專利名稱：在i.a.hiv的治療中用作逆轉(zhuǎn)錄酶調(diào)節(jié)劑的4－(3,5－二氰基苯氧基)吡唑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及吡唑衍生物，它們?cè)谒幬镏械膽?yīng)用，包含它們的組合物，它們的制備方法以及在該制備過程中所用的中間體。
逆轉(zhuǎn)錄酶涉及人類免疫缺陷病毒(HIV)的感染生命周期。已證實(shí)能夠干擾該酶功能的化合物可用于治療由HIV以及遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的病癥，如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。由于病毒能夠變異，對(duì)已知的調(diào)節(jié)劑產(chǎn)生抗藥性，人們總是不斷需要新的更好的HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的調(diào)節(jié)劑，特別是抑制劑。
作為逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的一類N-苯基吡唑類物質(zhì)在J.Med.Chem.，2000，43，1034中披露。在US專利3,303,200中描述了一類N-(羥乙基)吡唑衍生物具有抗病毒活性。在本申請(qǐng)的申請(qǐng)日尚未公開的國(guó)際申請(qǐng)PCT/IB02/01234中概括性的包括了、但未具體公開下述的式(I)化合物。
本發(fā)明的化合物可與逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合，并且是該酶的調(diào)節(jié)劑，特別是抑制劑。
根據(jù)本發(fā)明，提供了式(I)化合物 或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物。
式(I)化合物的可藥用鹽包括其酸加成鹽及堿鹽。
合適的酸加成鹽由可形成無(wú)毒鹽的酸生成，其實(shí)例有鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、醋酸鹽、延胡索酸鹽、雙羥萘酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、樟腦磺酸鹽、D和L-乳酸鹽、D和L-酒石酸鹽、乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、丙二酸鹽、乳清酸鹽、葡庚糖酸鹽、甲基硫酸鹽、硬脂酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、2-萘磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、羥苯酰苯酸鹽、煙酸鹽、羥乙磺酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖二酸鹽、苯甲酸鹽、乙磺酸鹽和雙羥萘酸鹽。
合適的堿鹽由可形成無(wú)毒鹽的堿生成，其實(shí)例有鈉鹽、鉀鹽、鋁鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、膽堿鹽、二乙醇胺鹽(diolamine)、乙醇胺鹽、精氨酸鹽、甘氨酸鹽、緩血酸胺鹽、芐乍生鹽(benzathine)、賴氨酸鹽、葡甲胺鹽和二乙胺鹽。
這些適宜的鹽參見Berge等人的J.Pharm.Sci.，66，1-19，1977和Bighley等人的Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，MarcelDekker Inc，New York，1996，13卷，453-497頁(yè)。
式(I)化合物的可藥用的溶劑化物包括水合物。
式(I)化合物可以在化合物的任意功能團(tuán)上進(jìn)行修飾得到其可藥用的衍生物。這些衍生物的實(shí)例在下述文獻(xiàn)中有描述Drugs of Today，第19卷(9)，1983，pp 499-538；Topics in Chemistry，第31章，pp306-316；及″Design of Prodrugs″，H.Bundgaard，Elsevier，1985，第1章(這些文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容引入本文作為參考)。這些衍生物包括酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝酸酯(nitro ester)、硫酸酯、亞砜、酰胺、磺胺類、氨基甲酸酯、偶氮化合物、磷酰胺、糖苷、醚類、縮醛和縮酮。
本發(fā)明包括式(I)化合物及其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物的所有異構(gòu)體形式，其包括所有的幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體，以及它們的混合物(例如外消旋混合物)。
非對(duì)映異構(gòu)體的分離可通過常規(guī)的技術(shù)完成，例如，將化合物的立體異構(gòu)體混合物進(jìn)行分步結(jié)晶、色譜分離或高效液相色譜(HPLC)。化合物的單個(gè)對(duì)映體也可以從相應(yīng)的光學(xué)純的中間體制備，或者可以通過例如使用適當(dāng)手性載體的HPLC拆分相應(yīng)的外消旋體，或通過將相應(yīng)的外消旋體與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的酸或堿反應(yīng)形成的非對(duì)映異構(gòu)體鹽分步結(jié)晶得到。
式(I)化合物和其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物能夠以多種不同的形式結(jié)晶，這一特征被稱為多晶型現(xiàn)象，并且所有的這些多晶形式(多晶型物)都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。多晶型現(xiàn)象通常因溫度和/或壓力的變化而發(fā)生，并能夠在結(jié)晶過程中產(chǎn)生各種變化。多晶型物能通過各種物理特征加以區(qū)分，并且典型的是X-射線衍射圖案、溶解行為及化合物的熔點(diǎn)，這些都可以用于區(qū)分多晶型物。
