專利名稱：細胞因子調節(jié)劑及相關用法的制作方法
背景技術：
本申請要求2003年9月12日提交的美國臨時申請60/502,755的優(yōu)先權，所述申請被并入本文作為參考。
本發(fā)明涉及體內的炎癥，更具體地，涉及調節(jié)炎癥以治療與其相關的狀況和疾病。
已知炎癥與影響身體的多種狀況和疾病有關。例如，已知關節(jié)內的炎癥使關節(jié)炎和類風濕性疾病以及骨和關節(jié)破壞性疾病的癥狀和由關節(jié)炎和類風濕性疾病以及骨和關節(jié)破壞性疾病引起的結構畸形惡化，關節(jié)炎和類風濕性疾病為例如粘液囊炎、腱炎、肌炎和骨關節(jié)炎，骨和關節(jié)破壞性疾病為例如骨質疏松癥。
還已知炎癥有助于多種心血管疾病和代謝疾病的進程，所述疾病為例如動脈粥樣硬化、血栓形成和與肥胖有關的胰島素抵抗力。動脈粥樣硬化可增加中風和心肌梗死的可能性，而胰島素抵抗力可導致糖尿病。
還認為炎癥有助于神經系統(tǒng)病癥如阿爾茨海默氏病的進展。
實際上，現在有許多研究發(fā)現炎癥與多種慢性退行性疾病有關。這些研究已經識別了某些產生促炎化學物質(細胞因子)的細胞-巨噬細胞，所述促炎化學物質(細胞因子)誘導產生炎癥應答的信號級聯(lián)。這些細胞因子在應答外源傳染物、創(chuàng)傷性或慢性損傷和異?；瘜W或物理應激的炎癥應答中起作用。
因此，已經開發(fā)了用于調節(jié)炎癥細胞因子的釋放或炎癥細胞因子(特別是得自巨噬細胞的白介素-1(IL-1)細胞因子)信號傳輸的治療。例如，授權給Vignery的美國專利5,635,478公開了使用降鈣素基因相關肽(CGRP)調節(jié)IL-釋放并從而治療類風濕性關節(jié)炎。雖然高特異性CGRP在調節(jié)IL-1中有效，但是其應用受到價格過高的限制，并且目前尚未確定這種化合物長期使用是否有毒性。
發(fā)明概述上述問題在本發(fā)明中得以解決，本發(fā)明提供了調節(jié)白介素細胞因子和/或調節(jié)由白介素細胞因子引起的生理反應的組合物。這種調節(jié)在控制免疫應答和/或炎性狀況中是有效的。一方面，該組合物可包括薔薇果(rosehips)，以及黑莓(blackberry)、越桔(blueberry)和接骨木(elderberry)中的至少一種。另一方面，該組合物可包括薔薇果和磷蝦油。又一方面，該組合物可包括薔薇果、黑莓、越桔、接骨木和磷蝦油。再一方面，該組合物可包括薔薇果、白藜蘆醇和非洲豆蔻(Aframomum melegueta)。再一方面，該組合物可包括薔薇果、白藜蘆醇和變胞藻黃素。
第四方面，該組合物可包括選自以下的至少一種成分薔薇果、越桔、黑莓、接骨木、酸果蔓、迷迭香、丁香、小白菊、蕁麻根、朝鮮薊、靈芝(reishi mushroom)、橄欖提取物、綠茶提取物(沒食子酸表棓兒茶素)、葡萄籽提取物、白藜蘆醇、非洲豆蔻、齒葉乳香(boswellia serrata)提取物、boswellia forte、依普黃酮、生育三烯酚、月見草油、INM-176、琉璃苣油、磷蝦油、葉黃素中的至少一種(如變胞藻黃素)、生咖啡提取物(綠原酸)和阿魏酸。在更具體的方面，該組合物可包括薔薇果、蕁麻根、橄欖提取物和朝鮮薊。在另一個具體的方面，該組合物可包括薔薇果、白藜蘆醇和變胞藻黃素。
第五方面，本發(fā)明可提供控制受試者的免疫應答和/或炎性狀況的方法，該方法包括對受試者給藥有效量的本發(fā)明的組合物以控制免疫應答和/或炎性狀況。在具體的方面，該組合物可抑制免疫調節(jié)細胞或促炎細胞如巨噬細胞和/或白細胞的功能。在更具體的方面，該組合物可通過例如阻止產生白介素細胞因子的基因的基因轉錄而抑制所述基因的表達。在更具體的方面，該組合物可抑制白介素細胞因子炎癥應答機制。在這些方面中，該組合物可減少和/或消除骨質、關節(jié)、肌肉、組織、動脈、靜脈、毛細管和其它組織、系統(tǒng)和/或細胞中的促免疫調節(jié)應答(pro-immunomodulatory)和/或促炎應答。
第六方面，本發(fā)明可提供通過對受試者給藥有效量的所述組合物調節(jié)和/或控制免疫細胞如巨噬細胞、白細胞和淋巴細胞的功能的方法。
另一方面，本發(fā)明可提供通過對受試者給藥細胞因子抑制量的所述組合物調節(jié)細胞因子從受試者的細胞釋放(也稱為分泌)的方法。
另一方面，本發(fā)明可提供通過對受試者給藥有效量的本發(fā)明的組合物抑制細胞對白介素細胞因子的應答的方法。在具體的方面，這種給藥可調節(jié)炎癥生物標志物(biomarker)如C反應蛋白的產生，所述C反應蛋白為一指示機體內過度炎癥的肝臟產生的生物標志物。
第九方面，本發(fā)明可提供通過給藥治療有效量的所述組合物治療由炎癥所致的疾病或異常狀況的方法。在具體的方面，疾病或異常狀況包括以下的至少一種心血管疾病或狀況、血栓形成、與胰島素抵抗力和肥胖有關的新陳代謝狀況、創(chuàng)傷性損傷、關節(jié)炎、骨質疏松癥和阿爾茨海默氏病。在更具體的方面，該方法可包括對患有炎性狀況的受試者給藥組合物，以減輕或緩解創(chuàng)傷性損傷、手術或可能引起炎癥的其它事件之后的疼痛、觸痛、感染和/或不適。
本發(fā)明提供用于治療多種基于免疫調節(jié)和基于炎癥的狀況、癥狀和疾病的組合物和相關方法。因為使用的成分容易得到且相對廉價，本發(fā)明提供了簡單且有成本效益的治療多種由炎癥所致的疾病和狀況的方法。此外，因為各成分是相對穩(wěn)定的，許多成分可以與其它材料混合并作為多功能增補劑或食品提供。
通過參考附圖和發(fā)明詳述可更容易了解和理解本發(fā)明的這些及其它目的、優(yōu)點和特點。


圖1為實施例3中的有動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展的受試者在用本發(fā)明的組合物治療之前的血管剖視圖；圖2為說明實施例3中的動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展中白介素細胞因子的作用的受試者的血管與肝臟的第二剖視圖；和圖3為說明實施例3中的組合物對動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展中白介素細胞因子的作用的受試者的血管與肝臟的第三剖視圖。
