專利名稱：具有身體脂肪減少功能的組合物以及含該組合物的食物和飲料的制作方法
專利說明具有身體脂肪減少功能的組合物以及含該組合物的食物和飲料 本發(fā)明涉及甘露寡糖組合物和含甘露寡糖的食物和飲料。更具體的說，甘露寡糖可通過甘露聚糖原料的水解來產(chǎn)生，并摻入食物和飲料中。甘露寡糖能有效減少身體脂肪特別是腹部脂肪。
背景近年來，西式飲食、缺乏鍛煉和較大的壓力導致體重增加和肥胖。超重和肥胖是疾病例如高血糖、高血壓和糖尿病的危險因素。已提供飲食療法來限制體重增加和治療肥胖。很多這些飲食療法是天然產(chǎn)物或源自天然產(chǎn)物?？Х裙I(yè)是加工和生產(chǎn)大量天然產(chǎn)物的工業(yè)的一個實例?？扇芸Х群凸扪b咖啡的制造者排放大量的咖啡廢渣。這些殘渣通常被焚燒或作為工業(yè)廢棄物處理。咖啡豆和所產(chǎn)生的咖啡殘渣含水不可溶性β-甘露聚糖。來自水解的咖啡甘露聚糖的甘露寡糖(MOS)是不可消化的寡糖。本發(fā)明利用甘露聚糖來提供具有脂肪減少作用的組合物。
概述提供能有效提供身體脂肪減少作用的甘露寡糖組合物。甘露寡糖組合物可加入到食物組合物，特別是飲料中，通過口服消費。甘露寡糖的給予能有效減少總身體脂肪(以身體脂肪比率表示)達至少約4％，優(yōu)選約4％至約8％，減少腹部脂肪達至少約10％，優(yōu)選約10％至約15％，并減輕體重。提供包含約1至約10個單糖的甘露寡糖。至少約60％重量的單糖是甘露糖，優(yōu)選至少約70％重量的單糖是甘露糖，最優(yōu)選至少約80％重量的單糖是甘露糖。甘露寡糖也可包含一種或者多種單糖，如葡萄糖、半乳糖、果糖及它們的混合物。甘露寡糖組合物可摻入食物、飲料、飼料、藥物和化妝品中。提供作為水解物的甘露寡糖組合物，所述水解物通過甘露聚糖原料的水解形成。甘露聚糖原料從包括以下的來源提供生咖啡豆、炒咖啡豆、咖啡廢渣、干椰子肉粉(copra meal)、椰子片(copra flake)、椰子、Huacra palm、薯蕷、魔芋、百合、水仙、甘草、刺槐豆膠、瓜爾豆膠及它們的混合物。在一個重要的方面，甘露聚糖原料的來源從咖啡原料特別是咖啡廢渣提供?？墒褂盟夥椒ɡ缢崴夥?、熱水解法、酶水解法、微生物發(fā)酵水解法和它們的組合，生產(chǎn)含甘露寡糖的水解物。熱水解法可在約200℃至約220℃，優(yōu)選約210℃的溫度下進行。水解物可通過與活性炭、吸附樹脂、離子交換樹脂、離子交換膜及它們的組合接觸，進行脫色、除臭和/或濃縮。在另一個方面，提供包含所述甘露寡糖的食物組合物。在這個方面，食物組合物每100克包含至少約1克甘露寡糖。甘露寡糖可摻入各種固體食品和/或飲料中。在一個重要的方面，甘露寡糖摻入咖啡中。也提供生產(chǎn)甘露寡糖組合物的方法。所述方法包括水解甘露聚糖原料，原料的量能有效形成含甘露寡糖的水解物，其中每個甘露寡糖具有約1至約10個單糖，且至少約60％重量的單糖是甘露糖，優(yōu)選至少約70％重量的單糖是甘露糖，最優(yōu)選至少約80％重量的單糖是甘露糖。甘露聚糖原料可從生咖啡豆、炒咖啡豆、咖啡廢渣、干椰子肉粉、椰子片、椰子、Huacra palm、薯蕷、魔芋、百合、水仙、甘草、刺槐豆膠、瓜爾豆膠及它們的混合物提供。一種優(yōu)選的甘露聚糖原料來源是咖啡廢渣。可使用水解方法例如酸水解法、熱水解法、酶水解法、微生物發(fā)酵水解法及它們的組合來生產(chǎn)含甘露寡糖的水解物。一種優(yōu)選的水解方法是熱水解法。所產(chǎn)生的水解物可用活性炭、吸附樹脂、離子交換樹脂、離子交換膜及它們的組合進行除臭、脫色和/或濃縮。所產(chǎn)生的水解物可作為含水組合物來使用，或者加以干燥或凍干。在另一個重要的方面，提供減少身體脂肪比率和腹部脂肪的方法。所述方法包括給予甘露寡糖組合物，給予的量能有效減少總身體脂肪比率達至少約4％，優(yōu)選約4％至約8％，減少腹部的身體脂肪比率達至少約10％，優(yōu)選約10％至約15％。甘露寡糖可作為食物組合物例如飲料(如咖啡)的一部分，以每天約1-10克，優(yōu)選每天約2-8克，更優(yōu)選每天約3-6克的速率口服給予。
