專利名稱：治療肥胖以及肥胖相關(guān)疾病和病癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，且具體涉及健康、飲食和營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及抗肥胖劑的用途。
背景肥胖及其相關(guān)病癥是美國(guó)及全世界常見(jiàn)的且非常嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題。上半身肥胖已知是2型糖尿病最強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)因素，且是心血管疾病的強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)因素。肥胖也是高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、充血性心力衰竭、中風(fēng)、膽囊疾病、骨關(guān)節(jié)炎、睡眠性呼吸暫停、比如多囊性卵巢綜合征這樣的生殖病癥、乳癌、前列腺癌、和結(jié)腸癌、和全身麻醉并發(fā)癥發(fā)病率提高的公認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)因素(參見(jiàn)，例如，Kopelman，Nature404635-43(2000))。
肥胖減少壽命并帶有上述共病(co-morbidities)以及比如感染、靜脈曲張、黑色棘皮癥、濕疹、運(yùn)動(dòng)耐受不良、胰島素抵抗、高血壓、高膽固醇血癥、膽石病、矯形損傷和血栓栓塞性疾病這樣的病癥的嚴(yán)重風(fēng)險(xiǎn)(Rissanen等人，Br.Med.J.301835-7(1990))。肥胖也是一組稱作胰島素抵抗綜合征、或“X綜合征”和代謝綜合征的狀況的風(fēng)險(xiǎn)因素。全世界的肥胖及相關(guān)病癥的醫(yī)療費(fèi)用是巨大的。
據(jù)信，肥胖的發(fā)病機(jī)理是多因素的。肥胖受試者中的一個(gè)問(wèn)題是，營(yíng)養(yǎng)物利用率與能量消耗不平衡，直至出現(xiàn)過(guò)量脂肪組織。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)控制能量平衡并協(xié)調(diào)合乎動(dòng)物代謝狀態(tài)的各種行為、自主和內(nèi)分泌活動(dòng)?？刂七@些活動(dòng)的機(jī)制或系統(tǒng)廣泛分布于前腦(例如，下丘腦)、后腦(例如，腦干)和脊髓。最終，將來(lái)自這些系統(tǒng)的代謝(也即，燃料利用率)和認(rèn)知(也即，習(xí)得的偏好)信息進(jìn)行整合，并開(kāi)啟(進(jìn)餐獲得和開(kāi)始)或關(guān)閉(進(jìn)餐終止)參與求欲形為(尋找食物)和完善行為(攝食)的決定。下丘腦被認(rèn)為主要負(fù)責(zé)整合這些信號(hào)并隨后向腦干發(fā)布指令。腦干核控制完善運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)(the consummatory motor control system)元件(例如，負(fù)責(zé)咀嚼和吞咽的肌肉)。同樣，這些CNS核在字面上被稱為構(gòu)成攝食行為的“最后共同途徑”。
神經(jīng)解剖學(xué)和藥理學(xué)證據(jù)支持，能量和營(yíng)養(yǎng)穩(wěn)態(tài)的信號(hào)整合在前腦核中，且完善運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)位于腦干核中，可能在環(huán)繞三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核的區(qū)域中。下丘腦和腦干間有著廣泛的相互連接。多種CNS-指向的抗肥胖治療劑(例如，小分子和肽)主要聚焦在位于下丘腦中的前腦基底和/或位于腦干中的后腦基底上。
肥胖維持一種難以治療的、慢性、基本上難以處理的代謝病癥。因此，需要用于減少和/或維持受試者體重的新療法。這樣的療法將對(duì)受試者健康產(chǎn)生深遠(yuǎn)的有益作用。
本文所引用的所有專利、專利申請(qǐng)和公開(kāi)文本均全文引入本文作為參考。
概述本發(fā)明提供用于控制、治療和預(yù)防肥胖及肥胖相關(guān)狀況、病癥和疾病的方法和組合物。本發(fā)明的方法包括向受試者施用控制、治療和預(yù)防肥胖及肥胖相關(guān)狀況、病癥和疾病有效量的至少兩種抗肥胖劑。
在一方面，本發(fā)明提供降低受試者營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法。在另一方面，本發(fā)明提供減少受試者重量的方法。在一方面，本發(fā)明提供誘導(dǎo)化合物之中的協(xié)同抗肥胖作用的方法。
在一方面，本發(fā)明提供治療受試者肥胖的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種不同的抗肥胖劑，其中至少一種抗肥胖劑作用于前腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)，且至少一種抗肥胖劑作用于后腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)，其中當(dāng)一種抗肥胖劑是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物、CCK、CCK類似物或CCK激動(dòng)劑，且其中當(dāng)一種抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括向受試者施用至少兩種不同的抗肥胖劑，其中至少一種抗肥胖劑選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯、CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑。在特定實(shí)施方案中，所施用的抗肥胖劑是苯丁胺、利莫那班(rimonabant)、西布茶明或普蘭林肽。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療受試者肥胖的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種抗肥胖劑，其中第一種抗肥胖劑選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯，其中第二種抗肥胖劑選自CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑不是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，且當(dāng)其中第一種抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，第二種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療肥胖的方法，其包括組合施用選自淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑的第一種抗肥胖劑和選自苗條蛋白、苗條蛋白衍生物或苗條蛋白激動(dòng)劑的第二種抗肥胖劑，其中與單獨(dú)施用任一試劑相比該試劑施用導(dǎo)致協(xié)同作用。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供使受試者借助其減少體重至少10％、減少身體脂肪量、喪失異位脂肪、或其任意組合的方法。
在一些實(shí)施方案中，這些方法涉及患有肥胖、肥胖相關(guān)病癥，肥胖相關(guān)疾病、肥胖相關(guān)狀況、糖尿病、胰島素抵抗綜合征、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良(lypodystrpohy)、非酒精性脂肪性肝炎、心血管疾病、多囊性卵巢綜合征、代謝綜合征或者想減輕體重的受試者。
在一方面，抗肥胖劑的組合施用可以是同時(shí)、并行或者相繼施用。
本發(fā)明還關(guān)注肥胖及肥胖相關(guān)狀況、病癥和疾病的治療，以及抗肥胖劑和本發(fā)明組合物在制備用于治療這些狀況的藥物中的用途。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是表示施用苗條蛋白和淀粉狀蛋白毒素對(duì)食物攝入的作用的圖。
圖2是表示施用苗條蛋白和淀粉狀蛋白毒素對(duì)體重的作用的圖。
圖3是表示施用苗條蛋白和淀粉狀蛋白毒素對(duì)身體組成的作用的圖。
圖4是表示施用苗條蛋白和淀粉狀蛋白毒素對(duì)身體組成的作用的圖。
圖5是表示施用苗條蛋白和淀粉狀蛋白毒素對(duì)能量消耗的作用的圖。
圖6A是表示單獨(dú)或組合施用苗條蛋白(500μg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)體重的作用的圖。圖6B是表示單獨(dú)或組合施用苗條蛋白(500μg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體脂肪的作用的圖。圖6C是表示單獨(dú)或組合施用苗條蛋白(500μg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體蛋白的作用的圖。
圖7是表示單獨(dú)施用苗條蛋白(500μg/kg/天)、單獨(dú)施用對(duì)喂組(pair-fed)苗條蛋白(500μg/kg/天)和組合施用苗條蛋白(500μg/kg/天和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)體重的作用的圖。
圖8顯示表示正常HSD和DIO傾向動(dòng)物中的血清苗條蛋白濃度的圖，所述動(dòng)物接受載體、為淀粉狀蛋白毒素處理組的對(duì)喂組或接受淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周。
圖9A是表示在正常動(dòng)物中施用載體或苗條蛋白(500μg/kg/天)對(duì)體重的作用的圖。圖9B是表示在DIO傾向動(dòng)物中施用載體或苗條蛋白(500μg/kg/天)對(duì)體重的作用的圖。
圖10A是表示單獨(dú)或組合施用西布茶明(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)體重的作用的圖。圖6B是表示單獨(dú)或組合施用西布茶明(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體脂肪的作用的圖。圖6C是表示單獨(dú)或組合施用西布茶明(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體蛋白質(zhì)的作用的圖。
圖11A是表示單獨(dú)或組合施用苯丁胺(10mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)體重的作用的圖。圖6B是表示單獨(dú)或組合施用苯丁胺(10mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體脂肪的作用的圖。圖6C是表示單獨(dú)或組合施用苯丁胺(10mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體蛋白質(zhì)的作用的圖。
圖12A是表示單獨(dú)或組合施用利莫那班(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)體重的作用的圖。圖6B是表示單獨(dú)或組合施用利莫那班(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體脂肪的作用的圖。圖6C是表示單獨(dú)或組合施用利莫那班(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)身體蛋白質(zhì)的作用的圖。
圖13是表示單獨(dú)或與淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)組合施用一定劑量范圍的CB-1拮抗劑對(duì)體重的作用的圖。環(huán)形區(qū)域中的組合的時(shí)程表示在圖14A和B中。
圖14A是表示單獨(dú)或組合施用CB-1拮抗劑(1mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)對(duì)于體重的作用的圖。圖14B是表示單獨(dú)或組合施用CB-1拮抗劑(3mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)對(duì)于體重的作用的圖。
圖15A是表示單獨(dú)或組合施用毒蜥外泌肽-4類似物(10μg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)于體重的作用的圖。圖6B是表示單獨(dú)或組合施用毒蜥外泌肽-4類似物(10μg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)于身體脂肪的作用的圖。圖6C是表示單獨(dú)或組合施用毒蜥外泌肽-4類似物(10μg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)于身體蛋白質(zhì)的作用的圖。
圖16A是表示單獨(dú)或組合施用PYY(3-36)(1mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)于體重的作用的圖。圖6B是表示單獨(dú)或組合施用PYY(3-36)(1mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)于身體脂肪的作用的圖。圖6C是表示單獨(dú)或組合施用PYY(3-36)(1mg/kg/天)和淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)兩周對(duì)于身體蛋白質(zhì)的作用的圖。
詳述我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，組合施用作用于前腦中參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和作用于后腦中參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑對(duì)于減少營(yíng)養(yǎng)物利用率和治療肥胖及肥胖相關(guān)狀況、病癥和疾病驚人地有效。還已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以這種方式組合施用這樣的抗肥胖劑時(shí)，抗肥胖劑對(duì)于降低接受者的營(yíng)養(yǎng)物利用率比單獨(dú)施用其中一種試劑更為有效。如本文所示，例如，抗肥胖劑組合可協(xié)同作用以降低營(yíng)養(yǎng)物利用率，例如，以減輕體重、減少脂肪、減少食物攝入或這三種的任意組合。
前腦的特定區(qū)域(端腦和間腦衍生的腦成分)和后腦或腦干(包括中腦、腦橋和髓質(zhì))已被鑒定為參與控制能量平衡。參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的前腦結(jié)構(gòu)或位于下丘腦中的核包括，例如，弓狀核(ARC)、室旁核(PVN)、背內(nèi)側(cè)下丘腦(DMH)、腹內(nèi)側(cè)核(VMH)和下丘腦外側(cè)核(LHA)。參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的后腦結(jié)構(gòu)或位于腦干中的核包括，例如，孤束核(NST)、最后區(qū)(AP)和臂旁外側(cè)核(lPBN)?？刂仆晟七\(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)元件的腦干核有可能受來(lái)自如NST、AP和IPBN這樣的腦干區(qū)域的初級(jí)或二級(jí)投射(projections)的控制。值得注意的是，AP、NST和IPBN已全部顯示出(共同地和獨(dú)立地)具有其自身的綜合能力。
多種CNS-指向的抗肥胖劑作用于位于下丘腦中的參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的前腦結(jié)構(gòu)。此外，CNS-指向的抗肥胖劑作用于位于腦干中的參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的后腦結(jié)構(gòu)。這樣的抗肥胖劑在本文中有描述。參見(jiàn)例如表1。這樣的試劑包括，例如，神經(jīng)肽Y1(NPY1)受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、苗條蛋白和苗條蛋白激動(dòng)劑、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)和CNTF激動(dòng)劑、黑色素濃縮激素(MHC)和MCH拮抗劑、黑皮質(zhì)素(melacortins)(MC)和MC激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑、5-羥色胺(5-HT)和5-HT激動(dòng)劑、肽YY(PYY)和PYY激動(dòng)劑、毒蜥外泌肽和毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1和GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、生長(zhǎng)素釋放肽和生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、縮膽囊肽(CCK)和CCK激動(dòng)劑、和淀粉狀蛋白毒素和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑。
表1.單個(gè)抗肥胖靶及定位
在特定實(shí)施方案中，這些方法包括主要靶向比如ARC、PVN、VM和LH這樣的下丘腦能量平衡中心的第一種化合物。在特定實(shí)施方案中，這些方法包括主要靶向比如NST、AP和IPBN這樣的后腦能量平衡中心的第二種化合物。
在特定實(shí)施方案中，這些化合物是抗肥胖劑。在特定實(shí)施方案中，這些方法可包括使用一種或多種主要前腦作用抗肥胖劑。在其它實(shí)施方案中，這些方法可包括使用一種或多種主要后腦作用抗肥胖劑。示例性的抗肥胖劑包括NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、苗條蛋白或苗條蛋白激動(dòng)劑或類似物、CNTF(例如，AXOKINE)、MCH拮抗劑、MC4激動(dòng)劑、CB-1拮抗劑(例如，利莫那班)、5-HT2C激動(dòng)劑、NPY2受體激動(dòng)劑(例如、PYY(3-36)或PYY(3-36)激動(dòng)劑)、毒蜥外泌肽或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑或類似物、GLP-1或GLP-1激動(dòng)劑或類似物、DPP-IV抑制劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、CCK或CCK激動(dòng)劑或類似物和淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑或類似物。
如本文所舉例的，作為本發(fā)明抗肥胖劑的激動(dòng)劑和拮抗劑包括，例如，比如肽、多肽和小分子試劑這樣的分子。
本發(fā)明的一種或多種實(shí)施方案的細(xì)節(jié)在附圖和以下說(shuō)明書(shū)中給出。從說(shuō)明書(shū)和附圖以及從權(quán)利要求書(shū)來(lái)看，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)是顯然的。
定義“抗肥胖劑”是在施用后能夠降低身體營(yíng)養(yǎng)物利用率的化合物?！爸亓?誘導(dǎo)劑”是將提高身體營(yíng)養(yǎng)物利用率的化合物。在一方面，重量誘導(dǎo)劑是抗肥胖劑的拮抗劑。
如本文所使用的，“作用于參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的前腦結(jié)構(gòu)”的抗肥胖劑刺激或抑制前腦中特定區(qū)域的活性，例如，特定的核和/或神經(jīng)元回路。該前腦刺激或抑制導(dǎo)致身體營(yíng)養(yǎng)物利用率下降。“作用于參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的后腦結(jié)構(gòu)”的抗肥胖劑刺激或抑制后腦中特定區(qū)域的活性，例如，特定的核和/或神經(jīng)元回路。該后腦刺激或抑制導(dǎo)致身體營(yíng)養(yǎng)物利用率下降。
“降低的營(yíng)養(yǎng)物利用率”意欲包括任何方法，通過(guò)所述方法身體降低可以獲得的作為脂肪儲(chǔ)存的營(yíng)養(yǎng)物。換言之，可以通過(guò)包括但不限于，降低食欲、提高飽滿感、影響食物選擇/味覺(jué)厭惡、提高代謝、和/或降低或抑制食物吸收的方法來(lái)降低營(yíng)養(yǎng)物利用率?？墒苡绊懙氖纠詸C(jī)制包括延遲胃排空或減少食物在腸中的吸收。
“提高的營(yíng)養(yǎng)物利用率”意欲包括任何方法，通過(guò)所述方法身體提高可獲得的作為脂肪儲(chǔ)存的營(yíng)養(yǎng)物。換言之，可以通過(guò)包括，但不限于，增進(jìn)食欲、降低飽滿感、影響食物選擇、減少味覺(jué)厭惡、降低代謝和/或提高食物吸收的方法來(lái)提高營(yíng)養(yǎng)物利用率?？墒苡绊懙氖纠詸C(jī)制包括減弱胃運(yùn)動(dòng)不足或提高食物在腸中的吸收。
盡管“肥胖”通常被定義為體重指數(shù)(BMI)大于30，但為本公開(kāi)內(nèi)容的目的，任何需要或者希望減輕體重或預(yù)防體重增加的受試者，包括那些體重指數(shù)低于30的受試者，都包括在“肥胖”范圍內(nèi)。因此，BMI低于30和25及以上(視為超重)或低于25的受試者也包括在本發(fā)明的受試者內(nèi)。病態(tài)肥胖指BMI為40或更高。
關(guān)于降低營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法，如本文所使用的，“需要其的受試者”包括超重或肥胖或病態(tài)肥胖、或渴望減輕體重的受試者。此外，胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良或患有任何形式糖尿病(例如，1型、2型或妊娠糖尿病)的受試者可從降低營(yíng)養(yǎng)物利用率的這些方法中受益。
關(guān)于提高營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法，如本文所使用的，“需要其的受試者”包括體重不足或希望增重的受試者。
“受試者”意欲包括意欲包括任何動(dòng)物，包括人，靈長(zhǎng)類動(dòng)物，和其它哺乳動(dòng)物，其包括大鼠，小鼠，比如貓、狗這樣的寵物，比如馬、牛、綿羊和山羊這樣的家畜；以及雞，火雞，以及其它任何體重或改變身體組成有可能成問(wèn)題的動(dòng)物。
“代謝率”意指每單位時(shí)間釋放/消耗的能量的量。每單位時(shí)間的代謝可通過(guò)食物消耗、作為熱釋放的能量、或代謝過(guò)程中所使用的氧來(lái)估計(jì)。當(dāng)人們想要喪失體重時(shí)通常需要具有較高的代謝率。例如，具有較高代謝率的人完成一項(xiàng)活動(dòng)可能比具有低代謝率的人完成該活動(dòng)能夠消耗更多的能量(例如，身體燃燒更多的熱量)。
如本文所使用的，“無(wú)脂肪組織”或“瘦體重”指肌肉和骨。瘦體重不必然指無(wú)脂肪量。瘦體重包含中樞神經(jīng)系統(tǒng)(腦和脊髓)、骨髓和內(nèi)部器官內(nèi)的小脂肪百分?jǐn)?shù)(約為3％)。瘦體重以密度測(cè)量。測(cè)定脂肪量和無(wú)脂肪組織的方法包括，但不限于，水下稱重、空氣置換體積描記器、x-射線、DEXA掃描、MRI和CT掃描。在一種實(shí)施方案中，采用水下稱重來(lái)測(cè)量脂肪量和無(wú)脂肪組織。
“脂肪分布”意指身體內(nèi)脂肪沉積的位置。這樣的脂肪沉積位置包括，例如，皮下、內(nèi)臟和異位脂肪庫(kù)(depot)。
“皮下脂肪”意指緊靠在皮膚表面下的脂質(zhì)沉積。受試者的皮下脂肪量可采用任何一種可采用的測(cè)量皮下脂肪的方法來(lái)測(cè)量。測(cè)量皮下脂肪的方法是本領(lǐng)域已知的，例如，在第6,530,886號(hào)美國(guó)專利中描述的那些，該專利全文引入本文作為參考。
“內(nèi)臟脂肪”意指作為腹內(nèi)脂肪組織的脂肪沉積。內(nèi)臟脂肪圍繞著重要器官，且可以被肝臟代謝從以產(chǎn)生血膽固醇。內(nèi)臟脂肪已與提高的比如多囊性卵巢綜合征、代謝綜合征和心血管疾病這樣的狀況的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
“異位脂肪儲(chǔ)存”意指在構(gòu)成瘦體重的組織和器官(例如，骨骼肌、心臟、肝、胰、腎、血管)內(nèi)或其周圍的脂質(zhì)沉積。總的來(lái)說(shuō)，異位脂肪儲(chǔ)存是脂質(zhì)在身體的經(jīng)典脂肪組織庫(kù)之外的累積。
如本文所使用的，以及本領(lǐng)域通常理解的，“治療”是獲得有益或所需結(jié)果(包括臨床結(jié)果)的方法?！爸委煛被颉皽p輕”疾病、病癥或狀況意指，與未治療該病癥相比，狀況、病癥或疾病狀態(tài)的程度和/或不期望的臨床表現(xiàn)減輕和/或進(jìn)展的時(shí)程被延緩或者延長(zhǎng)。例如，在治療肥胖、減輕體重中，例如，至少5％體重減輕是所需治療結(jié)果的一個(gè)例子。為本發(fā)明目的，有益或所需的臨床結(jié)果包括，但不限于，一種或多種癥狀的減輕或改善，疾病程度減低、穩(wěn)定的(也即，未惡化)疾病狀態(tài)、延遲或延緩疾病進(jìn)展、改善或減輕疾病狀態(tài)以及免除(無(wú)論是部分還是總體)，無(wú)論是可檢測(cè)的還是不可檢測(cè)的?！爸委煛边€可意指與如果不接受治療所預(yù)期的存活相比延長(zhǎng)存活。而且，治療不必定通過(guò)施用一劑來(lái)發(fā)生，而是常常在施用一系列劑次后發(fā)生的。因此，治療有效量，足以減輕的量，或足以治療疾病、病癥或狀況的量可以以一次或多次施用來(lái)施用。
如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“治療有效量”意指組合物中的活性化合物的量，該量將在組織、系統(tǒng)、受試者或人中引發(fā)研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)生所尋求的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)應(yīng)答，所述應(yīng)答包括所治療病癥的癥狀的減輕。本發(fā)明的新治療方法針對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的病癥。
如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“預(yù)防有效量”意指組合物中的活性化合物的量，該量將在組織、系統(tǒng)、受試者或人中引發(fā)研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)生所尋求的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)應(yīng)答以預(yù)防有肥胖或肥胖相關(guān)病癥、狀況或疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者發(fā)作肥胖或肥胖相關(guān)病癥、狀況或疾病。
如本文所使用的，單數(shù)形式“一種(a)”、“一種(an)”和“該(the)”包括復(fù)數(shù)含意，除非另行指明或者在上下文中是清楚的。例如，“一種”淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑可包括一種或多種淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，這在上下文中就是清楚的。
如本文所使用的，“類似物”指其序列衍生自基礎(chǔ)參照肽例如，淀粉狀蛋白毒素和降鈣素的序列的肽，并包括參照氨基酸系列的插入、取代、延伸和/或缺失，例如與基礎(chǔ)肽具有至少50或55％氨基酸序列同一性，在其它情況下，例如，與基礎(chǔ)肽具有至少70％、80％、90％或95％氨基酸序列同一性。這樣的類似物可包含保守或非保守氨基酸取代(包括非天然氨基酸以及L和D形式)。類似物包括具有激動(dòng)劑的化合物和具有拮抗劑活性的化合物。如本文所定義的類似物包括衍生物。
“衍生物”定義為，如上述的，在其一個(gè)或多個(gè)氨基酸側(cè)基、α-碳原子、末端氨基或末端羧基上帶有化學(xué)修飾的參照肽或類似物?；瘜W(xué)修飾包括，但不限于，添加化學(xué)部分(moiety)、生成新鍵和除去化學(xué)部分。在氨基酸側(cè)基上的修飾包括，不限于，賴氨酸ε-氨基的酰基化，精氨酸、組氨酸或賴氨酸的N-烷基化，谷氨酸或天冬氨酸羧酸基團(tuán)的烷基化，和谷氨酰胺或天冬酰胺的脫酰胺化。末端氨基的修飾包括，不限于，脫氨，N-低級(jí)烷基，N-二-低級(jí)烷基，和N-?；揎?。末端氨基的修飾包括，不限于，脫氨，N-低級(jí)烷基，N-二-低級(jí)烷基，和N-?；揎?，比如烷基?；⒎种У耐榛；?、烷基芳基-?；?。末端羧基的修飾包括，不限于，酰胺，低級(jí)烷基酰胺，二烷基酰胺，芳基酰胺，烷基芳基酰胺和低級(jí)烷基酯修飾。低級(jí)烷基是C1-C4烷基。此外，一種或多種側(cè)基，或末端基團(tuán)，可以用具備普通技術(shù)的合成化學(xué)家已知的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。氨基酸的α-碳可以是單或二甲基化的。
