專利名稱：猴頭菌絲體寡糖在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及猴頭菌絲體寡糖的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
本發(fā)明所稱的猴頭菌絲體(Hericium erinocens(Bull)eers)為小刺猴頭菌的發(fā)酵產(chǎn)物.其菌絲體浸膏多年來作為原料藥應(yīng)用于臨床。
我國(guó)市場(chǎng)上以猴頭菌絲體培養(yǎng)浸膏為原料制成的藥品有胃樂新沖劑。盡管該制劑對(duì)胃、十二指腸潰瘍、慢性胃炎等顯示出良好的療效，但對(duì)菌絲體中有效成分的提取、分離、純化方法及活性成分的基本化學(xué)組成等問題仍未得到解決，長(zhǎng)期以來一直制約著猴頭菌絲體的開發(fā)和利用。
通過對(duì)猴頭菌絲體中有效成分的提取、分離、純化得到了猴頭菌絲體寡糖，其基本化學(xué)結(jié)構(gòu)為HPGPC分析結(jié)果表明，該化合物的分子量分布在0.36-1.5×103，說明該化合物主要為寡糖類成分；理化性質(zhì)結(jié)果表明，糖的含量占90％左右；組成糖分析結(jié)果表明，該化合物主要由Man，Glc兩種單糖組成，摩爾比為1∶5；液—質(zhì)結(jié)果表明，該化合物主要由2-7個(gè)單糖連接的寡糖構(gòu)成，其中雙糖和三糖各占20％左右，其它為四糖、五糖、六糖、和七糖，還有少量的單糖。雙糖、四糖、五糖均有兩種構(gòu)型，六糖有三種構(gòu)型，三糖和七糖有一種構(gòu)型。采用HPLC法，氨基柱純化分離得到的雙塘、三糖，利用NMR，LC-MS，GG-MS，GC及甲基化分析，推測(cè)雙糖是以α-Glcl→4a-Glc和a-Glcl→6Man(或a-Manl→6Glc)兩種形式存在，三糖是α以-Glcl→4α-Glcl→6a-Glc形式存在。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供猴頭菌絲體寡糖的用途，即在制藥中的應(yīng)用。
實(shí)際上本發(fā)明提供猴頭菌絲體寡糖作為制備治療胃部疾病的藥中的應(yīng)用。
為了更好地理解本發(fā)明，下面給出猴頭菌絲體寡糖的提取方法，以及藥理試驗(yàn)來說明其在制藥領(lǐng)域中的用途。
方法1將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏10k8，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對(duì)透析膜分子量范圍8仟-1萬水透析，收集透析外液，濃縮至浸膏1kg，冷凍干燥，得猴頭菌絲體寡糖800g。
方法2取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀1kg，加蒸餾水配成水溶液，通過DEAE-SephadexA50離子交換樹脂柱，分別用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，濃縮至浸膏，冷凍干燥，得猴頭菌絲體寡糖780g。
方法3取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀1kg，加蒸餾水配成水溶液。通過分子量范圍在8仟-1萬的中空纖維超濾，得到寡糖800g。
經(jīng)過藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)篩選，上述化合物具有治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎效果。
按藥劑學(xué)方法，猴頭菌絲體寡糖能夠制備多種臨床藥物制劑作為治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎的藥物，所說的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，特別是作為各種口服劑型。
本發(fā)明的藥物含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體。
上文的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載休，包括稀釋劑、賦形刑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體。
本發(fā)明藥物可以通過口服、直腸、靜脈、肌肉注射或胃腸外給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑。也可使其活性成分或組合物與多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
下述的藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)了猴頭菌絲體寡糖的藥物制劑具有治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎的藥理活性。
一、猴頭菌提取物對(duì)乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍的影響摘要本實(shí)驗(yàn)觀察猴頭菌寡糖對(duì)乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍大鼠的影響。分別連續(xù)灌胃給予乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍大鼠480mg/kg猴頭菌寡糖14天，對(duì)乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍均有顯著的抑制作用。
