專利名稱：二肽基肽酶iv的新效應物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及由一個氨基酸及一個噻唑烷或吡咯烷基團構成的二肽化合物及與二肽化合物類似的化合物，及其鹽，下文中稱為二肽化合物，也涉及該化合物在治療哺乳動物葡萄糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥中的應用。
因此，本發(fā)明也涉及在作為如下的酶的活性降低效應物(底物，偽底物，抑制劑，結(jié)合蛋白，抗體等等)的二肽化合物的輔助下降低哺乳動物血糖濃度的簡便方法，所述的酶具有與二肽基肽酶IV相似或相同的酶活性。
背景技術：
DP IV或DP IV類似物(例如胞液性DP II有與DP IV幾乎相同的底物特異性)在血循環(huán)中具有活性，在血液循環(huán)中當脯氨酸或丙氨酸是N末端氨基酸相鄰殘基時，DP IV或DP IV類似物能夠高特異性地從生物學活性肽N末端分解出二肽。
葡萄糖依賴型促胰島多肽腸抑胃肽1-2(GIP1-42)及類胰高血糖素肽酰胺-1 7-36(GLP-17-36)，即通過胰腺刺激葡萄糖誘導型胰島素分泌的激素(也叫做腸降血糖素)，是DP IV的底物，因為后者在體外及體內(nèi)能從這些肽的N末端序列上分別分解出酪氨酸-丙氨酸及組氨酸-丙氨酸二肽。
降低在體內(nèi)分解這些底物的DP IV及類DP IV酶活性能夠在實驗室及哺乳動物病理條件下有效地抑制不希望的酶活性。例如，II型糖尿病(包括成人型糖尿病)是建立在胰島素分泌減少或特別是來自蛋白水解的異常腸降血糖素濃度所致的受體功能紊亂的基礎上。
依照現(xiàn)有技術，使用胰島素(例如從牛胰島分離或基因工程技術得到的物質(zhì))來治療高糖血癥及其相應的原因和后遺癥(包括糖尿病)。所有已知的方法包括比較先進的手段都需要大量的物質(zhì)，高額的費用并對患者的生活質(zhì)量有明顯的損害。傳統(tǒng)方法(從十九世紀三十年代開始使用的每日靜脈注射胰島素)治療該疾病的急性癥狀，但持續(xù)使用導致嚴重的血管變化(動脈硬化)及神經(jīng)損傷。
最近有建議皮下埋置植入物(胰島素以計量的方式被釋放，不需要日常的注射)及植入(移植)完好的朗罕氏細胞到功能損傷的胰腺或其它器官及組織。這種移植要求有高水平技術。而且，它們涉及對受體生物體的手術介入，這可造成危險，甚至，在細胞移植時需要抑制或干擾免疫系統(tǒng)。
作為DP IV及類DP IV酶活性抑制劑的丙氨酰吡咯烷及異亮氨酰噻唑烷的使用已從PCT/DE 97/00820知道，鹽酸異亮氨酰吡咯烷及異亮氨酰噻唑烷的使用已從DD 296 075中知道。異亮氨酰噻唑烷，其在后一現(xiàn)有技術中被使用，是天然的，也就是說L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷，在該兩篇說明書的優(yōu)先權日和申請日時，僅該型，即異亮氨酰噻唑烷天然的形式。
已明確知道這些化合物特別是L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷是DP IV及類DP IV酶活性的良好效應物，但這些化合物的使用對一些患者及疾病會造成問題。
例如糖尿病時，依賴于癥狀及嚴重程度，需要使用與現(xiàn)有已知化合物不同的效應物如已知為了以優(yōu)化方式進行疾病的治療，糖尿病患者的病情必須逐個穩(wěn)定。在一些時候，例如通過DP IV效應物降低活性應該是足夠的。也會出現(xiàn)高水平抑制劑活性及長期同樣藥物的使用所造成的副作用，特別在長期治療中。而且，為了增加體內(nèi)效應物的吸收率需改善某些轉(zhuǎn)運特性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是對例如哺乳動物葡萄糖糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥的治療提供一種新的(特別是降低活性的)效應物，及治療這些疾病的簡單方法。