發(fā)明詳述I.組合物本發(fā)明的組合物可包括選自以下的一種或多種成分薔薇果、越桔、黑莓、接骨木、酸果蔓、迷迭香、丁香、小白菊、蕁麻根、朝鮮薊、靈芝、橄欖提取物、綠茶提取物(沒食子酸表棓兒茶素)、葡萄籽提取物、白藜蘆醇、非洲豆蔻、齒葉乳香提取物、boswellia forte、依普黃酮、生育三烯酚、月見草油、INM-176、琉璃苣油、磷蝦油、葉黃素中的至少一種(如變胞藻黃素)、生咖啡提取物(綠原酸)和阿魏酸。具體地，本發(fā)明的組合物可包括薔薇果，以及黑莓、越桔、接骨木和磷蝦油中的至少一種。一組合物也可包括薔薇果、白藜蘆醇和非洲豆蔻。另一個組合物可包括薔薇果、白藜蘆醇和變胞藻黃素。組合物可以本文中所述的任何劑量給藥，用于抑制細胞因子的表達、產生、接收、分泌和/或釋放，以及抑制細胞因子應答，從而減少或消除免疫調節(jié)應答和/或炎癥應答。
可有效地調節(jié)細胞因子如調節(jié)示例性細胞因子如IL-1和/或IL-6的產生、接收、分泌和/或釋放的成分的可接受劑量在以下表I中示出。表I中的各個劑量為預測的有效日劑量，以毫克表示。此外，表I中的所有劑量都處在從所述下限值附近到所述上限值附近的范圍內。例如，蕁麻劑量A表述為“250-2500”，其表示每天約250毫克到約2500毫克的蕁麻劑量。
表I用于調節(jié)細胞因子的各成分的可接受劑量

上述表I中所述成分可容易地購得。根據應用和/或供應商，成分可為具有特定效價的提取物、純的成分、與賦形劑混合的成分，并且為多種物理形態(tài)，如液體或粉末。表示為INM-176的成分為得自韓國首爾Scigenic Company，Ltd.的未知組成的化合物。
更具體地，組合物可包括一種或多于一種的薔薇果成分。薔薇果成分的例子包括但不限于干薔薇果、薔薇果油和薔薇果提取物。薔薇果成分可得自屬于薔薇屬的多種植物物種中的任一種，如犬薔薇(Rosacanina)。此外，薔薇果可包括薔薇屬植物的果實、花瓣和/或籽。
可使用任何方法制備薔薇果成分。例如，可使用常規(guī)的收割和干燥方法制備干薔薇果。薔薇果油可以通過標準方法生產并與纖維素進行加工用于制片或用于粉末組合物。另外，薔薇果可以購自加利福尼亞州托蘭斯的MB North America。
本發(fā)明的組合物可以包含一種或多于一種的薔薇果成分。例如，食物增補劑可以包含干薔薇果以及薔薇果提取物。另外，組合物可以包含任何量的薔薇果組分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為薔薇果成分。典型地，組合物包含約500mg到約5000mg的薔薇果成分。
更具體地，組合物可包括一種或多于一種的黑莓成分。黑莓成分的例子包括但不限于干黑莓、黑莓粉和黑莓提取物。黑莓成分可得自屬于懸鉤子屬的多種植物物種中的任一種，如Rubus fruticosus。
可使用任何方法制備黑莓成分。例如，可使用常規(guī)的收割、干燥和粉化方法制備黑莓粉。另外，黑莓可以購自加利福尼亞州Santa Rosa的Van Drunen Farms Futureceuticals。
本發(fā)明的組合物可以包含一種或多于一種的黑莓成分。例如，食物增補劑可以包含黑莓粉以及黑莓提取物。另外，組合物可以包含任何量的黑莓組分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為黑莓成分。典型地，組合物包含約100mg到約1000mg的黑莓成分。
更具體地，組合物可包括一種或多于一種的越桔成分。越桔成分的例子包括但不限于干越桔、越桔粉和越桔提取物。越桔成分可得自屬于越桔屬的多種植物物種中的任一種，如高大越桔(Vacciniumcorymbosum)。
可使用任何方法制備越桔成分。例如，可使用常規(guī)的收割、干燥和粉化方法制備越桔粉。另外，越桔可以購自加利福尼亞州Santa Rosa的Van Drunen Farms Futureceuticals。
本發(fā)明的組合物可以包含一種或多于一種的越桔成分。例如，食物增補劑可以包含越桔粉以及越桔提取物。另外，組合物可以包含任何量的越桔組分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為越桔成分。典型地，組合物包含約200mg到約2000mg的越桔成分。
更具體地，組合物可包括一種或多于一種的接骨木成分。接骨木成分的例子包括但不限于接骨木提取物、干接骨木和接骨木粉。接骨木成分可得自屬于接骨木屬的多種植物物種中的任一種，如美洲接骨木(Sambucus canadensis)。
可使用任何方法制備接骨木成分。例如，可使用常規(guī)的提取技術制備接骨木提取物。另外，接骨木可以購自印第安納州Fort Wayne的Artemis International。
本發(fā)明的組合物可以包含一種或多于一種的接骨木成分。例如，食物增補劑可以包含接骨木粉以及接骨木提取物。另外，組合物可以包含任何量的接骨木組分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為接骨木成分。典型地，組合物包含約400mg到約4000mg的接骨木成分。
此外，組合物可包括非洲豆蔻。非洲豆蔻成分的例子包括但不限于粉碎的非洲豆蔻籽、非洲豆蔻粉和非洲豆蔻提取物。
可使用任何方法制備非洲豆蔻成分。例如，可使用常規(guī)的收割、干燥和提取方法制備非洲豆蔻提取物。另外，非洲豆蔻可以購自衣阿華州Norway的Frontier Natural Products Cooperative。
本發(fā)明的組合物可以包含一種或多于一種的非洲豆蔻成分。例如，食物增補劑可以包含非洲豆蔻粉以及非洲豆蔻提取物。另外，組合物可以包含任何量的非洲豆蔻組分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為非洲豆蔻成分。典型地，組合物包含約500mg到約1500mg的非洲豆蔻成分。
本發(fā)明的組合物可包括磷蝦油。磷蝦油可得自磷蝦屬的任何成員，如南極磷蝦(Euphausia superba)?？墒褂贸Ｒ?guī)生產油的技術得到磷蝦油。另外，磷蝦油可購自加拿大魁北克的Neptune Technologiesand Bioresources。
組合物可以包含任何量的磷蝦油。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為磷蝦油。典型地，組合物包含約300mg到約3000mg的磷蝦油成分。
