專利名稱：一種抗氧化降血脂的口服藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于含有原料或其與不明結構之反應產物的醫(yī)用配制品技術領域，具體涉及到來源于植物的材料。
背景技術：
氧自由基在人類許多疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著十分重要的作用，如衰老、腫瘤的發(fā)生、心腦血管病，臟器缺血——重灌注損傷、老年性癡呆、帕金森氏病、動脈硬化、白內障、糖尿病并發(fā)癥、酒精性肝損傷、慢性肝炎、肺氣腫等等。隨著對氧自由基與疾病關系的理論研究不斷深入，抗氧化劑的應用價值日益受到重視，相關的抗氧化劑藥品也日益受到人們的重視，有的抗氧化劑甚至作為保健食品的成分而應用，如維生素E族、胡蘿卜素、不飽和脂肪酸、輔酶Q10類黃酮類化合物等，所以開發(fā)新型的抗氧化劑藥物有十分廣闊的市場前景。
心血管病是一類嚴重危害人類健康的疾病，在全世界范圍內發(fā)病率和死亡率居高不下，是目前人類健康的頭號殺手，而高血脂癥是心腦血管發(fā)病的主要因素，因此，人們將血脂調節(jié)藥物的開發(fā)作為治療心血管病的重點。目前臨床應用的降血脂藥物主要有他汀類、貝特類、膽酸鱉合劑類和煙酸類四大類。
他汀類藥物能特異性競爭抑制羥甲基戊二酰輔酶A還原酶，酶可使羥甲基戊二酰輔酶A轉變?yōu)榧谆u戊酸，合成膽固醇，此酶受抑制則膽固醇合成減少，還可反饋性刺激細胞表面的低密度脂蛋白受體增加，使血液中脂蛋白降低，此類藥物控制血脂較好，適用于降低高膽固醇和甘油三酯的高血脂癥患者，常用藥物有洛伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀等。
貝特類藥物能激活過氧化酶體、激活型增殖體受體，增加脂蛋白脂酶、載脂蛋白AI、AII的基因表達，減少載脂蛋白ApocIII基因表達，增加高密度脂蛋白膽固醇濃度，減少載脂蛋白ApocIII濃度，使血中極低密度脂蛋白膽固醇加速降解，降低血中甘油三酯水平，常用藥物有非諾貝特、吉非貝齊、復方氯貝丁酸鈣等。膽酸鱉合劑口服后在腸道與膽酸結合，干擾肝腸循環(huán)，阻止膽酸或膽固醇從腸道吸收，形成穩(wěn)定的絡合物排出體外，并且促使膽固醇降解，對甘油三酯無影響，常用藥物有考來烯胺。
煙酸及其衍生物類藥物可抑制脂肪組織的脂解作用，降低游離脂肪酸的濃度，減少肝中極低低密度脂蛋白的合成，通過抑制環(huán)腺苷一磷酸的形成，導致血漿中甘油三酯濃度降低，常用藥物有煙酸、阿西莫司等。
上述藥物中他汀類、貝特類降血脂效果較好，但均存在一定的副作用，他汀類主要不良反應為肝功能異常和肌病，貝特類最常見不良反應為胃腸道反應，其中有的可致結石，故有膽石或膽囊病的患者禁用，雖然貝特類與他汀類聯(lián)用也十分有效，但是偶有肌病和橫紋肌溶解的發(fā)生等。
我國目前沒有降血脂藥物上市，而進口的相關藥物價格昂貴，普通患者難以承受，因此，開發(fā)廉價的無副作用的降血脂藥物是當前迫切需要解決的問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的一個技術問題在于克服上述藥物的缺點，提供一種抗氧化降血脂的口服藥物。
解決上述技術問題所采用的技術方案是連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶0.25～100重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑。連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶100～350重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。
本發(fā)明的固體口服藥劑為片劑、顆粒劑、膠囊劑。本發(fā)明的液體口服藥劑為糖漿劑。
本發(fā)明的優(yōu)選配比為連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶1～50重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑。連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶200～350重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。