通常，關(guān)于氨基酸序列，術(shù)語(yǔ)“修飾”包括單獨(dú)的取代、插入、延長(zhǎng)、缺失和衍生或組合。本發(fā)明的多肽可包括對(duì)“非必需”氨基酸殘基的一種或多種修飾。在本發(fā)明的上下文中，“非必需”氨基酸殘基是在新氨基酸序列中可以被改變，例如，缺失或取代，但不取消或大大降低該多肽(例如，類似物多肽)活性(例如，激動(dòng)劑活性)的殘基。本發(fā)明的多肽可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)非必需氨基酸殘基的缺失。本發(fā)明的多肽可包括至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)氨基酸的添加而不取消或大大降低該多肽的活性。
取代包括保守氨基酸取代?！氨Ｊ匕被崛〈笔前被釟埢痪哂邢嗨苽?cè)鏈、或物化特性(例如，靜電、氫鍵、等排的、疏水特性)的氨基酸殘基取代的一種取代。氨基酸可以是天然存在的或非天然的。具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族是本領(lǐng)域已知的。這些家族包括帶有堿性側(cè)鏈(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、非荷電極性側(cè)鏈(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)、β-分支的側(cè)鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳族側(cè)鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。取代還可包括非保守改變。
“氨基酸”或“氨基酸殘基”意指天然氨基酸、非天然氨基酸和經(jīng)過(guò)修飾的氨基酸。除非與所指相反，對(duì)氨基酸的任何提及，通常所指或者特別用名稱提及，如果它們的結(jié)構(gòu)允許這樣的立體異構(gòu)體形式，均包括對(duì)D和L立體異構(gòu)體的提及。天然氨基酸包括丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、組氨酸(His)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、賴氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和纈氨酸(Val)。非天然氨基酸包括，但不限于高賴氨酸、高精氨酸、高絲氨酸、氮雜環(huán)丁烷羧酸、2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、叔丁基甘氨酸、2，4-二氨基異丁酸、鎖鏈素、2，2’-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、高脯氨酸、羥賴氨酸、別羥賴氨酸、3-羥脯氨酸、4-羥脯氨酸、異鎖鏈素、別異亮氨酸、N-甲基丙氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基異亮氨酸、N-甲基戊基甘氨酸、N-甲基纈氨酸、naphthalanine、正纈氨酸、正亮氨酸、鳥(niǎo)氨酸、戊基甘氨酸、六氫吡啶羧酸和硫代脯氨酸。其它的非天然氨基酸包括經(jīng)過(guò)修飾的氨基酸殘基，它們被可逆或不可逆地化學(xué)阻斷，或其N-末端氨基或側(cè)鏈基團(tuán)經(jīng)過(guò)了化學(xué)修飾，比如例如，N-甲基化的D和L氨基酸或殘基——其中側(cè)鏈官能團(tuán)被修飾成為另一種官能團(tuán)。例如，經(jīng)過(guò)修飾的氨基酸包括甲硫氨酸亞砜；甲硫氨酸砜；天冬氨酸-(β-甲酯)，一種經(jīng)過(guò)修飾的天冬氨酸氨基酸；N-乙基甘氨酸，一種經(jīng)過(guò)修飾的甘氨酸氨基酸；或丙氨酸氨甲酰，一種經(jīng)過(guò)修飾的丙氨酸氨基酸。其它可以摻入的殘基描述于Sandberg等人，J.Med.Chem.412481-91，1998中。
應(yīng)當(dāng)注意，在整個(gè)申請(qǐng)中，馬庫(kù)什基團(tuán)中寫(xiě)出了替代物，例如，各氨基酸位置包含超過(guò)一個(gè)的可能氨基酸。特別預(yù)期，馬庫(kù)什基團(tuán)中的每個(gè)成員應(yīng)當(dāng)分別考慮，由此構(gòu)成本發(fā)明的另一種實(shí)施方案，并且馬庫(kù)什基團(tuán)不能作為單個(gè)單位來(lái)解讀。
本發(fā)明的方法在總體方面，本發(fā)明提供通過(guò)組合施用抗肥胖劑來(lái)降低營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法。因此，本發(fā)明提供治療將受益于營(yíng)養(yǎng)物利用率降低的肥胖及肥胖相關(guān)疾病、病癥和/或狀況的方法。假設(shè)組合施用時(shí)有效性提高，則本發(fā)明的方法可允許組合施用與比例如單一療法中單獨(dú)使用試劑相比更低劑量的一種或多種抗肥胖劑。
本發(fā)明的方法提供抗肥胖劑的組合施用。試劑的“組合”施用應(yīng)被理解為意指向需要接受治療的受試者提供每一試劑。試劑的施用可作為包含所有想要的抗肥胖劑的單一藥物劑量制劑形式發(fā)生或者用每一想要的試劑以其各自的劑量制劑分別發(fā)生。
在采用分離的劑量制劑的情況下，單獨(dú)的抗肥胖劑可基本同時(shí)，也即并行施用，或者在單獨(dú)地交錯(cuò)的時(shí)間，也即，在施用該方法的另一種抗肥胖劑之前或之后順序施用。在一些實(shí)施方案中，組合施用包括在重疊的時(shí)間間隔期間施用分離的劑量制劑。例如，第1至30天施用抗肥胖劑1，且第20至50天施用抗肥胖劑2。在其它實(shí)施方案中，組合施用包括順序、非重疊時(shí)間間隔地施用分離的劑量制劑。例如，第1至30天施用抗肥胖劑1，且第35至50天施用抗肥胖劑2。本發(fā)明因此被理解為包括所有這樣的在整個(gè)治療過(guò)程中同時(shí)進(jìn)行的、交替的或者完全分開(kāi)的治療方案，且術(shù)語(yǔ)“施用”和“組合施用”作相應(yīng)解釋。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)組合施用至少一種作用于參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的前腦結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的后腦結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑來(lái)降低營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法。在一些情況下，本發(fā)明的方法提高或增強(qiáng)當(dāng)單獨(dú)使用時(shí)(單一療法)具有有限效力(如果有的話)的抗肥胖劑的效力。在這樣的情況下，本發(fā)明的方法通過(guò)，例如，通過(guò)持續(xù)使用或提高效能從而預(yù)防或延遲效力喪失來(lái)提高或增強(qiáng)抗肥胖劑的效力。本發(fā)明的方法可允許施用在組合中使用的比任一試劑單獨(dú)使用時(shí)更低劑量的一或多種抗肥胖劑。
在一方面，本發(fā)明的方法提供所施用試劑之中的協(xié)同抗肥胖作用。因此，在一種實(shí)施方案中，組合施用抗肥胖劑產(chǎn)生，例如，營(yíng)養(yǎng)物利用率下降、體重下降、食物攝入減少、代謝提高這樣的作用，這些作用大于單獨(dú)施用(單一療法)抗肥胖劑的結(jié)果的組合。
在本發(fā)明的另一方面，提供了降低或消除受試者對(duì)抗肥胖劑抗性的方法，從而使得施用該試劑時(shí)，它將能夠引發(fā)抗肥胖應(yīng)答(例如，降低營(yíng)養(yǎng)物利用率，降低重量，降低脂肪量)。例如，且無(wú)意于受此以及任何其它理論的束縛，已形成這樣的理論苗條蛋白抗性可能是由于在肥胖受試者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的高水平苗條蛋白(也即，該身體已對(duì)苗條蛋白脫敏)而導(dǎo)致的。因此，本分明的一種方法包括施用除苗條蛋白外的抗肥胖劑(例如，淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑)以減輕受試者的體重從而降低或除去苗條蛋白抗性。一旦已達(dá)到這一效果，就再將苗條蛋白單獨(dú)或與抗肥胖劑(例如，淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑)組合施用以實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的抗肥胖作用。還預(yù)期了其它減輕體重以改善苗條蛋白抗性的方法，比如飲食、運(yùn)動(dòng)、其它飲食藥物、以及外科手術(shù)設(shè)備。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及，在施用作用于參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的前腦結(jié)構(gòu)的第二種抗肥胖劑之前，送遞作用于參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的后腦結(jié)構(gòu)的第一種抗肥胖劑以使身體做好準(zhǔn)備。在特定實(shí)施方案中，在施用第二種試劑前施用第一種試劑數(shù)日、數(shù)周或者甚至數(shù)月。在這一點(diǎn)上，第二種試劑可以單獨(dú)施用或者與第一種試劑組合施用。在特定實(shí)施方案中，第一種抗肥胖劑是淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，且第二種試劑是苗條蛋白或苗條蛋白激動(dòng)劑。在一些實(shí)施方案中，施用抗肥胖劑之前的受試者的血清苗條蛋白濃度大于10ng/ml，在其它實(shí)施方案中，它大于20ng/ml。
在一種實(shí)施方案中，在施用苗條蛋白或苗條蛋白激動(dòng)劑之前向受試者施用淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑至少1天、2天、3天、5天、7天、10天、14天、21天、28天或更多。在一些實(shí)施方案中，在施用苗條蛋白或苗條蛋白激動(dòng)劑之前，向受試者施用淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑直至受試者的血清苗條蛋白濃度為約4ng/ml、小于4ng/ml、小于2ng/ml、小于1ng/ml或小于約0.5ng/ml。在一些實(shí)施方案中，以替代療法的量(a replacementtherapy amount)施用苗條蛋白或苗條蛋白激動(dòng)劑以實(shí)現(xiàn)接近血漿中的苗條蛋白生理濃度。
在本發(fā)明的另一方面，提供了降低發(fā)展為代謝病癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括向受試者施用有效量的抗肥胖劑的組合以減輕受試者體重。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于提高受試者的代謝率，降低受試者代謝率的降低，或者保持受試者的代謝率。在一種實(shí)施方案中，代謝率可涉及相比于無(wú)脂肪身體組織更優(yōu)先使用身體的脂肪作為能量來(lái)源。在一方面，瘦體重在組合施用抗肥胖劑后不降低。在另一方面，在組合施用抗肥胖劑后，瘦體重的減輕得到減少或者阻止。仍在另一方面，在組合施用抗肥胖劑后瘦體重得到提高。這樣的優(yōu)先使用脂肪作為能量來(lái)源可以通過(guò)比較脂肪組織與無(wú)脂肪身體組織的量來(lái)確定，并通過(guò)在治療時(shí)間段開(kāi)始和結(jié)束時(shí)測(cè)量總體重和脂肪含量來(lái)確認(rèn)。代謝率的提高是，與在未施用抗肥胖劑組合的基本相似或相同條件下的另一時(shí)間段內(nèi)受試者的熱量或其它能量來(lái)源的利用水平相比，在所述時(shí)間段內(nèi)受試者的熱量或另一種能量來(lái)源的更高水平的利用。在一種實(shí)施方案中，受試者的代謝率提高至少約5％，在其它實(shí)施方案中，受試者的代謝率提高至少約10％、15％、20％、25％、30％或35％，與在未施用抗肥胖劑組合的基本相似或相同條件下的另一時(shí)間段內(nèi)受試者的熱量或其它能量來(lái)源的利用水平相比。代謝率的提高可利用例如呼吸熱量計(jì)來(lái)測(cè)量。該實(shí)施方案中所使用的有效量的抗肥胖劑是，與未接受試劑或僅接受其中一種試劑的受試者相比，各試劑組合施用時(shí)有效提高受試者代謝率的量。
在另一種實(shí)施方案中，提供了減少受試者代謝率降低的方法。這樣的代謝率降低可以是任何導(dǎo)致代謝率降低的條件或營(yíng)養(yǎng)或身體狀況的結(jié)果，例如，由于降低的熱量飲食、受限制的飲食或體重喪失。受限制的飲食包括在一個(gè)飲食允許的食物類型或者是食物量或者是二者的容許量或禁止或兩者，而并非必定基于熱量。例如，比如在個(gè)人飲食中，身體根據(jù)較低的熱量攝入用降低的代謝率來(lái)補(bǔ)償。本質(zhì)上，身體下調(diào)對(duì)食物的需求，由此以更少的食物來(lái)維持生存。隨著節(jié)食的繼續(xù)，熱量攝入的閾值會(huì)降低。當(dāng)節(jié)食結(jié)束時(shí)，在食用正常飲食時(shí)，個(gè)體通常會(huì)由于降低的熱量攝入閾值和較低的基線代謝率而增加體重(NIH Technology Assessment Conference Panel(1992)Ann.Intern.Med.116942-949；Wadden(1993)Ann.Intern.Med.119688-693)。在一方面，提供了降低受試者代謝率損失的方法，其中代謝率損失是降低的熱量飲食或體重減少的結(jié)果。通過(guò)使用這樣的方法，受試者的代謝率減少降低了至少約10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。對(duì)于這樣的方法，需要在啟動(dòng)了引導(dǎo)代謝率損失或降低的條件或營(yíng)養(yǎng)或身體狀況時(shí)施用抗肥胖劑組合。然而，還預(yù)期可以在啟動(dòng)條件或營(yíng)養(yǎng)或身體狀況之前施用這些試劑。在一種情況中，用呼吸熱量計(jì)來(lái)測(cè)量代謝率。如同本實(shí)施方案中所使用的抗肥胖劑的有效量是，在組合施用時(shí)每一試劑能夠有效降低受試者代謝率減少的量。
在另一方面，提供了降低代謝平臺(tái)的方法，所述方法包括向受試者組合施用有效量的抗肥胖劑。在一種實(shí)施方案中，受試者正在減輕體重，或者已經(jīng)減輕了體重，例如，由于降低的熱量飲食、增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)或其組合。“代謝平臺(tái)”意指穩(wěn)定代謝率的時(shí)間間隔，該過(guò)程中身體進(jìn)行調(diào)節(jié)以適應(yīng)熱量或能量輸入變化。熱量輸入或消耗可以是，例如，降低的熱量飲食或增強(qiáng)的身體活動(dòng)的結(jié)果。這樣的平臺(tái)可以在，例如，重量減輕方案過(guò)程中重量減輕減緩或停止時(shí)進(jìn)行觀察。在一種實(shí)施方案中，與其他方面相同的不施用抗肥胖劑組合的受試者在基本類似或相同的條件下在相同的時(shí)間段中的代謝平臺(tái)持續(xù)時(shí)間相比，本發(fā)明的方法降低了受試者的代謝平臺(tái)持續(xù)時(shí)間。在另一種實(shí)施方案中，與其他方面相同的不施用抗肥胖劑組合的受試者在基本類似或相同的條件下在相同的時(shí)間段中的代謝平臺(tái)頻率相比，本發(fā)明的方法降低了受試者的代謝平臺(tái)頻率。在又一種實(shí)施方案中，與其他方面相同的不施用抗肥胖劑組合的受試者在基本類似或相同的條件下在相同的時(shí)間段中的代謝平臺(tái)開(kāi)始相比，本發(fā)明的方法延遲了受試者的代謝平臺(tái)開(kāi)始。在一種實(shí)施方案中，代謝平臺(tái)通過(guò)對(duì)減少的體重減輕或者無(wú)體重減輕的時(shí)間段進(jìn)行作圖來(lái)鑒定。在一種實(shí)施方案中，降低了至少一種代謝平臺(tái)。在其它實(shí)施方案中，降低了至少兩、三、四、五、六、七、八、九或十種代謝平臺(tái)。在另一方面，與在相同或類似條件下未施用抗肥胖劑組合的受試者相比，代謝平臺(tái)被延遲一天。在其他方面，受試者的代謝平臺(tái)被延遲2天、3天、4天、5天、6天、1周、10天、2周或3周。
在另一種實(shí)施方案中，提供了保持受試者代謝率的方法。在一種實(shí)施方案中，受試者可能面臨例如由于降低的熱量飲食、受限制的飲食或預(yù)計(jì)重量減輕的起始而導(dǎo)致的損失代謝率的風(fēng)險(xiǎn)。代謝率的保持是，與在基本相似或相同的條件下，在相同時(shí)間段內(nèi)其他方面相同的未施用抗肥胖劑組合的受試者對(duì)熱量或其他熱量來(lái)源的利用水平相比，受試者在所述時(shí)間段內(nèi)對(duì)熱量或另一種能量來(lái)源的利用水平的維持。在一方面，代謝率維持在在導(dǎo)致代謝率降低這一事件起始之前的受試者代謝率的15％內(nèi)。在其他方面，代謝率維持在受試者代謝率的10％以內(nèi)、7％以內(nèi)、5％以內(nèi)、3％或更低以內(nèi)。在一方面，在熱量降低的飲食、受限制的飲食或運(yùn)動(dòng)方案開(kāi)始時(shí)施用抗肥胖劑組合。
可以采用任何可以用于測(cè)定這樣的速率方法來(lái)估定代謝率，例如通過(guò)使用呼吸熱量計(jì)。這樣的用于測(cè)定代謝率的方法和裝置是本領(lǐng)于已知的，且描述于，例如，第4,572,208、4,856,531、6,468,222、6,616,615、6,013,009和6,475,158號(hào)美國(guó)專利中。作為選擇，動(dòng)物的代謝率可通過(guò)測(cè)量動(dòng)物在限定飲食階段后所分解代謝的無(wú)脂肪組織對(duì)脂肪組織的量來(lái)估定。因此，總體重和脂肪含量可以在限定飲食階段結(jié)束時(shí)測(cè)量。在大鼠中，常用于測(cè)定總身體脂肪的方法是用外科手術(shù)方法取出腹膜后脂肪墊，位于后腹壁以及后壁腹膜之間區(qū)域后腹膜(retroperitoneum)中的脂肪體并稱重。該墊的重量被認(rèn)為與動(dòng)物的百分比身體脂肪直接相關(guān)。由于大鼠的體重與身體脂肪間的關(guān)系是線性的，所以肥胖動(dòng)物具有相應(yīng)較高的百分比身體脂肪以及腹膜后脂肪墊重量。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種通過(guò)降低受試者代謝率來(lái)降低脂肪量的方法，其中的方法包括施用抗肥胖劑組合，所述組合的量能夠有效地通過(guò)提高受試者的代謝率來(lái)降低脂肪量。脂肪量可以總體重的百分?jǐn)?shù)表示。在一些方面，脂肪量在治療過(guò)程中被減少至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。在一方面，受試者的無(wú)脂肪組織在治療過(guò)程中不降低。在另一方面，受試者的無(wú)脂肪組織在治療過(guò)程中得以保持或者提高。在另一方面，受試者正接受降低的熱量飲食或者受限制的飲食?！敖档偷臒崃匡嬍场币庵福c相同受試者的正常飲食相比，受試者每天攝食更少的熱量。在一種情況中，受試者每天少消耗至少50卡路里。在其它情況中，受試者每天少消耗至少100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900或1000卡路里。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，提供了一種改變受試者中脂肪分布的方法，該方法包括施用抗肥胖劑組合，所述組合的量能夠有效地改變受試者的脂肪分布。在一方面，這一改變?cè)从谑茉囌叩膬?nèi)臟或異位脂肪或者這兩者的代謝的提高。在一些實(shí)施方案中，該方法涉及內(nèi)臟或異位脂肪或二者的代謝率比皮下脂肪代謝率高至少約5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。在一方面，這些方法導(dǎo)致令人滿意的脂肪分布。在一種實(shí)施方案中，令人滿意的脂肪分布是皮下脂肪與內(nèi)臟脂肪、異位脂肪或這兩者的比率提高。在一方面，該方法涉及由，例如，肌細(xì)胞量的提高導(dǎo)致的瘦體重的提高。
在另一種實(shí)施方案中，提供了降低受試者皮下脂肪量的方法，其中所述方法包括向有此需求的受試者施用抗肥胖劑組合，所述組合的量能夠有效降低受試者的皮下脂肪的量。在一種情況中，受試者的皮下脂肪量減少至少約5％。在其它情況下，與施用抗肥胖劑之前的受試者相比，皮下脂肪量減少至少約10％、15％、20％、25％、30％40％或50％。
本文中所描述的方法可用于減少受試者的內(nèi)臟脂肪量。在一種情況下，受試者的內(nèi)臟脂肪量減少至少約5％。在其它情況下，與施用抗肥胖劑組合之前的受試者相比，受試者的內(nèi)臟脂肪減少至少約10％、15％、20％、25％、30％40％或50％。內(nèi)臟脂肪可通過(guò)任何可獲得的測(cè)定受試者內(nèi)臟脂肪量的方法來(lái)測(cè)量。這樣的方法包括，例如，借助CT掃描和MRI的腹部體層攝影術(shù)。例如，第6,864,415、6,850,797和6,487,445號(hào)美國(guó)專利中描述了測(cè)定內(nèi)臟脂肪的其他方法。
在一種實(shí)施方案中，提供了預(yù)防異位脂肪累積或減少受試者中異位脂肪量的方法，其中所述方法包括向有此需求的受試者施用抗肥胖劑組合，所述組合的量能夠有效預(yù)防異位脂肪累積或減少受試者中的異位脂肪的量。在一種情況下，與施用抗肥胖劑組合之前的受試者相比，受試者的異位脂肪量減少至少約至少約5％。在其它情況下，受試者的異位脂肪量減少至少約10％或至少約15％、20％、25％、30％40％或50％。作為選擇，與受試者的皮下脂肪相比，異位脂肪的量按比例減少5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％?？梢杂每色@得的任何測(cè)量異位脂肪的方法來(lái)測(cè)量受試者中的異位脂肪。
在另一種實(shí)施方案中，提供了在受試者中產(chǎn)生更令人滿意的脂肪分布的方法，所述方法包括向受試者施用抗肥胖劑組合，所述組合的量能有效地產(chǎn)生令人滿意的脂肪分布。在一種實(shí)施方案中，抗肥胖劑組合的施用減少受試者中內(nèi)臟脂肪或異位脂肪或這二者的量。例如，抗肥胖劑組合的施用，其中至少一種作用于前腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑與至少一種作用于后腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑組合施用。在一種實(shí)施方案中，與減少皮下脂肪相比，該方法優(yōu)選減少內(nèi)臟或異位脂肪或這二者組合的量。這樣的方法導(dǎo)致產(chǎn)生更高的皮下脂肪與內(nèi)臟脂肪或異位脂肪的比率。這樣的提高的比率可導(dǎo)致心血管疾病，多囊性卵巢綜合征，代謝綜合征或其任意組合的發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)降低。在一種實(shí)施方案中，異位或內(nèi)臟脂肪比皮下脂肪的代謝率高5％。在其它實(shí)施方案中，異位或內(nèi)臟脂肪比皮下脂肪的代謝率高至少10％、15％、20％、25％、30％50％、60％、70％、80％、90％或100％。
在另一方面，本發(fā)明的方法包括使用與糖皮質(zhì)類固醇組合施用的治療有效量的抗肥胖劑組合。糖皮質(zhì)類固醇有提高脂肪量和減少無(wú)脂肪組織的副作用。因此預(yù)期，抗肥胖劑組合可在糖皮質(zhì)類固醇使用有益的條件下與糖皮質(zhì)類固醇聯(lián)合施用。
還提供了降低病態(tài)肥胖受試者體重的方法，該方法通過(guò)首先將受試者體重降低至病態(tài)肥胖以下的水平，再向受試者施用有效量的抗肥胖劑組合以進(jìn)一步降低受試者體重來(lái)實(shí)現(xiàn)。將受試者體重降低至病態(tài)肥胖以下的方法包括，減少熱量攝入、增強(qiáng)身體活動(dòng)、藥物治療、比如胃旁路外科手術(shù)這樣的肥胖癥治療外科手術(shù)、或前述方法的任意組合。在一方面，施用抗肥胖劑組合可進(jìn)一步減輕受試者體重。在另一種實(shí)施方案中，提供了降低體重指數(shù)為40或更低的受試者的體重指數(shù)的方法，其通過(guò)施用有效量的抗肥胖劑組合來(lái)進(jìn)一步降低受試者的體重來(lái)實(shí)現(xiàn)。
減輕體重，意指，受試者在治療過(guò)程中喪失他/她的部分總體重，無(wú)論該治療過(guò)程是數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月還是數(shù)年。作為選擇，減輕體重可被定義為脂肪量與無(wú)脂肪組織之比的降低(換言之，受試者損失了脂肪量，但維持或增加了無(wú)脂肪組織，并不必定對(duì)應(yīng)總體重的損失)。該實(shí)施方案中組合施用的有效量的抗肥胖劑是在治療過(guò)程中有效降低受試者體重的量，或作為選擇是在治療過(guò)程中有效降低受試者的脂肪量百分?jǐn)?shù)的量。在特定實(shí)施方案中，治療過(guò)程中受試者的體重減少了至少約1％、至少約5％、至少約10％、至少約15％或至少約20％。作為選擇，在治療過(guò)程中，受試者的脂肪量百分?jǐn)?shù)降低了至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。
在特定實(shí)施方案中，降低受試者營(yíng)養(yǎng)物利用率，例如，降低受試者體重的方法包括一日內(nèi)向受試者施用一次或多次有效量的單次給藥量(bolus dose)抗肥胖劑。單次給藥量是間歇式的藥物劑量(與連續(xù)輸注相反)。受試者可每日施用一個(gè)或多個(gè)單次給藥量。單次給藥量可以是相同的，無(wú)論其什么時(shí)候向受試者施用，或者可進(jìn)行調(diào)節(jié)從而使得在一天當(dāng)中的特定次與其他次相比施用更大的單次給藥量。以特定的制劑施用試劑，例如持續(xù)釋放制劑，單次給藥量可施用得不那么頻繁，例如，每三天一次、每周一次、每月兩次、每月一次。此外，單次給藥量間的時(shí)間優(yōu)選足夠長(zhǎng)以允許所施用的在之前的單次給藥量中的藥物從受試者血流中清除。
在其它實(shí)施方案中，降低受試者營(yíng)養(yǎng)物利用率，例如，降低受試者體重的方法包括向受試者施用有效量的連續(xù)給藥的抗肥胖劑。連續(xù)給藥，欲意指藥物通過(guò)，例如靜脈注射或經(jīng)皮貼劑的連續(xù)輸注。作為選擇，連續(xù)給藥可以以受控釋放膠囊或片劑的形式經(jīng)口施用，所述膠囊或片劑在一段時(shí)間內(nèi)將藥物釋放入受試者的系統(tǒng)。當(dāng)以連續(xù)給藥施用時(shí)，藥物在約1小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)釋放，在一些情況下，藥物在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)釋放。
“組合施用”意指，抗肥胖劑以單次施用、作為分離劑次同時(shí)施用或順序施用。順序施用指，在施用一種抗肥胖劑之前或之后施用抗肥胖劑之一。在一種實(shí)施方案中，第一種抗肥胖劑在至少一種其他抗肥胖劑之前或之后約30分鐘施用，在其它實(shí)施方案中在至少一種其他抗肥胖劑之前或之后約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時(shí)施用。任一種所施用的抗肥胖劑均可以以單次給藥量或連續(xù)給藥施用。
本發(fā)明還涉及提高受試者產(chǎn)熱的方法，該方法包括向有此需求的受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。產(chǎn)熱是通過(guò)提高身體代謝率來(lái)將熱量以熱的形式釋放的過(guò)程。產(chǎn)熱由包括補(bǔ)充、營(yíng)養(yǎng)、運(yùn)動(dòng)和暴露于冷中在內(nèi)的機(jī)制激活。
本發(fā)明還涉及提高受試者氧化代謝的方法，該方法包括向有此需要的受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。氧化代謝是利用氧從碳水化合物(糖)產(chǎn)生能量的過(guò)程。
在另一方面，提供了誘導(dǎo)受試者豐滿感的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在另一方面，提供了控制受試者饑餓的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在又一方面，提供了延長(zhǎng)受試者飽滿感的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在又一方面，提供了通過(guò)減少膳食量來(lái)降低熱量攝入的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在另一方面，提供了控制食物攝入的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在又一方面，提供了保證或幫助與降低熱量的或受限制的飲食一致的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在又一方面，提供了調(diào)節(jié)受試者的調(diào)定點(diǎn)從而使身體的穩(wěn)態(tài)傾向調(diào)節(jié)至一個(gè)更健康的調(diào)定點(diǎn)的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。
在又一方面，提供了維持體重減輕或者維持體重喪失(weightlost)的方法，其中所述方法包括向所述受試者組合施用有效量的至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑。在本發(fā)明該方面的一種實(shí)施方案中，通過(guò)重新設(shè)置受試者的調(diào)定點(diǎn)來(lái)維持體重減輕。