在組合物包括白藜蘆醇時，白藜蘆醇可得自葡萄皮或其它葡萄組分的提取物。白藜蘆醇在組合物中可以以一種或多種不同的形式存在，例如，提取物形式和粉末形式。白藜蘆醇可以購自密歇根州Holland的Charles Bowman & Co.。
組合物可以包含任何量的白藜蘆醇組分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為白藜蘆醇。典型地，組合物包含約100mg到約1000mg的白藜蘆醇成分。
當組合物包括葉黃素中的至少一種時，葉黃素可為變胞藻黃素。變胞藻黃素可得自天然來源或合成獲得。例如，變胞藻黃素可得自藻類、真菌類和/或甲殼類動物。一種類型的變胞藻黃素可購自夏威夷Kailua-Kona的Cyanotech Corporation。
組合物可以包含任何量的變胞藻黃素成分。例如，食物增補劑的至少約1％(如至少約2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％)可為變胞藻黃素。典型地，組合物包含約0.5mg到約50mg的變胞藻黃素成分。
該組合物可包括一種或多種可藥用賦形劑，如交聯(lián)羧甲纖維素鈉、麥芽糖糊精、硅化微晶纖維素、二氧化硅、硬脂酸、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、乳糖、葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、醋酸纖維素、乙基纖維素等?？筛鶕褂玫慕M合物的形式使用稀釋劑及其它添加劑，如一種或多種可藥用粘合劑、填料、載體、增稠劑、味覺改善劑、著色劑、防腐劑、蛋白質、抗微生物劑、螯合劑、惰性氣體、穩(wěn)定劑、調節(jié)劑、乳化劑或其混合物。
可將組合物的成分加工為具有不同遞送系統(tǒng)的形式。例如，可對成分加工并將其引入膠囊、片劑、凝膠片(gel tabs)、錠劑、條、顆粒、粉末、濃縮物、溶液、洗液、膏或懸浮液中。也可將成分通過噴霧、霧、或氣霧劑給藥到呼吸道中，例如在哮喘、過敏性休克及其它急性休克狀況的治療中?？梢詫⒊煞址謩e配制或與其它食物組合配制，以提供預定量的營養(yǎng)增補劑、增補食品，例如，單次服用塊(singleserving bars)。在一個實施例中，組合物可包括以片劑形式給藥的一種成分和以膠囊形式給藥的另一種組成物。一般地說，組合物可以配制為用于多種給藥途徑，如靜脈內、肌內、皮下、經鼻、舌下、鞘內、局部或皮內給藥途徑。
組合物的劑量可以根據治療的疾病或狀況進行增量給藥。例如，在關節(jié)炎的治療中，組合物可以多個連續(xù)的劑量給藥，通常間隔約6到約12小時，甚至間隔長達約2周?？梢砸匀談┝拷o藥持續(xù)一段時間以獲得炎癥性觸痛、腫脹和疼痛的癥狀減輕?？梢哉{節(jié)劑量以維持這些癥狀的減輕。治療可持續(xù)數周或數月，或者任選地，對于慢性疾病或狀況可無限期地持續(xù)。
II.生產組合物的方法可以根據以下方法生產片劑形式的包括薔薇果、黑莓粉、越桔粉和接骨木提取物的本發(fā)明的示例性組合物?？筛鶕帉W工業(yè)公知的生產技術配制和制備其它給藥介質如凝膠片、膠囊、液體和緩釋制劑等。
將上述表II中劑量1中所述量的薔薇果、黑莓粉和越桔粉加入到二氧化硅中并置于聚乙烯薄膜袋中，混合，直到均勻和均一混合。將得到的混合物置于得自Pennsylvania，East troudsburg的Patterson-Kelley Co.的Patterson Kelley(P.K.)100攪拌器中。然后使以下成分以所列順序通過裝備有20目網篩的得自Kentucky，Florence的Sweco，Inc.的Sweco分離器直接進入P.K.100攪拌器右旋糖、交聯(lián)羧甲纖維素鈉和硅化微晶纖維素。將得到的組合物在P.K.100中攪拌器混合15分鐘。
然后使植物由來的硬脂酸粉通過Sweco分離器直接進入P.K.100攪拌器中。將得到的混合物另外混合五分鐘。將得到的混合物排放到手提袋或超級袋(super sacks)中，壓縮，并通過常規(guī)裝置沖壓成片劑。每片可接受的重量范圍為約250mg到約500mg。每片中薔薇果的量為約1200mg，黑莓的量為約165mg，越桔的量為約330mg。根據該方法生產的片劑可用于本文中所述的體內試驗。
可生產包括磷蝦油的組合物的軟膠囊?？墒褂贸Ｒ?guī)的膠囊生產工藝生產膠囊。各膠囊中磷蝦油的量為約300mg。這些膠囊可以單獨給藥或作為本文中所述體內試驗的一部分與組合物的其它成分的片劑共同給藥。
可以根據上述制片方法生產片劑形式的包括薔薇果和黑莓粉、或薔薇果和越桔粉的本發(fā)明的其它組合物。薔薇果/黑莓片劑中薔薇果的量為約300mg，黑莓的量為約80mg。薔薇果/越桔片劑中薔薇果的量為約300mg，越桔的量為約40mg。根據該方法生產的片劑可如希望的那樣用于本文中所述的體內試驗。
可以根據上述制片方法生產片劑形式的包括薔薇果、白藜蘆醇和非洲豆蔻的另一個組合物，其包括約300mg的薔薇果、10mg的白藜蘆醇和75mg的非洲豆蔻提取物。
可以根據上述制片方法生產片劑形式的包括薔薇果、白藜蘆醇和變胞藻黃素的本發(fā)明的另一個組合物，其包括約300mg的薔薇果、10mg的白藜蘆醇和1mg的變胞藻黃素。
可根據以下方法生產片劑形式的包括橄欖提取物、朝鮮薊、蕁麻根和薔薇果的本發(fā)明的另一個組合物。將上述表II中劑量1中所述量的橄欖提取物、朝鮮薊、蕁麻根和薔薇果加入到二氧化硅中并置于聚乙烯薄膜袋中，混合，直到均勻和均一混合。將得到的混合物置于得自Pennsylvania，East Stroudsburg的Patterson-Kelley Co.的PattersonKelley(P.K.)100攪拌器中。然后使以下成分以所列順序通過裝備有20目網篩的得自Kentucky，Florence的Sweco，Inc.的Sweco分離器直接進入P.K.100攪拌器右旋糖、交聯(lián)羧甲纖維素鈉和硅化微晶纖維素。將得到的組合物在P.K.100混合器中混合15分鐘。
然后使植物由來的硬脂酸粉末通過Sweco分離器直接進入P.K.100攪拌器中。將得到的混合物另外混合五分鐘。將得到的混合物排放到手提袋或超級袋中，壓縮，并通過常規(guī)裝置沖壓成片劑。每片可接受的重量范圍為約250mg到約500mg。
