專利名稱：抗病毒藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于對病毒感染疾病、特別是由HCV感染引起的肝臟疾病進行預防和治療的藥物組合物。
背景技術(shù)：
在全世界上，C型肝炎病毒(HCV)的感染者為1～2億人，在日本國內(nèi)大約有200萬人以上。這些患者中約50％的患者會轉(zhuǎn)移為慢性肝炎，其中約有20％在感染后經(jīng)過30年以上衍變?yōu)楦斡不⒏伟?。?jù)說肝癌的約90％的是起因于C型肝炎。在日本國內(nèi)，每年有2萬以上的患者因伴隨HCV感染的肝癌而死亡。
HCV是1989年作為輸血后的非A非B型肝炎的主要致病病毒而被發(fā)現(xiàn)的。HCV是具有被膜(envelope)的RNA病毒，其基因組由單鏈(+)RNA構(gòu)成，屬于黃病毒科肝炎病毒(Hepacivirus)屬。
HCV可由目前尚不清楚的原因而逃避宿主的免疫機構(gòu)，所以即使是在感染免疫機構(gòu)成熟的成年人的情況下，大都可以持續(xù)感染，進展至慢性肝炎、肝硬化、肝癌，即使通過手術(shù)摘除，因非癌變部位持續(xù)發(fā)生的炎癥而導致肝癌復發(fā)的患者較多。
由此，業(yè)界都希望確立C型肝炎的有效治療方法，更強烈要求研發(fā)不同于使用抗炎癥藥物抑制炎癥的對癥療法的、減少或根除作為患部的肝臟部位的HCV的藥物。
現(xiàn)在，作為排除HCV的唯一有效治療方法，已知有干擾素治療。但是，干擾素治療有效的患者占所有患者的1/3左右。特別是干擾素相對HCV基因型1b的奏效率非常低。因此，強烈要求研發(fā)出能代替干擾素的或可以與其并用的抗HCV藥物。
近年來，利巴韋林(Ribavirin1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-羧基酰胺)作為能與干擾素的并用的C型肝炎治療藥物在市場上有出售，但有效率依然較低，要求開發(fā)出更新型的C型肝炎治療藥物。另外，也正在嘗試通過干擾素激動劑、白細胞介素-12激動劑等使患者的免疫力增強來排除病毒的方法，但目前尚未發(fā)現(xiàn)有效的藥物。
在克隆HCV基因以來，有關(guān)病毒基因的機構(gòu)和功能、各病毒的蛋白質(zhì)的功能等的分子生物學分析得到了快速發(fā)展，但在宿主細胞內(nèi)的病毒的復制、持續(xù)感染、致病性等機制還不十分清楚，目前，還沒有構(gòu)建出使用了可以信賴的培養(yǎng)細胞的HCV感染試驗體系。因此，以前在對抗病毒藥物進行評價時，不得不采用使用了其他近緣病毒的替代病毒分析法。
但是，近年來，可以使用HCV的非結(jié)構(gòu)區(qū)域部分，觀測在活體外的HCV復制，由此通過復制子分析法可以容易地評價抗病毒藥物(非專利文獻1)。大家認為在該體系中的HCV RNA復制機制與已感染肝細胞的全長HCV RNA基因組的復制相同。因此，該體系可以說是以對鑒定抑制HCV復制的化合物有用的細胞為基礎(chǔ)的分析體系。
本發(fā)明的技術(shù)方案中的化合物是通過上述復制子分析法發(fā)現(xiàn)的能抑制HCV復制的化合物。這些抑制劑成為HCV治療藥的可能性較高。
非專利文獻1ブイ·ロ一マン等著，科學(science)，1999年，第285卷，第110～113頁發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于，提供一種用于對病毒感染疾病、特別是對由病毒感染引起的肝臟疾病進行預防和治療的藥物組合物。
本發(fā)明人為了解決上述課題進行了潛心研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物具有非常強的抗HCV復制子活性，進而具有HCV的增殖抑制效果，而且在活體外的細胞毒性輕微，作為抗HCV預防/治療藥極其有用，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明提供下述的(1)～(3)。
(1)一種用于預防或治療HCV等的病毒感染疾病的藥物組合物，包含用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，
(式中，A表示用-OX取代的苯基或3-吲哚基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基(oxo group)、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)(例如，哌嗪環(huán)、吡咯烷環(huán)、哌啶環(huán)、嗎啉環(huán)、六亞甲基亞胺環(huán)等)；R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，所述氨基上可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基)。
(2)用上述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽(式中的各符號與上述通式(I)同義。不過下述情況除外，即A是3-吲哚基的情況；A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基或氫原子，B是橋氧基，D是氫原子，E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是羥基的情況；以及A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基，B是橋氧基，D是氫原子，E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是甲氧基的情況)。
(3)用上述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽(式中的各符號與上述通式(I)同義。不過下述情況除外，即A是3-吲哚基的情況；A是對位被-OX取代的苯基，X是氫原子的情況；A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基，B是橋氧基，D是氫原子，E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是羥基或甲氧基的情況)。
具體實施例方式
下面對本發(fā)明的用于預防和/或治療由HCV等病毒感染引起的疾病的藥物組合物進行更詳細的說明。
其中，在本說明書中使用的所謂“治療”的用語，包括通過對被試驗者使用本發(fā)明的藥物組合物消滅或減少HCV、抑制HCV的進一步擴散、減輕由HCV感染引起的癥狀。作為由HCV感染引起的癥狀，可以舉出C型肝炎、肝硬化、肝纖維化、肝癌等，優(yōu)選是C型肝炎。
另外，本說明書中使用的碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基是指碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烴基中的至少含有1個雙鍵的基團。另外，碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基是指碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烴基中的至少含有1個參鍵的基團。
本發(fā)明的“藥物前體”是指在生理條件下或通過加溶劑分解，能轉(zhuǎn)換成式(1)的化合物或制藥上允許的它們的鹽的式(1)的化合物的衍生物。藥物前體是，在向患者用藥時可以沒有活性而在生物體內(nèi)會轉(zhuǎn)換成有活性的式(1)的化合物而存在的物質(zhì)。
本發(fā)明如下所示。
本發(fā)明之一是一種用于預防或治療病毒感染疾病的藥物組合物，包含用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，
(式中，A表示用-OX取代的苯基或3-吲哚基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)；R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，在該氨基上可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；鍵E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基)。
本發(fā)明之二具有以下特征的本發(fā)明之一所述的藥物組合物，即包含用下述通式(I’)表示的上述式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， (式中，A、B、D、鍵E、R1、R2和R3，如上述本發(fā)明之一所示)。
本發(fā)明之三是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，A是4位被-OX取代的苯基，X是氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基。
本發(fā)明之四是具有以下特征的本發(fā)明之一至三中任一項所述的藥物組合物，即包含B為橋氧基、氫原子、羥基或＝N-OR6的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
本發(fā)明之五是具有以下特征的本發(fā)明之一至四中任一項所述的藥物組合物，即包含R1、R2和R3相同或不同且為羥基、氨基或-OZ(這里，Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基)的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
本發(fā)明之六是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，A是4位被-OX取代的苯基，X是氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基，B是橋氧基、羥基或＝N-OR6，R1、R2和R3相同或不同且是羥基、或-OZ(這里，Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基)。
本發(fā)明之七是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，X是碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基，B是橋氧基或羥基，R1、R2和R3都是羥基。
本發(fā)明之八是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即是包含A為3-吲哚基的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽的藥物組合物。
本發(fā)明之九是具有以下特征的本發(fā)明之八所述的藥物組合物，即包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，B是橋氧基或羥基，R1、R2和R3都是羥基。
本發(fā)明之十是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即包含從下述的化合物中選擇的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。



或 本發(fā)明之十一是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即包含從下述的化合物中選擇的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。



或 本發(fā)明之十二是具有以下特征的本發(fā)明之一或者二所述的藥物組合物，即包含從下述的化合物中選擇的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
或 本發(fā)明之十三是，在本發(fā)明之一至十二所述的任一種藥物組合物中，病毒感染疾病是HCV感染疾病的組合物。
本發(fā)明之十四是，HCV感染疾病是C型肝炎的本發(fā)明之十三所述的藥物組合物。
本發(fā)明之十五是用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， (式中，A表示用-OX取代的苯基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)；R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，在該氨基上可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；鍵E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；不過下述情況除外，即A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基或氫原子，B是橋氧基，D是氫原子，E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是羥基的情況；以及A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基，B是橋氧基，D是氫原子，鍵E表示雙鍵；R1～R3中任一個都是甲氧基的情況)。