此外，在特定實(shí)施方案中，抗肥胖劑的組合施用在本文所述的任意方法中產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。此外，在特定實(shí)施方案中，抗肥胖劑的組合施用導(dǎo)致對(duì)至少一種試劑的更低劑量需求而具有相同的作用。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法可用于治療和/或預(yù)防受益于營(yíng)養(yǎng)物利用率降低的代謝狀況或病癥。因此，這些方法可用于治療和/或預(yù)防肥胖、糖尿病(例如，2型或非胰島素依賴性糖尿病，1型糖尿病，和妊娠糖尿病)、進(jìn)食障礙疾患、胰島素抵抗綜合征和心血管疾病。
在一種實(shí)施方案中，提供了在受試者中改變受試者脂肪分布、降低脂肪量或這二者的方法。因此，對(duì)于改變身體組成是有益的受試者來(lái)說(shuō)，他們也可受益于本發(fā)明的方法。如本文中所欲意指的，改變的身體組成包括身體脂肪的損失或維持，以及瘦體重?fù)p失的最小化、維持或獲得。在這樣的情形中，體重可以增加也可以減少。因此，根據(jù)這些術(shù)語(yǔ)在本領(lǐng)域通常所使用的，受試者可以是瘦弱的、超重的或者肥胖的。本發(fā)明的方法還包括減少非脂肪組織中的脂肪而不損害無(wú)脂肪組織。該方法的用途包括治療比如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或脂肪營(yíng)養(yǎng)不良這樣的疾病。
本文所述方法利用至少一種作用于前腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑和至少一種作用于后腦中參與食物攝入、體重調(diào)節(jié)或這二者的結(jié)構(gòu)的抗肥胖劑的組合施用來(lái)控制、預(yù)防和/或治療這樣的狀況或病癥。
在另一方面，提供了通過(guò)施用作用于前腦和后腦的試劑來(lái)刺激食物攝入、促進(jìn)體重增加或這二者的方法。在這樣的方法中，組合地且以刺激受試者食物攝入、促進(jìn)受試者體重增加或這二者的有效量向受試者施用重量誘導(dǎo)劑。這些方法尤其對(duì)諸如惡病質(zhì)和食欲缺乏以及其他以喪失食欲、食物攝入減少、以及受試者體重減輕為特征的消耗性疾病這樣的疾病和病癥有益。示例性的重量誘導(dǎo)劑包括NPY1受體激動(dòng)劑、NPY5受體激動(dòng)劑、苗條蛋白拮抗劑、MCH激動(dòng)劑、MC4拮抗劑、大麻素受體激動(dòng)劑、5-HT2C拮抗劑、毒蜥外泌肽拮抗劑、GLP-1拮抗劑、生長(zhǎng)素釋放肽激動(dòng)劑、CCK拮抗劑和淀粉狀蛋白毒素拮抗劑。因此，一種實(shí)施方案提供了刺激有此需要的受試者食物攝入、促進(jìn)有此需要的受試者體重增加或這二者的方法，該方法包括向所述受試者施用至少兩種或更多種重量誘導(dǎo)劑。
關(guān)于重量誘導(dǎo)劑的施用，重量誘導(dǎo)劑以單次施用，作為分離的劑次的同時(shí)施用，或順序施用。在使用分離的劑量制劑時(shí)，單個(gè)重量誘導(dǎo)劑可在基本相同的時(shí)間(也即，并行)施用，或單獨(dú)地交錯(cuò)的時(shí)間，例如，在施用該方法的另一種重量誘導(dǎo)劑之前或之后順序施用。在一種實(shí)施方案中，第一種重量誘導(dǎo)劑在至少一種其他重量誘導(dǎo)劑之前或之后約30分鐘施用，在其它實(shí)施方案中在至少一種其他重量誘導(dǎo)劑之前或之后約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時(shí)施用。在一些實(shí)施方案中，組合施用涉及以重疊的時(shí)間間隔施用分離的劑量制劑。例如，重量誘導(dǎo)劑1自第1天至第30天施用，且重量誘導(dǎo)劑2自第20天至第50天施用。在其它實(shí)施方案中，組合施用涉及以順序的、非重疊的時(shí)間間隔施用分離的劑量制劑。例如，重量誘導(dǎo)劑1自第1天至第30天施用，且重量誘導(dǎo)劑2自第35天至第50天施用。本發(fā)明由此被理解為包括所有這樣的在整個(gè)治療過(guò)程中同時(shí)、交替或完全分離的治療方案。所施用的任一種重量誘導(dǎo)劑均可以單次給藥量或連續(xù)給藥施用。
此外，在特定實(shí)施方案中，重量誘導(dǎo)劑的組合施用在本發(fā)明的任一方面導(dǎo)致協(xié)同效應(yīng)。此外，在特定實(shí)施方案中，重量誘導(dǎo)劑的組合施用導(dǎo)致對(duì)至少一種試劑的更低劑量需求而具有相同的作用。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑包括苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、重組苗條蛋白和苗條蛋白激動(dòng)劑。苗條蛋白(源自希臘文leptos，意指瘦)是一種主要由脂肪細(xì)胞產(chǎn)生的激素。在肥胖人中，苗條蛋白血液水平通常與身體中所存儲(chǔ)的脂肪量相關(guān)。通常，脂肪量越大，苗條蛋白的量就越大。大多數(shù)肥胖人中的血清苗條蛋白水平濃度是高的，并認(rèn)為存在苗條蛋白抗性狀態(tài)(Mantzoros等人(2000)J.Clin.Endocrinol.Metab.854000-4002)。盡管有治療性嘗試使用苗條蛋白來(lái)治療肥胖，但是重組人苗條蛋白的效果卻在使肥胖個(gè)體減輕體重中受到限制(如果存在限制的話)。其例外包括對(duì)先天性苗條蛋白缺陷個(gè)體的治療和對(duì)皮下脂肪萎縮個(gè)體的治療。參見(jiàn)，例如，Heymsfield等人(1999)JAMA 2821568-1575，F(xiàn)arooqi等人(1999)N.Engl.J.Med.341879-884，和第2005/0020496號(hào)美國(guó)專利公開(kāi)。
在特定實(shí)施方案中，苗條蛋白以替代療法的形式施用，從而實(shí)現(xiàn)在血漿中接近生理苗條蛋白濃度。據(jù)估計(jì)，苗條蛋白的生理替換劑量對(duì)所有年齡的男性為約0.02mg/kg體重每天，對(duì)18歲以下的女性為約0.03mg/kg體重每天，對(duì)成年女性為約0.04mg/kg體重每天。當(dāng)嘗試實(shí)現(xiàn)接近苗條蛋白生理濃度時(shí)，人們可以，例如，在第一個(gè)月的治療中用50％的估計(jì)替代劑量，在第二個(gè)月的治療中用100％的替代劑量，在第三個(gè)月的治療中用200％的替代劑量，等來(lái)治療受試者。血清苗條蛋白水平可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)測(cè)量，包括，例如，用商業(yè)可獲得免疫測(cè)定。
本發(fā)明的一個(gè)方面是，通過(guò)比如施用淀粉狀蛋白毒素來(lái)治療苗條蛋白抗性這樣的方法來(lái)減少脂肪。一旦苗條蛋白抗性得到改善(減輕)，就可施用苗條蛋白來(lái)進(jìn)一步治療肥胖。
適用于本發(fā)明所述方法的苗條蛋白和包含苗條蛋白的組合物是本領(lǐng)域已知的，且包括，但不限于重組人苗條蛋白(PEG-OB，HoffmanLa Roche)和重組甲硫氨酰人苗條蛋白(Amgen)。苗條蛋白、類似物、衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑之前已經(jīng)在以下專利公開(kāi)文本中作過(guò)描述，這些文獻(xiàn)在此全文引入作為參考第5,552,524、5,552,523、5,552,522、5,521,283號(hào)美國(guó)專利；和第WO96/05309、WO 96/40912、WO 97/06816、WO 00/20872、WO 97/18833、WO 97/38014、WO 98/08512和WO 98/284427號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本。
苗條蛋白激動(dòng)劑和拮抗劑是本領(lǐng)域已知的，并可以通過(guò)在專利數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到。例如，苗條蛋白激動(dòng)劑描述于第2004/0072219、2003/049693、2003/0166847、2003/0092126號(hào)美國(guó)專利公開(kāi)文本和第6,777,388和6,936,439號(hào)美國(guó)專利中。苗條蛋白拮抗劑描述于第2004/0048773、2002/0160935號(hào)美國(guó)專利公開(kāi)文本和第6,399,745號(hào)美國(guó)專利中。測(cè)試苗條蛋白激動(dòng)作用和拮抗作用的方法描述于第6,007,998和5,856,098號(hào)美國(guó)專利中。這些專利是示例性的，且全文引入本文作為參考。
可用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括淀粉狀蛋白毒素和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑。淀粉狀蛋白毒素是一種37氨基酸的肽激素，其響應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物刺激與胰島素共同分泌自胰腺β細(xì)胞。人淀粉狀蛋白毒素(h淀粉狀蛋白毒素)具有以下氨基酸序列
Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO1)。大鼠淀粉狀蛋白毒素(r淀粉狀蛋白毒素)具有以下序列KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ IDNO2)。預(yù)期可使用任何物種來(lái)源的淀粉狀蛋白毒素。
已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，比如通過(guò)使用淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑和淀粉狀蛋白毒素拮抗劑來(lái)調(diào)節(jié)有效的體內(nèi)淀粉狀蛋白毒素水平，可調(diào)節(jié)體內(nèi)的有效生長(zhǎng)素釋放肽水平。
預(yù)期在本發(fā)明中使用的淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑包括描述于第5,686,411、6,114,304和6,410,511號(hào)美國(guó)專利中的那些，這些專利全文引入本文作為參考。這樣的化合物包括具有式I的那些1A1-X-Asn-Thr-5Ala-Thr-Y-Ala-Thr-10Gln-Arg-Leu-B1-Asn-15Phe-Leu-C1-D1-E1-20F1-G1-Asn-H1-Gly-25I1-J1-Leu-K1-L1-30Thr-M1-Val-Gly-Ser-35Asn-Thr-Tyr-Z(SEQ ID NO3)其中A1是Lys、Ala、Ser或氫；B1是Ala、Ser或Thr；C1是Val、Leu或Ile；D1是His或Arg；E1是Ser或Thr；F1是Ser、Thr、Gln或Asn；G1是Asn、Gln或His；H1是Phe、Leu或Tyr；I1是Ala或Pro；J1是Ile、Val、Ala或Leu；K1是Ser、Pro、Leu、Ile或Thr；L1是Ser、Pro或Thr；M1是Asn、Asp、或Gln；X和Y是獨(dú)立選擇的帶有側(cè)鏈的氨基酸殘基，所述側(cè)鏈彼此間化學(xué)鍵合從而形成分子內(nèi)連接；和Z是氨基、烷基氨基、二烷基氨基、環(huán)烷基氨基、芳氨基、芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基(aralkyloxy)。
X和Y的適宜側(cè)鏈包括衍生自可形成二硫鍵的烷基硫醇的基團(tuán)；可形成環(huán)內(nèi)酰胺的烷基酸和烷基胺；可縮合和還原以形成烷基胺橋的烷基醛或烷基鹵化物和烷基胺；或可相連以形成烷基、鏈烯基、炔基、醚或硫醚鍵的側(cè)鏈。優(yōu)選的烷基鏈包括具有約1至約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基基團(tuán)。
本發(fā)明的又一方面涉及未橋化的SEQ ID NO3的激動(dòng)劑類似物，且其中X和Y獨(dú)立地選自Ala、Ser、Cys、Val、Leu和Ile或Ser或Cys的烷基、芳基、或芳烷基酯和醚。
上述激動(dòng)劑類似物的生物學(xué)活性衍生物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，其中單獨(dú)的氨基酸的立體化學(xué)可在一個(gè)或多個(gè)特定位點(diǎn)從(L)/S轉(zhuǎn)化為(D)/R。
還包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是Asn、Ser和/或Thr殘基經(jīng)過(guò)糖基化修飾的激動(dòng)劑類似物。
包含較少肽特征的淀粉狀蛋白毒素的生物學(xué)活性激動(dòng)劑類似物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。這樣的肽模擬物包括，例如，--CO--NH--酰胺鍵的以下一種或多種取代酯肽(--CO--O--)，亞氨基亞甲基(--CH2--NH--)，反式烯(trans-alkenes)(--CH＝CH--)，β-烯胺腈(beta-enaminonitriles)(--C(＝CH--CN)--NH--)，硫代酰胺(--CS--NH--)，硫代亞甲基(--S--CH2--或--CH2--S--)，亞甲基(--CH2--C2--)和逆酰胺(retro-amide)(--NH--CO--)。
本發(fā)明的化合物與各種無(wú)機(jī)和有機(jī)酸和堿形成鹽。這樣的鹽包括用有機(jī)和無(wú)機(jī)酸，例如，HCl、HBr、H2SO4、H3PO4、三氟乙酸、乙酸、甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸、馬來(lái)酸、延胡索酸和樟腦磺酸，制備的鹽。用堿制備的鹽包括，例如，銨鹽、堿金屬鹽(比如鈉鹽和鉀鹽)和堿土鹽(比如鈣和鎂鹽)。乙酸鹽、鹽酸鹽和三氟乙酸鹽為優(yōu)選的。
整個(gè)申請(qǐng)中，氨基酸序列可用與參照肽毗連的位置a至位置b的氨基酸來(lái)表示。例如，1-7h淀粉狀蛋白毒素指人淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO1)(本例中的參照肽)中從位置1至位置7(包括在內(nèi))的氨基酸序列。對(duì)參照肽的修飾可用與修飾毗連的修飾的位置來(lái)表示。例如，(2Asp 7Lys)1-7 h淀粉狀蛋白毒素表示，在位置2帶有Cys變?yōu)锳sp和在位置7處帶有Cys變?yōu)長(zhǎng)ys的修飾的人淀粉狀蛋白毒素中位置1至7的氨基酸序列。對(duì)于另一個(gè)例子，18Arg25，28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素表示在位置18處帶有His變?yōu)锳rg的修飾、在位置25處帶有Ala變?yōu)镻ro的修飾以及在位置28處帶有Ser變?yōu)镻ro的修飾的人淀粉狀蛋白毒素的氨基酸序列。
示例性的化合物包括，但不限于des-1Lys-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO4)、28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO5)、25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO6)、18Arg25，28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO7)和des-1Lys18Arg25，28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO8)，所有都在被治療的測(cè)試動(dòng)物中均顯示淀粉狀蛋白毒素活性(例如，激起顯著的hyperlactemia，隨后為高血糖癥)。除具有淀粉狀蛋白毒素活性特征外，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明特定的優(yōu)選化合物與人淀粉狀蛋白毒素相比時(shí)具有更令人滿意的溶解性和穩(wěn)定性特征。這些化合物的例子包括25Pro26Val28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO9)、25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO10)和18Arg25，28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO7)。
其他的化合物包括18Arg25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ IDNO11)、des-1Lys18Arg25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ IDNO12)、des-1Lys25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO13)、25Pro26Val28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO14)、23Leu25Pro26Val28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO15)、23Leu25Pro26Val28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO16)、des-1Lys23Leu25Pro26Val28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO17)、18Arg23Leu25Pro26Val28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO18)、18Arg23Leu25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO19)、18Arg23Leu25，28Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO20)、17Ile23Leu25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO21)、17Ile25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO22)、des-1Lys17Ile23Leu25，28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO23)、17Ile18Arg23Leu-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO24)、17Ile18Arg23Leu26Val29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO25)、17Ile18Arg23Leu25Pro26Val28，29Pro-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ IDNO26)、13Thr21His23Leu26Ala28Leu29Pro31Asp-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO27)、13Thr21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO28)、des-1Lys13Thr21His23Leu26Ala28Pro31Asp-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO29)、13Thr18Arg21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ IDNO30)、13Thr18Arg21His23Leu28，29Pro31Asp-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQID NO31)和13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28，29Pro31Asp-h-淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO32)。
有用的淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑類似物包括在第WO 93/10146號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本中鑒定的那些，該公開(kāi)文本的內(nèi)容引入本文作為參考。
用于本發(fā)明的淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑還包括淀粉狀蛋白毒素片段及其如上述的以及EP 289287(其內(nèi)容引入本文作為參考)中描述的那些類似物。淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑可以是與具有淀粉狀蛋白毒素活性的SEQ ID NO1具有至少60、65、70、75、80、85、90、95或99％氨基酸序列同一性的化合物。淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑還包括小分子、非肽分子，例如基于小分子化學(xué)的那些。如本文所使用的“淀粉狀蛋白毒素活性”包括淀粉狀蛋白毒素影響身體內(nèi)生長(zhǎng)素釋放肽水平的能力。淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑還包括在SEQ ID NO1的至少一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置具有插入、缺失、延伸和/或取代的淀粉狀蛋白毒素的類似物。氨基酸插入、缺失或取代的數(shù)目不超過(guò)5、10、15、20、25或30。插入、延伸或取代可以是用其他的天然氨基酸、合成氨基酸、肽模擬物或其他的化合物進(jìn)行的。淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，如本發(fā)明中所預(yù)期的，還可以是降鈣素，比如硬骨魚(yú)降鈣素，及其類似物，以及降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)及其類似物。
淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑還包括第60/543,275號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)和2005年2月11日提交的第PCT/US2005/004631號(hào)PCT申請(qǐng)(各引入本文作為參考)中描述的多肽(本文中稱為L(zhǎng)HC(環(huán)螺旋C-末端)肽)及其類似物和衍生物。用于本發(fā)明的LHC肽作為本文所公開(kāi)的降鈣素、淀粉狀蛋白毒素、CGRP或這三種的任意組合的至少一種生物學(xué)作用的激動(dòng)劑起作用，或與淀粉狀蛋白毒素、降鈣素或CGRP受體的至少一種結(jié)合。示例性LHC肽的受體結(jié)合活性和生物學(xué)活性描述于第60/543,275號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)和第PCT/US2005/004631號(hào)PCT申請(qǐng)中。在一個(gè)總的方面，這些多肽激動(dòng)劑具有淀粉狀蛋白毒素或降鈣素及其類似物的至少環(huán)區(qū)域、降鈣素或其類似物α螺旋區(qū)域的至少部分的α螺旋區(qū)域，或具有淀粉狀蛋白毒素α螺旋區(qū)域和降鈣素α螺旋區(qū)域或其各自類似物的部分的α螺旋區(qū)域，和淀粉狀蛋白毒素或降鈣素或其類似物的C-末端尾部，附帶條件是降鈣素或降鈣素類似物的C-末端尾部不是脯氨酸(Pro)、羥脯氨酸(Hyp)、高絲氨酸(Hse)或Hse的衍生物。
在特定實(shí)施方案中，這些LHC肽具有淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物環(huán)區(qū)域，至少部分的降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域和淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物C-末端尾部。在其它實(shí)施方案中，這些LHC肽具有降鈣素或降鈣素類似物環(huán)區(qū)域，至少部分的降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域和淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物C-末端尾部。在其他實(shí)施方案中，這些LHC肽具有淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物環(huán)區(qū)域，至少部分的淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物α螺旋區(qū)域和至少部分的降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域和淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物C-末端尾部。仍在其他實(shí)施方案中，這些LHC肽具有降鈣素或降鈣素類似物環(huán)區(qū)域，至少部分的淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物α螺旋區(qū)域和至少部分的降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域和淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物C-末端尾部。仍在其他實(shí)施方案中，這些LHC肽具有淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物環(huán)區(qū)域、部分或降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域或至少部分的淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物α螺旋區(qū)域和至少部分的降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域，和降鈣素或降鈣素類似物C-末端尾部。
在特定實(shí)施方案中，這些LHC肽的環(huán)區(qū)域還包含不超過(guò)一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)修飾，所述修飾包括來(lái)自于淀粉狀蛋白毒素或降鈣素環(huán)及其類似物的取代、插入或缺失。還預(yù)期，這些LHC肽可在包含N-帽區(qū)域的環(huán)的N-末端部分具有其他修飾，所述修飾可具有疏水或親水特征，比如乙酰基、異己?；?isocaproyl)、3，6-二羥基辛酸(3，6-dioxyoctanoic acid)或1-氨基-4，7，10-三氧雜-13-十三胺琥珀酰亞胺酸(succinimic acid)。修飾還可包括一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)附加氨基酸。這是允許多得不能悉數(shù)提及，但是可以被本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本申請(qǐng)中進(jìn)一步的舉例來(lái)理解的許多修飾的區(qū)域。
這些LHC肽還可通過(guò)，比如，比如酰胺化、糖基化、酰化、硫酸鹽化、磷酸化、乙?；铜h(huán)化作用這樣的化學(xué)改變進(jìn)行衍生化。這樣的化學(xué)改變可通過(guò)化學(xué)或者生物化學(xué)方法、以及通過(guò)體內(nèi)過(guò)程、或者其任意組合得到。這些LHC肽的衍生物還包括與一種或多種聚合物或小分子取代基的綴合。一種類型的聚合物綴合是聚乙二醇(“PEG”)聚合物、聚氨基酸(例如，聚組氨酸、聚精氨酸、聚賴氨酸等)和/或各種長(zhǎng)度的脂肪酸鏈與多肽的N-或C-末端或氨基酸殘基側(cè)鏈的連接或附著。小分子取代基包括短烷基和約束的(constrained)烷基(例如，分支的、環(huán)化的、稠合的、金剛烷基(adamantyl))和芳族基團(tuán)。此外，比如R和K這樣的堿性殘基可以用homoR和homoK、瓜氨酸或鳥(niǎo)氨酸取代以改善肽的代謝穩(wěn)定性。用于本發(fā)明的多肽包括酸以及酰胺形式。
在特定實(shí)施方案中，LHC肽的α螺旋區(qū)域包含降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域的至少四個(gè)連續(xù)的氨基酸。在其他實(shí)施方案中，該α螺旋區(qū)域包含降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域的至少5、6、7或8個(gè)連續(xù)氨基酸。在其它實(shí)施方案中，該α螺旋區(qū)域包含降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或更多個(gè)連續(xù)氨基酸。在特定實(shí)施方案中，當(dāng)連續(xù)氨基酸的數(shù)目少于8時(shí)，預(yù)期該α螺旋區(qū)域還包含淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物α螺旋區(qū)域的至少4、5、6、7、9、10、11或更多個(gè)氨基酸。在特定實(shí)施方案中，設(shè)想該新化合物α螺旋區(qū)域中可發(fā)現(xiàn)更少的降鈣素或降鈣素類似物的氨基酸和更多的淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物的氨基酸。構(gòu)成α螺旋區(qū)域的氨基酸數(shù)目可為約10至23個(gè)氨基酸。因此，該α螺旋區(qū)域可以為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23個(gè)氨基酸長(zhǎng)。此外，這些氨基酸應(yīng)當(dāng)提供約3至約6個(gè)α螺旋轉(zhuǎn)角。還預(yù)期，這些化合物的α螺旋區(qū)域還包含不超過(guò)一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個(gè)包括來(lái)自降鈣素和/或淀粉狀蛋白毒素α螺旋區(qū)域及其類似物的取代、插入或缺失的修飾。