藥物陽性藥為胃樂新，由白求思醫(yī)大藥廠生產(chǎn)，批號(hào)041205。
動(dòng)物220-260g雄性大鼠。購自中國(guó)人民解放軍208醫(yī)院動(dòng)物室。
方法取大鼠禁食不禁水48小時(shí)，乙醚麻醉，仰位固定，腹部去毛，碘酒、酒精消毒，劍突下正中開2.5cm左右的切口，用彎止血鉗在右肝臟下方將十二指腸輕輕勾出，將胃部輕輕拉出腹外，在胃的腹側(cè)面胃體部與幽門竇交界處，用0.25ml注射器刺入大鼠胃漿膜下0.4-0.5mm，注入10％醋酸溶液0.05ml，將胃輕輕送回，縫合腹壁肌層及皮膚，消毒后常規(guī)飼養(yǎng)，于術(shù)次日起，分組，連續(xù)給藥14天，末次給藥2h，斷頭，結(jié)扎幽門和賁門，胃浸于1％甲醛液中，固定10分鐘，沿胃大彎剪開，外翻洗滌，在注射醋酸溶液相應(yīng)部位的粘膜面觀察潰瘍形成情況，以潰瘍最長(zhǎng)徑和最短徑的均值作為潰瘍直徑，計(jì)算潰瘍指數(shù)。見表。
表.猴頭多糖提取物對(duì)乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍的影響

注n＝8，X±SD?！鵓＜0.05，※※※P＜0.001。
小結(jié)480mg/kg猴頭菌寡糖14天，對(duì)乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍均有顯著的抑制作用。480mg/kg對(duì)乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍的抑制作用尤其顯著。
二，猴頭菌提取物對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍的影響摘要采用應(yīng)激性胃潰瘍模型比較猴頭多糖提取物與胃樂新的抗?jié)冏饔谩?br> 分別連續(xù)灌胃給予大鼠480mg/kg猴頭菌寡糖15天，結(jié)果猴頭菌寡糖具有明顯的抗?jié)冏饔谩?br> 動(dòng)物Wister大鼠32只，購自白求思醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物室。
藥物陽性藥為胃樂新，由白求思醫(yī)大藥廠生產(chǎn)，批號(hào)041205。
方法取大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，每天灌胃給予480mg/kg猴頭菌寡糖及胃樂新各一次，對(duì)照組給予常水，連續(xù)給予15天，第14天給藥后將大鼠饑餓32h，次日下午16時(shí)用乙醚麻醉，將大鼠四肢用蠅綁在鐵籠上，同時(shí)將綁完的大鼠頭朝下，垂直放置18h，將動(dòng)物拉頸處死。將其胃的賁門及幽門結(jié)扎，取全胃，并向內(nèi)注入1％福爾馬林固定5min后，沿胃大彎剪開，平展于玻璃扳上，觀察判斷等級(jí)。
結(jié)果對(duì)照組為3.87±0.35，480mg/kg猴頭菌寡糖為2.38±1.51(P＜0.05)，胃樂新為2.13±1.13(P＜0.001)。
由此可見猴頭菌寡糖有非常明顯的抗?jié)冏饔谩?br> 三、猴頭菌提取物對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎實(shí)驗(yàn)研究摘要采用主動(dòng)免疫加灌服膽汁及熱水的綜合方法觀察猴頭菌寡糖對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎CAG的治療作用，結(jié)果X mg/kgHl、X mg/kgL2可明顯改善CAG大鼠胃粘膜的變薄，并使胃黏膜固有腺體增多，有良好的治療CAG的作用。
關(guān)鍵詞慢性萎縮性胃炎CAG、猴頭菌寡糖。
1.實(shí)驗(yàn)材料及方法1.1動(dòng)物Wistar雄性大鼠，購自長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心，合格10-5112，體重220-260g。
1.2藥物陽性藥為胃樂新，由白求恩醫(yī)大藥廠生產(chǎn)，批號(hào)041205。
1.3模型的制備1.3.1佐劑抗原的制備取160-180gWistar大鼠，將其饑餓24h后處死取胃黏膜，每只鼠胃黏膜加生理鹽水3ml，利用組織勻漿機(jī)將其打勻，然后加入等體積液體石臘制備成均勻的乳劑，備用。
1.3.2模型的制備取220-260g大鼠90只，在每只大鼠2點(diǎn)背部皮下注射佐劑抗原2ml，每點(diǎn)1ml，2周后重復(fù)1次，再1周后又重復(fù)1次，共免疫3次；自免疫起每隔3天給人鼠灌服豬膽汁2ml/只(膽汁∶甘油＝1∶1)；同時(shí)除灌服豬膽汁當(dāng)天外，每天連續(xù)灌服35天55℃熱水。
1.3.3動(dòng)物處理首次免疫35天處死10只大鼠取胃作組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)，可見胃黏膜腺體變薄，胃腺體減少，個(gè)別胃可見有潰瘍、出血、粘膜下大量細(xì)胞浸潤(rùn)。
1.3.4分組及給藥將余下大鼠隨機(jī)分為六組，即模型對(duì)照組，每天給予常水4ml/只，480mg/kg胃樂新，480mg/kg猴頭菌寡糖，每天給藥1次，連續(xù)給藥30天，并于每周稱重1次。
