色納品馬來酸鹽(260g)溶解于乙醇(480ml)和水(50ml)的混合物中。接著讓溶液緩慢冷卻并開始結(jié)晶。攪拌72小時(shí)后反應(yīng)混合物冷卻到-10℃，并再攪拌數(shù)小時(shí)。然后通過過濾收集結(jié)晶物。這樣就得到了阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型(224g，86％)。
XRPD＞95％斜方晶型實(shí)施例4C2批結(jié)晶(單斜多晶型)根據(jù)實(shí)施例2制得的另一批。
產(chǎn)率10kg＝100％(m/m)阿色納品馬來酸鹽DSC141.0℃XRPD符合單斜多晶型的鑒定多晶純度＞95％單斜晶型LDS測(cè)定的粒徑d95＜221μm實(shí)施例5C3批結(jié)晶(斜方多晶型)將根據(jù)實(shí)施例1描述的方法制備獲得的阿色納品馬來酸鹽(～30kg)在55℃下溶解于57L乙醇和6.5L軟化水中。將溶液進(jìn)行無塵過濾，濾液緩慢冷卻到20±5℃。向?yàn)V液中加入30g的Org 5222(多晶斜方晶型)晶種，并在20±5℃下冷卻48±6小時(shí)。收集結(jié)晶物并在60℃下真空干燥。
產(chǎn)率20.06kg＝69％(m/m)阿色納品馬來酸鹽DSC139.1℃XRPD符合斜方多晶型＞95％純度的鑒定實(shí)施例6C4擬結(jié)晶(斜方多晶型)用實(shí)施例5描述的步驟處理28.9kg阿色納品游離堿產(chǎn)率20.88kg＝72％(m/m)阿色納品馬來酸鹽(1，斜方晶型)DSC139.2℃XRPD符合斜方多晶型＞95％純度的鑒定實(shí)施例7C5擬結(jié)晶(斜方多晶型)用實(shí)施例4描述的步驟處理26.9kg阿色納品游離堿產(chǎn)率22.85kg＝85％(m/m)阿色納品馬來酸鹽(1，斜方晶型)DSC139.9℃XRPD符合斜方多晶型＞95％純度的鑒定LDS平均粒徑～30μm顯微鏡圖片粒徑最大為100μm實(shí)施例8C6批結(jié)晶(斜方多晶型)用實(shí)施例5描述的步驟處理28.9kg阿色納品游離堿產(chǎn)率24.2kg＝84％(m/m)阿色納品馬來酸鹽DSC139.2℃XRPD符合斜方多晶型＞95％純度的鑒定實(shí)施例9-15C1-C6批的微粉化獲得M1-M6將實(shí)施例2及4-8中描述的C1-C6批的純產(chǎn)物在Chrispro MC200不銹鋼氣流粉碎機(jī)中進(jìn)行微粉化，載氣為氮?dú)?，微粉化壓力?bar。
結(jié)果如表2所示。
結(jié)果證明斜方多晶型的阿色納品馬來酸鹽的微粉化結(jié)晶始終保持其多晶型結(jié)構(gòu)。這在微粉化C3-C5批從而獲得微粉化的M4，M5，M6和M7(實(shí)施例12-15)批的結(jié)果中得到證實(shí)。微粉化的M4-M7批全部以小顆粒即d95＜30μm的斜方多晶型為特征，如表2中所示。此外，由于XRPD檢測(cè)不到單斜多晶型的物質(zhì)，因此產(chǎn)物的多晶型純度很高(＞95％斜方晶型)。
實(shí)施例16藥物組合物原理將阿色納品馬來酸鹽的斜方晶型混入明膠/甘露糖醇基質(zhì)中，按劑量稱量到預(yù)形成的袋中。通過穿過冷凍通道，基質(zhì)在罩中被冷凍。接著在冷凍干燥器中升華冰來干燥冷凍片。
制造方法將2000g明膠和1500g甘露糖醇分散到45.01kg純凈水中，同時(shí)在真空混合器中進(jìn)行攪拌并加熱。溶解后將基質(zhì)過濾，加入1406g斜方晶型的反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽并混合。利用計(jì)量泵將混合物分發(fā)至預(yù)制泡袋中(每袋250mg)。通過穿過液氮冷凍通道，冷凍填充的袋。冷凍片劑在冷凍干燥器中使用預(yù)編的干燥循環(huán)程序來干燥。每個(gè)袋中所包含的藥物劑量單元包括7.03mg反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽，10.0mg明膠和7.5mg甘露糖醇。
實(shí)施例17重結(jié)晶獲得斜方晶型將粗制阿色納品馬來酸鹽單斜晶型(20kg)溶于丙酮(87.6kg)，并加熱到55℃。將溶液過濾以去除不溶物。添加庚烷(25.5kg)并將溫度恢復(fù)到55℃。加入阿色納品馬來酸鹽斜方晶型的晶種(約100g)并攪拌1小時(shí)。然后歷時(shí)2小時(shí)以恒定速度添加庚烷(62.8kg)。于57℃攪拌混合物2小時(shí)后，歷時(shí)6小時(shí)將溫度降至10℃。過濾分離阿色納品馬來酸鹽，用冷卻至10℃的1∶1丙酮和庚烷(30kg)混合物洗滌。接著將所得物干燥。產(chǎn)率為90-96％。XPRD分析表明獲得＞95％斜方晶型。每鼠接種0.2mlHeps腫瘤細(xì)胞懸液于皮下。整個(gè)接種過程須在無菌罩內(nèi)以無菌操作進(jìn)行，1h內(nèi)完成接種。
接種后隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為腫瘤模型對(duì)照組、15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg試驗(yàn)組、5-fu陽性對(duì)照組，另加陰性對(duì)照組，共6組。接種瘤細(xì)胞24h后，試驗(yàn)組腹腔注射annonareticin，劑量分別為15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg試驗(yàn)組，陰性對(duì)照組和腫瘤模型對(duì)照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對(duì)照組以生理鹽水為溶劑，劑量為10mg/kg，各組動(dòng)物均按0.2ml在腹腔注射，連續(xù)給藥8d。末次給藥后次日，進(jìn)行如下觀察①完整剝離瘤塊，并稱重計(jì)算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率＝(對(duì)照組腫瘤重量-治療組腫瘤重量)/對(duì)照組腫瘤重量×100％；②組織學(xué)檢查將腫瘤組織用4％甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，HE染色后用光鏡檢查，并切取上述各組大鼠腫瘤組織，經(jīng)4％戊二醛及1％四氧化鋨預(yù)固定和后固定后，酒精及丙酮逐級(jí)脫水，環(huán)氧樹脂包埋，作0.5μm厚薄切片，醋酸雙氧鈾及枸櫞酸鉛染色，透射電鏡觀察。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果番荔枝內(nèi)酯單體化合物(annonareticin)對(duì)小鼠移植性腫瘤Heps的生長(zhǎng)抑制作用不同劑量的annonareticin均能顯著抑制小鼠腫瘤的生長(zhǎng)(P＜0.01)。番荔枝內(nèi)酯單體化合物(annonareticin)的劑量極小，其抗癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表3。