式(I)化合物、其可藥用鹽、溶劑化物及衍生物、異構(gòu)體及多晶型物在下文中都稱為本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式(I)化合物及其可藥用鹽和溶劑化物。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是式(I)化合物。
本發(fā)明的化合物具有優(yōu)越的性能，包括良好的代謝穩(wěn)定性，并因而具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)特性。另外，本發(fā)明的化合物在許多其它有用的性能方面比那些現(xiàn)有技術(shù)中的物質(zhì)更為優(yōu)越，如效能、活性持續(xù)時(shí)間、藥物作用范圍、副反應(yīng)、溶解性、化學(xué)穩(wěn)定性等等。
本發(fā)明的化合物可以按本領(lǐng)域已知的制備類似結(jié)構(gòu)的化合物的方法制備。本發(fā)明的化合物可以按以下描述的方法制備，或按實(shí)施例描述的特定方法制備，或按類似于兩種方法的方法制備。本發(fā)明還包括一種或多種制備本發(fā)明化合物的方法，還包括所有在其中應(yīng)用的新的中間體。
式(I)化合物可以按以下方案1所述的途徑制備
方案1 在方案1中，式(I)化合物可以通過式(II)化合物與式(V)的2-羥基乙基肼或其鹽或水合物縮合得到，該反應(yīng)任選在酸或堿的存在下進(jìn)行，其中堿優(yōu)選是叔胺堿如三乙胺，酸優(yōu)選是乙酸。在一個(gè)有代表性的方法中，將式(II)化合物在適當(dāng)溶劑如乙酸中的溶液用式(V)的肼或其鹽或水合物和，如果使用的話，適宜的酸或堿處理，反應(yīng)溫度為室溫到溶劑的回流溫度。在一個(gè)優(yōu)選的方法中，反應(yīng)是在室溫下進(jìn)行的。
在該反應(yīng)中也可以使用式(II)化合物的功能等同物。其包括式(VI)或(VII)的化合物，其中L1和L2分別為適宜的離去基團(tuán)，優(yōu)選-N(C1-C6烷基)2，最優(yōu)選-N(CH3)2。

因此，式(I)化合物可以通過將式(VI)或(VII)的化合物與式(V)的化合物或其鹽或水合物縮合得到，該反應(yīng)任選地在酸或堿的存在下進(jìn)行，堿優(yōu)選為叔胺堿如三乙胺，酸優(yōu)選為乙酸。在一個(gè)有代表性的方法中，將式(VI)或(VII)化合物在適當(dāng)溶劑如乙醇中的溶液用式(V)化合物或其鹽或水合物和，如果使用的話，適宜的酸或堿處理，反應(yīng)溫度為室溫到溶劑的回流溫度。在一個(gè)優(yōu)選的方法中，反應(yīng)是在加熱回流下進(jìn)行的。
L1為二甲基氨基的式(VI)化合物可以通過式(VIII)化合物與適當(dāng)取代的甲酰胺縮醛在升高的溫度下反應(yīng)制備。優(yōu)選的反應(yīng)溫度為100℃。L1為二甲基氨基的式(VII)的化合物可以通過式(IX)化合物在相同的條件下反應(yīng)得到。
式(VIII)的化合物可以商購(gòu)獲得，或可以通過式(X)化合物與式(XI)化合物反應(yīng)制得。在一個(gè)有代表性的方法中，將式(XI)化合物在適當(dāng)?shù)娜軇┤绫械娜芤河眠m當(dāng)?shù)膲A如碳酸銫和式(X)的化合物進(jìn)行處理。在優(yōu)選的方法中，將反應(yīng)混合物加熱至例如回流。任選地，可向其中加入親核的催化劑如碘化鈉或碘化四丁基銨。
式(IX)的化合物可以商購(gòu)獲得，也可以從式(XII)化合物和式(XI)化合物按照從式(X)化合物制備式(VIII)化合物的相同方法制備。
式(II)化合物可以通過式(III)的化合物與式(XI)的化合物反應(yīng)得到。
在一個(gè)有代表性的方法中，將式(III)化合物在適當(dāng)溶劑如丙酮中的溶液用式(XI)化合物和適當(dāng)?shù)膲A如碳酸鉀或碳酸銫處理并加熱，優(yōu)選加熱至回流。任選地，可以向其中加入親核的催化劑如碘化鈉或碘化四丁基銨。
式(III)的化合物可以商購(gòu)獲得，或可以通過式(IV)的化合物與氯化試劑反應(yīng)得到。在一個(gè)有代表性的方法中，將冷卻的式(IV)化合物在適當(dāng)溶劑如乙腈中的溶液首先用溴化四丁基銨和三甲基氯硅烷處理，然后用干燥的二甲基亞砜處理。在另一個(gè)有代表性的方法中，將式(IV)的化合物用硫酰氯處理，在該反應(yīng)中任選地存在適當(dāng)?shù)娜軇┤缍燃淄椤?br> 式(I)化合物還可以通過將式(XIII)的吡唑化合物與式(XIV)的烷基化試劑或其保護(hù)的衍生物反應(yīng)得到。
在一個(gè)有代表性的方法中，將式(XIII)的吡唑化合物在適當(dāng)溶劑如乙醇或N，N-二甲基甲酰胺中的溶液用式(XIV)的烷基化試劑如保護(hù)的羥乙基溴化物，和堿如乙醇鈉或氫化鈉處理，加熱溫度為0℃至溶劑的回流溫度。優(yōu)選的組合是以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，氫化鈉為堿，在0℃下，以2-(2-溴乙氧基)四氫-2H-吡喃為烷基化試劑進(jìn)行反應(yīng)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在式(XIII)的吡唑化合物的烷基化反應(yīng)中，需要或希望對(duì)式(XIV)化合物的羥基基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，在這種情況下，式(I)化合物最終要通過對(duì)相應(yīng)的帶有-OP1基團(tuán)的化合物進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)方能制備，其中P1是適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)。適當(dāng)保護(hù)基團(tuán)的例子對(duì)于普通技術(shù)人員來說是顯而易見的；例如參見“Protecting groups in Organic Synthesis(第二版)”，Theodora W.Green和Peter G.M.Wuts，1991，John Wiley andSons(特別參見10-118頁(yè)，關(guān)于羥基基團(tuán)的保護(hù))，該文獻(xiàn)引入本文作為參考。帶有-OP1基團(tuán)的化合物可以按前述類似的方法制備，在細(xì)節(jié)上作必要的改動(dòng)。