本發(fā)明之十六是用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， (式中，A表示用-OX取代的苯基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)；
R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，在該氨基上可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；鍵E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；不過下述情況除外，即A是對位被-OX取代的苯基，X是氫原子的情況；以及A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基，B是橋氧基，D是氫原子，鍵E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是甲氧基或甲氧基的情況)。
本發(fā)明之十七是用下述通式(I’)表示的上述本發(fā)明之十五或十六的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， (式中，X、B、D、鍵E、R1、R2和R3，如上述本發(fā)明之十五所示)。
本發(fā)明之十八是具有以下特征的上述本發(fā)明之十五至十七的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，X是碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基，B是羥基、橋氧基或＝N-OR6。
本發(fā)明之十九是用下述式表示的上述本發(fā)明之十五至十八中任一項的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。

或 本發(fā)明之二十是用下述式表示的上述本發(fā)明之十五至十八中任一項的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
或 本發(fā)明之二十一是一種藥物組合物，包含上述本發(fā)明之十五至二十中任一項的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
本發(fā)明之二十二是用于預防或治療病毒感染疾病的上述本發(fā)明之二十一的藥物組合物。
本發(fā)明之二十三是病毒感染疾病為HCV感染疾病的本發(fā)明之二十二所述的藥物組合物。
本發(fā)明之二十四是HCV感染疾病為C型肝炎的本發(fā)明之二十三所述的藥物組合物。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基”，例如包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3-乙基丁基、2-乙基丁基等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基”，例如包括1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、丙烯-2-基、3-丁烯基(homoallyl)、2-異戊烯基等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基”，例如包括1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。
在本發(fā)明中，“鹵原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、或碘原子。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基”，例如包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3-乙基丁基、2-乙基丁基等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基”，例如包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、丙烯-2-基、3-丁烯基(高烯丙基)、2-異戊烯基等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基”，例如包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基”，例如包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基”，例如包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、丙烯-2-基、3-丁烯基(高烯丙基)等。
在本發(fā)明中，作為“碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基”，例如包括1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。
上述化合物No.1在國際公開公報WO98/56755號中已被公開，已知源于擔子菌(Aureobasidium)屬的微生物，對白色念珠菌、新型隱球菌等致病真菌具有抗菌活性，并且具有抑制免疫反應的效果。上述化合物No.9在國際公開公報WO94/18157號中已被公開，作為鯊烯合成抑制劑、抗真菌藥比較有效。
本發(fā)明的化合物的制造方法該化合物No.1可通過以下方法制造，即利用鐮刀菌(Fusarium)屬、擔子菌(Aureobasidium)屬等絲狀菌類，培養(yǎng)能產(chǎn)生上述化合物的菌株，然后通過從上述菌株的培養(yǎng)物進行離析而制造。
進而，可以以上述化合物No.1為初始物質(zhì)，使用如下所述的方法，得到用通式(I)和(I’)表示的化合物類。
制法1在甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃等溶劑中，在鈀碳、氫氧化鈀、阮來鎳等催化劑的存在下，在室溫或加熱條件下對上述化合物No.1進行氫化，由此可以得到二氫體(E＝單鍵，化合物No.7等)。
制法2在甲醇、乙醇、丙醇、四氫呋喃等溶劑中，在硼氫化鈉、氫化三甲氧基硼化鈉、氫化氰基硼化鈉、氫化硼化鋰、氫化二乙基鋁鈉、鋰鋁氫化物等還原劑的存在下，在室溫或冷卻條件下對上述化合物No.1進行還原，由此可以得到醇體(B＝羥基，化合物No.8等)。
制法3在甲醇、二噁烷、四氫呋喃、水等溶劑中，在鹽酸、硫酸、甲烷磺酸、三氟乙酸等的存在下，在室溫或加熱條件下對上述化合物No.1進行處理，由此得到脫烷基體(X＝氫，化合物No.9等)。進而在甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃等溶劑中，在載鈀碳、氫氧化鈀、阮來鎳、氧化鉑等催化劑的存在下，在室溫或加熱條件下對上述化合物No.9進行氫化，由此可以得到二氫體(E＝單鍵、且X＝氫，化合物No.10等)。
制法4在氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈣、碳酸鉀等堿的存在下，在二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃等溶劑中，在室溫或加熱條件下用烷基鹵、烯丙基鹵、炔基鹵等烷基化劑對上述化合物No.9等進行處理，由此可以合成四烷基、四炔基和四鏈烯基化體(X＝Z＝烷基、炔基或鏈烯基)。另外，在氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈣、碳酸鉀等堿的存在下，在甲醇、二噁烷、四氫呋喃、水等溶劑中，在室溫或加熱條件下對該化合物進行處理，由此可以合成烷基、炔基和鏈烯基化體(X＝烷基、炔基或鏈烯基，具體為化合物No.16、17、18、19、20等)。
制法5在二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃等溶劑中，在二異丙基乙胺、三乙胺等堿的存在下，用雙環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、水溶性碳化二亞胺鹽酸鹽(WSC·HCl)、1-羥基苯并三唑(HOBt)等縮合劑對上述化合物No.1和各種胺進行處理，由此可以在室溫或加熱條件下得到相對應的三酰胺體(R1＝R2＝R3＝氨基，化合物No.11等)。
制法6在甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃等溶劑中，在載鈀碳、氫氧化鈀、阮來鎳、氧化鉑等催化劑的存在下，在室溫或加熱條件下對上述化合物No.1進行氫化，由此可以得到四氫體(E＝單鍵、且X＝支鏈烷基，化合物No.12等)。
制法7在四氫呋喃、DMF和二氯甲烷等溶劑中，利用雙環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)等縮合劑，使上述化合物No.1和各種醇(R-OH)發(fā)生反應，由此可以在室溫或加熱條件下得到相對應的三酯(R1＝R2＝R3＝R)?；蛘撸诩状己投燃淄榈然旌先軇┲?，用酰胺二氫體三甲基硅烷基重氮甲烷(TMS CHN2)等對上述化合物No.1進行處理，可以得到三甲基酯體(R1＝R2＝R3＝CH3)。
制法8在甲醇、乙醇和丁醇等的溶劑中，用4-甲苯磺酰肼等肼衍生物對在制法7中得到的三甲基酯體進行處理，由此可以在室溫或加熱條件下得到相對應的酰肼體，在使用兒茶酚硼烷等還原劑對該酰肼體進行處理之后，在氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿的存在下，在乙醇、甲醇和水等溶劑中，在室溫或加熱條件下，可以得到脫酮體(B＝氫，化合物No.13等)。
制法9在吡啶、三乙胺、二異丙基乙胺等的存在下，在室溫或加熱條件下對上述化合物No.1和羥基胺或各種O-取代羥基胺進行處理，由此可以得到相對應的肟醚或肟體(B＝N-OR6和N-OH，化合物No.14、15等)。
制法10在四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿等溶劑中，用二乙基氨基三氟化硫(DAST)等對上述化合物No.1進行處理，可以得到鹵化體(B＝氟)。
制法11在乙醇、甲醇、以及四氫呋喃等溶劑中，在中性或弱酸性條件下，且在室溫或加熱條件下，用氫化氰基硼化鈉或氫化三乙酰氧基硼化鈉等還原劑對上述化合物No.1和各種胺進行處理，由此進行還原性氨基化，可以得到相對應的胺體(B＝-N(R4)(R5))。
本發(fā)明的化合物的制造方法可以用于制造該化合物例如No.1的菌株屬于鐮刀菌(Fusarium)屬、擔子菌(Aureobasidium)屬等絲狀菌類，如果是可以產(chǎn)生上述化合物的菌株，就沒有特別限制，可以舉例為鐮刀菌sp.(Fusarium sp.)F 1476株(以下稱為“F1476株”)、擔子菌sp.(Aureobasidium sp.)TKR2449株(國際公開公報Wo98/56755號)等。
F1476株是具有有利于產(chǎn)生上述化合物No.1的特性的菌株。另外，上述F1476株的生理學性質(zhì)如下所示生長溫度范圍為10～30℃，優(yōu)選20～30℃。
可以生長的pH范圍為3～11，優(yōu)選5～7。
F1476株表示為Fusarium sp.F 1476，于2003年2月4日，在獨立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心，以FERMBP-8290的保藏編號進行了保藏。
在本發(fā)明中，除了上述F 1476株之外，還可以使用F 1476株的天然或人工突變體、或者屬于鐮刀菌屬、擔子菌屬等絲狀菌類的其他菌種的具有F 1476株的產(chǎn)生能力的微生物。
在本發(fā)明中，制備上述No.1化合物時，可以通過將上述F 1476株接種于含營養(yǎng)源培養(yǎng)基并對其進行培養(yǎng)而得到培養(yǎng)物。在上述營養(yǎng)源中，作為碳源，可以舉例為葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、糊精、甘油、糖蜜、麥芽糖、油脂類、有機酸等。
在上述營養(yǎng)源中，作為氮源，可以舉例為大豆粉、棉籽粉、玉米浸漬液、酪蛋白、蛋白胨、酵母提取液、肉提取液、胚芽、尿素、氨基酸、銨鹽等有機氮化合物，無機氮化合物等。
在上述營養(yǎng)源中，作為鹽類，可以舉例為鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、磷酸鹽等無機鹽類等。它們可以單獨使用，也可以適當組合使用。
上述營養(yǎng)源可以單獨或適當組合使用。
在上述含營養(yǎng)源培養(yǎng)基中，可以根據(jù)需要適當添加鐵鹽、銅鹽、鋅鹽、鈷鹽等重金屬鹽；生物素、維生素B1等維生素類；其他有助于細菌生長并促進上述化合物No.1生成的有機物、無機物等。
在上述含營養(yǎng)源培養(yǎng)基中，除了上述營養(yǎng)源之外，還可以根據(jù)需要進一步添加硅油、聚亞烷基二醇醚等消泡劑、表面活性劑等。
當用上述含有營養(yǎng)源的培養(yǎng)基培養(yǎng)生成上述化合物No.1的菌株時，可以采用通過培養(yǎng)微生物進行生理活性物質(zhì)的合成時通常使用的固體培養(yǎng)法、液體培養(yǎng)法等培養(yǎng)方法。
通過上述的培養(yǎng)方法，使上述化合物No.1蓄積在培養(yǎng)物中。在本發(fā)明中，通過公知的方法使蓄積在培養(yǎng)物中的上述化合物No.1從培養(yǎng)物中分離之后，根據(jù)需要可以進一步精制。
