專利名稱：猴頭菌絲體糖蛋白在制藥中的應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及猴頭菌絲體糖蛋白的用途，尤其涉及在制藥領域中的用途。
背景技術(shù)：
本發(fā)明所稱的猴頭菌絲體(Hericium erinocens(Bull)eers)為小刺猴頭菌的發(fā)酵產(chǎn)物。其菌絲體浸膏多年來作為原料藥應用于臨床。
我國市場上以猴頭菌絲體培養(yǎng)浸膏為原料制成的藥品有胃樂新沖劑。盡管該制劑對胃、十二指腸潰瘍、慢性胃炎等顯示出良好的療效，但對菌絲體中有效成分的提取、分離、純化方法及活性成分的基本化學組成等問題仍未得到解決，長期以來一直制約著猴頭菌絲體的開發(fā)和利用。
通過對猴頭菌絲體中有效成分的提取、分離、純化得到了猴頭菌糖蛋白，其基本化學結(jié)構(gòu)為HPGPC分析結(jié)果表明，該化合物分子量分布為0.5～2.0×104；理化性質(zhì)結(jié)果表明，該化合物是由蛋白質(zhì)和多糖兩部分構(gòu)成，其蛋白質(zhì)和多糖的含量分別為52％和55％，比例約為1∶1；組成糖分析結(jié)果表明，該化合物主要由Man，Gal，Glc三種單糖組成，摩爾比為2∶1∶30；甲基化分析結(jié)果表明，該化合物主要是由1→4和1→6連接為主鏈的糖苷鏈，在0-2，0-3位上有分枝點；離子色譜法對硫酸基進行了測定，其結(jié)果表明，該化合物中不含有硫酸基；氨基酸分析結(jié)果表明，該化合物由15種氨基酸組成，其主要為甘氨酸，含量占1％；利用sevag法除游離蛋白，其結(jié)果表明，蛋白質(zhì)和多糖的比例無改變，說明糖與蛋白質(zhì)是以共價鍵的形式存在，證明該化合物為一種糖蛋白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供猴頭菌絲體糖蛋白的用途，即在制藥中的應用。
實際上本發(fā)明提供猴頭菌絲體糖蛋白作為制備治療胃部疾病的藥中的應用。
為了更好地理解本發(fā)明，下面給出猴頭菌絲體糖蛋白的提取方法，以及藥理試驗來說明其在制藥領域中的用途。
方法1將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對水透析，透析膜分子量范圍8仟-1萬，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏1kg，冷凍干燥，得猴頭菌絲體糖蛋白200g。
方法2取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，通過DEAE-SephadexA50離子交換樹脂柱，用1N NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，采用透析的方法脫鹽，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏，冷凍干燥，得猴頭菌絲體糖蛋白176g。
方法3取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，通過中空纖維超濾(分子量范圍在8仟-1萬)，得到糖蛋白160g。
經(jīng)過藥理學實驗篩選，上述化合物具有治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎效果。
按藥劑學方法，猴頭菌糖蛋白能夠制備多種臨床藥物制劑作為治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎的藥物，所說的藥劑是任何一種藥劑學上所說的劑型，特別是作為各種口服劑型。
本發(fā)明的藥物含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學上可以接受的載體。
上文的載體是指藥學領域常規(guī)的藥物載休，包括稀釋劑、賦形刑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體。
本發(fā)明藥物可以通過口服、直腸、靜脈、肌肉注射或胃腸外給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學領域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑。也可使其活性成分或組合物與多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
下述的藥理實驗證實了猴頭菌糖蛋白的藥物制劑具有治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎的藥理活性。