附圖簡述

圖1說明對照組和MOS組中從CT掃描圖計算出的相對腹部總身體脂肪面積的變化。圖2說明對照組和MOS組的相對腹部皮下脂肪面積的變化。圖3說明對照組和MOS組的相對腹部內(nèi)臟脂肪面積的變化。圖4顯示MOS對胰脂肪酶的作用。圖5說明在口服給予高脂肪飲食后MOS對人血漿甘油三酯(triglycerol)水平的作用。
詳述提供能提供脂肪減少作用，可認為在減輕肥胖方面具有生理學功能的組合物。所述組合物是主要包含甘露糖單位的寡糖。這些基于甘露糖的寡糖或者說甘露寡糖無致癌性，熱量低；它們被腸道微生物群落選擇性利用，抑制血清脂質(zhì)水平并促進礦物質(zhì)吸附。
定義提供的甘露寡糖是寡糖。本文所用的“寡糖”指單糖的聚合物，聚合度(DP)為至少1，優(yōu)選DP為約1至約10，更優(yōu)選DP為約2至約9，更優(yōu)選DP為約2至約6。DP為1的甘露寡糖在技術(shù)上來說是單糖，但也稱為寡糖，因為寡糖的混合物可能包含某些單糖單位。甘露寡糖通常會包含多種具有不同聚合度的寡糖。
甘露聚糖原料本文所用的“甘露聚糖”指包含甘露糖單糖殘基的多糖。甘露糖殘基可以是D-甘露糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖及它們的混合物的形式。包含甘露糖的多糖可完全由甘露糖單糖殘基形成，或者可以是甘露糖單糖殘基與其它單糖例如半乳糖、葡萄糖和果糖的組合。甘露寡糖可通過甘露聚糖的水解來生產(chǎn)。甘露聚糖的來源包括生咖啡豆、炒咖啡豆、咖啡廢渣、干椰子肉粉、椰子片、椰子、Huacra palm、薯蕷、魔芋、百合、水仙、甘草、刺槐豆膠、瓜爾豆膠及它們的混合物?？蓮囊又蝎@得干椰子肉粉和椰子片。南非Arecacease(棕櫚科)植物Huacra Palm、魔芋甘露聚糖和中國魔芋甘露聚糖都是甘露聚糖的來源。在一個重要的方面，焙炒和磨碎的咖啡豆和煮咖啡后殘留的咖啡廢渣是優(yōu)選的甘露聚糖來源?？衫萌魏蝸碓吹娜魏晤愋涂Х榷??？墒褂玫目Х鹊膶嵗ˋrabica咖啡、Robusta咖啡、Liveria咖啡等?？衫脝我活愋偷目Х?，或者不同類型的咖啡的摻合料。也可使用質(zhì)量或大小較次的咖啡豆，包括很少或沒有商業(yè)價值的咖啡豆。在另一個重要的方面，可由咖啡提取殘渣提供甘露聚糖，所述殘渣是在用生產(chǎn)液體咖啡或速溶咖啡的常規(guī)方法對焙炒和磨碎的咖啡豆進行提取處理后獲得的。
甘露聚糖原料的水解甘露聚糖原料的水解可使用水解方法來進行，所述水解方法可包括酸水解法、熱水解法、酶水解法、微生物發(fā)酵水解法及它們的組合。使用酸和/或高溫的水解方法在日本專利申請昭61-96947及平02-200147中描述，這兩個專利申請通過引用結(jié)合到本文中。此外，酸水解法在美國專利第4,508,745號中描述，高溫水解法在EP0363529中描述，這兩個專利通過引用結(jié)合到本文中。可在反應容器中，加酸或不加酸和加壓或不加壓水解咖啡廢渣。水解也可在任何其它適合于這種處理的反應容器，例如活塞流反應器中進行。水解能有效將DP為10-40或更高的甘露聚糖水解成DP為1-10的寡糖。酶水解可通過將甘露聚糖原料懸浮于含水介質(zhì)中，并加入合適的市售酶例如纖維素酶和半纖維素酶來進行?？墒褂帽绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的標準條件來進行酶水解。也可使用微生物發(fā)酵來水解甘露聚糖原料。甘露聚糖原料可用能產(chǎn)生可水解甘露聚糖的酶的微生物來發(fā)酵。