上述分離可以通過如下方法實施，即，用醋酸乙酯、醋酸丁酯、氯仿、丁醇、甲基異丁酮等非親水性有機溶劑萃取出整個培養(yǎng)物。另外，也可以通過過濾或離心分離將培養(yǎng)物分離成為培養(yǎng)液和菌體，分別從培養(yǎng)液、菌體進行分離。
為了從上述已分離的培養(yǎng)液中分離上述化合物No.1，也可以采用利用上述非親水性有機溶劑進行萃取的方法，另外，也可以采用使培養(yǎng)液接觸于吸附性的載體而使培養(yǎng)液中的上述化合物No.1吸附在載體上后使用溶解進行洗脫的方法。
作為上述載體，可以舉例為活性碳、粉末纖維素、吸附性樹脂等。作為上述溶劑，可以根據(jù)載體的種類、性質(zhì)等適當使用1種或組合2種以上使用，例如，可以舉出適當組合了含水丙酮、含水醇類等水溶性有機溶劑的含水溶液等的溶劑等。
為了從上述已分離的培養(yǎng)液中分離上述化合物No.1，可以采用利用丙酮等親水性有機溶劑進行萃取的方法。
在本發(fā)明中，根據(jù)需要，可以將如上所述地從培養(yǎng)物中分離的上述化合物No.1的粗萃取物提供給精制工序。
上述精制可以通過在脂溶性生理活性物質(zhì)的分離、精制中通常使用的方法進行，作為這樣的方法，可以舉例為使用硅膠、活性氧化鋁、活性碳、吸附性樹脂等載體的柱色譜法，高速液相色譜法等。當采用將硅膠用作載體的柱色譜法時，作為洗脫溶劑，可以舉例為氯仿、醋酸乙酯、甲醇、丙酮、水等，它們可以并用2種以上。
當采用上述高速液相色譜法時，作為載體，可以舉例為結(jié)合有十八烷基、辛基、苯基等化學鍵型硅膠；聚苯乙烯型多孔聚合物凝膠等，作為移動相，例如可以使用含水甲醇、含水乙腈等水溶性有機溶劑的含水溶液等。
本發(fā)明的化合物No.1可以直接或作為藥理學上允許的鹽在醫(yī)藥上使用。作為上述鹽，只要是藥理學上允許的鹽就沒有特別限制，可以舉例為鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫溴酸等無機酸的鹽，醋酸、酒石酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟腦磺酸等有機酸的鹽，鈉、鉀、鈣等堿金屬或堿土金屬等的鹽。
對在上述藥物制劑中含有的有效成分化合物的量沒有特別限制，可以在寬范圍內(nèi)適當選擇，例如為0.1～99.5重量％，優(yōu)選為0.5～90重量％。
可以采用常用方法，在主藥中使用賦形劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味矯臭劑、溶解輔佐劑、懸浮劑、涂敷劑等通?？梢栽卺t(yī)藥的制劑技術(shù)領(lǐng)域中使用的已知的輔佐劑，使本發(fā)明的化合物制劑化。在成為片劑形態(tài)時，作為載體，可以廣泛使用在該領(lǐng)域中的以往公知的載體，例如，可以例示乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結(jié)晶纖維素、硅酸等賦形劑，水、乙醇、丙醇、單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明膠溶液、羧甲基纖維素、蟲膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯基吡咯烷酮等結(jié)合劑，干燥淀粉、褐藻酸鈉、瓊脂粉末、昆布多糖、碳酸氫鈉、碳酸鈣、聚亞氧乙基山梨糖醇酐脂肪酸酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、淀粉、乳糖等崩解劑，白糖、三硬脂酸甘油酯、可可油脂(cacao butter)、硬化油等崩解抑制劑，季銨鹽、月桂基硫酸鈉等吸收促進劑，甘油、淀粉等吸濕劑，淀粉、乳糖、高嶺土、膨潤土、膠體狀硅酸等吸附劑，精制滑石、硬脂酸鹽、硼酸粉末、聚乙二醇等潤滑劑等。
進而根據(jù)需要，片劑可以制成實施了通常的涂層的片劑例如糖衣片、明膠包被片、腸溶片、薄膜包衣片或雙層片劑、多層片劑。當成形為丸劑形態(tài)時，作為載體，可以廣泛使用該領(lǐng)域中以往公知的載體，例如，可以例示葡萄糖、乳糖、可可油脂、淀粉、固化植物油、高嶺土、滑石等賦形劑，阿拉伯膠粉末、黃蓍膠、明膠、乙醇等結(jié)合劑，昆布多糖瓊脂等崩解劑等。在成形為栓劑時，作為載體，可以廣泛使用該領(lǐng)域中以往公知的載體，可以舉例為聚乙二醇、可可油脂、高級醇、高級醇的酯類、明膠、半合成甘油酯等。當作為注射劑進行調(diào)制時，液劑、懸浮劑優(yōu)選為已被殺菌且與血液等滲壓的制劑，當成形為這些液劑、乳劑和懸浮劑的形態(tài)時，作為稀釋劑，可以使用全部的在該領(lǐng)域中慣用的稀釋劑，可以舉例為水、乙醇、丙二醇、乙氧基化異硬脂醇、聚羥基化異硬脂醇、聚亞乙氧基山梨糖醇酐脂肪酸酯類等。還有，此時，可以在醫(yī)藥制劑中含有足以調(diào)制等滲壓性溶液的量的食鹽、葡萄糖、或甘油，另外可以添加通常的溶解輔佐劑、緩沖劑、鎮(zhèn)痛劑等。進而根據(jù)需要，也可以含有著色劑、保存劑、香料、風味劑、甜味劑等或其他藥品。
上述藥物組合物優(yōu)選以給藥單位形式進行用藥，可以進行口服給藥、組織內(nèi)給藥(皮下給藥、肌肉內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥等)、局部給藥(經(jīng)皮給藥等)或經(jīng)直腸給藥。上述藥物組合物當然可以以適合于這些給藥方法的劑型進行給藥。
當將本發(fā)明的化合物等或其制藥上允許的鹽作為藥物而給藥時，作為抗病毒藥的使用量，優(yōu)選在考慮年齡、體重等患者的狀態(tài)、給藥途徑、疾病的性質(zhì)和程度等的基礎(chǔ)上進行調(diào)整，但通常對于人來說，作為對于成人的本發(fā)明的有效成分量，每天用量在1～2000mg的范圍內(nèi)。也有即使用量不到上述范圍而足量的情況，但相反也有需要超過上述范圍的用量的情況。當大量給藥時，優(yōu)選一日數(shù)次分開給藥。
上述口服給藥可以以固態(tài)、粉末或液態(tài)的用量單位進行給藥，例如，可以通過粉劑、散劑、片劑、糖衣片、膠囊、滴加劑、舌下給藥型、其他劑型等進行。
上述組織內(nèi)給藥例如可以通過采用溶液或懸浮劑的皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射用的液態(tài)用量單位形式而進行。這些藥物可以通過以下方法制造，即，使一定量的本發(fā)明的化合物或其制藥上允許的鹽，在例如水性或油性介質(zhì)等適合于注射目的的非毒性的液態(tài)載體中懸浮或溶解于其中，接著對上述懸浮液或溶液進行滅菌而制造。
上述局部給藥(經(jīng)皮給藥等)可以通過采用例如液體、霜劑、粉末、糊劑、凝膠劑、軟膏劑等外用制劑的形式而進行。這些藥物可以通過以下方法制造，即，將一定量的本發(fā)明的化合物或其制藥上允許的鹽、和適合外用制劑的目的的香料、著色劑、填充劑、表面活性劑、保濕劑、皮膚軟化劑、凝膠化劑、載體、保存劑、穩(wěn)定劑等中的一種以上組合而制造。
上述經(jīng)直腸給藥可以通過以下方式進行，即，使用將一定量的本發(fā)明的化合物或其制藥上允許的鹽混入到由例如棕櫚酸肉豆蔻酯等高級酯類、聚乙二醇、可可脂、它們的混合物等構(gòu)成的低熔點固體中的栓劑等而進行。
上述給藥例如可以通過溶液或懸浮劑等的皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射用的液態(tài)用量單位形式而進行。這些藥物可以通過以下方法制造，即，將一定量的本發(fā)明的化合物或其制藥上允許的鹽，在例如水性或油性介質(zhì)等適合于注射目的的非毒性的液態(tài)載體中懸浮或溶解于其中，接著對上述懸浮液或溶液進行滅菌而制造。
實施例下面表示實施例，對本發(fā)明進行具體說明，但本發(fā)明并不限于這些。
實施例1用于本發(fā)明的F1476株是，從2000年1月24日在鐮倉市鐮倉山南斜面采集的落葉，于2000年2月29日通過清洗過濾分析法分離出來的絲狀菌。
培養(yǎng)各性狀在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上的生長較緩慢，在25℃下、近紫外線照射下經(jīng)10天達到12mm的直徑，生長率為1.5～1.6mm/日，形成密集的菌絲叢，表面繁茂生長為皺褶狀，在中央部分聚集有濕潤的分生孢子座(conidiospore)，周邊部有時形成明顯的絮凝狀的菌絲塊，色調(diào)是亮橙色(杏黃色、Light orange、Light Apricot或Apricot、蒙瑟爾5YR7/6至7/10、メトウエン6A6至6B8)，背面為淡橙色至橙色(Light orange、brjght reddish orange、Tiger Lily、蒙瑟爾5-10YR7/10、メトウエン6B8至8A6)。
在暗處的生長率稍差，為0.9～1.1mm/天，色調(diào)更淺，呈駝色(palebeige、Ivory、蒙瑟爾10YR9/2、メトウエン4A3)，背面為亮紅黃色(lightreddish yellow、Naples Yellow)，但菌絲的色調(diào)有時也變深，由土黃色至灰褐色(gold、Golden Ocher、light Grayish brown、blond、蒙瑟爾10YR5/4-8、メトウエン5E5-8)，此時的背面為暗黃褐色(栗色，Dark yellowishbrown、Burnt Umber，蒙瑟爾10YR3/6)。
在麥芽提取液瓊脂培養(yǎng)基(MA)上的生長緩慢，在近紫外線照射下經(jīng)11天達到11mm的直徑，生長率為1.0mm/天，形成密集的菌絲叢，生長繁盛，形成為羊毛狀或毛氈狀，色調(diào)為亮橙色(light orange、LightApricot、蒙瑟爾5YR8/6、メトウエン6A6)，背面為鮮橙色(bright orange、NasturtiumOrange，蒙瑟爾5YR7/12、メトウエン6A7)。在暗處色調(diào)成為淺色。
在燕麥瓊脂培養(yǎng)基(OA)上的生長較快，在近紫外線照射下經(jīng)10天達到21mm的直徑，生長率為3.7mm/天，雖然較平坦，但在中央部分密集有大量的分生孢子座，呈顆粒狀。色調(diào)為亮黃橙色(light yellowishorange、Maize、蒙瑟爾5YR7/8、メトウエン6B6)，背面顏色與其相同。在暗處色調(diào)成為淺色。
在合成營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(SNA)上的生長緩慢，在近紫外線照射下經(jīng)7天達到13mm的直徑，生長率為1.6mm/天，形成平坦且稀疏的集落，呈毛氈狀或羊毛狀，中央部分散有濕潤的分生孢子座。色調(diào)為駝色(palebeige、Ivory、蒙瑟爾10YR9/2、メトウエン4A3)，背面顏色與其相同。在暗處也顯示出同樣的生長情況。
在三浦培養(yǎng)基(LCA)上的生長較快，在近紫外線照射下經(jīng)10天達到25mm的直徑，生長率為3.4mm/天，形成平坦且稀疏的集落，呈顆粒狀或絮凝狀，中央部分散有濕潤的分生孢子座。色調(diào)為駝色(pale beige、Ivory、蒙瑟爾10YR9/2、メトウエン4A3)，背面顏色與其相同。在暗處也顯示出同樣的生長情況。
生長溫度范圍為10～30℃，最佳生長溫度為20～30℃。
生長pH范圍為pH3～11，最佳pH為5～7。
形態(tài)上的性質(zhì)在SNA上，分生孢子梗主要從空氣傳播的菌絲體(airborne mycelia)向上生長、支化，在其分枝或分生孢子梗上直接輪生出瓶梗(phialides)，形成復雜的分生孢子結(jié)構(gòu)。有時在空氣傳播的菌絲體上也直接單生出瓶梗。由在瓊脂表面上蔓延的菌絲形成分生孢子結(jié)構(gòu)，有時也不在空中向上生長。分生孢子梗的長為10～30μm。瓶梗為圓筒形，頂端通常具有顯著的杯狀結(jié)構(gòu)，大小為4.0～20.0×2.5～3.0μm。就瓶梗型分生孢子而言，在瓶梗頂端利用類粘蛋白聚集成塊狀而形成，典型的是，呈新月型，在基部具有清晰的足細胞。頂端細胞有時拉伸得較細，有時為鈍頭，通常彎曲，有時呈長橢圓形或圓筒形，1-3(4)隔板，6.8～30.0×1.9～4.9μm，L/W3.7～8.1(平均，19.3×3.8μm，L/W 5.2)。不被認為是厚壁孢子。
鑒定由亮色的菌絲形成的復雜的絮狀的分生孢子結(jié)構(gòu)，有時成為分生孢子座，分生孢子成為從圓筒形的細絲頂端內(nèi)生性地產(chǎn)生的瓶梗型、亮色、特征性的船型或新月形的2～5個細胞。從以上的形態(tài)特征可知，本菌F1476株屬于不完全菌鐮刀菌(Fusarium)屬。因此。鑒定本菌為鐮刀菌sp.F 1476株。
參考文獻Gerlach，W.and Nirenberg，H.1982 The genus Fusarium-a pictorial atlas.Mitt.Biol.Bundesanst.Land-u.Forstwirtsch.Berlin-Dahlem 2091-406.Booth，C.1971.The genus Fusarium.CMI，Kew，Surrey，237pp.Carmichael，J.W.，Kendrich，B.，Conners，I.L.and Sigler，L.1980.Genera ofHyphomycetes.University ofAlberta Press，Edmonton.Gams，W.1971.Cephalosporium-artige Schimmelpilze(Hyphomycetes)Gustav Fischer Verlag，Stuttgart.262pp.
