專(zhuān)利名稱：：一種可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠及其制備方法，屬于醫(yī)藥工程的藥物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：殼聚糖是甲殼素N-脫乙?；漠a(chǎn)物，是由β(1→4)鍵合的D-葡糖胺殘基和數(shù)目不同、分布無(wú)規(guī)的N-乙酰葡糖胺組成的線性多糖。殼聚糖由于分子鏈上具有游離氨基可以溶于稀酸溶液，因此比甲殼素具有更為廣泛的用途。作為一種天然陽(yáng)離子生物高聚物，殼聚糖具有來(lái)源廣泛、無(wú)毒、無(wú)味、抗血栓、抗靜電、耐堿、成膜性、生物黏附性、生物相容性和生物降解性，而且其降解產(chǎn)物無(wú)毒、無(wú)免疫原性、無(wú)致癌性。這些特性使殼聚糖成為應(yīng)用前景廣闊的生物醫(yī)藥載體[1]。以碘甲烷或縮水甘油三甲基氯化銨等試劑與殼聚糖反應(yīng)可得到殼聚糖季銨鹽。殼聚糖季銨鹽與殼聚糖相比，具有更好的水溶性、親水性及陽(yáng)離子性，因此在應(yīng)用上殼聚糖季銨鹽具有更高的吸濕保濕性、抑菌性、金屬離子螯合性、絮凝性等，多用于化妝品、水處理等領(lǐng)域[2][3][4]。近來(lái)人們開(kāi)始將殼聚糖季銨鹽用于醫(yī)藥領(lǐng)域。如將殼聚糖季銨鹽與殼聚糖復(fù)合成膜，在表面鍵合肝素，作為一種新型抗凝血材料[5]。將以縮水甘油三甲基氯化銨與殼聚糖反應(yīng)所制得的N-(2-羥基)丙基-3-三甲基氨化銨殼聚糖納米微粒用作蛋白質(zhì)載體，結(jié)果表明該載藥體系對(duì)于BSA模型蛋白可以得到較高的包埋率(90％)，并可實(shí)現(xiàn)BSA的緩慢釋放[6]。殼聚糖及其衍生物常以水凝膠形式應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。水凝膠具有親水性好、組織相容性好、能有效保持所包埋蛋白質(zhì)、多肽等活性生物物質(zhì)活性的特點(diǎn)，因而廣泛用于藥物載體、生物分離、細(xì)胞培養(yǎng)等領(lǐng)域[7]。尤其是智能水凝膠，因?yàn)槠淇梢皂憫?yīng)于環(huán)境刺激(如溫度、pH值、電場(chǎng)等)而發(fā)生性質(zhì)的改變，如體積溶脹度變化或相轉(zhuǎn)變，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)刺激的響應(yīng)性，因此近年來(lái)智能水凝膠作為藥物載體、分離介質(zhì)、細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)、組織工程材料得到了廣泛的研究[8]。利用殼聚糖本身的陽(yáng)離子性質(zhì)，或?qū)ζ涓叻肿渔溕系牧u基、氨基修飾，可制備具有不同pH敏感響應(yīng)性的水凝膠。Makarand等將聚乙烯吡咯烷酮與殼聚糖混合凍干制備水凝膠用于抗生素的釋放，結(jié)果表明該水凝膠為半互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，并表現(xiàn)出pH敏感溶脹性質(zhì)，即在酸性環(huán)境中溶脹，在堿性環(huán)境中收縮。該體系可以作為抗生素在酸性環(huán)境中釋放的載體[9]。Chen等對(duì)殼聚糖進(jìn)行修飾，得到了N，O-羧甲基化殼聚糖，并以京尼平將其與海藻酸鈉交聯(lián)，制備了在中性環(huán)境中溶脹、酸性環(huán)境中收縮的pH敏感水凝膠，將其用于蛋白質(zhì)的pH敏感釋放[10]。將殼聚糖與聚丙烯酰胺類(lèi)具有溫度敏感性的聚合物結(jié)合，還可得到兼具溫度敏感性和pH敏感性的水凝膠。Liliana等將殼聚糖與聚N-異丙基丙烯酰胺結(jié)合形成半互穿網(wǎng)絡(luò)體系，利用殼聚糖的pH敏感性和聚N-異丙基丙烯酰胺的溫度敏感性得到具有雙重刺激響應(yīng)性的水凝膠[11]。