式(IV)和(V)的化合物可商購(gòu)獲得、是文獻(xiàn)中已知的或者可容易地通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制得。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)給藥，但通常都是同適當(dāng)?shù)乃幱觅x形劑、稀釋劑或載體以混合物的形式給藥。所述賦形劑、稀釋劑或載體根據(jù)需要的給藥途徑以及規(guī)范的藥學(xué)實(shí)踐進(jìn)行選擇。
例如，本發(fā)明的化合物可以以片劑、膠囊、多顆粒、凝膠劑、薄膜片、ovule、酏劑、溶液劑或懸浮劑的形式通過口服、頰內(nèi)或舌下途徑給藥，其中可含有矯味劑或著色劑，用于速釋給藥、延遲釋放給藥、緩釋給藥、持續(xù)給藥、脈沖給藥或控釋給藥。本發(fā)明的化合物還可以以快速分散或快速溶解的劑型給藥，或以高能分散體的形式給藥，或以包衣顆粒的形式給藥。本發(fā)明化合物的適宜的制劑可以根據(jù)需要采用包衣或未包衣的形式。
所述固體藥物組合物，例如片劑，可以含有賦形劑，如微晶纖維素、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣、甘氨酸和淀粉(優(yōu)選玉米淀粉、土豆淀粉或木薯淀粉)，崩解劑，如淀粉乙醇酸鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和特定的復(fù)合硅酸鹽，以及顆粒粘合劑，如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、明膠和阿拉伯膠。另外，還可以包含潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石粉。
一般實(shí)施例片劑劑型典型地包含0.01-500mg的活性物質(zhì)，并且片劑填充的重量范圍在50-1000mg。一個(gè)10mg片劑劑型的實(shí)施例如下所述
成份 ％w/w本發(fā)明的化合物10.000*乳糖 64.125淀粉 21.375交聯(lián)羧甲基纖維素鈉3.000硬脂酸鎂 1.500*根據(jù)藥物的活性，含量相應(yīng)調(diào)整。
片劑的制備是按常規(guī)方法完成的，例如直接壓片法、干法或濕法制粒法。片芯可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)陌隆?br> 相似類型的固體組合物可以用于填充明膠或HPMC膠囊。優(yōu)選的賦形劑包括乳糖、淀粉、纖維素、乳糖(milk sugar)或高分子量的聚乙二醇。對(duì)于含水的混懸劑和/或酏劑，可將本發(fā)明的化合物與各種甜味劑或矯味劑、色素或染料、乳化劑和/或助懸劑，稀釋劑如水、乙醇、丙二醇和丙三醇，以及它們的混合物進(jìn)行混合。
本發(fā)明的化合物還可以通過非胃腸道途徑給藥，例如靜脈給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、心室內(nèi)給藥、尿道內(nèi)給藥、胸骨內(nèi)給藥、顱內(nèi)給藥、肌內(nèi)或皮下給藥，或者通過輸液或無(wú)針注射技術(shù)給藥。對(duì)于非胃腸道給藥形式來說，最好使用含有其它一些成分，例如使溶液與血液等滲的足量的鹽或葡萄糖的無(wú)菌水溶液的形式。如果需要的話，水溶液應(yīng)適當(dāng)?shù)鼐彌_(優(yōu)選至pH3-9)。在無(wú)菌條件下制備適宜的非胃腸道制劑可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的規(guī)范的制藥技術(shù)很容易地完成。
對(duì)于向患者口服和非胃腸道給藥，本發(fā)明的化合物的日劑量水平通常為0.01-30mg/kg，優(yōu)選是0.01-5mg/kg(以單劑或分劑量形式給予)。
因此，本發(fā)明化合物的片劑或膠囊可以含有1-500mg的活性化合物，用于單劑給藥，或在需要時(shí)，一次給藥兩劑或多劑。在任何情況下，醫(yī)師可以確定最適于患者個(gè)體的實(shí)際劑量，該劑量會(huì)根據(jù)特定患者的年齡、體重和反應(yīng)的不同而不同。上述劑量為一般情況的例子。當(dāng)然，對(duì)于有些個(gè)體而言，更高或更低的劑量范圍是有益的，因此也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在治療某些病癥時(shí)，需要或希望本發(fā)明的化合物以單劑的形式給藥。
本發(fā)明的化合物還可以鼻內(nèi)給藥或吸入給藥，并可方便地以干燥粉末形式通過吸入器，或以噴霧劑形式通過壓力容器、氣泵、噴霧器或霧化器釋藥，其中，可使用或不使用適宜的噴射劑如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫化氟代烷烴如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商標(biāo)])或1，1，1，2，3，3，3-七氟代丙烷(HFA 227EA[商標(biāo)])、二氧化碳或其它適宜的氣體。對(duì)于壓力氣霧劑，單元?jiǎng)┝客ㄟ^提供可測(cè)定量的閥門來確定。壓力容器、氣泵、噴霧器或霧化器可以含有活性化合物的溶液或懸浮液，例如應(yīng)用乙醇和噴射劑的混合物作為溶劑，另外還可以含有潤(rùn)滑劑如去水山梨糖醇三油酸酯。在吸入或吹入器中使用的膠囊及藥筒(由例如明膠制成)可以裝入本發(fā)明的化合物和適宜的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物。
或者，本發(fā)明的化合物可以以栓劑或陰道栓劑的形式給藥，或可以以凝膠、水凝膠、洗液、溶液、霜?jiǎng)?、軟膏或撲粉的形式局部給藥。本發(fā)明的化合物還可以經(jīng)皮或透皮給藥，例如，通過使用皮膚貼劑進(jìn)行給藥。它們還可以通過肺或直腸的途徑給藥。