實施例2從F 1476株的斜面培養(yǎng)物將一鉑環(huán)量接種到25個裝有100mL的液體培養(yǎng)基(葡萄糖2％、甘油1.5％、馬鈴薯淀粉1％、聚胨0.25％、酵母提取物0.35％、碳酸鈣0.5％、氯化鈉0.3％、硫酸鋅7水合物0.005％、硫酸銅5水合物0.0005％、硫酸錳4水合物0.0005％、烤大豆(toasted soya)1％)的容積為500mL的帶擋板的錐形燒瓶中，在25℃下振蕩3天進行培養(yǎng)(振蕩速度220rpm)，得到種培養(yǎng)液。將該種培養(yǎng)液16mL接種到125個裝有固體培養(yǎng)基(磨麥40g、SF1溶液(酵母提取物0.1％、酒石酸鈉0.05％、磷酸二氫鈉0.05％)24mL)的容積為500mL的帶擋板的錐形燒瓶中，在25℃下靜置11天進行培養(yǎng)。在如此培養(yǎng)的培養(yǎng)物中添加正丁醇12.5L，浸潤1晚，放置后進行過濾，得到正丁醇萃取液。在濃縮如此得到的萃取液之后，將其懸浮在1L水中，用鹽酸將pH調(diào)整至2，然后用醋酸乙酯1.1L進行萃取。再次用1.1L的醋酸乙酯萃取水層，與第1次的萃取物合在一起。向該醋酸乙酯萃取液(2.2L)中添加水0.9L，用氫氧化鈉水溶液將pH調(diào)整至10，然后進行分配。向所得水層再添加1L的醋酸乙酯，用鹽酸將pH調(diào)整至3，之后進行萃取。再次用醋酸乙酯1L對得到的水層進行萃取。在用硫酸鈉干燥如此得到的醋酸乙酯萃取液(2L)后，濃縮干燥，得到粗萃取物567mg。將其溶解于甲醇中，在如下所示的條件1下重復進行分取(preparative)高速液相色譜分析，由此得到含有化合物1的部分(Fraction 1)、含有化合物2和化合物3的部分(Fraction 2)、含有化合物4和化合物5和化合物6的部分(Fraction 3)。通過對Fraction 1進行減壓濃縮，得到化合物1的380mg白色粉末。
高速液相色譜分析的條件1裝置CCPP-D、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK C18(UG80、20mm×250mm)(資生堂制)移動相利用含有0.01％的三氟乙酸的水和含有0.01％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(15％乙腈～98％乙腈、逐級)化合物1的物理化學性質(zhì)分子量659FAB-MS(正型(positive mode)、基體m-NBA)660(M+H+)FAB-MS(負型(negative mode)、基體m-NBA)658(M-H-)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ
0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.40(14H、m)、1.53(4H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.96(2H、m)、2.42(4H、m)、2.57(1H、d、J＝16.5Hz)、2.89(1H、d、J＝16.5Hz)、2.91(1H、dd、J＝14、9Hz)、3.15(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.20(1H、d、J＝8Hz)、4.47(2H、d、J＝6Hz)、4.63(1H、dd、J＝9、4.5Hz)、5.43(1H、m)、5.52(2H、m)、6.78(2H、d、J＝9Hz)、7.10(2H、d、J＝9Hz)實施例3進一步對在實施例2中得到的部分(Fraction2，345mg)在如下所示的條件2下進行分取高速液相色譜分析，由此分離成含有化合物2的部分(Fraction 2-1、41.4mg)和含有化合物3的部分(Fraction 2-2、4.9mg)。進一步對Fraction 2-1在如下所示的條件3下進行分取高速液相色譜分析，得到含有化合物2的部分。對得到的部分進行減壓濃縮，由此離析化合物2的29.5mg的白色粉末。同樣地，通過在條件4下對Fraction 2-2進行分取高速液相色譜分析，得到化合物3的3mg白色粉末。
高速液相色譜分析的條件2裝置CCPP-D、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK C18(UG80、20mm×250mm)(資生堂制)移動相利用含有0.01％的三氟乙酸的水和含有0.01％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(65％乙腈～98％乙腈、逐級)高速液相色譜分析的條件3裝置CCPP-D、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK SPERIOREX ODS(20mm×250mm)(資生堂制)移動相利用含有0.01％的三氟乙酸的水和含有0.01％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(65％乙腈～98％乙腈、逐級(stepwise))高速液相色譜分析的條件4裝置CCPP-D、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK C8(SG120、20mm×250mm)(資生堂制)移動相利用含有0.01％的三氟乙酸的水和含有O.O 1％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(65％乙腈～98％乙腈、逐級)化合物2的物理化學性質(zhì)分子量673ESI(LC/MS正型)674(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.40(14H、m)、1.53(4H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.96(2H、m)、2.42(4H、m)、2.59(1H、d、J＝16.5Hz)、2.89(1H、d、J＝16.5Hz)、2.91(1H、dd、J＝14、9Hz)、3.15(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.20(1H、d、J＝8Hz)、3.63(3H、s)、4.47(2H、d、J＝6Hz)、4.63(1H、dd、J＝9、4.5Hz)、5.43(1H、m)、5.54(2H、m)、6.78(2H、d、J＝9Hz)、7.10(2H、d、J＝9Hz)化合物3的物理化學性質(zhì)分子量687ESI(LC/MS正型)688(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz))、1.20-1.40(14H、m)、1.53(4H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.96(2H、m)、2.42(4H、m)、2.56(1H、d、J＝16.5Hz)、2.89(1H、d、J＝16.5Hz)、2.91(1H、dd、J＝14Hz、9Hz)、3.11(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.20(1H、d、J＝8Hz)、3.63(3H、s)、3.71(3H、s)、4.47(2H、d、J＝6Hz)、4.64(1H、dd、J＝9、4.5Hz)、5.43(1H、m)、5.54(2H、m)、6.79(2H、d、J＝9Hz)、7.08(2H、d、J＝9Hz)實施例4進一步對在實施例2中得到的部分(Fraction3、453mg)在如上所示的條件2下進行分取高速液相色譜分析，由此分離成含有化合物4的部分(Fraction 3-1)、含有化合物5的部分(Fraction 3-2、16.4mg)、和含有化合物.6的部分(Fraction 3-3、26.5mg)。通過對Fraction 3-進行減壓濃縮得到化合物4的2mg白色粉末。進一步對Fraction 3-2在如下所示的條件5下進行分取高速液相色譜分析，得到含有化合物5的部分。對得到的部分進行減壓濃縮，由此離析化合物5的4mg白色粉末。同樣地，通過在條件5下對Fraction 3-3進行分取高速液相色譜分析，得到化合物6的6mg白色粉末。
高速液相色譜分析的條件5裝置CCPP-D、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK C18(UG80、20mm×250mm)(資生堂制)移動相利用含有0.01％的三氟乙酸的水和含有0.01％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(50％乙腈～98％乙腈、逐級)化合物4的物理化學性質(zhì)分子量607ESI(LC/MS正型)608(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.40(14H、m)、1.58(4H、m)、2.00(2H、m)、2.52(2H、m)、2.56(1H、d、J＝16Hz)、2.88(1H、dd、J＝14、8Hz)、2.90(1H、d、J＝16Hz)、3.10(1H、dd、J＝14、4Hz)、3.20(1H、d、J＝8Hz)、4.05(1H、dd、J＝8、4.5Hz)4.60(1H、dd、J＝8、4.5Hz)、5.53(2H、m)、6.67(2H、d、J＝8Hz)、7.02(2H、d、J＝8Hz)化合物5的物理化學性質(zhì)分子量614ESI(LC/MS正型)615(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.40(14H、m)、1.53(4H、m)、1.93(2H、m)、2.27(4H、m)、2.58(1H、d、J＝16Hz)、2.86(1H、d、J＝16Hz)、3.22(2H、m)、3.65(1H、d、J＝9Hz)、4.73(1H、dd、J＝8、5Hz)、5.50(2H、m)、6.96(1H、t、J＝7Hz)、7.06(1H、t、J＝7Hz)、7.10(1H、s)、7.29(1H、d、J＝7Hz)7.55(1H、d、J＝7Hz)化合物6的物理化學性質(zhì)分子量675ESI(LC/MS正型)676(M+H+)
1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.40(14H、m)、1.53(4H、m)、1.72(3H、s)、1.77(3H、s)、1.92(2H、m)、2.42(2H、m)、2.57(1H、d、J＝16Hz)、2.89(1H、d、J＝16Hz)、2.91(1H、dd、J＝14、9Hz)、3.15(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.20(1H、d、J＝7Hz)、4.05(1H、dd、J＝8、4Hz)、4.47(2H、d、J＝6Hz)、4.62(1H、dd、J＝9、4.5Hz)、5.43(1H、m)、5.52(2H、m)、6.78(2H、d、J＝9Hz)、7.10(2H、d、J＝9Hz)實施例5化合物7的合成在化合物1(5mg，0.0075mmol)的甲醇溶液(2mL)中添加10％的Pd-C(1mg)，在氫氣環(huán)境下在室溫下攪拌24小時。過濾鈀催化劑，對濾液進行減壓濃縮。在如下所示的條件下對得到的殘留物進行分取高速液相色譜分析，從而進行精制，得到化合物7(1.7mg，34％)的無色油狀物質(zhì)。
高速液相色譜分析的條件裝置CCPS、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK C18(UG、4.6mm×150mm)(資生堂制)移動相利用含有0.005％的三氟乙酸的水和含有0.005％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(65％乙腈～98％乙腈、逐級)化合物7的物理化學性質(zhì)分子量661ESI(LC/MS正型)662(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、0.96(6H、d、J＝6.5Hz)、1.20-1.35(14H、m)、1.46-1.58(4H、m)、1.64(2H、q、J＝6.5Hz)、1.83(1H、quintet、J＝6.5Hz)、1.93-2.01(2H、m)、2.43(4H、t、J＝7.5Hz)、2.58(1H、d、J＝16Hz)、2.89(1H、d、J＝16Hz)、2.91(1H、dd、J＝14、9Hz)、3.16(1H、dd、J＝14、5Hz)、3.19(1H、d、J＝8.5Hz)、3.95(2H、t、J＝6.5Hz)、4.64(1H、dd、J＝9、5Hz)、5.50-5.56(2H、m)、6.79(2H、d、J＝8.5Hz)、7.11(2H d、J＝8.5Hz)實施例6化合物8的合成在化合物1(22mg，0.033mmol)的甲醇溶液(1.5mL)中添加硼氫化鈉(13mg，0.33mmol)，在室溫下攪拌4小時。用1N鹽酸水溶液中和反應液，對溶劑進行減壓蒸餾。在得到的殘渣中添加二氯甲烷(10mL)，過濾不溶物質(zhì)。將濾液提供給Mega Bond Elute Diol(500mg，Varian公司)，利用二氯甲烷/甲醇(30∶1)洗脫部得到化合物8(11mg，51％)的白色粉末。
