專利名稱：緩釋l－精氨酸制劑及其生產(chǎn)和使用方法
相關(guān)申請本申請要求2002年10月24日提交的標(biāo)題為“治療腦血管和心血管疾病和失調(diào)的方法和組合物”的美國臨時專利申請序號60/421,258、2003年9月29日提交的標(biāo)題為“治療腦血管和心血管疾病和失調(diào)的方法和組合物”的美國臨時專利申請序號60/507,312、和2003年10月17日提交的標(biāo)題為“緩釋L-精氨酸制劑及其生產(chǎn)和使用方法”的美國臨時專利申請序號60/XXX,XXX的優(yōu)先權(quán)，上面提到的每一個申請的完整內(nèi)容都被完整并入本文作為參考。
背景技術(shù)：
被稱為一氧化氮合酶(NOS)的一個酶家族從L-精氨酸合成一氧化氮(NO)-一種重要的生物學(xué)第二信使。NOS有幾種不同的同種型，包括組成性NOS(cNOS)和可誘導(dǎo)的NOS(iNOS)。有兩種不同的cNOS表皮NOS(eNOS)和神經(jīng)元NOS(nNOS)。eNOS參與平滑肌松弛、血壓降低，和血小板聚集的抑制的調(diào)節(jié)。eNOS存在于內(nèi)皮細(xì)胞并且在應(yīng)答細(xì)胞Ca2+的受體介導(dǎo)的增加中的短期內(nèi)釋放NO。Michel等人，“一氧化氮合成哪些、哪里、怎樣和為什么？”J.Clin.Invest 1002146-2152(1997)。nNOS對于長期增強是重要的，并且負(fù)責(zé)神經(jīng)元的依賴Ca2+的釋放。iNOS在宿主防御中起作用，并且由免疫應(yīng)答期間活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，在血管平滑肌細(xì)胞中誘導(dǎo)(例如，通過各種細(xì)胞因子、微生物產(chǎn)物，和/或細(xì)菌內(nèi)毒素)，并且一旦表達(dá)就長時間合成NO。
認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞中通過cNOS形成一氧化氮在正常血壓調(diào)節(jié)、防止內(nèi)皮功能異常如高脂血癥、動脈硬化、血栓形成和再狹窄中起重要作用。CNOS是腦和上皮中存在的主要合酶，在功能上，cNOS在基礎(chǔ)條件下有活性并且可以通過細(xì)胞內(nèi)鈣的增加進(jìn)一步刺激，其中細(xì)胞內(nèi)鈣的增加是應(yīng)答受體-介導(dǎo)的激動劑或鈣離子載體而發(fā)生的。CNOS似乎是該酶的“生理”形式并且在生物學(xué)過程的各種組中起作用。體外研究表明一氧化氮自身可以以負(fù)反饋的方式調(diào)節(jié)NOS的活性。在心腦腎血管循環(huán)中，認(rèn)為組成性產(chǎn)生的NO的主要靶標(biāo)是可溶的鳥苷酸環(huán)化酶，其位于血管平滑肌、心肌(肌細(xì)胞)和冠狀血管平滑肌中。
與cNOS相比，可誘導(dǎo)的、依賴鈣的同種型iNOS最初僅在巨噬細(xì)胞中描述?，F(xiàn)在知道一氧化氮合酶的誘導(dǎo)可以應(yīng)答許多其他細(xì)胞類型中的適宜刺激而發(fā)生。該誘導(dǎo)可以在通常不表達(dá)一氧化氮合酶的組成性形式的細(xì)胞，如血管平滑肌細(xì)胞中發(fā)生，還可以在諸如表達(dá)高水平的組成性同種型的心肌的細(xì)胞中發(fā)生。
iNOS在基礎(chǔ)條件下顯示出可忽略不計的活性，但是當(dāng)應(yīng)答諸如脂多糖和某些細(xì)胞因子的因子時，在幾小時時間內(nèi)發(fā)生表達(dá)。該酶的誘導(dǎo)的形式產(chǎn)生比組成性形式大得多的NO量，并且被誘導(dǎo)的NOS似乎是該酶的“病理生理”形式，因為高濃度iNOS產(chǎn)生的NO對細(xì)胞是有毒的。通過糖皮質(zhì)激素和某些細(xì)胞因子可以抑制iNOS的誘導(dǎo)。關(guān)于iNOS的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)知道的相對較少。NO導(dǎo)致的細(xì)胞毒性效果可能很大程度上獨立于鳥苷酸環(huán)化酶和環(huán)GMP形成。在該領(lǐng)域的大部分研究集中于使用L-精氨酸的各種衍生物刺激iNOS抑制劑。
NO是在NOS催化的反應(yīng)中從分子氧和L-精氨酸的胍基氮合成的相對穩(wěn)定的自由基。在許多組織和細(xì)胞類型中發(fā)現(xiàn)該酶，這些細(xì)胞類型包括神經(jīng)元、巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、血管的內(nèi)皮細(xì)胞，和腎的上皮細(xì)胞。NO在其釋放點附近作用，進(jìn)入靶細(xì)胞并活化胞質(zhì)溶膠酶鳥苷酸環(huán)化酶，鳥苷酸環(huán)化酶催化第二信使環(huán)GMP(cGMP)的形成。在NO形成的數(shù)秒內(nèi)，其經(jīng)歷氧化成亞硝酸鹽或硝酸鹽。David L.Nelson，Michael M.Cox，Lehninger Principles of Biochemistry，892頁，第三版Worth Publishers，2000。
在應(yīng)答各種血管活性劑，甚至生理刺激時，內(nèi)皮細(xì)胞釋放一種稱為內(nèi)皮細(xì)胞衍生的松弛因子(EDRF)的短命血管舒張劑(也稱作內(nèi)皮細(xì)胞來源的一氧化氮(EDNO)。炎癥和血小板聚集的產(chǎn)物如5-羥色胺、組胺、緩激肽、嘌呤和凝血酶通過刺激NO的釋放發(fā)揮它們的所有或部分作用。松弛的依賴內(nèi)皮細(xì)胞的機理在各種血管床，包括冠狀循環(huán)中是重要的。Hobbs等人，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.39191-220(1999)。NO可容易地擴(kuò)散到下面的平滑肌并通過活化鳥苷酸環(huán)化酶而增加cGMP濃度，從而誘導(dǎo)血管平滑肌的松弛。
NO負(fù)責(zé)依賴內(nèi)皮細(xì)胞的松弛和可溶的鳥苷酸環(huán)化酶的活化、中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)傳遞，和活化的巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒性。在維管結(jié)構(gòu)中，EDNO具有幾種作用，其中包括血小板聚集的抑制、炎癥細(xì)胞的粘附，和平滑肌細(xì)胞的增殖。具體地，EDNO是血管緊張度的重要調(diào)節(jié)劑。而且，依賴流動的舒張(一種常用的內(nèi)皮功能指數(shù))很大程度上受到NO的介導(dǎo)。
對內(nèi)襯維管結(jié)構(gòu)的內(nèi)皮細(xì)胞的刺激，如乙酰膽堿、緩激肽、剪切力，等等啟動NO對血管緊張度的調(diào)節(jié)機理。通過這些內(nèi)皮細(xì)胞中所含eNOS的催化活性從L-精氨酸產(chǎn)生NO。所產(chǎn)生的NO離開內(nèi)皮細(xì)胞并刺激鄰近平滑肌細(xì)胞中鳥苷酸環(huán)化酶活性。鳥苷酸環(huán)化酶的活化增加了cGMP水平并導(dǎo)致平滑細(xì)胞松弛，從而擴(kuò)張血管并增加血流。Moncada等人，New Eng.J.Med.3292002-2012(1993)；Vallance等人，J.Royl.Coll.Physician London 28209-219(1994)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療和預(yù)防血管疾病和失調(diào)的方法，這些血管疾病和失調(diào)包括，但不限于，心血管、腦血管、和外周血管疾病和失調(diào)。本發(fā)明至少部分基于如下發(fā)現(xiàn)，即HMG-CoA還原酶抑制劑與L-精氨酸的緩釋制劑共同施用在治療和預(yù)防血管疾病和失調(diào)，尤其降低膽固醇和甘油三酯中具有協(xié)同效果。此外，本發(fā)明提供了L-精氨酸的緩釋制劑和生產(chǎn)方法，該制劑和生產(chǎn)方法使得組合物具有最佳釋放分布圖。此外，該制劑和生產(chǎn)方法使得組合物可以被方便地壓縮，但是不會過分易碎。
一方面，本發(fā)明提供了降低受試者中膽固醇的方法，該方法包括對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和含有L-精氨酸的緩釋制劑。在各種實施方案中，該方法降低總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL)膽固醇和/或甘油三酯水平。此外，該方法增加了高密度脂蛋白(HDL)膽固醇。而且，該方法降低總膽固醇、LDL膽固醇和/或甘油三酯水平，和/或增加HDL水平的程度比僅施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用L-精氨酸的程度更大。
另一方面，本發(fā)明提供了通過施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸使不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中一氧化氮的產(chǎn)生增加的方法。在另一方面，本發(fā)明提供了通過施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸使不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中血管舒張增強的方法。在這些方面的各種實施方案中，L-精氨酸作為緩釋制劑存在。在其他實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑是辛伐他汀。在某些實施方案中，受試者患有內(nèi)皮功能異常。在本發(fā)明的這些方面的其他實施方案中，該方法增強內(nèi)皮功能。
另一方面，本發(fā)明提供了通過對受試者施用L-精氨酸使該不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中一氧化氮(NO)產(chǎn)生的增加的方法，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制效果。在另一方面，本發(fā)明提供了通過對受試者施用L-精氨酸使該不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中血管舒張增強的方法，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制效果。在本發(fā)明的這些方面的各種實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀)與L-精氨酸共同施用。在某些實施方案中，L-精氨酸作為緩釋制劑存在。在本發(fā)明這些方面的其他實施方案中，該方法增強了內(nèi)皮功能。
另一方面，本發(fā)明提供了緩釋L-精氨酸組合物，其包括按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；按重量計約2％到約20％微晶纖維素；按重量計約3％以下的二氧化硅，和按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。在具體實施方案中，該組合物包含按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸為L-精氨酸單鹽酸鹽；按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；按重量計約10％微晶纖維素；按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅為膠態(tài)二氧化硅；和按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
另一方面，本發(fā)明提供了制備L-精氨酸的緩釋制劑的方法，該方法包括用?；瘎┝；疞-精氨酸以形成粒劑；濕潤磨碎該粒劑；干燥粒劑；干燥磨碎粒劑；并將該粒劑與至少一種緩釋制劑混合。在各種實施方案中，混合步驟可以包括預(yù)混合、混合和最終混合粒劑。在另一實施方案中，該方法可以包括粒化步驟前將L-精氨酸與結(jié)合劑干燥混合。該結(jié)合劑可以是聚乙烯吡咯烷酮。
在本發(fā)明該方面的具體實施方案中，該方法可以包括?；疞-精氨酸，其中L-精氨酸按重量計為緩釋制劑的約50％，?；瘎┌ň垡蚁┻量┩橥渲芯垡蚁┻量┩橥粗亓坑嫗榫忈屩苿┑募s3％到約4％；濕潤磨碎該粒劑；干燥粒劑；干燥磨碎粒劑；并將該粒劑與羥丙基甲基纖維素混合，其中羥丙基甲基纖維素按重量計為緩釋制劑的約35％。該方法可以還包括將粒劑與微晶纖維素、膠態(tài)二氧化硅和硬脂酸鎂混合，其中微晶纖維素按重量計為緩釋制劑的約10％，其中膠態(tài)二氧化硅為緩釋制劑的約1％以下，并且其中硬脂酸鎂按重量計為緩釋制劑的約1％以下。
另一方面，本發(fā)明提供了含有L-精氨酸的緩釋制劑(例如，L-精氨酸的緩釋顆粒)的食物棒，其用于治療或預(yù)防血管疾病或失調(diào)。該食物棒可以還含有HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀)。在各種實施方案中，該食物棒降低膽固醇、降低C-反應(yīng)蛋白，可治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病，和/或可治療或預(yù)防間歇性跛行。
另一方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療受試者中血管疾病或失調(diào)的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。在再一方面，本發(fā)明提供了降低受試者中膽固醇的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。在再一方面，本發(fā)明提供了增加受試者中一氧化氮的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。另一方面，本發(fā)明提供了增加受試者中血管舒張的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。另一方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防受試者中阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。在其他方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防受試者中間歇性跛行的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。在再一方面，本發(fā)明提供了降低受試者中C-反應(yīng)性蛋白的方法，該方法包括受試者施用含有L-精氨酸緩釋制劑的食物棒。在本發(fā)明前面方面的一些實施方案中，食物棒還可以含有HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀)。