它們還可以通過經(jīng)眼途徑給藥。對(duì)于眼科的應(yīng)用，該化合物可以制成在等滲的、pH調(diào)節(jié)過的、無(wú)菌鹽水中的微粒懸浮劑，或優(yōu)選是在等滲的、pH調(diào)節(jié)過的、無(wú)菌鹽水中的溶液，可任選地加入防腐劑，如苯扎氯銨。或者，它們還可以制成軟膏，如凡士林。
對(duì)于皮膚的局部應(yīng)用，本發(fā)明的化合物可以制成包含懸浮或溶解在下述混合物中的活性化合物的適宜的軟膏，所述混合物含有如下一種或多種成分礦物油、液狀石蠟、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水?；蛘?，它們還可以制成適宜的洗劑或霜?jiǎng)瑧腋』蛉芙庥诶绾幸环N或多種如下成分的混合物中礦物油、失水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚乙二醇、液狀石蠟、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、十六/十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
本發(fā)明的化合物還可以用于與環(huán)糊精組合。已知環(huán)糊精可形成包合的及非包合的藥物分子的復(fù)合物。藥物-環(huán)糊精復(fù)合物的形成可以改善溶解性、溶解速率、生物利用度和/或藥物分子的穩(wěn)定性。藥物-環(huán)糊精復(fù)合物通?？捎糜诖蠖鄶?shù)藥物劑型和給藥途徑。除了直接與藥物形成復(fù)合體外，環(huán)糊精還可以用作輔料添加劑，例如載體、稀釋劑或增溶劑。α-、β-和γ-環(huán)糊精是最常用的環(huán)糊精，其適宜的例子描述在WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148中。
應(yīng)該理解這里所述的治療包括治愈性、緩解性和預(yù)防性的治療。
口服給藥是優(yōu)選的。
本發(fā)明中的具體實(shí)施方式
包括將本發(fā)明的化合物與一種或多種其它治療劑共同給藥，及包含本發(fā)明的化合物和一種或多種其它治療劑的組合物。這樣的聯(lián)合治療特別用于預(yù)防和/或治療HIV及相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染，這些病毒會(huì)快速進(jìn)化成對(duì)任何單一治療有耐藥性的毒株?；蛘?，可能需要其它的治療劑來治療用本發(fā)明化合物進(jìn)行治療所引起的或所伴隨的疾病。例如，在治療HIV或相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染中，可能需要額外治療機(jī)會(huì)感染、腫瘤及其它由于患者的免疫妥協(xié)狀態(tài)發(fā)生的病癥。
優(yōu)選的本發(fā)明的聯(lián)合治療包括同時(shí)或順序應(yīng)用本發(fā)明的化合物和一種或多種以下藥物進(jìn)行治療(a)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，如阿巴卡韋、阿德福韋、雙脫氧腺苷、拉米夫定、司他夫定、扎西他濱和齊多夫定；(b)非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，如capavirine、地拉夫定、依法韋侖和奈韋拉平；(c)HIV蛋白酶抑制劑如印地那韋、那非那韋、利托那韋和沙奎那韋；(d)CCR5拮抗劑如TAK-779或UK-427,857；(e)CXCR4拮抗劑如AMD-3100；(f)整合酶抑制劑，如L-870,810或S-1360；(g)病毒融合抑制劑，如T-20；(h)研究中的新藥物，如三協(xié)唯、KNI-272、安潑那韋、GW-33908、FTC、PMPA、MKC-442、MSC-204、MSH-372、DMP450、PNU-140690、ABT-378、KNI-764、DPC-083、TMC-120或TMC-125；(i)抗真菌劑，如氟康唑、依曲康唑或伏立康唑；或(j)抗細(xì)菌劑，如阿齊紅霉素。
本發(fā)明化合物作為逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的活性可通過以下分析方法進(jìn)行測(cè)定。
HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制作用應(yīng)用純化的通過大腸桿菌表達(dá)獲得的重組HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶(RT，EC，2.7.7.49)，建立96-孔平板分析測(cè)定系統(tǒng)以測(cè)定大量的樣品，同時(shí)應(yīng)用Poly(rA)-寡(dT)逆轉(zhuǎn)錄酶[3H]-SPA酶測(cè)定系統(tǒng)(Amersham NK9020)和[3H]-Flashplate酶測(cè)定系統(tǒng)(NEN-SMP 103)，按照制造商的說明使用。將化合物溶解于100％的DMSO中并用適當(dāng)?shù)木彌_液稀釋到5％的DMSO終濃度。抑制活性用相對(duì)于DMSO的對(duì)照組的抑制百分?jǐn)?shù)表示。化合物抑制逆轉(zhuǎn)錄酶達(dá)50％的濃度表示為化合物的IC50值。
按以上步驟進(jìn)行測(cè)定，實(shí)施例1化合物的IC50值為295納摩爾。
本發(fā)明化合物的代謝應(yīng)用以下分析法測(cè)定。
A.在人類肝微粒體和SupermixTM中的代謝本發(fā)明化合物在肝微粒體和SupermixTM中的代謝不穩(wěn)定性可按下述方法測(cè)定。
微粒體部分從人類肝臟中分離并測(cè)定P450含量。SupermixTM從Gentest獲得。將人類微粒體(0.5μM細(xì)胞色素P450)和SupermixTM(0.05μM細(xì)胞色素P450)加入到含有50mM磷酸緩沖液(pH值7.4)、5mMMgCl2、1mM NADP和由異檸檬酸和異檸檬酸脫氫酶組成的NADPH生成系統(tǒng)的培養(yǎng)基中。底物濃度為1μM，并在37℃下培養(yǎng)1小時(shí)。在培養(yǎng)過程中的不同時(shí)間點(diǎn)提取樣品并應(yīng)用hplc-ms-ms法進(jìn)行分析。
