專利名稱：一種治療感冒的中藥組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療感冒的中藥組合物及制備方法。
背景技術(shù)：
感冒是最常見的多發(fā)病，在所有急性傳染病中，感冒發(fā)病率最高，而且感冒常誘發(fā)、繼發(fā)慢性支氣管炎、肺炎等疾病，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前治療感冒藥品大都是解熱、消炎為主的西藥，副作用較大，而中藥制品大多以清熱解毒藥定方，起效慢，療效欠佳。因此研制和生產(chǎn)一種可迅速緩解感冒癥狀，有效縮短療程而無毒副作用的藥品乃是人們所盼望的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于彌補現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種對于感冒發(fā)燒患者擁有明確迅速解熱功效，不反彈，同時可以有效改善頭痛、全身酸痛等感冒癥狀，無常用西藥的嗜睡等副作用，還可以明顯縮短感冒患者病程的理想治療感冒的中藥組合物。
本發(fā)明公開的治療感冒的中藥組合物是以金銀花、虎杖、生葛根、麻黃和杏仁的提取物為主要活性成份與藥用輔料組成的口服制劑。
本發(fā)明所述的組成主要活性成份的各味中藥的重量份比例范圍為金銀花7-15份、虎杖7-15份、生葛根7-15份、麻黃3.5-7.5份、杏仁3.5-7.5份。
在本發(fā)明的中藥組合物中還可以加入其他輔助中藥，以調(diào)和各諸藥，提高療效，所述的輔助中藥可選用甘草。
本發(fā)明優(yōu)選的活性成份各生藥重量份比例為金銀花7-15份、虎杖7-15份、生葛根7-15份、麻黃3.5-7.5份、杏仁3.5-7.5份、甘草1.5-3.5份。
本發(fā)明所述的口服制劑是指醫(yī)學(xué)上可接受的各種口服劑型，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑或口服液等。
本發(fā)明所述的藥用輔料為常規(guī)制劑中所采用的各種輔料。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述中藥組合物的制備方法。
本發(fā)明公開的治療感冒的中藥組合物的制備方法包括下列步驟1)活性成份提取物制備a)將配比量的金銀花、生葛根用8-12倍量70％乙醇作溶劑，浸漬10-15小時后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70℃回收乙醇，濃縮至相對密度1.14(50-60℃)，得提取液I；b)將配比量的虎杖用8-12倍量80％乙醇作溶劑，浸漬10-15小時后，回流提取2次，合并，提取液離心，濾液真空50-70℃回收乙醇，濃縮至相對密度1.13(45-50℃)，得提取液II；c)將配比量的麻黃、炮制好的杏仁和/或甘草加水浸泡1.5-3小時后，提取3次，提取液離心，濾液濃縮至相對密度1.15(50-60℃)，得提取液III；2)制劑制備合并提取液I、II、III，按常規(guī)方法與藥用輔料制成液體口服制劑；或?qū)⒑喜⒑蟮奶崛∫哼M(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法與藥用輔料制成固體口服制劑。
本發(fā)明治療感冒的中藥組合物的提取物中含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計，含量大于7％，含葛根以葛根素(C21H20O9)計，含量大于14％，均以HPLC法測定。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于公開上述中藥組合物在制備治療感冒藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明藥物用于時行感冒初起邪在肺衛(wèi)證，屬風(fēng)熱時毒客表，肺失宣降，表郁較甚。根據(jù)吳鞠通“治上焦如羽，非輕不舉”，葉天士“在衛(wèi)汗之可也”及《素問.至真要大論》“風(fēng)淫于內(nèi)，治以辛涼，佐以苦甘”之訓(xùn)及各家治溫之意，結(jié)合臨床實際和中醫(yī)理論，認(rèn)為感冒初起邪在肺衛(wèi)證存在著風(fēng)熱時毒侵襲肺衛(wèi)，肺失宣降，表氣郁閉較甚的病理變化。針對本證宜采用清熱解毒，宣肺解表疏邪之法綜合治療，使熱毒清解，表郁疏散。
方中以金銀花為君，即具有辛涼透邪清熱之效，又具有辟穢，清熱解毒之功?；⒄?、生葛根為臣藥，虎杖清熱解毒、辟穢、止咳；葛根解肌發(fā)表，生津舒筋，二藥助君藥清熱解毒，解肌發(fā)表，疏散衛(wèi)表之邪。麻黃、杏仁為佐藥。麻黃發(fā)散、解表宣肺，開皮毛而散邪；杏仁宣肺、止咳；二藥共輔佐君藥疏散衛(wèi)表邪郁。生甘草為使藥，具有清熱解毒，調(diào)各諸藥之功。方藥配伍符合前人治溫之訓(xùn)。藥用六味，嚴(yán)謹(jǐn)配伍，具有涼而不寒滯，溫而不燥熱，散而不傷正，生津不礙邪，祛熱毒而務(wù)盡。諸藥合用共奏清熱解毒，宣肺解表疏邪之功。
諸藥合用共奏清熱解毒，宣肺解表疏邪之功。對證屬邪熱侵襲肺衛(wèi)，表郁較甚者，證見發(fā)熱惡寒、無汗或少汗、頭身疼痛、鼻塞流涕、咳嗽、苔薄白、脈浮等癥狀具有明顯作用。