另一方面，本發(fā)明提供了降低受試者中膽固醇的方法，該方法包括對受試者施用L-精氨酸緩釋制劑。在各種實施方案中，該方法可以降低受試者中的總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL)膽固醇，和/或甘油三酯，和/或增加高密度脂蛋白(HDL)膽固醇。在其他方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括對受試者施用L-精氨酸緩釋制劑。在再一方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防中間歇性跛行的方法，該方法包括對受試者施用L-精氨酸緩釋制劑。在再一方面，本發(fā)明提供了降低C-反應(yīng)性蛋白的方法，該方法包括受試者施用L-精氨酸(例如，緩釋L-精氨酸)。在本發(fā)明前面方面的一些實施方案中，緩釋制劑包括按重量計約25％到約75％的L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；按重量計約2％到約20％微晶纖維素；按重量計約3％以下的二氧化硅，和按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。在具體實施方案中，該組合物包含按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸為L-精氨酸單鹽酸鹽；按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；按重量計約10％微晶纖維素；按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅為膠態(tài)二氧化硅；和按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
在各種其他方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防血管疾病或失調(diào)的方法、治療或預(yù)防動脈粥樣硬化的方法、增加血管舒張的方法，和/或增加一氧化氮產(chǎn)生的方法，該方法包括對受試者施用緩釋制劑，該緩釋制劑包括按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；按重量計約2％到約20％微晶纖維素；按重量計約3％以下的二氧化硅，和按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。在前面方面的具體實施方案中，該組合物包含按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸為L-精氨酸單鹽酸鹽；按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；按重量計約10％微晶纖維素；按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅為膠態(tài)二氧化硅；和按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
另一方面，本發(fā)明提供了降低受試者中C-反應(yīng)性蛋白的方法，該方法包括對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的緩釋制劑。該方法與僅施用HMG-CoA還原酶抑制劑，或僅施用L-精氨酸相比更大程度地降低受試者中C-反應(yīng)性蛋白。
根據(jù)下面的詳細(xì)描述和權(quán)利要求，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將是明顯的。
附圖簡述

圖1是描繪含有L-精氨酸和辛伐他汀的制劑的釋放模式的曲線圖。
圖2是用L-精氨酸和辛伐他汀處理的小鼠腦和未處理的小鼠腦中梗死大小的NMR圖像照片。
圖3是描繪用L-精氨酸、辛伐他汀，和L-精氨酸和辛伐他汀兩者處理的小鼠中梗死體積的條形圖。
圖4是描繪用L-精氨酸和各種水平的辛伐他汀處理的小鼠中梗死體積的條形圖。
圖5是描繪生產(chǎn)緩釋L-精氨酸片劑的方法的流程圖。
圖6是描繪生產(chǎn)緩釋L-精氨酸片劑的方法的流程圖。
圖7是比較緩釋L-精氨酸制劑的性能的條形圖。
圖8是比較辛伐他汀與或不與本發(fā)明的緩釋L-精氨酸組合物的施用對人中依賴內(nèi)皮的血管舒張的影響的圖。
圖9是概述辛伐他汀和本發(fā)明的緩釋L-精氨酸組合物的施用對人中膽固醇水平的協(xié)同作用的圖。
圖10是闡明辛伐他汀對培養(yǎng)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)和未處理的培養(yǎng)的HAEC的影響的條形圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了治療和預(yù)防血管疾病和失調(diào)的方法，這些血管疾病和失調(diào)包括，但不限于，心血管、腦血管、和外周血管疾病和失調(diào)。本發(fā)明至少部分基于如下發(fā)現(xiàn)，即HMG-CoA還原酶抑制劑與L-精氨酸的緩釋制劑共同施用在治療和預(yù)防血管疾病和失調(diào)(包括腦血管、心血管和外周血管疾病和失調(diào))，尤其降低膽固醇方面具有協(xié)同效果。此外，緩釋L-精氨酸和任選地，HMG-CoA還原酶抑制劑，可用于增加血管舒張、增加NO產(chǎn)生，和降低C-反應(yīng)性蛋白。在另一實施方案中，此處描述的制劑和方法可用于延緩在例如處于發(fā)生血管疾病或失調(diào)和/或事件發(fā)生的危險中的群體中該疾病、失調(diào)和/或事件的發(fā)作。HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸緩釋制劑可以順序地或同時施用于該受試者。該還原酶抑制劑和L-精氨酸可以包含在單一制劑中。
此外，本發(fā)明提供了L-精氨酸的緩釋制劑和生產(chǎn)方法，該緩釋制劑和生產(chǎn)方法使得組合物具有最佳釋放分布圖。此外，該制劑和生產(chǎn)方法使得組合物可以被方便地壓縮，但是不會過分易碎。
在一個實施方案中，用于本發(fā)明的方法的制劑含有至少一種緩釋劑(對本發(fā)明來說，控釋和緩釋可以互換使用)，例如，內(nèi)皮一氧化氮合酶的至少一種緩釋激動劑(例如，HMG-CoA還原酶抑制劑和/或一氧化氮前體，如L-精氨酸)。在另一實施方案中，L-精氨酸被緩慢釋放到受試者的系統(tǒng)中。L-精氨酸的緩釋在血漿中產(chǎn)生的L-精氨酸的藥物動力學(xué)圖譜，該藥物動力學(xué)圖譜為NOS提供產(chǎn)生NO所需的L-精氨酸的基本上恒定的供應(yīng)。因此，該制劑可以緩慢地在體內(nèi)溶解并在一段時間內(nèi)釋放L-精氨酸的基本上一致的量，其對于受試者是治療有效的。在另一實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑被緩慢釋放到受試者的系統(tǒng)中。在再一實施方案中，NO的產(chǎn)生在長時間內(nèi)基本上一致。
在本發(fā)明的另一方面，以食物的形式提供了用于治療血管疾病(包括，但不限于，心血管、腦血管、外周血管疾病和失調(diào))、間歇性跛行、關(guān)鍵肢局部缺血，和阿爾茨海默氏病的組合物。食物形式的這些組合物也可用于增加血管舒張、增加NO產(chǎn)生和降低膽固醇。優(yōu)選地，食物為棒狀食物，如處方健康棒狀食物的形式。使用食物使得可以提供的L-精氨酸的量比可以摻入單個片劑的量更大。本發(fā)明提供了棒狀食物，其可以提供1克以上L-精氨酸以及其他試劑(如果希望)。在一個實施方案中，L-精氨酸作為速釋制劑，例如L-精氨酸的速釋粒劑加入到食物棒中。在另一實施方案中，棒狀食物包括緩釋制劑，其包括，例如，L-精氨酸的緩釋粒劑。在另一實施方案中，棒狀食物還含有額外的試劑，如HMG-CoA還原酶抑制劑。優(yōu)選地，HMG-CoA還原酶抑制劑是斯特汀，如辛伐他汀。
定義在進(jìn)一步描述本發(fā)明前，為了方便起見，在這里收集了用于本說明書、實施例和權(quán)利要求書中的某些術(shù)語。
如此處所用的，除非另外指出，術(shù)語“受試者”包括哺乳動物。術(shù)語“哺乳動物”包括，但不限于，狗、貓、牛、馬、豬，和人。
如此處所用的，術(shù)語“治療”等等指對患者應(yīng)用或施用治療劑，或者對從患者分離的組織應(yīng)用或施用治療劑或制劑，該患者患有疾病或失調(diào)，疾病或失調(diào)的癥狀，或者疾病或失調(diào)的傾向，目的是治愈、治療、減輕、解除、改變、補救、預(yù)防、改善、延遲疾病或失調(diào)和/或事件的發(fā)作，延緩疾病或失調(diào)的惡化，改善或影響該疾病或失調(diào)、疾病或失調(diào)的癥狀，或者疾病或失調(diào)和/或事件的誘因。
如此處所用的，術(shù)語“血管疾病”或“血管失調(diào)”通常指血管的疾病或失調(diào)并且包括，但不限于，心血管、腦血管，和外周血管疾病或失調(diào)。心血管疾病指心臟的血管的疾病。見，例如，Kaplan，R.M.，等人，″心血管疾病″，Health and Human Behavior，206-242頁(McGraw-Hill，New York 1993)。心血管疾病同時是幾種形式之一，包括，例如，高血壓(也稱為高血液壓)、冠心病、中風(fēng)，和風(fēng)濕性心臟病。外周血管疾病或失調(diào)指心臟外任何血管的疾病。例如，外周血管疾病可以指將血液攜帶到腿和臂肌肉的血管變窄。腦血管疾病指影響血管向腦供血的能力的疾病。
術(shù)語“動脈粥樣硬化”包括在醫(yī)學(xué)相關(guān)領(lǐng)域中從業(yè)的醫(yī)生識別和理解的血管疾病，失調(diào)和病癥。動脈粥樣硬化心血管病、冠心病(也稱為冠狀動脈病或缺血性心臟病)、腦血管病和外周血管病都是動脈粥樣硬化的臨床表現(xiàn)并且因此被術(shù)語“動脈粥樣硬化”和“動脈粥樣硬化病”所包括。
如此處所用的術(shù)語“共同施用”當(dāng)用于描述對受試者施用兩種或多種化合物時指可以通過相同或不同途徑施用的化合物被同時(例如，作為混合物)或者順序施用，從而每種化合物的藥理學(xué)效果在時間上重疊。如此處所用的，除非另外說明，當(dāng)應(yīng)用于至少兩種化合物的施用時，術(shù)語“順序地”指施用化合物使得每種化合物的藥理學(xué)效果在時間上重疊。在某些實施方案中，試劑基本上被同時施用?！盎旧贤瑫r地”指本發(fā)明的制劑施用于受試者與至少一種額外的試劑的施用在時間上足夠接近，從而這些試劑可以發(fā)揮相加的或甚至協(xié)同的作用，例如，但不限于，增加NOS活性、NO產(chǎn)生，或血管舒張。
如此處所用的，術(shù)語“NO的前體”包括天然NO的任何底物前體，例如，L-賴氨酸。
如此處所用的術(shù)語“天然NO”指通過L-精氨酸的生物轉(zhuǎn)化或依賴L-精氨酸的途徑產(chǎn)生的一氧化氮。術(shù)語“內(nèi)皮來源的松弛因子(EDRF”或“內(nèi)皮細(xì)胞來源一氧化氮(EDDO)”可以與“天然NO”互換使用。
如此處所用的術(shù)語“L-精氨酸”指L-精氨酸和所有其生化等價物，例如，L-精氨酸鹽酸鹽、前體、和其堿性形式，它們作為NOS的底物，導(dǎo)致NO產(chǎn)生增加。該術(shù)語包括L-精氨酸的藥學(xué)上可接受的鹽。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指從藥學(xué)上可接受的無毒酸或堿制備的鹽，這些無毒酸或堿包括無機酸和堿或有機酸和堿。適宜的無毒酸包括無機和有機酸，如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、pamoic、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對-甲苯磺酸，等等。尤其優(yōu)選鹽酸、氫溴酸、磷酸和硫酸，最尤其優(yōu)選鹽酸鹽。
因為用于本發(fā)明方法的L-精氨酸是堿性和酸性的，所以可從藥學(xué)上可接受的無毒酸或堿制備鹽，這些酸或堿包括無機和有機酸或無機和有機堿。這些鹽可含有下面的陰離子的任一種乙酸根、苯磺酸根、苯甲酸根、樟腦磺酸根、檸檬酸根、反丁烯二酸根、葡萄糖酸根、氯離子、乳酸根、馬來酸根、粘酸根、硝酸根、雙羥萘酸根、磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根，等等。尤其優(yōu)選苯磺酸根、溴離子、氯離子、和硫酸根。這些鹽還可以含有下面的陽離子鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅、芐星(benzathine)、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺和普魯卡因。
如此處所用的術(shù)語“激動劑”或“eNOS或cNOS的激動劑”指刺激底物如，例如，L-精氨酸向NO的生物轉(zhuǎn)化的試劑。eNOS或cNOS的激動劑包括，例如，HMG-CoA還原酶抑制劑?！癏MG-CoA還原酶(3-羥基-2-甲基戊二酰-輔酶A)”是催化膽固醇生物合成中的限速反應(yīng)的微生物酶?！癏MG-CoA還原酶抑制劑”抑制HMG-CoA還原酶。HMG-CoA還原酶抑制劑也被稱作“斯特汀”。
文獻(xiàn)中描述了天然或合成得到的許多化合物，它們抑制HMG-CoA還原酶并且被稱為“斯特汀”，并且形成用于實施本發(fā)明的試劑類別。實例包括，但不限于，通過商業(yè)途徑可得到的那些，如辛伐他汀(美國專利號4,444,784)、洛弗斯特丁(美國專利號4,231,938)、普伐他汀鈉(美國專利號4,346,227)、氟伐地汀(美國專利號4,739,073)、托伐他汀(美國專利號5,273,995)、西伐他丁、rosuvastatin、和許多其他的，諸如美伐他汀、dalvastatin、美伐他汀、氟伐他汀、pitavastatin、HR-780、GR-95030、CI 980、BMY 22089、BMY 22566和在例如，美國專利號5,622,985、美國專利號5,135,935、美國專利號5,356,896、美國專利號4,920,109、美國專利號5,286,895、美國專利號5,262,435、美國專利號5,260,332、美國專利號5,317,031、美國專利號5,283,256、美國專利號5,256,689、美國專利號5,182,298、美國專利號5,369,125、美國專利號5,302,604、美國專利號5,166,171、美國專利號5,202,327、美國專利號5,276,021、美國專利號5,196,440、美國專利號5,091,386、美國專利號5,091,378、美國專利號4,904,646、美國專利號5,385,932、美國專利號5,250,435、美國專利號5,132,312、美國專利號5,130,306、美國專利號5,116,870、美國專利號5,112,857、美國專利號5,102,911、美國專利號5,098,931、美國專利號5,081,136、美國專利號5,025,000、美國專利號5,021,453、美國專利號5,017,716、美國專利號5,001,144、美國專利號5,001,128、美國專利號4,997,837、美國專利號4,996,234、美國專利號4,994,494、美國專利號4,992,429、美國專利號4,970,231、美國專利號4,968,693、美國專利號4,963,538、美國專利號4,957,940、美國專利號4,950,675、美國專利號4,946,864、美國專利號4,946,860、美國專利號4,940,800、美國專利號4,940,727、美國專利號4,939,143、美國專利號4,929,620、美國專利號4,923,861、美國專利號4,906,657、美國專利號4,906,624和美國專利號4,897,402中描述的那些試劑，這些專利在此處都被并入作為參考。本發(fā)明的方法中還可以使用兩種或多種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合。