可使用能產(chǎn)生諸如纖維素酶和半纖維素酶的酶的微生物。合適的微生物的一個實例是擔子菌綱(Basidiomycota)微生物。所產(chǎn)生的甘露聚糖原料水解物可原樣使用，或者用活性炭、吸附樹脂、離子交換樹脂、離子交換膜及它們的組合進一步純化。水解物的脫色和/或除臭可通過將水解物與活性炭或任何其它相似類型的吸附樹脂材料接觸來實現(xiàn)。可使用離子交換樹脂和/或離子交換膜進行脫鹽和脫酸。也可聯(lián)合使用這些方法。如要較高的劑量水平，或者當水解物要用于某些類型的食物或飲料時，則可進行進一步的純化。
臨床試驗在用MOS制劑進行的試驗中，MOS組與開始時相比在12周時體重和腰圍傾向于減少。平均起來，體重減輕在約0.5至約1.0kg的范圍，腰圍下降約1.5至約3.0cm。MOS組中用DEXA測出的身體脂肪比率與開始時相比在12周時減少約4％至約8％，且在觀察期結(jié)束時與安慰組有顯著差異。MOS組在12周時CT掃描測出的腹部總脂肪面積和內(nèi)臟脂肪面積比安慰組顯著減少，脂肪測量值比研究開始時平均減少約10％至約15％。以相對比較為基礎(chǔ)對CT掃描脂肪測量值進行表征，進一步證實腹部區(qū)域的顯著變化。結(jié)果顯示，含MOS的咖啡飲料能減少人的身體脂肪比率和腹部脂肪，隨時間推移可表現(xiàn)為體重減少。雖然不是有意拘泥于任何理論限制，但腹部脂肪的減少可能是由于一個或多個下列原因(1)MOS的腸道發(fā)酵產(chǎn)物丙酸可抑制肝臟中的脂肪酸合成，(2)MOS可抑制脂質(zhì)在小腸中的吸收，導致積聚在體內(nèi)的脂肪被代謝，和(3)脂肪通過糞便的排泄可能增加，從而減少腹部脂肪。
實施例實施例1MOS臨床試驗-研究11.MOS制備將咖啡廢渣在220℃溫度下的反應器中進行水解。水解物用活性炭粉末(Umehachi；Taihei Chemicals，日本大阪)脫色，用陽離子交換樹脂(SKIB；Mitsubishi Chemicals，日本東京)和陰離子交換樹脂(WA30；Mitsubishi Chemicals)脫鹽。使用活性炭色譜法，以分步梯度的水和10.0％(v/v)乙醇除去單糖。將純化溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮，凍干。MOS混合物(聚合度(dp)221.2％，dp322.2％，dp421.2％，dp516.2％，dp6或更高19.2％)用于臨床試驗。
2.試驗飲料咖啡飲料的組成如下所示表1
將咖啡飲料裝入900ml PET(聚對苯二甲酸乙二醇酯)瓶中。試驗飲料每100ml含1g MOS。每個受驗者每天攝入300ml的試驗咖啡飲料(含MOS 3.0g)。玉米糖漿固形物作為代替MOS的安慰劑加入對照咖啡飲料中。將試驗咖啡飲料制備成相同的咖啡固形物水平，這樣兩者之間在口味上沒有不同。這兩種飲料也制備成咖啡因水平相等，因為已公知咖啡因可增加能量消耗?？Х纫蛩椒謩e是，對照咖啡45.4mg/100ml，試驗咖啡46.8mg/100ml。
3.受驗者和試驗計劃本研究設(shè)計為安慰劑對照的雙盲試驗。志愿者進行醫(yī)學和體格檢查。采集禁食血樣用于血清脂質(zhì)分析。
選擇三十名志愿者(男15名，女15名)。他們按日本肥胖學會(JapanSociety for the Study of Obesity)對肥胖的分類屬于1類肥胖(25kg/m2＜BMI＜30kg/m2)，且屬于高膽固醇血癥類(血清總膽固醇水平＞180mg/100ml)。由一名不涉及本研究的醫(yī)生根據(jù)BMI和血清總膽固醇水平將他們分為兩組。
經(jīng)過一周的觀察期后，給予受驗者咖啡飲料12周。他們在開始日及4、8和12周后拜訪門診。他們在每次拜訪門診時進行醫(yī)學和體格檢查。采集禁食血樣和尿樣，并使用計算機斷層掃描(CT掃描)測量腹部脂肪面積。
