專利名稱：通過給予生長激素釋放化合物或其拮抗劑來治療腫瘤的制作方法
本申請是申請日為1999年11月11日、申請?zhí)枮?9813361.2、發(fā)明名稱為“通過給予生長激素釋放化合物或其拮抗劑來治療腫瘤”的中國發(fā)明專利申請的分案申請。
本發(fā)明涉及通過給予生長激素釋放肽或其拮抗劑來降低腫瘤細胞增殖的方法。
生長激素(GH)的分泌由兩類下丘腦肽調(diào)節(jié)GH-釋放激素(GHRH)，其對生長激素的釋放具有刺激作用，以及生長激素釋放抑制因子，其對生長激素的釋放具有抑制作用。在過去的幾年中，幾種研究證明GH的分泌還可受到合成低聚肽(又稱GH-釋放肽(GHRP))的刺激，例如海噻瑞林(Hexarelin)及各種海噻瑞林的類似物(Ghigo等人，EuropeanJournal of Endocrinology，136，445-460，1997)。這些化合物通過與GHRH明顯不同的機理發(fā)揮作用(C.Y.Bowers，“異種生物生長激素促分泌素”，Eds.B.Bercu和R.F.Walker，pg.9-28，Springer-Verlag，NewYork 1996)并且與位于下丘腦的特異性受體及垂體腺體具有相互作用((a)G.Muccioli等人，Journal of Endocrinology，157，99-106，1998；(b)G.Muccioli，“GHRP受體在人體中的組織分布”，Abstracts IVEuropean Congress of Endocrinology，Sevilla，Spain，1998)。最近證明GHRP受體不僅存在于下丘腦-垂體系統(tǒng)中，而且甚至存在于各種通常與GH釋放無關(guān)的人類組織中(G.Muccioli等人，參見上文(a))。
在下列出版物中描述了GHRPs及其拮抗劑C.Y.Bowers，Supra，R.Deghenghi，“生長激素釋放肽”，Ibidem，1996，pg.85-102；R.Deghenghi等人，“作為生長激素強釋放劑的小分子肽”，J.Ped.End.Metab.，8，pg.311-313，1996；R.Deghenghi，“作為生長激素促分泌素的不可透過肽類的發(fā)展”，Acta Paeditr.Suppl.，423，pg.85-87，1997；K.Veeraraganavan等人，“與豬前垂體和下丘腦膜有關(guān)的生長激素釋放肽(GHRP)”，Life Sci.，50，pg.1149-1155，1992；及T.C.Somers等人，“低分子量的仿肽生長激素促分泌素”，WO 96/15148(1996年5月23日)。
本發(fā)明涉及治療哺乳動物體內(nèi)腫瘤的方法，所述的方法包括給予需要治療的哺乳動物治療有效劑量的生長激素釋放肽(GHRP)或其拮抗劑。另外根據(jù)本發(fā)明，所用的化合物可以定義為生長激素促分泌素或其拮抗劑。所用化合物的量可有效地降低或抑制哺乳動物體內(nèi)腫瘤發(fā)生細胞的增殖。在另一個實施方案中，這些化合物被賦予了如下特征即它們從哺乳動物含腫瘤的組織中取代了放射活性標(biāo)記物125I-Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2(125I-Tyr-Ala-海噻瑞林)。
這里所公開的化合物顯示了與腫瘤發(fā)生組織的結(jié)合，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它們能在給藥后象特異性的受體一樣發(fā)揮作用，從而使得腫瘤發(fā)生細胞的數(shù)量有所降低。優(yōu)選地，所治療的腫瘤為肺腫瘤、乳腺腫瘤、甲狀腺腫瘤或胰腺腫瘤。
上述提到的化合物包括一些已知的化合物(參見上文)，但其它用于本發(fā)明的化合物是以前未公開的，包括螺旋內(nèi)酰胺、雙環(huán)或三環(huán)仿肽單位。本發(fā)明所用所有化合物一個共同的特征是至少存在一個賴氨酸單位。
在此描述中，使用了下列縮寫D為右旋對映體，GH為生長激素，Mrp為2-甲基-Trp，IMA為咪唑基乙?；珿AB為γ-氨基丁?；琁NIP為isopecotinyl，AIB為氨基異丁酰基，Nal為β-萘基丙氨酸，TXM為tranexamyl，即4-(氨基甲基)-環(huán)己基羰基，D-HNH為D-1，2，3，4，5，6-六氫-降哈爾滿(norharman)-3-羧酸酯(鹽)，HAIC為(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氫-氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-4-酮-2-羧酸酯(鹽)，ATAB為2-R-(2β，5β，8β)-8-氨基-7-氧-4-硫雜-1-氮雜-雙環(huán)[3.4.0]壬烷-2-羧酸酯(鹽)，并且Ala、Lys、Phe、Trp、His、Thr、Cys、Thr、Leu和Ile分別代表丙氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。