III.組合物成分的選擇本發(fā)明可包括成分篩選方法，用于挑選對于特定健康條件為最佳的、以及可如希望的那樣用于組合物中的成分。例如，在用于調節(jié)IL-1的營養(yǎng)增補劑的情況中，可以通過獨特的篩選方法選擇活性成分。多種因素包括生物學的、商業(yè)的、管理的和描述性的判別因素(discriminators)。一些優(yōu)選的判別因素及其加權值在表2中列出。優(yōu)選地，判別因素根據商業(yè)或消費者驅動目標指定權重。在表2中，權重3表示該判別因素對于選擇方法有重大影響或是重要的(“因素3判別因素”)；2表示該判別因素有重要的權重，但是小于選擇方法中3的重量因數(“因素2判別因素”)；1表示判別因素具有最小的權重(“因素1判別因素”)。
表II用于選擇細胞因子調節(jié)成分的判別因素

*級分生物利用度為吸收到體內并通常通過循環(huán)到達身體組織的口服攝取成分(表達為級分)中活性化合物的百分比。例如，0.10的級分利用度表示口服攝取成分的有效成分的10％從腸道被吸收并在循環(huán)中轉運(一段時間)。
在上述實施例中，主要任務是找到用于人用的、有效的和商業(yè)上成功的IL-1調節(jié)劑。通過將各個候選物的判別因素權重求和并比較總的權重得分選擇出最好的候選物。因此，按照獲得特定成分的成本和該成分的可用性，活性成分在調節(jié)IL-1方面的性能也是有關的。與商業(yè)上獲得成功有關的其它因素為成分的毒性和安全性、以及成分在該組合物銷售市場上的技術和管理的接受性?？赡艽嬖谄渲幸恍┏煞譀]有滿足一個因素3判別因素的情況，并且對于各個成分一個因素3判別因素是不同的。在這些情況中，因素3判別因素為指派的權重，而因素2和因素1判別因素也在選擇方法中得以考慮。
除了上述的成分篩選方法之外，優(yōu)選使治療用組合物或成分經過離體(ex vivo)臨床評價，以證實生物學性質和作用。具體地，受試者使用治療用組合物或成分。在使用之前和使用一段時間之后從受試者得到連續(xù)的血樣，所述一段時間是指所述成分的活性組分可能被吸收并在體循環(huán)系統(tǒng)內轉運的時間，對于大多數化學物質為6小時。將這些血樣加入到體外生物識別系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有對所感興趣的系統(tǒng)的生理學變化敏感的試驗或檢測讀數裝置。這些試驗(稱為離體試驗)結果可與體內臨床得到的結果進行比較。體外結果與離體評價的結果越接近，則該治療劑在身體內具有預期效果的可能性越大。
IV.細胞因子抑制潛力的評價組合物的成分可以通過至少兩種不同的生物學機制調節(jié)細胞因子。在第一種機制中，成分可以抑制白介素細胞因子的產生，即，合成。在這種機制中，據信成分阻止編碼用于白介素細胞因子產生的基因的mRNA轉錄。因此，隨著基因轉錄被阻斷，機體不能合成細胞因子、或在機體內不能合成細胞因子。在第二種機制中，成分可以抑制機體內化學物質和細胞對白介素細胞因子的級聯(lián)應答。更具體地，成分可以阻止急性期蛋白如C反應蛋白(CRP)連同其它化合物的產生。在創(chuàng)傷性和/或炎性狀況下，CRP在人肝臟中通過響應白介素細胞因子如IL-1和IL-6的肝細胞合成。成分可以影響細胞如肝細胞對白介素細胞因子的應答機制，使得那些細胞減少或停止CRP的產生。
在以下實施例中，測量了所列舉的不同成分的白介素細胞因子調節(jié)潛力，包括抑制細胞因子的合成和抑制由細胞因子引起的應答，并報告和評價了每次試驗的結果。
對于上述評價，在白血球中摻雜不同濃度的成分。然后向成分+細胞培養(yǎng)物以及未經處理的白血球對照樣品中加入炎癥刺激物脂多糖(LPS)。將用成分處理的和未經處理的細胞中的IL-1細胞因子的產生進行比較，并外推得到引起由細胞產生的IL-1的濃度發(fā)生50％改變時的成分的濃度。
提供這些實施例用于進一步說明和解釋本發(fā)明，從任何角度都不應及其看作是對本發(fā)明的限制。除非另外說明，所有的溫度測量值表示為攝氏度。
實施例1為了進行本實施例的抑制白介素合成的評價，將人白血球(具體地為得自Virginia，Manassas的ATCC的THP-1細胞)在ATCC推薦的條件下在具有5％二氧化碳的濕潤的37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。為了檢測不同化合物的IL-1抑制潛力，將多組THP-1細胞在96孔板中鋪板。具體地，在補充有10％胎牛血清和抗生素如青霉素和鏈霉素的RPMI1640中鋪板5×105個THP-1細胞。在將這些細胞鋪板后，進行劑量給藥。
在劑量給藥時，將各個成分以不同的劑量對鋪板的THP-1細胞給藥，不同劑量具體為100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml和0μg/ml。例如，在一個板的細胞中，給藥每毫升100微克的蕁麻根提取物，在另一個板的細胞中，給藥每毫升10微克的蕁麻根提取物，在另一個板的細胞中，給藥每毫升1微克的蕁麻根提取物，在另一個板的細胞中，不給藥蕁麻根。在將鋪板的細胞用各成分處理之后，將已進行劑量給藥各成分的THP-1細胞送回到培養(yǎng)箱中并在相同的條件下培養(yǎng)4小時。
其后，將已知的炎癥刺激物LPS加入到各個96孔板中到最終濃度為100毫微克/毫升。將用LPS處理的培養(yǎng)物送回到培養(yǎng)箱并再培養(yǎng)額外的16小時。然后將培養(yǎng)物以1000Gs離心約5分鐘，得到上清液。然后將上清液標記并組構用于IL-1檢測。
為檢測以不同劑量給藥的上清液中分泌的IL-1并由此評價各個成分在各劑量下的IL-1分泌抑制潛力，根據試驗供應商(California，Camarillo的Biosource International)提供的常規(guī)IL-1試驗流程檢測各上清液中IL-1的存在。具體試驗流程在參考文獻ProtocolBooklet，Human IL-1，(2001)中提供，得自Biosource International，其被并入本文作為參考。
大體上，根據該流程，將50微升的各上清液樣品加入到涂有抗IL-1的涂層板的孔中，并將其在室溫下培養(yǎng)2小時。同樣地，將設計用于建立已知的IL-1量的校準用標準品加入到涂有抗IL-1抗體的涂層板的指定孔中并在室溫下培養(yǎng)2小時。