本發(fā)明的目的通過提供由一種氨基酸及一種噻唑烷或吡咯烷基團形成的二肽化合物或二肽類似物及其鹽來達到。
將這些效應物給予哺乳動物，優(yōu)選口腔給予時，內(nèi)源性(或額外外源性給予)的促胰島肽GIP1-42及GLP-17-36(或GLP-17-37或它的類似物)被DP IV或類DP IV酶分解而減少，因此這些肽激素或其類似物的濃度的降低被減慢或延遲。因此，本發(fā)明是建立在血液循環(huán)中起作用的DP IV或類DP IV酶活性的降低對血糖水平會造成影響這個發(fā)現(xiàn)的基礎上。已發(fā)現(xiàn)1.DP IV或類DP IV酶活性的降低能提高葡萄糖刺激的或外來的腸降血糖素(或其類似物)的相對穩(wěn)定性，也就是說通過給予DPIV或類DP IV蛋白的效應物，使對血中腸降血糖素分解的控制成為可能；2.腸降血糖素(或其類似物)的生物學分解穩(wěn)定性的提高導致內(nèi)源性胰島素作用的變化；3.通過降低血液中DP IV或類DP IV酶活性而提高腸降血糖素的穩(wěn)定性導致葡萄糖誘導性胰島素作用的隨后變化，因此導致對由DP IV效應物控制的血糖水平的調(diào)節(jié)。
對本發(fā)明的這一目的特別合適的是二肽化合物，其氨基酸選自天然氨基酸，例如亮氨酸，纈氨酸，谷氨酰胺，脯氨酸，異亮氨酸，天冬酰胺及天冬氨酸。


圖1是毛細管區(qū)帶電泳(CE)分離異亮氨酰噻唑烷異構體的圖，其顯示L-蘇型-Ile-Thia*延胡索酸鹽、L-別-Ile-Thia*延胡索酸鹽、D-蘇型-Ile-Thia*延胡索酸鹽、D-別-Ile-Thia*延胡索酸鹽的1∶1∶1∶1的混合物的CE分離結(jié)果，方法和測量條件如下
用來自Beckmann公司的“P/ACE系統(tǒng)MDQ”進行CE研究

操作條件緩沖液20mM磷酸鹽，pH7.0，100mM β-羥基-丙基-環(huán)糊精毛細管50/60.2cm，25μm內(nèi)徑，用丙烯酰胺包被電壓10kV檢測在214nm用光電二極管陣列檢測器檢測溫度7℃。
圖2是Ile-Thia*延胡索酸鹽的CE分離的圖，其顯示L-蘇型-Ile-Thia*延胡索酸鹽與D-別-Ile-Thia*延胡索酸鹽的1∶1000的混合物的CE分離結(jié)果。
圖3顯示在口服給予各種H-Ile-Thia立體異構體(5μg/300g大鼠)后的血清DP IV活性。酶活性僅受L-別-Ile-Thia和L-蘇型-Ile-Thia影響。
圖4顯示各種氨酰噻唑烷對大鼠葡萄糖耐受的作用(用2g/300gWistar大鼠在0時間點進行口服葡萄糖耐受試驗，在口服葡萄糖刺激之前10分鐘給予DP IV抑制劑)。
具體實施例方式
在本發(fā)明中，通過口服給予高親和性低分子量酶抑制劑相對于在治療病理癥狀時廣泛使用的外科技術是比較經(jīng)濟的選擇。通過針對穩(wěn)定性，轉(zhuǎn)運及清除特性利用化學方法進行的設計，可調(diào)節(jié)作用模式及適應不同個體的特性。
如上所說，例如在糖尿病的長期治療的情況下，可能必須提供具有所述活性的效應物，其可符合患者的不同要求及治療他們的癥狀。本發(fā)明所說的二肽化合物顯示出在(二肽化合物)濃度為10微摩爾，特別在表1所示的條件下，二肽基肽酶IV或類DP IV酶活性至少降低10％，特別是至少降低40％。通常也要求降低至少60％或70％。優(yōu)選的效應物還可顯示最多降低活性20％或30％。而且，本發(fā)明化合物的特別是通過轉(zhuǎn)運Pep T1的轉(zhuǎn)運特性顯著改善。
