專利名稱：填充有除去了水不溶性微粒的吸附材料的直接血液灌注用吸附器、與除去了水不溶性微 ...的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及填充有以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300μm～600μM，粒徑分布的變動系數(shù)為10％～20％，且除去了水不溶性微粒的吸附材料的直接血液灌注用吸附器、與除去了水不溶性微粒的直接血液灌注用吸附材料的取得方法。
背景技術：
目前在大力嘗試積極地除去患者血液中存在的病因物質的血液凈化吸附療法，發(fā)現(xiàn)對許多的難病有其效果。血液凈化吸附療法有血漿灌注方式和直接血液灌注方式。血漿灌注方式是血漿分離裝置與血液凈化裝置的2段系統(tǒng)，需要用于安全操作的專用裝置，治療費用高，并且需要繁雜操作。另一方面，直接血液灌注方式由于是直接使血液灌注到吸附器中的1段系統(tǒng)，故操作簡單，并且體外循環(huán)血液量少，可減輕患者的負擔。但直接血液灌注方式中使用的吸附器課題之一存在涉及存在于吸附器內的水不溶性微粒的問題。
所謂水不溶性微粒，主要是來自吸附材料的微粒，是直接血液灌注方式治療時理論上能從吸附器內流出而進入體內的粒子。水不溶性微粒大量地流入體內時，堵塞血管或蓄積于臟器內等，估計是安全上的大問題。
直接血液灌注用吸附器中作為現(xiàn)有市售制品的代表例有以下的吸附器(參照非專利文獻1)。
其中一種是鐘淵化學工業(yè)(株)的除去β2微球蛋白(分子量約12000)用的吸附器。該吸附器中使用的吸附材料(參照非專利文獻2)是粒徑約500μm且粒徑分布均一的吸附材料。用途適用于伴隨關節(jié)痛的淀粉樣蛋白癥，在血液透析時利用。由于吸附材料的粒徑分布均一，故使用水不溶性微粒的除去裝置(參照專利文獻1)等時，在不使吸附材料損失的情況下容易除去水不溶性微粒。即，作為對于水不溶性微粒的一種對策，使用粒徑分布均一的吸附材料。但制造粒徑分布均一的吸附材料(參照專利文獻2)需要特殊的造粒裝置(參照專利文獻3)。而實際狀況是能適合作為吸附材料載體的具有均一粒徑分布的通用水不溶性載體作為市售品不存在。
另一種是可樂麗醫(yī)療(株)的腎輔助用吸附型血液凈化器。該吸附器中使用的吸附材料(參照非專利文獻2)的粒徑是400～900μm，用途是為了除去尿毒素原因物質(分子量約100～2000)而作為腎輔助使用。為了作為直接血液灌注用吸附材料使用，在活性炭表面實施涂布聚甲基丙烯酸羥乙酯，使之不產(chǎn)生水不溶性微粒。即，作為對于水不溶性微粒的一種對策，對吸附材料實施涂布。但由于吸附材料需要涂布故制造工序變得復雜。
如上所述，從水不溶性微粒產(chǎn)生的安全性的觀點考慮，在直接血液灌注用時要采用特殊的工序制造這些吸附器。由于需要這些特殊的工序，故制品的制造成本也升高。因此，期望不需要特殊的造粒設備、涂布設備而使用通用的水不溶性載體等，能簡便地取得的直接血液灌注用吸附器。
此外，目前為止也公開了有關醫(yī)療用吸附材料的除去水不溶性微粒的專利(參照專利文獻1)，但其特征是具有多個循環(huán)·微粒除去管線，也沒有記載除去水不溶性微粒的吸附材料的粒徑分布，并且也沒有記載除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(mesh opening size)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸的比的規(guī)定。
專利文獻1特開平04-14594專利文獻2特開平01-275601專利文獻3特開昭62-191033非專利文獻1日本醫(yī)療器材工業(yè)會，特定保險醫(yī)療用材料指南，p175～，2003年非專利文獻2人工臟器，Vol.23，No.2，p439～，1994年非專利文獻3化學工學，Vol.50，No.10，p685～，1986年發(fā)明內容本發(fā)明提供填充有不需要特殊的造粒設備、涂布設備，使用具有比較容易得到的粒徑分布的水不溶性載體(以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300～600μm，粒徑分布的變動系數(shù)為10％～20％)，并且除去了水不溶性微粒的吸附材料的直接血液灌注用吸附器、與除去了水不溶性微粒的直接血液灌注用吸附材料的取得方法。
本發(fā)明者們對填充有不需要特殊的造粒設備、涂布設備，使用具有比較容易得到的粒徑分布的水不溶性載體，并且除去了水不溶性微粒的吸附材料的直接血液灌注用吸附器的取得進行了潛心研究。結果完成了填充有除去水不溶性微粒時不使吸附材料損失，并且治療上達到安全水平地除去了水不溶性微粒的吸附材料的直接血液灌注用吸附器的發(fā)明。
