專利名稱：一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物及其制備方法，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
病毒性心肌炎(VMC)是心血管系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病，也是擴(kuò)張型心肌病、心力衰竭和猝死的主要誘因之一。目前，無論在發(fā)達(dá)國家還是在發(fā)展中國家，心肌炎的發(fā)病率較10年前有顯著增多，其主要原因是感染性心肌炎中病毒性心肌炎的發(fā)病率增高所致。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)全球病毒監(jiān)測研究報(bào)導(dǎo)顯示在新生兒、兒童突發(fā)死亡病例中，20％為病毒性心肌炎所致；病毒性心肌炎在新生兒、兒童中的發(fā)病率為360/10萬，死亡率為8％；病毒性心肌炎的發(fā)病率為同期心血管疾病住院病人的8.69～20.8％；病毒感染侵入心肌后，會(huì)引起局灶性或彌漫性心肌間質(zhì)性滲出和心肌纖維變性、壞死。重癥彌漫性心肌炎可出現(xiàn)嚴(yán)重心律不齊、心力衰竭、心源性休克、甚至猝死；也可遷延不愈，導(dǎo)致心臟肥大，并逐漸發(fā)展成擴(kuò)張型心肌病。
病毒性心肌炎與病毒感染及免疫性心肌損害有關(guān)。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的觀點(diǎn)出發(fā)，病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制與病理生理過程主要涉及以下三個(gè)方面一、病毒的直接侵襲造成心肌細(xì)胞破裂、溶解；二、病毒造成心肌細(xì)胞崩解后，誘發(fā)自體免疫性炎癥反應(yīng)；三、病毒感染后誘發(fā)機(jī)體特異性免疫反應(yīng)。由此可見，病毒性心肌炎主要與病毒入侵和免疫反應(yīng)有關(guān)，所以治療病毒性心肌炎的出發(fā)點(diǎn)便集中在尋找抗病毒藥物、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫和對(duì)癥治療方面。
然而到現(xiàn)在為止，尚未有針對(duì)VMC的特效藥物。世界上只報(bào)道了兩種對(duì)病毒性心肌炎細(xì)胞模型有明顯效果的單體化合物，他們分別是Ribavirin和Win54954，但是這兩種單體化合物在動(dòng)物模型上均未顯示良好的治療作用，可見開發(fā)針對(duì)病毒性心肌炎的新藥具有非常大的困難?？茖W(xué)家們由此將針對(duì)病毒性心肌炎的藥物研究集中在了以下四個(gè)方面一、調(diào)節(jié)病毒性心肌炎患者的免疫功能；二、開發(fā)減毒活疫苗；三、尋求基因治療的突破口；四、針對(duì)心血管系統(tǒng)的改變進(jìn)行對(duì)癥治療。
中藥是世界上歷史悠久的天然藥物之一，在針對(duì)病毒性心肌炎的治療中，具有一定的優(yōu)勢和特色。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的觀點(diǎn)認(rèn)為，病毒性心肌炎屬于中醫(yī)心悸怔忡，胸痹等病的范疇。該病因?yàn)檎龤馓撊?、?fù)受溫邪熱病侵襲、毒邪內(nèi)滯，內(nèi)含于心、血運(yùn)不暢、耗氣傷陽、心失所養(yǎng)、脈絡(luò)淤阻、痰濁濕熱阻滯所致。故而治療病毒性心肌炎當(dāng)以扶正祛邪治心為主，兼顧其他臟器，以益心氣、養(yǎng)心陽、清新寧神為主。然而在我國傳統(tǒng)的中醫(yī)藥治療方面，一直沒有療效非常確切的藥物，大多數(shù)醫(yī)生均是在經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上進(jìn)行藥味加減，并結(jié)合西醫(yī)的治療措施。既沒有針對(duì)疾病進(jìn)行深入的研究，也沒有開發(fā)出具有獨(dú)特療效的中藥新藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種療效顯著的治療病毒性心肌炎的中藥組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供這種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其有效成分由黃芪、紅景天和苦參制備而成。
所述黃芪、紅景天和苦參的重量份數(shù)之比同時(shí)滿足下列條件1〕紅景天黃芪為1∶2～2∶1；2〕苦參紅景天+黃芪為1∶6～1∶2。
所述紅景天與黃芪的重量份數(shù)之比以1∶1為佳。
所述中藥組合物中還含有藥劑學(xué)可接受的輔料，制成藥劑學(xué)可接受的劑型。
所述劑型為口服劑型，包括膠囊、片劑、沖劑、丸劑和散劑等。
本發(fā)明組方簡單、合理，療效顯著。其中的黃芪勃發(fā)心氣而運(yùn)血?jiǎng)樱蕼匾鏆?，使氣旺血行，溫陽益氣通脈?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)黃芪不但能直接抑制病毒的生長，而且能協(xié)同改善微循環(huán)，增加心肌營養(yǎng)血流量，有利炎癥的吸收，促進(jìn)損害心肌的恢復(fù)。
苦參清熱燥濕，調(diào)整心律，苦寒清心，專治心經(jīng)之火。藥理研究證明該藥不但能滲透到心肌細(xì)胞阻止病毒的繁殖，而且能降低心肌的應(yīng)激性，抑制異位起搏，是較普遍認(rèn)同的抗心律失常、尤其是治療各種早搏的有效藥物。在查詢的290個(gè)心血管病驗(yàn)方中，黃芪在主方中出現(xiàn)的頻率為57.24％(166/290)；苦參為26.6％(77/290)。所以這兩種藥是千百年來人們用于防病治病的有效和常用藥物。
紅景天在本處方中的加入是本發(fā)明不同于市場常用的抗病毒性心肌炎藥物的特色之一。紅景天有著與人參，刺五加等相似的滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本之功能，有神草和不老草之稱。我國最早的要典《神農(nóng)本草經(jīng)》中將其列為之上品，其臨床應(yīng)用非常廣泛?，F(xiàn)代藥理研究表明紅景天有明顯的抗缺氧、抗病毒、強(qiáng)心等作用。因此黃芪、苦參、紅景天組成的此方具有上調(diào)三焦之功效，可使氣暢血行、痰祛正復(fù)，標(biāo)本兼治，能明顯增加冠狀動(dòng)脈的血流量、改善微循環(huán)、提高耐缺氧，因而提高了心肌細(xì)胞抗病毒能力，減輕病毒對(duì)心肌細(xì)胞的破壞，促進(jìn)損害心肌細(xì)胞的修復(fù)。
