專利名稱：表兒茶素－3－0－沒食子酸酯及表沒食子兒茶素－3－0－沒食子酸酯抑制慢腎衰的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯及其混合物為功效成分的制劑用于治療慢性腎功能竭、尿毒癥。
背景技術(shù)：
腎功能衰竭、尿毒癥目前尚屬疑難癥之一，是各種腎臟疾患持續(xù)發(fā)展的結(jié)果，屬進(jìn)行性，不可逆性臨床綜合癥，患病率約占總?cè)丝诘?.25％。目前有效治療藥物較少，現(xiàn)臨床多采用腎移植療法和透析療法只能延緩病情發(fā)展，費(fèi)用亦較高。腎臟移植，不僅費(fèi)用昂貴且腎源難覓，術(shù)后排異、并發(fā)感染等尚難徹底解決，而影響腎(人)的存活率，為了尋求廉價(jià)有效的治療途徑對(duì)該類藥品的研發(fā)，引起世界各國(guó)的普遍關(guān)注。
日本、西歐投入大量人力、物力，從天然物中尋找有效成分，中藥的悠久臨床歷史及廣博的文獻(xiàn)資料，自然引起廣泛重視。經(jīng)過廣泛篩選，大黃治療慢腎衰、尿毒癥已受到各國(guó)研究人員的高度重視，尤其是中醫(yī)的臨床實(shí)用，資料非常珍貴，極有說服力，為深入研究奠定了堅(jiān)實(shí)的臨床基礎(chǔ)。
鑒于上述原因，美國(guó)、日本、歐洲各國(guó)耗資億元進(jìn)行化學(xué)、分子生物學(xué)研究，但至今難以進(jìn)入臨床試用，而在中國(guó)不少省市、自治州早已立項(xiàng)開展臨床應(yīng)用研究，率先將大黃直接應(yīng)用于臨床治療慢腎衰、尿毒癥，這是中醫(yī)中藥的優(yōu)勢(shì)，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，近十幾年來，國(guó)內(nèi)有40余家醫(yī)療單位、科研院所采用單方或復(fù)方大黃制劑，劑型繁多，給藥途徑多種，治療千余例腎功能衰竭及尿毒癥患者大多獲得一定效果。
在有效成分不清楚的條件下，供臨床研究用的大黃制劑，均采取盡量保留各種成分(含有害成分)的辦法，甚至采用大黃粉直接應(yīng)用臨床。其劑型有膠襄劑、片劑、丸劑、灌腸劑、注射劑等。從給藥途徑來看，有口服、腸道給藥，還有注射給藥。
在廣泛臨床研究的基礎(chǔ)上，深入進(jìn)行有效成分的研究勢(shì)在必然，因?yàn)榇簏S等常用中藥中除了有效成分外，尚有一些具一定毒副作用的化學(xué)成分，只有去除后，才能保證用藥安全，降低毒副反應(yīng)，對(duì)有效成分的定性、定量研究，將確保臨床用藥中有效成的治療劑量，和穩(wěn)定臨床療效。
有效成分的研究是多學(xué)科綜合運(yùn)用的結(jié)果，在藥理、藥化的密切配合之下，追蹤有效成分，去除無效成分，才得以完成。藥理實(shí)驗(yàn)采用生化指標(biāo)與器官形態(tài)學(xué)的指導(dǎo)，對(duì)大黃及茶葉中100余種成分進(jìn)行了藥理藥化試驗(yàn)研究，國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有文獻(xiàn)均認(rèn)為丹寧(Tannin)是治療慢腎功能衰竭及尿毒癥的有效成分，但本發(fā)明認(rèn)為主要活性成分并非丹寧，而是表兒茶素-3-O-沒食子酸酯，和表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯，二者均為多元酚類，但并無丹寧的通性。故有被機(jī)體吸收的而發(fā)揮作用的可能。綜上所述，去粗取精，確保臨床用藥中有效成分的含量，是提高療效，降低毒副作用的關(guān)鍵所在。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的就是提供從大黃、綠茶等植物中提取化合物——表兒茶素-3-O沒食子酸酯(ECG)和表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的就是提供以表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)和表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)及其混合物為功效成分的制劑治療慢性腎功能衰竭、尿毒癥的應(yīng)用。
表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate簡(jiǎn)稱ECG)的分子結(jié)構(gòu) 表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(epigallcatechin-3-O-gallateECG簡(jiǎn)稱EGCG)的分子結(jié)構(gòu) 發(fā)明詳述雖然國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)均報(bào)道，大黃丹寧是治療慢性腎功能衰竭、尿毒癥的有效成分，但本發(fā)明從上述植物原料中以溶劑提取，分子篩色層分離，所獲化合物；表兒茶素-3-O-沒食子酸酯，及表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯是治療慢性腎功能衰竭及尿毒癥的主要有效成分，二者均非丹寧。且大黃蒽醌、茶丹寧均被除去。表兒茶素沒食子酸酯及表沒食子兒茶素沒食子酸酯均屬小分子化合物，亦不具備丹寧的通性。上述二化合物的構(gòu)型在結(jié)構(gòu)式中亦已表達(dá)。
藥理、藥化研究大黃及綠茶中，有機(jī)成分均逾百種，經(jīng)過一系列提取、純化、分離工藝所獲得表兒茶素-3-O-沒食子酸酯和表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯均為灰白結(jié)晶形粉末，經(jīng)紫外、紅外、核磁共振(含二維譜)質(zhì)譜等現(xiàn)代分析手段，均證實(shí)為上述化合物，其他理化常數(shù)亦一致。