即本發(fā)明涉及填充有吸附材料的直接血液灌注用吸附器，該吸附材料包含以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300～600μm、粒徑分布的變動系數(shù)為10％～20％的水不溶性載體的粒子群，每個吸附器的存在于吸附器內的10μm以上的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均+6SD為24000個以下，每個吸附器的25μm以上的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均+6SD為4000個以下。
另外，本發(fā)明涉及使用除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸的比為1.3～1.5的篩網(wǎng)，從包含以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300～600μm、并且粒徑分布的變動系數(shù)為10％～20％的粒子群的吸附材料中除去水不溶性微粒，從而取得填充在直接血液灌注用吸附器中的吸附材料的方法。
根據(jù)本發(fā)明可以制得填充有不需要用于制造容易除去水不溶性微粒而粒徑分布均一的吸附材料的特殊造粒裝置，并且不進行抑制水不溶性微粒產(chǎn)生的涂布處理而使用具有比較容易得到的粒徑分布的水不溶性載體，并且除去了水不溶性微粒在治療上達到安全水平的吸附材料的直接血液灌注用吸附器。根據(jù)本發(fā)明容易取得直接血液灌注用吸附器，通過使用這種吸附器也可以提高治療時有關水不溶性微粒的安全性。


圖1為微粒除去的概況。
圖2為吸附器。
圖3為流量與壓力損失的關系。
符號說明1 吸附材料2 水不溶性微粒3 除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)4 過濾器5 泵6 噴嘴7 微粒除去槽8 血液流入口9 血液流出口10 柱11 吸附器12 吸附器的篩網(wǎng)具體實施方式
以下，舉出具體例對本發(fā)明的實施方式進行說明。
本發(fā)明中的吸附材料只要是對病因物質有親和性的物質則沒有特殊限定。作為一例可舉出將對病因物質有親和性的配位體固定在水不溶性載體上的吸附材料等。
本發(fā)明中的水不溶性載體在常溫常壓下是固體、水不溶性，并且具有適當大小的細孔，即具有多孔結構。水不溶性載體可以使用形狀為球狀或粒狀的載體。可以使用凝膠過濾劑、離子交換體的原料、親和性色譜用載體、高分子載體、體液凈化用載體、化妝品添加劑等用途中歷來使用的通用的載體。
直接血液灌注方式中，使用球狀或粒狀的水不溶性載體時，為了確保血球等通過的流路，必須使粒子徑比流過血漿等液態(tài)成分時(血漿灌注方式)大。然而，隨著粒徑變大，吸附的病因物質的擴散距離增加，動態(tài)吸附性能降低。即治療時間延長。作為本發(fā)明中的吸附材料，優(yōu)選在直接血液灌注方式中能夠發(fā)揮良好的通血與吸附效率的吸附材料的平均粒徑是300～600μm，更優(yōu)選是400～500μm。
直接血液灌注方式中從通血性方面考慮，優(yōu)選水不溶性載體的粒徑分布更均一。但粒徑分布均一的載體造粒變得困難，需要特殊的設備。另一方面，粒徑分布變寬時，吸附材料被緊密填充，由于血液的流路變窄故通血變得困難。而且，粒徑分布寬時，除去水不溶性微粒時，伴隨除去處理的吸附材料的損失量也增多。
本發(fā)明的吸附材料可以使用具有不需要特殊的造粒設備而比較容易得到的粒徑分布的通用的水不溶性載體等。其粒徑分布的變動系數(shù)(樣本中的以粒子個數(shù)為基準算出的標準偏差/平均粒徑×100)現(xiàn)實優(yōu)選10％～20％。此外，吸附材料的平均粒徑與粒徑分布的變動系數(shù)，由體視顯微鏡等得到的吸附材料的放大照片逐個地測定100個以上直徑以粒子個數(shù)為基準求出。
本發(fā)明中的水不溶性載體的強度，太軟、容易破壞不優(yōu)選。流過血液時如果產(chǎn)生壓實則不能得到足夠的血液流量，會產(chǎn)生處置時間不能延長進而不能繼續(xù)進行處置。為了防止吸附材料的壓實，優(yōu)選吸附材料是具有足夠機械強度的吸附材料(硬質)。這里所謂硬質，如后述參考例所示，是指將吸附材料均勻地填充到圓筒狀柱中，流過水性液體時的壓力損失與流量的關系至少直至0.3kgf/cm2時呈直線關系。另外，不優(yōu)選輸送、填充等各種工序時不斷產(chǎn)生水不溶性微粒的水不溶性載體。
本發(fā)明中的水不溶性載體的材質沒有特殊限定，作為代表例可舉出由纖維素、醋酸纖維素、甲殼質、殼聚糖、糊精、瓊脂糖等多糖類構成的有機載體，聚苯乙烯、苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯醇等合成高分子等。另外，雖然不是必需的，但也可以具有聚甲基丙烯酸羥乙酯等具有羥基的高分子材料、具有聚環(huán)氧乙烷鏈的單體與其他的聚合性單體共聚的這類接枝共聚物等的涂層。還可以使用玻璃、氧化鋁、陶瓷等無機物等。其中纖維素、包括聚乙烯醇等的合成高分子，由于在載體表面容易引入活性基團故在實用上優(yōu)選使用。