受驗者每天用量杯量取300ml咖啡飲料(含MOS或安慰劑)，不加入牛奶或奶油飲用。不限制攝入時間。指示受驗者在整個研究中他們不能以任何方式改變他們的日常飲食。此外，限制他們服食會影響血液脂質(zhì)水平的食物和藥物。要求他們每次拜訪門診時從早上9:00直至檢查結(jié)束除喝水外不能進行飲食。
4.飲食數(shù)據(jù)記錄向受驗者提供一個稱重儀、一個一次性照相機和一個計步器。要求受驗者在拜訪門診之前3天每天對所有各餐(包括兩餐之間的小吃、每盤菜的重量)進行記錄，給每餐食物照相并計算步行的步數(shù)。使用Microsoft Excel Add-in“Excel Eiyou-kun ver.3.0”(Kenpakusya；日本東京)從進餐記錄和照片計算營養(yǎng)攝入量。志愿者還記錄他們每天的酒精攝入量。
5.體格檢查進行體格檢查以記錄身高、體重、臀圍和腰圍以及皮下脂肪的厚度。根據(jù)日本肥胖學會的方法(Tokunaga等，Int.J.Obesity，7，437-445(1983))，在呼氣和站立體位測量臀圍和腰圍。使用卡尺測量臂和肩胛下的皮下脂肪厚度。根據(jù)下式計算體重指數(shù)(BMI)BMI(Kg/m2)＝[體重(Kg)]/[身高(m)]2。
6.腹部脂肪面積的測量使用Tokunaga方法(Int.J.Obesity，7，437-445(1983))，通過CT掃描進行腹部脂肪面積的測定。所有的CT掃描圖均用CT-W450(Hitachi Medico Inc.，日本)獲得。使用管電壓120kV，管電流90mA，窗位0和窗寬1000拍攝X-射線照片。使用內(nèi)臟脂肪測量PC軟件“Fat Scan ver.2”(N2 System Inc.，日本)從CT照片測定總脂肪面積、皮下脂肪面積和內(nèi)臟脂肪面積。
7.血液分析本研究血液分析包括白細胞、紅細胞、血紅蛋白、MCV、MCH、MCHC和血小板。使用血液生化檢驗測量總蛋白、A/G比率、白蛋白、總膽紅素、AST(GOT)、ALT(GPT)、ALP、LFH、γ-GTP、總膽固醇、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇、甘油三酯、尿酸、血尿素氮、肌酸酐、Na、K、Cl、Ca、IP、Mg、饑餓血糖、總脂質(zhì)、非酯化脂肪酸、脂質(zhì)過氧化物、HbA1c和胰島素。
8.統(tǒng)計分析分析結(jié)果以平均值和標準誤差表示。各組之間平均值的比較，當數(shù)據(jù)的差異符合正態(tài)分布時使用配對t檢驗進行分析，當數(shù)據(jù)的差異不符合正態(tài)分布時使用Wilcoxon符號秩檢驗(Wilcoxon signed-rankstest)進行分析。試驗期間脂肪面積的方差表示為與0周時數(shù)據(jù)相比的相對值。對兩組之間平均值的差異進行方差分析，然后使用Student t檢驗或Welch t檢驗進行計算。P值＜0.05認為顯著。
9.試驗期間的飲食對分為兩組的29名受驗者進行統(tǒng)計分析；其中一組15名受驗者給予對照飲料(以下稱“對照組”)，另一組14名受驗者給予含MOS的飲料(以下稱“試驗組”)。一名受驗者被排除出從試驗組，因為他在試驗期間飲食模式非常不規(guī)律。給予記錄顯示，對照組攝入率為99.9％，試驗組為99.7％，表明兩組之間沒有顯著差異。受驗者承認試驗期間沒有大量攝入酒精或藥物。飲食研究的結(jié)果揭示，試驗期間兩組的飲食幾乎沒有顯著差異。每日平均能量攝入量±標準誤差，對照組為1997±77kcal/天，試驗組為2066±72kcal/天。計步器所示的運動水平表明試驗期間任一組都沒有顯著變化。
10.副作用試驗期間任何時候?qū)κ茯炚呱眢w狀況沒有觀察到與給予試驗飲料相關(guān)的副作用。試驗期間醫(yī)生會診沒有鑒別到由于給予飲料所致的主觀/客觀癥狀或異常觀察結(jié)果。