1.3.5對(duì)胃粘膜病理組織中變化的影響動(dòng)物自胃竇沿小彎至賁門取材，包埋切片。采用x2檢驗(yàn)。
2.結(jié)果2.1對(duì)胃黏膜組織形態(tài)學(xué)的影響從附表及表2可見，模型組胃黏膜變薄、腺體減少等現(xiàn)象的陰性率還是明顯高于給藥組，并伴有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)從肌層增厚而猴頭菌寡糖對(duì)上述現(xiàn)象均有明顯的抑制作用而且未見肌層增厚現(xiàn)象。
2.2對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠體重變化的影響見表3表2.表明，對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠體重的變化無影響。
小結(jié)上述結(jié)果表明，猴頭菌糖蛋白對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎有一定的治療作用。
表1.對(duì)慢性萎縮性胃炎胃粘膜組織形態(tài)學(xué)的影響

注同表1。
表2.對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠體重變化的影響


從以上結(jié)果可以得出本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于有效部位明確，結(jié)構(gòu)清楚，服用量少，對(duì)于治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎有顯著的療效。并優(yōu)于陽性對(duì)照藥。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對(duì)透析膜分子量范圍8仟-1萬水透析，收集透析外液，濃縮至浸膏1kg，冷凍干燥，得粉狀猴頭菌寡糖800g，裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品。
實(shí)施例2取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀1kg，加蒸餾水配成水溶液，通過DEAE-SephadexA50離子交換樹脂柱，分別用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，濃縮至浸膏，冷凍干燥，得猴頭菌寡糖780g，制成XXX，裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品。
實(shí)施例3取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀1kg，加蒸餾水配成水溶液。通過分子量范圍在8仟-1萬的中空纖維超濾，得到寡糖800g，制成XXX，裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.猴頭菌絲體寡糖在制備治療胃部疾病的藥中的應(yīng)用。
2.猴頭菌絲體寡糖在制備治療胃炎疾病的藥中的應(yīng)用。
3.猴頭菌絲體寡糖在制備治療胃潰瘍疾病的藥中的應(yīng)用。
4.猴頭菌絲體寡糖在制備治療慢性萎縮性胃炎疾病的藥中的應(yīng)用。
5.一種猴頭菌絲體寡糖的提取方法，將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏10k8，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對(duì)透析膜分子量范圍8仟-1萬水透析，收集透析外液，濃縮至浸膏1kg，冷凍干燥，得猴頭菌絲體寡糖800g。
6.一種猴頭菌絲體寡糖的提取方法，取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀1kg，加蒸餾水配成水溶液，通過DEAE-SephadexA50離子交換樹脂柱，分別用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，濃縮至浸膏，冷凍干燥，得猴頭菌絲體寡糖。
7.一種猴頭菌絲體寡糖的提取方法，取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀1kg，加蒸餾水配成水溶液。通過分子量范圍在8仟-1萬的中空纖維超濾，得到猴頭菌絲體寡糖。
全文摘要
一種猴頭菌絲體寡糖在制藥中的應(yīng)用，涉及猴頭菌絲體寡糖的用途，將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏加水稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對(duì)透析膜透析，收集透析外液，濃縮至浸膏，得猴頭菌絲體寡糖。其有效部位明確，結(jié)構(gòu)清楚，服用量少，對(duì)于治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎有顯著的療效。
文檔編號(hào)A61P1/04GK1771974SQ20051001725
公開日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月2日
發(fā)明者高其品, 姜瑞芝 申請(qǐng)人:白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