其中最優(yōu)選使用由纖維素制成的載體。由纖維素制成的載體由于機械強度比較高、強韌，故被破壞或產(chǎn)生水不溶性微粒的情況少，填充到吸附器中時由于即使以高流速流過血液也難壓實，故可以以高流速流過血液。此外，具有安全性比合成高分子載體高等優(yōu)點，最適合作為本發(fā)明中的水不溶性載體使用。
作為本發(fā)明中的病因物質的例子，可舉出存在于體液中的低比重脂蛋白、超低比重脂蛋白等作為動脈硬化的原因物質的脂蛋白，免疫球蛋白(A.D.E.G.M)、抗DNA抗體、抗乙酰膽堿受體抗體、抗血液型抗體、抗血小板抗體等自身抗體與抗原抗體復合物，內毒素、類風濕因子、巨噬細胞、癌組織浸潤T細胞等。
作為對本發(fā)明中的病因物質有親和性的物質，只要是吸附目標病因物質的物質則沒有特殊限定。對病因物質有親和性的物質與病因物質的親和力，分成利用生物學的相互作用和物理化學的相互作用的親和力。作為利用了生物學的相互作用的親和力，可舉出固定抗原的親和力、固定抗體的親和力、利用了補體結合或Fc結合、其他生物學的相互作用而對病因物質有親和性的物質。作為利用物理的相互作用的親和力，有利用了靜電的相互作用、疏水的相互作用而對病因物質有親和性的物質。
作為利用了物理化學的相互作用而對病因物質有親和性的物質的具體例，要吸附低比重脂蛋白時，可以使用例如對具有陰性基的病因物質有親和性的物質。若例舉對具有陰性基的病因物質有親和性的物質，則可舉出硫酸葡聚糖、肝素、硫酸軟骨素、多硫酸軟骨素、硫酸乙酰肝素、硫酸木聚糖、硫酸卡洛寧、硫酸纖維素、硫酸甲殼質、硫酸殼聚糖、硫酸果膠、硫酸菊粉、硫酸褐藻酸、硫酸糖原、硫酸聚乳糖、硫酸角叉菜膠、硫酸淀粉、硫酸聚葡萄糖、硫酸昆布多糖、硫酸半乳聚糖、硫酸果聚糖、mepesulfate等硫酸化多糖，磷鎢酸、聚硫酸化茴香醚、硫酸聚乙烯醇、多聚磷酸、聚丙烯酸等。其中硫酸化多糖的效果特別大。從臨床上實用性方面考慮，作為優(yōu)選例可舉出肝素、硫酸葡聚糖。
作為利用了疏水的相互作用而對病因物質有親和性的物質的具體例，要吸附血纖維蛋白原時，可以使用作為疏水性氨基酸的色氨酸衍生物。所謂色氨酸衍生物，是指色氨酸、色氨酸乙酯、色氨酸甲酯等色氨酸酯類，色胺、色氨醇(tryptophanol)等具有與帶有吲哚環(huán)的色氨酸類似結構的化合物。另外，這些色氨酸衍生物也可以是L體、D體、DL體、或這些的混合物的任何一種。還可以是2種以上的色氨酸衍生物的混合物。這些色氨酸衍生物中，安全上優(yōu)選色氨酸，其中，L-色氨酸由于是天然型的氨基酸，有關其安全性的數(shù)據(jù)豐富，價廉而容易得到，故實用上最優(yōu)選使用。
如以上例示對具有陰性基與疏水基的病因物質有親和性的物質那樣，可以根據(jù)目標的病因物質，使用對顯示相互作用的各種病因物質有親和性的物質。此外，還可以將對上述病因物質有親和性的物質多個固定。作為具體例，要同時吸附低比重脂蛋白與血纖維蛋白原時，也可以同時選擇硫酸葡聚糖和色氨酸衍生物作為對病因物質有親和性的物質。
作為本發(fā)明中在水不溶性載體上將對病因物質有親和性的物質固定的方法，有共價鍵、離子鍵、物理吸附、包埋、對表面的沉淀不溶化等公知的方法，可以根據(jù)對病因物質有親和性的物質和上述水不溶性載體的材質選擇適當?shù)姆椒āＨ艨紤]滅菌時對病因物質有親和性的物質的溶出性，優(yōu)選利用共價鍵進行固定化、不溶化。另外，也可以根據(jù)需要在水不溶性載體與對病因物質有親和性的物質之間引入間隔物。
在水不溶性載體上利用共價鍵將對病因物質有親和性的物質固定時，作為提高水不溶性載體與對病因物質有親和性的物質的反應性的方法的例子，眾知鹵化氰法、環(huán)氧氯丙烷法、雙環(huán)氧化物法、溴代乙酰溴法等。采用這些方法在水不溶性載體上引入氨基、羧基、羥基、硫醇基、酸酐基、琥珀酰亞胺基、氯基、醛基、環(huán)氧基、tresyl基等官能團。其中從加熱滅菌時的穩(wěn)定性考慮，可舉出采用環(huán)氧氯丙烷法衍生的環(huán)氧基作為特別優(yōu)選的例子。
本發(fā)明中的水不溶性載體的球狀蛋白質的排除極限分子量必須比病因物質的分子量大，優(yōu)選使用2×104以上的分子量。所謂排除極限分子量，是指如專題著作(尺寸排除色譜、森定雄著、共立出版)所述，在尺寸排除色譜中流入具有各種分子量的試料時，在不能侵入細孔內(被排除)的分子內，具有最小分子量的物質的分子量。具體地說，例如吸附的病因物質為低密度脂蛋白與血纖維蛋白原時，球狀蛋白質的排除極限分子量低于5×105時纖維蛋白原與低密度脂蛋白的吸附能力小，不耐實用。而球狀蛋白質的排除極限分子量超過1×108，孔徑大小(細孔徑)太大，對吸附有用的表面積降低，結果纖維蛋白原與低密度脂蛋白的吸附能力降低。因此，本發(fā)明中水不溶性載體的球狀蛋白質的排除極限分子量優(yōu)選5×105～1×108，從發(fā)揮吸附性能的觀點考慮更優(yōu)選1×106～1×108，進一步優(yōu)選2×106～1×108。