如此處所用的術(shù)語“eNOS活性”指細(xì)胞從底物L(fēng)-精氨酸產(chǎn)生NO的能力?？梢砸栽S多不同的方法實現(xiàn)eNOS活性增加。例如，eNOS蛋白的量的增加或者該蛋白質(zhì)活性的增加(然而保持該蛋白質(zhì)的恒定水平)可導(dǎo)致增加的“活性”。可利用的蛋白質(zhì)的量的增加來自，例如并且不限于，eNOS基因的增加的轉(zhuǎn)錄、eNOS mRNA的增加的翻譯、eNOSmRNA的增加的穩(wěn)定性、eNOS的活化，或eNOS蛋白質(zhì)降解的減少。
也可以以許多不同方法測量細(xì)胞或組織中eNOS活性。一種直接的測量是測量存在的eNOS的量。另一種直接測量是測量通過eNOS使L-精氨酸向瓜氨酸轉(zhuǎn)化的量或者在特定條件，如組織的生理條件下通過eNOS產(chǎn)生的一氧化氮的量。還可以間接測量eNOS活性，例如通過測量mRNA半壽期(上游指示劑)或通過對NO存在的表型應(yīng)答(下游指示劑)可以實施該間接測量。用于本領(lǐng)域的一種表型測量是測量應(yīng)答乙酰膽堿的依賴內(nèi)皮的松弛，該應(yīng)答受到eNOS活性的影響。利用NO計可以測量樣品中存在的NO水平。所有前面的技術(shù)都是本領(lǐng)域中普通技術(shù)人員熟知的。
本發(fā)明的方法通過導(dǎo)致NO產(chǎn)生的增加而不僅允許重建eNOS活性的正常基線水平，而且允許增加高于正?；€水平的這種活性。正?；€水平是正常對照組中的活性的量，其受到年齡的控制并且沒有指示內(nèi)皮細(xì)胞NOS活性改變(如低氧條件、高脂血癥，等等)的癥狀。實際水平將取決于所選的具體年齡組和用于評估活性的具體測量方法。在異常環(huán)境中，內(nèi)皮細(xì)胞NOS活性(和NO產(chǎn)生)降低到正常水平以下。因此，本發(fā)明的制劑不僅可以恢復(fù)這些異常條件中NO產(chǎn)生的正?；€水平，而且可以使內(nèi)皮細(xì)胞NOS活性(和NO產(chǎn)生)增加到遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正?；€水平以上。
術(shù)語“載體”指用于制備藥物組合物的混合物的稀釋劑、賦形劑，等等。
如此處所用的，術(shù)語“劑型”指藥物組合物，其含有用于以單一或多個劑量施用于受試者，例如患者的活性成分的適宜量。
如此處所用的術(shù)語“mg/Kg”指每Kg受試者體重試劑的mg。
如此處所用的，除非另外說明，術(shù)語“半壽期”指生物的血漿中藥物的濃度降低到施用時該藥物濃度的約一半所花費的時間。
如此處所用的，除非另外說明，術(shù)語“立即釋放”指沒有外在因素延遲一種或多種藥物的體外釋放。
如此處所用的，術(shù)語“藥物組合物”或“藥物制劑”在此處互換使用，指含有藥學(xué)上可接受的成分的組合物。
如此處所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”指一種制劑類型，該制劑類型將被聯(lián)邦或州政府的管理機構(gòu)評審并且可能通過或者在美國藥典或者其他公認(rèn)的藥典中列出用于動物中，更尤其用于人。
如此處所用的，除非另外說明，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”指一種載體介質(zhì)，其不干擾活性成分的生物活性的有效性并且對其所施用的受試者無毒性。藥學(xué)活性制劑的這種介質(zhì)或試劑的用途是本領(lǐng)域中熟知的。除了與該活性化合物不相容的常規(guī)介質(zhì)或試劑之外，考慮用于本發(fā)明的方法中的制劑中使用任一常規(guī)介質(zhì)或試劑。
如此處所用的，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指從藥學(xué)上可接受的無毒酸，包括無機酸和有機酸，制備的鹽。
如此處所用的，除非另外說明，術(shù)語“緩釋”被定義為一種或多種藥物的長期釋放模式，從而藥物在一段時間內(nèi)釋放。對于本發(fā)明，緩釋和控釋可互換使用。
如此處所用的，除非另外說明，術(shù)語“鹽或復(fù)合物”用于描述含有兩種或多種化學(xué)部分的化合物或組合物，這兩種或多種化學(xué)部分通過至少一種類型的相互作用結(jié)合，這些相互作用包括，但不限于，范德華力、離子和/或氫鍵。鹽或復(fù)合物可以作為固體存在或者存在于液體中。
如此處所用的術(shù)語“重量百分?jǐn)?shù)”當(dāng)用于描述制劑中的組分的量時指基于該制劑中所有組分的重量的特定組分的重量。
在下面的小節(jié)中進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的各方面I.用于治療或預(yù)防腦血管和心血管疾病和失調(diào)的方法中的制劑本發(fā)明的方法包括治療和預(yù)防受試者，例如人中腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)的方法，該方法包括對受試者同時或順序地施用含有HMG-CoA還原酶抑制劑的制劑和含有L-精氨酸的制劑。備選地，對受試者施用含有L-精氨酸和HMG-CoA還原酶抑制劑的單一制劑。
本發(fā)明的一個實施方案包括緩釋制劑形式的L-精氨酸制劑、緩釋制劑形式的HMG-CoA還原酶抑制劑制劑、或者緩釋制劑形式的L-精氨酸和HMG-CoA還原酶抑制劑的制劑。在一個實施方案中，本發(fā)明包括含有L-精氨酸的制劑，其可以同時或順序地與至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑施用，其中該制劑在長時間內(nèi)以基本上恒定的濃度釋放L-精氨酸并且HMG-CoA還原酶抑制劑存在于立即釋放制劑中。在另一實施方案中，本發(fā)明包括含有高濃度L-精氨酸并且為緩釋制劑形式的制劑，其中藥物動力學(xué)圖譜為0級釋放動力學(xué)(即，隨時間線性釋放速度)。可以修飾兩類藥物的釋放特征以提供釋放模式，該釋放模式允許該聯(lián)合適于作為每天一次的單個單位劑量。
在一個實施方案中，用于本發(fā)明方法中的制劑含有治療有效量的L-精氨酸、治療有效量的HMG-CoA還原酶抑制劑，和至少一種緩釋劑。
該制劑還可以包括為了施用、保存、美觀等修飾該制劑所需的額外的成分。在一個實施方案中，本發(fā)明的制劑還包括結(jié)合劑、填充劑和潤滑劑。在優(yōu)選實施方案中，該制劑含有緩釋L-精氨酸配方，該配方包括L-精氨酸、結(jié)合劑、一種或多種緩釋劑、助流劑，和緩釋劑或潤滑劑。該制劑可以還含有填充劑和/和壓縮劑。本發(fā)明的緩釋制劑尤其有利，因為它們的釋放圖譜允許施用比立即釋放或者通過商業(yè)途徑可得到的緩釋劑更低的劑量而保持相同的藥物水平。因為緩釋L-精氨酸與斯特汀的施用還可以增加斯特汀，例如，辛伐他汀的有效性，所以本發(fā)明制劑的使用還可以允許斯特汀的更低劑量而具有等價的有益效果。
通過技術(shù)人員公知的許多來源可以得到L-精氨酸。例如，通過商業(yè)途徑從包括Sigma-Aldrich(Milwaukee，WI)的各種途徑可以得到USP級L-精氨酸。適宜的精氨酸和精氨酸衍生化合物包括，但不限于，精氨酸鹽，如精氨酸鹽酸鹽、精氨酸天冬氨酸鹽，或精氨酸煙酸鹽。其他精氨酸化合物或衍生物可選自二肽，其包括精氨酸如丙氨酰精氨酸(ALA-ARG)、纈氨酰-精氨酸(VAL-ARG)、異亮氨酰-精氨酸(ISO-ARG)、和亮氨酰-精氨酸(LEU-ARG)，和包含精氨酸的三肽如精氨酰-賴氨酰-谷氨酸(ARG-LYS-GLU)和精氨酰-甘氨酰-精氨酸(ARG-GLY-ARG)。L-精氨酸優(yōu)選為L-精氨酸單鹽酸鹽。
在一個實施方案中，L-精氨酸按重量計為制劑的約10％到約75％。在另一個實施方案中，L-精氨酸按重量計為制劑的約25％到約75％。在優(yōu)選實施方案中，L-精氨酸按重量計為制劑的約50％。
一種或多種緩釋劑的使用允許在更長時間內(nèi)緩慢釋放L-精氨酸和/或HMG-CoA還原酶抑制劑。例如，緩釋劑將以一定速度釋放L-精氨酸，該速度將不會導(dǎo)致濃度尖峰或低谷，這種濃度尖峰或低谷將使得與血流中L-精氨酸的高濃度或低濃度有關(guān)的副作用加劇。適于用于本發(fā)明的方法的制劑的緩釋劑包括水合劑，例如，諸如纖維素，其當(dāng)與水性環(huán)境接觸時部分水合而形成凝膠狀屏障，該屏障阻礙水合劑所包被的試劑的溶解。換句話說，緩釋劑形成暫時的水屏障從而水被緩慢吸收到制劑，從而水合該制劑并隨后以沒有緩釋劑的制劑低得多的速度釋放活性成分，例如，L-精氨酸。此外，緩釋劑存在于顆粒大小中，當(dāng)該顆粒被摻入膠囊或者壓制或壓縮成片劑、丸劑或gelcap時，水緩慢滲透到該結(jié)構(gòu)。
在一個實施方案中，一種或多種緩釋劑包括，但不限于，纖維素醚產(chǎn)物、聚甲基丙烯酸甲酯或聚乙烯醇。在另一實施方案中，緩釋劑包括纖維素，其包括，但不限于甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或它們的組合。在優(yōu)選實施方案中，緩釋劑包括一種或多種羥丙基甲基纖維素。適宜的緩釋劑可通過商業(yè)途徑從The DowChemical Company以商標(biāo)名METHOCEL和ETHOCEL得到。在優(yōu)選實施方案中，緩釋劑為METHOCELK100M CR Premium和/或METHOCELE4M CR Premium。
緩釋劑通常以足夠的量存在以在所希望的時間內(nèi)釋放活性成分，例如，L-精氨酸或HMG-CoA還原酶抑制劑。在一個實施方案中，所存在的緩釋劑按重量計為制劑的約5％到約40％。在另一個實施方案中，所存在的緩釋劑按重量計為約5％到約75％。在再一個實施方案中，所存在的緩釋劑按重量計為制劑的約15％到約50％。在優(yōu)選實施方案中，所存在的緩釋劑按重量計為制劑的約35％。上面范圍內(nèi)的所有范圍都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在一個實施方案中，緩釋劑在10小時內(nèi)釋放L-精氨酸，如圖1中描繪。在一個實施方案中，緩釋劑在約4小時到約24小時內(nèi)基本上一致地釋放L-精氨酸。在另一個實施方案中，本發(fā)明的制劑在約8小時到約24小時內(nèi)基本上一致地釋放L-精氨酸。在再一個實施方案中，緩釋L-精氨酸制劑在約12小時到約48小時內(nèi)基本上一致地釋放L-精氨酸。
在另一個實施方案中，用于本發(fā)明方法中的制劑將以一種方式釋放精氨酸以提供藥物動力學(xué)圖譜，其中半壽期(T1/2)和Tmax足夠保持L-精氨酸在基本上恒定的水平上。換句話說，在一個實施方案中，本發(fā)明的緩釋制劑釋放L-精氨酸從而實現(xiàn)了循環(huán)L-精氨酸的穩(wěn)態(tài)并且該穩(wěn)態(tài)保持恒定。在一個實施方案中，藥物動力學(xué)圖譜為使得T1/2為約4小時到約12小時并且Tmax為約4小時。在再一個實施方案中，T1/2為約4小時到約8小時并且Tmax為約4小時。
用于本發(fā)明的結(jié)合劑包括技術(shù)人員通常公知的那些結(jié)合劑。結(jié)合劑包括，但不限于，糖，如乳糖、蔗糖、葡萄糖、右旋糖和糖蜜；天然的和合成的樹膠，如阿拉伯樹膠、瓜爾膠、藻酸鈉、愛爾蘭苔蘚的提取物、panwar樹膠，和ghatti樹膠；其他結(jié)合劑包括聚環(huán)氧乙烷和聚乙二醇的混合物、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素(HPC)、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、褐藻酸、乙基纖維素、微晶纖維素、卡波母、玉米醇溶蛋白、淀粉、糊精、麥芽糊精、明膠、預(yù)明膠化淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚烯吡酮，和它們的混合物。在優(yōu)選實施方案中，結(jié)合劑是聚乙烯吡咯烷酮均聚物。
在一個實施方案中，所存在的結(jié)合劑按重量計為制劑的約20％以下。在另一實施方案中，所存在的結(jié)合劑按重量計為制劑的約0.5％到約5％。在優(yōu)選實施方案中，所存在的結(jié)合劑按重量計為制劑的約3％到約4％。
在優(yōu)選實施方案中，緩釋L-精氨酸制劑還包括助流劑。助流劑可以是任一種公知的UPS級助流劑，包括，例如，二氧化硅。在優(yōu)選實施方案中，助流劑是膠態(tài)二氧化硅。
在一個實施方案中，所存在的助流劑按重量計為制劑的約3％以下。在另一實施方案中，所存在的助流劑按重量計為制劑的約2％以下。在優(yōu)選實施方案中，所存在的助流劑按重量計為制劑的約1％以下。
用于制劑中的填充劑包括技術(shù)人員通常公知的那些填充劑。典型的填充劑包括，但不限于，糖，如乳糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇，和山梨醇、乳清、二堿磷酸鈣、三堿磷酸鈣、硫酸鈣，和它們的混合物。其他填充劑包括但不限于，纖維素制劑，諸如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍樹膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮，和它們的混合物。微晶纖維素還可以作為壓縮劑以及填充劑。在優(yōu)選實施方案中，填充劑/壓縮劑是微晶纖維素。更優(yōu)選地，微晶纖維素由The Dow ChemicalCompany以AVICELPH 102名稱出售。
在一個實施方案中，所存在的填充劑按重量計為制劑的約50％以下。在另一實施方案中，所存在的填充劑按重量計為制劑的約2％到約20％。在優(yōu)選實施方案中，所存在的填充劑按重量計為制劑的約10％。
可以加入賦形劑以增加制劑中存在的固體的量。通常聯(lián)合用于該目的的賦形劑包括磷酸鈉或鉀、碳酸鈣、磷酸鈣、氯化鈉、檸檬酸、酒石酸、明膠，和碳水化合物諸如右旋糖、蔗糖、乳糖、山梨醇、肌醇、甘露醇和葡聚糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠，和聚合物，諸如聚乙二醇。除了指出提到的那些，其他的是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
用于該制劑中的釋放劑或潤滑劑包括技術(shù)人員通常所公知的那些。典型的潤滑劑包括，但不限于，硬脂酸鹽、硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸鈣、硬脂酸、氫化植物油(例如，氫化棉花子油)、硬脂酰延胡索酸鈉、棕櫚酰硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、苯甲酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鎂、礦物油、滑石，和它們的混合物。在優(yōu)選實施方案中，潤滑劑是硬脂酸鎂。在其他實施方案中，選擇潤滑劑使得確保營養(yǎng)物的最佳吸收和利用。
在一個實施方案中，所存在的潤滑劑按重量計為該制劑的約20％以下。在另一個實施方案中，所存在的潤滑劑按重量計為該制劑的約2％到約20％。在優(yōu)選實施方案中，所存在的潤滑劑按重量計為該制劑的約10％。
崩解劑包括，但不限于，淀粉羥基乙酸鈉、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、聚乙烯聚吡咯烷酮、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉、預(yù)明膠化淀粉、微晶纖維素、褐藻酸、苯酚甲醛離子交換樹脂、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、羧甲基纖維素鈉、瓊脂、其鹽諸如褐藻酸鈉、Primogel、和它們的混合物。