一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，該方法包括以下步驟1〕制備苦參浸膏苦參加10～12倍量60～80％乙醇回流提取2～3小時(shí)，留提取液，剩余部分用60～80％乙醇再次提取2～3小時(shí)，合并兩次的提取液并過濾，減壓濃縮為相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏；2〕制備紅景天和黃芪浸膏紅景天與黃芪以6～12倍量水煎煮1～3小時(shí)，留提取液，剩余部分再以3～12倍量水煎煮0.5～2小時(shí)，合并兩次提取液并過濾，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏；3〕干燥將苦參浸膏與紅景天和黃芪浸膏合并后干燥，即得。
為實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，我們對(duì)以上工藝進(jìn)行了較為系統(tǒng)的優(yōu)化研究。通過正交試驗(yàn)，考察了各項(xiàng)工藝條件，在盡量減少浸膏的量和活性成分損失前提下，對(duì)濃縮的程度、醇濃度、水提時(shí)間、提取溶液的用量等指標(biāo)進(jìn)行考察，得到以下優(yōu)選方案所述步驟1〕制備苦參浸膏是指苦參加10倍量70％乙醇回流提取3小時(shí)，留提取液，剩余部分用80％乙醇再次提取3小時(shí)，合并兩次的提取液并過濾，減壓濃縮為相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏。
所述步驟2〕制備紅景天和黃芪浸膏是指紅景天與黃芪以10倍量水煎煮2小時(shí)，留提取液，剩余部分再以8倍量水煎煮1.5小時(shí)，合并兩次提取液并過濾，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏。
所述步驟2〕中紅景天與黃芪的重量份數(shù)比為1∶2～2∶1。
所述步驟3〕中苦參浸膏與紅景天和黃芪浸膏的重量份數(shù)比為1∶6～1∶2。
將所得的中藥組合物分裝、包裝，即可得到具有一定規(guī)格的藥物制劑。此外，還可以運(yùn)用本領(lǐng)域習(xí)知的傳統(tǒng)或現(xiàn)代制藥技術(shù)，添加藥劑學(xué)可接受的輔料或賦型劑，將上述組合物進(jìn)一步加工制成各種適于口服的劑型，如丸劑、片劑、膠囊劑、沖劑、散劑等。由于藥物有效成分均為本發(fā)明提供的組合物，因此，以上各種劑型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供了一種由三味中藥組成的藥物組合物，即現(xiàn)代中藥復(fù)方，其成分明確，療效可靠，質(zhì)量易控，并提出該藥物組合物的制備方法。同時(shí)結(jié)合病毒性心肌炎在中西醫(yī)方面不同的發(fā)病機(jī)制研究結(jié)果，針對(duì)病毒性心肌炎的病理生理機(jī)制，不僅在早期起到抗病毒的重要作用，而且在病程發(fā)展過程中發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)免疫的效果，從而起到阻止病毒性心肌炎向擴(kuò)張性心肌病及心力衰竭的發(fā)展的作用，在病毒性心肌炎的急性期和慢性期都起到良好的治療作用。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，并非對(duì)本發(fā)明的限制，凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容所作的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。


圖1為CVB病毒感染Vero細(xì)胞以后進(jìn)行MTT染色，根據(jù)OD值所作的結(jié)果圖。
圖2為CPE抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。
圖3為病毒繁殖抑制試驗(yàn)中CVB3毒力測定結(jié)果。
圖4為不同時(shí)間段本發(fā)明藥物刺激產(chǎn)生干擾素效價(jià)結(jié)果圖。
圖5為通過RT-PCR方法觀察本發(fā)明對(duì)細(xì)胞內(nèi)病毒含量的影響圖。
圖6為倒置顯微鏡下觀察到的本發(fā)明對(duì)Vero細(xì)胞的保護(hù)作用圖。
圖7為倒置顯微鏡下觀察到的本發(fā)明對(duì)Hela細(xì)胞的保護(hù)作用圖。
圖8為倒置顯微鏡下觀察到的本發(fā)明對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用圖。
圖9為通過RT-PCR方法鑒定體內(nèi)模型構(gòu)建成功。
圖10為各個(gè)分組動(dòng)物進(jìn)食量的比較圖。
圖11為各個(gè)分組動(dòng)物體溫的變化情況圖。
圖12為各個(gè)分組動(dòng)物體重的變化情況圖。
圖13為本發(fā)明在動(dòng)物水平對(duì)死亡率的改變結(jié)果圖。
圖14為感染后不同分組取血，分離血清，在Vero細(xì)胞水平測量TCID50值圖。
圖15為感染后不同分組取血，分離血清，檢測血清心肌酶CK-MB含量圖。
圖16為感染后不同分組取血，分離血清，檢測血清心肌酶LDH含量圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、藥物制備一、材料(一)原料來源和用量1.黃芪 本品為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。春、秋二季采挖，除去須根及根頭，曬干。主產(chǎn)山西、內(nèi)蒙、甘肅、黑龍江。
2.紅景天 本品為景天科植物大花紅景天或大株紅景天的干燥根及根莖。秋季采挖，除去粗皮，曬干。主產(chǎn)西藏、甘肅、新疆、吉林等地。
3.苦參 本品為豆科植物苦參的干燥根。春、秋二季采挖，除去根頭及小支根，洗凈，干燥，或趁鮮切片，干燥。主產(chǎn)山西、內(nèi)蒙、甘肅、黑龍江。全國大部分地區(qū)均產(chǎn)。
不同提取方案中原料藥物的用量如下原料用量(Kg)紅景天1 1 1 1 1 1 2 2 2黃芪 2 2 2 1 1 1 1 1 1苦參 0.5 1 1.5 0.33 0.5 1 0.5 1 1.5苦參紅景天+黃芪 1∶6 1∶3 1∶2 1∶6 1∶4 1∶2 1∶6 1∶3 1∶2(三)所使用的設(shè)備和試劑名稱及來源Agilent 1100高效液相色譜儀TSP-P4000-AS3000-UV1000高效液相色譜儀Alltech蒸發(fā)光散射檢測器AS3000自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱thermoquest Hypersil甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純對(duì)照品黃芪甲苷對(duì)照品和苦參堿對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供。
(四)該藥制備過程的工藝步驟及參數(shù)1、制備苦參浸膏苦參加10倍量70％乙醇回流提取3小時(shí)，留提取液，剩余部分用80％乙醇再次提取3小時(shí)，合并兩次的提取液并過濾，減壓濃縮為相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏；2、制備紅景天和黃芪浸膏紅景天與黃芪(重量比為1∶2～2∶1)以10倍量水煎煮2小時(shí)，留提取液，剩余部分再以8倍量水煎煮1.5小時(shí)，合并兩次提取液并過濾，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏；3、干燥將苦參浸膏與紅景天和黃芪浸膏按照重量比(1∶6～1∶2)合并后干燥，即得。