本發(fā)明的吸附器在具有血液的流入口與流出口、在流入口與流出口安裝有含血球成分的血液通過而吸附材料不通過的篩網(wǎng)的柱中填充本發(fā)明的吸附材料。為了降低血液中病因物質的濃度，本發(fā)明中吸附器的容量必須是100mL以上。從吸附性能的觀點出發(fā)，對吸附器的容量沒有限制，但由于排到體外的血液量太多時有引起血壓降低的危險性，故優(yōu)選吸附器容量是600mL以下。另外，從即使組裝到血液透析等其他的血液凈化療法的回路中而血液的體外循環(huán)量也不過分地增大，盡可能防止隨血液流到體外而有可能發(fā)生的血壓降低的觀點考慮，優(yōu)選吸附器容量為400mL以下。
本發(fā)明的吸附器由于用于操作簡便的直接血液灌注法，吸附器的篩網(wǎng)必須是吸附材料不從吸附器流出的篩網(wǎng)眼，并且必須是不捕捉血球成分的篩網(wǎng)眼。如果將吸附器的篩網(wǎng)的網(wǎng)眼比血球成分小的篩網(wǎng)安裝在吸附器上，血球成分被吸附器捕捉。而將吸附器的篩網(wǎng)的網(wǎng)眼比吸附材料大的篩網(wǎng)安裝到吸附器上時，吸附器內的吸附材料流出到通血中而進入體內。因此吸附器的篩網(wǎng)眼優(yōu)選100～200μm。
所謂本發(fā)明中的水不溶性微粒，是指治療時沒有被吸附器的篩網(wǎng)捕捉而能夠從吸附器流出而進入體內的水不溶性粒子。因此作為水不溶性微粒所定義的粒徑的上限值依賴于所使用的吸附器的篩網(wǎng)眼。例如，吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸為150μm時，水不溶性微粒的粒徑的上限值是150μm。
可以從吸附器流出的尺寸的水不溶性微粒存在于吸附器內在安全性方面是個大問題。根據(jù)“第14改正局方制劑總則17注射劑”的“水不溶性微粒試驗法”所述的某注射劑(容積100mL以上)的不溶性微粒的標準，可如下所述考慮有關與直接血液灌注用吸附器相關的水不溶性微粒的安全性的標準。
上述試驗方法記載了兩種，而在限度比第1法“使用光遮蔽型自動微粒測定裝置的方法”更嚴格的第2法“使用顯微鏡的方法”中，注射劑(容量100mL以上)的水不溶性微粒數(shù)的標準為在1mL中100μm以上的水不溶性微粒是12個以下，并且25μm以上的水不溶性微粒是2個以下。也有如血液過濾那樣作為補充液大量注入15-18L到靜脈中的例子，但如專題著作(圖表輸液手冊，北村建樹著，中外醫(yī)學社出版)所述，通常作為輸液使用的輸液總量為1天2～2.5L以下。這里將2L作為總輸液量，此時容許輸液中含有的最大值，在治療時即使吸附器內的全部水不溶性微粒進入體內也安全時，與水不溶性微粒數(shù)的安全有關的指標是10μm以上的水不溶性微粒每個吸附器為24000個以下，并且25μm以上的水不溶性微粒每個吸附器為4000個以下。因此，與水不溶性微粒數(shù)的安全有關的指標，考慮每個吸附器內的水不溶性微粒數(shù)偏差時，10μm以上的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均+6SD每個吸附器為24000個以下，25μm以上的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均+6SD每個吸附器為4000個以下。再者，本發(fā)明中的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均與SD，是由6個吸附器分別測定的以粒子個數(shù)為基準的每個吸附器的水不溶性微粒數(shù)的平均值與標準偏差。6SD是標準偏差的6倍值。本發(fā)明中水不溶性微粒數(shù)的測定，采用上述第2法“使用顯微鏡的方法”進行，但也可以使用庫樂爾特顆粒計數(shù)器(通過檢測粒子通過孔隙時的電阻而測定相當于等體積球的直徑)進行測定。
本發(fā)明中水不溶性微粒數(shù)如以下所述求出。邊向填充有吸附材料的吸附器中通入使用0.22μm的過濾器過濾過的水，邊將吸附材料裝入不會產(chǎn)生水不溶性微粒的容器(例市售的生理食鹽液的空容器)中，把全部漿液轉移到另一個準備的容器中，在容器間重復5次這種轉移操作從而充分攪拌吸附材料后，靜置到吸附材料進行沉降。吸附材料是否沉降，取上層澄清液，采用上述測定方法測定上層澄清液中的微粒濃度。由該微粒濃度的測定值算出吸附器內含有的水不溶性微粒數(shù)而求出每個吸附器的水不溶性微粒。