特別優(yōu)選的二肽化合物是L-別-異亮氨酰噻唑烷及其鹽類。這些化合物與L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷相比，經(jīng)轉(zhuǎn)運肽Pep T1的轉(zhuǎn)運改善高達5倍，同時對于葡萄糖調(diào)節(jié)具有大致相同的作用程度。
在表1進一步給出優(yōu)選化合物。
本發(fā)明中二肽化合物的鹽類可為，例如，有機鹽如乙酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽或延胡索酸鹽，或無機酸鹽如磷酸鹽或硫酸鹽。最好使用延胡索酸鹽，其在對水解作用有高度穩(wěn)定性及比鹽酸鹽更不易溶解的同時，有很好的作用。從蓋侖制劑的觀點來說，這些特點也是有益的。
也優(yōu)選L-蘇型-異亮氨酰吡咯烷及其鹽類，特別是延胡索酸鹽，及L-別-異亮氨酰吡咯烷及其鹽類，特別是延胡索酸鹽。
二肽化合物的鹽類可以二肽(二肽類似物)組分與鹽類組分的摩爾比為1∶1或2∶1存在。例如，(異亮氨酰噻唑烷)2延胡索酸。
特別優(yōu)選的鹽類是L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷及L-別-異亮氨酰噻唑烷的延胡索酸鹽類。
本發(fā)明涉及二肽基肽酶IV(DP IV)或類DP IV酶活性的效應物及它們在降低哺乳動物血清中的血糖濃度到高血糖癥特征性血糖濃度以下中的應用。本發(fā)明特別涉及本發(fā)明所述的DP IV或類DP IV酶活性效應物在預防或減輕哺乳動物的病理代謝異常中的應用，所述病理代謝異常為例如，哺乳動物中的葡萄糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥。在進一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及降低哺乳動物血清中的血糖濃度到高血糖癥特征性血糖濃度以下的方法，其特征在于給予哺乳動物治療有效量的本發(fā)明所述的至少一種DP IV或類DP IV酶活性效應物。
在進一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，也就是說藥物，其包括至少一種本發(fā)明所述的化合物或其鹽類，任選地與一種或多種藥物可接受載體及/或溶劑混合。
藥物組合物可以是，例如，腸道外或腸道配方的形式并可含有合適載體或它們可以是包括適宜口服給藥相應載體的口服配方的形式。
此外，藥物組合物可包括一種或多種具有低血糖作用的活性成分，其可以是已知的活性成分。
本發(fā)明中DP IV或類DP IV酶活性的效應物可用來降低哺乳生物血清中血糖水平到高血糖血癥特征性血糖濃度下，或用來生產(chǎn)相應的藥物。
本發(fā)明中使用的DP IV或類DP IV酶效應物可作為用來降低哺乳動物中DP IV或類DP IV蛋白濃度的抑制劑，底物，偽底物，DP IV表達抑制劑，結(jié)合蛋白或這些酶蛋白的抗體或這些不同物質(zhì)組合的藥物可接受配方或配方混合物。本發(fā)明的效應物可以是DP IV抑制劑如二肽衍生物或二肽模擬物L-別-異亮氨酰噻唑烷及在表1中提到的效應物及其延胡索酸鹽。本發(fā)明的效應物能使患者及疾病的治療依照各自的情況來調(diào)整，特別是可以控制個體中發(fā)生的不耐受，過敏及副作用。
化合物也顯示出不同的時間有效性。醫(yī)生根據(jù)患者的不同情況能采取不同的方法一方面，他能精確地設置作用的起始速度，另一方面，可控制作用的持續(xù)時間，特別是作用的強度。
本發(fā)明的方法代表著降低哺乳動物血清中已升高的血糖濃度的一種新的方法。其簡單，可經(jīng)濟開發(fā)及適應于治療中使用，特別對建立在高于平均血糖閾值基礎上的疾病，適用于哺乳動物，更適用于人類藥物。