(五)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢查結(jié)果黃芪為本藥品的君藥，目前，多以測定黃芪甲苷控制含黃芪類樣品的質(zhì)量，我們采用HPLC法，蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)測定其含量，方法簡單、靈敏，重現(xiàn)性好。
1、儀器與試藥Agilent 1100系列高效液相色譜儀。ELSD-Alltech蒸發(fā)光散射檢測器，TSP-AS3000自動(dòng)進(jìn)樣器，色譜柱CAPCELL PAK C185μ；250×4.6mm(UG120)，甲醇為色譜純(天津康科德)，正丁醇為分析醇(上海試劑公司)，黃芪甲苷對(duì)照品(購自中國藥品生物制品檢定所781-200210)。
2、測定條件的選擇 選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(75∶25)為流動(dòng)相；檢測用蒸發(fā)光散射檢測器，靈敏度(chain)2，檢測溫度115℃，載氣流速2.5ml/min。黃芪甲苷為對(duì)照。保留時(shí)間約為10分鐘。柱溫35℃，結(jié)果陰性對(duì)照沒有干擾(見圖1、2、3)。試驗(yàn)條件寬松，重現(xiàn)性好。
3、樣品的提取純化 目前黃芪甲苷的提取純化，一般采用正丁醇從水溶液中提取，堿洗去雜質(zhì)的方法。我們?cè)容^甲醇、水為溶劑，超聲及回流提取的比較，結(jié)果以本發(fā)明的方案所采用方法最為理想。
4、線性關(guān)系的考察 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品5.06mg，加甲醇定容至10ml，分別吸取2、4、6、8、10μl，分別注入高效液相色譜儀，測其峰面積積分值，以峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，濃度的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程。結(jié)果y＝1.7542x+5.3466 R＝0.9998。
表1 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)樣量(g)峰面積 Ln(C) Ln(A)1.012 218 0.0119295.3844952.024 699 0.7050766.5496513.036 14711.1105417.2936984.048 24861.3982237.818435.06 36041.6213668.1898結(jié)果表明進(jìn)樣量在1.012～5.06μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
5、精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液4μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)及其平均值、RSD％見下表。試驗(yàn)結(jié)果顯示儀器精密度良好。
表2精密度試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)A LnA平均 LnARSD(％)1 721 6.5812 699 6.5503 695 6.5446.563 0.3234 696 6.5455 732 6.5966、穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，在8小時(shí)內(nèi)分別進(jìn)樣5次(0、1、2、4、8小時(shí))，測定峰面積積分值，結(jié)果峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)及其平均值、RSD％見下表。試驗(yàn)結(jié)果顯示供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
表3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果測定時(shí)間 平均LnA RSD(％)A LnA(小時(shí))0 1211 7.0991 1149 7.0472 1141 7.0407.0840.4934 1214 7.1028 1250 7.1317、重現(xiàn)性試驗(yàn)按正文方法對(duì)批號(hào)為030904的樣品進(jìn)行測定，共測定5份，測定結(jié)果見下表。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。
表4 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果編號(hào) 含量(mg/g) 含量(mg/粒) 平均含量(mg/g) RSD(％)1 0.652 0.2942 0.652 0.2933 0.654 0.2940.295 0.4204 0.659 0.2975 0.655 0.2958、加樣回收率試驗(yàn)取批號(hào)為030904(含量見表5)的樣品1g，共5份，分別加入對(duì)照品溶液(黃芪甲苷對(duì)照品7.00mg，加甲醇至10ml)1ml，按正文方法測定，計(jì)算出回收率。結(jié)果見下表，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法回收率良好。
表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果取樣量 樣品中含量 加入量 測得量 平均回收率 RSD回收率(％)(g) (mg)(mg)(mg) (％)(％)1.1515 0.754 0.701.443 98.401.1622 0.761 0.701.447 97.971.1787 0.772 0.701.466 99.18 98.65 1.1081.1802 0.773 0.701.476 100.451.1551 0.757 0.701.437 97.26實(shí)施例2、體外藥效學(xué)試驗(yàn)1——在心肌細(xì)胞水平的CPE抑制實(shí)驗(yàn)一、試驗(yàn)材料1、試驗(yàn)藥物本發(fā)明實(shí)施例1所述的中藥組合物，生產(chǎn)批號(hào)為030904；2、試驗(yàn)用動(dòng)物SD乳鼠，為二級(jí)動(dòng)物(合格證號(hào)為SXK-11-00-0006)，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所；3、柯薩奇病毒CVB3毒株編號(hào)為Nancy株，由武漢協(xié)和醫(yī)院病毒室提供。