其后，取出各個孔中的液體并將涂層板在洗滌緩沖液中洗滌3次。在第三次洗滌之后，將100微升的酶(辣根過氧化酶)偶聯(lián)的抗IL-1抗體加入到涂層板的各個孔中并在室溫下培養(yǎng)30分鐘。將板再一次如前所述進行洗滌并將100微升的底物溶液(TMB)加入到各個孔中，以顯示在有或沒有所述成分的存在下加入LPS炎癥刺激物所產生的IL-1的量。其后，加入100微升的終止溶液如鹽酸或硫酸，以終止反應。底物溶液(TMB)與偶聯(lián)于抗IL-1抗體的辣根過氧化酶的反應產生有色產物，其在450nm波長具有特異性的光譜吸光度。通過測量由偶聯(lián)有結合酶的抗IL-1抗體的量產生的450nm處的吸光度測定IL-1的存在量，所述吸光度隨著IL-1存在量的不同而不同。
校準用標準樣品經過與上清液樣品一樣的流程，以測定存在于那些校準試樣中的IL-1。檢測校準用標準樣品的光密度以建立已知的不同水平(如每毫升校準稀釋液中1500到50、125、62.5、31.2、0皮克)的IL-1的吸光度。然后將標準校準樣品的光密度繪圖以確定標準化的IL-1吸光度校準曲線。
對于經過檢測和光學測量的每個樣品的上清液，將吸光度對照標準IL-1吸光度校準曲線繪圖，以確定存在于樣品上清液中的IL-1的量。
根據存在于樣品上清液中的IL-1的量，如以下表III所示記錄不同成分的IL-1抑制潛力結果。如其中所示，結果報告為EC50值，其為通常被接受的有效劑量的量度。一般而言，EC50為當與對照樣品相比時引起IL-1濃度發(fā)生50％變化時所需的成分濃度。
表III實施例1的IL-1試驗結果

表III中的試驗結果說明這些成分在減少和/或抑制細胞因子如IL-1的分泌或產生中的有效性。
實施例2
在本實施例中，試驗了本發(fā)明組合物中可包括的其它成分，用于(a)評價這些成分在減少和/或抑制細胞因子如IL-1的分泌或產生中的有效性；(b)評價這些其它成分與任選的主要成分(薔薇果、朝鮮薊提取物、橄欖提取物和蕁麻根)之間的相互作用；和(c)通過測量由肝細胞所致的C反應蛋白(CRP)分泌評價這些其它成分對肝細胞中白介素細胞因子如IL-1應答的作用。
具體地，測量IL-1β從用或未用不同劑量的其它成分、或這些其它成分與任選的主要成分的組合進行預處理的、接觸脂多糖(LPS)后的THP-1細胞中的釋放，以評價其它成分對單核細胞IL-1β分泌的作用。通過測量用或未用不同劑量的其它成分進行預處理的、接觸IL-1和IL-6后的培養(yǎng)物上清液中的CRP評價肝細胞對IL-1的應答。
受試的其它成分為黑莓提取物、越桔提取物、酸果蔓提取物、迷迭香提取物、丁香提取物和白藜蘆醇。表IV表示這些其它成分在有或沒有另外的小劑量的4種主要成分的存在下通過LPS活化測量的對IL-1β分泌的劑量特異性抑制結果。用于檢測IL-1β分泌抑制的方法與實施例1中用于所檢測成分的方法相同。在實施例2中的受試成分中，迷迭香提取物、越桔提取物、接骨木提取物、酸果蔓提取物在相對低的劑量(20-70μg/毫升)下具有IL-1調節(jié)作用。
通過比較任選的主要成分抑制IL-1分泌的作用(例如表III中所示的那些)與表IV中列舉的所述主要成分與其它成分組合抑制IL-1分泌的作用，檢測其它成分干擾所列出的任選主要成分的IL-1調節(jié)作用。例如，如沒有特征性抑制活性所說明的，黑莓的存在未改變薔薇果的IL-1調節(jié)作用。其它成分中沒有一個表現出干擾任選的主要成分，但是一些表現出協(xié)同作用(越桔提取物與薔薇果和蕁麻根表現出協(xié)同作用，接骨木提取物與朝鮮薊提取物和蕁麻根表現出協(xié)同作用)。在表IV中，分別如所示的那樣，“-”表示無干擾或協(xié)同作用，“+”表示有干擾或協(xié)同作用。
通過測量在用或未用不同劑量的其它成分進行預處理的肝細胞接觸IL-1β和IL-6時CRP的分泌，評價肝細胞中IL-1的應答作用。選擇CRP分泌是因為，如上所述，CRP為人的重要的急性期蛋白；在嚴重的創(chuàng)傷和/或炎癥過程中，其血漿濃度增加超過1000倍；在炎性狀況下，CRP響應IL-1和IL-6在肝細胞中表達，如合成或分泌。CRP擔當白介素細胞因子的生物標志物，并且測量這一生物標志物比測量細胞因子本身更有效，因為血液中細胞因子水平經常地不能正確地反映機體內細胞因子的實際量。因此，通過測量由肝細胞所致的CRP分泌，能夠測定細胞應答IL-1和/或IL-6的程度。
為進行本實施例的評價，將得自Maryland，Baltimore的In VitroTechnology的初級分離的人肝細胞在In Vitro Technology推薦的條件下在具有5％二氧化碳的濕潤的37℃培養(yǎng)箱中恢復。為了檢測不同化合物的CRP應答潛力，將多組肝細胞鋪板在96孔板中。具體地，在補充有10％胎牛血清的肝細胞培養(yǎng)基中鋪板1×104個細胞，然后使其接觸不同劑量的受試成分，所述劑量具體為100μg/毫升、10μg/毫升、1μg/毫升和0μg/毫升。例如在一個板的細胞中給藥每毫升100微克的黑莓提取物，在另一個板的細胞中給藥每毫升10微克的量，在另一個板的細胞中給藥每毫升1微克的量，在另一個板的細胞中不給藥蕁麻根。在將鋪板的細胞用各成分處理之后，將已經過劑量給藥成分的肝細胞送回到培養(yǎng)箱中并在相同的條件下培養(yǎng)4小時。
其后，向各個96孔板中加入已知的CRP誘導物如IL-1和IL-6到最終濃度為1毫微克/毫升。將用LPS處理的培養(yǎng)物送回到培養(yǎng)箱并再培養(yǎng)額外的16小時。在培養(yǎng)之后，將上清液標記并組構用于CRP檢測。
為了檢測進行不同劑量給藥的上清液中分泌的CRP并由此評價各成分在各劑量下的CRP分泌抑制潛力，根據試驗供應商Pennsylvania，West Chester的Life Diagnostics，Inc.提供的常規(guī)CRP試驗流程檢測各個上清液中CRP的存在。具體的流程在得自LifeDiagnostics，Inc.的文獻High Sensitivity C-Reactive Protein EnzymeImmunoassay Test Kit，(2003)中提供，其被并入本文作為參考。
大體上，根據流程，將10微升的各上清液樣品與100μl的偶聯(lián)于辣根過氧化酶的第二抗CRP抗體一起加入到涂有抗CRP抗體的涂層板的孔中，將其在室溫下培養(yǎng)45分鐘。同樣地，將設計用于建立已知的CRP量的校準用標準品與偶聯(lián)于HRP的第二抗CRP抗體一起加入到指定的涂有抗CRP抗體的涂層板的孔中，并在室溫下培養(yǎng)45分鐘。