效應物可以通過藥學制劑的形式被給藥，該藥學制劑包括與現(xiàn)有技術已知的傳統(tǒng)載體相結(jié)合的活性成分。例如，它們可非腸道給藥(如，靜脈注射，以生理鹽水的形式)或腸道給藥(如，口服，與傳統(tǒng)的載體如葡萄糖相結(jié)合)。
為了使血糖值正?；勒账鼈兊膬?nèi)源穩(wěn)定性及生物利用率，效應物需要每天一次或多次給藥。例如，人用劑量可在每天0.01毫克到30.0毫克的范圍內(nèi)，優(yōu)選范圍在每千克體重0.01毫克到10毫克的效應物。
已發(fā)現(xiàn)哺乳動物的血中二肽基肽酶IV或類DP IV酶效應物給藥的直接結(jié)果是，由于其活性的暫時降低，內(nèi)源的(或額外給予的外源的)促胰島肽腸抑胃肽GIP1-42及胰高血糖素樣肽酰胺-1 7-26(GLP-17-36)(或GLP-17-37或它的類似物)被DP IV或類DP IV酶分解而降低，因此這些肽激素或其類似物的濃度的降低被減慢或延遲。通過DP IV效應物的作用，(內(nèi)源性或外源性)腸降血糖素或其類似物的穩(wěn)定性增加，其結(jié)果是由于對胰腺內(nèi)朗罕氏細胞的腸降血糖素受體的促胰島刺激來說前者的量增加，改變了身體本身胰島素的有效性，其能刺激被治療機體碳水化合物的代謝。
結(jié)果，被治療機體血清中的血糖水平降低到高血糖血癥特征性血糖濃度以下，因此可預防或減輕代謝異常，如葡萄糖耐受不良，糖尿，高糖血癥及嚴重的代謝酸中毒及糖尿病，它們是長期血液中血糖升高的臨床癥狀。
在現(xiàn)有技術所知的口服有效抗糖尿病藥中，如此有效的低分子量物質(zhì)至今為止是未知的(除了雙胍二甲雙胍分子量為130)。氨?；邕蛲榈姆肿恿吭?46(甘氨酰噻唑烷)，203(異亮氨酰噻唑烷)到275(色氨酰噻唑烷)的范圍內(nèi)變化。相比之下，磺酰脲(優(yōu)降糖494)，糖類(阿卡波糖630)及噻唑烷二酮(pioglitazon586)的分子量在500到700Da內(nèi)變化。體內(nèi)氨酰噻唑烷被氨基肽酶水解及酸水解形成內(nèi)源性物質(zhì)，例如氨基酸及半胱胺，因此本發(fā)明化合物作為口服抗糖尿病藥的使用豐富了藥品。
在小鼠及大鼠中，經(jīng)口給予本發(fā)明中使用的化合物可比平均水平更好地治療實驗誘導的高糖血癥(表2及3)。在對小鼠及大鼠所作的三周毒理學實驗中，給予有效劑量的500到1000倍不能明顯出現(xiàn)病理變化。
表1顯示了本發(fā)明化合物對DP IV的有益作用。
表1在30℃，pH7.6及離子強度為0.125的條件下，不同效應物對于二肽基肽酶IV催化0.4毫摩爾底物H-Gly-Pro-pNA水解反應的作用

已知氨酰吡咯烷及氨酰噻唑烷可被小腸粘膜細胞，血清和肝細胞上的脯氨酸氨基肽酶及氨酰基脯氨酸二肽酶所分解，且噻唑烷環(huán)在酸存在時(如胃酸)趨于打開，形成相應的半胱胺衍生物(見US 458407)。因此，當口服給藥時，驚奇地發(fā)現(xiàn)活性成分具有劑量依賴型有效性?？稍谙卤碇锌吹皆趯】档腤istar大鼠經(jīng)口給予L-別-異亮氨酸-噻唑烷后，L-別-異亮氨酸-噻唑烷對血清DP IV活性的劑量依賴作用。
表2經(jīng)口給予及依賴于L-別-異亮氨酸-噻唑烷的劑量后在30℃，pH7.6及0.125的離子強度的條件下，血清中的DP IV對于0.4毫摩爾的底物H-甘氨酸-脯氨酸-pNA的殘余活性，在給予抑制劑30分鐘后檢測

在糖尿病動物模型中，經(jīng)口給予本發(fā)明的活性成分L-別-異亮氨酸-噻唑烷并同步口服糖刺激物后，可達到驚奇也是希望看到的結(jié)果，就是其具有降糖作用(表3)。