本發(fā)明中藥組合物具有下述特點一是方中寒、溫藥并用。方中金銀花、虎杖、生葛根、生甘草性寒涼，能清熱解毒、解肌疏表；麻黃為辛溫之品，疏散表邪之功較強。寒溫藥并用可達(dá)涼而不寒滯，溫而不燥熱，祛毒邪而務(wù)盡，疏表郁而調(diào)和營衛(wèi)。因此，寒溫藥并用不僅使其臨床適用面大為增加，且可發(fā)揮二者之長。
二是方中辛涼、辛溫、甘涼、苦寒之品合用。辛涼與辛溫合用可增加辛涼解肌疏表之功；甘涼(葛根)與辛溫、苦寒之品合用，即可制約辛溫之品燥烈之性，又可防苦寒之品化燥傷陰之弊；甘涼養(yǎng)陰還有防護(hù)辛溫之品汗泄太過之慮。
三是方中解表與止咳藥并用。感冒初起常出現(xiàn)咳嗽、鼻塞流涕等肺衛(wèi)失宣證，而一般治療感冒的中成藥和西藥往往不能兼具治療感冒和止咳作用。本方由解表方與三拗湯(麻黃、杏仁、甘草)組成，所以既解除感冒其它癥狀，又具有明顯止咳作用。
四是方中清解熱毒與解表疏邪之法合用，可達(dá)標(biāo)本同治。風(fēng)熱時毒侵襲肺衛(wèi)是時行感冒等外感熱病致病之本，肺失宣肅，表氣郁閉是其標(biāo)。方中清解熱毒與解表疏邪之品合用，可達(dá)標(biāo)本同治。
用本發(fā)明治療感冒的中藥組合物進(jìn)行有關(guān)藥效試驗一、祛邪作用(一)抗病毒作用(1)對小鼠流感病毒性肺炎防治作用的試驗動物ICR小鼠，清潔級，體重14-15g，雌雄各半。
流感病毒為流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR8/34(H1N1)，購自國家流感中心。
小鼠流感病毒性肺炎實驗方法動物于感染流感病毒前一天開始灌胃給上述各藥，連續(xù)5天；正常對照組、模型組用同樣方法灌服相同體積的生理鹽水，在乙醚淺度麻醉下滴鼻感染流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR8/34(HINI)15LD50，感染96小時后，稱體重后解剖，并取肺稱重，稱重后固定以備作病理切片。
分組與給藥小鼠按體重、性別分層后隨機分組，每組10只，分為9組，共計90只。即a.正常對照組；b.模型組；c.本發(fā)明制劑顆粒劑按倍數(shù)梯度分4組(60mg/20g/d、30mg/20g/d、15mg/20g/d，7.5mg/20g/d)；d.陽性藥對照組(分清熱解毒口服液組、雙黃連口服液，病毒靈三組)。正常對照組與模型組灌服等量的生理鹽水。
表1.本發(fā)明制劑對小鼠流感病毒性肺炎的防治作用組別 劑量 肺指數(shù)值 抑制率(mg or ml/20g/24h) (X±SD) (％)正常對照NS0.93±0.081 /模型NS1.51±0.123**/病毒靈 5mg 1.16±0.078▲▲23.2清熱解毒口服液 0.3ml 1.20±0.135▲ 20.5雙黃連口服液0.3ml 1.35±0.27010.6本發(fā)明制劑7.5mg 1.29±0.19514.615mg 1.25±0.363▲ 17.230mg 1.16±0.144▲▲23.260mg 1.02±0.081▲▲32.5注模型組與正常對照組相比**p＜0.01；給藥組與模型組相比▲p＜0.05，▲▲p＜0.01。
結(jié)果由表1可見，流感病毒性肺炎模型組肺指數(shù)值與正常對照組相比顯著升高；病毒靈、清熱解毒口服液與模型組相比具有顯著差異；本發(fā)明制劑在0.75g/kg/24h以上劑量均有顯著地抗小鼠流感病毒性肺炎的作用，尤其是較大劑量組具有極顯著的防治作用，本發(fā)明制劑各劑量組量效呈正相關(guān)；雙黃連口服液未見明顯作用。結(jié)果提示本發(fā)明制劑具有顯著的抗小鼠流感病毒性肺炎的作用。
(2)對小鼠流感病毒性肺炎治療作用試驗動物及分組給藥同前。
小鼠流感病毒性肺炎試驗方法在乙醚淺度麻醉下滴鼻感染流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR8/34(HINI)15LD50，感染96小時，稱體重后解剖，取肺稱重。
動物于感染流感病毒后10min開始灌胃給上述各藥，連續(xù)3天；正常對照組、模型組用同樣方法灌服相同體積的生理鹽水。
表2 本發(fā)明制劑對小鼠流感病毒性肺炎的治療作用組別 劑量 肺指數(shù)值 抑制率(mg or ml/20g/24h)(X±SD) (％)正常對照 NS 0.99±0.030模型 NS 1.52±0.099**病毒靈5mg1.18±0.054▲▲22.4清熱解毒口服液0.3ml 1.26±0.048▲▲17.1雙黃連口服液 0.3ml 1.46±0.1233.9本發(fā)明制劑7.5mg 1.47±0.0903.315mg 1.41±0.1147.230mg 1.21±0.117▲▲20.460mg 1.06±0.105▲▲30.3注模型組與正常對照組相比**p＜0.01；給藥組與模型組相比▲▲p＜0.01。
結(jié)果由表2可見，流感病毒性肺炎模型組肺指數(shù)值與正常對照組相比顯著升高；病毒靈、清熱解毒口服液與模型組相比具有顯著差異；本發(fā)明制劑顆粒劑高劑量組(1.5g/kg/24h以上劑量)，均具有極顯著的治療作用；本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組量效呈正相關(guān)；雙黃連口服液未見明顯作用。結(jié)果提示本發(fā)明制劑具有顯著的治療小鼠流感病毒性肺炎的作用。