按照上述方法測(cè)定的實(shí)施例1的化合物的t1/2＞120分鐘(人類微粒體和SupermixTM均如此)。
B.在人類肝細(xì)胞中的代謝本發(fā)明化合物在人類肝細(xì)胞中的代謝不穩(wěn)定性可通過以下方法測(cè)定。
冷藏保存的人類肝細(xì)胞得自In vitro Technologies公司。將肝細(xì)胞解凍并以1百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/ml的濃度在50％的Krebs-Heinsleit緩沖液50％的包含10％胎牛血清的Williams E培養(yǎng)液中懸浮。底物濃度為3μM，并在37℃下培養(yǎng)3小時(shí)。在培養(yǎng)過程中的不同時(shí)間點(diǎn)提取樣品并應(yīng)用hplc-ms-ms法進(jìn)行分析。
按照上述方法測(cè)定的實(shí)施例1的化合物的非結(jié)合肝細(xì)胞清除值為＜9ml/分鐘/kg。
因此，本發(fā)明提供(i)式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物；(ii)式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物的制備方法；(iii)包含式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，及可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體的藥物組合物；(iv)用作藥物的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或組合物；(v)用作逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或調(diào)節(jié)劑的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或組合物；(vi)用于治療HIV或遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，或由此引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或組合物；(vii)式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或組合物在制備具有逆轉(zhuǎn)錄酶抑制或調(diào)節(jié)活性的藥物中的應(yīng)用；(viii)式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或組合物在制備用于治療HIV或遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，或由此引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的藥物中的應(yīng)用；
(ix)一種治療HIV或遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，或由此引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的方法，包括給予有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或組合物；和(xi)這里所公開的某些新的中間體。
以下實(shí)施例用于說明式(I)化合物的制備。在這里應(yīng)用的特定中間體的合成在實(shí)施例后面的制備例部分作出描述。
所有的1H核磁共振(NMR)圖譜與預(yù)料的結(jié)構(gòu)相符。特征性化學(xué)位移值(δ)以向四甲基硅烷的低場(chǎng)偏移的百萬(wàn)分之一(ppm)給出，采用常規(guī)的縮寫指定主要的峰，例如s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，寬峰。應(yīng)用以下縮寫進(jìn)行描述HRMS，高分辨率質(zhì)譜；hplc，高效液相色譜；nOe，核歐沃豪斯效應(yīng)；m.p.，熔點(diǎn)；CDCl3，氘代氯仿；D6-DMSO，氘代二甲基亞砜；CD3OD，氘代甲醇。使用薄層色譜(TLC)時(shí)，指的是應(yīng)用硅膠60 F254板的硅膠TLC，Rf值是指TLC板中化合物的展開距離與溶劑前沿展開距離的比值。
實(shí)施例15-{[3-環(huán)丙基-1-(2-羥乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}間苯二氰 在氮?dú)夥占笆覝叵拢瑢?-羥基乙基肼(1.15ml，16.9mmol)加入到制備例7的二酮(4.1g，15.4mmol)的乙酸(40ml)溶液中。攪拌18小時(shí)后，將混合物減壓濃縮，將殘余的油通過快速硅膠色譜法純化，用乙酸乙酯∶戊烷(50∶50→100∶0，體積比)洗脫，得到需要進(jìn)一步純化的兩種區(qū)域異構(gòu)體樣品。
低極性的級(jí)分以黃色固體(1.2g)的形式分離得到，用甲苯(5ml)重結(jié)晶其樣品(815mg)得到無(wú)色針狀的標(biāo)題化合物(600mg)。將該物質(zhì)的樣品(580mg)進(jìn)一步通過制備性HPLC進(jìn)行純化，應(yīng)用Luna C8(II)150×21.2mm10μm柱，用95∶5的水∶乙腈(0.1％三氟乙酸水溶液)和乙腈(0-1分鐘是，100∶0，然后在1分鐘內(nèi)變?yōu)?0∶30，進(jìn)行18分鐘，然后在1分鐘內(nèi)變?yōu)?00∶0)洗脫，得到標(biāo)題化合物的樣品。該物質(zhì)通過溶解于二氯甲烷(50ml)，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)洗滌去除所有殘留的酸。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到泡沫狀產(chǎn)物(270mg)，用甲苯(5ml)重結(jié)晶，得到無(wú)色針狀的標(biāo)題化合物樣品(265mg)。M.p.127-128℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.84(m，4H)，1.58(m，1H)，2.13(s，3H)，4.03(m，2H)，4.13(m，2H)，7.42(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(常壓化學(xué)電離)m/z[MH+]309。