一、猴頭菌提取物對乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍的影響摘要本實驗觀察猴頭菌糖蛋白乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍大鼠的影響。分別連續(xù)灌胃給予乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍大鼠480mg/kg猴頭菌糖蛋白14天，對乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍均有顯著的抑制作用。
藥物陽性藥為胃樂新，由白求思醫(yī)大藥廠生產(chǎn)，批號041205。
動物220-260g雄性大鼠。購自中國人民解放軍208醫(yī)院動物室。
方法取大鼠禁食不禁水48小時，乙醚麻醉，仰位固定，腹部去毛，碘酒、酒精消毒，劍突下正中開2.5cm左右的切口，用彎止血鉗在右肝臟下方將十二指腸輕輕勾出，將胃部輕輕拉出腹外，在胃的腹側(cè)面胃體部與幽門竇交界處，用0.25ml注射器刺入大鼠胃漿膜下0.4-0.5mm，注入10％醋酸溶液0.05ml，將胃輕輕送回，縫合腹壁肌層及皮膚，消毒后常規(guī)飼養(yǎng)，于術(shù)次日起，分組，連續(xù)給藥14天，末次給藥2h，斷頭，結(jié)扎幽門和賁門，胃浸于1％甲醛液中，固定10分鐘，沿胃大彎剪開，外翻洗滌，在注射醋酸溶液相應部位的粘膜面觀察潰瘍形成情況，以潰瘍最長徑和最短徑的均值作為潰瘍直徑，計算潰瘍指數(shù)。見表2。
表.猴頭多糖提取物對乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍的影響

注n＝8，X±SD。※P＜0.05，※※※P＜0.001。
小結(jié)480mg/kg猴頭菌糖蛋白14天，對乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍均有顯著的抑制作用。480mg/kg對乙酸所致?lián)p傷型胃潰瘍的抑制作用尤其顯著。
二，猴頭菌提取物對應激性胃潰瘍的影響摘要采用應激性胃潰瘍模型比較猴頭多糖提取物與胃樂新的抗?jié)冏饔谩?br> 分別連續(xù)灌胃給予大鼠480mg/kg猴頭菌糖蛋白15天，結(jié)果猴頭菌糖蛋白具有明顯的抗?jié)冏饔谩?br> 動物Wister大鼠32只，購自白求思醫(yī)科大學動物室。
藥物陽性藥為胃樂新，由白求思醫(yī)大藥廠生產(chǎn)，批號041205。
方法取大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，每天灌胃給予480mg/kg猴頭菌糖蛋白及胃樂新各一次，對照組給予常水，連續(xù)給予15天，第14天給藥后將大鼠饑餓32h，次日下午16時用乙醚麻醉，將大鼠四肢用蠅綁在鐵籠上，同時將綁完的大鼠頭朝下，垂直放置18h，將動物拉頸處死。將其胃的賁門及幽門結(jié)扎，取全胃，并向內(nèi)注入1％福爾馬林固定5min后，沿胃大彎剪開，平展于玻璃扳上，觀察判斷等級。
結(jié)果對照組為3.87±0.35，480mg/kg猴頭菌糖蛋白為2.38±1.51(P＜0.05)，胃樂新為2.13±1.13(P＜0.001)。
由此可見猴頭菌糖蛋白、猴頭菌寡糖及糖蛋白和寡糖組合物均有非常明顯的抗?jié)冏饔谩?br> 三、猴頭菌提取物對大鼠慢性萎縮性胃炎實驗研究摘要采用主動免疫加灌服膽汁及熱水的綜合方法觀察猴頭菌糖蛋白對大鼠慢性萎縮性胃炎CAG的治療作用，結(jié)果Xmg/kgHl、Xmg/kgL2可明顯改善CAG大鼠胃粘膜的變薄，并使胃黏膜固有腺體增多，有良好的治療CAG的作用。
關(guān)鍵詞慢性萎縮性胃炎CAG、猴頭菌糖蛋白。
1.實驗材料及方法1.1動物Wistar雄性大鼠，購自長春高新醫(yī)學動物實驗研究中心，合格10-5112，體重220-260g。
1.2藥物陽性藥為胃樂新，由白求恩醫(yī)大藥廠生產(chǎn)，批號041205。
1.3模型的制備1.3.1佐劑抗原的制備取160-180gWistar大鼠，將其饑餓24h后處死取胃黏膜，每只鼠胃黏膜加生理鹽水3ml，利用組織勻漿機將其打勻，然后加入等體積液體石臘制備成均勻的乳劑，備用。
1.3.2模型的制備取220-260g大鼠90只，在每只大鼠2點背部皮下注射佐劑抗原2ml，每點1ml，2周后重復1次，再1周后又重復1次，共免疫3次；自免疫起每隔3天給人鼠灌服豬膽汁2ml/只(膽汁∶甘油＝1∶1)；同時除灌服豬膽汁當天外，每天連續(xù)灌服35天55℃熱水。
1.3.3動物處理首次免疫35天處死10只大鼠取胃作組織形態(tài)學檢測，可見胃黏膜腺體變薄，胃腺體減少，個別胃可見有潰瘍、出血、粘膜下大量細胞浸潤。
1.3.4分組及給藥將余下大鼠隨機分為六組，即模型對照組，每天給予常水4ml/只，480mg/kg胃樂新，480mg/kg猴頭菌糖蛋白，每天給藥1次，連續(xù)給藥30天，并于每周稱重1次。
1.3.5對胃粘膜病理組織中變化的影響動物自胃竇沿小彎至賁門取材，包埋切片。采用x2檢驗。