壓縮劑允許制劑被成形為片劑、錠劑、膠蓋(gelcap)，或者以固態(tài)施用的其他形式。在一個實施方案中，壓縮劑允許制劑被成形為片劑、錠劑、或者膠蓋。壓縮劑包括，但不限于，Avicel、硬脂酸鎂、蠟、樹膠、纖維素(celleusics)、硬脂酸鹽，或者它們的聯(lián)合。在優(yōu)選實施方案中，壓縮劑是微晶纖維素。
在一個實施方案中，所存在的壓縮劑按制劑的重量百分?jǐn)?shù)計為約0.01％到約5％。在另一個實施方案中，所存在的壓縮劑的量為約0.5％到約3％。在再一個實施方案中，所存在的壓縮劑的量按制劑的重量百分?jǐn)?shù)計為約1％到約2％。
在一個實施方案中，L-精氨酸配方包括單位劑量中的L-精氨酸，其對于約5mg/kg到約40mg/kg受試者體重是足夠的。在另一實施方案中，L-精氨酸配方包括單位劑量中的L-精氨酸，其對于約20mg/kg到約25mg/kg是足夠的。
在另一實施方案中，L-精氨酸和HMG-CoA還原酶抑制劑都在緩釋制劑中。HMG-CoA還原酶抑制劑的量可以基于制劑中存在的特定抑制劑而變，因為某些抑制劑比其他抑制劑更有效。例如，每個片劑中存在的BAYCOL可以為約0.1mg到約0.8mg，每個片劑中存在的ZOCOR可以為約10mg到約80mg。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠基于所用的特定抑制劑確定治療量。在一個實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑為辛伐他汀并且所存在的單位劑量對于約0.5mg/kg到約3mg/kg受試者體重是足夠的。在另一實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑為辛伐他汀并且所存在的單位劑量對于約1.2mg/kg到約1.4mg/kg受試者體重是足夠的。
在再一個實施方案中，L-精氨酸和HMG-CoA還原酶抑制劑都在單獨的緩釋制劑，例如，單獨的片劑中提供。緩釋HMG-CoA還原酶抑制劑可通過商業(yè)途徑從例如，Merck & Company，Inc.(Rahway，NJ)得到。
用于本發(fā)明方法中的制劑可以含有根據(jù)常規(guī)藥物復(fù)合技術(shù)的藥物載體。根據(jù)口服施用所希望的制劑形式，該載體可以采取各種形式。在制備口服劑型的制劑中，可以使用任一種常規(guī)藥物介質(zhì)。最優(yōu)選的口服固態(tài)制劑是片劑和gelcap。備選地，本發(fā)明的制劑可摻入膠囊中。在該實施方案中，緩釋L-精氨酸粒劑，和任選地，HMG-CoA還原酶抑制劑可被摻入膠囊中。
由于它們易于施用，所以片劑和膠囊劑代表最有利的口服劑量單位形式，在該情況中使用固態(tài)藥物載體。片劑或膠囊劑可以在相同片劑或膠囊中含有不同配置的L-精氨酸制劑和HMG-CoA還原酶抑制劑制劑。配置包括，兩部分半和半片劑或膠囊，圍繞另一種制劑的制劑、在另一種制劑中的一種制劑的分散劑、兩種制劑相互混合的粒劑，等等。如果希望，通過標(biāo)準(zhǔn)水性或無水技術(shù)可以包被片劑或膠囊劑。
用于本發(fā)明方法中的制劑還可以含有其他藥學(xué)上可接受的成分，如本領(lǐng)域中常用的成分。見，Remingtonthe Science & Practice ofPharmacy，，Alfonso R.Gennaro，第20版，Williams & Wilkins，2000。用于本發(fā)明方法中的制劑中的額外成分包括，但不限于，水、二醇、油類、酒精、淀粉、糖、稀釋劑、崩解劑、防腐劑、賦形劑、潤滑劑、崩解劑、稀釋劑、載體、穩(wěn)定劑、著色劑、增味劑，和它們的聯(lián)合。適宜的稀釋劑的實例包括水、乙醇、多元醇、植物油、可注射的有機酯諸如油酸乙酯，和它們的聯(lián)合。制劑還可以含有佐劑諸如防腐劑、增濕劑、乳化劑，和分配劑。通過各種抗細(xì)菌和抗真菌劑可以確保預(yù)防微生物的作用，這些抗細(xì)菌和抗真菌劑包括但不限于對羥基苯甲酸酯類、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、等等。還希望包括等滲劑，其包括但不限于糖、氯化鈉、等等。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，該制劑還可以與至少一種其他藥劑共同施用。藥劑類別的實例包括腎上腺素能劑、腎上腺皮質(zhì)類固醇類、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、醛甾酮拮抗劑、氨基酸、氨解毒劑、合成代謝劑、強壯劑、止痛劑、雄激素、麻醉劑、減食欲劑、拮抗劑、垂體前葉抑制劑、驅(qū)蟲劑、抗粉刺劑、抗腎上腺素劑、抗-過敏劑、抗變形蟲劑、抗雄激素、抗貧血劑、抗絞痛劑、抗焦慮劑、抗關(guān)節(jié)炎劑、抗哮喘劑、抗動脈粥樣硬化劑、抗細(xì)菌、抗膽石的、抗膽石形成、抗膽堿能劑、抗凝劑、抗球蟲劑、抗驚厥劑、抗抑郁劑、抗糖尿劑、止瀉劑、抗利尿劑、抗催吐劑、抗癲癇、抗雌激素、抗纖維蛋白溶解劑、抗真菌劑、抗血友病、抗出血、抗組胺、抗高脂血癥、抗高脂蛋白血癥藥、抗高血壓劑、抗感染、消炎、抗角質(zhì)化劑、抗瘧疾、抗微生物、抗偏頭痛、抗有絲分裂、抗霉菌、抗惡心、抗腫瘤、antineutropenic、抗肥胖劑、抗寄生蟲劑、抗帕金森病、抗蠕動藥物、抗肺囊蟲、抗增殖、抗前列腺肥大、抗原生動物、止癢的、抗精神病藥、抗風(fēng)濕病藥、抗血吸蟲劑、抗皮脂溢藥、抗分泌、解痙藥、抗血栓形成的、鎮(zhèn)咳藥、抗?jié)??？鼓蚴瘎⒖共《緞?、食欲抑制劑、良性前列腺肥大治療劑、血糖調(diào)節(jié)劑、骨吸收抑制劑、支氣管擴(kuò)張劑、碳酸酐醇抑制劑、心鎮(zhèn)靜劑、心保護(hù)劑、強心劑、心血管劑、利膽劑、膽堿能藥物、膽堿酯酶鈍化劑、球蟲抑制劑、認(rèn)知佐劑、鎮(zhèn)靜劑、利尿劑、多巴胺能劑、殺外寄生物藥、催吐劑、酶抑制劑、雌激素、纖溶劑、熒光劑、自由氧自由基清除劑、胃腸運動效應(yīng)物、糖皮質(zhì)激素、生殖腺-刺激成分、毛發(fā)生長刺激劑、止血劑。組胺H2受體拮抗劑、激素、膽汁過少、低血糖、低血脂、低血壓、顯影劑、免疫劑、免疫調(diào)節(jié)劑、免疫調(diào)制劑、免疫刺激劑、免疫抑制劑、陽萎治療輔助劑、溶角蛋白劑、LNRII激動劑、肝失調(diào)處理、溶黃體素、精神性能增強劑、情緒調(diào)節(jié)劑、粘液溶解劑、粘膜防護(hù)劑、散瞳劑、鼻減充血劑、神經(jīng)肌肉阻斷劑、神經(jīng)保護(hù)基、NMDA拮抗劑、非激素甾醇類衍生物、催產(chǎn)劑、纖溶酶原激活物、血小板活化因子拮抗劑、血小板凝聚抑制劑、增效劑、孕酮、前列腺素、前列腺生長抑制劑、prothyrotropin、治療精神病的試劑、放射性劑、調(diào)節(jié)劑、弛緩劑、分配劑、抗疥螨劑、硬化劑、鎮(zhèn)靜劑、選擇性腺苷A1拮抗劑、5-羥色胺拮抗劑、5-羥色胺抑制劑、5-羥色胺受體拮抗劑、類固醇、興奮劑、抑制劑、癥狀性多發(fā)性硬化、協(xié)同劑、甲狀腺激素、甲狀腺抑制劑、thyromimetic、鎮(zhèn)靜劑、大腦局部缺血的治療、派杰病的治療、不穩(wěn)定絞痛的治療、促尿酸排泄劑、血管收縮劑、血管擴(kuò)張劑、外傷劑、傷口愈合劑、或者黃嘌呤氧化酶抑制劑。
藥劑的另一實例包括血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE抑制劑)。ACE是催化血管緊張肽I向血管緊張肽II轉(zhuǎn)化的一種酶。ACE抑制劑包括氨基酸和其衍生物、肽，包括二肽和三肽和ACE的抗體，這些ACE抑制劑通過抑制ACE的活性干擾腎素-血管緊張肽，從而減少或消除前體物質(zhì)血管緊張肽II的形成。ACE抑制劑已經(jīng)被在醫(yī)學(xué)上用于治療高血壓、充血性心力衰竭、心肌梗死和腎病。公知可用作ACE抑制劑的化合物類別包括酰基巰基和巰基烷?；彼崛缈ㄍ衅绽?美國專利號4,105,776)和佐諾普利(美國專利號4,316,906)、羧烷基二肽，如依那普利(美國專利號4,374,829)、賴諾普利(美國專利號4,374,829)、喹那普利(美國專利號4,344,949)、雷米普利(美國專利號4,587,258)和普吲哚酸(美國專利號4,508,729)，羧烷基二肽模擬物，如西拉普利(美國專利號4,512,924)和貝那普利(美國專利號4,410,520)、氧膦基烷?；彼?，如福辛普利(美國專利號4,337,201)和群多普利。雌激素上調(diào)NOS表達(dá)，而ACE抑制劑不影響表達(dá)，但是影響NOS對L-精氨酸作用的效率。從而，可以以各種方法增加活性。通常，通過本發(fā)明的抑制劑通過相對于沒有根據(jù)本發(fā)明的還原酶抑制劑處理的細(xì)胞，用該還原酶處理的細(xì)胞中存在的活性酶的量的增加而增加活性。
II.預(yù)防和治療方法一方面，本發(fā)明提供了預(yù)防受試者中血管疾病或失調(diào)，如腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)的方法，該方法包括對處于腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)的危險中的受試者順序地或同時施用含有L-精氨酸的制劑與含有HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀)的制劑，或者含有L-精氨酸和HMG-CoA還原酶抑制劑的單一制劑。處于腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)(包括事件)的危險中的受試者可以通過，例如，動脈粥樣硬化的誘因、動脈粥樣硬化的癥狀，或者存在危險因素如，例如，吸煙、高血壓、糖尿病、家族史、遺傳因素、高膽固醇水平、老年和飲酒來鑒定。
作為預(yù)防劑用于本發(fā)明方法中的制劑的施用可以在腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)的發(fā)作的特征性癥狀表現(xiàn)出來之前施用，從而，該腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)被防止、其惡化減慢，或者其發(fā)作延遲。
如在標(biāo)題為“通過HMG-CoA還原酶抑制劑上調(diào)III型內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶”的國際專利公開號WO 00/56403(其被完整并入本文作為參考)中所描述的，NOS活性的上調(diào)不取決于膽固醇合成的減少并且尤其不取決于ox-LDL形成的減少。因此，無論何時希望恢復(fù)eNOS活性或者增加受感染的細(xì)胞或組織中這種活性時，都可以利用本發(fā)明。組織被定義為包括向組織提供營養(yǎng)的脈管系統(tǒng)中的細(xì)胞，以及表達(dá)eNOS的組織的細(xì)胞。
一氧化氮合酶活性與許多病癥有關(guān)，這些病癥包括陽痿、心力衰竭、胃和食管運動失調(diào)、腎失調(diào)，如腎高血壓和進(jìn)行性腎病、胰島素不足，等等?；加羞@些病癥的個體可以從NO產(chǎn)生的增加受益。例如，患有肺高血壓的個體通常在它們的肺血管中一氧化氮合酶表達(dá)水平降低并且從吸入一氧化氮而在臨床上受益。因此本發(fā)明尤其可用于治療肺高血壓。還表明低氧導(dǎo)致eNOS活性的抑制。因此本發(fā)明可用于治療患有低氧誘導(dǎo)的病癥的受試者。令人驚奇地，還發(fā)現(xiàn)HMG-CoA還原酶抑制劑可用于減小中風(fēng)后的ID腦損傷。
受試者的病癥特征是低氧誘導(dǎo)的eNOS活性的異常的低水平。在其他實施方案中，受試者患有一種病癥，其包括化學(xué)誘導(dǎo)的eNOS活性的異常的低水平。在其他實施方案中，受試者患有一種病癥，其包括細(xì)胞因子誘導(dǎo)的eNOS的異常的低水平。在某些重要的實施方案中，受試者患有肺部高血壓或者肺部高血壓的異常升高的危險。在其他重要實施方案中，受試者經(jīng)歷了缺血性中風(fēng)或者具有缺血性中風(fēng)的異常升高的危險。在其他實施方案中，受試者患有心力衰竭或進(jìn)行性腎病。在其他重要實施方案中，受試者被長期暴露于低氧條件。
在其他重要實施方案中，受試者已經(jīng)經(jīng)歷了血栓形成事件或者具有血栓形成的異常高的危險。在其他實施方案中，受試者具有動脈粥樣硬化的異常升高的危險或者患有動脈粥樣硬化。在其他重要實施方案中，受試者具有患心急梗死的異常升高的危險或者已經(jīng)經(jīng)歷心急梗死。在再一實施方案中，受試者具有反復(fù)灌注損傷的異常升高的危險。在優(yōu)選實施方案中，具有反復(fù)灌注損傷的異常升高的危險的受試者是器官移植受體(例如，心、腎、肝，等)。在其他重要實施方案中，受試者患有高胱氨酸尿癥。在某些其他重要實施方案中，受試者患有皮層下梗死和白質(zhì)腦病的常染色體顯性遺傳性腦動脈病(CADASIL)綜合癥。在其他重要的實施方案中，受試者患有神經(jīng)系統(tǒng)的退化性失調(diào)。在優(yōu)選實施方案中，患有中樞系統(tǒng)的退化性失調(diào)的受試者患有阿爾茨海默氏病。
在某些其他實施方案中，當(dāng)需要根據(jù)本發(fā)明的治療的受試者具有缺血性中風(fēng)的異常升高的危險時，HMG-CoA還原酶抑制劑被排除在作為這些受試者的治療之外。
在其他實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物(例如，L-精氨酸緩釋制劑、L-精氨酸食物棒，等等)可用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病。在再一實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物可用于治療或預(yù)防間歇性跛行。在再一實施方案中，本發(fā)明的制劑和組合物可用于增加血管舒張。
在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的方法可用于降低受試者中的膽固醇水平。對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸可用于降低總膽固醇。在一個實施方案中，該方法使總膽固醇降低約50到約150mg/dL。在另一個實施方案中，該方法使總膽固醇降低約80到約100mg/dL。此外，對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸可用于降低低密度脂蛋白(LDL)膽固醇。在一個實施方案中，該方法使LDL膽固醇降低約40到約110mg/dL。在另一個實施方案中，該方法使LDL膽固醇降低約60到約100mg/dL。本發(fā)明的方法還可用于增加受試者中高密度脂蛋白(HDL)膽固醇。此外，施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸可以降低受試者中的甘油三酯。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法使受試者中甘油三酯降低約30到約100mg/dL。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法使受試者中甘油三酯降低約45到約75mg/dL。
HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的共同施用在降低受試者中膽固醇水平中具有協(xié)同效果。本發(fā)明的方法和組合物與其他公知方法和組合物相比已經(jīng)表現(xiàn)出以令人驚奇的和顯著的量降低膽固醇水平。具體地，HMG-CoA還原酶抑制劑和按照本發(fā)明的緩釋L-精氨酸的共同施用比現(xiàn)有方法以顯著的方式降低了甘油三酯和LDL水平。此外，HMG-CoA還原酶抑制劑和緩釋L-精氨酸的共同施用比現(xiàn)有方法以顯著的方式增加HDL。在一個實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的共同施用與僅施用HMG-CoA還原酶抑制劑相比使總膽固醇多降低約5％到約15％。在另一實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的共同施用與僅施用HMG-CoA還原酶抑制劑相比使總膽固醇多降低約5到約20mg/dL。在再一實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的共同施用與僅施用HMG-CoA還原酶抑制劑相比使總LDL膽固醇多降低約2到約20mg/dL。在再一實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的共同施用與僅施用HMG-CoA還原酶抑制劑相比使甘油三酯多降低約5到約50mg/dL，或者備選地約20到約35mg/dL。
在另一實施方案中，本發(fā)明的方法可用于降低受試者中的C-反應(yīng)性蛋白。C-反應(yīng)性蛋白是身體應(yīng)答急性損傷、感染、或其他炎癥刺激釋放的急性期反應(yīng)物。研究已經(jīng)闡明了C-反應(yīng)性蛋白和冠狀動脈疾病之間的正相關(guān)性。Ridker，Circulation 108(12)e81-85(2003)；Blake等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.285(5)R1250-1252(2003)。在一個實施方案中，該方法使C-反應(yīng)性蛋白降低約10％到約50％，或者約25％到約35％。
HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸的共同施用在降低C-反應(yīng)性蛋白中具有協(xié)同效果。在一個實施方案中，該方法與施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用L-精氨酸的緩釋制劑相比使C-反應(yīng)性蛋白多降低約50％到約90％，或者約65％到約75％。在另一實施方案中，該方法與施用L-精氨酸的緩釋制劑而不施用HMG-CoA還原酶抑制劑相比使C-反應(yīng)性蛋白多降低約80％到約120％，或者約95％到約105％。
此外，本發(fā)明的方法可用于增加具有升高的不對稱二甲基精氨酸(ADMA)的受試者中一氧化氮產(chǎn)生和/或增加血管舒張。不對稱二甲基精氨酸(ADMA)是eNOS的內(nèi)源的、競爭性抑制劑。升高的血漿ADMA水平的存在與內(nèi)皮功能異常有關(guān)。斯特汀刺激體外內(nèi)皮NO合酶(eNOS)的表達(dá)并增強體內(nèi)依賴內(nèi)皮的、NO-介導(dǎo)的血管舒張。因此，斯特汀(例如，辛伐他汀)可增強具有升高的ADMA的患者中的內(nèi)皮功能。不希望被理論所束縛，認(rèn)為L-精氨酸克服了ADMA的抑制效果。
通過對具有升高的ADMA的受試者施用L-精氨酸和，任選地，HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀)，本發(fā)明的方法可用于增加一氧化氮產(chǎn)生和/或增加血管舒張。這種共同施用可以使內(nèi)皮功能增加約5％到約15％或者備選地，約7％到約12％。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，受試者具有內(nèi)皮功能異常。
對于任一施用模式，所遞送的化合物的實際量，以及實現(xiàn)此處描述的有利的藥物動力學(xué)圖譜所需的給藥方案將部分取決于諸如該化合物(和/或其活性代謝物)的生物利用度、所治療的失調(diào)、所希望的治療劑量的因素和本領(lǐng)域技術(shù)人員將顯而易見的其他因素。技術(shù)人員不用過多實驗通過監(jiān)視所施用的化合物和/或其活性代謝物的血漿水平，和調(diào)節(jié)實現(xiàn)所希望的藥物動力學(xué)圖譜所需的劑量或給藥方案可以容易地確定遞送的實際量和給藥方案。
使用各種施用途徑或模式，可以將如此處描述用于本發(fā)明方法中的制劑或者其藥學(xué)上可接受的加成鹽或水合物遞送于受試者以便避免或者減少根據(jù)本發(fā)明的不希望的副作用。在一個實施方案中，受試者是動物。在另一實施方案中，受試者是哺乳動物。在再一個實施方案中，受試者是人。任何給定情況中最適宜的途徑將取決于被治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重性。本發(fā)明的優(yōu)選施用途徑是經(jīng)口途徑。這些組合物可以方便地以單位劑型給出，并且通過藥劑學(xué)領(lǐng)域中熟知的任一方法制備。施用組合物的技術(shù)和配方可以在Remingtonthe Science &Practice of Pharmacy，Alfonso R.Gennaro，第20版，Williams& Wilkins，2000中發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明的制劑將通常以有效實現(xiàn)所計劃的目的的量使用，例如，以治療和/或預(yù)防腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)。“治療有效量”指有效治療疾病、失調(diào)、與疾病或失調(diào)有關(guān)的癥狀，或者疾病或失調(diào)的傾向的量。如前面描述的，術(shù)語“治療”指對患者應(yīng)用或施用治療劑或制劑，或者對從患者分離的組織應(yīng)用或施用治療劑或制劑，其中該患者患有疾病、失調(diào)、與疾病或失調(diào)有關(guān)的癥狀，或者疾病或失調(diào)的傾向，目的是治愈、治療、減輕、解除、改變、補救、預(yù)防、改善、延遲疾病或失調(diào)和/或事件的發(fā)作，延緩疾病或失調(diào)的惡化，改善或影響該疾病或失調(diào)、疾病或失調(diào)的癥狀，或者疾病或失調(diào)和/或事件的傾向。確定治療有效量將在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)，特別是參考本文提供的詳細(xì)公開之后。
適于用于本發(fā)明的藥物制劑包括這樣的制劑，其中該制劑中含有治療有效量(即有效實現(xiàn)所計劃的目的的量)的L-精氨酸和/或HMG-CoA還原酶抑制劑。通常，有效量是單獨或者與其他制劑一起產(chǎn)生所希望的應(yīng)答的藥物制劑的量。這可以包括僅暫時延緩疾病的惡化。在另一實施方案中，其包括永久停止該疾病的惡化或者延遲該疾病或病癥的發(fā)作或者防止其發(fā)生。通過常規(guī)方法可以監(jiān)視劑量對任一具體疾病的效果。當(dāng)然，這些量將取決于被治療的具體病癥、該病癥的嚴(yán)重性、個體患者的參數(shù)，包括年齡、生理條件、大小和體重、治療的持續(xù)時間、并行治療(如果有)的性質(zhì)、施用的具體途徑和健康技術(shù)人員的知識和專門技術(shù)內(nèi)的類似因素。
通常，活性化合物的劑量將為每天約0.01mg/kg到每天約1000mg/kg。在一個實施方案中，預(yù)期約50到約500mg/kg的劑量將是適宜的。在另一實施方案中，施用是經(jīng)口并且每天施用一次或數(shù)次。
當(dāng)然，L-精氨酸和/或HMG-CoA還原酶抑制劑的實際量將取決于受試者的狀況、受試者的體重和代謝。例如，當(dāng)施用于患有IC或AD的受試者時，片劑、丸劑、糖錠劑、膠囊劑、gelcap、錠劑或膠囊劑所含有的L-精氨酸和/或HMG-CoA還原酶抑制劑的量將有效減輕血流不足對正常組織的有害作用，即，防止被治療的受試者的癥狀的發(fā)生或者減輕現(xiàn)有癥狀，或者延長存活時間。有效量的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)的，特別是參考本文中詳述的公開之后。
還可以從動物模型估計用于人中的治療有效量。例如，可以配制用于人的劑量以實現(xiàn)發(fā)現(xiàn)在動物中有效的濃度。
還可以從人藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)估計治療有效劑量。然而不希望被任何具體理論所束縛，認(rèn)為效能與受試者對所施用的藥物和/或其活性代謝物的應(yīng)用劑量的總暴露有關(guān)，這可通過測量血濃度-時間曲線(AUC)下的面積來確定。從而，預(yù)期根據(jù)本發(fā)明的方法施用的某一劑量是有效的，該劑量所具有的所施用的化合物(和/或其活性代謝物)的AUC為公知對適應(yīng)癥有效的劑量的AUC的約50％以內(nèi)。優(yōu)選劑量為所施用的化合物(和/或其活性代謝物)的AUC為公知有效劑量的AUC的約70％、約80％或甚至約90％和以上的范圍內(nèi)。通過細(xì)胞培養(yǎng)和實驗動物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法，例如，用于確定LD50(50％群體致死的劑量)和ED50(50％群體治療有效的劑量)的方法可以確定這些試劑的毒性和治療功效。毒性和治療效果之間的劑量比例為治療指數(shù)并且可表達(dá)為比例LD50/ED50。優(yōu)選顯示出大治療指數(shù)的制劑。盡管可以使用顯示出毒性副作用的制劑，但是應(yīng)該注意設(shè)計一種遞送系統(tǒng)，該遞送系統(tǒng)將這些制劑靶定所侵襲的組織的部位以便使對未受感染的細(xì)胞的可能損傷最小，從而，減小副作用。
從細(xì)胞培養(yǎng)測定和動物研究所得數(shù)據(jù)可用于配制用于人的一系列劑量。在一個實施方案中，本發(fā)明的這些制劑的劑量在包括ED50的循環(huán)濃度范圍內(nèi)，具有很小的或者沒有毒性。劑量可以根據(jù)所用的劑型和所利用的施用途徑在該范圍內(nèi)變動。對于用于本發(fā)明的治療或預(yù)防方法內(nèi)的任一制劑，可以從細(xì)胞培養(yǎng)測定初步估計治療有效劑量?？梢栽趧游锬Ｐ椭幸?guī)化劑量，該劑量實現(xiàn)了循環(huán)血漿濃度范圍，其包括如在細(xì)胞培養(yǎng)中確定的IC50(即，實現(xiàn)癥狀的半最大抑制的受試化合物的濃度)。該信息可用于更準(zhǔn)確地確定人中的有用劑量。通過例如，高效液相層析可以確定血漿中的水平。
基于上述方法，尤其基于所施用化合物的血液濃度和持續(xù)時間和/或其活性代謝物調(diào)節(jié)在受試者中實現(xiàn)最大功效的劑量是普通技術(shù)人員能力范圍之內(nèi)的。
III.生產(chǎn)方法已經(jīng)發(fā)現(xiàn)基質(zhì)內(nèi)L-精氨酸粒劑的有效和大量摻入或覆蓋改善了本發(fā)明的組合物的緩釋特征。對于纖維素基質(zhì)，當(dāng)與水接觸時，該基質(zhì)被部分水化，形成凝膠層，其控制L-精氨酸的釋放速度。L-精氨酸粒劑的有效包裹或摻入產(chǎn)生了暫時的溶解屏障，其延遲了L-精氨酸的遞送?；|(zhì)中大量縫隙使得L-精氨酸溶解太快。本發(fā)明的方法導(dǎo)致與通過直接壓縮產(chǎn)生的產(chǎn)品相比具有性質(zhì)改進(jìn)的產(chǎn)品。此外，本發(fā)明的方法相對于包括流化分散的方法相比是有利的，因為這些方法費時并且昂貴。
有效和有效率地覆蓋的關(guān)鍵在于實施本發(fā)明的粒化、碾磨和混合步驟中。參考圖5，在優(yōu)選實施方案中，根據(jù)一種方法生產(chǎn)片劑，該方法包括?；疞-精氨酸(步驟110)、碾磨L-精氨酸(步驟125，140)、將L-精氨酸與剩余的成分混合(步驟145、150、155)，和將成分壓縮形成片劑(步驟160)。優(yōu)選地，該方法還包括篩選成分(步驟105)、和/或在碾磨步驟期間干燥L(fēng)-精氨酸(步驟135)步驟的一步或者兩個步驟。
如果在使用前篩選成分(步驟105)，#20和/或#30目篩可用于部分或所有成分。在優(yōu)選實施方案中，在粒化(步驟105)，并且再次在碾磨(未顯示)前篩選粒劑。篩選提供的粒劑具有更窄的顆粒大小分布范圍，這對于包衣和/或壓縮是有利的。
?；襟E是有利的，因為其提供了更均勻的顆粒。使用本領(lǐng)域中公知的任一適宜的方法可以將活性劑制成粒狀或者粒化。粒狀化或?；ǔ１欢x為尺寸增大的過程，其中小顆粒聚集成更大的、持久的聚集體，其中原來的顆粒仍可以被鑒定并使得它們成為自由的流動態(tài)。?；?，可以將結(jié)合劑加入活性劑以改善?；^程。在?；陂g可以加入其他添加劑。這些添加劑包括，例如，增甜劑、調(diào)味劑、著色劑、抗氧化劑，等等。
任選地，可以加入水或其他溶劑以幫助粒化過程。所加入的水或溶劑的量取決于，例如，?；椒ǖ倪x擇，并且本領(lǐng)域中的技術(shù)人員可以容易地確定。可以在?；^程期間任一適宜的時間點加入水或其他溶劑。例如，結(jié)合劑可以與溶劑(例如，水)混合以形成粒化劑，然后?；瘎┛梢员粐婌F到活性劑上。備選地，如果?；瘎┨吵矶荒芫鶆虻貒婌F到活性劑上，那么希望將結(jié)合劑首先與活性劑混合，然后噴霧水或其他溶劑以產(chǎn)生活性劑粒劑或小粒的均勻形式。
任一適宜的?；椒ǘ伎捎糜诋a(chǎn)生含有活性劑的顆粒。可以使用濕潤?；?或干燥粒化方法。
干燥?；噶；苿┒皇褂脽岷腿軇?。干燥?；夹g(shù)通常包括擊壓法或滾動壓縮。擊壓法為干燥混合制劑并將該制劑在壓縮機上壓縮成大片劑或塊劑(slug)。將所得片劑或塊劑碾磨而產(chǎn)生粒劑。滾筒壓縮類似于擊壓法，但是在滾筒壓縮中，使用滾筒壓縮機代替制片機。見，例如，Handbook of Pharmaceutical Granulation Technology，D.M.Parikh編者，Marcel-Dekker，Inc.102-103頁(1997)。干燥?；夹g(shù)可用于某些情況中，例如，當(dāng)活性劑對熱或溶劑敏感時。
備選地，可以使用濕潤粒化。在濕潤?；?，溶劑和結(jié)合劑通常被加入制劑以提供粒劑的更大聚集。?；陂g的溫度可以被設(shè)定在任一適宜的點，通常不超過該制劑的任一組分的熔點。通常，將該混合物在約35℃到約65℃的溫度下?；∮诩s20分鐘，更優(yōu)選在室溫下約1到約10分鐘(見實施例8)。通常將粒劑在空氣中干燥適宜的時間(例如，一或幾小時)。
優(yōu)選地，通過高剪切混合器?；?“HSG”)或者流化床粒化(“FBG”)?；钚詣＿@兩種?；椒ǘ继峁┝烁蟮牧┗蛐×＃撬鼈冊谒玫脑O(shè)備和該方法運行的機理上不同。使用通過商業(yè)途徑可得到的裝置可以實施這些?；夹g(shù)。
在HSG中，通過葉輪或切碎機的高機械攪拌完成混合和濕潤塊化。通過葉輪所產(chǎn)生剪切力和壓縮力實現(xiàn)濕潤物質(zhì)的混合、稠化，和團(tuán)聚。切碎機的主要功能是將塊切成更小的片段和幫助液體結(jié)合劑的分布。液體結(jié)合劑被導(dǎo)入輥筒或者噴霧到粉劑上以實現(xiàn)更均勻的液體分布。
另一方面，流化是這樣的操作，通過該操作細(xì)小的固體通過與其他接觸被轉(zhuǎn)化成類似液體狀態(tài)。在一定的氣體速度下，該液體將支持這些顆粒，使得它們自由運動而不被帶走。這種流化床類似劇烈沸騰的液體，固體顆粒經(jīng)歷非常劇烈的運動，該運動隨著氣體速度增加。從而流化床?；沁@樣一種方法，通過該方法，通過流化床將結(jié)合劑溶液噴霧到流化粉末床形成更大的顆粒而產(chǎn)生了粒劑。結(jié)合劑溶液可以從例如，以任何適宜的方式(例如，頂部或底部)安置的噴槍噴出。噴霧位置和噴霧速度取決于所用的活性劑和結(jié)合劑的性質(zhì)，并且可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。