化合物8的物理化學性質(zhì)分子量661ESI(LC/MS正型)662(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.48(22H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.93-2.04(2H、m)、2.58(1H、d、J＝16Hz)、2.89(1H、d、J＝16Hz)、2.91(1H、dd、J＝14、9Hz)、3.16(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.20(1H、d、J＝8Hz)、3.44-3.53(1H、m)、4.48(2H、d、J＝6.5Hz)、4.64(1H、dd、J＝9、4.5Hz)、5.41-5.47(1H、m)、5.51-5.56(2H、m)、6.79(2H、d、J＝8.5Hz)、7.11(2H、d、J＝8.5Hz)實施例7化合物9的合成將化合物1(30mg，0.045mmol)添加至1，4-二噁烷(1mL)和6N鹽酸水溶液(0.5mL)的混合溶液中，在50℃下攪拌5分鐘，隨后在室溫下攪拌4小時。向反應液中添加水(15mL)，用醋酸乙酯(15mL)進行萃取。在用飽和食鹽水(15mL)清洗有機層之后，用無水硫酸鈉進行脫水干燥。對溶劑進行減壓蒸餾，得到化合物9(24mg，91％)的白色粉末。
化合物9的物理化學性質(zhì)分子量591ESI(LC/MS正型)592(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.40(14H、m)、1.46-1.59(4H、m)、1.93-2.03(2H、m)、2.43(4H、t、J＝7Hz)、2.62(1H、d、J＝16Hz)、2.89(1H、dd、J＝14、9Hz)、2.91(1H、d、J＝16Hz)、3.11(1H、dd、J＝14、5Hz)、3.21(1H、d、J＝8Hz)、4.61(1H、dd、J＝9、5Hz)、5.46-5.57(2H、m)、6.67(2H、d、J＝8.5Hz)、7.02(2H、d、J＝8.5Hz)實施例8化合物10的合成在化合物9(12mg，0.020mmol)的甲醇溶液(1mL)中添加10％的Pd-C(3mg)，在氫氣環(huán)境下在室溫下攪拌3小時。過濾鈀催化劑，對濾液進行減壓濃縮。使用薄層色譜儀(DIOLF 254s，メルク公司，展開溶劑二氯甲烷/甲醇(10∶1)、Rf值0.4)展開殘留物來進行精制，得到化合物10(3mg，25％)的白色粉末。
化合物10的物理化學性質(zhì)分子量593ESI(LC/MS正型)594(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.03-1.40(20H、m)、1.45-1.60(4H、m)、2.40-2.47(4H、m)、2.54-2.64(1H、m)、2.65(1H、d、J＝17Hz)、2.75-2.88(2H、m)、3.20(1H、dd、J＝14.5、4.5Hz)、4.65(1H、dd、J＝10、4.5Hz)、6.69(2H、d、J＝8.5Hz)、7.08(2H、d、J＝8.5Hz)實施例9化合物11的合成在化合物1(20mg，0.030mmol)的DMF溶液(1mL)中添加氯化銨(7.3mg，0.136mmol)、水溶性碳化二亞胺鹽酸鹽(WSC·HCl)(28mg，0.145mmol)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(22mg、0.145mmol)、N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)(174μl，0.145mmol)，在室溫下攪拌17小時。對溶劑進行減壓蒸餾，將殘渣溶解于醋酸乙酯(20mL)中，用飽和氯化銨水溶液(20mL)和飽和食鹽水(20mL)進行清洗。用無水硫酸鈉對有機層進行脫水干燥，然后對溶劑進行減壓蒸餾。在如下所示的條件下對得到的殘留物進行分取高速液相色譜分析，進行精制，得到化合物11(4.4mg，22％)的白色粉末。
高速液相色譜分析的條件裝置CCPS、MCPD-3600系統(tǒng)(東ソ一)柱CAPCELL PAK C 18(UG、4.6mm×150mm)(資生堂制)移動相利用含有0.005％的三氟乙酸的水和含有0.005％的三氟乙酸的乙腈的溶劑梯度洗脫(65％乙腈～98％乙腈、逐級(stepwise))化合物11的物理化學性質(zhì)分子量656ESI(LC/MS正型)657(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.19-1.39(14H、m)、1.46-1.59(4H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.88-1.98(2H、m)、2.28(1H、d、J＝15Hz)、2.43(4H、t、J＝7.5Hz)、2.74(1H、d、J＝15Hz)、2.79(1H、dd、J＝14、10Hz)、3.15(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.18(1H、d、J＝8Hz)、4.47(2H、d、J＝6.5Hz)、4.59(1H、dd、J＝10、4.5Hz)、5.39-5.49(3H、m)、6.79(2H、d、J＝8.5Hz)、7.13(2H、d、J＝8.5Hz)實施例10化合物12的合成在化合物1(80mg，0.12mmol)的甲醇溶液(10mL)中添加10％的Pd-C(10mg)，在氫氣環(huán)境下在室溫下攪拌20小時。用鈣鐵石過濾鈀催化劑，對濾液進行減壓濃縮。使用薄層色譜儀(DIOL F254s，メルク公司，展開溶劑二氯甲烷/甲醇(10∶1)、Rf值0.8)展開殘留物，進行精制，得到化合物12(41mg，51％)的白色粉末。
化合物12的物理化學性質(zhì)分子量663ESI(LC/MS正型)664(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、0.96(6H、d、J＝6.5Hz)、1.07-1.35(20H、m)、1.46-1.56(4H、m)、1.64(2H、q、J＝6.5Hz)、1.81(1H、sexet、J＝6.5Hz)、2.43(4H、t、J＝7.5Hz)、2.50-2.58(1H、m)、2.61(1H、d、J＝16.5Hz)、2.84(1H、dd、J＝14.5、10.5Hz)、2.92(1H、d、J＝16.5Hz)、3.22(1H、dd、J＝14.5、4Hz)、3.95(2H、t、J＝6.5Hz)、4.71(1H、dd、J＝10.5、4Hz)、6.81(2H、d、J＝8.5Hz)、7.16(2H、d、J＝8.5Hz)實施例11化合物13的合成a)化合物1的三甲酯體的合成在化合物1(260mg，0.39mmol)的甲醇溶液(15mL)-二氯甲烷(15mL)的混合溶液中添加三甲基硅烷基重氮甲烷10v/v％的己烷溶液(4.3mL)，在室溫下攪拌3小時。對反應液進行減壓濃縮。使用Mega Bond Elute硅膠(2g，バリアン公司)對得到的殘渣進行精制。通過己烷/醋酸乙酯(1∶1)洗脫部得到化合物1的三甲酯體(230mg，83％)的白色粉末。
化合物1的三甲酯體的物理化學性質(zhì)分子量701FAB-MS(正型，基體m-NBA)702(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.37(14H、m)、1.46-1.59(4H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.93-2.03(2H、m)、2.43(4H、t、J＝7.5Hz)、2.60(1H、d、J＝16Hz)、2.89(1H、dd、J＝14、9Hz)、2.93(1H、d、J＝16Hz)、3.11(1H、dd、J＝14、5Hz)、3.19(1H、d、J＝8.5Hz)、3.63(3H、s)、3.71(3H、s)、3.72(3H、s)、4.48(2H、d、J＝6.5Hz)、4.63(1H、dd、J＝9、5Hz)、5.40-5.58(3H、m)、6.79(2H、d、J＝8.5Hz)、7.07(2H、d、J＝8.5Hz)b)酰肼體的合成在上述化合物1的三甲酯體(21mg，0.030mmol)的甲醇溶液(2mL)中添加4-甲苯磺酰肼(6.7mg，0.036mmol)，加熱1.5小時并進行回流。對溶劑進行減壓蒸餾，減壓下干燥得到的殘渣24小時。將殘渣溶解于無水氯仿(2mL)，0℃下添加1M的兒茶酚硼烷四氫呋喃溶液(75μL，0.075mmol)，在相同溫度下攪拌3小時。在反應液中添加甲醇(20μL)，室溫下攪拌10分鐘。進而添加醋酸鈉(8mg，0.060mmol)和二甲亞砜(32μL)，加熱1小時并進行回流。在反應液中添加水(20mL)，用醋酸乙酯(20mL)萃取2次。將有機層合在一起，用飽和食鹽水(20mL)清洗，用無水硫酸鈉脫水干燥，對溶劑進行減壓蒸餾。使用薄層色譜儀(硅膠F254，メルク公司，展開溶劑己烷/醋酸乙酯(3∶1)、Rf值0.3)展開殘留物，進行精制，得到酰肼體(11mg，54％)的白色粉末。
酰肼體的物理化學性質(zhì)分子量687FAB-MS(正型，基體m-NBA)688(M+H+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6.5Hz)、1.15-1.37(24H、m)、1.74(3H、s)、1.80(3H、s)、1.94-2.04(2H、m)、2.62(1H、d、J＝16Hz)、2.87(1H、d、J＝16Hz)、3.00(1H、dd、J＝14、7Hz)、3.10(1H、dd、J＝14、5.5Hz)、3.16(1H、d、J＝9Hz)、3.67(3H、s)、3.72(3H、s)、3.76(3H、s)、4.47(2H、d、J＝7Hz)、4.76-4.83(1H、m)、5.41-5.69(3H、m)、6.76(1H、d、J＝8Hz)、6.80(2H、d、J＝9Hz)、7.03(2H、d、J＝9Hz)c)化合物13的合成在上述酰肼體(10mg，0.015mmol)的乙醇溶液(1mL)中添加1M氫氧化鋰水溶液(0.15mL，0.15mmol)，室溫下攪拌16小時。用1N鹽酸水溶液中和反應液，對溶劑進行減壓濃縮。使用薄層色譜儀(DIOL F 254s，メルク公司，展開溶劑二氯甲烷/甲醇(10∶1)、Rf值0.5)展開殘留物，進行精制，得到化合物13(3mg，35％)的白色粉末。其中，在本實施例中，化合物13是作為…的酪氨酸部分的立體配置成為外消旋體的化合物而得到的。
化合物13的物理化學性質(zhì)分子量645ESI(LC/MS正型)646(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.18-1.44(24H、m)、1.73(3H、s)、1.77(3H、s)、1.90-2.04(2H、m)、2.57-2.68(1H、m)、2.86-3.22(4H、m)、4.47(2H、d、J＝6.5Hz)、4.56-4.67(1H、m)、5.39-5.65(3H、m)、6.78-6.84(2H、m)、7.09-7.16(2H、m)實施例12化合物14的合成將化合物1(10mg，0.015mmol)和O-(2-氨乙基)-羥基胺二鹽酸鹽(4.5mg，0.030mmol)溶解于吡啶(0.2mL)中，在室溫下攪拌16小時。對溶劑進行減壓濃縮，使用薄層色譜儀(DIOL F 254s，メルク公司，展開溶劑二氯甲烷/甲醇(5∶1)、Rf值0.5)展開殘留物，進行精制，得到化合物14(Ro4575919)(7.7mg，71％)的無色油狀物質(zhì)。
化合物14的物理化學性質(zhì)分子量717ESI(LC/MS正型)718(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.21-1.40(14H、m)、1.42-1.56(4H、m)、1.74(3H、s)、1.78(3H、s)、1.88-2.04(2H、m)、2.18(2H、t、J＝7.5Hz)、2.30-2.37(2H、m)、2.63(1H、d、J＝15Hz)、2.84-2.97(2H、m)、3.12-3.25(4H、m)、4.18(2H、t、J＝5Hz)、4.48(2H、d、J＝6.5Hz)、4.63(1H、dd、J＝9、4Hz)、5.40-5.62(3H、m)、6.80(2H、d、J＝8.5Hz)、7.11(2H、d、J＝8.5Hz)實施例13化合物15的合成將化合物1(10mg，0.015mmol)和O-甲基羥基胺鹽酸鹽(2.5mg，0.030mmol)溶解于吡啶(0.2mL)中，在室溫下攪拌15小時。對溶劑進行減壓蒸餾。使用MegaBond Elute Diol(500mg，バリアン公司)精制殘留物。利用二氯甲烷/甲醇(25∶1)洗脫部得到化合物15(9.6mg，92％)的無色油狀物質(zhì)。