在特定實(shí)施方案中，LHC肽的C-末端尾部包含淀粉狀蛋白毒素或降鈣素及其類似物的至少最后六個(gè)、五個(gè)或四個(gè)氨基酸。在特定實(shí)施方案中，該新化合物的C-末端尾部包含至少部分帶有β轉(zhuǎn)角的C-末端。在特定實(shí)施方案中，該β轉(zhuǎn)角通過(guò)氨基酸組合Gly-Ser導(dǎo)入。因此，該LHC肽可具有包含部分帶有Gly-Ser或起始于Gly-Ser的淀粉狀蛋白毒素或降鈣素C-末端尾部(及其類似物)的C-末端。
在特定實(shí)施方案中，LHC肽的該C-末端尾部還包含不超過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)包括來(lái)自淀粉狀蛋白毒素或降鈣素環(huán)及其類似物的取代、插入或缺失的修飾。還預(yù)期，該LHC肽可在C-末端尾部的C-末端部分帶有其他修飾，這些修飾包括，例如，L-辛基甘氨酸、4ABU(4-氨基丁酸)、9Anc(9氨基壬酸(9 amiononanoic acid))、3，6-二羥基辛酸或1-氨基-4，7，10-三氧雜-13-十三胺琥珀酰亞胺酸。修飾還可包括一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)其他的氨基酸。預(yù)期該區(qū)域中的修飾的類型可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本申請(qǐng)中進(jìn)一步的舉例來(lái)理解。
在一方面，環(huán)區(qū)域定義為，在N-末端發(fā)現(xiàn)的包含至少5至8個(gè)氨基酸的區(qū)域，其中第一個(gè)和最后一個(gè)氨基酸能夠形成鍵，例如，淀粉狀蛋白毒素的第2-7位的殘基或降鈣素的第1-7位的殘基以及其各自的類似物的相應(yīng)區(qū)域。在另一方面，α螺旋區(qū)域定義為，淀粉狀蛋白毒素或降鈣素中兩側(cè)為環(huán)區(qū)域和C-末端尾部的中間部分，其在結(jié)構(gòu)上形成α螺旋，例如，淀粉狀蛋白毒素的第8-23位的殘基或降鈣素的第8-27位的殘基以及其各自的類似物的相應(yīng)區(qū)域。在另一方面，C-末端尾部定義為α螺旋后的區(qū)域，例如，淀粉狀蛋白毒素第33-37位的殘基或更長(zhǎng)的比如第27-37位的殘基或降鈣素第27或28至32位的殘基。LHC肽中同時(shí)包括了所公開(kāi)的化合物的酰胺和酸形式。
如本文所定義的淀粉狀蛋白毒素和降鈣素包括所有天然的和物種變異。淀粉狀蛋白毒素和降鈣素的例子包括，但不限于人淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO1)、大鼠淀粉狀蛋白毒素(SEQ ID NO2)、鮭魚(yú)降鈣素(sCT)CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO33)和人降鈣素(hCT)CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP(SEQ IDNO34)。
在一個(gè)總的方面，該LHC肽包含至少環(huán)區(qū)域、α螺旋區(qū)域和C-末端尾部。該環(huán)區(qū)域包含一段包含式(II)X-Xaa1序列-Y的氨基酸序列，其中的X和Y能夠成鍵，且為獨(dú)立選擇的具有側(cè)鏈的殘基，所述側(cè)鏈彼此化學(xué)結(jié)合或能夠彼此化學(xué)結(jié)合以形成分子內(nèi)連接，比如例如二硫鍵；酰胺鍵；例如由烷基酸和烷基胺形成的環(huán)內(nèi)酰胺；例如，通過(guò)縮合和還原烷基醛或烷基鹵化物和烷基胺而形成的烷基胺或亞胺橋；和例如，通過(guò)側(cè)鏈的連接形成的烷基、鏈烯基、炔基、醚或硫醚鍵。烷基鏈可包括帶有約1至約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基基團(tuán)。在特定實(shí)施方案中，分子內(nèi)連接可以是二硫鍵、酰胺鍵、亞胺鍵、胺鍵、烷基鍵和烯鍵。在特定實(shí)施方案中，式(II)的X和Y獨(dú)立選自Ser、Asp、Glu、Lys、Orn(鳥(niǎo)氨酸)或Cys。在特定實(shí)施方案中，式(II)的X和Y是Cys和Cys。在其它實(shí)施方案中，式(II)的X和Y是Ser和Ser。仍在其他實(shí)施方案中，式(II)的X和Y是Asp和Lys或Lys和Asp。
式(II)的Xaa1序列包含介于X和Y之間的3、4、5或6個(gè)氨基酸的氨基酸序列。在特定實(shí)施方案中，該Xaa1序列包含氨基酸序列，該氨基酸序列具有帶有相鄰于Y的一個(gè)或多個(gè)取代或非取代的含羥基殘基的區(qū)域。例如，該含羥基殘基區(qū)域可具有相鄰于Y的3個(gè)氨基酸中的至少2個(gè)，其為Ser或Thr。Xaa1序列中的其他氨基酸可以是任何氨基酸。在特定實(shí)施方案中，Xaa1序列是3個(gè)氨基酸。在其它實(shí)施方案中，Xaa1序列是4個(gè)氨基酸。仍在其他的實(shí)施方案中，Xaa1序列是5個(gè)氨基酸。在又一其他實(shí)施方案中，Xaa1序列是6個(gè)氨基酸。因此，式(II)的Xaa1可用Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7(SEQ ID NO35)表示。在特定實(shí)施方案中，Xaa2、Xaa3、Xaa4、任意兩個(gè)或所有這三個(gè)都可以不存在。在特定實(shí)施方案中，Xaa5、Xaa6和Xaa7包含含羥基的殘基區(qū)域。同樣，三個(gè)氨基酸中的至少兩個(gè)可以是Ser、Hse、Thr、別蘇氨酸(alloThr)、d-蘇氨酸(d-Thr)、或其其他的非天然類似物。Xaa2可以是任何氨基酸或不存在，Xaa3可以是任何氨基酸或不存在，Xaa4可以是任何氨基酸或不存在，如果Xaa6是Ser或Thr且Xaa7是Ser或Thr則Xaa5可以是任何氨基酸，如果Xaa5是Ser或Thr且Xaa7是Ser或Thr則Xaa6可以是任何氨基酸，如果Xaa5是Ser或Thr且Xaa6是Ser或Thr則Xaa7可以是任何氨基酸。因此，在特定實(shí)施方案中，Xaa1可以表示為Xaa2不存在，Xaa3為Ala、Gly、Ser、Asp或不存在，Xaa4為Asn、Ala、Asp、Gly或不存在；Xaa5為Ala、Leu、Thr或Ser；Xaa6為Ala、Ser或Thr；且Xaa7為Ala、Ser、Val、Hse、(S)-2-氨基(amio)-3-羥基甲基丁酸(Ahb)、(2S，3R)-2-氨基-3羥基甲基戊酸(Ahp)、d-Thr、Thr或其衍生物。在其它實(shí)施方案中，Xaa1可表示為Xaa2不存在，Xaa3為Ser、Gly或不存在，Xaa4為Asn或Asp，Xaa5為Ala、Ser、Thr或Leu，Xaa6為Ala、Thr或Ser，且Xaa7為Ser、d-Thr、alloThr或Thr。在特定實(shí)施方案中，式(II)的環(huán)區(qū)域包括上述的Xaa1代表，其中Xaa3為Ala，其中Xaa3為Ser，或其中Xaa3為Gly。作為選擇或另外地，該環(huán)區(qū)域包括上述的Xaa1代表，其中Xaa4為Ala，其中Xaa4為Asn，其中Xaa4為Asp，或其中Xaa4為Gly。作為選擇或另外地，該環(huán)區(qū)域包括上述的Xaa1代表，其中Xaa5為Ala，其中Xaa5為Thr，或其中Xaa5為L(zhǎng)eu。作為選擇或另外地，該環(huán)區(qū)域包括上述的Xaa1代表，其中Xaa6為Ser，或其中的Xaa6為Ala。作為選擇或另外地，該環(huán)區(qū)域包括上述的Xaa1代表，其中Xaa7為Thr，或其中Xaa7為d-Thr。還預(yù)期，可對(duì)該環(huán)區(qū)域做不超過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生的修飾。
本發(fā)明的環(huán)區(qū)域例子包括，但不限于，CNTATC(SEQ IDNO36)；CATATC(SEQ ID NO37)；CDTATC(SEQ ID NO38)；CGTATC(SEQ ID NO39)；CNAATC(SEQ ID NO40)；CNTSTC(SEQ ID NO41)；CNTA-dThr-C(SEQ ID NO42)；CNTA-T(OPO3H2)-C(SEQ ID NO43)；CNTASC(SEQ ID NO44)；CNTAAC(SEQ ID NO45)；CNTAVC(SEQ ID NO46)；CNTA-Hse-C(SEQ ID NO47)；CNTA-Ahb-C(SEQ ID NO48)；CNTA-Ahp-C(SEQ ID NO49)；CSNLSTC(SEQ ID NO50)；CGNLSTC(SEQID NO51)；CANLSTC(SEQ ID NO52)；CSALSTC(SEQ IDNO53)；CSNASTC(SEQ ID NO54)；CSNLATC(SEQ ID NO55)；和CSNLSAC(SEQ ID NO56)。如前述指出的，還預(yù)期，可對(duì)該環(huán)區(qū)域做不超過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生的修飾。
LHC肽的環(huán)區(qū)域還可在N-末端包含修飾或附加的氨基酸。這樣的修飾包括添加比如Lys、Ala、Phe、Ile、Ser、辛基甘氨酸、Isocap、Fmoc-3，6-二羥基辛酸、Fmoc-1-氨基-4，7，10-三氧雜-13-十三胺琥珀酰亞胺酸、乙酰基、和/或用于溶解性、送遞、信號(hào)傳導(dǎo)的基團(tuán)這樣的化合物。示例性的修飾環(huán)包括向序列Xaa1添加Lys或向序列Xaa1添加Ile。例如，該修飾的環(huán)區(qū)域可以是KCNTATC(SEQ ID NO57)。在特定實(shí)施方案中，在環(huán)區(qū)域的N-末端的添加和/或修飾可改變?cè)摥h(huán)區(qū)域。例如，該環(huán)區(qū)域可作下述修飾環(huán)(2，7)1-7h淀粉狀蛋白毒素、環(huán)(2Asp7Lys)1-7h淀粉狀蛋白毒素、N-異己酰1-7h淀粉狀蛋白毒素、N-3，6二羥基辛酰1-7h淀粉狀蛋白毒素、L-辛基甘氨酸1-7h淀粉狀蛋白毒素、乙?；?2Agy，7Agy)1-7h淀粉狀蛋白毒素(其中Agy為烯丙基甘氨酸)、乙?；?1Ala)1-7h淀粉狀蛋白毒素、(1Thr3Asp)1-7h淀粉狀蛋白毒素、Isocap(7Ala)5-7 sCT、乙酰基(2Agy，7Agy)1-7sCT和環(huán)(1，7)(1Asp7Lys)1-7sCT。因此，以Isocap(7Ala)5-7sCT為例，特定的實(shí)施方案在環(huán)區(qū)域的N-末端區(qū)域包含修飾，由此氨基酸Xaa2至Xaa5為不存在。
LHC肽的α螺旋區(qū)域長(zhǎng)度可為約8至23個(gè)氨基酸。在特定實(shí)施方案中，α螺旋區(qū)域?yàn)殡p親的。在特定實(shí)施方案中，α螺旋區(qū)域包含約3至6個(gè)螺旋轉(zhuǎn)角。在特定實(shí)施方案中，α螺旋區(qū)域包含3、4、5或6個(gè)螺旋轉(zhuǎn)角。在其它實(shí)施方案中，α螺旋區(qū)域是相當(dāng)于約3、4、5或6個(gè)螺旋轉(zhuǎn)角的剛性結(jié)構(gòu)。一個(gè)理想化的螺旋的例子是LLQQLQKLLQKLKQY(SEQ ID NO58)。在特定實(shí)施方案中，該α螺旋是雙親結(jié)構(gòu)。因此，可以選擇將提供該類型結(jié)構(gòu)的所需氨基酸的特征。
已發(fā)現(xiàn)，降鈣素α螺旋區(qū)域、淀粉狀蛋白毒素和降鈣素α螺旋區(qū)域的組合、或其部分，和/或一些CGRP元件在LHC肽的α螺旋區(qū)域中是需要的。預(yù)期，如同環(huán)區(qū)域，α螺旋區(qū)域可來(lái)自任何淀粉狀蛋白毒素或降鈣素，及其類似物。因此，在特定實(shí)施方案中，α螺旋區(qū)域?yàn)橹辽俨糠值慕碘}素或降鈣素類似物的α螺旋區(qū)域。在其它實(shí)施方案中，α螺旋區(qū)域?yàn)橹辽俨糠值慕碘}素或降鈣素類似物的α螺旋區(qū)域和至少部分的淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物的α螺旋。仍在其他實(shí)施方案中，LHC肽的α螺旋區(qū)域包含CGRP的元件。還預(yù)期，這些新化合物可具有不超過(guò)一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的其他修飾。
在特定實(shí)施方案中，LHC的α螺旋區(qū)域可包含I型α螺旋區(qū)域。I型α螺旋區(qū)域包含自sCT第8位至sCT第18、19、20、21、22、23、24、25、26或27位的氨基酸。此外，I型α螺旋區(qū)域可包含相同或不同物種的降鈣素或降鈣素類似物α螺旋區(qū)域的超過(guò)一個(gè)部分，例如8-21 sCT 19-27 sCT；8-21 sCT 18-27 sCT；或8-16 hCT 17-27sCT；或(11Arg)8-16hCT(18Arg)17-27sCT。作為選擇或另外地，上述8-18sCT至8-27sCT的α螺旋還可包含(10Aib)、(11Arg)、(11Orn)、(11hArg)、(11Cit)、(11hLys)、(11Lys(for))、(17Aib)、(18Arg)、(18Orn)、(18hArg)、(18Cit)、(18hLys)、(18Lys(for))、(18Lys(PEG5000))、(22Leu)、(24Pro)或其任意組合的一種或多種的取代。
在一種實(shí)施方案中，LHC肽的I型α螺旋區(qū)域可表示為X1 V LXaa10 Xaa11 L S Q Xaa15 L Xaa17 Xaa18 L Q T Xaa22 P Xaa24 T NT X1(SEQ ID NO59)，其中Xaa10是Gly或Aib；Xaa11是Lys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLys或Lys(for)；Xaa15是Glu或Phe；Xaa17是His或Aib；Xaa18是Lys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLys、Lys(for)、Lys(PEG 5000)；Xaa22是Try或Leu；Xaa24是Arg或Pro；或X1不存在或包含1-4個(gè)附加氨基酸。
應(yīng)當(dāng)記住，馬庫(kù)什基團(tuán)中的各成員或其組合是本發(fā)明的另一種實(shí)施方案，且不被視為單一的單元。這是用于陳述的速記方法，作為舉例，LHC肽的實(shí)施方案包括I型α螺旋區(qū)域式，其中Xaa18可為L(zhǎng)ys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLys或Lys(for)，且各變化都是本發(fā)明單獨(dú)的實(shí)施方案。因此，I型α螺旋區(qū)域式具有一種其中Xaa18為L(zhǎng)ys的實(shí)施方案。還有其中Xaa18為Arg等的另一種實(shí)施方案。還預(yù)期，α螺旋區(qū)域可包含不超過(guò)一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的修飾。因此，I型α螺旋區(qū)域的化合物還可在C-末端帶有缺失。在特定實(shí)施方案中，X1的氨基酸能夠形成α螺旋轉(zhuǎn)角。
LHC肽I型α螺旋區(qū)域的例子包括，但不限于，
8-18sCT，8-21sCT，8-24sCT，8-27sCT，(11Arg)8-18sCT，(18Arg)8-18sCT，(11Arg18Arg)8-18 sCT，(11Orn18Orn)8-18 sCT，(11Arg18Cit)8-18 sCT，(11hArg18hArg)8-18sCT，(11Arg18Orn)8-18sCT，(11Cit18Arg)8-18 sCT，(11Cit18Cit) 8-18sCT，(11hLys18hLys)g-18sCT，(10Aib11Arg17Aib18Arg)8-18sCT，(11Lys(for)18Lys(for))8-18sCT，(10Aib11Lys(for)17Aib18Lys(for))8-18sCT，(11Arg18Lys(PEG5000))8-18sCT，(11Arg)8-21sCT，(18Arg)8-21sCT，(11Arg18Arg)8-21 sCT，(11Orn18Orn)8-21sCT，(11Arg18Cit)8-21sCT，(11hArg18hArg)8-21sCT，(11Arg18Orn)8-21sCT，(11Cit18Arg)8-21sCT，(11Cit18Cit)8-21 sCT，(11hLys18hLys)8-21 sCT，(10Aib11Arg17Aib18Arg)8-21 sCT，(11Lys(for)18Lys(for))8-21sCT，(10Aib11Lys(for)17Aib18Lys(for))8-21sCT，(11Arg18Lys(PEG5000))8-21sCT，(11Arg)8-24sCT，(18Arg)8-24sCT，(11Arg18Arg)8-24sCT，(11Arg18Arg22Leu)8-24 sCT，(11Arg18Arg24Pro)8-24sCT，(11Orn18Orn)8-24sCT，(11Arg18Cit)8-24sCT，(11hArg18hArg)8-24 sCT，(11Arg18Orn)8-24 sCT，(11Cit18Arg)8-24 sCT，(11Cit18Cit)8-24 sCT，(11hLys18hLys)8-24sCT，(10Aib11Arg17Aib18Arg)8-24sCT，(11Lys(for)18Lys(for))8-24sCT，(10Aib11Lys(for)17Aib18Lys(for))8-24 sCT，(11Arg18Lys(PEG5000))8-24sCT，(11Arg)8-27sCT，(18Arg8-27sCT，(11Arg18Arg)8-27 sCT，(11Arg18Arg22Leu)8-27sCT，(11Arg18Arg24Pro)8-27sCT，(11Orn18Orn)8-27sCT，(11Arg18Cit)8-27 sCT，(11hArg18hArg)8-27sCT，(11Arg18Orn)8-27sCT，(11Cit18Arg)8-27sCT，(11Cit18Cit)8-27sCT，(11hLys18hLys)8-27sCT，(10Aib11Arg17Aib18Arg)8-27sCT，(11Lys(for)18Lys(for))8-27sCT，(10Aib11Lys(for)17Aib18Lys(for))8-27sCT，(11Arg18Lys(PEG5000))8-27sCT，(11Arg18Arg)8-21sCT-19-27sCT，and(11Arg18Arg)8-21sCT-(18Leu)18-27sCT。
在特定實(shí)施方案中，LHC肽的α螺旋區(qū)域可包含II型α螺旋區(qū)域。II型α螺旋區(qū)域包含部分的淀粉狀蛋白毒素或淀粉狀蛋白毒素類似物的α螺旋區(qū)域和部分的降鈣素或降鈣素類似物的α螺旋區(qū)域。II型α螺旋區(qū)域可包含自h淀粉狀蛋白毒素中第8位至h淀粉狀蛋白毒素中第11、12、13、14、15、16、17、18或19位氨基酸，和sCT的第13、14、15、16、17、18和19位至sCT的第18、19、20、21、22、23、24、25、26或27位的氨基酸。作為選擇或另外地，上述淀粉狀蛋白毒素和降鈣素的α螺旋區(qū)域還可包含(8Val)、(9Leu)、(9Met)、(10Gly)、(10His)、(12Thr)、(13Thr)、(13Asn)、(13Phe)、(13Tyr)、(14Arg)、(14Ala)、(14Asp)、(14Glu)、(14Gln)、(14Thr)、(14Gly)、(15Leu)、(15Ser)、(15Glu)、(15Ala)、(15Tyr)、(16Asp)、(17Ser)、(17Phe)、(18Arg)、(17Aib)、(18Arg)、(18Orn)、(18hArg)、(18Cit)、(18hLys)、(18Lys(for))、(18Lys(PEG5000))、(19Phe)、(20His)、(21Asn)、(22Met)、(22Val)、(22Phe)、(22Leu)、(24Pro)或其任意組合中的一種或多種的取代。在特定實(shí)施方案中，LHC肽II型α螺旋區(qū)域中的氨基酸數(shù)目為至少10個(gè)氨基酸。在其它實(shí)施方案中，LHC肽II型α螺旋區(qū)域中的氨基酸數(shù)目為11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23。在其它實(shí)施方案中，LHC肽II型α螺旋區(qū)域中的氨基酸數(shù)目為24或更多。
在一種實(shí)施方案中，LHC肽II型α螺旋區(qū)域可表示為X1 Xaa8Xaa9 Xaa10 R Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N T X1(SEQ ID NO60)其中Xaa8是Ala或Val；Xaa9是Thr、Met或Leu；Xaa10是Gln、Gly、His；Xaa12是Leu或Thr；Xaa13是Ala、Thr、Asn、Phe、Tyr、Ser或Thr；Xaa14是Asn、Arg、Ala、Asp、Glu、Gln、Thr或Gly；Xaa15是Phe、Leu、Ser、Glu、Ala、Asp或Tyr；Xaa16是Leu或Asp；Xaa17是Val、His、Ser、Phe或Aib；Xaa18是His、Arg、Lys、Orn、hArg、Cit、hLys、Lys(for)或Lys(PEG5000)；Xaa19是Leu、Ser或Phe；Xaa20是Gln或His；Xaa21是Thr或Asn；Xaa22是Tyr、Val、Phe、Leu或Met；Xaa24是Arg或Pro；和X1是不存在或包含1-4個(gè)附加的氨基酸。
再次說(shuō)明，馬庫(kù)什基團(tuán)中的各成員或其組合是本發(fā)明的另一種實(shí)施方案，且不被視為單一的單元。還預(yù)期II型α螺旋區(qū)域可包含對(duì)本文所述化合物的不超過(guò)一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的修飾。例如，在特定實(shí)施方案中，該II型α螺旋區(qū)域可在C-末端帶有導(dǎo)致第27、26、25、24或22位缺失的缺失。在其它實(shí)施方案中，然而，這些缺失并不除去第19、20、21或22位氨基酸。
LHC肽II型α螺旋區(qū)域的例子包括，但不限于，(8Val9Leu10Gly)11-15h淀粉狀蛋白毒素16-27sCT、(8Val9Leu10Gly)11-15h淀粉狀蛋白毒素(18Arg)16-27 sCT、8-12h淀粉狀蛋白毒素(18Arg)13-27sCT、8-18h淀粉狀蛋白毒素19-23sCT、8-18H淀粉狀蛋白毒素19-27sCT、(15Glu18Arg)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-24sCT、(14Arg15Ser)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(13Ala14Ala15Ala)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-27sCT、(13Ala14Asp15Ala)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(13Ala14Asp)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-23sCT、(13Ala14Asp)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-27sCT、(13Ala14Ala)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(13Ala14Glu)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(13Thr14Asp15Tyr)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(13Ala14Gln)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(13Asn14Glu15Tyr)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-27sCT、(13Phe14Asp)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-27sCT、(13Ala14Asp)8-18h淀粉狀蛋白毒素(15Glu18Arg)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-24sCT、(19Phe22Phe)19-27sCT、(13Ala14Asp)8-18h淀粉狀蛋白毒素(19Phe20His22Phe)19-27sCT、(13Ala14Asp)8-18h淀粉狀蛋白毒素(19Phe22Phe)19-27sCT、(9Thr10His)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22sCT、(9Thr10His14Gly15Leu17Ser18Arg)8-19h淀粉狀蛋白毒素20-23sCT、8-18h淀粉狀蛋白毒素(21Asn22Phe23Val)19-23 sCT、8-18h淀粉狀蛋白毒素(22Met)19-27sCT、8-18h淀粉狀蛋白毒素(22Val)19-27sCT、(9Met12Thr13Tyr14Thr15Glu16Asp17Phe)8-17h淀粉狀蛋白毒素(18Arg)18-20sCT)。在其它實(shí)施方案中，新化合物包括上述示例性化合物的變化，其中α螺旋終止于相應(yīng)于sCT第22、23、24、25、26或27位。換言之，化合物8-18h淀粉狀蛋白毒素19-24 sCT也確切的描述為，該化合物僅為上述8-18h淀粉狀蛋白毒素19-27sCT截短至第24位。如另一實(shí)施例，由于應(yīng)用于(13Ala 14Asp 15Ala)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-22的上述語(yǔ)言，也具體描述了化合物(13Ala 14Asp 15Ala)8-18h淀粉狀蛋白毒素19-23。
在特定實(shí)施方案中，LHC肽的C-末端尾部包含h淀粉狀蛋白毒素自第27、28、29、30、31、32或33位至第36或37位的氨基酸。在其它實(shí)施方案中，LHC肽的C-末端尾部包含sCT自第27或28位至第32位的氨基酸；然而，當(dāng)環(huán)區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物，且α螺旋區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物時(shí)，C-末端尾部的最后位置不是Pro、Hyp、Hse或Hse的衍生物。作為選擇或另外地，淀粉狀蛋白毒素和降鈣素的上述α螺旋還可包含(27Tyr)h淀粉狀蛋白毒素、(29Arg)h淀粉狀蛋白毒素、(32Val)h淀粉狀蛋白毒素、(32Thr)h淀粉狀蛋白毒素、(34Glu)h淀粉狀蛋白毒素、(35Lys)h淀粉狀蛋白毒素、(36Phe)h淀粉狀蛋白毒素、(36Ala)h淀粉狀蛋白毒素、(37Phe)h淀粉狀蛋白毒素、(30Asn)sCT、(32Tyr)sCT或其任意組合中的一種或多種的取代。
在一種實(shí)施方案中，LHC肽的C-末端尾部可表示為Xaa28 Xaa29Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38(SEQ IDNO61)，其中Xaa28是Lys、Tyr或不存在；Xaa29是Ser、Pro或不存在；Xaa30是Ser、Pro、Arg或不存在；Xaa31是Thr或不存在；Xaa32是Asn或不存在；Xaa33是Val、Thr或不存在；Xaa35是Ser、GluXaa36是Asn、Lys或Gly；Xaa37是Thr、Phe或Ala；Xaa38是Tyr、Phe、Pro或不存在；附帶條件是，當(dāng)LHC激動(dòng)劑的環(huán)區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物且α螺旋區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物時(shí)，C-末端尾部的最后位置不是Pro、Hyp、Hse或Hse的衍生物。
再次說(shuō)明，馬庫(kù)什基團(tuán)中的各成員或其組合是本發(fā)明的另一種實(shí)施方案，且不被視為單一的單元。還預(yù)期C-末端尾部可包含對(duì)本文所述化合物的不超過(guò)一、二或三個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的修飾。
LHC激動(dòng)劑的C-末端尾部的例子包括，但不限于，27-37r淀粉狀蛋白毒素、(27Tyr29Arg32Thr)27-37r淀粉狀蛋白毒素、(29Arg32Thr)28-37r淀粉狀蛋白毒素、30-37h淀粉狀蛋白毒素、(32Thr)30-37h淀粉狀蛋白毒素、(35Lys36Ala37Phe)30-37h淀粉狀蛋白毒素、30-36h淀粉狀蛋白毒素、(32Val)30-36h淀粉狀蛋白毒素、(34Glu36Phe)30-36h淀粉狀蛋白毒素、31-37h淀粉狀蛋白毒素(Amyin)、31-36h淀粉狀蛋白毒素、33-36h淀粉狀蛋白毒素、33-37h淀粉狀蛋白毒素、28-32sCT、(30Asn32Tyr)28-32sCT和27-32sCT。在其它實(shí)施方案中，該C-末端尾部包含氨基酸序列KSNFVPTN(SEQ IDNO62)或SNFVPTNV(SEQ ID NO63)。