水不溶性微粒的除去也可以采用傾析等間歇操作進行，但需要時間、效率低。即優(yōu)選如下所述能連續(xù)地除去水不溶性微粒。有關本發(fā)明中的水不溶性微粒的除去，圖1中示出了一實施例的簡略圖。圖1中1為吸附材料，2為水不溶性微粒，3為除去微粒的篩網(wǎng)，4為過濾器，5為泵，6為噴嘴，7為微粒除去槽。使吸附材料分散在設置有水不溶性微粒通過而吸附材料不通過的篩網(wǎng)的容器內的洗滌液中，從利用篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，使用具有捕捉水不溶性微粒的過濾器的循環(huán)·水不溶性微粒除去管線，邊利用過濾器捕捉洗滌液中的水不溶性微粒邊經(jīng)噴嘴再注入洗滌液，使微粒除去槽內的吸附材料長時間分散，進行水不溶性微粒的除去。
圖1只不過是一例，只要是具有除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)的裝置則沒有特殊限定。另外，水不溶性微粒的除去管線也可以是多個。
除去該水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸太小時不能除去水不溶性微粒，若太大則除去水不溶性微粒時吸附材料從篩網(wǎng)流出而產(chǎn)生損失。此外，從篩網(wǎng)流出的吸附材料的量多時，除去水不溶性微粒的過濾器產(chǎn)生堵塞，難以連續(xù)處理。除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸，優(yōu)選使除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸的比為1.3～1.5。
接著，對于本發(fā)明的吸附器，將一實施例的簡略截面圖示于圖2。圖2中1為吸附材料，8為血液的流入口，9為血液的流出口，10為柱，12為吸附器的篩網(wǎng)，11為吸附器。然而本發(fā)明的吸附器并不限定于這樣的具體例，只要是在具有液體入口與出口，并且具有防止吸附材料往容器外流出的機構的容器內填充了病因物質的吸附材料的吸附器，則形狀沒有特殊限定。
實施例以下，根據(jù)本發(fā)明的實施例具體地進行說明。
(參考例)在兩端安裝有孔徑15μm的過濾器的玻璃制圓筒柱(內徑9mm，柱長150mm)中分別均一地填充瓊脂糖材料(Bio-rad公司制的BiogelA-5m，粒徑50～100目)、乙烯基系高分子材料(東曹公司制的TOYOPEARL HW-65，粒徑50～100μm)與纖維素材料(Chisso公司制的Cellulofine GC-700m，粒徑45～105μm)，使用蠕動泵通水，求出流量與壓力損失ΔP的關系。把其結果示于圖3。
如圖3所示，TOYOPEARL HW-65與Cellulofine GC-700m大致與壓力的增加成正比地增大流量，而BiogelA-5m引起壓實，即使增大壓力而流量并不增大。本發(fā)明中如前者那樣，把壓力損失ΔP與流量的關系直到0.3kgf/cm2時呈直線關系的材料稱為硬質。
(制造例)加入平均粒徑約446μm、粒徑分布的變動系數(shù)14％、球狀蛋白質的排除極限分子量5×107的多孔纖維素球珠24L、4N的NaOH水溶液6.6L與環(huán)氧氯丙烷7L，加水使總量為33L，在40℃下攪拌2小時進行反應。反應后用水充分洗滌球珠而得到環(huán)氧化纖維素球珠。環(huán)氧化纖維素球珠的環(huán)氧基量是16.4μmol/ml(濕潤體積)。
制備將3kg的硫酸葡聚糖(硫含量約18％，分子量約4000)溶解于15L水的硫酸葡聚糖水溶液，加入用水濕潤狀態(tài)的環(huán)氧化纖維素球珠24L，使用NaOH水溶液成為堿性后，在45℃下反應6小時。反應后，使用水與食鹽水充分洗滌球珠后，加入將0.34kg的L-色氨酸溶解于11L稀NaOH水溶液而得到的溶液，在50℃下反應8小時。然后，用水與食鹽水充分洗滌球珠，得到硫酸葡聚糖與色氨酸固定化纖維素球珠的吸附材料。該吸附材料的平均粒徑是446μm，粒徑分布的變動系數(shù)是14％。此外，平均粒徑與粒徑分布的變動系數(shù)，是充分地攪拌水不溶性載體與吸附材料的漿液，取適當量置于玻璃皿上，由使用體視顯微鏡把焦點對準約150μm以上的吸附材料攝影的放大照片，采用3點圓法測定100個吸附材料，以粒子個數(shù)為基準求出。
(實施例1)把制造例的吸附材料填充在兩端安裝有網(wǎng)眼150μm的聚對苯二甲酸乙二醇酯制篩網(wǎng)的內徑10mm、長34mm的丙烯酸制柱(容積2.7mL)中，得到吸附器。然后相對于血液1mL添加5單位的肝素，使抗凝固的健康人血液40mL按流速6.5mL/分循環(huán)2小時。循環(huán)2小時前后的混合血液的血球數(shù)如表1所示，任何一種情況的血球均顯示良好的通過性。另外，循環(huán)前后的混合血液中的LDL-膽甾醇、血纖維蛋白原、與HDL-膽甾醇的濃度如表2所示，LDL-膽甾醇從163mg/dL降低到105mg/dL，血纖維蛋白原從210mg/dL降低到152mg/dL，而HDL-膽甾醇只從49mg/dL降到46mg/dL。