本發(fā)明的最佳配比為連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶7重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑。連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶300重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。
連翹苷(Forsythia，Phillyrin，)是從我國常用中藥連翹或連翹葉中提取分離得到的，連翹在我國廣泛栽培，資源十分豐富，是一類極具開發(fā)價值的降血脂藥物。連翹苷的分子結構式為 連翹苷為木脂素甙類化合物，化學式為C27H34O11分子量為534，熔點181℃。
連翹苷的制備方法如下將連翹葉粉碎，加入10倍量甲醇回流提取4小時，過濾，濾液濃縮至提取液的5-10％體積，加入3倍體積的20％中性醋酸鉛溶液，使沉淀完全，過濾，濾液濃縮至無醇味，沸水提取2小時，提取液放冷，待沉淀完全后，過濾，沉淀用熱水溶解，通入H2S氣體脫鉛至無沉淀產生，過濾，濾液濃縮后用乙醇溶解，重結晶即得連翹苷。
本發(fā)明的活性成分連翹苷經發(fā)明人委托試驗單位進行了藥效試驗，藥效試驗結果表明連翹苷具有良好的清除羥自由基的作用，可以有效抑制組織、細胞器水平的氧化損傷作用。連翹苷不同劑量組組織中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、過氧化物酶(POD)活性和丙二醛(MDA)含量均低于模型對照組，表現出顯著差異或極顯著差異，與正常對照組的超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性和丙二醛含量接近。連翹苷有延緩衰老的作用，可以有效的提高衰老小鼠抗氧化酶系的活力，減少衰老產物過氧化脂質在組織中的積累。連翹苷有良好的降低營養(yǎng)性高血脂癥小鼠血脂的作用。


圖1是本發(fā)明活性成分連翹苷對肝線粒體腫脹度的影響圖。
具體實施例方式
下面結合附圖和實施例對本發(fā)明進一步詳細說明，但本發(fā)明不限于這些實施例。
實施例1以制備本發(fā)明產品片劑1000片為例所用原料和輔料及其配比如下連翹苷 30g
淀粉150g乳糖120g其制備工藝按制劑學片劑的常規(guī)工藝進行，每片重0.3g，含連翹苷30mg。
用法用量口服，每次一片，一日三次，小兒酌減。
實施例2以制備本發(fā)明產品膠囊劑1000粒為例所用原料和輔料及其配比如下連翹苷 30g玉米淀粉35g硬脂酸鎂5g其制備工藝按制劑學膠囊劑的常規(guī)工藝進行，每粒膠囊含連翹苷30mg。
用法用量口服，每次一粒，一日三次，小兒酌減。
實施例3以制備本發(fā)明產品顆粒劑1000g為例所用原料和輔料及其配比如下連翹苷 10g蔗糖粉 650g糊精340g制備工藝按制劑學顆粒劑的常規(guī)工藝進行，1g含連翹苷10mg。
用法用量口服，每次3g，一日三次，小兒酌減。
實施例4以制備本發(fā)明產品糖漿劑1000mL為例所用原料和輔料及其配比如下連翹甙 3g蔗糖600g苯甲酸 1g蒸餾水 加至1000mL其制備工藝按制劑學糖漿劑的常規(guī)工藝進行，1mL含連翹苷3mg。
用法用量口服，每次10mL，一日三次，小兒酌減。
為了驗證本發(fā)明的有益效果，發(fā)明人采用本發(fā)明的活性成分連翹苷委托試驗單位進行了藥效實驗，各種藥效試驗情況如下1、連翹苷的體外抗氧化作用試驗目的觀測連翹苷對自由基的清除作用和連翹苷對自由基導致的組織及細胞損傷的保護作用。
受試藥物連翹苷(批號0821-9903)，購自中國藥品生物制品檢定所，經高效液相峰面積歸一化法測定含量大于99.54％，連翹苷用0.3％的羧甲基纖維素鈉按劑量要求配制成相應濃度。
實驗動物ICR小鼠由陜西省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供，體重20～22g，動物合格證為醫(yī)動字08-24號。
(1)連翹苷清除·OH效果的測定試驗方法按Smirnoff等的方法改進用FeSO4+H2O2產生·OH，以·OH氧化水楊酸所得產物測A510，以(對照組-加藥組/對照組)×100％計算·OH的清除率。
試驗結果試驗結果見表1。