在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，所給予的有用化合物具有下列通式IAA1-AA2-AA3-AA4-Lys-R(I)其中
AA1為IMA，GAB，INIP，TXM，AIB，HIs-D-Trp-，His-D-Mrp，Thr-D-Trp，Thr-D-Mrp，D-Thr-D-Trp，D-Thr-D-Mrp，D-Ala-D-Nal，IMA-D-Trp，IMA-D-Mrp，D-Thr-His-D-Trp，D-Thr-His-D-Mrp，Cys-Tyr-GAB，Ala-His-Trp，Ala-His-D-Mrp，Tyr-Ala-His-D-Trp，Tyr-Ala-His-D-Mrp，D-Ala-D-Trp，或D-Ala-D-Mrp；AA2為Ala，D-Nal，D-Lys，D-Mrp，或Trp；AA3為D-Trp，D-Nal，D-Trp，Mrp，D-Mrp、Phe，或D-Phe；AA4為D-Trp，Mrp，D-Mrp，Phe，或D-Phe；和R為-NH2，Thr-NH2，或D-Thr-NH2。
含有D-Mrp單位的化合物是優(yōu)選的。
在另一個實施方案中，有用的化合物包括那些在U.S.權(quán)利申請No.09/089,954(1998年6月3日申請)中所述的化合物。這些化合物是具有通式II的肽類化合物A-B-D-Mrp-C-D(II)其中A為H或Tyr；B為具通式III的螺內(nèi)酰胺 其中的R1為H或Tyr，R2為任意一個天然存在的氨基酸側(cè)鏈，*處的構(gòu)型為(R)，(S)或其混合物；式IV三環(huán)化合物
其中的R3為H或Tyr，*處的構(gòu)型為(R)，(S)或其混合物；式V雙環(huán)化合物 其中的R4為H或Tyr，*處的構(gòu)型為(R)，(S)或其混合物；D-Mrp為右旋-2-甲基-Trp；C為Trp-Phe-Lys，D-Trp-Phe-Lys，Mrp-Phe-Lys，D-Mrp-Phe-Lys，Trp-Lys，D-Trp-Lys，Mrp-Lys，D-Mrp-Lys，Ala-Trp-D-Phe-Lys，Ala-Mrp-D-Phe-Lys，Ala-D-Mrp-D-Phe-Lys，D-Lys-Trp-D-Phe-Lys，D-Lys-Mrp-D-Phe-Lys，D-Lys-D-Mrp-D-Phe-Lys，或式VI三環(huán)化合物 其中的R5為H或SO2Me，并且*處的構(gòu)型為(R)，(S)或其混合物；且E為Lys-NH2或-NH2，條件是C為前面定義的三環(huán)化合物VI時，E為Lys-NH2。
根據(jù)本發(fā)明，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，GH釋放化合物及不釋放GH的化合物均對腫瘤的治療有作用。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的可治療腫瘤包括肺腫瘤、乳腺腫瘤、甲狀腺腫瘤或胰腺腫瘤。
特別優(yōu)選的具式I的GH釋放化合物包括以下化合物His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，His-D-Trp-Ala-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，D-Thr-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，Thr-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，IMA-D-Mrp-D-Trp-Phe-Lys-NH2，IMA-D-Mrp-D-Nal-Phe-Lys-NH2，GAB-D-Mrp-D-Mrp-D-Mrp-Lys-NH2，D-Ala-D-Nal-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，INIP-D-Nal-D-Nal-Phe-Lys-NH2，INIP-D-Nal-D-Trp-Phe-Lys-NH2，IMA-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，INIP-D-Mrp-D-Trp-Phe-Lys-NH2，INIP-D-Mrp-D-Nal-Phe-Lys-NH2，GAB-D-Mrp-D-Trp-Phe-Lys-NH2，TXM-D-Mrp-D-Trp-Phe-Lys-NH2，GAB-D-Mrp-Mrp-Phe-Lys-NH2，Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-Thr-NH2，His