化合物15的物理化學性質(zhì)分子量688ESI(LC/MS正型)689(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.20-1.36(14H、m)、1.40-1.50(4H、m)、1.74(3H、s)、1.78(3H、s)、1.91-2.00(2H、m)、2.14(2H、t、J＝7.5Hz)、2.27(2H、t、J＝7.5Hz)、2.59(1H、d、J＝16Hz)、2.90(1H、d、J＝16Hz)、2.91(1H、dd、J＝14、9Hz)、3.16(1H、dd、J＝14、4.5Hz)、3.20(1H、d、J＝8.5Hz)、3.75(3H、s)、4.48(2H、d、J＝6.5Hz)、4.64(1H、dd、J＝9、4.5Hz)、5.41-5.49(1H、m)、5.52-5.60(2H、m)、6.80(2H、d、J＝8.5Hz)、7.11(2H、d、J＝8.5Hz)另外，通過與上述相同的方法，可以合成以下的化合物。

進而，下面通過實施例說明本發(fā)明的式(I)的化合物的制造方法以及式(I)的化合物的藥理活性。
實施例14 1-1(工序1-1) 按照文獻記載的方法(J.Org.Chem.1989，45，5522，B.E.Marron，et al)，合成用式 表示的化合物a(70.1g)，將該化合物a的無水二乙醚(700ml)溶液冷卻至0℃，緩慢加入氫化雙(2-甲氧基乙氧基)鋁鈉(414mmol，121ml，70％的甲苯溶液)。添加試劑結(jié)束5分鐘后取下冰浴，室溫下持續(xù)攪拌1小時。將反應液冷卻至0℃，緩慢加入無水醋酸乙酯(19.8ml，203mmol)。相同溫度下攪拌10分鐘后，冷卻至-78℃，添加碘(76.1g，300mmol)。用2個小時漸漸升溫至室溫，使反應結(jié)束。在反應液中添加亞硫酸氫鈉水溶液，添加醋酸乙酯。在使用鈣鐵石吸濾反應液之后分離有機層，再一次用醋酸乙酯萃取水層。在無水硫酸鈉上干燥合在一起的有機層之后，進行減壓濃縮，得到粗精制的標題化合物(100g)的淺茶色的油狀物質(zhì)。得到的粗精制物直接用于下面的反應。
化合物b的物理化學性質(zhì)分子量466FAB-MS(正型，基體m-NBA)467(M+H+)
1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.04(9H、s)、1.44(1H、t、J＝5Hz)、2.73(2H、t、J＝6Hz)、3.80(2H、t、J＝6Hz)、4.18(2H，t、J＝5Hz)、5.91(1H、t、J＝5Hz)、7.35.7.46(6H、m)、7.65-7.69(4H、m)1-2(工序1-2) 將在上述反應中得到的化合物b的二氯甲烷溶液(300ml)冷卻至0℃，添加二氫呋喃(22.7ml，248mmol)。在該溶液中添加吡啶鎓對甲苯磺酸(260mg，1mmol)。1小時后添加碳酸氫鈉水并停止反應。用飽和食鹽水清洗分離的有機層，在無水硫酸鈉上干燥之后進行減壓濃縮。得到的粗精制的化合物c(108g)直接用于下述的反應。
化合物c的物理化學性質(zhì)分子量550FAB-MS(正型，基體m-NBA)551(M+H+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.04(9H、s)、1.49-1.91(6H、m)、2.74(2H、t、J＝6Hz)、3.46-3.58(2H、m)、3.76(2H、t、J＝6Hz)、3.82-3.93(1H、m)、4.06(1H，dd、J＝13、6Hz)、4.27(1H、dd、J＝13、6Hz)、4.65(1H、t、J＝3Hz)、5.91(1H、t、J＝5Hz)、7.35-7.43(6H、m)、7.65-7.69(4H、m)1-3(工序1-3)
將粗精制的化合物c(4.73g)溶解于無水二乙醚(30ml)中，冷卻至-78℃。緩慢添加叔丁基鋰(17.2mmol，10.7ml，1.6N戊烷溶液)。相同溫度下攪拌1小時之后，添加仲甲醛(18.9mmol，570mg)，相同溫度下攪拌30分鐘，升溫至0℃，攪拌1小時。添加氯化銨水溶液而停止反應，用醋酸乙酯進行萃取。用少量的醋酸乙酯對水層進行萃取，用飽和食鹽水清洗合在一起的有機層，用無水硫酸鈉干燥。通過柱色譜法(硅膠，己烷-醋酸乙酯9∶1至4∶1)對減壓濃縮后得到的粗產(chǎn)物進行精制，得到化合物d(1.635g)的無色油狀物質(zhì)。
化合物d的物理化學性質(zhì)分子量454FAB-MS(正型，基體m-NBA)455(M+H+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.04(9H、s)、1.49-1.89(6H、m)、2.41(2H、t、J＝6Hz)、3.03(1H、t、J＝6Hz)、3.47-3.58(2H、m)、3.75-3.92(3H、m)、4.08-4.26(4H、m)、4.68(1H，t、J＝3Hz)、5.53(1H、t、J＝7Hz)、7.35-7.47(6H、m)、7.64-7.68(4H、m)1-4(工序1-4) 將化合物d(344mg，0.76mmol)和咪唑(77mg，1.14mmol)的無水N，N-二甲替甲酰胺溶液(2ml)冷卻至0℃，添加叔丁基二苯基氯硅烷(0.2ml，0.76mmol)，攪拌2小時。添加氯化銨水溶液而停止反應，用己烷進行萃取。用水清洗有機層2次，接著用飽和食鹽水清洗有機層，在無水硫酸鈉上進行干燥。減壓下進行濃縮，得到粗精制的化合物(e)(554mg)的無色油狀物質(zhì)。
化合物e的物理化學性質(zhì)分子量692
FAB-MS(正型，基體m-NBA)715(M+Na+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.00(9H、s)、1.04(9H、s)、1.38-1.82(6H、m)、2.49(2H、t、J＝7Hz)、3.29-3.42(1H、m)、3.63-3.85(4H、m)、4.00-4.09(1H、m)、4.14(2H、s)、4.46(1H，t、J＝3Hz)、5.43(1H、t、J＝7Hz)、7.29-7.48(12H、m)、7.57-7.78(8H、m)1-5(工序1-5) 在化合物e(1.16mg，1.67mmol)的乙醇溶液(6ml)中添加吡啶鎓對甲苯磺酸(90mg，0.36mmol)，在60℃下攪拌3.5小時。在將溶液冷卻至室溫之后，添加飽和碳酸氫鈉水，用醋酸乙酯進行萃取。用水、飽和食鹽水依次清洗有機層，在無水硫酸鈉上進行干燥。減壓下進行濃縮，使用柱色譜法(硅膠、己烷-醋酸乙酯20∶1)精制得到的粗產(chǎn)物，得到化合物(f)(825mg，81％)的無色油狀物質(zhì)。
化合物f的物理化學性質(zhì)分子量608FAB-MS(正型，基體m-NBA)631(M+Na+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.01(9H、s)、1.01(9H、s)、1.23(1H、t、J＝6Hz)、2.41(2H、t、J＝7Hz)、3.75(2H、t、J＝7Hz)、3.90(2H、t、J＝6Hz)、4.14(2H、s)、5.47(1H、t、J＝7Hz)、7.29-7.47(12H、m)、7.57-7.75(8H、m)1-6(工序1-6)
減壓下加熱干燥安裝有轉(zhuǎn)子的圓底燒瓶后進行氮置換，向其中添加二氯甲烷(60ml)，冷卻至-20℃。依次添加四異丙醇鈦(2.33ml，7.88mmol)、L-(+)-酒石酸二乙酯(1.62ml，9.46mmol)，攪拌15分鐘后添加化合物f(4.80g，7.88mmol)的二氯甲烷溶液(30ml)，攪拌15分鐘。冷卻至-25℃，緩慢滴下叔丁基氫過氧化物(5.25ml，15.8mmol，3N二氯甲烷溶液)。在滴加結(jié)束之后，在20℃下攪拌2小時，添加二甲亞砜(1.1ml)，進而在相同溫度下攪拌1小時。在反應液中添加10％的酒石酸水溶液，在攪拌30分鐘之后，室溫下攪拌1小時。分離有機層，用少量的二氯甲烷.對水層進行萃取，在無水硫酸鈉上干燥合在一起的有機層。使用柱色譜法(硅膠、己烷-醋酸乙酯9∶1)對減壓濃縮得到的粗產(chǎn)物進行精制。得到化合物g(4.78g，97％)的無色油狀物質(zhì)。不對稱收率(＞95％ee)通過相對應的MTPA酯的NMR分析而求出。
化合物g的物理化學性質(zhì)分子量624FAB-MS(正型，基體m-NBA)647(M-+Na+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.02(9H、s)、1.03(9H、s)、1.72(1H、t、J＝6Hz)、1.82(1H、dt、J＝14、7Hz)、2.23(1H、dt、J＝14、6Hz)、3.17(1H、dd、J＝6、5Hz)、3.55-3.79(6H、m)、7.32-7.45(12H、m)、7.60-7.65(8H、m)1-7(工序1-7)
在氮氣環(huán)境下，在通過以下所示的制造例1的工序2-3中制造的化合物α(10.45g，37.2mmol)的無水四氫呋喃溶液(100ml)中，室溫下添加雙茂基二鋯氫氯化物(10.11g，37.2mmol)，攪拌30分鐘。將得到的溶液冷卻至-78℃，添加甲基氯化鎂(24.7ml，74mmol，3N四氫呋喃溶液)，攪拌5分鐘。在該溶液中添加一價的碘化銅(500mg，7.2mmol)，漸漸升溫至-30℃。用20分鐘的時間添加化合物g(4.49g)的無水四氫呋喃溶液(70ml)，在滴下結(jié)束之后在-25℃下整夜攪拌。緩慢添加飽和氯化銨水溶液，停止反應，接著升溫至室溫。室溫下攪拌混合物10小時，用鈣鐵石過濾產(chǎn)生的白色固體。用醋酸乙酯充分清洗鈣鐵石，分離有機層。用少量的醋酸乙酯對水層進行萃取，在用飽和氯化銨水溶液清洗合在一起的有機層之后，在無水硫酸鈉上進行干燥。在減壓下進行濃縮，使用柱色譜法(硅膠、己烷-醋酸乙酯20∶1至9∶1)對得到的粗產(chǎn)物進行精制。得到化合物h(5.96g，91％)的淡黃色的油狀物質(zhì)。
化合物h的物理化學性質(zhì)分子量907FAB-MS(負型，基體m-NBA)906(M+H+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝7Hz)、0.99(9H、s)、1.04(9H、s)、1.18-1.63(22H、m)、1.78-2.01(4H、m)、2.44-2.57(1H、m)、3.00(1H、t、J＝6Hz)、3.59-3.92(10H、m)、4.28(1H、s)、5.37-5.55(2H、m)、7.29-7.65(20H、m)1-8(工序1-8) 將化合物h(5.30g，5.84mmol)溶解于二氯甲烷(200ml)和2，2-二甲氧基丙烷(150ml)，添加吡啶鎓對甲苯磺酸(15mg，0.058mmol)，在室溫下整夜攪拌。添加飽和碳酸氫鈉水，停止反應，用二氯甲烷萃取2次。在無水硫酸鈉上干燥后進行減壓下濃縮，使用柱色譜法(硅膠、己烷-醋酸乙酯20∶1)對得到的粗產(chǎn)物進行精制。得到化合物i(4.69g，86％)的淡黃色的油狀物質(zhì)。
化合物i的物理化學性質(zhì)分子量947FAB-MS(負型，基體m-NBA)946(M+H+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6Hz)、1.02(9H、s)、1.05(9H、s)、1.14-1.63(28H、m)、1.78-2.16(4H、m)、2.41-2.51(1H、m)、3.47(1H、d、J＝10Hz)、3.64-3.86(6H、m)、3.92(s、4H)、5.36-5.42(2H、m)、7.28-7.47(12H、m)、7.61-7.69(8H、m)1-9(工序1-9) 將化合物i(4.39g，4.64mmol)的四氫呋喃溶液(50ml)冷卻至0℃，添加氟化四丁基銨(10.2ml，10.2mmol，1M的四氫呋喃溶液)和醋酸(0.53ml，9.27mmol)。漸漸升溫至室溫，攪拌2小時。添加飽和氯化銨水溶液，用二氯甲烷萃取2次。用碳酸氫鈉水清洗合在一起的有機層，在無水硫酸鈉上進行干燥。在減壓下進行濃縮，使用柱色譜法(硅膠、己烷-醋酸乙酯9∶1至3∶2)對得到的粗產(chǎn)物進行精制。得到化合物j(1.73g，81％)的淡黃色的油狀物質(zhì)。
化合物j的物理化學性質(zhì)分子量470FAB-MS(正型，基體m-NBA)493(M+Na+)
1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6Hz)、1.17-1.73(26H、m)、1.91-2.16(4H、m)、2.44(1H、brs)、2.73(1H、dt、J＝6、10Hz)、2.95(1H、brs)、3.48(1H、d、J＝11Hz)、3.63-4.01(m、10H)、5.15(1H、dd、J＝15，9Hz)、5.55(1H、dt、J＝15、7Hz)1-10(工序1-10) 在氮氣環(huán)境下，將草酰氯(0.575ml，6.6mmol)的無水二氯甲烷溶液(17ml)冷卻至-78℃，滴下二甲亞砜(0.936ml，13.2mmol)的二氯甲烷溶液(1ml)，攪拌15分鐘。緩慢滴下化合物j(388mg，0.824mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)。在相同溫度下攪拌混合物1小時之后，添加三乙胺(3ml，21.4mmol)，進而攪拌30分鐘。取下冷卻浴，向溶液吹入氮氣氣流，除去低沸點的化合物，接著減壓下進行干燥。在殘渣中添加二乙醚(15ml)，過濾不溶物質(zhì)進行濃縮。在2次進行該操作之后，將得到的殘渣馬上用于下面的反應。