(3)體外抗病毒作用采用雞胚孵育法，以血凝反應(yīng)為測定指標(biāo)觀察本品對流行性感冒病毒甲3型的抑制作用；用Vero細(xì)胞體外培養(yǎng)法，以細(xì)胞病變效應(yīng)為測定指標(biāo)觀察本品對柯薩奇病毒B3型、單純皰疹病毒1型的抑制作用，以血凝反應(yīng)為測定指標(biāo)觀察本品對副流感病毒2型的抑制作用。結(jié)果表明本發(fā)明藥物對具有顯著的體外抗流行性感冒病毒甲3型、副流感病毒2型、單純皰疹病毒1型及柯薩奇病毒B3型的作用，表明本發(fā)明藥物具有抗與上呼吸道感染有關(guān)病毒的作用。
(二)抗細(xì)菌作用(1)體內(nèi)抗菌作用動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重20-22g。
菌株金黃色葡萄球菌ACTT25923分組與給藥小鼠按性別、體重隨機分成6組，每組16只(模型組18只)，即a.生理鹽水對照組；b.本發(fā)明制劑顆粒三組(100mg/20g/d，50mg/20g/d，25mg/20g/d)；c.陽性對照組兩組(雙黃連口服液組和清熱解毒口服液)。各組灌服等容積各藥。
實驗方法小鼠腹腔注射1.9×109/ml的金黃色葡萄球菌液(經(jīng)預(yù)試所得的100％最小致死量)0.5ml，于注射菌液后0,6小時，各組分別給藥一次，對照組灌服等體積生理鹽水，連續(xù)給藥觀察7天，記錄各組小鼠死亡數(shù)。
結(jié)果表3 本發(fā)明制劑對金黃色葡萄球菌感染小鼠體內(nèi)保護(hù)試驗藥物 劑量 動物數(shù)死亡數(shù)死亡率ml or mg/20g/d (只) (只) (％)對照組 NS 1816 88.8雙黃連口服液 0.161613 81.3△清熱解毒口服液 0.1616743.8*本發(fā)明制劑100 16531.2**50 16850.0*25 1612 75.0△注各組與模型組經(jīng)卡方檢驗，得**p＜0.01；*p＜0.05；△p＞0.05結(jié)論本發(fā)明制劑大中劑量具有抗感染作用，對金黃色葡萄球菌感染小鼠具有明顯體內(nèi)保護(hù)，其大劑量作用強度優(yōu)于清熱解毒口服液，雙黃連口服液與金平感顆粒小劑量抗菌作用不明顯。
(2)體外抗菌活力測定選用金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，痢疾桿菌，乙型溶血性鏈球菌，肺炎雙球菌，流感桿菌，肺炎克雷伯氏菌等，制備含藥平板，測定體外抗菌活力，結(jié)果表明本發(fā)明藥物具有明顯的抗菌作用，其MIC低，對上述臨床常見的致病菌均具有抑制作用，表明其具有廣譜抗菌作用。
二、清熱作用對酵母致大鼠發(fā)熱的影響動物SD大白鼠，清潔級，體重200-220g，雄性大鼠。
酵母引起大鼠發(fā)熱的實驗方法選體溫36.92±0.09(X±SD)的大鼠，分別于背部皮下注射10％鮮啤酒酵母混懸液(1ml/100g)致熱，4小時后大鼠體溫明顯升高，選體溫升高0.8℃以上動物隨機分為以下6組。此時均采用灌胃給藥，于給藥后每隔1h，用肛表插入肛門內(nèi)2cm左右，3min后記錄肛溫，共6次。
分組與給藥大鼠按體重隨機分組，每組10只，分為6組。即a.生理鹽水對照組；b.陽性藥對照組(分復(fù)方阿斯匹林與感冒軟膠囊兩組)；c.本發(fā)明制劑各劑量組；各組在試驗前灌服上述各藥1次，于試驗時(固定時)再灌服1次，對照組灌服等量的生理鹽水。
表4 本發(fā)明制劑對大鼠發(fā)熱體溫的影響(X±SD)分組 劑量體溫增高值(℃)(g/kg) 造模前給藥前 給藥后(h)12 3 4 5 6對照組NS01.01±0.12 1.97±0.17 2.12±0.14 1.68±0.30 1.56±0.201.52±0.12 1.43±0.17復(fù)方阿斯匹林 0.2 01.02±0.15 0.42±0.19*-0.43±0.17**-0.59±0.18**0.49±0.33**0.75±0.30**1.09±0.62感冒軟膠囊0.8 00.97±0.12 1.89±0.13 1.77±0.26*1.20±0.24**1.19±0.27*1.40±0.221.25±1.11本發(fā)明制劑高劑量2.0 01.04±0.11 1.66±0.22 1.66±0.48*0.81±0.18**0.84±0.24**1.06±0.15**0.94±0.24*中劑量1.0 01.06±0.14 1.78±0.31 1.68±0.20*1.07±0.21**0.90±0.30**1.19±0.17*1.20±0.95低劑量0.5 01.00±0.15 1.83±0.28 1.99±0.38 1.30±0.36**1.22±0.33*1.36±0.331.34±0.39注用藥組與生理鹽水對照組相比*P＜0.05；**P＜0.01。
結(jié)果表4可見，復(fù)方阿斯匹林組與對照組相比給予藥后1h后即能顯著抑制酵母致大鼠體溫升高，3-5小時極為顯著；感冒軟膠囊組2-4h小時具有顯著抑制體溫升高的作用；本發(fā)明制劑顆粒劑大中劑量組給藥后2小時均能顯著抑制大鼠體溫升高，其中給藥后3-5小時的作用極為顯著，本發(fā)明制劑顆粒劑小劑量組給藥后3-5小時也具有顯著抑制體溫升高的作用，本發(fā)明制劑顆粒劑各組量效呈正相關(guān)。本發(fā)明制劑顆粒劑與感冒軟膠囊相比其降溫作用具有起效更早的特點；本發(fā)明制劑顆粒劑與復(fù)方阿斯匹林組相比其降溫具有作用持久的特點。
三、發(fā)汗作用對正常大鼠汗液分泌的影響試驗動物SD大白鼠，清潔級，體重320-350g，雌雄各半。