還預(yù)期，還可以如前述段落中所述，對(duì)本發(fā)明的C-末端尾部作不超過(guò)一、二或三個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的修飾。LHC肽的C-末端尾部還可在C-末端包含修飾或附加的氨基酸。這樣的修飾包括添加比如Lys、最多4個(gè)Lys、L-辛基甘氨酸、4ABU(4-氨基丁酸)、9Anc(9-氨基壬酸)和/或用于溶解性、穩(wěn)定性或送遞的基團(tuán)這樣的化合物。例子包括，但不限于，33-37h淀粉狀蛋白毒素L-辛基甘氨酸、33-37h淀粉狀蛋白毒素4ABU和33-37h淀粉狀蛋白毒素9Anc。
在一個(gè)總的方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含(a)如本文所述的LHC激動(dòng)劑環(huán)區(qū)域中的任一個(gè)；(b)如本文所述的LHC激動(dòng)劑α螺旋區(qū)域中的任一個(gè)；和(c)任何如本文所述的LHC激動(dòng)劑C-末端尾部，附帶條件是，當(dāng)環(huán)區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物且α螺旋區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物時(shí)，C-末端尾部的最后位置不是Pro、Hyp、Hse或Hse的衍生物。
在另一個(gè)總的方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含(a)在N-末端含有式(II)Xaa1或帶有修飾的Xaa1的環(huán)區(qū)域；(b)含有I型或II型α螺旋區(qū)域的α螺旋區(qū)域；(c)C-末端尾部由SEQ ID NO61所示，附帶條件是，當(dāng)環(huán)區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物且α螺旋區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物時(shí)，C-末端尾部的最后位置不是Pro、Hyp、Hse或Hse的衍生物。C-末端可包含其他修飾。
在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含式(III)的氨基酸序列Xaa1 X Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Y Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32(SEQ ID NO64)其中Xaa1是A、C、hC、D、E、F、I、L、K、hK、R、hR、S、Hse、T、G、Q、N、M、Y、W、P、Hyp、H、V或不存在；Xaa3是A、D、E、N、Q、G、V、R、K、hK、hR、H、I、L、M或不存在；Xaa4是A、I、L、S、Hse、T、V、M或不存在；Xaa5是A、S、T、Hse、Y、V、I、L或M；Xaa6是T、A、S、Hse、Y、V、I、L或M；Xaa8是A、V、I、L、F或M；Xaa9是L、T、S、Hse、V、I或M；Xaa10是G、H、Q、K、R、N、hK或hR；Xaa11是K、R、Q、N、hK、hR或H；Xaa12是L、I、V、F、M、W或Y；Xaa13是A、F、Y、N、Q、S、Hse或T；Xaa14是A、D、E、G、N、K、Q、R、H、hR或hK；Xaa15是A、D、E、F、L、S、Y、I、V或M；Xaa16是L、F、M、V、Y或I；Xaa17是H、Q、N、S、Hse、T或V；Xaa18是K、hK、R、hR、H、u(Cit)或n(Orn)；Xaa19是F、L、S、Hse、V、I、T或不存在；Xaa20是H、R、K、hR、hK、N、Q或不存在；Xaa21是T、S、Hse、V、I、L、Q、N或不存在；Xaa22是F、L、M、V、Y或I；Xaa23是P或Hyp；Xaa24是P、Hyp、R、K、hR、hK或H；Xaa25是T、S、Hse、V、I、L、F或Y；Xaa26是N、Q、D或E；Xaa27是T、V、S、F、I或L；Xaa28是G或A；
Xaa29是S、Hse、T、V、I、L或Y；Xaa30是E、G、K、N、D、R、hR、hK、H或Q；Xaa31是A、T、S、Hse、V、I、L、F或Y；和Xaa32是F、P、Y、Hse、S、T或Hyp；其中X和Y能夠成鍵，且為獨(dú)立選擇的具有側(cè)鏈的殘基，所述側(cè)鏈彼此化學(xué)結(jié)合以形成分子內(nèi)連接，比如例如二硫鍵；酰胺鍵；可形成環(huán)內(nèi)酰胺的烷基酸和烷基胺；可縮合和還原以形成烷基胺或亞胺橋的烷基醛或烷基鹵化物和烷基胺；或可連接以形成烷基、鏈烯基、炔基、醚或硫醚鍵的側(cè)鏈。烷基鏈可包括帶有約1至約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基基團(tuán)。在特定實(shí)施方案中，分子內(nèi)連接可以是二硫鍵、酰胺鍵、亞胺鍵、胺鍵、烷基鍵和烯鍵。在特定實(shí)施方案中，X和Y獨(dú)立選自Ser、Asp、Glu、Lys、Orn或Cys。在特定實(shí)施方案中，X和Y是Cys和Cys。在其它實(shí)施方案中，X和Y是Ser和Ser。仍在其他實(shí)施方案中，X和Y是Asp和Lys或Lys和Asp。
在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含式(IV)的氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa31 Xaa32(SEQ ID NO65)其中Xaa1是A、C、D、F、I、K、S、T或不存在；Xaa2是C、D、S或不存在；Xaa3是A、D、N或不存在；Xaa4是A、L、T或不存在；Xaa5是A或S；Xaa6是T、A、S或V；Xaa7是C、K或A；Xaa8是A、V、L或M；Xaa9是L或T；Xaa10是G、H或Q；Xaa11是K、R、Q或hArg；Xaa12是L、W或Y；Xaa13是A、F、N、Q、S或T；
Xaa14是A、D、E、G、N、K、Q或R；Xaa15是A、D、E、F、L、S或Y；Xaa16是L或F；Xaa17是H、Q、S或V；Xaa18是K、R、hArg、u(Cit)或n(Orn)；Xaa19是F、L、S或不存在；Xaa20是H、Q或不存在；Xaa21是T、N或不存在；Xaa22是F、L、M、V或Y；Xaa24是P或R；Xaa27是T或V；Xaa30是E、G、K或N；Xaa31是A或T；和Xaa32是F、P或Y。
在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含式(V)的氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 T Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 LXaa13 Xaa14 Xaa15 L Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 PXaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa31 Xaa32，(SEQ ID NO66)其中Xaa1是A、C、F、I、K、S或不存在；Xaa2是C、D或S；Xaa3是A、D或N；Xaa4是A、L或T；Xaa5是A或S；Xaa7是C或K；Xaa8是A或V；Xaa9是L或T；Xaa10是G、H或Q；Xaa11是K、R或hArg；Xaa13是A、F、N、S或T；Xaa14是A、D、E、G、N、Q或R；Xaa15是A、E、F、L、S或Y；Xaa17是H、S或V；
Xaa18是K、R、hArg、u(Cit)或n(Orn)；Xaa19是F、L或S；Xaa20是H或Q；Xaa21是T或N；Xaa22是F、L、M、V或Y；Xaa24是P或R；Xaa27是T或V；Xaa30是E、G、K或N；Xaa31是A或T；和Xaa32是F、P或Y。
在一個(gè)總的方面，式(III)、(IV)或(V)的序列還包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多個(gè)取代、插入、缺失、延長(zhǎng)和/或衍生的修飾。在特定實(shí)施方案中，式(III)、(IV)或(V)的序列在第22和23位氨基酸之間包含插入的Val。在其它實(shí)施方案中，式(III)、(IV)或(V)的序列在第22和23位之間包含插入的Gln。在又一個(gè)其他實(shí)施方案中，式(III)、(IV)或(V)的序列在第22和23位之間包含Gln-Thr-Tyr序列。在又一個(gè)其他實(shí)施方案中，式(III)、(IV)或(V)的序列在第22和23位之間包含Leu-Gln-Thr-Tyr序列(SEQ ID NO67)。在另一個(gè)總的方面，式(III)、(IV)或(V)的修飾可以在N-末端。在特定實(shí)施方案中，式(III)、(IV)或(V)的N-末端部分具有添加的辛基甘氨酸。在其它實(shí)施方案中，式(III)、(IV)或(V)的N-末端部分具有添加的isocap。
在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含式(VI)的氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa31 Xaa32(SEQ ID NO68)其中Xaa1是A、C、D、F、K、T或不存在；Xaa2是A、C、D、S或不存在；Xaa3是A、D、N或不存在；Xaa4是A、L、T或不存在；
Xaa5是A或S；Xaa6是A、S、T或V；Xaa7是A、C或K；Xaa8是A、L、M或V；Xaa9是L或T；Xaa10是G、H或Q；Xaa11是K、Q或R；Xaa12是L、W或Y；Xaa13是A、N、Q、S或T；Xaa14是A、D、E、G、K、N、Q或R；Xaa15是A、D、E、F、L、S或Y；Xaa16是F或L；Xaa17是H、Q、S或V；Xaa18是K或R；Xaa19是F、L、S或不存在；Xaa20是H、K、Q或不存在；Xaa21是Q、T或不存在；Xaa22是F、L或Y；Xaa24是P或R；Xaa27是T或V；Xaa30是E、K或N；Xaa31是A或T；和Xaa32是F、Y或不存在。
在一個(gè)總的方面，式(VI)的序列還包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多個(gè)取代、插入、缺失、延長(zhǎng)和/或衍生的修飾。在特定實(shí)施方案中，式(III)、(IV)、(V)或(VI)的序列在第24位包含缺失。
在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含a)包含式(II)Xaa1的環(huán)區(qū)域；其中Xaa1包含氨基序列X Xaa2Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Y(SEQ ID NO69)其中，Xaa2是任意氨基酸或不存在；
Xaa3是Ala、Gly、Ser、Asp或不存在；Xaa4是Asn、Ala、Asp、Gly或不存在；Xaa5是Ala、Leu、Thr或Ser；Xaa6是Ala、Ser或Thr；和Xaa7是Ala、Ser、Val、Hse、(S)-2-氨基-3-羥基-甲基丁酸(Ahb)、(2S，3R)-2-氨基-3羥基-甲基正戊酸(Ahp)、d-Thr、Thr或其衍生物；X和Y是能夠成鍵的氨基酸，且為獨(dú)立選擇的具有側(cè)鏈的殘基，所述側(cè)鏈可彼此化學(xué)結(jié)合以形成分子內(nèi)連接，比如例如二硫鍵；酰胺鍵；由烷基酸和烷基胺形成的環(huán)內(nèi)酰胺；通過(guò)縮合和還原烷基醛或烷基鹵化物和烷基胺而形成的烷基胺或亞胺橋；和通過(guò)側(cè)鏈的連接形成的烷基、鏈烯基、炔基、醚或硫醚鍵；b)包含序列X1 V L Xaa10 Xaa11 L S Q Xaa15 L Xaa17 Xaa18 LQ T Xaa22 P Xaa24 T N T X1(SEQ ID NO70)的I型α螺旋區(qū)域，其中Xaa10是Gly或Aib；Xaa11是Lys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLys或Lys(for)；Xaa15是Glu或Phe；Xaa17是His或Aib；Xaa18是Lys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLys、Lys(for)、Lys(PEG 5000)；Xaa22是Try或Leu；Xaa24是Arg或Pro；和X1是不存在或包含1-4個(gè)附加的氨基酸；和c)包含序列Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35Xaa36 Xaa37 Xaa38(SEQ ID NO71)的C-末端尾部，其中Xaa28是Lys、Tyr或不存在；Xaa29是Ser、Pro或不存在；Xaa30是Ser、Pro、Arg或不存在；Xaa31是Thr或不存在；Xaa32是Asn或不存在；Xaa33是Val、Thr或不存在；
Xaa35是Ser、GluXaa36是Asn、Lys或Gly；Xaa37是Thr、Phe或Ala；Xaa38是Tyr、Phe、Pro或不存在；附帶條件是，當(dāng)環(huán)區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物且α螺旋區(qū)域來(lái)自降鈣素或降鈣素類似物時(shí)，C-末端尾部的最后位置不是Pro、Hyp、Hse或Hse的衍生物。
在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含a)包含Xaa1的環(huán)區(qū)域；a)包含式(II)Xaa1的環(huán)區(qū)域；其中Xaa1包含氨基序列X Xaa2Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Y(SEQ ID NO72)，其中，Xaa2是任意氨基酸或不存在；Xaa3是Ala、Gly、Ser、Asp或不存在；Xaa4是Asn、Ala、Asp、Gly或不存在；Xaa5是Ala、Leu、Thr或Ser；Xaa6是Ala、Ser或Thr；和Xaa7是Ala、Ser、Val、Hse、Ahb、Ahp、d-Thr、Thr或其衍生物；X和Y是能夠成鍵的氨基酸，且為獨(dú)立選擇的具有側(cè)鏈的殘基，所述側(cè)鏈可彼此化學(xué)結(jié)合以形成分子內(nèi)連接，比如例如二硫鍵；酰胺鍵；由烷基酸和烷基胺形成的環(huán)內(nèi)酰胺；通過(guò)縮合和還原烷基醛或烷基鹵化物和烷基胺而形成的烷基胺或亞胺橋；和通過(guò)側(cè)鏈的連接形成的烷基、鏈烯基、炔基、醚或硫醚鍵；b)含有序列X1 Xaa8 Xaa9 Xaa10 R Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N T X1(SEQ ID NO73)的II型α螺旋區(qū)域，其中Xaa8是Ala或Val；Xaa9是Thr、Met或Leu；Xaa10是Gln、Gly、His；Xaa12是Leu或Thr；Xaa13是Ala、Thr、Asn、Phe、Tyr、Ser或Thr；
Xaa14是Asn、Arg、Ala、Asp、Glu、Gln、Thr或Gly；Xaa15是Phe、Leu、Ser、Glu、Ala、Asp或Tyr；Xaa16是Leu或Asp；Xaa17是Val、His、Ser、Phe或Aib；Xaa18是His、Arg、Lys、Orn、hArg、Cit、hLys、Lys(for)或Lys(PEG5000)；Xaa19是Leu、Ser或Phe；Xaa20是Gln或His；Xaa21是Thr或Asn；Xaa22是Tyr、Val、Phe、Leu或Met；Xaa24是Arg或Pro；和X1是不存在或包含1-4個(gè)附加的氨基酸；和c)含有序列Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35Xaa36 Xaa37 Xaa38(SEQ ID NO74)的C-末端尾部，其中Xaa28是Lys、Tyr或不存在；Xaa29是Ser、Pro或不存在；Xaa30是Ser、Pro、Arg或不存在；Xaa31是Thr或不存在；Xaa32是Asn或不存在；Xaa33是Val、Thr或不存在；Xaa35是Ser或GluXaa36是Asn、Lys或Gly；Xaa37是Thr、Phe或Ala；Xaa38是Tyr、Phe、Pro或不存在。
在又一個(gè)方面，用于本發(fā)明的LHC肽包括
(SEQ ID NO75)KCNTATCVLGKLSSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO76)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPRTNTGSNTY(SEQ ID NO77)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPPTNTGSNTY(SEQ ID NO78)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYRRTNVGSNTY(SEQ ID NO79)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPPTNVGSNTY(SEQ ID NO80)KCNTATCVLGRLANFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO81)ACNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO82)KCNAATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO83)KGNTAACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO84)CANLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO85)異己酰-STAVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO86)CSNASTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO87)CSNLATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO88)CSNLSACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO89)KCNTATCVLGRLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO90)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO91)CSALSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO92)Ac-(Agy)SNLST(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO92)Ac-K(Agy)NTAT(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO93)異己酰-STAVL(Aib)RLSQELRLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO94)異己酰-STAVLG[K(For)]LSQELH[K(For)]LQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO95)異己酰-STAVL(Aib)[K(For)]LSQEL(Aib)[K(For)]LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO96)異己酰-STAVL(Aib)[K(For)]LSQEL(Aib)[K(For)]LQTYPRTNVGSNTY(SEQ ID NO97)KCNTATCLLQQLQKLLQKLKQYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO98)KCNTASCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO99)KCNTAVCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO100)KCNTATCVLGRLSQELHRYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO101)KCNTATCVLGK(For)LSQELHK(For)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO102)KCNTA(d-Thr)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO103)KCNTA(dAb)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO104)Ac-ACNTATCVLGRLSQELHK(PEG5000)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO105)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO106)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLLQYPPTNTGSNTY(SEQ ID NO107)KCNTATCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO108)KCNTSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO109)KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO110)KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY(SEQ ID NO111)KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY(SEQ ID NO112)KCNTA(Ase)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO113)KCNTA(Ahb)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO114)KCNTA(Ahp)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO115)KCNTAT(OPO3H2)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO116)KCNTATCVLG(Orn)LSQELH(Orn)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO117)KCNTATCVLG(Cit)LSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO118)KCNTATCVLG(homoK)LSQELH(homoK)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO119)L-辛基甘氨酸KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO120)N-3，6二羥基辛酰-CNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY(SEQ ID NO121)KCNTATCMLGRYTQDFHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO122)DSNLSTKLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO123)KDNTATKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO124)CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO125)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(9Anc)(SEQ ID NO126)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(L-辛基甘氨酸)(SEQ ID NO127)N-異己酰-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO128)KCNTATCVLG(homoR)LSQELH(homoR)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO129)FCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO130)KCNTATCVLGRLSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO131)KCNTATCVLGRLSQELH(Om)LQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO132)ICNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNY(SEQ ID NO133)1-辛基甘氨酸-CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO134)異己酰-CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNY(SEQ ID NO135)KCNTATCVLG(Cit)LSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO136)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNYY(4ABU)(SEQ ID NO137)異己酰-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU)(SEQ ID NO138)KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSEAF(SEQ ID NOl39)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPTNVGSEAF(SEQ ID NO140)KCNTATCVLGRLSRSLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO141)KCNTATCVTHRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO142)KCNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO143)CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNT(SEQ ID NO144)KCNTATCVLGRLSQELHRLQNFVPRTNTGSNTY(SEQ ID NO145)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSETF(SEQ ID NO146)ACDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO147)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSKAF(SEQ ID NO148)KCDTATCVTHRLAGLLSRSQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO149)KCNTATCVLGRLADALHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO150)KCNTATCVLGRLAAFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO151)SCNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNY(SEQ ID NO152)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTMPRTNTGSNTY(SEQ ID NO153)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY(SEQ ID NO154)KCNTATCVLGRLNEYLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO155)SCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO156)KCNTATCVLGRLTEFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO157)KCNTATCVLGRLAEFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO158)KCNTATCVLGRLTDYLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO159)KCNTATCVLGRLAQFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO160)KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSNTY(SEQ ID NO161)KCNTATCVLGRLADFLHRFHTFPRTNTGSNTY(SEQ ID NO162)KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSGTP(SEQ ID NO163)CNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO164)KCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO165)KCNTATCVLGRLFDFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO166)KCNTATCVLGRLAAALHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO167)TCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO168)CSMLSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY(SEQ ID NO169)KCNTATCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY(SEQ ID NO170)CSNLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO171)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY在又一方面，用于本發(fā)明的LHC肽包括SEQ ID NO75至171的生物學(xué)活性片段。生物學(xué)活性片段可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多個(gè)氨基酸的缺失。在特定實(shí)施方案中，SEQ ID NO75至171的氨基酸序列包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的修飾。在其它實(shí)施方案中，SEQ ID NO75至171的氨基酸序列具有不超過(guò)1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)比如取代、插入、缺失和/或衍生這樣的修飾。在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明的化合物包括與SEQ ID NO75至171中任一個(gè)具有至少75、80、85、90、95或97％氨基酸序列同一性的那些。同一性百分?jǐn)?shù)通過(guò)用AlignXmodulein Vector NTI(Invitrogen；Carlsbad CA)分析測(cè)定。意欲使所描述的各百分?jǐn)?shù)同一性、或生物學(xué)活性片段或修飾的參考都可單獨(dú)應(yīng)用于各SEQ ID NO。例如，所描述的各實(shí)施方案，片段、修飾或％同一性可應(yīng)用于SEQ ID NO75、76、77、78、44等，或任一組SEQ IDNO。