此外，Chenite等將甘油磷酸鹽加入殼聚糖溶液中，通過(guò)調(diào)節(jié)殼聚糖與水分子之間的相互作用，可以使殼聚糖溶液在體溫下發(fā)生膠凝，實(shí)現(xiàn)藥物的長(zhǎng)效釋放[12]。然而目前所研究制備的智能水凝膠還存在著許多缺點(diǎn)，限制了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用。首先，目前所制備的智能水凝膠大多不具有可注射性，通常在體外成形，必須通過(guò)手術(shù)植入才能進(jìn)入體內(nèi)，這給病人帶來(lái)了經(jīng)濟(jì)上的負(fù)擔(dān)和肉體上的痛苦以及應(yīng)用上的不便。其次，目前所制備的智能水凝膠大多不能生物降解或缺乏生物相容性。當(dāng)藥物釋放完畢后，必須通過(guò)手術(shù)從人體中取出，這也限制了水凝膠作為藥物載體的臨床應(yīng)用。如聚丙烯酰胺類(lèi)聚合物及其衍生物是目前研究最為廣泛的溫度敏感水凝膠，但聚丙烯酰胺類(lèi)聚合物不能生物降解，且其單體對(duì)人體存在一定的毒性，因此該類(lèi)水凝膠在臨床上的應(yīng)用存在著很大的障礙。另外目前所研制的pH敏感水凝膠的pH響應(yīng)性不夠靈敏，難以迅速響應(yīng)體內(nèi)pH的微小變化而實(shí)現(xiàn)藥物釋放的“通-斷”。因此有必要制備一種可注射并具有較好pH敏感性的可生物降解水凝膠，以利用其來(lái)包埋藥物、蛋白質(zhì)、多肽、細(xì)胞、酶、抗體等，并實(shí)現(xiàn)所包埋物質(zhì)的智能控釋。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一在于提供一種可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠。該水凝膠可包埋藥物、蛋白質(zhì)、多肽、細(xì)胞、酶、抗體等，以溶液形式注射入體內(nèi)，在體溫下形成水凝膠，并可響應(yīng)體內(nèi)pH變化發(fā)生溶脹、溶解，實(shí)現(xiàn)藥物的智能控釋?zhuān)R床應(yīng)用方便。本發(fā)明的另一目的在于提供一種制備這種水凝膠的方法。本發(fā)明所提供的水凝膠由以下成分組成(1)1.0-10.0wt％的殼聚糖季銨鹽；(2)1.0-20.0wt％的α-或β-甘油磷酸鹽。所述殼聚糖季銨鹽水凝膠在溫度低于30℃、pH在6.8-8.0之間為溶液，在溫度30-60℃、pH在6.5-8.0之間形成水凝膠并保持穩(wěn)定。所述殼聚糖季銨鹽水凝膠可以響應(yīng)于pH變化發(fā)生溶脹、溶解。固體微粒、水溶性添加物、藥物、多肽、蛋白質(zhì)、酶、細(xì)胞、抗體可在膠凝前預(yù)先加入到所述水凝膠中。所述殼聚糖季銨鹽水凝膠可以在動(dòng)物或人的組織、器官內(nèi)在位形成，可以用作在位釋放藥物、試劑的載體。本發(fā)明中提出了一種制備所述可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠的方法，步驟如下(1)將一定摩爾比的殼聚糖與2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨在60-90℃間反應(yīng)一段時(shí)間后，以丙酮沉淀、洗滌，經(jīng)烘干得到季銨基團(tuán)取代度為20％-100％的殼聚糖季銨鹽；(2)將步驟(1)中所述的殼聚糖季銨鹽溶解于pH2.0-6.0的酸性溶液中以得到1.0-10.0wt％的殼聚糖季銨鹽溶液；(3)在1-10℃之間將1.0-20.0wt％的甘油磷酸鹽溶液逐滴加入步驟(2)中所述的殼聚糖季銨鹽溶液中，攪拌得到pH在6.5-8.0之間的均勻清澈混合溶液；(4)升高溫度到膠凝溫度，并恒溫一段時(shí)間，得到均勻透明的殼聚糖季銨鹽水凝膠。