其后，取出各個孔中的液體并將涂層板在洗滌緩沖液中洗滌3次。在第三次洗滌之后，將100微升底物溶液(TMB)加入到各個孔中，以顯示在有或沒有所述成分的存在下由于加入IL-1和IL-6(CRP誘導劑)所致的CRP產生量。其后，加入100微升終止溶液如鹽酸或硫酸，以終止反應。底物溶液(TMB)與偶聯(lián)于抗CRP抗體的辣根過氧化酶的反應產生有色產物，其在450nm波長處具有特異性光譜吸光度。因此，通過測量由偶聯(lián)有結合酶的抗CRP抗體的量產生的450nm處的吸光度測定CRP的存在量，所述吸光度隨著CRP存在量的不同而不同。
校準用標準樣品經過與上清液樣品一樣的流程，以測定存在于那些校準試樣中的CRP。檢測校準用標準樣品的光密度以建立已知的不同水平(如每毫升校準稀釋液中0、0.005、0.01、0.025、0.05和0.1微克)的CRP的吸光度。然后將標準校準樣品的光密度繪圖以確定標準化的CRP吸光度校準曲線。
對于經過檢測和光學測量的每個樣品的上清液，將吸光度對照標準CRP吸光度校準曲線繪圖，以確定存在于樣品上清液中的CRP的量。
根據存在于樣品上清液中的CRP的量，如以下表III所示記錄不同成分的CRP抑制潛力結果。如其中所示，結果報告為EC50值，其為通常被接受的有效劑量的量度。一般而言，EC50為與對照樣品相比引起CRP濃度發(fā)生50％改變(CRP減少或CRP合成的抑制)所需的成分濃度。
當以CRP分泌的形式評價肝細胞中的IL-1應答效果時，黑莓提取物、酸果蔓提取物和白藜蘆醇具有有效活性，EC50為1-10μg/毫升。因此，這些成分特異性地通過減少生物標志物如CRP的合成有效地調節(jié)IL-1/IL-6應答。越桔粉、迷迭香提取物和接骨木粉在調節(jié)IL-1/IL-6應答中也有活性。另外，檢測了所選成分在IL-1和IL-6(各自為1ng/毫升)活化時對CRP分泌的劑量特異性抑制。對于另外的受試成分，10％的天然變胞藻黃素、非洲豆蔻提取物(w/o載體)和Reveravine(白藜蘆醇)表現出有效的CRP減少活性，EC50分別為約0.3、0.6和0.8μg/毫升。變胞藻黃素微珠(beadlet)表現出活性，EC50略超過1μg/毫升。
表IV實施例2的結果，包括其它成分在抑制LPS刺激的IL-1分泌、IL-1/IL-6刺激的CRP分泌、和與任選的主要成分的協(xié)同作用或拮抗作用的EC50

實施例3通過在二十周時間內每日劑量給藥本發(fā)明的組合物，在約150-200名人受試者中進行體內試驗。更具體地，檢測組合物，以評價(a)在方案1的個體中對IL-1合成的抑制，和(b)通過測量具有超過3mgCRP/升血液的CRP水平的方案2的個體中CRP水平評價對IL-1應答的抑制。
對于本實施例，方案1個體為已知具有“正常的”或“擴大的”IL-1基因表達應答的IL-1基因型的人。擴大的IL-1基因表達基因型定義為在IL-1β基因的+3954基因座上存在至少一個等位基因2的拷貝或在IL-1α基因的+4845基因座上具有至少兩個等位基因2的拷貝。在本實施例中，方案2個體為具有高的炎癥生物標志物血液水平的人，如CRP水平為約3到約10mg/L或更高的人。在該范圍內的CRP，似乎更可能觀察到顯著的改善，即，CRP水平的減少。換句話說，有可能在方案2受試者中檢測到CRP的適度減少。
以片劑形式對五十名受試受試者給藥的本發(fā)明的一個組合物包括薔薇果、黑莓和越桔，日劑量為1200mg的薔薇果、165mg的黑莓和330mg的越桔。
對五十名受試受試者給藥的本發(fā)明的另一個組合物包括薔薇果、黑莓、越桔和非洲豆蔻，日劑量為1200mg的薔薇果、165mg的黑莓、330mg的越桔和300mg的非洲豆蔻。這些成分為片劑形式。
對50名受試受試者給藥的本發(fā)明的另一個組合物包括薔薇果、非洲豆蔻和白藜蘆醇(如Resveravine，購自France，Bram的Bio Serae的白藜蘆醇產品)，日劑量為1200mg的薔薇果、150mg的非洲豆蔻和40mg的白藜蘆醇。這些成分為片劑形式。
每天對五十名受試者給藥片劑形式的不含組合物各成分的安慰劑。
對上式各受試者給藥上述組合物和安慰劑的第一個十二周為試驗的雙盲階段。在該階段過程中，上述劑量為負荷劑量。在第十二周之后，開始試驗的單盲階段。在該階段過程中，可以將上述劑量改變?yōu)閺呢摵蓜┝侩A段數據外推得到的維持劑量。
在本實施例的體內試驗中，從受試者取得血樣以測量IL-1和CRP。然而，應該控制這種血樣采集以量化個體間的差異性并使其最小化。例如，在多個、禁食血樣中測量炎癥生物標志物如CRP，和基因表達結果如IL-1的轉錄和隨后的合成；并且得自婦女的樣品在所述受試者月經周期的同一周取得。這樣做的理由是已經發(fā)現高脂肪進食和月經周期劇烈地增加炎癥生物標志物。另外，這種CRP監(jiān)控流程需要在不同的、鄰近的幾天進行多次采血。
在給藥之后，通過離體IL-1產生抑制(參見上述方法)、體內IL-1基因表達和炎癥生物標志物(如IL-6、TNF、IL-10、IL-12、血清淀粉樣物質A、纖維蛋白原、ICAM-1、C反應蛋白等等)的血液水平評價安慰劑、第一和第二組合物的有效性。通過經rtPCR測量受試者白細胞中IL-1mRNA的量評價體內IL-1基因表達。有效干涉炎癥過程的調節(jié)的證據包括離體IL-1產生的抑制、體內IL-1基因表達的抑制和一種或多種上述炎癥生物標志物水平的減少。
本實施例的體內試驗結果預期說明組合物具有通過抑制白介素細胞因子的合成和抑制受試者中由白介素細胞因子所致的級聯(lián)應答而調節(jié)白介素細胞因子的作用?，F在參考圖1-3，參見患有由炎癥加劇的動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展的受試者，描述這種益處的具體例子。
圖1說明炎癥和白介素細胞因子如何有助于動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展。具體地，單核白細胞10進入動脈壁組織100，吞沒被氧化的脂質，通過炎癥細胞因子如IL-1募集另外的白細胞14，通過生長因子刺激斑塊生長30，導致狹窄。白細胞在斑塊內釋放的細胞因子20導致斑塊的不穩(wěn)定性，并可能最終引起破裂和血栓形成。
在圖2中，表示IL-1200的合成和IL-1應答300。具體地，白細胞10合成細胞因子20，其隨后刺激肝臟50產生急性期蛋白如CRP。