11.體格測量表2受驗者攝入試驗飲料前的情況
數(shù)值表示為平均值和標準誤差。
a收縮壓b舒張壓沒有鑒別到對照組和試驗組之間的顯著差異。試驗期間體格測量的變化如下所示
表3給予期間體格檢查項目的變化
數(shù)值表示為平均值和標準誤差。
*，**分別與0周攝入前有顯著差異，p＜0.05，p＜0.01。
任何一組的體重、BMI或臂伸展側(cè)中間部分的皮下脂肪都沒有顯著差異。當與給予飲料前比較時，兩組的腰圍減少都具有統(tǒng)計學顯著性，但沒有鑒別到兩組之間的顯著差異。試驗組靠近背部肩胛下的皮下脂肪厚度在12周時比給予開始時顯著減少(p＜0.05)，但兩組之間沒有顯著差異。兩組之間的差異認為是極微的和不顯著的。
12.CT掃描測出的腹部脂肪面積一名對照組受驗者和一名試驗組受驗者由于腰圍過大而不能獲得完全的CT掃描圖像，故被排除出脂質(zhì)截面分析。對27名受驗者進行統(tǒng)計分析，14名來自對照組，13名來自試驗組。試驗期間腹部脂肪面積的變化如表4所示。
表4給予期間腹部脂肪面積的變化
數(shù)值表示為平均值和標準誤差。
*，**分別與0周攝入前有顯著差異，p＜0.05，p＜0.01。
，分別與對照組有顯著差異，p＜0.05，p＜0.01。
在給予開始(0周)時沒有鑒別到兩組之間在總脂肪面積、皮下脂肪面積和內(nèi)臟面積方面的顯著差異。在脂肪面積分析的試驗期間，對照組的皮下脂肪面積在第8周時與給予開始時比較顯著減少(p＜0.05)。試驗組在第8周和第12周時鑒別到在總脂肪面積、皮下脂肪面積和內(nèi)臟脂肪面積方面的顯著減少(p＜0.01)。與0周攝入前相比的減少量MOS組大于對照組。與對照組相比，試驗組第8周(p＜0.05)和第12周(p＜0.01)時在總脂肪面積方面明顯顯示出顯著較低的值(圖1)。與對照組相比，試驗組第12周時在皮下脂肪面積和內(nèi)臟脂肪面積方面也顯示出顯著減少(兩者都是p＜0.05)(圖2和3)。
13.血液試驗結(jié)果兩名試驗組受驗者被排除出血液分析，由于他們在第12周拜訪門診時從早上9:00起吃早餐和軟飲料。試驗期間血液檢驗的數(shù)值變化在表5中表示，血液生化檢驗的數(shù)值變化在表6中表示。
表5給予期間血液檢驗結(jié)果
數(shù)值表示為平均值和標準誤差。
*，**分別與0周攝入前有顯著差異，p＜0.05，p＜0.01。
表6給予期間血液生化檢驗結(jié)果
在給予開始(0周)時，沒有鑒別到兩組之間在血液檢查和血液生化檢查的任何項目上的顯著差異。對于涉及人血清脂質(zhì)的檢查項目，試驗組的血液檢查和血液生化檢查結(jié)果顯示，第12周相比于給予開始時LDL-膽固醇顯著下降(p＜0.05)。雖然沒有鑒別到兩組之間的顯著差異，與對照組相比，試驗組在第12周時傾向于顯示出較低的總膽固醇濃度(p＜0.054)和LDL-膽固醇(p＜0.062)值。盡管與給予開始時相比，涉及人血清脂質(zhì)的項目之外的其它項目存在某些統(tǒng)計學上顯著的差異，但這種差異仍在標準范圍內(nèi)。
實施例2含甘露寡糖的液體咖啡的作用進一步分析實施例1中BMI＞26.4的試驗組受驗者(2男5女)的數(shù)據(jù)。如表所示，飲用含MOS的液體咖啡后，體重、身體脂肪比率和BMI顯著下降。因此證實含MOS的液體咖啡(3g/300ml)在人體中具有減少身體脂肪或者說抗肥胖的作用。
表含MOS的液體咖啡的攝入對體重、身體脂肪比率和BMI的作用
**與攝入前有顯著差異(p＜0.01)*與攝入前有顯著差異(ρ＜0.05)□與攝入前有顯著差異(p＜0.10)實施例3MOS臨床試驗-研究2除使用兩個劑量(MOS 3.0或6.0g/天)的MOS外，本研究與實施例1所述的研究相似。所有測量與實施例1所述相同，另增加雙能量X-射線吸收測定法(DEXA)。
本研究設(shè)計為安慰劑對照的雙盲試驗。志愿者進行醫(yī)學和體格檢查。在研究開始之前采集禁食血樣用于血清脂質(zhì)分析。