為了加強各種抗糖尿病藥的降血糖作用，通常是混合使用不同的口服有效抗糖尿病藥。雖然本發(fā)明中效應物的抗糖尿病作用是不依賴其它已知口服抗糖尿病藥，為了達到理想的正常血糖效果，本發(fā)明的活性成分類似地可以合適制劑的形式可適用于組合治療。
因此，本發(fā)明中所使用的化合物可制成傳統(tǒng)配方，例如，片劑，膠囊，糖丸，藥丸，栓劑，小粒，氣霧劑，糖漿，液體，固體及乳劑及懸浮液和溶液，使用惰性，非毒性，藥物可接受的載體及添加劑或溶劑。在這樣的配方中，每一例子中藥物學有效化合物優(yōu)選以總混合物的約0.1到80％(重量)、優(yōu)選1-50％(重量)的濃度存在，也就是說足夠產(chǎn)生指定范圍的劑量的量。
表3對同步進行糖耐受試驗不同的動物模型大鼠經(jīng)口給予20微摩爾的L-別-異亮氨酸-噻唑烷后，在60分鐘期間循環(huán)血糖的降低程度

胃腸道粘膜對本發(fā)明中所使用化合物的良好吸收使得能夠使用大量蓋侖制劑這些物質(zhì)作為藥物能以糖丸，膠囊，可咬型膠囊，片劑，滴劑，糖漿及栓劑和鼻腔噴霧的形式被使用。
通過使用溶劑及/或載體，任選地使用乳化劑及/或分散劑來擴散活性成分生產(chǎn)配方，任選地，例如水作為稀釋劑時有機溶劑可作為助溶劑。
下列的輔助成分可提及水，非毒性有機溶劑，如石蠟(礦物油部分)，植物油(如油菜籽油，花生油，芝麻油)，醇類(如乙醇，甘油)，乙二醇類(如丙二醇，聚乙二醇)；固體載體，例如粉碎的天然礦物質(zhì)(高度分散的硅酸，硅酸鹽)，糖類(如未加工糖，乳糖，葡萄糖)；乳化劑，如非離子及陰離子乳化劑(如聚氧乙烯脂肪酸酯，聚氧乙烯脂肪醇醚，烷基磺酸鹽及芳基磺酸鹽)，分散劑(如，木質(zhì)素，亞硫酸廢液，甲基纖維素，淀粉及聚乙烯吡咯酮)及助流劑(如硬脂酸鎂，滑石，硬脂酸及十二烷基硫酸鈉)及任選地調(diào)味劑。
傳統(tǒng)的給藥方式是有效的，優(yōu)選腸道或腸道外給藥，特別是經(jīng)口給藥。在腸道給藥時，除了包括上述的載體，片劑也可包括其它添加劑，如檸檬酸鈉，碳酸鈣及磷酸鈣，也可加入各種輔助成分，如淀粉，特別是土豆淀粉，明膠等。為制成片劑可使用助流劑，如硬脂酸鎂，十二烷基硫酸鈉，滑石。在為口服使用的水性懸浮液及/或酏劑的情況下，為了各種口味除了上述所提及的添加劑，可在有效成分中加入矯味劑或色素。
對于腸道外給藥，可使用活性成分的溶液，其使用了合適的液態(tài)載體物質(zhì)。在靜脈給藥時，已證明給藥劑量大約在0.01到2.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)，特別是在0.01到1.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)效果較好，在腸道給藥時，給藥劑量大約在0.01到2.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)，特別是在0.01到1.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)效果較好。
不過在一些時候，根據(jù)試驗動物或患者的體重或給藥途徑，并且以動物的種類及其對藥物的個體或給藥間隔的不同反應為基礎，必須以不同于指示量給藥。一些時候例如使用少于上面所提及的最小劑量就夠了，而另一些時候需使用超過上述所提及劑量的上限。當使用較大劑量時，最好一天分成幾份使用。對于人類也是上述的劑量范圍，同時上面的建議也適用。
藥物配方的實施例1.每粒膠囊中含有100毫克的L-別-異亮氨酰噻唑烷對于約10,000粒膠囊，需準備下列成分的溶液L-別-異亮氨酰噻唑烷鹽酸鹽1.0千克甘油 0.5千克聚乙二醇 3.0千克水0.5千克5.0千克溶液以已知方式放入軟明膠膠囊中，膠囊適于咀嚼或吞咽。