表1連翹苷對·OH的清除作用(N＝6)組別 劑量(μg/ml) A510nm抑制率(％)對照組0 0.285±0.009-連翹苷組1 0.167 0.227±0.003**20.35連翹苷組2 0.333 0.205±0.020**28.07連翹苷組3 0.667 0.194±0.019**31.93統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗，與對照組比較，**P＜0.01。
試驗結論連翹苷在0.167μg/ml濃度時對·OH就有一定的清除能力，數據差異達極顯著水平。說明連翹苷對·OH具有較強的清除作用。連翹苷的濃度與清除率之間呈較好的量效關系。
(2)連翹苷對H2O2誘導小鼠血紅細胞溶血的抑制作用試驗方法各取紅細胞懸浮液1ml，加不同濃度的連翹苷，最后加100mmol/LH2O2啟動反應，37℃作用1小時，生理鹽水稀釋5倍，3000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液測A415，計算溶血度和抑制率。
表2連翹苷對H2O2誘導小鼠血紅細胞(RBC)溶血的影響(N＝6)組別 劑量(μg/ml) A510nm抑制率(％)對照組 0 0.285±0.009 -連翹苷組1 0.167 0.227±0.003**20.35連翹苷組2 0.333 0.205±0.020**28.07連翹苷組3 0.667 0.194±0.019**31.93試驗結果試驗結果見表2。
統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示，兩樣本比較采用t檢驗，與對照組比較，**P＜0.01。
試驗結論H2O2加入后溶血量顯著高于正常組，H2O2使紅細胞膜受氧化而損傷，胞內容物外流，連翹苷可顯著抑制紅細胞氧化性溶血的發(fā)生。表明連翹苷可抑制氧化損傷，保護紅細胞膜，且呈良好的量效關系。
(3)連翹苷對小鼠組織及肝線粒體和微粒體脂質過氧化產物丙二醛生成的影響試驗方法迅速取取血后小鼠的腦、心、肝，用冷的生理鹽水洗凈后冰浴下勻漿，制成0.5％的懸浮液備測定用；取肝組織在冰浴下以0.25mol/L蔗糖制成10％勻漿，用BeckmanL8-80離心機的80Ti轉頭3000轉/分鐘，4℃離心20分鐘，沉淀用冷的0.25mol/L蔗糖水溶液洗滌兩次，合并上清液，用80Ti轉頭10000轉/分鐘，4℃離心20分鐘，所得沉淀為線粒體，用10mmol/L Tris-HCl緩沖液配成含蛋白質0.5mg/ml線粒體懸浮液備用；上清液用80Ti轉頭42000轉/分鐘，4℃離心30分鐘，所得沉淀即為微粒體，用10mmol/L Tris-HCl緩沖液配成含蛋白質0.5mg/ml微粒體懸浮液備用。
1ml0.5％組織勻漿或蛋白含量為0.5mg/mL(用Lowry法測定)肝線粒體和微粒體，加不同濃度連翹苷，6mmol/L FeSO4100μl，最后加60mmol/L H2O240μl，在37℃下水浴1小時后，加入1ml 15％三氯乙酸結束反應，再加入1ml0.67％硫代巴比妥酸，于沸水浴中顯色15分鐘，冷卻后離心，測上清液的A532nm，檢測組織或膜組分脂質過氧化產物丙二醛的生成量。
試驗結果試驗結果見表2、表3。
表3連翹苷對小鼠組織脂質過氧化產物丙二醛生成的影響(N＝6)組 劑量 腦心 肝別 (μg/ml) A532nm抑制率(％)A532nm抑制率(％) A532nm抑制率(％)

表4連翹苷對小鼠肝線粒體和微粒體脂質過氧化產物丙二醛生成的影響(N＝6)組別 劑量線粒體 微粒體(μg/ml)A532nm抑制率(％) A532nm抑制率(％)正常組 0 0.07±0.02**- 0.02±0.01**-模型組 0 0.76±0.09 - 0.94±0.09 -F1 1.5 0.43±0.11*43.85 0.48±0.09**48.67F2 3.0 0.24±0.06**69.24 0.34±0.05**63.84F3 4.5 0.22±0.06**71.47 0.24±0.01**75.08F4 6.0 0.11±0.02**85.60 0.13±0.03**86.32統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗，與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；F代表連翹苷。
試驗結論由表3、表4結果表明模型組丙二醛含量比正常組顯著增加，說明·OH可誘導脂質過氧化反應，若同時加入連翹苷，丙二醛生成量比只加·OH組顯著減少，說明連翹苷可抑制·OH誘導的氧化作用，此抑制作用有一定的量效關系。