選擇七十二名志愿者(36名男性；36名女性)作為試驗的受驗者。按日本肥胖學會對肥胖的分類，將志愿者歸類為1類肥胖(25kg/m2＜BMI＜30kg/m2)。由一名不涉及本研究的醫(yī)生根據(jù)BMI和初始身體脂肪比率將他們分為三組。
經(jīng)過一周的觀察期后，給予受驗者咖啡飲料12周。受驗者每天用量杯量取300ml咖啡飲料(含MOS或安慰劑)，不加入牛奶或奶油飲用。飲料隨用餐飲用。指示受驗者在整個研究中他們不能以任何方式改變他們的日常飲食。此外，限制他們服食會影響血液脂質(zhì)水平的食物和藥物。
受驗者在第0日、然后在第4、8和12周后拜訪門診。要求他們在每次拜訪門診時，從早上9:00直至檢查結(jié)束除喝水外不吃喝任何東西。受驗者在每次拜訪門診時進行醫(yī)學和體格檢查。用雙能量X-射線吸光測定法(DEXA)測量總身體脂肪比率。此外，在第0天和第12周，采集禁食血樣和尿樣，并使用計算機斷層掃描(CT掃描)測量腹部脂肪面積。
本研究2的結(jié)果與研究1(實施例1)的結(jié)果部分相似。總體重、腰圍、身體脂肪比率、腹部脂肪和內(nèi)臟脂肪的降低都發(fā)生在MOS組。此外，與研究開始時相比，MOS組在12周時用DEXA測出的總身體脂肪平均下降6％，且與對照組有顯著差異?；诘侥壳盀橹沟膶嶒灩ぷ鹘Y(jié)果，沒有記錄到與劑量相關(guān)的反應。
實施例4MOS對胰脂肪酶活性的作用按實施例1所示制備MOS組合物。用于本實施例的甘露寡糖(MOS)組合物的DP分布為DP12.4％；DP226.6％；DP320.2％；DP417.8％；DP510.9％；DP68.9％；DP76.0％；DP83.6％；DP91.9％和DP101.7％。糖鏈中甘露糖殘基的含量為90％。
胰脂肪酶活性的測量脂肪酶的活性通過測量油酸從三油精的釋放速度來測定。簡要地說，將三油精(80mg)、磷脂酰膽堿(10mg)和?；悄懰?5mg)在9ml0.1 M N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)緩沖液(pH7.0，含0.1mNaCl)中的懸浮液超聲處理5分鐘。將這一超聲處理過的底物懸浮液(100μl)與50μl(10單位)的胰脂肪酶和100μl各種濃度的MOS溶液(終體積250μl)在37℃下溫育30分鐘。用常規(guī)方法測定釋放出的油酸量。溫育混合物加入到氯仿和正庚烷(含2％(v/v)甲醇)的1∶1(v/v)混合物的3ml等分試樣中，并通過水平振蕩試管10分鐘進行萃取，抽吸除去上層水相。然后將銅試劑(1ml)加入下層有機相中。將試管振蕩10分鐘，混合物在2000g離心10分鐘，將0.5ml的上層有機相(含萃取出的游離脂肪酸的銅鹽)用0.5ml 0.1％(w/v)浴銅靈的氯仿溶液(含0.05％(w/v)3(2)-叔丁基-4-羥基茴香醚)處理。然后在480nm處測量吸光度。脂肪酶活性以每小時每亳升反應表示。如圖4所示，MOS在1-5mg/ml濃度時以劑量依賴性方式抑制胰脂肪酶活性，在5mg/ml濃度時抑制約70％的活性。這些體外結(jié)果提示MOS是脂質(zhì)吸收的強抑制劑。
實施例5人體研究中攝入高脂肪飲食后的血漿甘油三酯十名健康的人志愿者(全部男性)分為2組，并采用雙盲交叉設(shè)計。每組給予第一批MOS或安慰劑。一周后，反過來給予第二批(安慰劑或MOS)。他們禁食過夜后，口服給予200g由含牛油和豬油(脂肪含量40g)的玉米肉湯、加或不加MOS(3g)所組成的高脂肪飲食?？诜o予前和給予后(1h、2h、3h、4h、5h和6h)從靜脈采集血液并測量甘油三酯。如圖5所示，在給予3小時后血漿甘油三酯的增加受到顯著抑制。在高脂肪飲食中攝入MOS能有效減少餐后血漿甘油三酯的增加。這些結(jié)果提示MOS攝入能有效減少人體的脂肪攝取。