此外，制造例的吸附材料的色氨酸固定化量由吸附材料的氮含量求出。即，將1mL的制造例的吸附材料用水充分洗滌后，在60℃下減壓干燥6小時以上后，使用微量全氮分析裝置進行定量。其結果，制造例的吸附材料的色氨酸固定化量是7.8μmol/mL。
此外，制造例的吸附材料的硫酸葡聚糖固定化量利用硫酸葡聚糖與甲苯胺藍具有親和性而測定。即，相對于3mL的制造例的吸附材料，加入100mL左右調節(jié)為約90mg/L的甲苯胺藍(堿性藍17(東京化成))水溶液，攪拌10分鐘，靜置后，采用630nm下的吸光度對上面澄清的甲苯胺藍進行定量，由其減少量求出。其結果制造例的吸附材料的硫酸葡聚糖固定化量為0.23μmol/mL。
表1

表2

(實施例2)使制造例的吸附材料(漿液濃度30％，液量16L)分散在設置有網(wǎng)眼212μm的篩網(wǎng)的槽內，從被篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，將漿液-溶劑液(水)使用循環(huán)管線，經(jīng)噴嘴把漿液-溶劑液再注入到槽內，邊使槽內的吸附材料長時間分散，邊按流量32L/分進行10分鐘漿液-溶劑液的循環(huán)。另外，在處于設置有篩網(wǎng)的槽外的漿液-溶劑液的循環(huán)管線上設置網(wǎng)眼104μm的篩網(wǎng)，求出上述10分鐘循環(huán)中從網(wǎng)眼122μm的篩網(wǎng)流出而被網(wǎng)眼104μm的篩網(wǎng)捕捉的吸附材料的量。該量如表3所示，是8.0mL。
假定安裝捕捉水不溶性微粒的0.22μm的過濾器而代替循環(huán)管線中的網(wǎng)眼104μm的篩網(wǎng)，在上述條件下進行了水不溶性微粒的除去時，估計伴隨水不溶性微粒的除去的吸附材料的損失(流出)量為約8.0mL，該量少。另外，如果是該流出量，則連續(xù)運轉時，通過在捕捉水不溶性微粒的過濾器前設置預過濾器，也可以避免流出的水不溶性微粒造成的過濾器堵塞。
此外，吸附器的篩網(wǎng)眼采用與實施例1相同尺寸，水不溶性微粒除去槽的篩網(wǎng)眼采用與本實施例相同尺寸的場合，除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(212μm)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸(150μm)的比是1.41。
(比較例1)使制造例的吸附材料(漿液濃度30％，液量16L)分散在設置有網(wǎng)眼233μm的篩網(wǎng)的槽內，從被篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，將漿液-溶劑液(水)使用循環(huán)管線，經(jīng)過噴嘴把漿液-溶劑液再注入到槽內，邊使槽內的吸附材料長時間分散，邊按流量32L/分進行10分鐘漿液-溶劑液的循環(huán)。另外，在處于設置有篩網(wǎng)的槽外的漿液-溶劑液的循環(huán)管路上設置網(wǎng)眼104μm的篩網(wǎng)，求出上述10分鐘循環(huán)中從網(wǎng)眼233μm的篩網(wǎng)流出而被網(wǎng)眼104μm的篩網(wǎng)捕捉的吸附材料的量。該量如表3所示，是20mL。
假定安裝捕捉水不溶性微粒的0.22μm的過濾器而代替循環(huán)管線中的網(wǎng)眼104μm的篩網(wǎng)，在上述條件下進行了水不溶性微粒的除去時，估計伴隨水不溶性微粒的除去的吸附材料的損失(流出)量約為20mL。該量比實施例2多。而連續(xù)運轉時，為了避免除去水不溶性微粒的過濾器的堵塞，即使設置了預過濾器，預過濾器的尺寸也比實施例2大。
此外，吸附器的篩網(wǎng)眼采用與實施例1相同的尺寸，水不溶性微粒除去槽的篩網(wǎng)眼利用與本例相同的尺寸的場合，除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(233μm)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸(150μm)的比是1.55。
表3

(實施例3)使制造例的吸附材料(漿液濃度15％，液量16L)分散在設置有網(wǎng)眼212μm的篩網(wǎng)的微粒除去槽內的洗滌液中，從被篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，使用具有捕捉自212μm的篩網(wǎng)流出的水不溶性微粒的0.2 2μm的過濾器的循環(huán)·水不溶性微粒除去管線，邊利用過濾器捕捉洗滌液中的水不溶性微粒，邊按流量32L/分循環(huán)洗滌液，經(jīng)噴嘴將洗滌液再注入到微粒除去槽內，使微粒除去槽內的吸附材料長時間分散，進行10分鐘水不溶性微粒的除去。此外，除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(212μm)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸(150μm)的比是1.41。