微量分析實(shí)測(cè)值C，66.14；H，5.24；N，18.15。C17H16N4O2要求C，66.22；H，5.23；N，18.17％。
通過nOE NMR證實(shí)有區(qū)域異構(gòu)體，并通過X-射線晶體分析法明確鑒定。
較高極性的級(jí)分進(jìn)一步通過快速硅膠色譜法純化，用乙酸乙酯∶甲苯(50∶50，體積比)洗脫，得到5-{[5-環(huán)丙基-1-(2-羥乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}間苯二氰(結(jié)構(gòu)如下)，為白色固體(90mg)，M.p.129-130℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.68(m，2H)，0.87(m，2H)，1.58(m，1H)，2.03(s，3H)，4.07(m，2H)，4.31(m，2H)，7.39(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(常壓化學(xué)電離)m/z[MH+]309。
實(shí)施例25-{[3-環(huán)丙基-1-(2-羥乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}間苯二氰攪拌下，向制備例9的吡唑(250mg，0.64mmol)的甲醇(6ml)溶液中加入對(duì)-甲苯磺酸(12mg，0.06mmol)。18小時(shí)后，將反應(yīng)混合物濃縮，殘余物在10％碳酸鉀水溶液(20ml，w/v)和二氯甲烷(20ml)之間進(jìn)行分配。水層用二氯甲烷(2×20ml)洗滌，合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到淡黃色油狀的標(biāo)題化合物(195mg)，其不需進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(400mHz，CDCl3)，與上述的一致。
LRMS(熱噴霧法)m/z[MH+]309。
制備例11，3-二溴-5-甲氧基苯 0℃及氮?dú)夥障?，將甲醇鈉(8.80ml的4.5M甲醇溶液，39.6mmol)在攪拌下滴加至3，5-二溴氟代苯(5.00g，19.0mmol)(Aldrich)的N，N-二甲基甲酰胺(95ml)溶液中。反應(yīng)升溫至室溫，攪拌1小時(shí)，減壓濃縮。殘余物溶解于乙醚中(500ml)，并用水(3×300ml)和鹽水(300ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到白色固體狀產(chǎn)物(5.13g)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝3.79(s，3H)，7.00(s，2H)，7.26(s，1H)。
LRMS(熱噴霧法)m/z[MH+] 266。
微量分析實(shí)測(cè)值C，31.56；H，2.29。C7H6OBr2需要C，31.62；H，2.27％。
制備例23，5-二氰基甲氧基苯
在室溫及氮?dú)夥障拢瑢⑷?二亞芐基丙酮)二鈀(O)(6.53g，7.15mmol)一次性加入到制備例1的溴化物(38.0g，143mmol)、1，1′-二(二苯基膦基)二茂鐵(9.3g，16.8mmol)和氰化鋅(20.0g，172mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(300ml)溶液中。反應(yīng)加熱至100℃反應(yīng)14小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入水(1500ml)，混合物用乙酸乙酯萃取(3×500ml)。合并有機(jī)相，過濾，濾液用水(500ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，所得固體加入甲苯(1000ml)研磨，得到標(biāo)題化合物(18.0g)，為褐色固體。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝3.83(3H，s)，7.31(2H，s)，7.48(1H，s)。
制備例33，5-二氰基羥基苯 0℃及氮?dú)夥障?，將制備?的腈(9.60g，60.7mmol)在攪拌下分批加入至三氯化鋁(32.4g，243mmol)的二氯甲烷(250ml)懸浮液中。懸浮液加熱至45℃，并攪拌6天。反應(yīng)冷卻至室溫，小心傾倒至冰上(450ml)。滴加濃鹽酸(450ml)，所得懸浮液在室溫下攪拌10分鐘。過濾收集所得固體，用水洗滌，用五氧化二磷干燥后，得到標(biāo)題化合物(7.83g)，為褐色固體，1H-NMR和微量分析表明，其中含有大約11％的原料。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.36(m，2H)，7.56(m，1H)。
制備例43-氧代丁酸
將氫氧化鈉(37.9g，0.947mol)溶解于水(770ml)中，并在攪拌下用20分鐘時(shí)間于室溫滴加至3-氧代-丁酸甲酯(100g，0.861mol)(Aldrich)中。攪拌18小時(shí)，用硫酸銨(700g)終止反應(yīng)，并在冰浴下緩慢用濃鹽酸(21.5ml)的水(250ml)溶液進(jìn)行酸化。反應(yīng)混合物用二乙醚(6×200ml)萃取，合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(58.2g)，為淡黃色油狀物，其為酮和烯醇的互變異構(gòu)體混合物(如1H NMR所示)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.00(s，3H-烯醇)，2.30(s，3H-酮)，3.51(s，2H-酮)，5.02(s，1H-烯醇)。