2.結(jié)果2.1對胃黏膜組織形態(tài)學的影響從附表及表2可見，模型組胃黏膜變薄、腺體減少等現(xiàn)象的陰性率還是明顯高于給藥組，并伴有大量炎細胞浸潤從肌層增厚而猴頭菌糖蛋白對上述現(xiàn)象均有明顯的抑制作用而且未見肌層增厚現(xiàn)象。
2.2對慢性萎縮性胃炎大鼠體重變化的影響見表3表2.表明，對慢性萎縮性胃炎大鼠體重的變化無影響。
小結(jié)上述結(jié)果表明，猴頭菌糖蛋白對大鼠慢性萎縮性胃炎有一定的治療作用。
表1.對慢性萎縮性胃炎胃粘膜組織形態(tài)學的影響

注同表1。
表2.對慢性萎縮性胃炎大鼠體重變化的影響


從以上結(jié)果可以得出本發(fā)明的優(yōu)點在于有效部位明確，結(jié)構(gòu)清楚，服用量少，對于治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎有顯著的療效。
具體實施例方式實施例1將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏10k8，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對水透析，透析膜分子量范圍8仟-1萬，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏1kg，冷凍干燥，得粉狀猴頭菌糖蛋白200g，裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品。
實施例2取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，通過DEAE-SephadexA50離子交換樹脂柱，用1N NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，采用透析的方法脫鹽，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏，冷凍干燥，得猴頭菌糖蛋白176g，制成XXX，裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品。
實施例3取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，通過分子量范圍在8仟-1萬的中空纖維超濾，得到糖蛋白160g，制成XXX，裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.猴頭菌絲體糖蛋白在制備治療胃部疾病的藥中的應用。
2.猴頭菌絲體糖蛋白在制備治療胃炎疾病的藥中的應用。
3.猴頭菌絲體糖蛋白在制備治療胃潰瘍疾病的藥中的應用。
4.猴頭菌絲體糖蛋白在制備治療慢性萎縮性胃炎疾病的藥中的應用。
5.一種猴頭菌絲體糖蛋白的提取方法，將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對水透析，透析膜分子量范圍8仟-1萬，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏。
6.一種猴頭菌絲體糖蛋白的提取方法，取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，通過DEAE-SephadexA50離子交換樹脂柱，用1N NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，采用透析的方法脫鹽，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏，冷凍干燥，得猴頭菌絲體糖蛋白。
7.一種猴頭菌絲體糖蛋白的提取方法，取猴頭菌絲發(fā)酵浸膏10kg，加水1-2倍稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇至醇濃度為80％，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，通過分子量范圍在8仟-1萬的中空纖維超濾，得到糖蛋白。
全文摘要
一種猴頭菌絲體糖蛋白在制藥中的應用，涉及猴頭菌絲體糖蛋白的用途，將猴頭菌絲體發(fā)酵浸膏加水稀釋，攪拌，離心，離心液加乙醇，離心，收集沉淀，加蒸餾水配成水溶液，對水透析，收集透析內(nèi)液，濃縮至浸膏，得猴頭菌絲體糖蛋白。其有效部位明確，結(jié)構(gòu)清楚，服用量少，對于治療急、慢性胃炎，胃潰瘍，慢性萎縮性胃炎有顯著的療效。
文檔編號A61K36/06GK1772287SQ20051001725
公開日2006年5月17日 申請日期2005年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月2日
發(fā)明者高其品, 姜瑞芝 申請人:白求恩醫(yī)科大學制藥廠