在封閉系統(tǒng)中向6個具有實施例1中使用的吸附器的篩網(wǎng)、容器250mL的柱中填充除去了水不溶性微粒的約250mL的吸附材料后，邊向吸附器內通入用0.22μm的過濾器過濾的水邊驅出吸附材料，測定吸附器內的水不溶性微粒數(shù)。(因吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸是150μm，故水不溶性微粒的粒徑的上限值是150μm)有關水不溶性微粒的測定方法，在第14改正局方制劑總則17注射劑的水不溶性微粒試驗法中，由于纖維素系吸附材料是半透明的，故采用該方法不能進行測定。因此，使用通過檢測粒子通過孔隙時的電阻而測定相當于等體積球的直徑的庫樂爾特顆粒計數(shù)器測定了水不溶性微粒。但由于吸附材料的水不溶性載體是多孔質，故實際粒徑為采用庫樂爾特顆粒計數(shù)器測定的粒徑乘以修正系數(shù)的值(實際粒徑＝測定的粒徑×2)。(以后的實施例與比較例的水不溶性微粒數(shù)的測定采用本測定方法實施)6個吸附器的吸附器內的水不溶性微粒數(shù)的測定結果如表4所示，每個吸附器中10～150μm的水不溶性微粒測定值的平均+6SD是8474個，每個吸附器中25～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是1648個。如上所述，水不溶性微粒數(shù)達到了安全水平。
(實施例4)使制造例的吸附材料(漿液濃度30％，液量16L)分散在設置有網(wǎng)眼212μm的篩網(wǎng)的微粒除去槽內的洗滌液中，從被篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，使用具有捕捉自212μm的篩網(wǎng)流出的水不溶性微粒的0.22μm的過濾器的循環(huán)·水不溶性微粒除去管線，邊利用過濾器捕捉洗滌液中的水不溶性微粒邊按流量32L/分循環(huán)洗滌液，經(jīng)噴嘴把洗滌液再注入到微粒除去槽內，使微粒除去槽內的吸附材料長時間分散，進行10分鐘水不溶性微粒的除去。此外，除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(212μm)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸(150μm)的比是1.41。
在封閉系統(tǒng)中向6個具有實施例1中使用的吸附器的篩網(wǎng)、容量為250mL的柱中填充除去了水不溶性微粒的約250mL的吸附材料后，邊向吸附器內通入用0.22μm的過濾器過濾的水邊驅出吸附材料，測定吸附器內的水不溶性微粒數(shù)。(因吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸是150μm，故水不溶性微粒的粒徑上限值是150μm)6個吸附器的吸附器內的水不溶性微粒數(shù)的測定結果如表4所示，每個吸附器中10～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是8501個，每個吸附器中25～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是1652個。如上所述，水不溶性微粒數(shù)達到了安全水平。
(實施例5)使制造例的吸附材料(漿液濃度50％，液量6L)分散在設置有網(wǎng)眼212μm的篩網(wǎng)的微粒除去槽內的洗滌液中，從被篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，使用具有捕捉自212μm的篩網(wǎng)流出的水不溶性微粒的0.22μm的過濾器的循環(huán)·水不溶性微粒除去管線，邊利用過濾器捕捉洗滌液中的水不溶性微粒邊按流量32L/分循環(huán)洗滌液，經(jīng)噴嘴把洗滌液再注入到微粒除去槽內，使微粒除去槽內的吸附材料長時間分散，進行10分鐘水不溶性微粒的除去。此外，除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(212μm)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸(150μm)的比是1.41。