將上述的粗精制二醛溶解于2-甲基-2-丙醇(24ml)、2-甲基-2-丁烯(6ml)，冷卻至5～7℃左右。在該溶液中緩慢滴下亞氯酸鈉(745mg，8.24mmol)和磷酸二氫鈉(745mg，6.21mmol)的水溶液(7.45ml)。2小時后將混合物冷卻至0℃，添加磷酸二氫鈉水溶液，調(diào)節(jié)pH約為5。用二氯甲烷萃取3次，用飽和食鹽水清洗合在一起的有機層之后，在無水硫酸鈉上進行干燥。在過濾之后，對在減壓下濃縮而得到的淡黃色的油狀殘渣不進行進一步的精制而馬上用于下面的反應。
將粗精制的二羧酸溶解于N，N-二甲基甲酰胺二叔丁基乙縮醛(4.5ml)，在70℃下攪拌1小時。在減壓下蒸餾低沸點化合物。使用柱色譜法(硅膠、己烷-醋酸乙酯20∶1)對殘渣進行精制，得到化合物k(340mg，60％)的淡黃色的油狀物質(zhì)。
化合物k的物理化學性質(zhì)分子量610FAB-MS(正型，基體m-NBA)(M+H+)611、(M+Na+)6331H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6Hz)、1.18-1.64(46H、m)、1.99(2H、q、J＝7Hz)、2.69(2H、ABq、J＝15、18Hz)、2.93(1H、q、J＝7Hz)、3.82-3.88(2H、m)、3.92(4H、s)、5.51-5.69(2H、m)1-11(工序1-11) 將化合物k(340mg，0.556mmol)溶解于四氫呋喃(1ml)中，添加80％醋酸水溶液(10ml)，在室溫下攪拌3.5小時。將混合物緩慢添加到飽和碳酸氫鈉水中，在中和醋酸之后，用醋酸乙酯萃取2次。在無水硫酸鈉上干燥，接著進行過濾，減壓濃縮，得到化合物1(290mg，99％)的淡黃色的油狀物質(zhì)。
化合物1的物理化學性質(zhì)分子量526FAB-MS(正型，基體m-NBA)(M+H+)527、(M+Na+)5491H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝7Hz)、1.18-1.68(36H、m)、2.01(2H、q、J＝7Hz)、2.25-2.41(5H、m)、1.99(1H、d、J＝7Hz)、2.04(1H、d、J＝7Hz)、3.62-3.82(2H、m)、3.99(1H、s)、5.42(1H、dd、J＝9、15Hz)、5.58(1H、dt、J＝16、6Hz)1-12(工序1-12)
將丙酮(45ml)冷卻至0℃，添加瓊斯試劑(0.48ml，0.9mmol，1.89N)。向該混合物中緩慢滴下化合物1(216mg，0.41mmol)的丙酮溶液(3ml)。在相同溫度下攪拌1小時之后，添加亞硫酸氫鈉水溶液直至反應液的黃色消失并出現(xiàn)深綠色的沉淀，停止反應。向其中添加飽和食鹽水(20ml)，用二氯甲烷萃取2次，在無水硫酸鈉上干燥合在一起的有機層。在減壓下進行濃縮，使用硅膠柱色譜儀(二氯甲烷-甲醇50∶1至20∶1)對殘渣進行精制，得到化合物m(198mg，89％)的淡黃色的油狀物質(zhì)。
化合物m的物理化學性質(zhì)分子量541ESI(LC/MS正型)(M+H+)5421H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6Hz)、1.16-1.67(36H、m)、1.99(2H、q、J＝6Hz)、2.35(4H、t、J＝8Hz)、2.70(1H、d、J＝16Hz)、2.90(1H、d、J＝16Hz)、3.28(1H、d、J＝9Hz)、5.52(1H、dd、J＝9、15Hz)、5.68(1H、dt、J＝15、5Hz)1-13(工序1-13) 將化合物m(6.4mg，0.012mmol)、(S)-4-(2-丁炔氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯鹽酸鹽(4.6mg，0.014mmol)的N，N-二甲替甲酰胺溶液(1ml)冷卻至-10℃，依次添加N，N-二異丙基乙胺(0.005ml，0.026mmol)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲陽離子六氟磷酸酯(7.0mg，0.017mmol)。緩慢升溫至室溫，整夜攪拌。添加氯化銨水溶液，停止反應，用醋酸乙酯進行萃取。依次用水清洗有機層2次，用飽和食鹽水清洗有機層，然后在無水硫酸鈉上進行干燥。過濾、減壓濃縮之后，使用硅膠薄層色譜儀(己烷-醋酸乙酯7∶3)對殘渣進行精制，得到化合物n(8.4mg，88％)的無色固體。
化合物n的物理化學性質(zhì)ESI(LC/MS正型)834(M+Na+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.86(3H、t、J＝6.6Hz)、1.12-1.68(45H、m)、1.85(3H、t、J＝1.9Hz)、1.90-2.03(2H、m)、2.29-2.43(4H、m)、2.59(1H、d、J＝16.5Hz)、2.76(1H、d、J＝16.5Hz)、2.97-3.14(3H、m)、4.22(1H、s)、4.57-4.74(3H、m)、5.46(1H、dd、J＝9.2、15.2Hz)、5.64(1H、dt、J＝6.6、15.2Hz)、6.86(2H、d、J＝8.6Hz)、7.01(1H、d、J＝7.9Hz)、7.13(2H、d、J＝8.6Hz)1-14(工序1-14) 將化合物n(8.4mg)的二氯甲烷溶液(3ml)冷卻至-0℃，依次添加茴香醚(0.01ml)、三氟乙酸(1ml)。緩慢升溫至室溫，整夜攪拌。在減壓濃縮反應溶液之后用苯共沸兩次，之后，使用Mega Bond Elute Diol(500mg，バリアン公司)(二氯甲烷-甲醇＝20∶1)精制殘渣，得到化合物21(5.3mg，80％)的無色固體。
化合物21的物理化學性質(zhì)
分子量643ESI(LC/MS正型)644(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.19-1.38(14H、m)、1.42-1.60(4H、m)、1.82(3H、、J＝2Hz)、1.89-2.02(2H、m)、2.44(4H、t、J＝7Hz)、2.58(1H、d、J＝16Hz)、2.78-2.98(2H、m)、3.09-3.23(2H、m)、4.53-4.67(3H、m)、5.39-5.61(2H、m)、6.83(2H、d、J＝9Hz)、7.13(2H、d、J＝9Hz)制造例在制造例1中，說明在實施例14的工序1-7中使用的化合物α的合成方法。
工序2-1 在0℃下，在N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(63.3g，0.65mmol)、水溶性碳化二亞胺鹽酸鹽(WSC·HCl)(124g，0.65mol)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(99.3g，0.65mol)、N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)(220ml，1.3mol)的二氯甲烷溶液(500ml)中滴加8-壬炔酸(50g，0.32mol)，在室溫下攪拌15小時。用飽和氯化銨水溶液(400ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(400ml)、飽和食鹽水(300ml)清洗反應液。用無水硫酸鈉對有機層進行脫水干燥后，對溶劑進行減壓蒸餾。使用柱色譜儀(ワコ一ゲルC-300，500g，和光純藥)精制得到的殘留物。通過己烷/醋酸乙酯(20∶1)洗脫部得到化合物β(60g，94％)的無色油狀物質(zhì)。
化合物β的物理化學性質(zhì)分子量197ESI(LC/MS正型)198(M+H+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ1.30-1.70(8H、m)、1.94(1H、t、J＝2.5Hz)、2.19(2H、dt、J＝2.5、7Hz)、2.42(2H、t、J＝7.5Hz)、3.18(3H、s)、3.68(3H、s)工序2-2 在-10℃下，在上述化合物β(7g，0.035mol)的四氫呋喃溶液(100ml)中滴下正庚基鎂溴化物的1M二乙醚溶液(100mL，0.1mol)，在相同溫度下攪拌2小時30分鐘。在反應液中添加飽和氯化銨水溶液(30ml)，進一步添加水(100ml)，在室溫下攪拌10分鐘。用水(300ml)稀釋混合物，用醋酸乙酯(400ml)進行兩次萃取。將合在一起的有機層用飽和食鹽水(30ml)進行清洗，使用無水硫酸鈉進行脫水干燥，對溶劑進行減壓蒸餾。使用柱色譜儀(ワコ一ゲルC-300，250g，和光純藥)精制殘留物。通過己烷/醋酸乙酯(100∶1)洗脫部得到化合物γ(7.8g，93％)的無色油狀物質(zhì)。
化合物γ的物理化學性質(zhì)分子量236EI-MS 236(M+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6.5Hz)、1.23-1.63(18H、m)、1.94(1H、dt、J＝0.5、2.5Hz)、2.18(2H、dt、J＝2.5、7Hz)、2.36-2.42(4H、m)工序2-3 在苯(150mL)中添加上述化合物γ(7.8g，0.033mol)、乙二醇(18mL，0.33mol)、甲苯磺酸一水合物(125mg，0.66mmol)，裝入安裝有Dien Staak水分離器的回流冷卻管，加熱回流20小時。放冷后，用飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)、水(50ml)、飽和食鹽水(50ml)清洗反應液。用無水硫酸鈉對有機層進行脫水干燥，對溶劑進行減壓蒸餾。使用Mega Bond Elute硅膠(10g，バリアン公司)精制所得殘渣。通過己烷/醋酸乙酯(20∶1)洗脫部得到化合物α(8.9g，97％)的無色油狀物質(zhì)。
化合物α的物理化學性質(zhì)分子量280EI-MS 280(M+)1H-NMR(重氯仿中)的化學位移值δ0.88(3H、t、J＝6.5Hz)、1.23-1.63(22H、m)、1.93(1H、t、J＝2.5Hz)、2.18(2H、dt、J＝2.5、7Hz)、3.92(4H、s)以下的實施例15～19的化合物可以通過和實施例14所述的方法相同的方法制造。
實施例15 化合物22的物理化學性質(zhì)分子量635ESI(LC/MS正型)636(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7.0Hz)、1.17-1.36(14H、m)、1.45-1.60(4H、m)、1.90-2.02(2H、m)、2.41-2.45(4H、m)、2.53(1H、d、J＝16.0Hz)、2.87(1H、d、J＝16.0Hz)、2.92(1H、dd、J＝8.8、14.0Hz)、3.16-3.20(2H、m)、3.78(3H、s)、3.80(3H、s)、4.67(1H、dd、J＝4.8、9.2Hz)、5.47-5.58(2H、m)、6.75(1H、m)、6.82-6.84(2H、m)實施例16 化合物23的物理化學性質(zhì)分子量647ESI(LC/MS正型)648(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.80(3H、t、J＝7Hz)、0.98(3H、t、J＝7Hz)、1.19-1.62(20H、m)、1.91-2.03(2H、m)、2.38-2.46(4H、m)、2.57(1H、d、J＝8Hz)、2.84-2.96(2H、m)、3.11-3.23(2H、m)、3.92(2H、t、J＝7Hz)、4.63(1H、dd、J＝9、5Hz)、5.42-5.61(2H、m)、6.80(2H、d、J＝9Hz)、7.11(2H、d、J＝9Hz)實施例17
化合物24的物理化學性質(zhì)分子量633ESI(LC/MS正型)634(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.03(3H、t、J＝7Hz)、1.17-1.40(14H、m)、1.43-1.60(4H、m)、1.77(2H、q、J＝7Hz)、1.91-2.01(2H、m)、2.39-2.49(4H、m)、2.56(1H、d、J＝17Hz)、2.80-2.97(2H、m)、3.10-3.20(2H、m)、3.88(2H、t、J＝7Hz)、4.64(1H、dd、J＝9、5Hz)、5.42-5.61(2H、m)、6.80(2H、d、J＝9Hz)、7.12(2H、d、J＝9Hz)實施例18 化合物25的物理化學性質(zhì)分子量631ESI(LC/MS正型)632(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.89(3H、t、J＝7Hz)、1.14-1.38(14H、m)、1.42-1.58(4H、m)、1.89-2.01(2H、m)、2.37-2.46(4H、m)、2.57(1H、d、J＝16Hz)、2.82-2.96(2H、m)、3.11-3.22(2H、m)、4.45-4.52(2H、m)、4.63(1H、dd、J＝9、4Hz)、5.22(1H、dd、J＝10、1Hz)、5.37(1H、dd、J＝17、1Hz)、5.45-5.59(2H、m)、5.97-6.10(1H、m)、6.82(2H、d、J＝9Hz)、7.14(2H、d、J＝9Hz)實施例19 化合物26的物理化學性質(zhì)分子量605ESI(LC/MS正型)606(M+H+)1H-NMR(甲醇d-4中)的化學位移值δ0.90(3H、t、J＝7Hz)、1.18-1.40(14H、m)、1.42-1.58(4H、m)、1.91-2.01(2H、m)、2.38-2.47(4H、m)、2.53(1H、d、J＝15Hz)、2.80-2.97(2H、m)、3.11-3.21(2H、m)、3.75(3H、s)、4.64(1H、dd、J＝9、5Hz)、5.44-5.62(2H、m)、6.81(2H、d、J＝9Hz)、7.13(2H、d、J＝9Hz)復制子分析法為了定量HCV-RNA的復制數(shù)量，構(gòu)建了在HCV-RNA中作為報道基因而引入源自螢的蟲熒光素酶基因的結(jié)構(gòu)。按照Krieger等(J.Virol.754614)的方法，以在HCV基因的IRES(Internal Ribosome Entry Site)的正下方融合新霉素耐受基因的形式導入蟲熒光素酶基因。在生物體外合成該RNA之后，通過電穿孔法引入Huh7細胞，作為G418耐受性克隆而離析。