參考圖3，本發(fā)明的組合物通過白細胞10抑制細胞因子200的產生?？梢蕴囟ǔ煞?00如薔薇果、越桔和接骨木為目標執(zhí)行這一功能。本發(fā)明的組合物也可通過減少或消除CRP的合成從而抑制細胞300和/或肝臟50對細胞因子的應答。可以特定成分600如黑莓、白藜蘆醇、非洲豆蔻和/或變胞藻黃素為目標執(zhí)行這一功能。
V.用法基于上述實施例1-3中的可包括在本發(fā)明組合物中的各成分的試驗結果，顯然可以對受試者給藥包括這些成分的組合物，以調節(jié)白介素細胞因子，具體地，抑制白介素細胞因子合成、減少C反應蛋白合成和/或抑制受試者機體內對白介素細胞因子的應答。
已知細胞因子如IL-1和IL-6為機體內炎癥應答的關鍵介體，本發(fā)明的組合物可用于調節(jié)與疾病和/或異常狀況有關的炎癥應答。例如，該組合物可用于治療關節(jié)炎、心血管狀況、骨質疏松癥、阿爾茨海默氏病、對創(chuàng)傷性損傷的炎癥應答、或與炎癥或免疫調節(jié)應答有關的任何其它的異常狀況或疾病如與炎癥有關的疼痛和僵硬。
更具體地，已知骨質疏松癥與異常高的IL-1釋放水平有關。因此，本發(fā)明還考慮了通過給藥治療有效量的本發(fā)明的組合物調節(jié)IL-1從而治療骨質疏松癥的方法。
已知炎癥與心血管疾病如動脈粥樣硬化和血栓形成有關，本發(fā)明還考慮了通過給藥治療有效量的組合物治療這種心血管疾病，所述組合物包括上述劑量的至少一種成分。另外，據信本發(fā)明的IL-1調節(jié)組合物可用于限制或控制由手術、創(chuàng)傷和涉及皮膚、肺、眼、耳、鼻、喉、消化道、神經系統(tǒng)等的過敏性反應所致的炎癥應答。
此外，已經觀察到，在炎癥條件下應激時，神經系統(tǒng)細胞和組織分泌大量的IL-1，因此，該組合物可用于治療精神問題、頭痛和耳痛、以及使人變衰弱的神經學疾病如阿爾茨海默氏病。
以上說明了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案?？蛇M行不同的改變和變化而不脫離權利要求中所定義的本發(fā)明的精神實質和廣泛的方面，其根據專利法法規(guī)可解釋為包括等價宗旨。對權利要求要素的任何單數形式的引述例如表述“一”、“該”、或“所述”都不應看作是限制該要素。
權利要求書(按照條約第19條的修改)1.治療受試者的炎癥應答的組合物，包括薔薇果，以及黑莓、越桔和接骨木中的至少一種，其中薔薇果為治療有效量以抑制受試者的至少IL-1的合成，其中黑莓為治療有效量以至少抑制受試者的IL-1應答，其中越桔為治療有效量以抑制受試者的至少IL-1的合成，和其中接骨木為治療有效量以抑制受試者的至少IL-1的合成。
2.權利要求1的組合物，其中炎癥應答由炎性狀況、疾病和癥狀中的至少一種所致。
3.權利要求1的組合物，其中薔薇果的治療有效量為每天劑量至少約50mg。
4.權利要求1的組合物，其中黑莓的治療有效量為每天劑量約100mg。
5.權利要求1的組合物，其中越桔的治療有效量為每天劑量約200mg。
6.權利要求1的組合物，其中接骨木的治療有效量為每天劑量約200mg。
7.(刪除)8.權利要求1的組合物，其中黑莓減少受試者的炎癥生物標志物的合成。
9.權利要求8的組合物，其中炎癥生物標志物為C反應蛋白。
10.治療受試者的炎癥應答的組合物，包括治療有效量的薔薇果和白藜蘆醇，其中薔薇果為治療有效量以抑制受試者的至少一種白介素細胞因子的合成，和其中白藜蘆醇為治療有效量以至少抑制受試者的IL-1應答。
11.權利要求10的組合物，其中組合物適合于影響炎性狀況、疾病和癥狀中的至少一種。
12.權利要求10的組合物，其中薔薇果的治療有效量為每天劑量至少約50mg。
13.權利要求10的組合物，其中白藜蘆醇的治療有效量為每天劑量至少約200mg。
14.權利要求10的組合物，其中白藜蘆醇抑制炎癥生物標志物的合成，并且炎癥生物標志物為C反應蛋白。
15.權利要求10的組合物，其中組合物減輕受試者的炎癥、疼痛和僵硬中的至少一種。
16.(刪除)17.(刪除)18.(刪除)19.(刪除)20.包括以下成分中的至少兩種的組合物治療有效量的薔薇果成分，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子的合成；治療有效量的黑莓成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子應答；治療有效量的越桔成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子的合成；和治療有效量的接骨木成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子的合成。
21.權利要求20的組合物，包括薔薇果、黑莓、越桔和接骨木。
22.權利要求20的組合物，其中組合物包括至少約50mg的薔薇果、至少約100mg的黑莓，至少約200mg的越桔和至少約200mg的接骨木。
23.權利要求20的組合物，包括薔薇果和黑莓。
24.權利要求20的組合物，包括薔薇果和越桔。
25.權利要求20的組合物，包括非洲豆蔻(Aframomummelegueta)。
26.(刪除)27.治療受試者的炎癥應答的組合物，包括薔薇果、白藜蘆醇和變胞藻黃素，其中薔薇果為治療有效量以抑制受試者的至少一種白介素細胞因子的合成，其中白藜蘆醇為治療有效量以抑制受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成，和其中變胞藻黃素為治療有效量以抑制受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成。
28.權利要求25的組合物，其中白藜蘆醇和變胞藻黃素各自為治療有效量以各自抑制炎癥生物標志物的合成，并且炎癥生物標志物為C反應蛋白。
29.組合物，包括治療有效量的薔薇果，用于調節(jié)受試者的至少一種白介素細胞因子的合成；治療有效量的白藜蘆醇，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成；和治療有效量的非洲豆蔻，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成。
30.權利要求27的組合物，其中炎癥生物標志物為C反應蛋白。
權利要求
1.治療受試者的炎癥應答的方法，包括對受試者給藥治療有效量的組合物，該組合物包括薔薇果，以及黑莓、越桔和接骨木中的至少一種，其中薔薇果抑制受試者的至少IL-1的合成，其中黑莓至少抑制受試者的IL-1應答，其中越桔抑制受試者的至少IL-1的合成，和其中接骨木抑制受試者的至少IL-1的合成。