2.含有100毫克L-別-異亮氨酰噻唑烷的片劑/糖衣片劑或糖丸下面是關于制備100,000個片劑所需的量L-別-異亮氨酰噻唑烷鹽酸鹽，細碎10.0千克葡萄糖 4.35千克乳糖 4.35千克淀粉 4.50千克纖維素，細碎 4.50千克上述成分混合后與下面溶液相混，該溶液由以下來制備聚乙烯吡咯烷酮 2.0千克多乙氧基醚 0.1千克及水 大約5.0千克并用已知的方法將潮濕塊磨碎成粒狀，隨后加入0.2千克的硬脂酸鎂，干燥。最后得到30.0千克的片劑混合物，將其制成圓頂樣每片300毫克的片劑。該片劑能用已知的方法包衣或糖衣化。
下面是優(yōu)選化合物的技術數(shù)據(jù)。
關于Ile-Thia*延胡索酸鹽(異構體)及其它鹽類的實驗

IT*F＝異亮氨酰噻唑烷延胡索酸鹽核磁共振及高效液相色譜數(shù)據(jù)證實了實驗物質(zhì)的性質(zhì)。
測定物質(zhì)Ki的測量條件酶在25毫摩爾Tris pH7.6，30％硫酸銨，0.5毫摩爾EDTA，0.5毫摩爾DTE中的DP IV豬腎，0.75毫克/毫升，18單位/毫升(GPpNA)儲存溶液用測量緩沖液稀釋成1∶250緩沖液40毫摩爾HEPES pH7.6，I＝0.125(KCl)底物GPpNA*HCl儲存溶液2.1毫摩爾測量裝置Perkin-Elmer生物分析讀數(shù)儀，HTS 7000Plus，T＝30℃λ＝450納米測量混合物100微升 緩沖液100微升 底物(三種不同濃度 0.8毫摩爾-0.2毫摩爾)50微升水/抑制劑(七種不同濃度，2.1微摩爾-32.8納摩爾)10微升 酶緩沖液，水/抑制劑及酶預熱到30℃，反應在加入如上一樣預熱的底物后開始。
檢測進行四次。
測量時間為10分鐘。
熔點測定使用來自Leica Aktiengesellschaft的Kofler加熱平臺顯微鏡或DSC儀器(Heumann-Pharma)來測定熔點，數(shù)值未校正。
旋光性用來自Perkin-Elmer公司的“Polarimeter 341”或更先進的設備記錄在不同波長條件下的旋轉(zhuǎn)值。
質(zhì)譜測量條件在購自PE Sciex公司的“API165”或“API 365”設備上利用電噴離子化(ESI)來記錄質(zhì)譜。
這個試驗中濃度大約為c＝10微克/毫升，物質(zhì)被MeOH/H2O50∶50，0.1％HCO2H吸收，使用電噴泵(20微升/分鐘)灌輸。在陽性狀態(tài)[M+H]+，ESI電壓U＝5600V的條件下測量。
鹽類有以下數(shù)據(jù)

檢測Ile-Thia的溶解度Ile-Thia*延胡索酸鹽稱量為10.55毫克相應于0.02毫摩爾(520.72克/摩爾)加入100微升H2O蒸餾100微升不溶，目視對表面不濕潤從200微升開始溶解一直到400微升才完全溶解2.63％
因此說這種鹽很少潮濕并不易分解Ile-Thia*琥珀酸鹽稱量為16.6毫克相應于0.031毫摩爾(522.73克/摩爾)加入16微升H2O蒸餾16微升不溶，目視“吸收“水分從66微升到1.5毫升可觀察到物質(zhì)不完全溶解Ile-Thia*酒石酸鹽稱量為17.3毫克相應于0.049毫摩爾(352.41克/摩爾)加入100微升H2O蒸餾100微升完全溶解17.3％Ile-Thia*磷酸鹽稱量為15.5毫克相應于0.051毫摩爾(300.32克/摩爾)加入100微升H2O蒸餾可觀察到100微升微溶不斷每次加入100微升水到400微升時完全溶解3.87％Ile-Thia*鹽酸鹽稱量為16.1毫克相應于0.067毫摩爾(238.77克/摩爾)
加入100微升H2O蒸餾100微升完全溶解16.1％Ile-Thia*鹽類的概括分析Boc保護氨基酸Boc-Ile-OH放入乙酸乙酯中并將混合物冷卻到大約零下5℃。逐滴加入N-甲基嗎啉，在恒溫下逐滴加入氯化新戊酸(試驗室規(guī)模)或新己酰氯(中試規(guī)模)。為了活化，需將反應物攪拌幾分鐘。隨后依次逐滴加入N-甲基嗎啉(試驗室規(guī)模)及噻唑烷鹽酸鹽(試驗室規(guī)模)，加入噻唑烷(中試規(guī)模)。實驗室中的加工是用傳統(tǒng)方法使用鹽溶液，中試時混合物用氫氧化鈉及醋酸溶液來純化。