二、試驗(yàn)方法(一)CVB3病毒毒力滴定方法(TCID50，50％tissue culture infective dose)1、實(shí)驗(yàn)步驟在96孔板中培養(yǎng)Vero細(xì)胞；用無血清培養(yǎng)基將病毒連續(xù)10倍稀釋，分別為10-1～10-8稀釋度，之后接種于96孔板(孔中為已培養(yǎng)24小時(shí)的單層Vero細(xì)胞)；37℃/5％CO2孵箱培養(yǎng)，使病毒和細(xì)胞充分接觸30min～1h后，棄病毒液，以Hanks液洗三次，然后加入細(xì)胞培養(yǎng)液，重新放回孵箱；每日在倒置顯微鏡下觀察CPE，以細(xì)胞病變達(dá)“++”以上為陽性，以最高稀釋度不再出現(xiàn)CPE時(shí)為終點(diǎn)，連續(xù)觀察若干天；利用已經(jīng)記錄好的數(shù)據(jù)以Reed-Muench法計(jì)算TCID50；選擇100TCID50作為正式實(shí)驗(yàn)的接種濃度。
2、CVB3病毒毒力滴定結(jié)果96孔板培養(yǎng)Vero細(xì)胞，加入CVB3病毒以后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞CPE發(fā)生情況(表6)表6 倒置顯微鏡觀察加入不同濃度病毒以后Vero細(xì)胞CPE發(fā)生情況

++++表示CPE發(fā)生率＞75％+++表示CPE發(fā)生率為75％-50％；++表示CPE發(fā)生率為25％-50％；+表示CPE發(fā)生率＜25％。
3、所得數(shù)據(jù)應(yīng)用Reed-Muench方法進(jìn)行計(jì)算(表7)表7 應(yīng)用Reed-Muench方法計(jì)算病毒滴度判讀結(jié)果 累計(jì)值 感染率病毒稀釋感染百分率CPE non-CPE CPE non-CPECPE數(shù)/總和10070530 53/53 10010-170460 46/46 10010-270390 39/39 10010-370320 32/32 10010-470250 25/25 10010-570180 18/18 10010-661111 11/12 91.610-7435 4 5/9 55.610-8161 10 1/119.110-9070 17 0/17010-10070 24 0/24010-11070 31 0/310
Reed-Muench方法計(jì)算公式為(僅高于50％的感染百分率-50)/(僅高于50％的感染百分率-僅低于50％的感染百分率)＝(55.6-50)/(55.6-9.1)＝0.12；將0.12加到僅高于50％感染率的稀釋指數(shù)(本實(shí)驗(yàn)中為10-7)；最后，得出該病毒的TCID50為7.12，即能夠使50％細(xì)胞發(fā)生CPE的病毒濃度是10-7.12/ml；數(shù)據(jù)經(jīng)三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，均值為TCID50＝7.36。在以后針對(duì)Vero細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，涉及CVB3的毒力，均以TCID50＝7.36作為實(shí)際病毒毒力。
4、MTT染色以后，在酶標(biāo)儀測量570nm處的OD值圖1為三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中的一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其余兩次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此類似，圖中表示方式為均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
(二)心肌細(xì)胞水平的CPE抑制實(shí)驗(yàn)1、以最高濃度為1000μg/ml進(jìn)行首次實(shí)驗(yàn)，以1∶3系列稀釋藥物(1)為96孔板分組情況(表8)表8本發(fā)明在心肌細(xì)胞水平CPE抑制實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)方法

(2)CPE發(fā)生情況觀察記錄表本實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，表9為其中一次的觀察記錄
表9 倒置顯微鏡觀察本發(fā)明在心肌細(xì)胞水平的CPE抑制情況

2、在16μg/ml濃度以下進(jìn)行進(jìn)一步的CPE抑制實(shí)驗(yàn)，以1∶2系列稀釋藥物，濃度分別為16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml。
(1)96孔板分組情況(表10)表10 本發(fā)明在心肌細(xì)胞水平CPE抑制實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)方法

(2)CPE發(fā)生情況觀察記錄表本實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，下表(表11)為其中一次的觀察記錄表11 倒置顯微鏡觀察本發(fā)明在心肌細(xì)胞水平的CPE抑制情況

(3)半數(shù)有效量(IC50)及治療指數(shù)(TI)的計(jì)算
按Reed-Muench法計(jì)算藥物對(duì)CVB3導(dǎo)致CPE產(chǎn)生50％抑制的濃度表12 Reed-Muench法計(jì)算本發(fā)明IC50判讀結(jié)果累計(jì)值感染率藥物濃度 感染百分率CPEnon-CPE CPEnon-CPE CPE數(shù)/總和0.5μg/ml 6 0 17 017/17 1001μg/ml6 0 11 011/11 1002μg/ml4 2 5 25/7 71.44μg/ml1 5 1 71/8 12.58μg/ml0 6 0 13 0/13016μg/ml 0 6 0 19 0/190根據(jù)計(jì)算公式(僅高于50％的感染百分率-50)/(僅高于50％的感染百分率-僅低于50％的感染百分率)＝(71.4-50)/(71.4-12.5)＝0.36；將0.36加到僅高于50％感染率的藥物濃度稀釋指數(shù)；得出該藥物在心肌細(xì)胞水平的IC50為2.36μg/ml；按TI＝TD50/IC50計(jì)算治療指數(shù)，但是因?yàn)闊o法測出TD50，只能預(yù)測本發(fā)明的治療指數(shù)＞1000μg/ml/2.36，即TI＞423.7。
(4)MTT染色以后在酶標(biāo)儀570nm處測定OD值，見圖2所示。
實(shí)施例3、體外藥效學(xué)試驗(yàn)2——病毒繁殖抑制試驗(yàn)一、試驗(yàn)材料Vero細(xì)胞、柯薩奇病毒CVB3及試驗(yàn)藥物同實(shí)施例2。
二、試驗(yàn)方法1、24孔板接種Vero細(xì)胞，然后分組加入藥物及病毒，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如表13表13 孔板接種Vero細(xì)胞后分組加入藥物及病毒