實施例6甘露寡糖對身體脂肪比率的作用用健康的日本受驗者(6名男性和7名女性)研究MOS對人身體脂肪比率的作用。由6名受驗者組成的一組以1.0g/天服用MOS。由7名受驗者組成的另一組以3.0g/天服用MOS。基于身體脂肪比率的變化進行評價。身體脂肪比率用電阻抗法進行分析。下表顯示MOS攝入對身體脂肪比率的作用的結(jié)果。
如下表所示，服用MOS后身體脂肪比率下降。由此證實MOS(1.0g/天和3.0g/天)在人體中具有減少身體脂肪的作用。
身體脂肪比率的變化(％)MOS 1.0g/天 MOS 3.0g/天N67初始 31.1±5.931.4±4.3第2周30.7±4.431.2±4.7第4周30.1±5.130.3±4.7**與攝入前有顯著差異(p，0.05)實施例7含甘露寡糖的液體咖啡的作用使用與實施例6所述相同的含MOS咖啡樣品，用10名健康的日本受驗者研究含MOS的液體咖啡對人體重和身體脂肪比率的作用。受驗者飲用含MOS的液體咖啡，連續(xù)4周每天飲用900ml液體咖啡(即每天3瓶，共9g MOS/天)。如同實施例6根據(jù)體重、身體脂肪比率和BMI的變化進行評價。下表顯示含MOS的液體咖啡的攝入對體重、身體脂肪比率和BMI的作用的結(jié)果。
如表所示，飲用含MOS的液體咖啡后體重、身體脂肪比率和BMI顯著下降。由此證實含MOS的液體咖啡在人體中具有減少身體脂肪的作用或者說抗肥胖作用。
含MOS的液體咖啡對體重、身體脂肪比率和BMI的作用
n＝10，*與攝入前有顯著差異(p＜0.05)
權(quán)利要求
1.一種甘露寡糖組合物，所述甘露寡糖組合物包含由甘露聚糖原料的水解所提供的水解物，所述甘露寡糖具有約1至約10個單糖，其中至少約60％重量的單糖是甘露糖，且所述甘露寡糖組合物當被人以至少約1至約10g/天的速度消費時，能有效減少身體脂肪比率達至少約4％和減少腹部脂肪達至少約10％。
2.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，其中所述甘露聚糖原料從選自以下的來源提供生咖啡豆、炒咖啡豆、咖啡廢渣、干椰子肉粉、椰子片、椰子、Huacra palm、薯蕷、魔芋、百合、水仙、甘草、刺槐豆膠、瓜爾豆膠及它們的混合物。
3.權(quán)利要求2的甘露寡糖組合物，其中所述甘露聚糖原料從咖啡廢渣提供。
4.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，其中所述含甘露寡糖的水解物用選自以下的水解方法生產(chǎn)酸水解法、熱水解法、酶水解法、微生物發(fā)酵水解法和它們的組合。
5.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，其中所述水解物用活性炭、吸附樹脂、離子交換樹脂、離子交換膜或它們的組合純化。
6.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，其中至少70％重量的甘露寡糖組合物是甘露糖。
7.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，其中至少80％重量的甘露寡糖組合物是甘露糖。
8.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，其中所述甘露寡糖組合物摻入食物、飲料、藥物、飼料、化妝品及它們的混合物中。
9.權(quán)利要求1的甘露寡糖組合物，所述組合物進一步包含至少一種選自葡萄糖、半乳糖、果糖及它們混合物的單糖。
10.一種包含甘露寡糖的食物組合物，所述甘露寡糖包含約1至約10個單糖，其中至少約60％重量的單糖是甘露糖。