將螢的蟲熒光素酶HCV復制子細胞(3-1)懸浮在含有5％的牛胎兒血清(Hyclone cat.no.SH30071.03)的ダルベツコMEM(Gibco cat.no.10569-010)中，在96孔板上以5000個細胞/孔進行播種，在5％的CO2、37度下培養(yǎng)一夜。約20小時之后，在每個孔中添加已稀釋的化合物10微升，進而培養(yǎng)3天。準備2個體系的分析板，一個是白色的板，另一個是干凈的板(clear plate)，進行了分析。在培養(yǎng)結(jié)束后，白色的板用于Steady-Glo Luciferase Assay System(Promega cat.no.E2520)。即，在每個孔中放入100μl的試劑，用吸管混合3～4次，放置5分鐘之后用1450MicroBeta TRILUX(WALLAC)測量發(fā)光。將未添加細胞的值作為背景值，從所有的值中減去該值，將未添加藥物的值作為抑制％，計算出藥物的IC50(50％抑制濃度)。
細胞毒性試驗在細胞毒性的測量中使用Cell counting kit-8(Dojindo cat.no.CK40)。即把10μl的Cell counting kit-8添加到干凈的板上，在37度下保濕30～60分鐘。用96孔板引線以波長450nm、對照波長630nm測量吸光度。將未添加細胞的值作為背景值，從所有的值中減去該值，將未添加藥物的值作為抑制％，計算出藥物的CC50(50％細胞抑制濃度)。


工業(yè)上的可利用性本發(fā)明的化合物具有非常強的抗HCV活性和HCV的增殖抑制效果，而且具有輕微的活體內(nèi)細胞毒性，所以含有本發(fā)明的化合物的藥物組合物作為HCV預防/治療藥極其有用。
權(quán)利要求
1.一種用于預防或治療病毒感染疾病的藥物組合物，其特征在于，包含用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， 式中，A表示用-OX取代的苯基或3-吲哚基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)；R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，其中所述氨基可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；鍵E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，包含用下述通式(I’)表示的權(quán)利要求1中的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， 式中，A、B、D、鍵E、R1、R2和R3，如權(quán)利要求1中所示。
3.如權(quán)利要求1或者2所述的藥物組合物，其特征在于，包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，A是4位被-OX取代的苯基，X是氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基。
4.如權(quán)利要求1～3中任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，包含B為橋氧基、氫原子、羥基或＝N-OR6的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
5.如權(quán)利要求1～4中任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，包含R1、R2和R3相同或不同且為羥基、氨基或-OZ(這里，Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基)的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
6.如權(quán)利要求1或者2所述的藥物組合物，其特征在于，包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，A是4位被-OX取代的苯基，X是氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基，B是橋氧基、羥基或＝N-OR6，R1、R2和R3相同或不同且是羥基、或-OZ，這里，Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，X是碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基，B是橋氧基或羥基，R1、R2和R3都是羥基。
8.如權(quán)利要求1或者2所述的藥物組合物，其特征在于，包含A為3-吲哚基的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，包含式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其中，B是橋氧基或羥基，R1、R2和R3都是羥基。
10.如權(quán)利要求1或者2所述的藥物組合物，其特征在于，包含從下述的化合物中選擇的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，
11.如權(quán)利要求1或者2所述的藥物組合物，其特征在于，包含從下述的化合物中選擇的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， 或
12.如權(quán)利要求1或者2所述的藥物組合物，其特征在于，包含從下述的化合物中選擇的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， 或
13.如權(quán)利要求1～12中任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，病毒感染疾病是HCV感染疾病。
14.權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其特征在于，HCV感染疾病是C型肝炎。
15.用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， 式中，A表示用-OX取代的苯基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)；R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，其中所述氨基可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；鍵E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；不過下述情況除外，即A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基或氫原子，B是橋氧基，D是氫原子，E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是羥基的情況；以及A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基，B是橋氧基，D是氫原子，鍵E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是甲氧基的情況。
16.用下述通式(I)表示的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽， 式中，A表示用-OX取代的苯基；X表示氫原子、碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基；B表示氫原子、羥基、橋氧基、-N(R4)(R5)、＝N-OH、＝N-OR6、或鹵原子；R4和R5相同或不同，表示氫原子、碳原子數(shù)為1～6的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～6的直鏈狀或支鏈狀的炔基，或者R4和R5結(jié)合在一起，表示3～8員環(huán)；R6表示碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基(可以用氨基進行取代，其中所述氨基可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)；D表示氫原子或羥基；鍵E表示單鍵或雙鍵；R1、R2和R3相同或不同，表示氫原子、羥基、氨基(可以用碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基進行單或雙取代)、-OZ、碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；Z表示碳原子數(shù)為1～4的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～4的直鏈狀或支鏈狀的炔基；不過下述情況除外，即A是對位被-OX取代的苯基，X是氫原子的情況；以及A是對位被-OX取代的苯基，X是2-異戊烯基，B是橋氧基，D是氫原子，鍵E表示雙鍵，R1～R3中任一個都是羥基或甲氧基的情況。
17.如權(quán)利要求15或者16所述的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其特征在于，用下述通式(I’)表示， 式中，X、B、D、鍵E、R1、R2和R3，如權(quán)利要求15中所示。
18.如權(quán)利要求15～17中任一項所述的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其特征在于，X是碳原子數(shù)為1～8的直鏈狀或支鏈狀的烷基、碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的鏈烯基、或者碳原子數(shù)為2～8的直鏈狀或支鏈狀的炔基，B是羥基、橋氧基或＝N-OR6。
19.如權(quán)利要求15～18中任意一項所述的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其特征在于，用下述式表示， 或 。
20.如權(quán)利要求15～18中任意一項所述的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽，其特征在于，用下述式表示， 或 。
21.一種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求15～20中任意一項所述的式(I)的化合物或其藥物前體、或者制藥上允許的它們的鹽。
22.如權(quán)利要求21所述的藥物組合物，其特征在于，用于預防或治療病毒感染疾病。
23.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其特征在于，病毒感染疾病是HCV感染疾病。
24.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物，其特征在于，HCV感染疾病是C型肝炎。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于預防或治療病毒感染疾病的藥物組合物。本發(fā)明的化合物具有非常強的抗HCV活性和HCV的增殖抑制效果，而且具有輕微的活體內(nèi)細胞毒性，所以含有本發(fā)明的化合物的藥物組合物作為抗HCV預防/治療藥極其有用。
文檔編號A61K31/216GK1835744SQ20048000409
公開日2006年9月20日 申請日期2004年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月12日
發(fā)明者青木雅弘, 加藤秀之, 須藤正幸, 佃拓夫, 增渕宮子, 川崎健一 申請人:中外制藥株式會社