實驗方法于第二次給藥后立即將大鼠置入大鼠固定器內(nèi)，固定雙后肢，用棉簽蘸取無水乙醇輕輕將大鼠后肢污物擦洗干凈，30分鐘時將各組大鼠足跖部原有的和由于固定時掙扎所致汗液用干棉簽輕輕拭干，在大鼠足跖部皮膚涂上和田—高垣氏試劑A液，待充分干燥后，再薄薄涂上B液，然后用放大鏡仔細(xì)觀察，并記錄深紫色著色點(即汗點)出現(xiàn)的時間、顏色和數(shù)量，繼續(xù)觀察至第二次給藥后1小時，對第二次給藥后1小時在第二和第三足跖部肉墊上出現(xiàn)的著色點進(jìn)行統(tǒng)計分析。
分組與給藥大鼠按體重、性別分層后隨機分組，每組10只，分為6組。即a.生理鹽水對照組；b.陽性藥對照組(分阿斯匹林與麻黃湯兩組)；c.本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組；各組在試驗前灌服上述各藥1次，于試驗時(固定時)再灌服1次，對照組灌服等量的生理鹽水。
表5 本發(fā)明制劑對正常大鼠足跖部汗液分泌的影響組別劑量 給藥1小時汗點出現(xiàn)數(shù)(g or ml/kg/24h)(X±SD)對照 NS 37.5±4.95阿斯匹林 0.4g 84.9±7.65**麻黃湯 2.0ml88.8±6.57**本發(fā)明制劑低劑量 0.5g 54.80±11.43*中劑量 1.0g 73.6±8.34**高劑量 2.0g 81.8±8.25**注用藥組與生理鹽水對照組相比*P＜0.05；**P＜0.01。
結(jié)果表5可見，與對照組相比，阿斯匹林、麻黃湯和本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組均具有顯著增加汗點出現(xiàn)數(shù)的作用；本發(fā)明制劑各組量效呈正相關(guān)。
四、抗炎作用(1)對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性作用試驗動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重20-22g。
分組與給藥按小鼠性別、體重隨機分下列各組，除模型12只外，其余各組10只，分為6組，共計62只。即a.生理鹽水對照組；b.本發(fā)明制劑三組(100mg/20g/d、50mg/20g/d、25mg/20g/d)；c.陽性藥對照組(分阿斯匹林組、雙黃連口服液二組)。各組灌服上述各藥，對照組灌服等容積的生理鹽水。
實驗方法 分別給予上述供試液后1h，各鼠尾靜脈注射伊文思藍(lán)(2％)0.1ml/20g，并同時腹腔注射0.6％乙酸0.2ml/20g，20min后，斷頭處死小鼠，剪開腹腔，用蒸餾水沖洗數(shù)次，收集沖洗液，調(diào)整體積至10.0ml，3000r/min，10min離心，取上液，采用酶標(biāo)儀，570nm濾光片測定吸收度(OD)。
表6.本發(fā)明制劑對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響組別 劑量 OD值(mg or μl/20g/24h) (X±SD)對照組 NS 0.1941±0.0072Asprin 10mg0.0941±0.0288**雙黃連口服液150μl 0.1349±0.0042**本發(fā)明制劑100mg 0.1055±0.0090**50mg0.1302±0.0069**30mg0.1401±0.0098**注給藥組與對照組相比**p＜0.01。
結(jié)果表6可見，阿斯匹林組、雙黃連口服液和本發(fā)明制劑顆粒劑與生理鹽水對照組相比均具有顯著差異；本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組量效呈正相關(guān)，本發(fā)明制劑顆粒劑大劑量組作用顯著優(yōu)于中、小劑量組；表明本發(fā)明制劑顆粒劑對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高具有顯著的抑制作用。
(2)對小鼠二甲苯致耳廓炎癥影響試驗動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重20-22g，分組與給藥按小鼠性別、體重隨機分下列各組，除模型12只外，其余各組10只，分為6組，共計62只。即a.生理鹽水對照組；b.本發(fā)明制劑三組(100mg/20g/d、50mg/20g/d、25mg/20g/d)；c.陽性藥對照組(分阿斯匹林組、雙黃連口服液二組)。各組灌服上述各藥，對照組灌服等容積的生理鹽水。
實驗方法 分別給上述供試液2次，于第2次給藥60min后，以二甲苯棉球接觸小鼠右側(cè)耳殼5s，左側(cè)耳殼作對照，15min后處死小鼠，以直徑為8mm打孔器將小鼠雙耳同部位等面積切下，用FA2104型電子天平(1/1000)稱重。以右耳重量減去左耳重量的差值為腫脹值。
表7.本發(fā)明制劑對小鼠二甲苯耳殼腫脹的影響(X±SD)組別劑量 左右耳重量差值抑制率(％)(mg or μl/20g/24h)對照組 NS9.24±0.75 /Asprin 10mg 4.64±0.45**49.8雙黃連口服液150μl8.65±0.39*6.4本發(fā)明制劑100mg 5.20±0.66**43.750mg 6.98±0.42**24.530mg 8.29±0.31*10.3注給藥組與對照組相比*p＜0.05，**p＜0.01。
結(jié)果表7可見，阿斯匹林組、雙黃連口服液和本發(fā)明制劑顆粒劑與生理鹽水對照組相比均具有顯著差異；本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組量效呈正相關(guān)，本發(fā)明制劑顆粒劑大、中劑量組的作用顯著優(yōu)于雙黃連口服液組；表明本發(fā)明制劑顆粒劑對小鼠二甲苯致耳廓腫脹具有顯著地抑制作用。