2、按照不同收獲時(shí)間，收獲分組細(xì)胞，并用病毒滴定的方法滴定CVB3毒力。
三、試驗(yàn)結(jié)果按照不同收獲時(shí)間，收獲分組細(xì)胞，并用病毒滴定的方法滴定CVB3毒力，然后用Reed-Muench法計(jì)算的TCID50，結(jié)果如圖3所示。
在抗病毒藥物的開發(fā)中，如果藥物能夠?qū)⒉《镜牡味冉档?個(gè)對(duì)數(shù)值以上，則視為有抗病毒效果，在本次實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明藥物在不同的時(shí)間段對(duì)病毒滴度的下降幅度均在1以上，說明其確實(shí)具有明顯的抗病毒作用。
實(shí)施例4、體外藥效學(xué)試驗(yàn)3——干擾素效價(jià)測定一、材料1、L929細(xì)胞由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生命科學(xué)中心惠贈(zèng)。
2、水皰性口炎病毒(VSV)由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所惠贈(zèng)。
3、試驗(yàn)藥物同實(shí)施例2。
二、方法1、L929細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)調(diào)配37℃～40℃的溫水，或?qū)⒑銣厮∠涞臏囟日{(diào)節(jié)至37℃～40℃；從液氮中取出L929細(xì)胞凍存管，立即投入37℃溫水中迅速晃動(dòng)，直至凍存液完全溶解；將細(xì)胞凍存懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，加入約5ml培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻；將細(xì)胞懸液經(jīng)800～1000r/min離心5min，棄上清液；向細(xì)胞沉淀內(nèi)加入培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)足培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。
2、雞胚細(xì)胞制備方法取9-11天齡雞胚，75％酒精消毒蛋殼表面；用無菌剪刀在氣室上方打開蛋殼，傾倒雞胚入一無菌平皿；取出雞胚，去除四肢、頭部及內(nèi)臟；0.125％Trypsin消化10-15min，大口徑吸管吹打細(xì)胞，使分散；重復(fù)消化幾次，直到完全分散開為止；10％FBS·DMEM重懸細(xì)胞；計(jì)數(shù)細(xì)胞，調(diào)整到合適濃度，接種入培養(yǎng)瓶。
3、VSV毒種擴(kuò)增將VSV接種于已生長成為單層的雞胚成纖維細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)；觀察細(xì)胞病變，當(dāng)CPE出現(xiàn)“++～+++”時(shí)停止細(xì)胞培養(yǎng)；反復(fù)凍融3次，以使細(xì)胞充分裂解，釋放出病毒顆粒；1200rpm低速離心，留取上清，棄沉渣；以0.22微米的小濾器過濾所得上清液，即為VSV病毒液。
4、取不同時(shí)間段的細(xì)胞培養(yǎng)液上清，通過抑制VSV病毒在L929細(xì)胞上的毒力，測定本發(fā)明刺激脾細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的效價(jià)。
5、誘生干擾素方法選用Balb/c小鼠15-20g，雌雄兼用，制備脾細(xì)胞懸液，濃度為1×107/ml；將此脾細(xì)胞懸液等分4份，每份3ml。分組方法(表14)表14 在培養(yǎng)瓶中誘生干擾素的分組方法脾細(xì)胞懸液ConA藥物1藥物2 培養(yǎng)液組別(ml)(20μg/ml) (125μg/ml) (62.5μg/ml) (ml)陰性對(duì)照3.0 - -- 3.0陽性對(duì)照3.0 0.6 -- 2.4藥物1 3.0 - 1.2 - 1.8藥物2 3.0 - -1.2 1.8之后，置孵箱中培養(yǎng)48小時(shí)；取培養(yǎng)液上清以1500rpm離心15分鐘；收集上清液，凍存于-20℃待測活性。
6、干擾素效價(jià)滴定方法用含5％小牛血清的MEM培養(yǎng)基將誘生干擾素樣品按2的倍次遞次稀釋。96孔板中每孔加入50μl干擾素樣品，細(xì)胞對(duì)照和病毒對(duì)照孔內(nèi)加50μl DMEM培養(yǎng)基。將預(yù)先培養(yǎng)好的L929細(xì)胞用0.25％胰酶消化下來，用含5％小牛血清的DMEM營養(yǎng)培基將細(xì)胞制成2×105/ml的細(xì)胞懸液。用微量移液器向每孔中加入50μl細(xì)胞懸液。置CO2孵箱中培養(yǎng)24小時(shí)。將各孔內(nèi)干擾素倒掉，于每孔中加入100μl攻擊病毒(VSV)，細(xì)胞對(duì)照孔加100μl含5％小牛血清的MEM營養(yǎng)培基。CO2孵箱中孵育，直到病毒對(duì)照孔的CPE達(dá)++++為止。各孔加入20μl，1mg/ml MTT，孵育6小時(shí)后棄去液體，每孔加入100μl酸化異丙醇，置酶標(biāo)儀570nm處比色。計(jì)算干擾素效價(jià)。
三、試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明刺激脾細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的效價(jià)測定結(jié)果見表15，通過該結(jié)果作圖，如圖4所示。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明具有刺激脾細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的能力，但是其隨時(shí)間的延長，誘生能力逐漸下降，可能因?yàn)楸景l(fā)明在培養(yǎng)液中的半衰期較短有關(guān)，環(huán)胞霉素A刺激脾細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的能力較強(qiáng)而且穩(wěn)定。
表15不同時(shí)間段本發(fā)明刺激產(chǎn)生干擾素效價(jià)CoA 本發(fā)明藥物 空白對(duì)照12h4.65±0.213.26±0.16 024h4.93±0.053.30±0.21 048h4.21±0.192.17±0.16 072h3.84±0.241.36±0.09 0實(shí)施例5、體外藥效學(xué)試驗(yàn)4——通過RT-PCR方法觀察本發(fā)明對(duì)細(xì)胞內(nèi)病毒含量的影響一、試驗(yàn)材料1、試驗(yàn)藥物及原代乳鼠心肌細(xì)胞同實(shí)施例2。
2、TRIZOL購自GIBCO公司；引物由賽百勝生物公司負(fù)責(zé)合成。