使用鹽酸/二惡烷(試驗室規(guī)模)或硫酸(中試規(guī)模)來除去Boc保護基團。
在實驗室中從乙醇/乙醚中結(jié)晶出鹽酸鹽。
在中試中，通過加入氫氧化鈉/氨來制備游離胺。延胡索酸溶解到熱乙醇中，逐滴加入游離胺，出現(xiàn)(Ile-Thia)2延胡索酸鹽的沉淀。
電泳分析異構體及對映體。
權利要求
1.組合物，其包含二肽基肽酶IV或二肽基肽酶IV類似酶活性的效應物和進一步的抗糖尿病藥，或其藥學可接受的鹽。
2.藥物組合物，其包含二肽基肽酶IV或二肽基肽酶IV類似酶活性的效應物和進一步的抗糖尿病藥或其藥學可接受的鹽，以及一種或多種藥學可接受的載體和/或溶劑。
3.前述權利要求之任一項的組合物或藥物組合物，其中所述效應物選自底物、偽底物、抑制劑、結(jié)合蛋白和抗體。
4.前述權利要求之任一項的組合物或藥物組合物，其中該效應物是二肽模擬物。
5.前述權利要求之任一項的組合物或藥物組合物，其中所述效應物是二肽模擬物，其包含氨基酸和吡咯烷或噻唑烷基團，或其藥學可接受的鹽。
6.權利要求4或5的組合物或藥物組合物，其中所述二肽模擬物選自L-蘇型-異亮氨酰吡咯烷、L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷、L-別-異亮氨酰噻唑烷、L-別-異亮氨酰吡咯烷、谷氨酰吡咯烷、谷氨酰噻唑烷、丙氨酰噻唑烷、丙氨酰吡咯烷、纈氨酰噻唑烷及纈氨酰吡咯烷，以及它們的藥學可接受的鹽。
7.前述權利要求之任一項的組合物或藥物組合物，其中所述進一步的抗糖尿病藥選自雙胍、磺酰脲、糖類及噻唑烷二酮。
8.權利要求7的組合物或藥物組合物，其中所述雙胍為二甲雙胍。
9.權利要求7的組合物或藥物組合物，其中所述磺酰脲為優(yōu)降糖。
10.權利要求7的組合物或藥物組合物，其中所述糖為阿卡波糖。
11.權利要求7所述的組合物或藥物組合物，其中所述噻唑烷二酮為pioglitazon。
12.前述權利要求之任一項的組合物或藥物組合物在制備治療哺乳動物代謝疾病的藥物中的應用。
13.根據(jù)權利要求12的應用，其中所述代謝疾病選自葡萄糖耐受不良、糖尿、高脂血癥、代謝性酸中毒、糖尿病性神經(jīng)病和腎病、糖尿病及糖尿病后遺癥。
14.權利要求12或13的應用，其中所述治療導致至少一種內(nèi)源存在或外源引入的GIP1-42、GLP-17-36、GLP-17-37或它們的類似物的穩(wěn)定性提高。
15.權利要求12-14之任一項的應用，其中所述治療導致腸降血糖素水平升高并刺激朗格漢斯細胞上的腸降血糖素受體。
16.權利要求12-15之任一項的應用，其中所述治療導致朗格漢斯細胞的有效性增加。
17.根據(jù)權利要求12-16之任一項的應用，其中所述治療方法導致所治療的哺乳動物的糖代謝刺激增加。
18.根據(jù)權利要求12-17之任一項的應用，其中所述治療導致接受治療的哺乳動物血清中血糖水平降低到所述動物中高血糖癥特征性葡萄糖濃度以下。
19.權利要求12-18之任一項的應用，其中將所述藥物口服給予。
全文摘要
本發(fā)明涉及組合物，其包含二肽基肽酶IV或二肽基肽酶IV類似酶活性的效應物和進一步的抗糖尿病藥或其藥學可接受的鹽。本發(fā)明還涉及這種組合物在制備治療哺乳動物代謝疾病的藥物中的應用。
文檔編號A61K31/425GK1636593SQ20041008330
公開日2005年7月13日 申請日期1999年5月28日 優(yōu)先權日1998年5月28日
發(fā)明者漢斯-烏爾里?！さ履绿? 康拉德·格隆德, 達格瑪·施倫齊希, 蘇珊·克魯貝爾 申請人:普羅西迪恩有限公司