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，D-Thr-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，GAB-D-Mrp-D-Nal-Phe-Lys-NH2，GAB-D-Mrp-D-Mrp-Mrp-Lys-NH2，Cys-Tyr-GAB-D-Mrp-D-Mrp-Mrp-Lys-NH2，Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，和D-Ala-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，優(yōu)選的具通式I的不釋效GH的化合物包括
His-D-Trp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，His-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，His-Ala-D-Trp-Lys-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，His-D-Mrp-D-Lys-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，His-Ala-D-Trp-Ala-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，和His-D-Trp-Ala-Mrp-D-Phe-Lys-NH2。
優(yōu)選的具通式II的化合物包括[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-Trp-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-Mrp-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，Tyr-[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Ile)]-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-HNH-(SO2CH3)-Phe-Lys-NH2，HAIC-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，和ATAB-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，其中的S，S-螺(Pro-Leu)和S，S-螺(Pro-Ile)相應(yīng)地為4-甲基-2S[6’-氧-(5’-S)1’，7’-二氮雜螺[4，4]壬烷-7’-基-]戊酸酯(鹽)和3-甲基-2S[6’-氧-(5’-S)1’，7’-二氮雜螺[4，4]壬烷-7’-基-]戊酸酯(鹽)。
這些單位具有下式 其中的R1為H且R2為Leu或Ile的側(cè)鏈(參見P.Ward等人，J.Med.Chem.，33，1848(1990)。同樣，對具有下式的相應(yīng)的四氫降哈爾滿-3-羧酸進行常規(guī)的氫化反應(yīng)，可以得到三環(huán)化合物HNH
根據(jù)式III，IV，V和VI，這些單位構(gòu)成仿肽單位，它們的優(yōu)勢在于它們鎖于β-構(gòu)型，從而可以模仿天然氨基酸。
如有所需，還可以使用這些化合物制藥上可接受的鹽類。這些鹽類包括有機或無機加成鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、苯甲酸鹽、蘋果酸鹽、富馬酸鹽、硬脂酸鹽或雙羥萘酸鹽。
根據(jù)肽化學(xué)中常用的方法可以方便地合成所有的化合物，例如通過固相肽合成方法(參見E.Atherton和R.C.Sheppard在1989年由牛津大學(xué)出版社IRL出版的“固相肽合成”中的描述)，或通過溶液相合成方法(參見J.Jones在“肽類的化學(xué)合成”，Clarendon出版社，牛津1994中的描述)，或通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的固相-和液相方法的組合。
固相合成從化合物的C末端開始。將需要的保護α-氨基酸連接到氯代甲基化的樹脂、羥甲基化樹脂、二苯甲基胺樹脂(BHA)或?qū)?甲基-二苯甲基樹脂(p-Me-BHA)上，可以制備得到合適的起始物質(zhì)。例如，市售的氯代甲基化的樹脂來自BioRad Laboratories，Richmond，California的Biobeads SX1。羥甲基化樹脂的制備可以按照Bodansky等人在Chem.Ind.(London)，38，15997(1966)中所述的方法進行。BHA樹脂的制備方法可以參見Pietta和Marshall，在Chem.Comm.，650(1970)中的描述，并可以在Peninsula Laboratories Inc.，Belmont，California購得。