二、試驗(yàn)方法1、引物序列為CX15’-CCCCGGACTGAGTATCAATA-3’CX25’-GCAGTTAGGATTAGCCGCAT-3’2、反應(yīng)體系為RT-PCR Enzyme Mix 2μl20×buffer(Mg2+free) 1.5μlMgCl2(25mM)1.5μldNTP(10mM) 1.0μlCX1 sense primer1.0μlCX1 anti-sense primer 1.0μlRNA 2.0μldH2O 20μlTOTAL 30μl3、循環(huán)參數(shù)為37℃/50min 94℃/5min (94℃/30sec 59℃/30sec 72℃/1min)×30 72℃/7min 4℃。
三、試驗(yàn)結(jié)果如圖5所示，通過對(duì)CVB3病毒感染的細(xì)胞擴(kuò)增特異序列，可以明確在被感染的細(xì)胞中存在CVB3病毒，同時(shí)可以觀察到隨著藥物濃度的增高，病毒含量逐漸下降。
實(shí)施例6、體外藥效學(xué)試驗(yàn)5——形態(tài)學(xué)觀察本發(fā)明對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用一、材料1、試驗(yàn)藥物同實(shí)施例22、心肌細(xì)胞同實(shí)施例2二、方法在25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)Vero細(xì)胞、Hela細(xì)胞或原代心肌細(xì)胞，待細(xì)胞生長形成單層以后，接種100TCID50病毒和(或)加入本發(fā)明藥物溶液，分組為正常細(xì)胞對(duì)照組、藥物對(duì)照組、病毒感染對(duì)照組以及病毒+藥物試驗(yàn)組；連續(xù)觀察72小時(shí)，在倒置顯微鏡下對(duì)典型的細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行攝影。
三、結(jié)果倒置顯微鏡觀察本發(fā)明對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用，如圖6、7、8所示，正常細(xì)胞對(duì)照組和藥物對(duì)照組(KX)在觀察期內(nèi)沒有發(fā)生任何CPE病變，病毒感染對(duì)照組病變進(jìn)展迅速，而病毒+藥物試驗(yàn)組病變發(fā)展要明顯慢于病毒對(duì)照組，但是隨時(shí)間推移，也有部分細(xì)胞發(fā)生CPE病變。
實(shí)施例7、體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)1——病毒性心肌炎體內(nèi)模型建立及鑒定一、材料1、Balb/c小鼠四周齡、純系雄性Balb/c小鼠(體重為15g左右)，為二級(jí)動(dòng)物，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所，合格證號(hào)為SXK-11-00-0006。
2、柯薩奇病毒CVB3同實(shí)施例2。
二、方法(一)模型建立方法實(shí)驗(yàn)第一天腹腔接種0.1ml濃度為100LD50的CVB3病毒；感染病毒0.5小時(shí)以后，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.4ml，共7天；一般于第三天開始發(fā)病，之后死亡率逐漸增高。
(二)模型鑒定方法1、病理切片取感染CVB3病毒后的小鼠心臟，固定于10％中性甲醛；制作石蠟切片；顯微鏡下觀察心臟組織的病變情況，對(duì)明顯的病灶照相記錄。
2、心肌組織病毒核酸的分離、提取以TRIZOL提取心肌組織總RNA，并以瓊脂糖凝膠電泳鑒定CVB3特異性條帶方法同實(shí)施例5。
三、試驗(yàn)結(jié)果電泳分析如圖9所示，通過對(duì)CVB3病毒感染的小鼠心臟組織擴(kuò)增特異序列，可以明確在被感染心臟組織中存在CVB3病毒，證明病毒性心肌炎體內(nèi)模型成立。
實(shí)施例8、體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)2——對(duì)病毒性心肌炎動(dòng)物模型的藥效學(xué)研究一、試驗(yàn)材料1、試驗(yàn)藥物如實(shí)施例22、動(dòng)物模型如實(shí)施例7二、試驗(yàn)方法(一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及設(shè)計(jì)1、分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用隨機(jī)化分組原則進(jìn)行，本實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)本發(fā)明藥物實(shí)驗(yàn)組，另外設(shè)五個(gè)對(duì)照組，分別是空白對(duì)照組、假處理對(duì)照組、西醫(yī)聯(lián)合用藥組、中醫(yī)對(duì)照組和利巴韋林對(duì)照組，其中假處理對(duì)照組為腹腔注射同等量的病毒液，口服本發(fā)明藥物溶酶。每組動(dòng)物數(shù)安排依照預(yù)試驗(yàn)后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果而定。
(1)本發(fā)明藥物高劑量組按照本發(fā)明藥物毒性測得的LD50值及最大耐受量進(jìn)行設(shè)計(jì)，高劑量組為1/3 LD50給藥量，為0.4g/20g。
(2)本發(fā)明藥物中劑量組取高劑量組和低劑量組的幾何平均數(shù)400×4≈40mg/20g，按照40mg/20g給藥。
(3)本發(fā)明藥物低劑量組為高于或等于臨床使用劑量，本發(fā)明在人的使用劑量為10g/60kg，所以在小鼠的使用劑量為4mg/20g，(4)中藥對(duì)照組使用中藥治療病毒性心肌炎的常用中成藥“生脈飲”作為對(duì)照組，以參考本發(fā)明的藥效學(xué)結(jié)果，在小鼠的使用劑量為0.075ml/只/d。
(5)西醫(yī)聯(lián)合治療對(duì)照組其中包括V-C、肌苷和輔酶Q10，使用劑量分別為V-C55mg/kg、肌苷25mg/kg、輔酶Q1055mg/kg。
(6)利巴韋林對(duì)照組利巴韋林在小鼠的治療劑量為75mg/kg。
(7)假處理對(duì)照組腹腔注射同等濃度的病毒懸液，口服本發(fā)明藥物的溶酶——羧甲基纖維素。
2、實(shí)驗(yàn)安排及實(shí)驗(yàn)周期Balb/c小鼠腹腔感染CVB3以后，灌胃給予本發(fā)明藥物，每日一次，共14天，觀察本發(fā)明對(duì)病毒性心肌炎動(dòng)物模型的療效。各個(gè)分組動(dòng)物例數(shù)均為21只(依據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定)。
(二)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、對(duì)不同分組動(dòng)物的一般觀察(1)感染動(dòng)物的食欲、活動(dòng)力及糞便情況實(shí)驗(yàn)前對(duì)加入的飼料進(jìn)行稱重，然后每天記錄各組動(dòng)物的飼料消耗量。觀察每只動(dòng)物的活動(dòng)力，并作詳細(xì)記錄。觀察動(dòng)物排便情況。