在根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方法中，粒化L-精氨酸(步驟110)包括將L-精氨酸與結(jié)合劑如聚烯吡酮混合形成混合物(步驟115)，并將混合物與?；瘎?粒化載體)在制粒機中?；?步驟120)。?；瘎┛梢允?，例如，溶于純化水中的聚烯吡酮。優(yōu)選地，使用高剪切制粒機，如Niro PMA65高剪切制粒機。該制粒機可用于混合L-精氨酸和結(jié)合劑，還可用于將?；d體噴霧到混合物上后將該混合物粒化。
?；苿┑囊环N或多種組分后，任選地，可以碾磨?；闹苿?。可以用任一適宜的通過商業(yè)途徑可得到的設(shè)備(例如，裝備0.039英寸篩子的CoMil)實施碾磨?？梢愿鶕?jù)所希望的粒劑的大小選擇篩子的網(wǎng)眼大小。將?；幕钚詣┠肽ズ?，如果希望可以將它們進(jìn)一步干燥(例如，在空氣中)。
在優(yōu)選實施方案中，碾磨L-精氨酸包括按照本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)(通常見美國專利號5,145,684和歐洲專利申請498,482,這兩個申請的內(nèi)容都被并入本文作為參考)碾磨濕潤粒劑或者濕潤碾磨(步驟125)，干燥粒劑(步驟130)，和碾磨干燥粒劑或干燥碾磨(步驟140)。磨機如CoMil可被用于濕潤碾磨和干燥碾磨粒劑。在一個實施方案中，磨機被配備用于濕潤碾磨的’375Q篩子和用于干燥碾磨的’062R篩。通過將粒劑在床干燥器，例如，Aeromatic S-2流化床干燥器中干燥到所希望的干燥損失(LOD)水平，例如≤3％LOD，可以實現(xiàn)干燥步驟?？梢苑蛛A段(步驟135)實施干燥步驟直到達(dá)到所希望的LOD。
將L-精氨酸與剩余的成分混合可以包括預(yù)混合步驟(步驟145)、混合步驟(步驟150)，和最終混合步驟(步驟155)。預(yù)混合步驟可以包括將L-精氨酸/聚烯吡酮粒劑與填充劑和助流劑，例如，微晶纖維素和膠態(tài)二氧化硅混合。例如，在8夸脫V形混合機中以25rpm混合約5分鐘可以實現(xiàn)預(yù)混合步驟。混合步驟可以包括向該混合物加入一種或多種緩釋劑，例如，一種或多種羥丙基甲基纖維素，和一種填充劑，例如，微晶纖維素?？梢栽诶?立方英尺V形混合機中以25rpm混合約20分鐘可以實現(xiàn)混合步驟。最終混合步驟可以包括向2立方英尺V形混合機中的混合物加入釋放劑/潤滑劑，例如，硬脂酸鎂并以25rpm混合約5分鐘。
當(dāng)制備了如上述的制劑后，將該制劑壓縮(步驟160)成片劑形式。通過任一適宜的方法，用或者不用壓縮力可以實施該片劑成形。例如，可以用任一壓片機(例如，裝備0.748”×0.380”卵圓形、凸起的、普通模具的Manesty Beta Press)完成?；襟E后制劑的壓縮，優(yōu)選地，該制劑組合物被潤滑劑(例如，硬脂酸鎂)充分潤滑?？梢岳脤崿F(xiàn)該步驟的許多備選方法，并且本發(fā)明不受到任一具體裝置的使用的限制。可以用旋轉(zhuǎn)型壓片機實施壓縮步驟。該旋轉(zhuǎn)型壓片機具有旋轉(zhuǎn)板，后者又具有用于形成片劑的多個通過孔，或者模子。制劑被插入該模子并隨后被壓模。
備選地，通過模塑可以制備片劑。在適宜的機器中將用惰性液體稀釋劑濕潤的粉狀混合物模塑可以制備模塑的片劑。
片劑的直徑和形狀取決于選擇用于粒劑組合物的成形或壓縮的模子、塑模和沖床。片劑可以是盤形的、卵圓形、橢圓形、圓形、圓柱形、三角形，等等?？梢詫⑵瑒┕蝹源龠M(jìn)破裂。上表面或下表面可以用符號或字母浮雕或凹入。
可以基于壓片機的類型/模型、對片劑產(chǎn)品所希望的那些物理性質(zhì)(例如，所希望的硬度、脆性，等等)、所希望的片劑外觀和大小，等等，可以選擇壓縮力。通常，應(yīng)用壓縮力使得該壓縮的片劑具有至少約2kp的硬度。這些片劑通常提供了足夠的硬度和強度而可以被包裝、運輸或被使用者處理。如果希望，可以對片劑應(yīng)用更高的壓縮力以增加片劑硬度。然而，優(yōu)選如此選擇壓縮力使得其不會使片劑內(nèi)的含有活性劑的顆粒變性(例如，龜裂或破裂)。優(yōu)選地，如此應(yīng)用壓縮力使得壓縮片劑的應(yīng)答小于約10kp。在某些實施方案中，優(yōu)選將片劑壓縮到約3kp到約7kp，任選約3kp到約5kp，或者約3kp的硬度。
通常，最終片劑的重量為約50mg到約2000mg，更通常約200mg到約1000mg，或者約400mg到約700mg。
生產(chǎn)本發(fā)明組合物的具體制劑和方法對緩釋L-精氨酸組合物賦予了獨特的優(yōu)點。具體地，本發(fā)明的制劑和方法使得組合物具有所希望的緩釋溶解分布圖。任選地，緩釋L-精氨酸制劑將持續(xù)體外藥物釋放至少長達(dá)14小時，優(yōu)選約1小時時釋放約10％到約40％，約4小時時釋放約30％到約70％，約6小時時釋放約55％到約75％，約8小時時釋放約65％到約85％，約12小時時釋放約75％到約95％，約14小時時釋放約80％到約100％。如通過圖7所闡明的，本發(fā)明的制劑實現(xiàn)了這種優(yōu)選溶解。此外，如實施例8和實施例14中所示，溶解和穩(wěn)定性研究表明本發(fā)明的制劑在生產(chǎn)后1和2個月顯示出最佳的溶解分布圖。
此外，本發(fā)明的制劑和方法使得緩釋L-精氨酸組合物不過度易碎。此外，本發(fā)明的制劑和方法使得緩釋L-精氨酸組合物是足夠可壓縮的以允許方便制備該組合物。
如果希望，可以將其他修飾摻入片劑的實施方案。例如，通過任一公知的技術(shù)，諸如，例如，應(yīng)用各種包衣，例如，例如與，例如Amberlite IRP-69的離子交換復(fù)合物，可以實現(xiàn)活性劑穿過本發(fā)明的片劑基質(zhì)釋放的修飾。本發(fā)明的片劑還可以包括GI運動-減弱藥物或者與該藥物共同施用。還可以通過生物活性化合物的化學(xué)修飾來修飾活性劑以產(chǎn)生前藥，該前藥將在體內(nèi)通過酶或水解切割等釋放活性化合物。額外的層或包衣可作為擴(kuò)散屏障以提供控制藥物釋放速度和時間的額外方法。
如果包括HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀)和/或額外的試劑，那么這些試劑優(yōu)選在混合步驟(步驟145、150、155)中加入。當(dāng)片劑含有緩釋L-精氨酸制劑和HMG-CoA還原酶抑制劑制劑時，該片劑可以具有緩釋L-精氨酸制劑核心和含有至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的制劑的第二個外層覆蓋或包衣。備選地，片劑可以含有L-精氨酸制劑，例如，緩釋L-精氨酸制劑，和共享一個表面的HMG-CoA還原酶抑制劑制劑。
當(dāng)L-精氨酸與HMG-CoA還原酶抑制劑順序地或共同施用時，每種片劑、扁囊劑、錠劑，或膠囊可以含有約0.01mg到約200mg HMG-CoA還原酶抑制劑。HMG-CoA還原酶抑制劑的量將取決于所用的具體HMG-CoA還原酶抑制劑。
在本發(fā)明的另一方面，以食物的形式提供了用于治療心血管和/或腦血管疾病的組合物。優(yōu)選地，該食物為棒狀食物如處方健康棒的形式。利用食物使得可以提供的L-精氨酸的量比可以摻入單一片劑的量更大，例如，在單個片劑中難以摻入1g以上的L-精氨酸。從而，需要多個片劑以遞送超過1g的L-精氨酸的量。本發(fā)明提供了棒狀食物，其可以提供1g以上的L-精氨酸以及其他試劑(如果希望)。在一個實施方案中，L-精氨酸作為立即釋放制劑，例如，L-精氨酸的立即釋放粒劑被加入到食物棒中。優(yōu)選地，該棒狀食物包括緩釋制劑，其包括，例如，L-精氨酸的緩釋粒劑。在優(yōu)選實施方案中，粒劑包括味道掩蔽成分，例如，味道掩蔽包衣。在另一實施方案中，該棒狀食物還含有額外的試劑，如HMG-CoA還原酶抑制劑。優(yōu)選地，HMG-CoA還原酶抑制劑是斯特汀，如辛伐他汀。將L-精氨酸與斯特汀在食物載體中組合將提供節(jié)制和易于施用該制劑。當(dāng)希望更高劑量時，使用食物還可以減少對服用L-精氨酸的多個片劑的需要。
在一個實施方案中，棒狀食物具有約1到約80g辛伐他汀和約1到約10g L-精氨酸。在優(yōu)選實施方案中，提供了棒狀食物，其具有總共至少約10mg辛伐他汀和每個棒狀食物約4g L-精氨酸或者其鹽，以及糖、水果成分、蛋白質(zhì)、和維生素和礦物質(zhì)。該棒狀食物的重量為約25到約100g。在具體方法中，通過將糖和水果糊在較高的溫度混合，將該糖漿在較低的溫度與少量成分混合制備棒狀食物。將少量成分與糖漿混合后，加入L-精氨酸和辛伐他汀，尤其還加入蛋白質(zhì)膨脹劑，然后膨脹，還加入食物劑，尤其水果片或其他細(xì)小的可食用的成分以提供所希望的質(zhì)地和風(fēng)味，還加入大豆蛋白。所得產(chǎn)品可以穩(wěn)定保存，在可口方面具有所希望的影響感觀的性質(zhì)，并且提供了成分與辛伐他汀和L-精氨酸結(jié)合的健康組合。在美國專利號6,063,432中描述了生產(chǎn)含有L-精氨酸和L-賴氨酸的健康棒狀食物的方法和配方，該專利被完整并入本文作為參考。
本發(fā)明的另一方面是生產(chǎn)上述棒狀食物的方法。該方法將包括如上述的與圖5，步驟110有關(guān)的?；疞-精氨酸。優(yōu)選地，粒化步驟將包括預(yù)混合步驟(步驟115)和?；襟E(步驟120)。優(yōu)選地，該方法還包括上述濕潤碾磨步驟(步驟125)。通過L-精氨酸與如上描述的適宜的賦形劑的濕潤?；梢缘玫竭@種棒狀食物。所得粒劑將直接使用或者將其用味道掩蔽纖維素包衣。
通過下面的實施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，這些實施例不應(yīng)該被理解為限制。通過本申請應(yīng)用的所有參考文獻(xiàn)、專利和出版的專利申請的內(nèi)容都被摻入本文作為參考。
實施例實施例1片劑制劑1將約250g L-精氨酸置于混合器中并且當(dāng)其以100RPM緩慢混合時，加入100g EUDRAGIT RS 30D低滲透性甲基丙烯水性聚合物分散劑(Rohm America，Piscataway，NJ)以形成濕潤塊。使該濕潤塊穿過18-20目篩并允許在50℃干燥24小時。將所得干燥L(fēng)-精氨酸粒劑(250g)與84g METHOCEL K100M CR甲基纖維素(The Dow ChemicalCompany，Danbury，CT)和3g硬脂酸鎂干燥混合形成混合物。用7/16拱形沖床將所得混合物壓縮成片劑。
實施例2片劑制劑2將250g L-精氨酸置于混合器中并且當(dāng)其緩慢混合時，加入84gMETHOCEL K100M CR甲基纖維素和3g硬脂酸鎂。用7/16拱形沖床將所得混合物壓縮成片劑。
實施例3膠囊制劑1將250g L-精氨酸置于混合器中并且當(dāng)其緩慢混合時，加入100gEUDRAGIT RS 30D低滲透性甲基丙烯水性聚合物分散劑以形成濕潤塊。使該濕潤塊穿過18-20目篩并允許在50℃干燥24小時。將所得干燥L(fēng)-精氨酸粒劑(250g)與84g METHOCEL K100 M CR甲基纖維素和3g硬脂酸鎂干燥混合形成混合物。所得混合物置于00凝膠膠囊中。
實施例4膠囊制劑2將250g L-精氨酸置于混合器中并且當(dāng)其緩慢混合時，加入84gMETHOCEL K100 M CR甲基纖維素和3g硬脂酸鎂。所得混合物置于00凝膠膠囊中。
實施例5片劑制劑3用KitchenAid混合器將250g L-精氨酸與50g METHOCEL K100M CR甲基纖維素混合并勻漿；混合機低速混合10分鐘形成干燥混合物。將115g EUDRAGIT RS 30D低滲透性甲基丙烯水性聚合物分散劑以5g遞增加入干燥混合物直到該物質(zhì)被均勻地濕潤。該濕潤物質(zhì)穿過12目篩，然后20目篩，隨后在30℃干燥24小時直到水分含量按重量計為1％。將所得干燥L(fēng)-精氨酸粒劑與7g硬脂酸鎂干燥混合，然后用Beta Manesy press，使用7/16拱形沖床壓縮成片劑。
實施例6緩釋片劑的生產(chǎn)將約1000g L-精氨酸和約200g METHOCEL K100 M CR甲基纖維素在GP-1高剪切混合機(制粒機)中以100 RPM混合約5分鐘。然后加入約138g EUDRAGIT RS 30D低滲透性甲基丙烯水性聚合物分散劑，葉輪以200RPM運行，壓力為1.5巴。以200RPM?；旌衔?分鐘。然后將顆粒在MP-1流化床制粒機中以45℃入口溫度和100 CMH空氣流干燥到約2％水分含量。然后用Comil 197S以55R篩和90％速度的圓形葉輪碾磨干燥粒劑。在8Qt.V形混合機中，向碾磨的粒劑加入約27g硬脂酸鎂并混合2分鐘。然后用Beta Manesty Press用7/16″標(biāo)準(zhǔn)拱形模具將材料壓縮成片劑，該片劑的片劑重量為682.5mg，具有最高可能的硬度。將片劑以每瓶60片手工包裝與75cc HDPE瓶中。
用高效液相色譜(HPLC)產(chǎn)生了該片劑相對于從BioEnergy(Warren，NJ)購買的通過商業(yè)途徑可得到的緩釋L-精氨酸片劑的釋放圖譜。圖7是描繪兩種制劑的釋放圖譜的圖表。
實施例7L-精氨酸的藥物動力學(xué)評估對處于禁食條件下的14名健康的成年志愿者實施了隨機的四通交叉(four-way crossover)研究，該研究用于評估L-精氨酸緩釋片劑對立即釋放膠囊的藥物動力學(xué)。如此處所用的“健康的”指沒有心血管危險因素的非高膽固醇血癥受試者。該研究比較了實施例6的緩釋L-精氨酸片劑(L-精氨酸SR)和從Montiff(Los Angeles，CA)購買的通過商業(yè)途徑可得到的立即釋放L-精氨酸膠囊(L-精氨酸IR)。
研究目的是確定緩釋L-精氨酸的藥物動力學(xué)參數(shù)。如下表1中所描繪，基于對每種藥物動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行的雙尾成對t-檢驗的p值，Cmax和Tmax之間有統(tǒng)計學(xué)顯著差異。如所預(yù)期的，與立即釋放膠囊相比，緩釋L-精氨酸片劑具有更低的Cmax(14.9μg/mL對24.1μg/mL)和更長的Tmax(4.4h對1.4h)。
表1L-精氨酸SR對L-精氨酸IR的PK參數(shù)
實施例8生產(chǎn)改進(jìn)的緩釋L-精氨酸片劑表II列出了用于生產(chǎn)改進(jìn)的緩釋片劑的成分，以及每種成分所用的量。
表II成分
*粒化中使用水，然后干燥混合物除了硬脂酸鎂，所有成分都在#20目篩中篩選。硬脂酸鎂在#30目篩中篩選。將約一半聚烯吡酮(聚乙烯吡咯烷酮)溶于純化水并作為?；瘎┲糜谝贿?。將L-精氨酸和剩余的聚烯吡酮在Niro PMA 65高剪切制粒機中干燥混合4分鐘，然后通過向混合物噴霧?；瘎┘s6.5分鐘將該混合物?；?。然后在裝備’375Q篩子的CoMil中碾磨濕潤粒劑。然后在Aeromatic S-2流化床干燥機中將碾磨的粒劑干燥成＜3％的LOD。接著在裝備’062R篩子的CoMil中碾磨干燥粒劑。然后在8夸脫V形混合機中以25rpm將約一半的微晶纖維素和膠態(tài)二氧化硅混合5分鐘并轉(zhuǎn)移到2立方英尺V形混合機中。微晶纖維素的剩余部分和羥丙基甲基纖維素也被加入2立方英尺V形混合機中并以25rpm混合20分鐘。然后向2立方英尺V形混合機中加入硬脂酸鎂并以25rpm混合5分鐘。最后，用裝備0.748″×0.380″橢圓形凸起的普通模具的Manesty Bet Press將混合物壓縮成目標(biāo)重量1000mg。圖6是該方法的示意性流程圖。
在生產(chǎn)過程期間可以使用標(biāo)準(zhǔn)的過程中對照試驗和規(guī)格，用于該實施例的對照試驗和規(guī)格在下表III中列出。
表IIIL-精氨酸SR片劑過程中對照規(guī)格和方法
可以使用標(biāo)準(zhǔn)釋放方法和規(guī)格，用于該實例中的在下表IV中提供
表IVL-精氨酸SR片劑釋放方法和規(guī)格