11.權(quán)利要求10的食物組合物，其中所述食物組合物每100g包含至少約1g的甘露寡糖。
12.權(quán)利要求10的食物組合物，其中所述食物組合物是食品或飲料。
13.權(quán)利要求12的食物組合物，其中所述飲料是咖啡。
14.權(quán)利要求10的食物組合物，其中所述甘露寡糖是由甘露聚糖原料的水解所提供的水解物。
15.權(quán)利要求14的食物組合物，其中甘露聚糖原料從選自以下的來源提供生咖啡豆、炒咖啡豆、咖啡廢渣、干椰子肉粉、椰子片、椰子、Huacra palm、薯蕷、魔芋、百合、水仙、甘草、刺槐豆膠、瓜爾豆膠及它們的混合物。
16.權(quán)利要求15的食物組合物，其中所述甘露聚糖原料從咖啡廢渣提供。
17.權(quán)利要求14的食物組合物，其中所述含甘露寡糖的水解物用選自以下的水解方法生產(chǎn)酸水解法、熱水解法、酶水解法、微生物發(fā)酵水解法和它們的組合。
18.權(quán)利要求14的食物組合物，其中所述水解物用活性炭、吸附樹脂、離子交換樹脂、離子交換膜或它們的組合純化。
19.權(quán)利要求10的食物組合物，其中至少70％重量的甘露寡糖是甘露糖。
20.權(quán)利要求10的食物組合物，其中至少80％重量的甘露寡糖是甘露糖。
21.一種減少人中身體脂肪比率或腹部脂肪的方法，所述方法包括將甘露寡糖組合物給予人，所述甘露寡糖包含約1至約10個單糖，其中至少約60％重量的單糖是甘露糖，所述甘露寡糖組合物能有效減少身體脂肪比率達至少約4％和減少腹部脂肪達至少約10％。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述甘露寡糖以每天約1-10g的速度口服給予。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述甘露寡糖在食物組合物中口服給予。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述食物組合物是飲料。
25.權(quán)利要求21的方法，其中所述甘露寡糖是通過甘露聚糖原料的水解所提供的水解物。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述甘露聚糖原料從選自以下的來源提供生咖啡豆、炒咖啡豆、咖啡廢渣、干椰子肉粉、椰子片、椰子、Huacra palm、薯蕷、魔芋、百合、水仙、甘草、刺槐豆膠、瓜爾豆膠及它們的混合物。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述甘露聚糖原料從咖啡廢渣提供。
28.權(quán)利要求25的方法，其中所述含甘露寡糖的水解物用選自以下的水解方法生產(chǎn)酸水解法、熱水解法、酶水解法、微生物發(fā)酵水解法和它們的組合。
29.權(quán)利要求25的方法，其中所述水解物用活性炭、吸附樹脂、離子交換樹脂、離子交換膜或它們的組合純化。
30.權(quán)利要求21的方法，其中至少70％重量的甘露寡糖是甘露糖。
31.權(quán)利要求21的食物組合物，其中至少80％重量的甘露寡糖是甘露糖。
全文摘要
提供能有效提供身體脂肪減少作用和有效減少體重的甘露寡糖組合物。所述甘露寡糖組合物通過甘露聚糖原料的水解來提供。所述甘露寡糖包含約1至約10個單糖，且至少約60％重量的單糖是甘露糖。
文檔編號A61K47/00GK101087621SQ200580038862
公開日2007年12月12日 申請日期2005年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月17日
發(fā)明者淺野一朗, 藤井繁佳, 武藤勝仁, 高尾和泉, 尾崎和人, 中室賢一, 松島俊行 申請人:味之素通用食品株式會社, 卡夫食品集團公司