所述方法在步驟(3)中可加入固體微粒、水溶性添加物、藥物、多肽、蛋白質(zhì)、酶、細(xì)胞、抗體到所制的混合溶液中。所述方法可在步驟(4)中包括以下步驟(4a)將混合溶液倒入容器、模型或注射入動(dòng)物或人組織、器官、身體空腔內(nèi)，以使溶液膠凝為所需形狀。殼聚糖分子量范圍為5-200萬(wàn)，脫乙酰度為65％-100％。殼聚糖與2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨的摩爾比范圍為1∶2-1∶10，優(yōu)選為1∶4-1∶6。制備殼聚糖季銨鹽的反應(yīng)時(shí)間范圍為1-24h，優(yōu)選為6-12h。酸性溶液包括醋酸、鹽酸、乳酸、檸檬酸、抗壞血酸、蟻酸。膠凝溫度范圍為30-60℃，優(yōu)選為36-38℃，膠凝在1h內(nèi)完成。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鹽制備的可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠，可通過(guò)環(huán)境溫度的變化實(shí)現(xiàn)溶液-凝膠轉(zhuǎn)變。該體系可以溶液形式注射入體內(nèi)，在體溫下在位膠凝，能適應(yīng)體內(nèi)組織或空隙的不同形狀，可用于填充空隙，修復(fù)缺損。該體系保留了殼聚糖生物材料的生物相容性、生物降解性，并提高了其親水性、pH敏感性，可響應(yīng)于體內(nèi)pH值變化發(fā)生溶脹、溶解以實(shí)現(xiàn)藥物的智能釋放，提高了藥物在體內(nèi)的利用率和安全性。本發(fā)明提供的可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠及其制備方法還具備以下特點(diǎn)(1)本發(fā)明提供的制備方法，方法簡(jiǎn)便，條件溫和，可望保持生物活性藥物的高活性。(2)本發(fā)明提供的殼聚糖季銨鹽水凝膠，pH響應(yīng)性高，可望實(shí)現(xiàn)靈敏的、重現(xiàn)性好的藥物智能控制釋放。圖1殼聚糖及殼聚糖季銨鹽的紅外光譜。注圖中a線為殼聚糖的紅外光譜，b線為季銨化后的殼聚糖季銨鹽的紅外光譜。從圖中可知，季銨化后1597cm-1處的氨基伸縮振動(dòng)峰消失，在1481cm-1出現(xiàn)-CH3的C-H彎曲振動(dòng)強(qiáng)吸收峰。圖2實(shí)施例2制備的殼聚糖季銨鹽-甘油磷酸鹽水溶液及在37℃下形成的水凝膠照片。注圖中a為殼聚糖季銨鹽溶液，b為殼聚糖季銨鹽-β-甘油磷酸鈉混合溶液，c為在37℃下加熱膠凝后形成的殼聚糖季銨鹽水凝膠。圖3實(shí)施例2制備的殼聚糖季銨鹽水凝膠的掃描電鏡照片。圖4實(shí)施例2制備的殼聚糖季銨鹽水凝膠在不同pH緩沖溶液中質(zhì)量比隨時(shí)間變化示意圖。圖5實(shí)施例2制備的殼聚糖季銨鹽水凝膠的pH敏感性示意圖。具體實(shí)施方案本發(fā)明包括可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠及其制備方法。殼聚糖季銨鹽水凝膠制備的具體方法和步驟說(shuō)明如下(1)殼聚糖季銨鹽的制備將殼聚糖分散于水或異丙醇中，將2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨水溶液加入殼聚糖分散液中，加熱到反應(yīng)溫度，反應(yīng)一段時(shí)間。將反應(yīng)液倒入丙酮中沉淀、洗滌，烘干得到殼聚糖季銨鹽。殼聚糖與2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨的摩爾比為1∶2-1∶10，反應(yīng)溫度為60-90℃，反應(yīng)時(shí)間為1-24h。(2)殼聚糖季銨鹽水凝膠的制備將上述步驟(1)所得的殼聚糖季銨鹽溶解于酸性溶液中，冷卻到1-10℃，攪拌下逐滴加入適量一定濃度的甘油磷酸鹽溶液，繼續(xù)攪拌一段時(shí)間使其混合均勻。