(4)小鼠肝線粒體腫脹度的測定試驗方法3ml肝線粒體懸浮液，加不同濃度連翹苷后，以5μmol/L FeSO4和0.1mmol/L維生素C激發(fā)線粒體膨脹，測不同時間的A520，確定線粒體受損傷程度。
試驗結果見圖1。
試驗結論參見圖1，隨著時間的延長各組在520nm吸光值下降，說明線粒體膜被氧化損傷而發(fā)生了腫脹，其中對照組下降幅度最大，說明·OH誘導加速了氧化損傷，腫脹嚴重。加連翹苷組與對照組相比下降趨勢減緩，表明連翹苷可抑制·OH所致氧化損傷程度，腫脹減輕。而且連翹苷高濃度組損傷程度低于低濃度組，這表明連翹苷作用效果呈劑量依賴關系。
2、連翹苷對小鼠氧化損傷的保護作用試驗目的觀測連翹苷對四氧嘧啶致小鼠氧化損傷的保護作用。
受試藥物連翹苷(批號0821-9903)，購自中國藥品生物制品檢定所經高效液相峰面積歸一化法測定含量大于99.54％，連翹苷用0.3％的羧甲基纖維素鈉按劑量要求配制成相應濃度。
實驗動物ICR小鼠由陜西省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供，體重20～22g，動物合格證為醫(yī)動字08-24號。
試驗用化學試劑四氧嘧啶為Sigma公司產品，鄰苯三酚、硫代巴比妥酸為天津市天河化學試劑廠產品，過氧化氫、愈創(chuàng)木酚為上海試劑三廠產品。
實驗方法50只ICR小鼠，按體重隨機分為5組，雌雄各半。各組動物均隨機進食飲水，其中小劑量組按每天10mg/kg、中劑量組按每天30mg/kg、大劑量組按每天90mg/kg的連翹苷0.4ml灌胃給藥，正常對照組和模型對照組灌胃給予等體積0.3％羧甲基纖維素鈉溶液，20天后禁食不禁水16小時，除正常對照組外的各組動物均腹腔注射四氧嘧啶150mg/kg，72小時后稱重，眼眶采血，檸檬酸鈉抗凝，血漿或適當稀釋的溶血液用于測定超氧化物歧化酶、過氧化脂質和血紅蛋白以及過氧化物酶活性。肝和腦分別用0.05mol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，pH為7.8，低溫勻漿，5000轉/分鐘離心10分鐘，上清液用于測定超氧化物歧化酶、丙二醛、過氧化物酶。
測試指標及方法血紅蛋白測定用氰化高鐵比色法，超氧化物歧化酶測定用鄰苯三酚自氧化法，過氧化物酶測定用愈創(chuàng)木酚比色法，丙二醛測定用硫代巴比妥酸反應比色法。
發(fā)明人委托試驗單位采用本發(fā)明的活性成分連翹苷對小鼠紅細胞抗氧化作用的影響、對肝臟抗氧化作用的影響、對小鼠腦抗氧化作用的影響、對小鼠心臟抗氧化作用的影響進行了試驗，各種試驗結果如下(1)連翹苷對小鼠紅細胞抗氧化作用的影響試驗結果見表5。
表5連翹苷對小鼠紅細胞抗氧化作用的影響(X±s，n＝10)

注*表示與模型對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
統(tǒng)計學處理兩樣本比較采用t檢驗。
試驗結論紅細胞超氧化物歧化酶為抗氧化酶類，過氧化脂質為脂質氧化的產物，血紅蛋白與機體總耗氧量有關。模型組的超氧化物歧化酶活性、過氧化脂質、血紅蛋白均高于正常對照組，數據差異有顯著意義，說明紅細胞氧化損傷模型的制造是成功的。不同加藥組的超氧化物歧化酶活性、過氧化脂質、血紅蛋白均低于模型對照組，數據差異有顯著意義，說明連翹苷可提高紅細胞的抗氧化能力。
(2)連翹苷對肝臟抗氧化作用的影響試驗結果見表6。
表6連翹苷對小鼠肝臟抗氧化作用的影響(X±s，n＝10)

注*表示與模型對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗。
實驗結論肝臟的超氧化物歧化酶活性、丙二醛和過氧化物酶活性均高于正常對照組，數據差異有顯著意義，說明用四氧嘧啶制造肝臟的氧化損傷模型是成功的，連翹苷不同劑量組的超氧化物歧化酶活性、丙二醛和過氧化物酶活性均低于模型對照組，數據差異有極顯著意義。
(3)連翹苷對小鼠腦抗氧化作用的影響試驗結果見表7。
表7連翹苷對小鼠腦抗氧化作用的影響(X±s，n＝10)

注*表示與模型對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，。
統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示。兩樣本比較采用t檢驗。