此外，研究已經(jīng)闡明了所希望的物理特征，包括本發(fā)明的緩釋L-精氨酸制劑的脆性和含量均一性。
表V兩批SR-L精氨酸制劑的物理試驗、效力、含量均一性和溶解
實施例9L-精氨酸SR與和不與辛伐他汀和辛伐他汀與和不與L-精氨酸SR的藥物動力學(xué)評估研究了L-精氨酸SR與和不與辛伐他汀和辛伐他汀與和不與L-精氨酸SR的藥物動力學(xué)。使用了實施例6的L-精氨酸SR片劑和通過商業(yè)途徑可得到的從BioEnergy(Warren，NJ)購買的辛伐他汀片劑。
如從表VI可以看出，基于對每種藥物動力學(xué)參數(shù)實施的雙尾成對t檢驗得到的p值，在Cmax、AUC0-10、和Tmax的處理之間沒有統(tǒng)計學(xué)顯著差異。如表VII中所描繪的，L-精氨酸SR對辛伐他汀的單一劑量動力學(xué)沒有統(tǒng)計學(xué)顯著影響。
表VI.有和沒有辛伐他汀的L-精氨酸PK參數(shù)
表VII.有和沒有L-精氨酸的辛伐他汀的PK參數(shù)
實施例10辛伐他汀與L-精氨酸的施用對小鼠中梗死大小的影響在小鼠中研究了施用辛伐他汀與L-精氨酸兩者對梗死大小的影響。小鼠被腹膜內(nèi)注射溶于鹽水溶液中的含有辛伐他汀的溶液和含有辛伐他汀和L-精氨酸的溶液，用量如圖3中所示。圖2和圖3中描繪了這些小鼠和對照組中的梗死大小結(jié)果。
實施例11辛伐他汀和L-精氨酸組合的劑量優(yōu)化在小鼠中研究了辛伐他汀和L-精氨酸的組合施用的劑量優(yōu)化。小鼠被注射不同水平的辛伐他汀和L-精氨酸，如圖4中所示。該研究的結(jié)果也在圖4中顯示。統(tǒng)計學(xué)分析預(yù)測該組合的最佳范圍為1.2-1.4mg/kg辛伐他汀和約20-25mg/kg L-精氨酸。
實施例12通過與L-精氨酸緩釋聯(lián)合增強ADMA水平升高的患者中依賴內(nèi)皮的血管舒張的改善斯特汀刺激體外內(nèi)皮NO合酶(eNOS)的表達(dá)并增強體內(nèi)依賴內(nèi)皮的NO介導(dǎo)的血管舒張。不對稱二甲基精氨酸(ADMA)是eNOS的一種內(nèi)源的競爭性抑制劑。血漿ADMA水平的升高與內(nèi)皮功能異常有關(guān)。發(fā)現(xiàn)僅當(dāng)通過補充的L-精氨酸緩釋克服ADMA的抑制作用時，辛伐他汀才增強ADMA升高的患者中的內(nèi)皮功能。
在三個周期的交叉設(shè)計中，15名臨床無癥狀的ADMA水平升高的老年受試者以隨機順序接受辛伐他汀(40mg/天)、如實施例8中描述的L-精氨酸緩釋(3g/天)或者它們的組合，每種施用持續(xù)3周，治療之間至少有三周的清除(wash-out)時間。通過臂動脈超聲使用計算機輔助圖像分析評估依賴內(nèi)皮的血管舒張；通過有效的HPLC方法確定ADMA和L-精氨酸血漿濃度。
對完成研究的15名患者的分析揭示與治療前測量相比，緩釋L-精氨酸單獨或者與辛伐他汀聯(lián)合都增強依賴內(nèi)皮的血管舒張百分比。聯(lián)合使得比只用辛伐他汀觀察到的治療前依賴內(nèi)皮的血管舒張百分比的變化增加3.87％(p＜0.025)。聯(lián)合和僅緩釋L-精氨酸之間依賴內(nèi)皮的血管舒張百分比的改變的差異很小。三硝酸甘油酯導(dǎo)致的依賴內(nèi)皮的血管舒張不受任一治療的影響。L-精氨酸緩釋單獨或者與辛伐他汀聯(lián)合都顯著提高了血漿L-精氨酸/ADMA比例(分別為基線82.3±4.0vs.102.8±9.2和102.6±10.8，每種p＜0.05)。這些結(jié)果在圖8中概述。
辛伐他汀不能增強eNOS被升高的ADMA水平阻斷的受試者中的內(nèi)皮功能；辛伐他汀與口服L-精氨酸緩釋的聯(lián)合對內(nèi)皮功能具有協(xié)同作用。由于NO-介導(dǎo)的效果可以在斯特汀的療效中起主要作用，所以在ADMA濃度升高的患者中應(yīng)該考慮與L-精氨酸緩釋的組合。
實施例13通過辛伐他汀與L-精氨酸緩釋的聯(lián)合治療提高膽固醇水平在實施例12中描繪的研究中，分析了治療前和治療后總膽固醇(TC)、LDL膽固醇、HDL膽固醇和甘油三酯的改變。該分析的結(jié)果在圖9中顯示。如結(jié)果所闡明的，本發(fā)明的緩釋L-精氨酸與辛伐他汀的共同施用與僅施用辛伐他汀相比降低了總膽固醇、LDL膽固醇和甘油三酯并更大程度地增加了HDL膽固醇。
實施例14通過HPLC確定緩釋精氨酸HCl 500mg片劑中精氨酸HCl的溶解釋放如下制備流動相。最初，稱量約0.9g 1-戊烷磺酸鈉鹽一水合物和3.5g磷酸二氫鈉一水合物，加入適宜的容器中制備1升pH3.3緩沖液。加入約100mL去離子水溶解。通過加入磷酸調(diào)節(jié)pH至3.3。隨后，將850mL pH3.3緩沖液與150mL甲醇合并到適宜的容器中并混合?；旌衔锿ㄟ^0.45μm尼龍膜濾器過濾。最后將混合物使用前脫氣。
如下制備溶解介質(zhì)(pH6.8的50mM磷酸緩沖液)。最初，將20.0mL 10M NaOH吸取到1000mL容量瓶中并用去離子水稀釋以制備0.2M NaOH。隨后，向適宜的容器中加入54.44g無水磷酸二氫鉀，用2000mL去離子水溶解并稀釋。向該容器加入896mL 0.2M NaOH并用去離子水稀釋到8000mL。最后，該混合物在使用前脫氣。
如下制備溶解樣品。稱量如實施例8中描述的制備的六精氨酸HCl500mg片劑。將每個片劑置于含有900mL磷酸緩沖液(pH6.8)的不銹鋼沉錘(sinker)中。隨后將該沉錘落入USP Apparatus 2(漿)的容器中在37℃±0.5℃以75rpm立即旋轉(zhuǎn)。對于各自溶解分析在1、2、4、6、8、10、12和14小時時間點的每個時間點從容器取出10mL溶液。這些樣品溶液的每一種都通過0.45μm PVDF注射器濾器過濾。將濾液收集到HPLC瓶中用于分析，其中將頭1-2mL丟棄。使用10μmFull Flow Filter，每個取樣點后將預(yù)熱到37℃±0.5℃的10mL溶解介質(zhì)返回到溶解容器中。操作人員應(yīng)該明白該樣品溶液在室溫下最多穩(wěn)定1天，在4℃下最多穩(wěn)定3天。
如下制備精氨酸HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確稱量28±2mg精氨酸HCl參比標(biāo)準(zhǔn)物置于50mL容量瓶中。用溶解介質(zhì)將標(biāo)準(zhǔn)溶解并稀釋到體積。
使用BDS Hypersil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)實施HPLC，使用UV在210nm處檢測。柱溫度設(shè)置為室溫。通常，運行時間為9分鐘，注射體積為10μL，流速為0.8mL/min，流動相為pH3.3。緩沖液/甲醇(85/15，v/v)，如上述制備。
每個試驗如下進(jìn)行。注射一次溶解介質(zhì)后，然后連續(xù)5次注射精氨酸HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液并最后注射一次每種樣品溶液。每6次樣品注射后和順序運行結(jié)束時再次注射精氨酸HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液。整個運行中系統(tǒng)漂移(即，與精氨酸HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的5次連續(xù)注射的平均相比標(biāo)準(zhǔn)溶液的回收百分比)應(yīng)該為約97％到約103％。
在確定釋放的精氨酸的百分?jǐn)?shù)時，操作人員應(yīng)該小心確保工作標(biāo)準(zhǔn)溶液的注射中精氨酸HCl峰的USP尾隨因子(T)小于2。如下計算TT＝W.05/2f其中W.05是距離基線的峰高的5％處精氨酸HCl峰的峰寬，f為峰最大值與峰的前沿之間的距離(在距離基線的峰高的5％點處測量的距離)。
如下計算釋放的精氨酸HCl百分?jǐn)?shù)
其中n是測量的總數(shù)，Vr是每種測量的溶解介質(zhì)的體積(10mL)，V為溶解介質(zhì)的最初體積(900mL)，Cs為工作標(biāo)準(zhǔn)溶液中精氨酸HCl的濃度(mg/mL)，Ci為每個樣品溶液中精氨酸HCl的濃度(mg/mL)(其中i＝1到i＝n-1)，Ru為從樣品溶液得到的精氨酸HCl峰的峰面積應(yīng)答，Rs為從工作標(biāo)準(zhǔn)溶液的連續(xù)注射得到的精氨酸HCl峰的平均峰面積應(yīng)答，LC為精氨酸HCl的標(biāo)簽聲稱(500mg)。
計算1、2、4、6、8、10、12和14小時處的釋放百分?jǐn)?shù)。表VI和VIII概述了各種溶液研究的結(jié)果。
表VIII在約40℃/75％RH穩(wěn)定性下L-精氨酸SR片劑的溶解分布圖
實施例15eNOS表達(dá)的依賴辛伐他汀的調(diào)節(jié)下面的方案用于研究eNOS功能中依賴辛伐他汀的增加的機理，該研究使用培養(yǎng)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)來區(qū)分eNOS功能的上調(diào)中重新蛋白質(zhì)合成和蛋白質(zhì)動員或蛋白質(zhì)活化。
根據(jù)下面的方法培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC-c)(BioWhittaker，Walkersville，MD)。EBM-2/EGM-2培養(yǎng)基(BioWhittaker)中的內(nèi)皮細(xì)胞生長到約80％到約90％匯合。用5ml培養(yǎng)基洗滌每個瓶中的細(xì)胞并向每種細(xì)胞加入15ml培養(yǎng)基。用細(xì)胞刮刀使細(xì)胞脫離并將其轉(zhuǎn)移到50ml錐形管中。通過在800RPM離心8分鐘沉淀細(xì)胞。丟棄上清液并用冷的1×PBS洗滌沉淀。
如下勻漿細(xì)胞。使沉淀變松并加入400μl 10×勻漿緩沖液(250mM Tris，pH7.4，10mM EDTA和10mM EGTA)。用27G針勻漿樣品約10次。將勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml epindorph管中。隨后將沉淀重懸在30到45μl 1×勻漿緩沖液中。
如下分析細(xì)胞。在適當(dāng)大小的柱子中用5柱床體積0.5N NaOH洗滌樹脂AG 50W-X8(BioRad Laboratories，Hercules，CA)制備樹脂漿。用20體積水洗滌柱子。以終止/平衡緩沖液(50mM乙酸鈉，pH5.5)平衡樹脂直到洗脫物在終止/平衡緩沖液的0.05pH單位內(nèi)。所得溶液作為終止/平衡緩沖液中的50％漿液在4℃保存。此外，通過將602μltris加到預(yù)先稱重的NADPH的5mg瓶制備25mM tris中的新鮮10mMNADPH(pH7.4)。將0.069mg鈣調(diào)蛋白加入4.1mL水中制備1μM鈣調(diào)溶液。還制備溶于水的8μM CaCl。通過混合50mM Tris(pH7.4)、6μM BH4、2μM黃素腺嘌呤二核苷酸和2μM黃素腺嘌呤單核苷酸制備2×反應(yīng)緩沖液。隨后，通過混合25μl 2×反應(yīng)緩沖液、5μl 10mMNADP、5μl 8mM CaCl2、4μl鈣調(diào)蛋白溶液和1μl14C精氨酸制備2×反應(yīng)混合物。將40μl反應(yīng)混合物和5μl樣品或?qū)φ赵?.5ml離心管中合并。將該離心管在37℃孵育1小時。
從1ml移液管頭切除頂端以增加該移液管頭的最小直徑來制備柱子。將250μl如上描述制備的樹脂漿液移液到每個柱子(FisherScientific，Glenlake，IL)。用400μl終止/平衡緩沖液(50mM乙酸鈉，pH5.5)洗滌柱子兩次。
孵育后，向每個樣品和對照加入約400μl終止/平衡緩沖液(50mM乙酸鈉，pH5.5)。向平衡的柱子加入400μl該混合物。用400μl終止/平衡緩沖液洗滌每個柱子。將400μl柱洗脫物轉(zhuǎn)移到裝有4ml閃爍液的閃爍瓶中。所得溶液在渦旋器上充分混合。用閃爍計數(shù)器(Beta counter，Beckman Coulter，Inc.，F(xiàn)ullerton，CA)得到所希望的計數(shù)。部分通過從每個樣品減去背景(緩沖液對照)計算結(jié)果。樣品值表達(dá)為每分鐘計數(shù)或未處理細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。
通過標(biāo)記的L-精氨酸向L-瓜氨酸的轉(zhuǎn)換測量相對eNOS功能并將其表達(dá)為未處理的細(xì)胞產(chǎn)生的瓜氨酸的百分?jǐn)?shù)。圖10顯示了實驗數(shù)據(jù)，其中在確定eNOS功能前將HAEC與1.0或0.3μM辛伐他汀孵育24小時。同時培養(yǎng)未處理的細(xì)胞并將這些細(xì)胞用于計算相對eNOS功能。圖10清除地表明辛伐他汀增加了培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS功能的水平。
全體數(shù)據(jù)表明辛伐他汀影響內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS表達(dá)和功能。eNOS功能的上調(diào)中蛋白質(zhì)合成的需要和eNOS特異的mRNA和功能中依賴辛伐他汀的增加與eNOS基因轉(zhuǎn)錄的藥物誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)模型一致。
等價方案本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)實驗就可以認(rèn)識到或者能夠確定本文中描述的本發(fā)明的特定實施方案的許多等價方案。這些等價方案將被下面的權(quán)利要求書包括。
權(quán)利要求
1.降低受試者中膽固醇的方法，該方法包括對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和含有L-精氨酸的緩釋制劑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中HMG-CoA還原酶抑制劑含有緩釋制劑。
3.權(quán)利要求1的方法，其中該方法降低受試者中總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇。
4.權(quán)利要求1的方法，其中HMG-CoA還原酶抑制劑含有辛伐他汀。
5.權(quán)利要求1的方法，其中該方法使總膽固醇降低約50到約150mg/dL。
6.權(quán)利要求1的方法，其中該方法使總膽固醇降低約80到約100mg/dL。
7.權(quán)利要求1的方法，其中該方法使LDL膽固醇降低約40到約110mg/dL。
8.權(quán)利要求1的方法，其中該方法使LDL膽固醇降低約60到約100mg/dL。
9.權(quán)利要求1的方法，其中該方法增加受試者中高密度脂蛋白(HDL)膽固醇。
10.權(quán)利要求1的方法，其中該方法使甘油三酯降低約30到約100mg/dL。
11.權(quán)利要求1的方法，其中該方法使甘油三酯降低約45到約75mg/dL。
12.權(quán)利要求1的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使總膽固醇多降低約5％到約15％。
13.權(quán)利要求1的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使總膽固醇多降低至少約5到約20mg/dL。
14.權(quán)利要求1的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使LDL膽固醇多降低至少約2到約20mg/dL。