在起始連接之后，通過不同的酸試劑除去α-氨基酸的保護基團，例如室溫下溶于有機溶劑中的三氟乙酸(TFA)或鹽酸(HCl)。除去α-氨基酸的保護基團之后，可以按照需要的順序一步一步地使剩余的保護天然氨基酸或相應(yīng)于通式HI、IV、V和VI單位的羧酸(其本身即構(gòu)成氨基酸)進行偶聯(lián)。通常使用約3倍過量的合適羧基活化基團(例如溶解于二氯甲烷(CH2Cl2)、二甲基甲酰胺(DMF)或其混合物中的二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)或二異丙基碳化二亞胺(DIC))使每一個保護氨基酸進行反應(yīng)。在完成所需的氨基酸序列之后，通過用氟化氫(HF)等試劑進行處理，使需要的化合物從支持樹脂上斷裂下來，上述試劑不僅使化合物從樹脂上斷裂下來，而且使外側(cè)鏈的保護基團斷裂下來。當(dāng)采用氯代甲基化的樹脂時，采用HF的處理導(dǎo)致了具有終端酸基團化合物的形成，并且該化合物以游離形式存在。當(dāng)采用BHA或p-Me-BHA樹脂時，采用HF的處理直接導(dǎo)致了具有終端酰胺基團化合物的形成，并且該化合物以游離形式存在。
可用來治療哺乳動物(包括人類)腫瘤的藥物包括本發(fā)明化合物及其制藥上可接受的鹽類，或本發(fā)明化合物及其制藥上可接受鹽類任意地與載體、賦形劑、媒介物、稀釋劑、基質(zhì)或緩釋包衣相混合物的組合物。這些載體、賦形劑、媒介物、稀釋劑的實例可在Remington’sPharmaceutical Sciences，18th，A.R.Gennaro，Ed.，Mack PublishingCompany，Easton，PA 1990中找到。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可將本發(fā)明中的任意化合物配成適合于經(jīng)過非腸道、頰、直腸、陰道、皮透、肺或口服等途徑給藥的藥物。
根據(jù)需要的釋放速率，可以選擇含有化合物藥物的配方類型，例如，如果需要化合物迅速釋放，可以采取鼻腔或靜脈途徑。
可以治療有效劑量給予哺乳動物(包括人類)這些藥物，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地決定所述的治療有效劑量，并需要根據(jù)物種、年齡、性別、治療患者或?qū)ο蟮捏w重以及給藥途徑對該劑量進行適當(dāng)?shù)淖兓?。例如對于人類而言，?dāng)采取靜脈給藥時，優(yōu)選的劑量下降至約1-25μg總化合物/Kg體重。當(dāng)采取口服給藥時，通常需要較高的劑量。例如在人類進行口服給藥時，典型的劑量水平約為30-1000μg總化合物/Kg體重。根據(jù)上述公開，可以根據(jù)經(jīng)驗決定藥物的準(zhǔn)確劑量。
實施例下列實施例將說明用于治療本發(fā)明腫瘤的最優(yōu)選化合物的效力。
1.方法和材料
a)化學(xué)品海噻瑞林(His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2)，Ala-海噻瑞林(Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2)，Tyr-Ala-海噻瑞林(Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2)，MK0677(N-[1(R)([1，2-二氫-1-甲磺酰基螺-(3H-吲哚，3，4’-哌啶)-1’基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-甲基丙酰胺-甲磺酸酯(鹽))，EP80317(HAIC-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2)和D-(Lys)3-GHRP6(His-D-Trp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2)由Europeptides(Argenteuil，法國)提供。人類GHRH(GHRH 1-44)和生長激素釋放抑制因子(生長激素釋放抑制因子1-14)可從Bachem(Bubendorf，Switzerland)購買。人類重組表皮生長因子(EGF)以及所有的組織培養(yǎng)試劑可從SigmaChemical Co.(St.Louis，MO，USA)購買。3H-胸腺嘧啶可從Pharmacia-Amersham Italia(Milan，Italy)購買。