通常，淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑類似物被視為指通過(guò)直接或間接與一個(gè)或多個(gè)受體相互作用或結(jié)合來(lái)模擬淀粉狀蛋白毒素的作用的化合物。因此，本發(fā)明的化合物可作為本文所公開(kāi)的降鈣素、淀粉狀蛋白毒素、CGRP或這三種的任意組合的至少一種生物學(xué)作用的激動(dòng)劑起作用或者與淀粉狀蛋白毒素、降鈣素或CGRP的受體的至少一種結(jié)合。相反，淀粉狀蛋白毒素拮抗劑通過(guò)直接或間接與一種或多種受體相互作用或結(jié)合，抑制淀粉狀蛋白毒素的作用。這樣的相互作用或結(jié)合事件包括影響生長(zhǎng)素釋放肽水平的那些。
預(yù)期在本發(fā)明中使用的淀粉狀蛋白毒素拮抗劑包括AC66(sCT[8-32])(SEQ ID NO172)和比如AC187(Ac 30Asn，32Tyr-sCT[8-32])(SEQ ID NO173)這樣的25氨基酸鮭魚(yú)降鈣素肽片段的衍生物，開(kāi)發(fā)為CGRP受體的選擇性淀粉狀蛋白毒素受體拮抗劑。其他有用的拮抗劑包括第5,625,032和5,580,953號(hào)美國(guó)專利所述的拮抗劑，這些專利引入本文作為參考。這樣的拮抗劑化合物包括含有式(VII)X-R1-Thr-Gln-R2-Leu-Ala-Asn-R3-Leu-Val-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-R4-Asn-Thr-Tyr-NH2(SEQ ID NO174)的那些其中R1是Ala或鍵；R2是Arg、Gln、Lys、Asn或Leu；R3是Gln、Glu、Asn、Asp或Phe；R4是Ala或Ser；和X是氫或乙?；?。
淀粉狀蛋白毒素拮抗劑可以是N-末端乙?；幕蚍且阴；模野ㄔ摲肿拥乃岷王０沸问?。淀粉狀蛋白毒素拮抗劑的例子包括，但不限于，乙?；?Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg LeuGln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO175)，Ala Thr Gln GlnLeu Ala Asn Gln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO176)，Ala Thr Gln Leu Leu Ala Asn Gln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr ProArg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO177)，Ala Thr Gln Arg Leu Ala AsnGln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ IDNO178)，Ala Thr Gln Leu Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg ThrAsn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO179)，Ala Thr Gln Gln Leu Ala Asn Glu LeuVal Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO180)。
測(cè)試具有淀粉狀蛋白毒素活性的化合物的方法是本領(lǐng)域已知的。測(cè)試淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑或拮抗劑的示例性篩選方法和測(cè)定描述于本文實(shí)施例中，特別是實(shí)施例4，以及第5,264,372和5,686,411號(hào)美國(guó)專利，其引入本文作為參考。
通過(guò)進(jìn)行各種篩選測(cè)定可以證實(shí)并定量作為淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑和/或類似物的活性，所述測(cè)定包括依核(nucleus accumben)受體結(jié)合測(cè)定，之后進(jìn)行比目魚(yú)肌測(cè)定、胃排空測(cè)定，或通過(guò)誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物低血鈣癥或降低哺乳動(dòng)物餐后高血糖的能力。
受體結(jié)合測(cè)定是一種測(cè)量化合物與膜結(jié)合的淀粉狀蛋白毒素受體特異性結(jié)合的能力的競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定，第5,264,372和5,686,411號(hào)美國(guó)專利對(duì)其作了描述，這些公開(kāi)文本引入本文作為參考。該測(cè)定中所使用的膜制劑的優(yōu)選來(lái)源是基底前腦，其包含來(lái)自依核及其周圍區(qū)域的膜。所測(cè)定的化合物與125I Bolton Hunter大鼠淀粉狀蛋白毒素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合這些受體制劑。將結(jié)合量(B)作為配體濃度對(duì)數(shù)的函數(shù)作圖得到競(jìng)爭(zhēng)曲線，借助計(jì)算機(jī)利用對(duì)4-參數(shù)邏輯方程的非線性回歸分析(INPLOT程序；GraphPad Software，San Diego，Calif.)或DeLean等人的ALLFIT程序(ALLFIT，版本2.7(NIH，Bethesda，Md.20892))對(duì)所述競(jìng)爭(zhēng)曲線進(jìn)行分析。Munson和Rodbard(1980)Anal.Biochem.107220-239。
對(duì)比目魚(yú)肌中的淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑/類似物的生物學(xué)活性的測(cè)定可利用前述方法進(jìn)行(Leighton等人(1988)Nature 335632-635；Cooper等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci. USA 857763-7766)，在該測(cè)定中可以通過(guò)測(cè)量對(duì)胰島素-刺激的糖原合成的抑制來(lái)評(píng)估淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑活性。簡(jiǎn)言之，示例性方法包括從禁食12小時(shí)的雄性Wistar大鼠制得的比目魚(yú)肌條。在附著到不銹鋼夾子上之前將肌腱結(jié)扎。將肌肉條在含有3.5ml Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液、7mM N-2-羥乙基-哌嗪(peperazine)-N’-2-乙磺酸，pH7.4和5.5mM丙酮酸鹽的錐形瓶中預(yù)溫育。密封瓶，并持續(xù)充入比率為19∶1(v/v)的O2和CO2。肌肉于37℃下在置于振蕩水浴的該培養(yǎng)基中預(yù)溫育30分鐘后，將肌肉條轉(zhuǎn)移到含有相同添加了[U-14C]葡萄糖(0.5μCi/ml)和胰島素(100μU/ml)的培養(yǎng)基(除丙酮酸鹽外)的類似小瓶中。密封瓶，并在1小時(shí)溫育的初始15分鐘內(nèi)再次充氣。溫育階段結(jié)束時(shí)，將肌肉吸干(blotted)并在液氮中快速冷凍。溫育培養(yǎng)基中的乳酸濃度可通過(guò)分光光度法測(cè)定，并測(cè)量糖原中摻入的[U-14C]葡萄糖。淀粉狀蛋白毒素拮抗劑活性可通過(guò)測(cè)量100nM大鼠淀粉狀蛋白毒素和淀粉狀蛋白毒素拮抗劑存在下胰島素-刺激的糖原合成的恢復(fù)來(lái)評(píng)估。
測(cè)定胃排空率的方法公開(kāi)于，例如，Young等人中。在酚紅法中，有意識(shí)的大鼠通過(guò)管飼法接受含有甲基纖維素和酚紅指示劑的acoloric gel。管飼法后二十分鐘，用三氟氯溴甲烷麻醉動(dòng)物，使胃部暴露并在幽門和食道下端括約肌處夾住，取出并置入堿性溶液中。胃容量可得自堿性溶液中的酚紅強(qiáng)度，后者可通過(guò)560nm波長(zhǎng)處的吸光度來(lái)測(cè)量。在氚標(biāo)記葡萄糖法中，用溶于水中的氚標(biāo)記葡萄糖管飼有意識(shí)的大鼠。在尾部輕柔限制大鼠，尾尖用利多卡因麻醉。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集從尾血中分離的血漿中的氚并在β計(jì)數(shù)器中檢測(cè)。測(cè)試化合物通常在管飼法前約一分鐘施用。
淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑和拮抗劑化合物在受體結(jié)合測(cè)定中可表現(xiàn)小于約1至5nM數(shù)量級(jí)的活性，優(yōu)選小于約1nM和更優(yōu)選小于約50pM。在比目魚(yú)肌測(cè)定中，淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑化合物可表現(xiàn)小于約1至10微摩爾數(shù)量級(jí)的EC50值。在比目魚(yú)肌測(cè)定中，淀粉狀蛋白毒素拮抗劑可表現(xiàn)小于約1至2微摩爾數(shù)量級(jí)的IC50值。在胃排空測(cè)定中，優(yōu)選的激動(dòng)劑化合物顯示小于100μg/大鼠數(shù)量級(jí)的ED50值。拮抗劑化合物在胃排空測(cè)定中將不顯示效果或顯示相反的效果。
在制備化合物的一種示例方法中，本發(fā)明的化合物可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的固相肽合成技術(shù)來(lái)制備，并優(yōu)選使用自動(dòng)或半自動(dòng)肽合成儀。一般，用這樣的技術(shù)，在比如二環(huán)己基碳二亞胺和1-羥基苯并三唑這樣的偶聯(lián)劑以及比如二異丙基乙胺這樣的堿存在下，α-N-氨基甲酰保護(hù)的氨基酸和附著于位于樹(shù)脂上的生長(zhǎng)中的肽鏈的氨基酸于室溫下在比如二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷這樣的惰性溶劑中偶聯(lián)。用比如三氟乙酸或哌啶這樣的試劑從所得肽-樹(shù)脂上除去α-N-氨基甲酰保護(hù)基，并重復(fù)偶聯(lián)反應(yīng)，其中下一個(gè)所需N-保護(hù)氨基酸添加到肽鏈上。適宜的N-保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，其中叔丁氧羰基(t-butyloxycarbonyl)(tBoc)和芴基甲氧羰基(Fmoc)是本文優(yōu)選的。其它合成或表達(dá)淀粉狀蛋白毒素和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑以及純化它們的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括毒蜥外泌肽激素和毒蜥外泌肽激動(dòng)劑。天然毒蜥外泌肽激素是本領(lǐng)域已知的，功能性的肽類似物和衍生物也是本領(lǐng)域已知的。本文中描述了特定的天然肽、肽類似物和衍生物，然而應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，任何已知的表現(xiàn)本領(lǐng)域已知的激素活性的毒蜥外泌肽均可用于本發(fā)明。示例性的毒蜥外泌肽包括毒蜥外泌肽-3(His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu GluGlu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro SerSer Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ ID NO181))和毒蜥外泌肽-4(HisGly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu GluAla Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser SerGly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ ID NO182))。
本領(lǐng)域已知的任何毒蜥外泌肽類似物或衍生物均可用于本發(fā)明。在一種實(shí)施方案中，毒蜥外泌肽類似物和衍生物具有天然毒蜥外泌肽的至少一種激素活性。在特定實(shí)施方案中，該毒蜥外泌肽類似物是天然毒蜥外泌肽能特異性結(jié)合的受體的激動(dòng)劑。毒蜥外泌肽化合物包括毒蜥外泌肽類似物，其中一個(gè)或多個(gè)天然存在的氨基酸被除去或者被另一種氨基酸替代。如本領(lǐng)域已知的，這樣的毒蜥外泌肽類似物可以是酰胺化的或者是酸形式。
在一種實(shí)施方案中，毒蜥外泌肽類似物與天然或天然存在的毒蜥外泌肽相比可具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、倒置或添加。因此，與天然存在的毒蜥外泌肽，例如，毒蜥外泌肽-4相比，毒蜥外泌肽類似物的氨基酸序列可具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、添加或缺失。在一種實(shí)施方案中，與比如毒蜥外泌肽-4這樣的天然存在的毒蜥外泌肽相比，毒蜥外泌肽類似物具有帶有約30或更少、25或更少、20或更少、15或更少、10或更少、5或更少、4或更少、3或更少、2或更少、或1或更少的取代、添加或缺失的氨基酸序列。
示例性毒蜥外泌肽化合物包括毒蜥外泌肽-4的激動(dòng)劑類似物，包括但不限于，14Leu，25Phe-毒蜥外泌肽-4(His Gly Glu Gly Thr Phe ThrSer Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe IleGlu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ ID NO183)、5Ala，14Leu，25Phe-毒蜥外泌肽-4(His Gly Glu GlyAla Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val ArgLeu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala ProPro Pro Ser(SEQ ID NO184))、和14Leu，22Ala，25Phe-毒蜥外泌肽-4(His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu GluGlu Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly ProSer Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ ID NO185))。其它的示例性毒蜥外泌肽類似物包括，但不限于，毒蜥外泌肽-4(1-30)(His GlyGlu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly(SEQ IDNO186))、毒蜥外泌肽-4(1-28)酰胺(His Gly Glu Gly Thr Phe ThrSer Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe IleGlu Trp Leu Lys Asn-NH2(SEQ ID NO187))、14Leu，25Phe毒蜥外泌肽-4(1-28)酰胺(His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser LysGln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2(SEQ ID NO188))、和14Leu，22Ala，25Phe毒蜥外泌肽-4(1-28)酰胺(His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu GluGlu Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2(SEQ IDNO189))。
另外的示例性毒蜥外泌肽激動(dòng)劑描述于第10/181,102號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)和第PCT/US98/16387號(hào)PCT申請(qǐng)，二者都要求了1997年8月8日提交的第No.60/055,404號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)的利益，所有申請(qǐng)均引入本文作為參考。示例性毒蜥外泌肽激動(dòng)劑包括第10/181,102號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)和第PCT/US98/16387號(hào)PCT申請(qǐng)中的式(I)、式(II)和式(III)的化合物。
其它的毒蜥外泌肽激動(dòng)劑描述于第09/554,533號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)和第PCT/US98/24210號(hào)PCT申請(qǐng)，兩者都要求了1997年11月14日提交的第60/065,442號(hào)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的利益，所有申請(qǐng)均引入本文作為參考。其它的毒蜥外泌肽激動(dòng)劑描述于第09/554,531號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)和第PCT/US98/24273號(hào)PCT申請(qǐng)，兩者都要求了1997年11月14日申請(qǐng)的第60/066,029號(hào)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的利益，所有申請(qǐng)均引入本文作為參考。其它的毒蜥外泌肽激動(dòng)劑描述于1997年8月8日提交的第PCT/US97/14199號(hào)PCT申請(qǐng)，它是1996年8月8日提交的第08/694,954號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)的部分繼續(xù)申請(qǐng)，兩者均引入本文作為參考。其它的毒蜥外泌肽激動(dòng)劑描述于第6,956,026號(hào)美國(guó)專利，其要求了1997年1月7日提交的第60/034,905號(hào)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，兩者均引入本文作為參考。其它的毒蜥外泌肽類似物和衍生物描述于2003年12月19日提交的US 2004/0209803 A1中，其引入本文作為參考。
本發(fā)明中的抗肥胖劑還包括睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)、CNTF-相關(guān)多肽、修飾的CNTF多肽、CNTF激動(dòng)劑和CNTF類似物，包括但不限于AXOKINE(Regeneron)。適于本發(fā)明方法中使用的含有CNTF、CNTF-相關(guān)多肽和CNTF和/或CNTF-相關(guān)多肽的組合物是本領(lǐng)域已知的。CNTF多肽、CNTF-相關(guān)多肽、修飾的CNTF多肽、CNTF激動(dòng)劑、類似物、衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑以前已經(jīng)描述于，例如，第6,680,291和6,767,894號(hào)美國(guó)專利和第WO 94/09134、WO 98/22128和WO 99/43813號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本中，其全文引入本文作為參考。
本發(fā)明的抗肥胖劑還包括5-羥色胺(5HT)轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，包括但不限于，帕羅西汀、氟西汀、氟苯丙胺、氟伏沙明、舍曲林(sertraline)和依米帕明。本發(fā)明的抗肥胖劑還包括選擇性5-羥色胺重?cái)z取抑制劑，包括但不限于右旋氟苯丙胺、氟西汀、西布茶明(例如，MERIDIA)和第6,365,633號(hào)美國(guó)專利以及第WO 01/27060和WO01/162341號(hào)PCT專利申請(qǐng)公開(kāi)文本中描述的那些，其全文引入本文作為參考。這樣的5HT轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑和5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、類似物、衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑在之前已經(jīng)描述過(guò)了。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括選擇性5-羥色胺激動(dòng)劑和選擇性5-HT2C受體激動(dòng)劑，包括但不限于，第3,914,250號(hào)美國(guó)專利；和第WO 02/36596、WO 02/48124、WO 02/10169、WO 01/66548、WO02/44152；WO 02/51844、WO 02/40456和WO 02/40457號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本，其全文引入本文作為參考。這樣的選擇性5-羥色胺激動(dòng)劑和5-HT2C受體激動(dòng)劑、含有這樣的激動(dòng)劑組合物、以及適于本發(fā)明方法中使用的施用途徑是本領(lǐng)域已知的。參見(jiàn)，例如，Halford等人(2005)Curr.Drug Targets 6201-213和Weintraub等人(1984)Arch.Intern.Med.1441143-1148。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括中央大麻素受體(CB-1受體)的拮抗劑/逆激動(dòng)劑，包括但不限于，利莫那班(Sanofi Synthelabo)、和SR-147778(Sanofi Synthelabo)。CB-1拮抗劑/逆激動(dòng)劑，衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑之前已經(jīng)描述于，例如，第6,344,474、6,028,084、5,747,524、5,596,106、5,532,237、4,973,587、5,013,837、5,081,122、5,112,820、5,292,736、5,624,941號(hào)美國(guó)專利；第EP-656 354和EP-658546號(hào)歐洲專利申請(qǐng)；和第WO96/33159、WO 98/33765、WO 98/43636、WO 98/43635、WO 01/09120、WO 98/31227、WO 98/41519、WO 98/37061、WO 00/10967、WO00/10968、WO 97/29079、WO 99/02499、WO 01/58869和WO02/076949號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本中，其全文引入本文作為參考。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括黑皮質(zhì)素和黑皮質(zhì)素激動(dòng)劑。黑皮質(zhì)素是來(lái)自阿黑皮素原基因的肽，其包括α-黑素細(xì)胞-刺激激素(α-MSH)和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)，且五種黑皮質(zhì)素受體MC1-5R是已知的。MC4R在能量平衡和肥胖中起作用。參見(jiàn)，例如，Anderson等人(2001)Expert Opin.Patents 111583-1592，Speake等人(2002)Expert Opin.Ther.Patents 121631-1638，Bednarek等人(2004)Expert Opin.Ther.Patents 14327-336。黑皮質(zhì)素激動(dòng)劑，包括但不限于，MC4R激動(dòng)劑，且適于本發(fā)明方法使用的含有這樣的激動(dòng)劑的組合物是本領(lǐng)域已知的。MCR激動(dòng)劑、MC4R激動(dòng)劑、衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑之前已描述于，例如，以下PCT專利公開(kāi)文本中，其全文引入本文作為參考WO03/007949、WO 02/068388、WO 02/068387、WO 02/067869、WO03/040117、WO 03/066587、WO 03/068738、WO 03/094918和WO03/031410。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括代謝型谷氨酸亞型5受體(mGluR5)拮抗劑，包括但不限于，比如2-甲基-6-(苯乙炔基)-吡啶(MPEP)和(3-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)乙炔基]吡啶)(MTEP)這樣的化合物和那些描述于Anderson等人(2003)J.Eur.J.Pharmacol.47335-40；Cosford等人(2003)Bioorg.Med.Chem.Lett.13(3)351-4；和Anderson等人(2002)J.Pharmacol.Exp.Ther.3031044-1051中的化合物。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括托吡酯(TOPIMAX(OrthoMcNeil Pharmaceuticals)，示為抗抽搐劑和抗抽搐劑，但也顯示出提高體重減輕。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括神經(jīng)肽Y1(NPY1)拮抗劑和NPY5拮抗劑。NPY1和NPY5拮抗劑是本領(lǐng)域已知的。參見(jiàn)，例如Duhault等人(2000)Can.J Physiol.Pharm.78173-185，和第6,124,331、6,214,853和6,340,683號(hào)美國(guó)專利。NPY1和NPY5拮抗劑、衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑之前已描述過(guò)。可用于本發(fā)明的NPY1拮抗劑，包括第6,001,836號(hào)美國(guó)專利；和第WO96/14307、WO 01/23387、WO 99/51600、WO 01/85690、WO 01/85098、WO 01/85173和WO 01/89528號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本，其全文引入本文作為參考?？