制備例51-環(huán)丙基-1，3-丁二酮 將懸浮于甲醇(145ml)中的鎂屑(3.04g，125mmol)在通氮?dú)獾那闆r下加熱至回流1小時(shí)，冷卻至室溫，在冰冷卻下滴加制備例4的β-酮酸(25.5g，250mmol)的甲醇(25ml)溶液。反應(yīng)在室溫下攪拌1小時(shí)，減壓去除溶劑，得到酸的鎂鹽。同時(shí)，將環(huán)丙烷-甲酸(9.91ml，125mmol)溶解于二甲基甲酰胺(200ml)中，并在0℃和通氮?dú)獾那闆r下分批加入羰基二咪唑(22.4g，138mmol)。攪拌1.5小時(shí)，在0℃下加入上述鎂鹽的二甲基甲酰胺(100ml)溶液。反應(yīng)在室溫下攪拌92小時(shí)，混合物傾入到2M鹽酸水溶液(85ml)中，隨后用水(170m1)稀釋?；旌衔镉枚颐?6×200ml)萃取，合并有機(jī)相，用鹽水(3×200ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮。殘留的橙色油狀物通過快速硅膠色譜法純化，用戊烷二乙醚(100∶0→90∶10，然后是80∶20，體積比)洗脫，得到標(biāo)題化合物(7.39g)，其為黃色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.89(m，2H)，1.08(m，2H)，1.59(m，1H)，2.00(s，3H)，5.61(s，1H)，15.62(s，1H)。
LRMS(電噴霧法)m/z[MNa+]149。
制備例62-氯-1-環(huán)丙基-1，3-丁二酮 在室溫和通氮?dú)獾臈l件下，將三甲基氯硅烷(18.9ml，174mmol)加入至四丁基溴化銨(932mg，2.89mmol)在干燥乙腈(50ml)中的溶液中，將混合物冷卻至0℃。加入制備例5的二酮(7.3g，57.9mmol)的乙腈(36ml)溶液，隨后滴加干燥的二甲基亞砜(12.3ml，174mmol)。反應(yīng)在0℃下攪拌1.5小時(shí)，混合物用水(500ml)稀釋，用二乙醚(2×200ml及100ml)萃取，合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。殘余油狀物通過快速硅膠色譜法純化，用戊烷∶二乙醚(100∶0→95∶5，然后是90∶10，體積比)洗脫，得到標(biāo)題化合物(5.76g)，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.04(m，2H)，1.18(m，2H)，2.27(s，3H)，2.42(m，1H)，15.78(s，1H)。
LRMS(電噴霧法)m/z[M-H+]159。
制備例75-[1-(環(huán)丙基羰基)-2-氧代丙氧基]間苯二氰
將碳酸銫(6.01g，18.5mmol)和得自制備例3的酚(2.66g，18.5mmol)在攪拌下、在通氮?dú)夂?0℃的條件下加入到制備例6的二酮(2.46g，15.4mmol)的丙酮(75ml)溶液中，反應(yīng)攪拌3小時(shí)。冷卻后減壓去除丙酮，所得殘余物在1N鹽酸水溶液(100ml)和二氯甲烷(100ml)之間進(jìn)行分配。分離水相，用二氯甲烷(50ml)萃取。合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到標(biāo)題化合物，其為乳白色固體(4.2g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.92(m，2H)，1.19(m，2H)，1.78(m，1H)，1.99(s，3H)，7.47(m，2H)，7.62(m，1H)。
LRMS(電噴霧法)m/z[M-H+]267。
制備例85-[(3-環(huán)丙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氧基]間苯二氰 將水合肼(298μl，6.16mmol)在通氮?dú)夂褪覝叵录尤氲街苽淅?的二酮(1.50g，5.60mmol)的乙酸(22ml)溶液中。在50℃下攪拌18小時(shí)后，將混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。殘余物在10％的碳酸鉀水溶液(50ml)和二氯甲烷(50ml)之間進(jìn)行分配。分離出水層，用二氯甲烷洗滌兩次(2×50ml)。合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到淡黃色油狀物。粗產(chǎn)物通過快速硅膠色譜法純化，用戊烷∶乙酸乙酯(75∶25→67∶33，體積比)洗脫，得到標(biāo)題化合物(1.20g)，為淡黃色油狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.75(m，2H)，0.85(m，2H)，1.60(m，1H)，2.10(s，3H)，7.40(s，2H)，7.60(s，1H)。
LRMS(熱噴霧法)m/z[MH+]260。
制備例95-({3-環(huán)丙基-5-甲基-1-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基}氧基)間苯二氰 于0℃下向攪拌的制備例8的吡唑(420mg，1.59mmol)的二甲基甲酰胺(4ml)溶液中加入氫化鈉(70mg在礦物油中的60％w/w懸浮液)。完成后去除冷卻浴，混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入2-(2-溴代乙氧基)四氫-2H-吡喃(264μl，1.75mmol)在二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液。2小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中加入水(20ml)終止反應(yīng)，用二氯甲烷(3×20ml)萃取。合并有機(jī)相，用鹽水(2×20ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮后得到黃色油狀物。粗產(chǎn)物混合物通過快速硅膠色譜法純化，用二氯甲烷∶甲醇(100∶0→98∶2，體積比)洗脫，得到兩種區(qū)域異構(gòu)體的混合物(594mg)。此兩種區(qū)域異構(gòu)體通過快速硅膠色譜法分離，用甲苯∶乙酸乙酯(100∶0→80∶20，75∶25，67∶33及50∶50體積比)洗脫，得到標(biāo)題化合物(257mg)(低極性級(jí)分)和其區(qū)域異構(gòu)體(90mg)(高極性級(jí)分)。