b)人類組織從Turin大學(xué)生物醫(yī)學(xué)科學(xué)和人類腫瘤學(xué)系(病理學(xué)分部)采集外科腫瘤標(biāo)本。將鄰近用于醫(yī)院病理學(xué)診斷的腫瘤切片立即冷凍在-80℃下，并儲存2-6個月，直至進一步加工用于結(jié)合研究。采用13個侵入乳腺癌樣品(10個為導(dǎo)管的，3個為小葉的)，14個非內(nèi)分泌肺癌樣品(5個鱗狀細胞和9個腺癌細胞)，11個內(nèi)分泌肺腫瘤樣品，9個內(nèi)分泌胰腺腫瘤樣品以及12個甲狀腺腫瘤樣品(7個卵泡起源的，5個髓起源的)。同時對每一個腫瘤樣品相應(yīng)器官非腫瘤正常組織進行平行分析。
c)腫瘤細胞系從ATCC(Rockville，MD，USA)購買人類肺腫瘤細胞樣品(CaLu1)、T47D和MDA-MB231以及人類雌激素依賴和不依賴乳腺癌細胞系。在37℃并5％CO2和95％的濕度下于25cm3燒瓶中供濟有10％FCS的RPMI中對細胞進行常規(guī)培養(yǎng)。當(dāng)達到亞融合狀態(tài)時，用胰蛋白酶/EDTA從燒瓶中分離出細胞。
d)GHRP受體分析按照G.Muccioli等人在Journal of Endocrinology，157，99-106，1998中所述的方法，采用125I-Tyr-Ala-海噻瑞林作為配體，可以測定腫瘤膜上的GHRP受體。計算在缺乏和有過量未標(biāo)記Tyr-Ala-海噻瑞林存在下特異性結(jié)合的差異，并用加入的放射活性的百分比來表示。用GraphPADPrism 2程序(GraphPAD Software，San Diego，CA，USA)對飽和及競爭性結(jié)合研究進行分析。
e)細胞繁殖研究按照G.Muccioli等人在Journal of Endocrinology，153，365-371，1997中所述的3H-胸腺嘧啶混入方法對DNA合成進行評價。在缺乏和有不同濃度(10-8-10-6mol/l)海噻瑞林、Ala-海噻瑞林、Tyr-Ala-海噻瑞林、MK0677、D-(Lys)3-GHRP6或EP80317存在下，用單獨培養(yǎng)基(基線)或帶有EGF(1ng/ml)的培養(yǎng)基對饑餓細胞進行培養(yǎng)。培養(yǎng)20小時后，加入3H-胸腺嘧啶，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。終止反應(yīng)，將細胞收集于玻璃纖維濾紙條上。用閃爍計數(shù)器測定3H-胸腺嘧啶的混入。
按照P.Cassoni等人在Virchows Archiv，425，467-472，1994中所描述的方法進行細胞生長研究。在24多孔平皿中種植細胞，密度為5,000-10,000細胞/ml，共3份平行樣品。種植24小時后，改變培養(yǎng)基。在需要處加入海噻瑞林或Ala-海噻瑞林，濃度為10-8-10-6mol/l。每48小時改變培養(yǎng)基。采用血細胞計，由兩個獨立的調(diào)查者以雙盲分析的方式，在處理48、72、96小時對細胞進行計數(shù)。
f)統(tǒng)計分析除非另有說明，數(shù)據(jù)以平均值或平均值±S.E.M.表示。采用Mann-Whitnry檢驗或單道ANOVA來決定統(tǒng)計顯著性。所有的實驗至少做3份平行樣。
2.結(jié)果a)在不同人類腫瘤中GHRP及其拮抗劑受體的鑒別肺和乳腺非內(nèi)分泌腫瘤以及胰腺和甲狀腺(小葉型)內(nèi)分泌腫瘤顯示出中等程度的特異性結(jié)合值，從統(tǒng)計學(xué)角度而言，高于在相應(yīng)的非腫瘤正常組織中得到的結(jié)果。相反，在正常組織和肺或甲狀腺(髓型)內(nèi)分泌腫瘤之間在特異性結(jié)合值方面卻沒有差異。
b)GHRP及其拮抗劑受體的生化特征為了測定125I-Tyr-Ala-海噻瑞林與腫瘤膜的結(jié)合是否顯示配體-受體相互作用的典型性質(zhì)，在肺起源的非內(nèi)分泌腫瘤(其顯示出最高的特異性結(jié)合值)中對放射示蹤物的結(jié)合進行了更加詳細的調(diào)查。此項研究揭示了可飽和的特異性結(jié)合的證據(jù)，并且Scatchard分析顯示出存在單類的高親和力部位。
通過測定不同化合物與放射配體競爭腫瘤結(jié)合部位的能力，可以建立125I-Tyr-Ala-海噻瑞林結(jié)合的特異性。放射示蹤物的結(jié)合以劑量依賴方式被海噻瑞林、Ala-海噻瑞林、Tyr-Ala-海噻瑞林以及GHRP拮抗劑所取代，所述的拮抗劑例如有D-(Lys)3-GHRP6和EP80317(一種海噻瑞林的(氨基-氮雜-吲哚)D-(Lys)3衍生物，其在新生大鼠中不釋放GH)。在MK0677(一種與垂體GHRP受體結(jié)合的非肽基GHRP模仿物)存在下，觀察到不可忽略的取代。相反，在GHRP或生長激素釋放抑制因子存在下，沒有觀察到競爭。