(2)局部反應(yīng)及全身反應(yīng)情況包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)及血液系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、眼睛、皮膚及毛發(fā)等。
(3)動(dòng)物體溫及體重的情況此項(xiàng)測量于每天同一時(shí)間進(jìn)行，小鼠體溫采用半導(dǎo)體溫度計(jì)進(jìn)行測試。
2、不同分組死亡率統(tǒng)計(jì)從實(shí)驗(yàn)開始以后，連續(xù)觀察14天，對(duì)不同分組的動(dòng)物進(jìn)行死亡率統(tǒng)計(jì)，觀察組間是否存在顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
3、心肌組織懸液病毒滴度(TCID50)測定(1)實(shí)驗(yàn)方法收集各組動(dòng)物的血清；離心棄沉渣后取上清，作系列10倍稀釋，共設(shè)8個(gè)梯度；將稀釋后的病毒液接種于已培養(yǎng)好Vero細(xì)胞96孔板上；對(duì)比各個(gè)不同分組之間TCID50的差別。
(2)結(jié)果分析以Reed-Muench法計(jì)算各組血清接種細(xì)胞后的TCID50；以加藥組比病毒對(duì)照組TCID50降低1個(gè)對(duì)數(shù)以上作為有效。
三、結(jié)果(一)、對(duì)不同分組動(dòng)物的一般觀察結(jié)果；1、進(jìn)食量記錄(表16)表16不同分組動(dòng)物進(jìn)食量記錄表 統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖10。
2、一般情況及活動(dòng)力觀察記錄(表17)觀察內(nèi)容包括
表17 全身系統(tǒng)觀察需要注意的內(nèi)容列表系統(tǒng) 觀察內(nèi)容中樞神經(jīng)系統(tǒng)是否有煩躁、易怒、或萎靡、昏迷等現(xiàn)象自主神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔擴(kuò)大或縮小、分泌物增多、流涎、流淚、出汗等循環(huán)及血液系統(tǒng) 心動(dòng)過速或過緩、心律紊亂、皮膚黏膜蒼白、潮紅、紫紺等呼吸系統(tǒng)呼吸急促或緩慢、鼻翼扇動(dòng)、張口呼吸、口鼻出血、咳嗽或噴嚏泌尿生殖系統(tǒng)尿色改變、陰部或乳腺腫脹、會(huì)陰部污濁有分泌物等眼睛眼瞼下垂、眼球突出、角膜混濁、結(jié)膜充血、分泌物增多皮膚及毛發(fā) 皮膚發(fā)紅、松弛、皮疹、毛蓬松無光澤、污穢不潔等其他拒食、消瘦、體溫升高或降低等表18 不同分組動(dòng)物一般情況及活動(dòng)力記錄表1-3d 4-6d 7-9d 10-12d 13-14dKX高劑量組 - - - + +KX中劑量組 - - + + +KX低劑量組 - - + ++ ++中藥對(duì)照組 - + ++++ +++西醫(yī)聯(lián)合對(duì)照組 - - + ++ +++利巴韋林對(duì)照組 - - + + ++假處理對(duì)照組 + +++++ ++++++++正常對(duì)照組 - - - - -3、動(dòng)物體溫的變化情況依據(jù)各組測量值求出平均值見表19表19不同分組動(dòng)物體溫變化情況1d3d5d7d9d 11d 13dKX高 36.5±0.2136.4±0.1236.5±0.2036.5±0.0136.6±0.3236.7±0.2436.8±0.61KX中 36.5±0.3336.5±0.1936.7±0.4136.7±0.2736.9±0.2236.8±0.3137.0±0.49KX低 36.4±0.2436.5±0.2436.8±0.1937.1±0.1437.1±0.4137.4±0.2837.5±0.21中藥對(duì)照36.6±0.4636.6±0.2537.7±0.4137.8±0.2736.8±0.1636.9±0.2437.1±0.31西醫(yī)對(duì)照36.1±0.1936.8±0.1536.5±0.2437.4±0.3537.2±0.1237.0±0.4237.4±0.21利巴韋林36.4±0.2436.2±0.3536.1±0.3536.9±0.1637.0±0.3537.2±0.5136.9±0.47假處理 36.6±0.1636.6±0.1737.7±0.2138.9±0.1037.5±0.6437.6±0.8136.7±0.62正常 36.8±0.1437.1±0.1436.2±0.3436.5±0.2136.5±0.2436.7±0.3036.5±0.38結(jié)果統(tǒng)計(jì)見圖11。
4、動(dòng)物體重的變化情況依據(jù)各組測量值求出平均值見表20表20 不同分組動(dòng)物體重變化情況1d 3d 5d 7d 9d 11d 13dKX高15.616.517.118.218.318.518.7KX中15.716.416.917.617.718.118.2KX低15.416.116.316.616.917.117.1中藥對(duì)照 15.616.416.717.217.417.618.0西醫(yī)聯(lián)合 15.515.715.916.115.715.114.6利巴韋林 15.415.616.917.117.517.618.1假處理15.715.615.615.415.914.114.0正常對(duì)照 15.316.217.418.318.619.219.4結(jié)果統(tǒng)計(jì)見圖12。
(二)、不同分組動(dòng)物死亡率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表21結(jié)果統(tǒng)計(jì)見圖13。
表21 不同分組動(dòng)物死亡率統(tǒng)計(jì)表藥效試驗(yàn)組 生脈飲 西醫(yī)聯(lián)合 利巴韋林 假處理 正常對(duì)高劑量組 中劑量組 低劑量組 對(duì)照組 對(duì)照組 對(duì)照組組 照組動(dòng)物數(shù) 21 21 21 21 21 2121 21死亡數(shù) 9348 13 6 17 0死亡率(％)42.8 14.2 19.0 38.161.9 28.6 81.00總計(jì) 168(只)(三)不同時(shí)間各個(gè)分組取血后分離血清檢測指標(biāo)1、病毒在Vero細(xì)胞水平的TCID50值(1)試驗(yàn)材料同實(shí)施例2；(2)試驗(yàn)方法同實(shí)施例2；(3)試驗(yàn)結(jié)果如圖14所示，除正常對(duì)照組以外，其他各組均可以檢測到血清中病毒的存在，服用藥物的小鼠血清中病毒滴度下降，具體分析見圖解。
2、血清中心肌酶含量測定(1)試驗(yàn)材料儀器為SABA18型生化分析儀，試劑購買自首都醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)科技中心；(2)試驗(yàn)方法按照生化分析儀及試劑盒說明書進(jìn)行試驗(yàn)。