2.權利要求1的方法，包括識別患有炎性狀況、疾病和癥狀中的至少一種的受試者，并且根據識別進行給藥。
3.權利要求1的方法，其中薔薇果以每天劑量至少約50mg的量給藥。
4.權利要求1的方法，其中黑莓以每劑量約100mg的量給藥。
5.權利要求1的方法，其中越桔以每天劑量約200mg的量給藥。
6.權利要求1的方法，其中接骨木以每天劑量約200mg的量給藥。
7.權利要求1的方法，其中組合物的給藥減輕受試者的炎癥、疼痛和僵硬中的至少一種。
8.權利要求1的方法，其中黑莓減少受試者的炎癥生物標志物的合成。
9.權利要求8的方法，其中炎癥生物標志物為C反應蛋白。
10.治療受試者的炎癥應答的方法，包括對受試者給藥治療有效量的薔薇果和白藜蘆醇，其中薔薇果抑制受試者的至少一種白介素細胞因子的合成，和其中白藜蘆醇至少抑制受試者的IL-1應答。
11.權利要求10的方法，包括識別患有炎性狀況、疾病和癥狀中的至少一種的受試者，并且根據識別進行給藥。
12.權利要求10的方法，其中薔薇果以每天劑量至少約50mg的量給藥。
13.權利要求10的方法，其中白藜蘆醇以每天劑量約200mg的量給藥。
14.權利要求10的方法，其中白藜蘆醇抑制炎癥生物標志物的合成，并且炎癥生物標志物為C反應蛋白。
15.權利要求10的方法，其中組合物的給藥減輕受試者的炎癥、疼痛和僵硬中的至少一種。
16.影響受試者的炎癥的方法，包括對受試者給藥治療有效量的以下成分中的至少兩種薔薇果成分，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子的合成；黑莓成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子應答；越桔成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子的合成；和接骨木成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子的合成。
17.權利要求16的方法，其包括識別需要調節(jié)白介素細胞因子的受試者。
18.權利要求16的方法，其中給藥薔薇果、黑莓和越桔。
19.權利要求18的方法，其中另外給藥非洲豆蔻(Aframomummelegueta)。
20.包括以下成分中的至少兩種的組合物治療有效量的薔薇果成分，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子的合成；治療有效量的黑莓成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子應答；治療有效量的越桔成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子的合成；和治療有效量的接骨木成分，用于抑制受試者的白介素細胞因子的合成。
21.權利要求20的組合物，包括薔薇果、黑莓、越桔和接骨木。
22.權利要求20的組合物，其中組合物包括至少約50mg的薔薇果、至少約100mg的黑莓，至少約200mg的越桔和至少約200mg的接骨木。
23.權利要求20的組合物，包括薔薇果和黑莓。
24.權利要求20的組合物，包括薔薇果和越桔。
25.治療受試者的炎癥應答的方法，包括對受試者給藥治療有效量的組合物，該組合物包括薔薇果、白藜蘆醇和非洲豆蔻，其中薔薇果抑制受試者的至少一種白介素細胞因子的合成，其中白藜蘆醇抑制受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成，和其中非洲豆蔻抑制受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成。
26.權利要求25的方法，其中白藜蘆醇和非洲豆蔻各自抑制炎癥生物標志物的合成，并且炎癥生物標志物為C反應蛋白。
27.治療受試者的炎癥應答的方法，包括對受試者給藥治療有效量的組合物，該組合物包括薔薇果、白藜蘆醇和變胞藻黃素，其中薔薇果抑制受試者的至少一種白介素細胞因子的合成，其中白藜蘆醇抑制受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成，和其中變胞藻黃素抑制受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成。
28.權利要求25的方法，其中白藜蘆醇和變胞藻黃素各自抑制炎癥生物標志物的合成，并且炎癥生物標志物為C反應蛋白。
29.組合物，包括治療有效量的薔薇果，用于調節(jié)受試者的至少一種白介素細胞因子的合成；治療有效量的白藜蘆醇，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成；和治療有效量的非洲豆蔻，用于調節(jié)受試者的白介素細胞因子和炎癥生物標志物中的至少一種的合成。
30.權利要求27的組合物，其中炎癥生物標志物為C反應蛋白。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于調節(jié)細胞因子從而調節(jié)炎癥應答或免疫調節(jié)應答的組合物。該組合物可包括選自以下的至少一種薔薇果、越桔、黑莓、接骨木、酸果蔓、迷迭香、丁香、小白菊、蕁麻根、朝鮮薊、靈芝、橄欖提取物、綠茶提取物、葡萄籽提取物、白藜蘆醇、非洲豆蔻、齒葉乳香提取物、boswellia forte、依普黃酮、生育三烯酚、月見草油、INM－176、琉璃苣油、磷蝦油、葉黃素中的至少一種(如變胞藻黃素)、生咖啡提取物和阿魏酸。具體地，本發(fā)明的組合物可包括薔薇果，和黑莓、越桔、接骨木中的至少一種，和任選的磷蝦油；或包括薔薇果，白藜蘆醇，和非洲豆蔻和變胞藻黃素中的至少一種。基于組合物的細胞因子調節(jié)和細胞因子應答抑制，該組合物可用于調節(jié)免疫調節(jié)和/或炎癥應答，并因此用于治療與炎癥應答有關的疾病和/或異常狀況，如心血管狀況、關節(jié)炎、骨質疏松癥和阿爾茨海默氏病。
文檔編號A61K36/738GK1882354SQ200480026054
公開日2006年12月20日 申請日期2004年9月10日 優(yōu)先權日2003年9月12日
發(fā)明者R·K·倫道夫, H·羅哈-舒密特, M·A·默里, A·W·卡羅福特, K·W·格倫貝克, D·J·普薩特里 申請人:捷通國際有限公司