c)GHRP及其拮抗劑對3H-胸腺嘧啶混入的作用濃度為10-6mol/l的海噻瑞林可以抑制人類肺腫瘤細胞中基本的和EGF-刺激的3H-胸腺嘧啶混入。當(dāng)在有10-6mol/l的Ala-海噻瑞林、Tyr-Ala-海噻瑞林或GHRP拮抗劑所取代(例如D-(Lys)3-GHRP6和EP80317)存在下對細胞進行培養(yǎng)時，也觀察到這種抗增殖作用。相反，在MK0677存在下，僅觀察到輕微的抑制。采用增加濃度的海噻瑞林、Ala-海噻瑞林、Tyr-Ala-海噻瑞林、D-(Lys)3-GHRP6和EP80317的實驗揭示這些化合物抑制了EGF對人類肺腫瘤細胞的增殖作用，所述的肺腫瘤細胞以劑量-依賴方式被抑制。EP80317的EC50值為5.6×10-8mol/l，Tyr-Ala-海噻瑞林的EC50值為6.5×10-8mol/l，海噻瑞林的EC50值為8×10-8mol/l，D-(Lys)3-GHRP6的EC50值為9×10-8mol/l，Ala-海噻瑞林的EC50值為1×10-7mol/l。
d)GHRP對細胞生長的作用在人類肺腫瘤細胞中，與具有顯著作用的對照相比(-47％)，僅在96小時后濃度為10-8mol/l的海噻瑞林可以引起細胞數(shù)量的下降。這種作用在10-7mol和10-6mol時會進一步增加，并可以在任意的實驗時間點被觀察到。
在人類乳腺癌T47D細胞中，與具有顯著作用的對照相比(-54％)，僅在96小時后濃度為10-8mol/l的海噻瑞林可以引起細胞數(shù)量的下降。這種作用在10-7mol和10-6mol時會進一步增加，并可以在任意的實驗時間點被觀察到。Ala-海噻瑞林對這些腫瘤細胞也顯示出相似的抗增殖作用。
在人類乳腺癌MDA-MB231細胞中，與具有顯著作用的對照相比(-33％)，僅在72小時后濃度為10-8mol/l的海噻瑞林可以引起細胞數(shù)量的下降。這種作用在10-7mol和10-6mol時會進一步增加，并可以在任意的實驗時間點被觀察到。Ala-海噻瑞林對這些腫瘤細胞也顯示出相似的抗增殖作用。
這些實驗結(jié)果證明，合成的生長激素釋放肽及其拮抗劑可以在體外抑制人類腫瘤細胞的生長。這種抗增殖作用是由特異性的受體介導(dǎo)的。
權(quán)利要求
1.化合物，其為His-D-Trp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，His-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，His-Ala-D-Trp-Lys-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，His-D-Mrp-D-Lys-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，His-Ala-D-Trp-Ala-Mrp-D-Phe-Lys-NH2，或His-D-Trp-Ala-Mrp-D-Phe-Lys-NH2.
2.化合物，其為[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-Trp-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-Mrp-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，Tyr-[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Ile)]-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，[S，S-Spiro(Pro-Leu)]-D-Mrp-D-HNH-(SO2CH3)-Phe-Lys-NH2，HAIC-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2，或ATAB-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2.
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其為HAIC-D-Mrp-D-Lys-Trp-D-Phe-Lys-NH2.
全文摘要
治療哺乳動物體內(nèi)腫瘤的方法，所述的方法包括給予有效劑量的生長激素釋放肽或其拮抗劑以降低或抑制腫瘤發(fā)生細胞在哺乳動物體內(nèi)的增殖。特別地，所治療的腫瘤為肺腫瘤、乳腺腫瘤、甲狀腺腫瘤或胰腺腫瘤。優(yōu)選的化合物是一些含有甲基色氨酸和賴氨酸單位的肽類。
文檔編號A61K38/00GK1594358SQ20041004599
公開日2005年3月16日 申請日期1999年11月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月16日
發(fā)明者G·姆西奧利, M·帕波提, E·吉戈, R·戴根吉 申請人:贊塔里斯股份公司