將所得混合溶液加熱到膠凝溫度，并恒溫一段時(shí)間直到溶液膠凝完全。酸性溶液pH范圍為2.0-6.0。殼聚糖季銨鹽溶液濃度范圍為1.0-10.0wt％，甘油磷酸鹽濃度范圍為1.0-20.0wt％，膠凝溫度為30-60℃。(3)載藥殼聚糖季銨鹽水凝膠的制備將上述步驟(1)所得的殼聚糖季銨鹽溶解于酸性溶液中，冷卻到1-10℃，加入所需包埋的藥物、蛋白質(zhì)、多肽、細(xì)胞、酶或抗體等，攪拌下逐滴加入適量一定濃度的甘油磷酸鹽溶液，繼續(xù)攪拌一段時(shí)間使其混合均勻。將所得混合溶液加熱到膠凝溫度，并恒溫一段時(shí)間直到溶液膠凝完全。上述方法將通過(guò)下面的實(shí)例進(jìn)一步描述，但是提供的實(shí)例不能作為對(duì)此方法的限制。實(shí)施例1將3.0g殼聚糖分散于20mL水中，在80℃下攪拌1h。將16.94g2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨溶解于15mL水中，加入殼聚糖分散液中。在80℃下攪拌反應(yīng)12h后，將反應(yīng)液倒入丙酮中沉淀，在冰箱中攪拌洗滌過(guò)夜后烘干，得到白色疏松產(chǎn)物。通過(guò)紅外光譜表征(附圖1)，證明殼聚糖鏈上發(fā)生季銨基團(tuán)取代，生成殼聚糖季銨鹽。實(shí)施例2將實(shí)施例1中所制殼聚糖季銨鹽0.50g溶解于8mL0.1mol/L的乳酸溶液中，完全溶解。冷卻至4℃，攪拌下逐滴加入0.25g/mL的β-甘油磷酸鈉溶液2mL，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆?。所得溶液pH值為7.4。將該混合溶液加熱到37℃并保溫60min使該體系膠凝充分。該體系在4℃下可穩(wěn)定保存。殼聚糖季銨鹽溶液、殼聚糖季銨鹽-β-甘油磷酸鈉混合溶液、37℃下膠凝形成的殼聚糖季銨鹽水凝膠的照片如附圖2所示。實(shí)施例3將實(shí)施例1中所制殼聚糖季銨鹽0.50g溶解于8mL0.1mol/L的醋酸溶液中，完全溶解。冷卻至4℃，攪拌下逐滴加入0.25g/mL的β-甘油磷酸鈉溶液2mL，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆颉Ｋ萌芤簆H值為7.0。將該混合溶液加熱到37℃并保溫60min使該體系膠凝充分。該體系在4℃下可穩(wěn)定保存。實(shí)施例4將實(shí)施例1中所制殼聚糖季銨鹽0.50g溶解于8mL0.1mol/L的乳酸溶液中，完全溶解。冷卻至4℃，攪拌下逐滴加入0.25g/mL的β-甘油磷酸鈉溶液2mL，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆?。向混合溶液中加?0wt％的牛血清白蛋白(BSA，模型藥物)溶液，并混合均勻。將含有牛血清白蛋白的混合溶液加熱到37℃并保溫60min使該體系膠凝充分。該體系在4℃下可穩(wěn)定保存。實(shí)施例5將實(shí)施例2中所制殼聚糖季銨鹽水凝膠浸于不同pH值的磷酸鹽緩沖溶液中，定時(shí)取出稱重。殼聚糖季銨鹽水凝膠在酸性環(huán)境中發(fā)生溶脹、溶解，在中性、堿性環(huán)境基本保持原有狀態(tài)不變。水凝膠在不同pH值緩沖溶液中的質(zhì)量比隨時(shí)間的變化曲線如圖4所示。質(zhì)量比為Wt/W0，式中Wt為一定時(shí)間間隔時(shí)水凝膠的質(zhì)量，W0為水凝膠的初始質(zhì)量。將殼聚糖季銨鹽水凝膠浸于不同pH值的磷酸鹽緩沖溶液中，定時(shí)取出稱重，直至達(dá)到恒重。殼聚糖季銨鹽的pH敏感性示意圖如圖5所示，即水凝膠在不同緩沖溶液中的最終質(zhì)量比與pH值的關(guān)系曲線。最終質(zhì)量比為We/W0，式中We為水凝膠在不同pH值緩沖溶液中的最終質(zhì)量，W0為水凝膠的初始質(zhì)量。