在封閉系統(tǒng)中向6個具有實施例1中使用的吸附器的篩網(wǎng)、容量為250mL的柱中填充除去了水不溶性微粒的約250mL的吸附材料后，邊向吸附器內通入用0.22μm的過濾器過濾的水邊驅出吸附材料，測定吸附器內的水不溶性微粒數(shù)。(因吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸是150μm，故水不溶性微粒的粒徑上限值是150μm)6個吸附器的吸附器內的水不溶性微粒數(shù)的測定結果如表4所示，每個吸附器中10～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是4412個，每個吸附器中25～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是831個。如上所述，水不溶性微粒數(shù)達到了安全水平。
(比較例2)使制造例的吸附材料(漿液濃度30％，液量16L)分散在設置有網(wǎng)眼180μm的篩網(wǎng)的微粒除去槽內的洗滌液中，從被篩網(wǎng)分隔的吸附材料不存在的部位，使用具有捕捉自180μm的篩網(wǎng)流出的水不溶性微粒的0.22μm的過濾器的循環(huán)·水不溶性微粒除去管線，邊利用過濾器捕捉洗滌液中的水不溶性微粒邊按流量32L/分循環(huán)洗滌液，經(jīng)噴嘴把洗滌液再注入到微粒除去槽內，使微粒除去槽內的吸附材料經(jīng)長時間分散，進行10分鐘水不溶性微粒的除去。此外，除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸(180μm)與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸(150μm)的比是1.20。
在封閉系統(tǒng)中向6個具有實施例1中使用的吸附器的篩網(wǎng)、容量為250mL的柱中填充除去了水不溶性微粒的約250mL的吸附材料后，邊向吸附器內通入用0.22μm的過濾器過濾的水邊驅出吸附材料，測定吸附器內的水不溶性微粒數(shù)。(因吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸是150μm，故水不溶性微粒的粒徑上限值是150μm)。6個吸附器的吸附器內的水不溶性微粒數(shù)的測定結果如表4所示。每個吸附器中10～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是23909個，每個吸附器中25～150μm的水不溶性微粒的測定值的平均+6SD是13142個。如上所述，水不溶性微粒數(shù)沒有達到安全水平。
表4

權利要求
1.直接血液灌注用吸附器，是填充有吸附材料的直接血液灌注用吸附器，該吸附材料包含以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300μm～600μm、粒徑分布的變動系數(shù)為10％～20％的水不溶性載體的粒子群，每個吸附器的存在于吸附器內的10μm以上的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均+6SD為24000個以下，每個吸附器的25μm以上的水不溶性微粒數(shù)的測定值的平均+6SD為4000個以下。
2.權利要求1所述的直接血液灌注用吸附器，其中，吸附材料的球狀蛋白質的排除極限分子量為2×104～1×108。
3.權利要求1或2所述的直接血液灌注用吸附器，其中，吸附材料為纖維素類載體。
4.權利要求1所述的直接血液灌注用吸附器，其中，吸附材料為纖維素類載體，吸附材料的球狀蛋白質的排除極限分子量為5×105～1×108，并且填充了低密度脂蛋白和血纖維蛋白原的吸附材料。
5.取得填充到直接血液灌注用吸附器中的吸附材料的方法，其中，使用除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸的比為1.3～1.5的篩網(wǎng)，從包含以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300μm～600μm且粒徑分布的變動系數(shù)為10％～20％的粒子群的吸附材料中除去水不溶性微粒。
全文摘要
提供不需要特殊的造粒設備、涂布設備，使用具有比較容易得到的粒徑分布的水不溶性載體，并且填充有除去水了不溶性微粒的吸附材料的直接血液灌注用吸附器、與除去了水不溶性微粒的直接血液灌注用吸附材料的取得方法。使用除去水不溶性微粒的篩網(wǎng)眼尺寸與吸附器的篩網(wǎng)眼尺寸的比為1.3～1.5的水不溶性微粒除去篩網(wǎng)，實現(xiàn)沒有吸附材料損失而填充有以粒子個數(shù)為基準算出的平均粒徑為300～600μm、粒度分布的變動系數(shù)為10％～20％，并且除去水不溶性微粒達到安全水平的吸附材料的直接血液灌注用吸附器的取得。
文檔編號A61L33/00GK1988926SQ20058002488
公開日2007年6月27日 申請日期2005年7月20日 優(yōu)先權日2004年7月23日
發(fā)明者藤田耕資, 中谷勝, 小林明, 西本岳弘 申請人:株式會社鐘化