低極性級(jí)分1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.78(m，4H)，1.55(m，5H)，1.67(m，2H)，2.12(s，3H)，3.45(m，1H)，3.65(m，1H)，3.75(m，1H)，4.04(m，1H)，4.18(m，2H)，4.53(m，1H)，7.40(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(熱噴霧法)m/z[MH+]393。
高極性級(jí)分5-({5-環(huán)丙基-3-甲基-1-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基}氧基)間苯二氰
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝0.68(m，2H)，0.85(m，2H)，1.53(m，3H)，1.72(m，4H)，2.10(s，3H)，3.51(m，1H)，3.72(m，1H)，3.83(m，1H)，4.17(m，1H)，4.35(m，2H)，4.58(m，1H)，7.38(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(熱噴霧法)m/z[MH+]393。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物。
2.一種藥物組合物，其包含式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，以及一種或多種可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中包含一種或多種其它附加的治療劑。
4.用作藥物的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，或如權(quán)利要求2或3所述的藥物組合物。
5.用作逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或調(diào)節(jié)劑的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，或如權(quán)利要求2或3所述的藥物組合物。
6.用于治療HIV或遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，或由此引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，或如權(quán)利要求2或3所述的藥物組合物。
7.式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，或如權(quán)利要求2或3所述的藥物組合物在制備具有逆轉(zhuǎn)錄酶抑制或調(diào)節(jié)活性的藥物中的應(yīng)用。
8.式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，或如權(quán)利要求2或3所述的藥物組合物在制備用于治療HIV或遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，或由此引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的藥物中的應(yīng)用。
9.一種治療HIV或遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，或由此引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的方法，包括給予有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，或如權(quán)利要求2或3所述的藥物組合物。
10.一種制備式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或可藥用衍生物的方法，包括(A)將式(II)、(VI)或(VII)的化合物 與式(V)化合物或其鹽或水合物縮合H2NNHCH2CH2OH (V)；(B)將式(XIII)的吡唑 用式(XIV)的烷基化劑或其保護(hù)的衍生物烷基化；Lg-CH2CH2OH (XIV)(C)將式(I)化合物的保護(hù)的衍生物脫保護(hù)；并且任選地將由步驟(A)到(C)任意一步所制備的式(I)化合物轉(zhuǎn)變成其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物。
11.式(II)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)或(XIII)所述的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的吡唑衍生物及其可藥用鹽、溶劑化物或衍生物，其在藥物中的應(yīng)用，包含它們的組合物，它們的制備方法，以及在制備過程中應(yīng)用的中間體。本發(fā)明的化合物可與逆轉(zhuǎn)錄酶相結(jié)合，并且是其調(diào)節(jié)劑，特別是抑制劑。逆轉(zhuǎn)錄酶涉及人免疫缺陷病毒(HIV)的感染生命周期。能夠干擾該酶功能的化合物可用于治療由HIV以及遺傳上相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的病癥，如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。
文檔編號(hào)A61K31/415GK1681494SQ03821960
公開日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2003年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月16日
發(fā)明者C·E·莫巴里, D·A·普萊斯, M·D·塞爾比, P·A·斯圖普勒 申請(qǐng)人:輝瑞大藥廠