參考文獻(xiàn)[1]蔣挺大，殼聚糖，北京化學(xué)工業(yè)出版社，2001年第1版[2]許晨，盧燦輝，丁馬太，殼聚糖季銨鹽的合成及結(jié)構(gòu)表征，功能高分子學(xué)報(bào)，1997，10(1)51-55[3]ZhishenJia，Dongfengshen，WeiliangXu，Synthesisandantibacterialactivitiesofquaternaryammoniumsaltofchitosan，CarbohydrateResearch，2001，3331-6[4]Sang-HoonLim，SamuelM.Hudson，Synthesisandantimicrobialactivityofawater-solublechitosanderivativewitha.ber-reactivegroup，CarbohydrateResearch，2004，339313-319[5]屠美，崔瑩，周長(zhǎng)忍等，肝素化殼聚糖季銨鹽/殼聚糖復(fù)合膜抗凝血性能的研究，功能高分子學(xué)報(bào)，1997，10(3)328-332[6]YongmeiXu，YuminDu，RonghuaHuang，LepingGao，PreparationandmodificationofN-(2-hydroxyl)propyl-3-trimethylammoniumchitosanchloridenanoparticleasaproteincarrier，Biomaterials，2003，245015-5022[7]AllanS.Hoffman，Hydrogelsforbiomedicalapplications，AdvancedDrugDeliveryReviews，2002，433-12[8]YongQiu，KinamPark，Environment-sensitivehydrogelsfordrugdeliver，AdvancedDrugDeliveryReviews，2001，53321-339[9]MakarandV.Risbud，AnandwardhanA.Hardikar，SujataV.Bhat，RameshR.Bhonde，pH-sensitivefreeze-driedchitosan-polyvinylpyrrolidonehydrogelsascontrolledreleasesystemforantibioticdelivery，JournalofControlledRelease，2000，6823-30[10]Sung-ChingChen，Yung-ChihWu，F(xiàn)wu-LongMi，Yu-HsinLin，Lin-ChienYu，Hsing-WenSung，AnovelpH-sensitivehydrogelcomposedofN，O-carboxymethylchitosanandalginatecross-linkedbygenipinforproteindrugdelivery，JournalofControlledRelease，2004，96285-300[11]LilianaVerestiuc，ClaudiaIvanov，EugenBarbu，JohnTsibouklis，Dual-stimuli-responsivehydrogelsbasedonpoly(N-isopropylacrylamide)/chitosansemi-interpenetratingnetworks，InternationalJournalofPharmaceutics，2004，269185-194[12]A.Chenite，C.Chaput，D.Wang，C.Combes，M.D.Buschmann，C.D.Hoemann，J.CLeroux，B.L.Atkinson，F(xiàn).Binette，A.Selmani，Novelinjectableneutralsolutionsofchitosanformbiodegradablegelsinsitu，Biomaterials，2000，212155-216權(quán)利要求1.