捎糜诒景l(fā)明的NPY5拮抗劑，包括但不限于，第6,140,354、6,191,160、6,258,837、6,313,298、6,337,332、6,329,395、6,340,683、6,326,375和6,335,345號(hào)美國(guó)專利；第EP-01010691和EP-01044970歐洲專利；和第WO 97/19682、WO 97/20820、WO97/20821、WO 97/20822、WO 97/20823、WO 98/27063、WO 00/64880、WO 00/68197、WO 00/69849、WO 01/09120、WO 01/85714、WO01/85730、WO 01/07409、WO 01/02379、WO 01/02379、WO 01/23388、WO,01/23389、WO 01/44201、WO 01/62737、WO 01/62738、WO01/09120、WO 02/22592、WO 0248152、WO 02/49648和WO 01/14376號(hào)PCT專利公開(kāi)文本中描述的那些化合物。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括黑色素濃縮激素(MCH)拮抗劑，其包括比如T-226296(Takeda)這樣的黑色素濃縮激素1受體(MCH1R)拮抗劑和黑色素濃縮激素2受體(MCH2R)拮抗劑。MCH受體拮抗劑，衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑之前已描述于，例如，第2005/0009815、2005/0026915、2004/0152742、2004/0209865號(hào)美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)文本；第WO01/82925、WO 01/87834、WO 02/06245、WO 02/04433和WO 02/51809號(hào)PCT專利申請(qǐng)公開(kāi)文本；和第JP 13226269號(hào)日本專利申請(qǐng)中，其全文引入本文作為參考。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括阿片樣物質(zhì)拮抗劑，包括但不限于描述于第WO 00/21509號(hào)PCT申請(qǐng)中的那些。可用于本發(fā)明的特定阿片樣物質(zhì)拮抗劑包括但不限于，納美芬(REVEX)、3-甲氧基納曲酮納洛酮(3-methoxynaltrexone naloxone)、納曲酮、納洛肼(naloxonazine)、β-funaltrexamine、δ1([D-Ala2，Leu5，Cys6]-英腦啡肽(DALCE)、異硫氰酸納屈吲哚(naltrindole isothiocyanate)和nor-binaltorphamine。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括食欲肽拮抗劑，包括但不限于，描述于第WO 01/96302、WO 01/68609、WO 02/51232和WO 02/51838號(hào)PCT專利申請(qǐng)中的那些。可用于本發(fā)明的特定食欲肽拮抗劑包括但不限于，SB-334867-A。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括神經(jīng)肽Y2(NPY2)激動(dòng)劑，包括但不限于，比如PYY3-36(例如，Batterham等人(2003)Nature418650-654)、NPY3-36這樣的化合物，和其它比如N乙?；鵞Leu(28，31)]NPY 24-36(White-Smith等人(1999)Neuropeptides33526-533，TASP-V(Malis等人(1999)Br.J.Pharmacol.126989-996)、環(huán)-(28/32)-Ac-[Lys28-Glu32]-(25-36)-pNPY(Cabrele等人(2000)J.Pept.Sci. 697-122)這樣的Y2激動(dòng)劑。本發(fā)明的抗肥胖劑還包括神經(jīng)肽Y4(NPY4)激動(dòng)劑，包括但不限于，比如胰肽(PP)(例如，Batterham等人(2003)J.Clin.Endocrinol.Metab.883989-3992)這樣的化合物和比如1229U91(Raposinho等人(2000)Neuroendocrinology 712-7)這樣的其他Y4激動(dòng)劑。NPY2激動(dòng)劑和NPY4激動(dòng)劑、衍生物、制品、制劑、藥物組合物、劑量和施用途徑之前已描述于，例如，第2002/0141985號(hào)美國(guó)專利公開(kāi)文本和第WO2005/077094號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本中。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括組胺3(H3)拮抗劑/逆激動(dòng)劑，包括但不限于，描述于第WO 02/15905號(hào)PCT申請(qǐng)中的那些，O-[3-(1H-咪唑-4-基)丙醇]氨基甲酸酯(Kiec-Kononowicz等人(2000)Pharmazie 55349-355)、含哌啶的組胺H3-受體拮抗劑(Lazewska等人(2001)Pharmazie 56927-932)、二苯酮衍生物和相關(guān)化合物(Sasse等人(2001)Arch.Pharm.(Weinheim)33445-52)、取代的N-苯基氨基甲酸酯(Reidemeister等人(2000)Pharmazie 5583-86)、和proxifan衍生物(Sasse等人(2000)J.Med.Chem.433335-3343)。用于本發(fā)明的特定H3拮抗劑/逆激動(dòng)劑包括但不限于，thioperamide、3-(1H-咪唑-4-基)丙基N-(4-戊烯基)氨基甲酸酯、clobenpropit、iodophenpropit、imoproxifan和GT2394(Gliatech)。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括縮膽囊肽(CCK)和CCK激動(dòng)劑。用于本發(fā)明的縮膽囊肽-A(CCK-A)激動(dòng)劑包括但不限于，描述于第5,739,106號(hào)美國(guó)專利中的那些。特定CCK-A激動(dòng)劑包括，但不限于，AR-R 15849、GI 181771、JMV-180、A-71378、A-71623和SR146131。
用于本發(fā)明的抗肥胖劑還包括比如描述于第WO 01/87335和WO 02/08250號(hào)PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本中的那些的生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑。生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑也稱為GHS(生長(zhǎng)激素促分泌素受體)拮抗劑。因此本發(fā)明的組合物和方法包括用GHS拮抗劑取代生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑。
劑量/制劑抗肥胖劑和重量誘導(dǎo)劑(本文中這一部分稱作“化合物”)可以以單劑或多劑，單獨(dú)施用或與藥學(xué)可接受載體或賦形劑組合施用。這些藥物化合物可與藥學(xué)可接受載體或稀釋劑以及任何其他已知的佐劑和賦形劑根據(jù)比如Remington’s Pharmaceutical Sciences by E.W.Martin中公開(kāi)的常規(guī)技術(shù)配制。亦參見(jiàn)Wang等人(1988)J.ofParenteral Sci.And Tech.，Technical Report No.10，Supp.422S。
通常，化合物可配制成向患者施用的穩(wěn)定安全的藥物組合物。預(yù)期用于本發(fā)明方法的藥物制劑可包含約0.01至1.0％(w/v)、在特定情況中0.05至1.0％的化合物，使最終組合物的pH為約3.0至約7.0的約0.02至0.5％(w/v)乙酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽或谷氨酸鹽緩沖液；約1.0至10％(w/v)的碳水化合物或多元醇強(qiáng)壯劑(tonicifier)和，任選地，約0.005至1.0％(w/v)選自間甲酚，芐醇，甲基、乙基、丙基和丁基對(duì)羥基苯甲酸酯和苯酚的防腐劑。如果所配制的肽包括在多次使用的產(chǎn)品中，則這樣的防腐劑通常包括在內(nèi)。
在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物制劑可包含一定濃度范圍的化合物，例如，在該實(shí)施方案中為約0.01％至約98％w/w，或?yàn)榧s1至約98％w/w，或優(yōu)選80％至90％w/w，或優(yōu)選約0.01％至約50％w/w，或更優(yōu)選約10％至約25％w/w?？梢允褂米懔康挠糜谧⑸溆盟垣@得所需的溶液濃度。
如果需要的話，還可以存在比如氯化鈉這樣的附加的強(qiáng)壯劑(tonicifying agent)，以及其它的已知賦形劑。在一些情況下，這樣的賦形劑對(duì)于維持化合物的整體張度是有用的。目前描述的制劑中可包含各種濃度的賦形劑。例如，可包括濃度范圍為約0.02％至約20％w/w，優(yōu)選約0.02％至0.5％w/w，約0.02％至約10％w/w，或約1％至約20％w/w的賦形劑。此外，與目前的制劑本身相似，所包括的賦形劑可以是固體(包括粉末)、液體、半固體或凝膠形式。
藥物制劑可以以各種形式組成，例如，固體、液體、半固體或液體。術(shù)語(yǔ)“固體”，如本文所使用的，意指包括該術(shù)語(yǔ)的所有正常用途，包括例如，粉末和凍干制劑。當(dāng)前描述的制劑可以是凍干的。
術(shù)語(yǔ)緩沖液、緩沖溶液和緩沖的溶液，當(dāng)關(guān)于氫離子濃度或pH使用時(shí)，指系統(tǒng)，尤其是水性溶液，在添加酸或堿或用溶劑稀釋后抵抗pH變化的能力。緩沖的溶液的特征，是存在弱酸和弱酸的鹽、或弱堿和弱堿的鹽，所述溶液在加入酸或堿后發(fā)生小的pH變化。前述系統(tǒng)的例子是乙酸和乙酸鈉。pH的改變是輕微的，只要所加入的水合氫離子或羥離子不超過(guò)緩沖系統(tǒng)將其中和的能力。
如本文所述，多種液體載體適用于肽抗肥胖劑的制劑中，例如，水或水性/有機(jī)溶劑混合物或懸浮液。
當(dāng)是液體形式時(shí)，用于本發(fā)明的肽制劑的穩(wěn)定性通過(guò)將制劑的pH維持在約3.0至約7.0的范圍內(nèi)而得到增強(qiáng)。在特定實(shí)施方案中，制劑的pH被維持在約3.5至5.0，或約3.5至6.5的范圍內(nèi)，在一些實(shí)施方案中為約3.7至4.3，或約3.8至4.2。在一些實(shí)施方案中，pH可以是約4.0。盡管不尋求受該理論的限制，但目前所理解的是，若藥物制劑的pH超過(guò)5.5，則會(huì)加速肽的化學(xué)降解由此使得保存期限小于約兩年。
在特定實(shí)施方案中，抗肥胖劑的緩沖液是乙酸鹽緩沖液(優(yōu)選終制劑濃度為約1-5至約60mM)、磷酸鹽緩沖液(優(yōu)選終制劑濃度為約1-5至約30mM)或谷氨酸鹽緩沖液(優(yōu)選終制劑濃度為約1-5至約60mM)。在一些實(shí)施方案中，緩沖液是乙酸鹽(優(yōu)選終制劑濃度為約5至約30mM)。
抗肥胖劑制劑中可包括穩(wěn)定劑，但重要的是，它不是必需的。然而，如果包括的話，用于本發(fā)明實(shí)踐的穩(wěn)定劑是碳水化合物和多元醇。用于本發(fā)明實(shí)踐的合適穩(wěn)定劑是約1.0至10％(w/v)的碳水化合物和多元醇。多元醇和碳水化合物在其主鏈上共有相同的特征，也即，-CHOH-CHOH-，其負(fù)責(zé)穩(wěn)定蛋白質(zhì)。多元醇包括比如山梨糖醇、甘露糖醇、甘油和聚乙二醇(PEGs)這樣的化合物。這些化合物是直鏈分子。另一方面，比如甘露糖、核糖、蔗糖、果糖、海藻糖、麥芽糖、肌醇和乳糖這樣的碳水化合物是可包含酮基或醛的環(huán)形分子。已證實(shí)這兩類化合物對(duì)于穩(wěn)定蛋白質(zhì)不被由升高的溫度和凍融或冷凍干燥過(guò)程引起的變性有效。適宜的碳水化合物包括半乳糖、阿拉伯糖、乳糖或任何其他對(duì)糖尿病患者無(wú)不利作用的碳水化合物，也即，碳水化合物不被代謝以形成不可接受的血液中高濃度的葡萄糖。這樣的碳水化合物在本領(lǐng)域中已知適于糖尿病。蔗糖和果糖適用于非糖尿病應(yīng)用(例如用于治療肥胖)的化合物。
在特定實(shí)施方案中，如果包括了穩(wěn)定劑，就用比如山梨糖醇、甘露糖醇、肌醇、甘油、木糖醇和聚丙二醇/聚乙二醇共聚物以及分子量為200、400、1450、3350、4000、6000和8000的各種聚乙二醇這樣的多元醇來(lái)穩(wěn)定化合物。在一些實(shí)施方案中，甘露糖醇是優(yōu)選的多元醇。本發(fā)明的凍干制劑的另一個(gè)有用的特征，是用與用于維持其穩(wěn)定性的相同的制劑組分來(lái)維持本文所述凍干制劑的張度。在一些實(shí)施方案中，甘露糖醇是用于此目的的優(yōu)選多元醇。
美國(guó)藥典(The United States Pharmacopeia，USP)規(guī)定，多劑量容器所含的制品中必須添加制菌或制真菌濃度的抗微生物劑?？刮⑸飫┍仨氃谑褂脮r(shí)以足夠的濃度存在以預(yù)防在用皮下注射針和注射器，或用其他的比如筆注射器這樣的侵入性送遞方式，抽出部分內(nèi)容物時(shí)不經(jīng)意導(dǎo)入制品中的微生物的繁殖?？刮⑸飫?yīng)當(dāng)進(jìn)行評(píng)估以確保其與制劑中所有其他組分的相容性，也要評(píng)估它們?cè)诳傊苿┲械幕钚砸源_保在一種制劑中有效的特定試劑在另一種制劑中不會(huì)無(wú)效。具體抗微生物劑在一種制劑中有效而在另一種制劑中無(wú)效是不常見(jiàn)的。
在通常的藥學(xué)概念中，防腐劑是預(yù)防或抑制微生物生長(zhǎng)且可為此目的添加到藥物制劑中以避免該由微生物造成的對(duì)該制劑的隨后損害的物質(zhì)。盡管防腐劑的量不大，但它仍然會(huì)影響肽的總體穩(wěn)定性。
盡管用于藥物組合物的防腐劑可為0.005至1.0％(w/v)，但在一些實(shí)施方案中各防腐劑單獨(dú)或與其他防腐劑組合的范圍是芐醇(0.1-1.0％)或間甲酚(0.1-0.6％)或苯酚(0.1-0.8％)或甲基(0.05-0.25％)和乙基或丙基或丁基(0.005％-0.03％)對(duì)羥基苯甲酸酯的組合。對(duì)羥基苯甲酸酯是對(duì)羥基苯甲酸的低級(jí)烷基酯。各防腐劑的詳細(xì)描述列于Remington’s Pharmaceutical Sciences by Martin。
普蘭林肽，人25，28，29Pro-淀粉狀蛋白毒素，以液體形式存在于玻璃容器中時(shí)不具有吸附于玻璃上的傾向，因此，不需要表面活性劑來(lái)進(jìn)一步穩(wěn)定該藥物制劑。然而，對(duì)于處于液體形式時(shí)具有這種傾向的化合物，在其制劑中應(yīng)當(dāng)使用表面活性劑。這些制劑之后可被凍干。表面活性劑常導(dǎo)致疏水破壞和鹽橋分離的蛋白質(zhì)變性。由于表面活性劑部分與蛋白質(zhì)的活性位點(diǎn)之間的強(qiáng)烈相互作用，相對(duì)低濃度的表面活性劑都會(huì)發(fā)揮潛在的變性活性。然而，對(duì)這一相互作用的明智利用可使蛋白質(zhì)抵抗界面或表面變性而穩(wěn)定。能夠進(jìn)一步穩(wěn)定肽的表面活性劑可任選地以總制劑的約0.001至0.3％(w/v)存在，且包括聚山梨醇酯80(也即，聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯)、CHAPS(也即，3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲氨基]1-丙磺酸鹽)、Brij(例如，Brij35，其為(聚氧乙烯(23)十二烷基醚)、泊洛沙姆(poloxamer)，或另一種非離子表面活性劑。
根據(jù)所選擇的強(qiáng)壯劑加入氯化鈉或其他的鹽來(lái)調(diào)節(jié)藥物制劑的張度，也是所需的。然而，這是任選的，且依賴于所選擇的特定制劑。腸胃外制劑優(yōu)選可以是等張或基本等張的。
腸胃外產(chǎn)品的優(yōu)選載體是水。質(zhì)量適于腸胃外施用的水可通過(guò)蒸餾或反滲制備。注射用水是用于藥物制劑的優(yōu)選水性載體。
藥物制劑中有可能存在其他的成分。這樣的附加成分可包括，例如，濕潤(rùn)劑、乳化劑、油、抗氧化劑、填充劑、張度調(diào)節(jié)劑、螯合劑、金屬離子、油質(zhì)載體、蛋白質(zhì)(例如，人血清清蛋白、明膠或蛋白質(zhì))和兩性離子(例如，比如甜菜堿、?；撬帷⒕彼?、甘氨酸、賴氨酸和組氨酸這樣的氨基酸)。此外，聚合物溶液或與聚合物的混合物提供肽的受控釋放的機(jī)會(huì)。這樣的附加成分，當(dāng)然，不應(yīng)當(dāng)影響本發(fā)明藥物制劑的總體穩(wěn)定性。
容器也是注射制劑的整體部分且可被考慮為組分，因?yàn)闆](méi)有容器是完全惰性的，或者沒(méi)有容器不會(huì)以某種方式影響其所包含的液體，尤其是該液體為水性時(shí)。因此，對(duì)特定注射用容器的選擇必須基于對(duì)容器和溶液組成以及將用于的治療的考慮。如果需要的話，還可以利用硼硅酸鹽玻璃，例如，I型Wheaton硼硅酸鹽玻璃#33(WheatonType I-33)或其等同物(Wheaton Glass Co.)，來(lái)使得肽對(duì)小瓶玻璃表面的吸附最小化。類似的硼硅酸鹽玻璃小瓶和可接受用于生產(chǎn)的筒的其他商家包括Kimbel Glass Co.、West Co.、Bünder Glas GMBH和Forma Vitrum。可通過(guò)在Wheaton Type I-33硼硅酸鹽血清小瓶中在5％甘露糖醇和0.02％Tween 80存在下配制和凍干終濃度為0.1mg/ml和10mg/ml的化合物來(lái)穩(wěn)定化合物的生物學(xué)和化學(xué)特性。
對(duì)于通過(guò)注射送遞的，為了使皮下注射器的針插入多劑量小瓶中并且在抽出針后立即再次密封，各小瓶的開(kāi)口端優(yōu)選用被鋁帶定位的橡膠基密封。
玻璃小瓶的塞子，比如West 4416/50，4416/50(特氟隆貼面的)和4406/40，Abbott 5139，或任何其他的等同塞子，可用作注射用藥物的閉塞物。對(duì)于含有肽抗肥胖劑的制劑，這些塞子與肽以及制劑中的其他組分相容。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，利用患者使用模式進(jìn)行測(cè)試時(shí)這些塞子通過(guò)了塞子完整性測(cè)試，例如，塞子可承受至少約100次注射。作為選擇，為之后的重構(gòu)，肽可在小瓶、注射器或筒中凍干。本發(fā)明的液體制劑可填充入一室或兩室的筒，或一室或兩室的注射器。
上述藥物制劑的各組分是本領(lǐng)域已知的，且描述于Pharmaceutical Dosage FormsParenteral Medications，Vol.1，2nded.，Avis等人Ed.，Mercel Dekker，New York，N.Y.1992(其全文引入本文作為參考)。
上述液體制劑的生產(chǎn)過(guò)程通常涉及化合、無(wú)菌過(guò)濾和填充步驟?；系牟襟E包括將成分以特定順序(防腐劑，之后是穩(wěn)定劑/強(qiáng)壯劑、緩沖液和肽)溶解或同時(shí)溶化。
可替代的制劑，例如，非腸胃外，可無(wú)需滅菌。然而，如果滅菌是需要的或者必需的，則任何適宜的滅菌方法均可用于開(kāi)發(fā)本發(fā)明的肽藥物制劑。一般的滅菌方法包括過(guò)濾、蒸汽(濕熱)、干熱、充氣(例如，環(huán)氧乙烷、甲醛、二氧化氯、氧化丙烯、β-丙醇酸內(nèi)酯、臭氧、三氯硝基甲烷、過(guò)乙酸甲基溴等)、暴露于輻射源以及無(wú)菌操作。過(guò)濾是本發(fā)明液體制劑的優(yōu)選滅菌方法。無(wú)菌過(guò)濾包括通過(guò)可串聯(lián)連接的0.45μm和0.22μm(1或2)的過(guò)濾。過(guò)濾后，將溶液填充入適宜的小瓶或容器。
在一種實(shí)施方案中，抗肥胖劑通過(guò)外周施用給受試者。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的液體藥物制劑意欲是為腸胃外施用的。適宜的施用途徑包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、鞘內(nèi)等。在一些實(shí)施方案中，皮下施用途徑是優(yōu)選的。在特定實(shí)施方案中，粘膜送遞也是優(yōu)選的。這些途徑包括，但不限于，經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)舌下、經(jīng)肺和經(jīng)口腔途徑，這些途徑可包括液體、半固體或固體形式的肽的施用。對(duì)于含有肽抗肥胖劑的制劑，由于與腸胃外送遞相比，通過(guò)這些途徑的施用具有降低的生物利用率，所以通過(guò)這些途徑的施用需要基本上更多的肽以獲得所需的生物學(xué)效果。此外，通過(guò)形成多聚微囊、基質(zhì)、溶液、植入體和裝置，并將它們通過(guò)腸胃外途徑或外科手術(shù)途徑進(jìn)行施用，可實(shí)現(xiàn)腸胃外的受控釋放送遞。受控釋放制劑的例子描述于第6,368,630、6,379,704和5,766,627號(hào)美國(guó)專利(其引入本文作為參考)。這些制劑形式由于一些肽在多聚基質(zhì)和裝置中的截留可能會(huì)具有較低的生物利用率。參見(jiàn)，例如，第6,379,704、6,379,703和6,296,842號(hào)美國(guó)專利。
化合物可以以包含一定量帶或不帶胰島素或葡萄糖(或葡萄糖源)的化合物的劑量單位形式提供，所述量在一劑或多劑中有效控制生長(zhǎng)素釋放肽的作用?；衔镉糜谥委熒L(zhǎng)素釋放肽-相關(guān)疾病或病癥的治療有效量是足以治療、預(yù)防或改善不期望的生長(zhǎng)素釋放肽水平的生理學(xué)作用的量。
如同將被本領(lǐng)域人員所認(rèn)識(shí)到的，抗肥胖劑的有效量將隨著包括患者年齡和體重、患者的身體條件、所治療的狀況、以及其他因素在內(nèi)的許多因素而變化?？狗逝謩┑挠行Я窟€將隨著所施用的特定組合而變化。如本文所述，試劑的組合施用將使得任一所施用試劑的有效量能夠降低。
然而，通常劑量可包括每天從下限約1μg、5μg、10μg、50μg至100μg至上限約100μg、500μg、1mg、5mg、10mg、50mg或100mg的藥物化合物。還預(yù)期了其他劑量范圍，比如每劑0.1μg至1mg化合物。每日劑量可以以不連續(xù)的單位劑量送遞，只要在24小時(shí)時(shí)間段或在所述24小時(shí)的任何部分內(nèi)持續(xù)。每日的給藥數(shù)可為每日1至約4次，盡管可以更多。連續(xù)送遞可以是連續(xù)輸注的形式。示例性的劑量和輸注率包括0.005nmol/kg至約20nmol/kg/不連續(xù)劑量或約0.01/pmol/kg/分鐘至約10pmol/kg/分鐘連續(xù)輸注。這些劑量和輸注可通過(guò)靜脈內(nèi)施用(i.v.)或皮下施用(s.c.)來(lái)送遞。示例性的經(jīng)靜脈內(nèi)給予的藥物組合物的總劑量/送遞可為每日約2μg至約8mg，而經(jīng)皮下給予的藥物組合物的總劑量/送遞可為每日約6μg至約6mg。
苗條蛋白和苗條蛋白衍生物可以，例如，以約0.01mg/kg至約20mg/kg，在一些情況下，約0.01mg/kg至約0.3mg/kg的日劑量進(jìn)行施用。施用可以是通過(guò)單劑或分開(kāi)的劑次注射。
西布茶明可以，例如，以約0.01mg/kg至約10mg/kg的日劑量，在一些情況下約0.01mg/kg至約1mg/kg的日劑量，以單劑或每日2至3次分開(kāi)的劑次，或以持續(xù)釋放形式施用。在一些情況中，西布茶明可以以5mg、10mg、15mg、20mg或30mg的單次日劑量經(jīng)口施用。
利莫那班可以，例如，以約0.01mg/kg至約8mg/kg體重的日劑量，在一些情況中為約0.3mg/kg至約3mg/kg體重的日劑量，以單劑或每日2至3次分開(kāi)的劑次，或以持續(xù)釋放形式施用。
為說(shuō)明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明，提供了以下實(shí)施例。
實(shí)施例實(shí)施例1Sprague-Dawley大鼠中飲食誘導(dǎo)的肥胖(DIO)是進(jìn)行肥胖研究和能量穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)研究的一種有價(jià)值的模型。這些大鼠從飼以脂肪和能量相對(duì)高的飲食的有肥胖傾向的大鼠(CrlCD(SD)BR)系開(kāi)發(fā)而來(lái)。參見(jiàn)，例如，Levin(1994)Am.J.Physiol.267R527-R535，Levin等人(1997)Am.J.Physiol. 273R725-R730。DIO雄性大鼠獲自Charles River Laboratories，Inc.(Wilmington，MA)。將這些大鼠在22℃下單獨(dú)圈養(yǎng)在鞋盒籠子里，光暗周期為12/12-小時(shí)。在進(jìn)行藥物治療前，以中度高脂肪飲食(32％kcal來(lái)自脂肪；ResearchDiets D1226B)隨意維持這些大鼠6-7周。增肥時(shí)間段結(jié)束時(shí)(施用藥物之前)，通常動(dòng)物的平均體重達(dá)到約500g。
將DIO動(dòng)物分成四個(gè)治療組。各組植入設(shè)計(jì)用于送遞載體、苗條蛋白(500μg/kg/天)、淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)或苗條蛋白(500μg/kg/天)+淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)14天時(shí)間段的皮下滲透微泵(DURECT Corp.，Cupertino，CA)。如本文所述，淀粉狀蛋白毒素作用于后腦中參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)，且苗條蛋白作用于下丘腦中參與食物攝入和/或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)。每日記錄食物攝入和體重。在藥物治療前和治療后用NMR(EchoMedical Systems，Houston，TX)測(cè)量身體組成。在藥物治療第4、5和6天用間接量熱術(shù)測(cè)量能量消耗變化(Oxymax；ColumbusInstruments，Columbus，OH)。所有數(shù)據(jù)以平均值±SEM表示。用方差分析(Analysis of variance，ANOVA)和事后比較檢驗(yàn)(post-hoc tests)測(cè)試組差異。P-值＜0.05視為顯著。用PRISM4 forWindows(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和作圖。在一些早期研究中，用SYSTATfor Windows(SystatSoftware，Inc.，Point Richmond CA)進(jìn)行分析。
圖1和2顯示淀粉狀蛋白毒素和苗條蛋白在藥物施用14天后對(duì)累積食物攝入和體重總變化的作用。尤其重要的是(1)苗條蛋白，前腦作用試劑，在該肥胖模型中對(duì)其自身無(wú)效(無(wú)論對(duì)食物攝入還是體重均無(wú)效)，和(2)用淀粉狀蛋白毒素和苗條蛋白組合治療的大鼠相對(duì)于單獨(dú)用載體或淀粉狀蛋白毒素或苗條蛋白治療的大鼠消耗顯著更少的食物并喪失顯著更多的體重(p＜0.05；不同的字母表示這些組彼此顯著不同)。
在身體組成上觀察到了類似的作用。圖3描述了由治療產(chǎn)生的身體脂肪的變化，且圖4描繪了由治療產(chǎn)生的身體蛋白質(zhì)的變化。用苗條蛋白+淀粉狀蛋白毒素組合治療的動(dòng)物中的脂肪損失顯著大于用各單獨(dú)試劑或載體治療的動(dòng)物的(p＜0.05)。這些身體脂肪上的變化并不伴有顯著的無(wú)脂肪組織減少(p＞0.05；圖4)。
圖5描繪了治療組的暗循環(huán)過(guò)程中能量消耗的變化。盡管藥物(或飲食)-誘導(dǎo)的食物攝入和體重減少常伴有代謝率減緩(熱，kcal/h/kg)，但用苗條蛋白和淀粉狀蛋白毒素組合治療的大鼠相對(duì)于其他組在暗循環(huán)過(guò)程中具有顯著更高的代謝率(p＜0.05)。因此，用淀粉狀蛋白毒素+苗條蛋白組合同時(shí)靶向后腦和前腦攝食中樞導(dǎo)致在提高代謝率的同時(shí)使食物攝入、體重和身體脂肪顯著和持續(xù)減少。此外，體重和身體脂肪的減少并不伴有無(wú)脂肪組織量的減少。
實(shí)施例2進(jìn)行了另一系列的試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)淀粉狀蛋白毒素和苗條蛋白組合對(duì)體重和身體組成變化的協(xié)同作用。為進(jìn)行這些研究從Charles Rivers Labs獲得了近交DIO(Levin)大鼠。這些大鼠由BarryLevin從飼以脂肪和能量相對(duì)高的飲食的有肥胖傾向的大鼠CrlCD(SD)BR系開(kāi)發(fā)而來(lái)。它們被單獨(dú)圈養(yǎng)在22℃的鞋盒籠子里，光暗周期為12/12-小時(shí)。除對(duì)喂組對(duì)照(PF)之外，藥物治療前以及在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中用中等高脂肪飲食(32％kcal來(lái)自脂肪；Research DietsD1226B)隨意維持大鼠約6周。PF大鼠受限于任一淀粉狀蛋白毒素-治療組的攝入。施用藥物前，大鼠一般已達(dá)到平均體重500g。
將動(dòng)物分成體重平均的治療組，并植入皮下滲透微泵(DurectCorp.，Cupertino，CA)。各大鼠植入兩個(gè)含有藥物或適宜載體的微泵。大鼠淀粉狀蛋白毒素(AC0128；Lot#28)溶于以無(wú)菌水為溶劑的50％DMSO中，而鼠苗條蛋白(Peprotech，catalog#450-31)溶于無(wú)菌水中。這些泵被設(shè)計(jì)用于以100μg/kg/天送遞載體、淀粉狀蛋白毒素或以500μg/kg/天送遞鼠苗條蛋白14天時(shí)間段。