五、鎮(zhèn)痛作用對小鼠疼痛的影響試驗動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重22-24g。
分組與給藥按小鼠性別、體重隨機分下列各組，每組10只，分為6組。即a.生理鹽水對照組；b.本發(fā)明制劑顆粒劑三組(100mg/20g/d、50mg/20g/d、25mg/20g/d)；c.陽性藥對照組(分復(fù)方阿斯匹林組、感冒軟膠囊二組)。各組灌服上述各藥，對照組灌服等容積的生理鹽水。
實驗方法 小鼠腹腔注射致痛劑致小鼠扭體實驗，于腹腔注射致痛劑1％醋酸溶液0.01ml/g，致小鼠產(chǎn)生“扭體反映”模型。以后肢伸展，腹部貼板扭曲及腹肌間歇收縮為指標(biāo)。致痛前1h，各組分別灌胃給予上述各藥。觀察第一次扭體出現(xiàn)時間，并在5min后記錄10min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，作用為鎮(zhèn)痛作用的觀察指標(biāo)。
表8.本發(fā)明制劑對小鼠疼痛效應(yīng)的影響(X±SD)組別劑量潛伏期(秒)次數(shù)(10min)(mg/20g/24h)對照組 NS297.6±35.41 23.4±4.56復(fù)方阿斯匹林10mg 439.2±39.12**8.60±2.73**感冒軟膠囊 20mg 343.80±25.89*19.7±2.37*本發(fā)明制劑100mg 351.9±24.58*12.90±3.06**50mg 323.5±38.45 14.90±3.34**30mg 310.5±40.24 20.7±2.28注給藥組與對照組相比*p＜0.05；**p＜0.01。
結(jié)果對扭體次數(shù)的影響表8可見，復(fù)方阿斯匹林組、感冒軟膠囊組和本發(fā)明制劑顆粒劑大中劑量組與生理鹽水對照組相比均能顯著減少扭體次數(shù)；本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組量效呈正相關(guān)；復(fù)方阿斯匹林組和本發(fā)明制劑顆粒劑大、中組與生理鹽水對照組相比均具有極顯著差異，其作用均顯著優(yōu)于感冒軟膠囊。
對扭體潛伏期的影響表8可見，復(fù)方阿斯匹林組、感冒軟膠囊和本發(fā)明制劑顆粒劑與生理鹽水對照組相比對小鼠腹腔注射致痛劑醋酸溶液致小鼠疼痛扭體的潛伏期均具有顯著延長作用。
六、鎮(zhèn)咳作用鎮(zhèn)咳作用的試驗動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重20-22g。
分組與給藥1.對氨水誘導(dǎo)小鼠咳嗽的影響按小鼠性別、體重隨機分下列各組，每組10只，分為6組，共計6只。即a.生理鹽水對照組；b.本發(fā)明制劑顆粒劑三組(100mg/20g/d、50mg/20g/d、25mg/20g/d)；c.陽性藥對照組(分咳必清、蛇膽川貝液二組)。各組灌服上述各藥后1日，于第二日給藥一次后60min進(jìn)行試驗，對照組灌服等容積的生理鹽水。
2.對枸櫞酸誘導(dǎo)豚鼠咳嗽的影響按豚鼠性別、體重隨機分下列各組，每組10只，分為6組，共計6只。即a.生理鹽水對照組；b.本發(fā)明制劑顆粒劑大中小三個劑量組；c.陽性藥對照組(分咳必清、蛇膽川貝液二組)。各組灌服上述各藥后1日，于第二日給藥一次后60min進(jìn)行試驗，對照組灌服等容積的生理鹽水。
實驗方法
1.對氨水誘導(dǎo)小鼠咳嗽的影響末次給藥后1小時用28％氨水噴入特制的透明玻璃箱內(nèi)，噴霧10s，然后各組取一只小鼠同時放入箱內(nèi)，過1min后開始觀察并記錄2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。室溫為24℃--26℃。典型咳嗽是小鼠腹肌收縮，同時張大口，有時有咳嗽。
2.對豚鼠枸櫞酸誘導(dǎo)咳嗽的影響末次給藥后1小時用17.5％的枸櫞酸溶液噴入特制的透明玻璃箱內(nèi)，噴霧1min，然后各組取一只豚鼠同時放入箱內(nèi)，觀察并記錄2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。室溫為24℃--26℃。在灌藥前一日挑選豚鼠時，5min咳嗽次數(shù)少于10次者不用。豚鼠咳嗽時，會發(fā)出響亮的咳聲。
表9.本發(fā)明制劑對氨水誘導(dǎo)小鼠咳嗽的影響(X±SD)組別 n 劑量2min內(nèi)咳嗽次數(shù)(mg or ml/20g/24h)對照組 10 NS 26.10±8.34咳必清 10 2mg 13.10±5.76**蛇膽川貝液 10 0.15ml 15.20±7.05**本發(fā)明制劑10 100mg 15.90±4.17*10 50mg18.10±6.67*10 30mg20.10±5.01*注給藥組與對照組相比*p＜0.05；**p＜0.01。
表10.本發(fā)明制劑對豚鼠枸櫞酸誘導(dǎo)咳嗽的影響(X±SD)組別n 劑量 2min內(nèi)咳嗽次數(shù)(g or.ml/k24h)對照組 10 NS 21.30±4.98咳必清 10 0.02g9.10±5.04**蛇膽川貝液 10 4.0ml9.70±4.14**本發(fā)明制劑10 2.0g 10.90±3.69**10 1.0g 12.10±3.72**10 0.5g 18.20±3.63注給藥組與對照組相比**p＜0.01。