一種可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠，其組成為(1)1.0-10.0wt％的殼聚糖季銨鹽；(2)1.0-20.0wt％的α-或β-甘油磷酸鹽。所述殼聚糖季銨鹽水凝膠在溫度低于30℃、pH在6.8-8.0之間為溶液，在溫度30-60℃、pH在6.8-8.0之間形成水凝膠。2.權(quán)利要求1所述水凝膠，可響應(yīng)于pH變化發(fā)生溶脹、溶解。3.權(quán)利要求1所述水凝膠的制備方法，步驟如下(1)將一定摩爾比的殼聚糖與2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨在60-90℃間反應(yīng)一段時(shí)間后，以丙酮沉淀、洗滌，經(jīng)烘干得到季銨基團(tuán)取代度為20％-100％的殼聚糖季銨鹽；(2)將步驟(1)中所述的殼聚糖季銨鹽溶解于pH2.0-6.0的酸性溶液中得到1.0-10.0wt％的殼聚糖季銨鹽溶液；(3)在1-10℃之間將1.0-20.0wt％的甘油磷酸鹽溶液逐滴加入步驟(2)中所述的殼聚糖季銨鹽溶液中，攪拌得到pH在6.5-8.0之間的均勻清澈混合溶液；(4)升高溫度到膠凝溫度，并恒溫一段時(shí)間，得到均勻透明的殼聚糖季銨鹽水凝膠。4.權(quán)利要求3所述制備方法，在步驟(3)中可加入固體微粒、水溶性添加物、藥物、多肽、蛋白質(zhì)、酶、細(xì)胞、抗體等到所制的混合溶液中。5.權(quán)利要求3所述制備方法，步驟(4)中可包括以下步驟(4a)將混合溶液倒入容器、模型或注射入動(dòng)物或人組織、器官、身體空腔內(nèi)，使溶液膠凝為所需形狀。6.權(quán)利要求3所述制備方法，步驟(1)中所述殼聚糖分子量范圍為5-200萬(wàn)，脫乙酰度為65％-100％。7.權(quán)利要求3所述制備方法，步驟(1)中所述殼聚糖與2，3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨的摩爾比范圍為1∶2-1∶10，優(yōu)選為1∶4-1∶6。8.權(quán)利要求3所述制備方法，步驟(1)中所述反應(yīng)時(shí)間為1-24h，優(yōu)選為6-12h。9.權(quán)利要求3所述制備方法，步驟(2)中所述酸性溶液包括醋酸、鹽酸、乳酸、檸檬酸、抗壞血酸、蟻酸。10.權(quán)利要求3所述制備方法，步驟(4)中所述膠凝溫度范圍為30-60℃，優(yōu)選范圍為36-38℃。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)一種可注射型pH敏感殼聚糖季銨鹽水凝膠及其制備方法，屬于醫(yī)藥工程的藥物制劑領(lǐng)域。該方法采用殼聚糖季銨鹽與甘油磷酸鹽制備出具有pH敏感性的可注射型水凝膠。其制備步驟為(1)將殼聚糖與2，3－環(huán)氧丙基三甲基氯化銨在反應(yīng)溫度下反應(yīng)一段時(shí)間后，以丙酮沉淀、洗滌，經(jīng)烘干得到殼聚糖季銨鹽；(2)將制備的殼聚糖季銨鹽溶解于酸性溶液中；(3)將甘油磷酸鹽溶液逐滴加入殼聚糖季銨鹽溶液中，攪拌得到均勻清澈的混合溶液；(4)升高溫度到膠凝溫度，并恒溫一段時(shí)間，得到均勻透明的殼聚糖季銨鹽水凝膠。該體系可在體溫下發(fā)生膠凝，并響應(yīng)pH值變化發(fā)生溶脹、溶解，從而實(shí)現(xiàn)所包埋藥物的智能釋放。文檔編號(hào)A61K47/36GK1830420SQ200510051350公開(kāi)日2006年9月13日申請(qǐng)日期2005年3月8日優(yōu)先權(quán)日2005年3月8日發(fā)明者馬光輝,蘇志國(guó),吳頡申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所