15.權(quán)利要求1的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使甘油三酯多降低至少約5到約50mg/dL。
16.權(quán)利要求1的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L～精氨酸的緩釋制劑時相比使甘油三酯多降低至少約20到約35mg/dL。
17.增加不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中一氧化氮產(chǎn)生的方法，該方法包括對該受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸。
18.增強不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中血管舒張的方法，該方法包括對該受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸。
19.權(quán)利要求17或18的方法，其中HMG-CoA還原酶抑制劑含有辛伐他汀。
20.權(quán)利要求17或18的方法，其中L-精氨酸含有緩釋制劑。
21.權(quán)利要求17或18的方法，其中該方法提高內(nèi)皮功能至少約5到約15％。
22.權(quán)利要求17或18的方法，其中該方法提高內(nèi)皮功能至少約7到約12％。
23.權(quán)利要求17或18的方法，其中該受試者患有內(nèi)皮功能異常。
24.增加不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中一氧化氮(NO)產(chǎn)生的方法，該方法包括對該受試者施用L-精氨酸，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制作用。
25.增強不對稱二甲基精氨酸(ADMA)升高的受試者中血管舒張的方法，該方法包括對該受試者施用L-精氨酸，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制作用。
26.權(quán)利要求24或25的方法，其中該受試者患有內(nèi)皮功能異常。
27.權(quán)利要求24或25的方法，其中L-精氨酸含有緩釋制劑。
28.權(quán)利要求24或25的方法，其中該方法使內(nèi)皮功能提高約5到約15％。
29.權(quán)利要求24或25的方法，其中該方法使內(nèi)皮功能提高約6到約10％。
30.權(quán)利要求24或25的方法，其還包括對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑。
31.權(quán)利要求30的方法，其中HMG-CoA還原酶抑制劑含有辛伐他汀。
32.權(quán)利要求30的方法，其中施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸使內(nèi)皮功能提高約5％到約15％。
33.權(quán)利要求30的方法，其中施用HMG-CoA還原酶抑制劑和L-精氨酸使內(nèi)皮功能提高約7％到約12％。
34.緩釋L-精氨酸組合物，該組合物含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅；和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
35.權(quán)利要求34的組合物，其含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
36.制備L-精氨酸的緩釋組合物的方法，該方法包括(a)用粒化劑?；疞-精氨酸以形成粒劑；(b)濕潤碾磨該粒劑；(c)干燥該粒劑；(d)干燥碾磨該粒劑；和(e)將該粒劑與至少一種緩釋劑混合。
37.權(quán)利要求36的方法，其中步驟(e)包括預(yù)混合、混合和最終混合粒劑的步驟。
38.權(quán)利要求36的方法，其還包括在?；襟E前將L-精氨酸與結(jié)合劑干燥混合。
39.權(quán)利要求38的方法，其中結(jié)合劑含有聚乙烯吡咯烷酮。
40.權(quán)利要求36的方法，該方法包括(a)用包括聚乙烯吡咯烷酮的?；瘎┝；疞-精氨酸，其中L-精氨酸按重量計為緩釋制劑的約50％，其中聚乙烯吡咯烷酮按重量計為緩釋制劑的約3％到約4％；(b)濕潤碾磨該粒劑；(c)干燥該粒劑；(d)干燥碾磨該粒劑；和(e)將該粒劑與羥丙基甲基纖維素混合，其中羥丙基甲基纖維素按重量計為緩釋制劑的約35％。
41.權(quán)利要求40的方法，該方法還包括將粒劑與微晶纖維素、膠態(tài)二氧化硅和硬脂酸鎂混合，其中微晶纖維素按重量計為緩釋制劑的約10％，其中膠態(tài)二氧化硅按重量計為緩釋制劑的約1％以下，并且其中硬脂酸鎂按重量計為緩釋制劑的約1％以下。
42.用于治療或預(yù)防血管疾病或失調(diào)的食物棒，該食物棒含有包含L-精氨酸的緩釋制劑。
43.權(quán)利要求42的食物棒，其中緩釋制劑含有L-精氨酸的緩釋粒劑。
44.權(quán)利要求42的食物棒，其還含有HMG-CoA還原酶抑制劑。
45.權(quán)利要求42的食物棒，其中該食物棒當(dāng)被受試者消費時降低膽固醇。
46.權(quán)利要求42的食物棒，其中該食物棒用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病。
47.權(quán)利要求42的食物棒，其中該食物棒用于治療或預(yù)防間歇性跛行。
48.權(quán)利要求42的食物棒，其中該食物棒當(dāng)被受試者消費時降低C-反應(yīng)性蛋白。
49.預(yù)防或治療受試者中血管疾病或失調(diào)的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
50.降低受試者中膽固醇的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
51.增加受試者中一氧化氮的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
52.增強受試者中血管舒張的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
53.預(yù)防或治療受試者中阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
54.預(yù)防或治療受試者中間歇性跛行的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
55.降低受試者中C-反應(yīng)性蛋白的方法，該方法包括對受試者施用含有包含L-精氨酸的緩釋制劑的食物棒。
56.權(quán)利要求49到54任一項的方法，其中食物棒還含有HMG-CoA還原酶抑制劑。
57.權(quán)利要求56的方法，其中HMG-CoA還原酶抑制劑含有辛伐他汀。
58.降低受試者中膽固醇的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸的緩釋制劑。
59.權(quán)利要求58的方法，其中該方法降低受試者中總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇。
60.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使總膽固醇降低約50到約150mg/dL。
61.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使總膽固醇降低約80到約100mg/dL。
62.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使LDL膽固醇降低約40到約110mg/dL。
63.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使LDL膽固醇降低約60到約100mg/dL。
64.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使受試者中高密度脂蛋白(HDL)膽固醇增加。
65.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使甘油三酯降低約30到約100mg/dL。
66.權(quán)利要求58的方法，其中該方法使甘油三酯降低約45到約75mg/dL。
67.權(quán)利要求58的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅；和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
68.權(quán)利要求67的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
69.治療或預(yù)防血管疾病或失調(diào)的方法，該方法包括對受試者施用緩釋制劑，該緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅；和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
70.權(quán)利要求69的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
71.治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸的緩釋制劑。
72.權(quán)利要求71的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅，和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
73.權(quán)利要求72的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
74.治療或預(yù)防間歇性跛行的方法，該方法包括對受試者施用含有L-精氨酸的緩釋制劑。
75.權(quán)利要求74的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅，和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
76.權(quán)利要求75的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
77.治療或預(yù)防受試者中動脈粥樣硬化的方法，該方法包括對受試者施用緩釋制劑，該緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅，和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
78.權(quán)利要求77的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
79.增強受試者中血管舒張的方法，該方法包括對受試者施用緩釋制劑，該緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅，和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
80.權(quán)利要求79的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
81.增加受試者中-氧化氮產(chǎn)生的方法，該方法包括對受試者施用緩釋制劑，該緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅，和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
82.權(quán)利要求81的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
83.降低C-反應(yīng)性蛋白的方法，該方法包括對受試者施用L-精氨酸。
84.權(quán)利要求83的方法，其中L-精氨酸包括緩釋制劑。
85.權(quán)利要求83的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約25％到約75％L-精氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)按重量計約0.5％到約5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約5％到約40％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約2％到約20％微晶纖維素；(e)按重量計約3％以下的二氧化硅，和(f)按重量計約3％以下的硬脂酸鎂。
86.權(quán)利要求85的方法，其中緩釋制劑含有(a)按重量計約50％L-精氨酸單鹽酸鹽，其中L-精氨酸包含L-精氨酸單鹽酸鹽；(b)按重量計約3％到約4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量計約35％羥丙基甲基纖維素；(d)按重量計約10％微晶纖維素；(e)按重量計約1％以下的膠態(tài)二氧化硅，其中二氧化硅包含膠態(tài)二氧化硅；和(f)按重量計約1％以下的硬脂酸鎂。
87.降低受試者中C-反應(yīng)性蛋白的方法，該方法包括對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑和含有L-精氨酸的緩釋制劑。
88.權(quán)利要求87的方法，其中該方法使C-反應(yīng)性蛋白降低約10％到約50％。
89.權(quán)利要求87的方法，其中該方法使C-反應(yīng)性蛋白降低約25％到約35％。
90.權(quán)利要求87的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使C-反應(yīng)性蛋白多降低約50％到約90％。
91.權(quán)利要求87的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使C-反應(yīng)性蛋白多降低約65％到約75％。
92.權(quán)利要求87的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使C-反應(yīng)性蛋白多降低約80％到約120％。
93.權(quán)利要求87的方法，其中該方法與當(dāng)對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑而不施用含有L-精氨酸的緩釋制劑時相比使C-反應(yīng)性蛋白多降低約95％到約105％。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療和預(yù)防腦血管和心血管疾病和失調(diào)的方法和制劑。本發(fā)明至少部分基于如下發(fā)現(xiàn)，即對受試者施用含有內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)的激動劑，如HMG－CoA還原酶抑制劑的制劑和含有NO前體，如L－精氨酸的制劑可用于治療或預(yù)防腦血管和/或心血管疾病或失調(diào)。
文檔編號A61K9/22GK1731985SQ200380107369
公開日2006年2月8日 申請日期2003年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月24日
發(fā)明者E·S·龍 申請人:恩諾斯藥品公司