結(jié)果表9可見，與生理鹽水對照組相比，咳必清、蛇膽川貝液和本發(fā)明制劑各劑量組均具有顯著抑制氨水誘導(dǎo)小鼠咳嗽；本發(fā)明制劑各劑量組量效呈正相關(guān)，本發(fā)明制劑大劑量組作用顯著優(yōu)于中、小劑量組。
表10可見，與生理鹽水對照組相比，咳必清、蛇膽川貝液和本發(fā)明制劑大中劑量組均具有顯著抑制枸櫞酸誘導(dǎo)豚鼠咳嗽。本發(fā)明制劑各劑量組量效呈正相關(guān)，本發(fā)明制劑大中劑量組作顯著優(yōu)于小劑量組的鎮(zhèn)咳作用。
七、增強免疫作用(1)對小鼠體內(nèi)炭粒廓清功能影響試驗動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重20-22g。
分組與給藥取雄性小鼠，按體重隨機分下列各組，每組10只，分為6組，共計60只。即a.空白對照組；b.本發(fā)明制劑三組(100mg/20g/d、50mg/20g/d、25mg/20g/d)；c.陽性藥對照組(分雙黃連口服液，小柴胡沖劑二組)。各組灌服上述各藥，對照組灌服等容積的生理鹽水。連續(xù)灌胃給藥5天后，并于第6日在實驗前2小時再灌胃給藥1次。
實驗方法于第6日末次灌胃給藥后2小時，各小鼠由尾靜脈注射稀釋的印度墨汁0.1ml/10g，然后在5min、10min、20min時間點用尖咀吸在小鼠眼后靜脈叢管取血0.025ml，加入盛有1mg/ml Na2CO3溶液的試管中，使成等容積，搖勻后，用酶標(biāo)儀，405nm濾光片測光密度(OD)，并按指數(shù)衰減曲線計算碳粒在血液中消失的T1/2。
表11.本發(fā)明制劑對小鼠炭粒廓清率的影響組別劑量 OD值(X±SD)(mg or μl/20g/24h) T1/25min20min 20min (min)對照組 NS0.84±0.054 0.70±0.043 0.58±0.054 28.1雙黃連口服液150μl0.74±0.078**0.69±0.072**0.55±0.033**7.7小柴胡沖劑 150mg 0.66±0.075**0.56±0.064**0.40±0.083**6.3本發(fā)明制劑100mg 0.63±0.078**0.53±0.052**0.36±0.078**5.950mg 0.70±0.063**0.56±0.058**0.39±0.079**5.825mg 0.72±0.067**0.60±0.072**0.48±0.045**6.9注給藥組與對照組相比**p＜0.01。
結(jié)果表11可見，小柴胡沖劑、雙黃連口服液和本發(fā)明制劑顆粒劑與空白對照組相比均能顯著地提高正常小鼠對體內(nèi)炭粒的清除速度，本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組量效呈正相關(guān)；本發(fā)明制劑顆粒劑大劑量組的作用尤為顯著。
(2)對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力影響試驗動物ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體重20-22g。
分組與給藥取雄性小鼠，按體重隨機分下列各組，每組10只，分為6組，共計60只。即a.空白對照組；b.本發(fā)明制劑三組(100mg/20g/d、50mg/20g/d、25mg/20g/d)；c.陽性藥對照組(分雙黃連口服液，小柴胡沖劑二組)。各組灌服上述各藥，對照組灌服等容積的生理鹽水。連續(xù)灌胃給藥5天后，并于第6日在實驗前2小時再灌胃給藥1次。
實驗方法于末次給藥后2小時每鼠腹腔注射5％雞紅細(xì)胞0.4ml，10-11小時后將動物脫頸椎處死，仰位固定于鼠板。消毒腹部，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2.5ml.，轉(zhuǎn)動固定板1分鐘，然后抽取腹腔洗液1ml，滴涂于干凈載玻片上，每片0.2ml，共2片，放在墊有濕紗布的搪瓷盒中，置于37攝氏度孵箱中溫育30分鐘，取出玻片，投入生理鹽水中漂洗以除去未帖片的細(xì)胞。晾干，以丙酮-甲醇液(1∶1)固定5分鐘，再用4％姬姆薩-瑞特氏液染色3-5分鐘，用蒸餾水漂洗，晾干。在油鏡下每片計巨嗜細(xì)胞數(shù)200個，結(jié)果取兩片的均數(shù)，按下式計算其吞噬指數(shù)與吞噬百分率。
表12.本發(fā)明制劑對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響組別劑量 吞噬百分率(X±SD) 吞噬指數(shù)(X±SD)(mg or μl/20g/24h)對照組 NS 33.40±5.690.469±0.044雙黃連口服液150μl 47.80±5.45**0.641±0.112**小柴胡沖劑 150mg66.05±5.30**0.939±0.087**本發(fā)明制劑100mg64.65±5.26**0.957±0.089**50mg 61.45±3.90**0.865±0.091**30mg 54.35±5.05**0.752±0.118**注給藥組與對照組相比**p＜0.01。
結(jié)果表12可見，小柴胡沖劑、雙黃連口服液和本發(fā)明制劑各組與空白對照組相比均能顯著地提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)；本發(fā)明制劑顆粒劑各劑量組量效呈正相關(guān)，本發(fā)明制劑顆粒劑大劑量組的作用尤為顯著，與小劑量組相比具有顯著差異。顯示本發(fā)明制劑能顯著地提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能，具有提高機體防御能力的作用。