腎功能衰竭、尿毒癥患者，臨床癥狀多具有肌酐、尿素氮、尿蛋白值高出正常人，活性氧清除酶活度下降及腎小球膜增生，濾過功能下降等，故實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵勒赵O(shè)計(jì)下述指標(biāo)。
藥理實(shí)驗(yàn)表明表兒茶素-3-O-沒食子酸酯、表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯及其二者的混合物能明顯降低尿素氮，見表1；降低肌酐，見表2。
表1 有效部位對(duì)尿素氮的影響劑量天數(shù) 組別 (mg/kg 氮B.w./day) (mg/dl)0 腎切除鼠對(duì)照組 - 42.3±1.4治療組I 10 43.2±2.9治療組II 20 41.6±2.5腎切除鼠20對(duì)照組 - 39.7±3.5治療組I 10 28.7±1.3a治療組II 20 30.5±1.4b腎切除鼠40對(duì)照組 - 40.2±3.9治療組I 10 31.7±1.9a治療組II 20 32.1±2.2b腎切除鼠60對(duì)照組 - 42.8±4.4治療組I 10 34.0±2.8a治療組II 20 30.2±1.9b腎切除鼠80對(duì)照組 - 51.8±2.7治療組I 10 36.9±3.0a治療組II 20 40.2±3.6b正常值 16.4±0.3aP＜0.01；bp＜0.001與對(duì)照組比較，治療組具顯著性差異表2 有效部位對(duì)血清肌酐的影響劑量天數(shù) 組別 (mg/kg 肌酸酐B.w./day) (mg/dl)0 腎切除鼠對(duì)照組 - 0.58±0.02治療組I 10 0.59±0.02治療組II 20 0.57±0.02腎切除鼠20對(duì)照組 - 0.77±0.05治療組I 10 0.69±0.02a治療組II 20 0.59±0.02b腎切除鼠40對(duì)照組 - 0.84±0.03治療組I 10 0.73±0.02a治療組II 20 0.70±0.02b腎切除鼠60對(duì)照組 - 0.83±0.05治療組I 10 0.74±0.03a治療組II 20 0.69±0.03b腎切除鼠80對(duì)照組 - 10.5±0.05治療組I 10 0.90±0.05a治療組II 20 0.86±0.05b正常值 0.48±0.03aP＜0.01；bp＜0.001與對(duì)照組比較，治療組具顯著性差異提高氧自由基清除酶的活力，見表3，組織病理研究表明，能抑制腎小球細(xì)胞膜的增生和減輕腎硬化損傷的程度，見表4。
表3 對(duì)活性氧清除酶活力的影響劑量GSH-Px組別 (mg/kg SOD Catalase(U/mg蛋白)B.w./day) (U/mg蛋白) (U/mg蛋白)腎切除鼠對(duì)照組- 8.75±0.40 142.7±11.8 69.63±2.02治療組I 10 10.68±0.48a213.2±13.9a71.91±3.41a治療組II 20 11.66±0.54b224.4±10.9b76.97±3.15b正常值18.33±1.00 225.9±8.785.12±3.95SOD(超氧歧化酶)；GSH-Px(谷光胱肽氧化酶)；aP＜0.05；bp＜0.01；cp＜0.001與對(duì)照組比較，治療組具顯著性差異表4 組織病理學(xué)觀察給藥組 給藥組參數(shù) 對(duì)照組(10mg) (20mg)腎細(xì)胞膜增殖程度正常 000輕度 134中度 432重度 100腎小球膜損傷1.59±0.18 1.24±0.12a1.15±0.13b指數(shù)p＜0.01與對(duì)照組比較，治療組具顯著性差異大黃、綠茶等植物中含有上述有效成分，但同時(shí)亦存在有害物質(zhì)，如大黃蒽醌、茶丹寧(茶多酚)，去除這些有害成分，提高有效成分的純度，力求準(zhǔn)確定量，使臨床治療劑量準(zhǔn)確，確保臨床療效的提高是本發(fā)明的研究宗旨。同時(shí)為制定合理的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
綜上所述，本發(fā)明旨在深入探索中草藥治療慢性腎功能衰竭、尿毒癥的作用機(jī)理，更合理的應(yīng)用天然植物有效成分，進(jìn)一步提高臨床治療慢性腎功能衰竭、尿毒癥效果。
應(yīng)用實(shí)例ECG與EGCG混合物600g藥用淀粉 200g粘合劑CMC(10％) 若干將以上物質(zhì)按處方配料混合、加工、制粒低溫真空干燥，裝膠襄，每粒含ECG與EGCG混合藥物300mg，進(jìn)一步臨床實(shí)驗(yàn)，經(jīng)30名患者臨床服用膠襄，結(jié)果表明治療組尿素氮、肌酐、尿蛋白值均低于對(duì)照組，食欲、體癥表現(xiàn)明顯優(yōu)于對(duì)照組，有效率達(dá)到90.6％，高出中藥大黃的有效率83.2％。應(yīng)指出的是服量大幅度減小。丹寧、蒽醌所致毒副反應(yīng)明顯降低。
權(quán)利要求
1.表兒茶素-3-0-沒食子酸酯和/或表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯，及其混合物為功效成分的制劑用于治療慢性腎功能衰竭、尿毒癥。
2.權(quán)利要求1所述的以大黃、綠茶等植物為原料，以溶劑提取、純化、通過分子篩色層分離得到表兒茶素-3-0-沒食子酸酯和/或表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯，去除蒽醌和丹寧類成分。
全文摘要
表兒茶素－3－0－沒食子酸酯和/或表沒食子兒茶素－3－0－沒食子酸酯，及其混合物為功效成分的制劑用于治療慢性腎功能衰竭、尿毒癥。
文檔編號(hào)A61K31/353GK1615843SQ20031011136
公開日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2003年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月11日
發(fā)明者譚文界, 潘源虎, 譚靜玲 申請(qǐng)人:譚文界