表3 annonareticin對(duì)小鼠移植性肝癌Heps作用結(jié)果
腫瘤組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的透射電鏡觀察結(jié)果內(nèi)酯單體化合物用藥組小鼠的腫瘤細(xì)胞，電鏡下可見較為典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，如胞體縮小細(xì)胞質(zhì)密度增高，核固縮，細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)濃縮并聚集成塊，有邊集現(xiàn)象，并可見到類圓形的凋亡小體，核碎裂，線粒體空泡樣變等；5-Fu化療對(duì)照組則主要表現(xiàn)為細(xì)胞壞死，凋亡少見。
權(quán)利要求
1.斜方晶的反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，3:6，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽。
2.化合物反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，3:6，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽，其特征在于所述化合物是其中包含10％或更少的另一種晶型，5％或更少的另一種晶型，或不可檢測(cè)量的另一種晶型的斜方晶型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于用CuKα射線得到的X-射線粉末衍射圖譜在2-θ(2θ)值為10.5°和15.7°處具有峰。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于用CuKα射線得到的X-射線粉末衍射圖譜在2-θ(2θ)值為10.5°，15.7°，18.3°，19.0°，22.2°，23.2°和27.5°處具有峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于用CuKα射線得到的X-射線粉末衍射圖譜在2-θ(2θ)值為10.5°，15.7°，18.3°，19.0°，20.3°，20.8°，22.2°，23.2°，25.6°和27.5°處具有峰。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于拉曼光譜圖在2888cm-1和824cm-1處有特征峰。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于拉曼光譜圖在3051cm-1，3029cm-1，3011cm-1，2888cm-1，824cm-1和717cm-1處有特征峰。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于拉曼光譜圖在3072cm-1，3051cm-1，3029cm-1，3011cm-1，2909cm-1，2888cm-1，1245cm-1，824cm-1，747cm-1，717cm-1和194cm-1處有特征峰。
9.一種制備權(quán)利要求1-8的化合物的方法，其特征在于將反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，3:6，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽從乙醇/水的混合物中結(jié)晶。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于乙醇/水混合物體積比為9∶1。
11.將權(quán)利要求1-8的反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，3:6，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽在制備用于治療精神分裂癥或雙相性精神障礙的藥物制劑中的用途。
12.一種藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的賦形劑和斜方晶型的反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，3:6，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽。
13.一種治療包括人的哺乳動(dòng)物的精神病的方法，包括給予治療有效量的斜方晶型的反式-5-氯-2，3，3a，12b-四氫-2-甲基-1H-二苯并[2，3:6，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5-c]吡咯(Z)-2-丁烯二酸鹽化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種反式－5－氯－2，3，3a，12b－四氫－2－甲基－1H－二苯并[2，36，7]氧雜環(huán)庚三烯并[4，5－c]吡咯(Z)－2－丁烯二酸鹽化合物的斜方晶型，制備該晶型的方法及含有該斜方晶型的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P25/18GK1861604SQ200610091699
公開日2006年11月15日 申請(qǐng)日期2006年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月7日
發(fā)明者G·J·希萊斯 申請(qǐng)人:奧格諾愛爾蘭有限公司