用本發(fā)明中藥組合物進(jìn)行流行性感冒治療臨床觀察按照嚴(yán)格的臨床科研設(shè)計，對治療流行性感冒80例的臨床初步觀察研究，結(jié)果表明，本發(fā)明藥物治療組80例，痊愈62例，顯效10例，無效2例，痊顯率為90.0％。治療組用藥1天后退熱率占37.5％；2天后退熱率占75％；3天后退熱率90％，未見明顯的不良反應(yīng)。與陽性對照藥清熱解毒口服液相比痊顯率、總有效率、3天內(nèi)退熱率均具有顯著差異。初步表明本制劑治療感冒具有確切療效，有縮短病程等特點。
具體實施例方式實施例1、顆粒劑制備a)將1000g生葛根、1000g金銀花用10倍量70％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.14(50-60℃)，作為液I留用；b)將1000g虎杖用10倍量80％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，真空(0.09MPa)低溫(50℃)回收乙醇，濃縮至相對密度1.13(45-50℃)，作為液II留用；C)將500g生麻黃、250g甘草加水浸泡2小時后，加入500g炮制好的杏仁粗粉，3味藥材加水量為投料量的10倍，煎煮3次，每次1小時，提取液用管式高速離心機離心(15000轉(zhuǎn)/分)，得提取液III；d)將液III濃縮至相對密度為1.15(50-60℃)后與液I、液II合并進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140℃)，得干燥粉，對噴霧干燥粉稱重，加入150g糊精，干擠制粒(主壓力6Mpa，側(cè)壓力0.6Mpa)，整粒，分裝于鋁箔袋中，每包6g，滅菌，即得。用HPLC法測定含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計84mg/包，含葛根以葛根素(C21H20O9)計110mg/包。
實施例2、顆粒劑制備
a)將750g生葛根、1000g金銀花用8倍量70％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.14(50-60℃)，作為液I留用；b)將500g虎杖用12倍量80％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，真空(0.09MPa)低溫(50℃)回收乙醇，濃縮至相對密度1.13(45-50℃)，作為液II留用；C)將350g生麻黃加水浸泡2小時后，加入500g炮制好的杏仁粗粉，2味藥材加水量為投料量的10倍，煎煮3次，每次1小時，提取液用管式高速離心機離心(15000轉(zhuǎn)/分)，得提取液III；d)將液III濃縮至相對密度為1.15(50-60℃)后與液I、液II合并進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140℃)，得干燥粉，對噴霧干燥粉稱重，加入150g糊精，干擠制粒(主壓力6Mpa，側(cè)壓力0.6Mpa)，整粒，分裝于鋁箔袋中，每包6g，滅菌，即得。用HPLC法測定含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計78mg/包，含葛根以葛根素(C21H20O9)計102mg/包。
實施例3、膠囊劑制備a)將1000g生葛根、1000g金銀花用10倍量70％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.14(50-60℃)，作為液I留用；b)將1000g虎杖用10倍量80％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，真空(0.09MPa)低溫(50℃)回收乙醇，濃縮至相對密度1.13(45-50℃)，作為液II留用；C)將500g生麻黃加水浸泡2小時后，加入炮制好的500g杏仁粗粉，2味藥材加水量為投料量的10倍，煎煮3次，每次1小時，提取液用管式高速離心機離心(15000轉(zhuǎn)/分)，濃縮至相對密度為1.15(50-60℃)，得提取液III；d)將液I、液II、液III合并進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140℃)，得干燥粉，對噴霧干燥粉稱重，加入10％噴霧干燥乳糖，干擠制粒(主壓力6Mpa，側(cè)壓力0.6Mpa)，加入5％硬脂酸鎂，混均，灌膠囊，每粒0.5g，滅菌，即得。用HPLC法測定含金銀花以綠原酸計(C16H18O9)13mg/g，含葛根以葛根素計(C21H20O9)19mg/g。