(3)試驗(yàn)結(jié)果如圖1 5和圖16所示，心肌酶CK-MB和LDH含量在3～7天均有增加，但是增幅不同，具體統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如下表(表22)表22 CK-MB統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)高中 低生脈飲 西醫(yī) 利巴韋林 假處理 正常第1天 6.6 6.76.2 6.8 6.5 5.9 6.7 6.1第3天 9.3 12.5 14.2 19.617.8 11.6 21.37.2第5天 12.9 19.8 22.9 33.131.2 19.0 46.26.9第7天 16.7 22.4 21.8 30.526.4 22.4 34.28.3第9天 10.2 9.711.6 16.517.8 9.1 15.36.2表23 LDH統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)高中低 生脈飲 西醫(yī)利巴韋林 假處理 正常第1天 26.5 25.4 28.423.126.025.5 28.122.6第3天 31.6 42.3 62.568.757.237.8 78.623.5第5天 68.9 52.6 111.9 126.3 98.359.6 132.6 29.8第7天 102.4 132.5 123.5 117.2 153.4 104.2 168.2 22.5第9天 41.3 79.0 98.196.5126.8 71.9 154.2 26.5本發(fā)明提供了一種由三味中藥組成的藥物組合物，即現(xiàn)代中藥復(fù)方，其成分明確，療效可靠，質(zhì)量易控，并提出該藥物組合物的制備方法。同時(shí)結(jié)合病毒性心肌炎在中西醫(yī)方面不同的發(fā)病機(jī)制研究結(jié)果，針對(duì)病毒性心肌炎的病理生理機(jī)制，不僅在早期起到抗病毒的重要作用，而且在病程發(fā)展過程中發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)免疫的效果，從而起到阻止病毒性心肌炎向擴(kuò)張性心肌病及心力衰竭的發(fā)展的作用，在病毒性心肌炎的急性期和慢性期都起到良好的治療作用。
權(quán)利要求
1.一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其有效成分由黃芪、紅景天和苦參制備而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療病毒心肌炎的中藥組合物，其特征在于所述黃芪、紅景天和苦參的重量份數(shù)之比同時(shí)滿足下列條件1〕紅景天∶黃芪為1∶2～2∶1；2〕苦參∶紅景天+黃芪為1∶6～1∶2。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療病毒心肌炎的中藥組合物，其特征在于所述紅景天與黃芪的重量份數(shù)之比為1∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其特征在于所述中藥組合物中還含有藥劑學(xué)可接受的輔料，制成藥劑學(xué)可接受的劑型。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其特征在于所述劑型為口服劑型，包括膠囊、片劑、沖劑、丸劑和散劑等。
6.一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟1〕制備苦參浸膏苦參加10～12倍量60～80％乙醇回流提取2～3小時(shí)，留提取液，剩余部分用60～80％乙醇再次提取2～3小時(shí)，合并兩次的提取液并過濾，減壓濃縮為相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏；2〕制備紅景天和黃芪浸膏紅景天與黃芪以6～12倍量水煎煮1～3小時(shí)，留提取液，剩余部分再以3～12倍量水煎煮0.5～2小時(shí)，合并兩次提取液并過濾，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏；3〕干燥將苦參浸膏與紅景天和黃芪浸膏合并后干燥，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于所述步驟1〕制備苦參浸膏是指苦參加10倍量70％乙醇回流提取3小時(shí)，留提取液，剩余部分用80％乙醇再次提取3小時(shí)，合并兩次的提取液并過濾，減壓濃縮為相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于所述步驟2〕制備紅景天和黃芪浸膏是指紅景天與黃芪以10倍量水煎煮2小時(shí)，留提取液，剩余部分再以8倍量水煎煮1.5小時(shí)，合并兩次提取液并過濾，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.30的浸膏。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或8所述的一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于所述步驟2〕中紅景天與黃芪的重量份數(shù)比為1∶2～2∶1。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于所述步驟3〕中苦參浸膏與紅景天和黃芪浸膏的重量份數(shù)比為1∶6～1∶3。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物及其制備方法，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其有效成分由黃芪、紅景天和苦參制備而成。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供了一種由三味中藥組成的藥物組合物，即現(xiàn)代中藥復(fù)方，其成分明確，療效可靠，質(zhì)量易控，并提出該藥物組合物的制備方法。同時(shí)結(jié)合病毒性心肌炎在中西醫(yī)方面不同的發(fā)病機(jī)制研究結(jié)果，針對(duì)病毒性心肌炎的病理生理機(jī)制，不僅在早期起到抗病毒的重要作用，而且在病程發(fā)展過程中發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)免疫的效果，從而起到阻止病毒性心肌炎向擴(kuò)張性心肌病及心力衰竭的發(fā)展的作用，在病毒性心肌炎的急性期和慢性期都起到良好的治療作用。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1660155SQ20041000632
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2004年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月25日
發(fā)明者惠汝太, 宋曉東, 陳敬洲, 甄一松, 鄒玉寶, 馬平, 祝立新 申請(qǐng)人:惠汝太