各組植入設(shè)計(jì)用于送遞載體、苗條蛋白(500μg/kg/天)、淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)或苗條蛋白(500μg/kg/天)+淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)14天時(shí)間段的皮下滲透微泵(DURECTCorp.，Cupertino，CA)。每日記錄體重和食物攝入。在藥物治療前和治療后用NMR(Echo Medical Systems，Houston，TX)測(cè)量身體組成。為測(cè)量身體組成，將大鼠短暫(～1分鐘)置于充分通風(fēng)的有機(jī)玻璃管中，之后將該管插入專門的嚙齒類動(dòng)物NMR機(jī)器中。在泵植入之前以及在實(shí)驗(yàn)最后一天掃描大鼠。這樣就使得能夠計(jì)算脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的實(shí)際克數(shù)的變化(例如，治療后身體脂肪的克數(shù)-基線身體脂肪克數(shù)＝身體脂肪克數(shù)的變化)和以％表示的脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的身體組成變化(例如，％治療后的身體脂肪-％基線身體脂肪＝％身體脂肪變化)。
圖6A的圖顯示，治療組在治療兩周過(guò)程中，經(jīng)載體校正的體重百分?jǐn)?shù)變化。在該實(shí)驗(yàn)中，苗條蛋白施用導(dǎo)致體重整體降低2％，而淀粉狀蛋白毒素施用導(dǎo)致體重整體降低6％。特別地，響應(yīng)于組合施用淀粉狀蛋白毒素和苗條蛋白的體重百分?jǐn)?shù)降低為約12％，該作用大于單個(gè)試劑單獨(dú)施用的作用組合。因此，淀粉狀蛋白毒素和苗條蛋白對(duì)于減輕體重起協(xié)同作用。圖6B和6C分別顯示了治療兩周后產(chǎn)生的身體脂肪的變化以及身體蛋白質(zhì)的變化。此外，試劑組合導(dǎo)致的身體脂肪減少大于單獨(dú)試劑導(dǎo)致的身體脂肪減少的組合。身體脂肪的這些變化未伴隨有身體蛋白質(zhì)的減少，而是伴有身體蛋白質(zhì)的增加。這些結(jié)果支持了試劑組合的代謝作用以及體重減輕作用。
已知淀粉狀蛋白毒素對(duì)接受者有厭食作用。為檢查在淀粉狀蛋白毒素的厭食作用背景下的淀粉狀蛋白毒素+苗條蛋白的作用，進(jìn)行了對(duì)喂實(shí)驗(yàn)。如上述確立DIO大鼠和藥物治療組。載體、淀粉狀蛋白毒素和淀粉狀蛋白毒素+苗條蛋白治療組的DIO大鼠可自由獲得食物，而對(duì)喂的苗條蛋白治療組的攝入則受限于淀粉狀蛋白毒素-治療組所消耗的量。治療兩周內(nèi)每日記錄體重。如圖7所示，淀粉狀蛋白毒素治療組和對(duì)喂的苗條蛋白治療組相對(duì)于載體對(duì)照都有約6％的體重下降。該結(jié)果與之前的苗條蛋白對(duì)DIO動(dòng)物的體重有小或沒(méi)有作用的結(jié)果一致。淀粉狀蛋白毒素+苗條蛋白的組合相對(duì)于載體對(duì)照導(dǎo)致約12％的體重下降。因此，該對(duì)喂實(shí)驗(yàn)證實(shí)，淀粉狀蛋白毒素+苗條蛋白組合減少的體重超過(guò)由于熱量限制所帶來(lái)的體重下降。
實(shí)施例3如本文所討論的，大多數(shù)肥胖人中的血清苗條蛋白水平是高的，且認(rèn)為在這些個(gè)體中存在苗條蛋白抗性狀態(tài)。檢查了正常HarlanSprague-Dawley(HSD)和DIO傾向大鼠中的血漿苗條蛋白水平和苗條蛋白抗性。
將DIO傾向和正常HSD大鼠分成三個(gè)治療組。兩個(gè)治療組植入設(shè)計(jì)用于送遞載體或淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)14天時(shí)間段的皮下滲透微泵(DURECT Corp.，Cupertino，CA)，而第三個(gè)組以淀粉狀蛋白毒素治療組所消耗的量對(duì)喂14天時(shí)間段。用商業(yè)試劑盒(Linco Research，Inc.，St.Charles，MO)通過(guò)免疫測(cè)定確定了血清苗條蛋白水平。如圖8所示，DIO傾向動(dòng)物中的血清苗條蛋白水平約為正常HSD動(dòng)物的三倍。因此，DIO傾向大鼠是hyper-leptinemic。淀粉狀蛋白毒素治療以及將熱量限制于淀粉狀蛋白毒素治療動(dòng)物食入的食物量均顯著降低DIO傾向和正常動(dòng)物中的血漿苗條蛋白水平。
通常，將瘦HSD大鼠分成兩個(gè)治療組。各組植入設(shè)計(jì)用于送遞載體或苗條蛋白(500μg/kg/天)14天時(shí)間段的皮下滲透微泵(DURECT Corp.，Cupertino，CA)，并每周記錄體重。如圖9所示，DIO傾向動(dòng)物中的苗條蛋白(500mg/kg/天)有效劑量，引發(fā)正常HSD大鼠的顯著和持續(xù)的體重下降。本文所述的DIO傾向動(dòng)物表現(xiàn)出對(duì)苗條蛋白的體重減輕作用的抗性。
實(shí)施例4為證實(shí)淀粉狀蛋白毒素與5-羥色胺能/去甲腎上腺素能重?cái)z取抑制劑的組合對(duì)體重和身體組成變化的作用，使DIO雄性大鼠增肥，并分成四個(gè)治療組，如實(shí)施例2所述。將大鼠淀粉狀蛋白毒素溶于以無(wú)菌水為溶劑的50％DMSO中，并將西布茶明溶于無(wú)菌水中。各組植入設(shè)計(jì)用于送遞載體、西布茶明(3mg/kg/天)或淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)14天時(shí)間段的皮下滲透微泵。每日記錄體重和食物攝入。藥物治療之前和之后用NMR(Echo Medical Systems，Houston，TX)測(cè)量身體組成。為測(cè)量身體組成，將大鼠短暫(～1分鐘)置于充分通風(fēng)的有機(jī)玻璃管中，之后將該管插入專門的嚙齒類動(dòng)物NMR機(jī)器中。在泵植入之前以及在實(shí)驗(yàn)最后一天掃描大鼠。這樣就使得能夠計(jì)算脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的實(shí)際克數(shù)的變化(例如，治療后身體脂肪的克數(shù)-基線身體脂肪克數(shù)＝身體脂肪克數(shù)的變化)和以％表示的脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的身體組成變化(例如，％治療后的身體脂肪-％基線身體脂肪＝％身體脂肪變化)。
圖10A的圖顯示，治療組在治療兩周過(guò)程中，經(jīng)載體校正的體重百分?jǐn)?shù)變化。西布茶明單獨(dú)施用和淀粉狀蛋白毒素單獨(dú)施用導(dǎo)致約6％的體重下降。響應(yīng)于組合施用淀粉狀蛋白毒素和西布茶明的體重百分?jǐn)?shù)降低為約12％。圖10B和10C分別顯示了治療兩周后產(chǎn)生的身體脂肪的變化以及身體蛋白質(zhì)的變化。單獨(dú)用淀粉狀蛋白毒素或單獨(dú)用西布茶明治療的脂肪量減少是明顯的，且組合施用淀粉狀蛋白毒素和西布茶明時(shí)得到了協(xié)同作用(圖10B)。淀粉狀蛋白毒素單獨(dú)施用導(dǎo)致無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織的增加。西布茶明單獨(dú)施用或與淀粉狀蛋白毒素組合施用相對(duì)來(lái)說(shuō)未改變無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織(圖10C)。這些結(jié)果支持了試劑組合的代謝作用以及體重減輕作用。
還測(cè)試了淀粉狀蛋白毒素與兒茶酚胺能激動(dòng)劑苯丁胺的組合對(duì)體重和身體組成的改變的作用。由于苯丁胺實(shí)際上命中NA/5-HT受體，所以它通常被稱作兒茶酚胺能激動(dòng)劑。使DIO雄性大鼠增肥，并分成四個(gè)治療組，如上所述。各組植入皮下滲透微泵和/或插入經(jīng)口管飼管(oral gavage)，它們?cè)O(shè)計(jì)用于送遞載體、苯丁胺(10mg/kg/天)、淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)或苯丁胺(10mg/kg/天)+淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)14天時(shí)間段。微泵包含載體(溶于水的50％DMSO)或淀粉狀蛋白毒素，而所施用的經(jīng)口管飼包含無(wú)菌水或苯丁胺。每日記錄體重，且藥物治療之前和之后用NMR測(cè)量身體組成。
圖11A的圖顯示，治療組在治療兩周過(guò)程中，經(jīng)載體校正的體重百分?jǐn)?shù)變化。苯丁胺單獨(dú)施用導(dǎo)致約5％的體重下降，且淀粉狀蛋白毒素單獨(dú)施用導(dǎo)致約7％的體重下降。響應(yīng)于組合施用淀粉狀蛋白毒素和苯丁胺的體重百分?jǐn)?shù)降低為約12％。圖11B和11C分別顯示了治療兩周后產(chǎn)生的身體脂肪的變化以及身體蛋白質(zhì)的變化。單獨(dú)用苯丁胺治療時(shí)中等量的脂肪量損失是明顯的，而單獨(dú)用淀粉狀蛋白毒素治療時(shí)較大量的脂肪量損失是明顯的。當(dāng)?shù)矸蹱畹鞍锥舅嘏c苯丁胺組合施用時(shí)，可獲得協(xié)同作用(圖11B)。單獨(dú)施用苯丁胺時(shí)，無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織不變或傾向于損失。單獨(dú)施用淀粉狀蛋白毒素保持無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織，且淀粉狀蛋白毒素和苯丁胺的組合傾向于具有較大的無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織提高，甚至是在動(dòng)物體重減輕約12％時(shí)(圖11C)。這些結(jié)果支持了試劑組合的代謝作用以及體重減輕作用。
實(shí)施例5為證實(shí)淀粉狀蛋白毒素和CB-1拮抗劑組合對(duì)于體重和身體組成變化的作用，從Charles Rivers Labs獲得了近交DIO(Levin)。這些大鼠由Barry Levin從飼以脂肪和能量相對(duì)高的飲食的有肥胖傾向的大鼠CrlCD(SD)BR系開(kāi)發(fā)而來(lái)。它們被單獨(dú)圈養(yǎng)在22℃的鞋盒籠子里，光暗周期為12/12-小時(shí)。藥物治療前以及在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中用中度高脂肪飲食(32％kcal來(lái)自脂肪；Research DietsD1226B)隨意維持大鼠約6周。施用藥物前，大鼠一般達(dá)到平均體重500g。治療前使大鼠習(xí)慣經(jīng)口管飼1周。經(jīng)口管飼施用一定劑量范圍(0.1、0.3、1.0、3.0、10mg/kg/天)的利莫那班。通過(guò)微泵施用淀粉狀蛋白毒素(溶于以無(wú)菌水為溶劑的50％DMSO)或載體(100μg/kg/天)。利莫那班總是在臨熄燈前送遞。治療后1和2周測(cè)量食物攝入和體重。藥物治療之前和之后用NMR(Echo MedicalSystems，Houston，TX)測(cè)量身體組成。為測(cè)量身體組成，將大鼠短暫(～1分鐘)置于充分通風(fēng)的有機(jī)玻璃管中，之后將該管插入專門的嚙齒類動(dòng)物NMR機(jī)器中。在泵植入之前以及在實(shí)驗(yàn)最后一天掃描大鼠。這樣就使得能夠計(jì)算脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的實(shí)際克數(shù)的變化(例如，治療后身體脂肪的克數(shù)-基線身體脂肪克數(shù)＝身體脂肪克數(shù)的變化)和以％表示的脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的身體組成變化(例如，％治療后的身體脂肪-％基線身體脂肪＝％身體脂肪變化)。
圖12A的圖顯示，治療組在治療兩周過(guò)程中，經(jīng)載體校正的體重百分?jǐn)?shù)變化。利莫那班單獨(dú)施用導(dǎo)致約4％的體重下降，且淀粉狀蛋白毒素單獨(dú)施用導(dǎo)致約6％的體重下降。響應(yīng)于組合施用淀粉狀蛋白毒素和利莫那班的體重百分?jǐn)?shù)降低為約11％。圖12B和12C分別顯示了治療兩周后產(chǎn)生的身體脂肪的變化以及身體蛋白質(zhì)的變化。單獨(dú)用淀粉狀蛋白毒素或單獨(dú)用利莫那班的治療所產(chǎn)生的脂肪量損失是明顯的，且當(dāng)?shù)矸蹱畹鞍锥舅嘏c利莫那班組合施用時(shí)可獲得協(xié)同作用(圖12B)。單獨(dú)施用淀粉狀蛋白毒素、單獨(dú)施用利莫那班和組合施用淀粉狀蛋白毒素+利莫那班導(dǎo)致相對(duì)等量的無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織增加(圖12C)。這些結(jié)果支持了試劑組合的代謝作用以及體重減輕作用。
在另一個(gè)測(cè)定中，CB-1拮抗劑利莫那班(rimonanbant)(AC163720)與淀粉狀蛋白毒素組合施用。DIO傾向大鼠在治療前以中度高脂肪飲食(32％kcal來(lái)自脂肪；Research Diets D1226B)隨意維持6周。增肥期結(jié)束時(shí)，它們的平均體重一般為500g。之后將大鼠分成治療組，并植入一個(gè)皮下微泵(Durect Corp)和插入經(jīng)口管飼管。微泵包含載體(溶于水中的50％DMSO)或淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)，而所施用的經(jīng)口管飼包含無(wú)菌水或一定劑量范圍的利莫那班(AC163720)(0.1、0.3、1.0、3.0、10.0mg/kg/天)。兩周后的體重變化描繪于圖13中，且這些組合中有兩個(gè)在圖14A和14B中更為詳細(xì)地著重顯示(加圓圈的)。
實(shí)施例6為證實(shí)淀粉狀蛋白毒素和毒蜥外泌肽類似物14Leu-毒蜥外泌肽-4His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu GluGlu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro SerSer Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ ID NO190)組合對(duì)于體重和身體組成變化的作用，使DIO雄性大鼠增肥并將其分作四個(gè)治療組，如上所述。藥物施用之前，大鼠一般達(dá)到平均體重500g。用微泵施用一定劑量范圍(0.3、1、3、10、30μg/kg/天)的毒蜥外泌肽-4類似物。淀粉狀蛋白毒素(溶于以水為溶劑的50％DMSO)或載體通過(guò)微泵施用(100μg/kg/天)。每日記錄體重和食物攝入。藥物治療之前和之后用NMR(Echo Medical Systems，Houston，TX)測(cè)量身體組成。為測(cè)量身體組成，將大鼠短暫(～1分鐘)置于充分通風(fēng)的有機(jī)玻璃管中，之后將該管插入專門的嚙齒類動(dòng)物NMR機(jī)器中。在泵植入之前以及在實(shí)驗(yàn)最后一天掃描大鼠。這樣就使得能夠計(jì)算脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的實(shí)際克數(shù)的變化(例如，治療后身體脂肪的克數(shù)-基線身體脂肪克數(shù)＝身體脂肪克數(shù)的變化)和以％表示的脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的身體組成變化(例如，％治療后的身體脂肪-％基線身體脂肪＝％身體脂肪變化)。
圖15A的圖顯示，治療組在治療兩周過(guò)程中，經(jīng)載體校正的體重百分?jǐn)?shù)變化。單獨(dú)毒蜥外泌肽-4類似物和單獨(dú)施用淀粉狀蛋白毒素各導(dǎo)致約6％的體重下降。響應(yīng)于組合施用淀粉狀蛋白毒素和毒蜥外泌肽-4類似物的體重百分?jǐn)?shù)降低為約12％。圖15B和15C分別顯示了治療兩周后產(chǎn)生的身體脂肪的變化以及身體蛋白質(zhì)的變化。單獨(dú)用毒蜥外泌肽-4類似物治療時(shí)，脂肪量減少是明顯的。單獨(dú)施用淀粉狀蛋白毒素和淀粉狀蛋白毒素+毒蜥外泌肽-4類似物組合施用導(dǎo)致相對(duì)等量的脂肪量下降(圖15B)。淀粉狀蛋白毒素的單獨(dú)施用、毒蜥外泌肽-4類似物的單獨(dú)施用和淀粉狀蛋白毒素+AC3174的組合施用導(dǎo)致相對(duì)等量的無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織(圖15C)增加。這些結(jié)果支持了試劑組合的代謝作用以及體重減輕作用。
實(shí)施例7為證實(shí)淀粉狀蛋白毒素和PYY激動(dòng)劑組合對(duì)于體重和身體組成變化的作用，使DIO雄性大鼠增肥并將其分作四個(gè)治療組，如上所述。各組植入設(shè)計(jì)用于送遞載體、PYY(3-36)(1000μg/kg/天)、淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)或PYY(3-36)(1000μg/kg/天)+淀粉狀蛋白毒素(100μg/kg/天)14天時(shí)間段的皮下滲透微泵。用微泵施用一定劑量范圍的PYY(3-36)(100、200、400、800、1000μg/kg/天)。淀粉狀蛋白毒素100μg/kg/天(溶于以無(wú)菌水為溶劑的50％DMSO)、PYY(3-36)(溶于以無(wú)菌水為溶劑的50％DMSO)或載體用微泵施用。每日記錄食入攝入和體重。藥物施用之前和之后用NMR(Echo Medical Systems，Houston，TX)測(cè)量身體組成。為測(cè)量身體組成，將大鼠短暫(～1分鐘)置于充分通風(fēng)的有機(jī)玻璃管中，之后將該管插入專門的嚙齒類動(dòng)物NMR機(jī)器中。在泵植入之前以及在實(shí)驗(yàn)最后一天掃描大鼠。這樣就使得能夠計(jì)算脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的實(shí)際克數(shù)的變化(例如，治療后身體脂肪的克數(shù)-基線身體脂肪克數(shù)＝身體脂肪克數(shù)的變化)和以％表示的脂肪和干燥無(wú)脂肪組織的身體組成變化(例如，％治療后的身體脂肪-％基線身體脂肪＝％身體脂肪變化)。
圖16A的圖顯示，治療組在治療兩周過(guò)程中，經(jīng)載體校正的體重百分?jǐn)?shù)變化。PYY(3-36)單獨(dú)施用導(dǎo)致約9％的體重下降，且淀粉狀蛋白毒素單獨(dú)施用導(dǎo)致約7％的體重下降。響應(yīng)于組合施用淀粉狀蛋白毒素和PYY(3-36)的體重百分?jǐn)?shù)降低為約15％。圖16B和16C分別顯示了治療兩周后產(chǎn)生的身體脂肪的變化以及身體蛋白質(zhì)的變化。用PYY(3-36)單獨(dú)治療、用淀粉狀蛋白毒素單獨(dú)治療和用淀粉狀蛋白毒素+PYY(3-36)組合治療時(shí)的，逐漸提高的脂肪量損失量是明顯的(圖16B)。淀粉狀蛋白毒素的單獨(dú)施用以及與淀粉狀蛋白毒素+PYY(3-36)的組合施用導(dǎo)致無(wú)脂肪(蛋白質(zhì))組織增加(圖16C)。這些結(jié)果支持了試劑組合的代謝作用以及體重減輕作用。
盡管前述說(shuō)明連同所提供用于具體說(shuō)明的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了公開(kāi)，但可以理解，本發(fā)明的實(shí)踐包括所有在所要求的本發(fā)明范圍內(nèi)的通常的變化、改編或修飾。因此，說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)被解釋為對(duì)由所附權(quán)利要求書(shū)所描繪的本發(fā)明范圍的限制。
權(quán)利要求
1.一種治療受試者肥胖的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種不同的抗肥胖劑，其中至少一種抗肥胖劑作用于前腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)，且至少一種抗肥胖劑作用于后腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)；其中當(dāng)一種抗肥胖劑是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物、CCK、CCK類似物或CCK激動(dòng)劑；和其中當(dāng)一種抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述抗肥胖劑中至少一種選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯、CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中至少一種抗肥胖劑是苯丁胺、利莫那班、西布茶明或普蘭林肽。
4.治療受試者肥胖的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種抗肥胖劑，其中所述第一種抗肥胖劑選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯，其中所述第二種抗肥胖劑選自CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑不是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，且其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，第二種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者體重減少至少10％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者身體脂肪量減少。
7.一種使需要降低營(yíng)養(yǎng)物利用率的受試者降低營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法，其包括向所述受試者外周施用至少兩種不同的抗肥胖劑，其中至少一種抗肥胖劑作用于前腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)，且至少一種抗肥胖劑作用于后腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)；其中當(dāng)一種抗肥胖劑是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑的，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物、CCK、CCK類似物或CCK激動(dòng)劑；其中當(dāng)一種抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物，和其中所述抗肥胖劑以有效降低受試者的營(yíng)養(yǎng)物利用率的量施用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述抗肥胖劑中至少一種選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯、CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中至少一種抗肥胖劑是苯丁胺、利莫那班、西布茶明或普蘭林肽。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中一種抗肥胖劑是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，且另一種抗肥胖劑是苗條蛋白、苗條蛋白衍生物或苗條蛋白激動(dòng)劑。
11.一種降低受試者營(yíng)養(yǎng)物利用率的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種抗肥胖劑，其中所述第一種抗肥胖劑選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯，其中所述第二種抗肥胖劑選自CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑不是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，且其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，第二種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物，和其中所述抗肥胖劑以有效降低受試者的營(yíng)養(yǎng)物利用率的量施用。
12.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項(xiàng)的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)物利用率的降低以體重減輕、脂肪量喪失或異位脂肪喪失指示。
13.根據(jù)權(quán)利要求7-12中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者具有至少一種選自肥胖、肥胖相關(guān)病癥、肥胖相關(guān)疾病、肥胖相關(guān)狀況、糖尿病、胰島素抵抗綜合征、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、非酒精性脂肪性肝炎、心血管疾病、多囊性卵巢綜合征和代謝綜合征的狀況。
14.一種減輕受試者體重的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種不同的抗肥胖劑，其中至少一種抗肥胖劑作用于前腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)，且至少一種抗肥胖劑作用于后腦中參與食物攝入或體重調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)；其中當(dāng)一種抗肥胖劑是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物、CCK、CCK類似物或CCK激動(dòng)劑，其中當(dāng)一種抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，另一種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物，和其中所述抗肥胖劑以有效減輕受試者的體重至少10％的量施用。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述抗肥胖劑中至少一種選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯、CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中至少一種抗肥胖劑是苯丁胺、利莫那班、西布茶明或普蘭林肽。
17.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中一種抗肥胖劑是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物或淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，且另一種抗肥胖劑是苗條蛋白、苗條蛋白衍生物或苗條蛋白激動(dòng)劑。
18.一種減輕受試者體重的方法，其包括外周施用治療有效量的至少兩種抗肥胖劑，其中所述第一種抗肥胖劑選自NPY1受體拮抗劑、NPY5受體拮抗劑、NPY2受體激動(dòng)劑、NPY4受體激動(dòng)劑、苗條蛋白、苗條蛋白衍生物、苗條蛋白激動(dòng)劑、CNTF、CNTF激動(dòng)劑/調(diào)節(jié)劑、CNTF衍生物、MCH1R拮抗劑、MCH2R拮抗劑、黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑、MC4受體激動(dòng)劑、大麻素受體(CB-1)拮抗劑/逆激動(dòng)劑、生長(zhǎng)素釋放肽拮抗劑、5HT2c激動(dòng)劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物、毒蜥外泌肽激動(dòng)劑、GLP-1、GLP-1類似物、GLP-1激動(dòng)劑、DPP-IV抑制劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑、食欲肽拮抗劑、代謝型谷氨酸亞型5受體拮抗劑、組胺3拮抗劑/逆激動(dòng)劑、托吡酯，其中所述第二種抗肥胖劑選自CCK、CCK類似物、CCK激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素類似物和淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑，其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑不是PYY(3-36)、PYY(3-36)類似物或PYY(3-36)激動(dòng)劑時(shí)，其中當(dāng)?shù)谝环N抗肥胖劑是毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激動(dòng)劑時(shí)，第二種抗肥胖劑不是淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑、淀粉狀蛋白毒素類似物，和其中所述抗肥胖劑以有效減輕受試者的體重至少10％的量施用。
19.一種減輕受試者體重的方法，其包括以有效使受試者體重減少至少10％的量施用至少一種苗條蛋白、苗條蛋白衍生物或苗條蛋白激動(dòng)劑和至少一種淀粉狀蛋白毒素、淀粉狀蛋白毒素激動(dòng)劑或淀粉狀蛋白毒素類似物。
全文摘要
公開(kāi)了治療肥胖或肥胖相關(guān)病癥的方法。這些方法包括指向前腦的抗肥胖劑和指向后腦的抗肥胖劑的組合使用。
文檔編號(hào)A61K38/22GK101094689SQ200580045679
公開(kāi)日2007年12月26日 申請(qǐng)日期2005年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月1日
發(fā)明者J·羅思, C·M·安德森, A·貝倫 申請(qǐng)人:安米林藥品公司