實施例4、膠囊劑制備a)將700g生葛根、1000g金銀花用10倍量70％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.14(50-60℃)，作為液I留用；b)將1200g虎杖用10倍量80％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，真空(0.09MPa)低溫(50℃)回收乙醇，濃縮至相對密度1.13(45-50℃)，作為液II留用；C)將700g生麻黃、250g甘草加水浸泡2小時后，加入炮制好的350g杏仁粗粉，3味藥材加水量為投料量的10倍，煎煮3次，每次1小時，提取液用管式高速離心機離心(15000轉(zhuǎn)/分)，濃縮至相對密度為1.15(50-60℃)，得提取液III；d)將液I、液II、液III合并進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140℃)，得干燥粉，對噴霧干燥粉稱重，加入10％噴霧干燥乳糖，干擠制粒(主壓力6Mpa，側(cè)壓力0.6Mpa)，加入5％硬脂酸鎂，混均，灌膠囊，每粒0.5g，滅菌，即得。用HPLC法測定含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計12mg/g，含葛根以葛根素(C21H20O9)計17mg/g。
實施例5、口服液制備a)將1000g生葛根、1000g金銀花用10倍量70％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.14(50-60℃)，作為液I留用；b)將1000g虎杖用10倍量80％乙醇作溶劑，浸漬12小時后，85℃回流提取2次，每次1小時，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)分離后，真空(0.09MPa)低溫(50℃)回收乙醇，濃縮至相對密度1.13(45-50℃)，作為液II留用；C)將500g生麻黃加水浸泡2小時后，加入500g炮制好的杏仁粗粉，2味藥材加水量為投料量的10倍，煎煮3次，每次1小時，提取液用管式高速離心機離心(15000轉(zhuǎn)/分)，濃縮至相對密度為1.15(50-60℃)，得提取液III；d)將液I、液II、液III合并，加3倍量95％乙醇，攪勻，冷藏24小時，取上清液減壓回收乙醇，加水稀釋至4.251，靜置，取上清液濾過，罐裝，每支10ml，滅菌，即得。用HPLC法測定含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計3.0mg/ml，含葛根以葛根素(C21H20O9)計5.4mg/ml。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物，其特征在于該組合物是以金銀花、虎杖、生葛根、麻黃和杏仁的提取物為主要活性成份與藥用輔料組成的口服制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的組成主要活性成份的各味中藥的重量份比例范圍為金銀花7-15份、虎杖7-15份、生葛根7-15份、麻黃3.5-7.5份、杏仁3.5-7.5份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的活性成份還可以加入其他輔助中藥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的輔助中藥為甘草。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的活性成份各生藥重量份比例為金銀花7-15份、虎杖7-15份、生葛根7-15份、麻黃3.5-7.5份、杏仁3.5-7.5份、甘草1.5-3.5份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的口服制劑是指醫(yī)學(xué)上可接受的各種口服劑型，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑或口服液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該組合物的制備方法包括下列步驟1)活性成份提取物制備a)將配比量的金銀花、生葛根用8-12倍量70％乙醇作溶劑，浸漬10-15小時后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70℃回收乙醇，濃縮至相對密度1.14，得提取液I；b)將配比量的虎杖用8-12倍量80％乙醇作溶劑，浸漬10-15小時后，回流提取2次，合并，提取液離心，濾液真空50-70℃回收乙醇，濃縮至相對密度1.13，得提取液II；c)將配比量的麻黃、炮制好的杏仁和/或甘草加水浸泡1.5-3小時后，提取3次，提取液離心，濾液濃縮至相對密度1.15，得提取液III；2)制劑制備合并提取液I、II、III，按常規(guī)方法與藥用輔料制成液體口服制劑；或?qū)⒑喜⒑蟮奶崛∫哼M(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法與藥用輔料制成固體口服制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備治療感冒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療感冒的中藥組合物及制備方法。本發(fā)明公開的治療感冒的中藥組合物是以金銀花、虎杖、生葛根、麻黃和杏仁的提取物為主要活性成分與藥用輔料組成的口服制劑。該制劑對于感冒發(fā)燒患者擁有明確迅速解熱功效，不反彈，同時可以有效改善頭痛、全身酸痛等感冒癥狀，無常用西藥的嗜睡等副作用，還可以明顯縮短感冒患者病程的治療感冒的理想中藥組合物。
文檔編號A61P31/00GK1600352SQ03151188
公開日2005年3月30日 申請日期2003年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月25日
發(fā)明者萬海同, 白海波, 劉沐榮 申請人:杭州健源生物技術(shù)有限公司