試驗結論模型對照組的超氧化物歧化酶活性、丙二醛和過氧化物酶活性均高于正常對照組，數據差異有顯著意義，連翹苷不同劑量組的超氧化物歧化酶活性、丙二醛和過氧化物酶活性均低于模型對照組，也表現出顯著差異或極顯著差異。
(4)連翹苷對小鼠心臟抗氧化作用的影響試驗結果見表8。
表8連翹苷對小鼠心臟抗氧化作用的影響(X±s，n＝10)

注*表示與模型對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗。
試驗結論模型對照組的超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性、丙二醛含量均高于正常對照組，數據差異有顯著意義。連翹苷不同劑量組的超氧化物歧化酶活性、丙二醛和過氧化物酶活性均低于模型對照組，也表現出顯著差異或極顯著差異。
3、連翹苷對小鼠的抗衰老作用試驗目的觀測連翹苷對小鼠的抗衰老作用。
受試藥物連翹苷(批號0821-9903)，購自中國藥品生物制品檢定所經高效液相峰面積歸一化法測定含量大于99.54％，連翹苷用0.3％的羧甲基纖維素鈉按劑量要求配制成相應濃度。
實驗動物ICR小鼠由陜西省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供，體重20～22g，動物合格證為醫(yī)動字08-24號。
試驗用化學試劑四氧嘧啶為Sigma公司產品，鄰苯三酚、硫代巴比妥酸為天津市天河化學試劑廠產品，過氧化氫、愈創(chuàng)木酚為上海試劑三廠產品。
試驗方法選用1月齡ICR小鼠12只為少齡對照組，12月齡ICR小鼠36只，按體重隨機分為高齡對照組、高齡給藥組1和高齡給藥組2。各組動物均雌雄各半。高齡給藥組1和高齡給藥組2分別以每天30mg/kg和90mg/kg的劑量灌胃，少齡對照組和高齡對照組以等體積0.3％羧甲基纖維素鈉蒸餾水灌胃。21天后處死動物，眼眶采血，取心臟、腦和肝臟測定相關指標。
線粒體的制備取小鼠肝臟1g加7ml 0.25mol/Tris-HCl溶液研磨，3000轉/分鐘離心15分鐘，上清液于10000轉/分鐘離心20分鐘，收集線粒體。
指標及測定方法單胺氧化酶-B活性采用紫外吸收法，超氧化物歧化酶活性測定用鄰苯三酚自氧化法，丙二醛含量測定用硫代巴比妥酸反應比色法，過氧化物酶活性測定用愈創(chuàng)木酚法。
發(fā)明人委托試驗單位采用本發(fā)明的活性成分連翹苷對心臟丙二醛含量、超氧化物歧化酶、過氧化物酶活性的影響進行了試驗，連翹苷對腦組織丙二醛含量和超氧化物歧化酶、單胺氧化酶-B活性的影響進行了試驗，連翹苷對線粒體中丙二醛含量、單胺氧化酶-B活性的影響進行了試驗，連翹苷對小鼠肝指數、胸腺指數和脾指數的影響進行了試驗，試驗結果如下(1)連翹苷對心臟丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性的影響試驗結果見表9表9連翹苷對小鼠心臟MDA含量、POD、SOD酶活性的影響(X±s，n＝12)

注*P＜0.05，**P＜0.01表示與高齡對照組相比較。
統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗。
試驗結論連翹苷可抑制高齡小鼠心臟丙二醛的生成，數據差異有顯著意義?？商岣叱趸锲缁傅幕钚?、過氧化物酶的活性，在給藥量為90mg/kg時超氧化物歧化酶的數據差異有極顯著意義，在給藥量為30mg/kg時過氧化物酶活性的數據差異有顯著意義。
(2)連翹苷對腦組織丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性、單胺氧化酶-B活性的影響試驗結果見表10。
表10連翹苷對小鼠腦MDA含量和SOD、MAO-B酶活性的影響(X±s，n＝12)

*P＜0.05，**P＜0.01表示與高齡對照組相比較統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗。
試驗結論連翹苷可以降低高齡小鼠腦組織中的丙二醛含量，同時在一定劑量條件下對機體內的超氧化物歧化酶活力有顯著的增強作用，對單胺氧化酶-B的活性有明顯的抑制作用。
(3)連翹苷對線粒體中丙二醛含量、單胺氧化酶-B活性的影響試驗結果見表11。
表11連翹苷對小鼠線粒體中MDA含量、MAO-B活性的影響(X±s，n＝12)組別 劑量(mg/kg.d) MDA(nmol/mg) MA0-B(u/mg.hr)少齡對照組 0 38.29±1.52**2.00±0.87**高齡對照組 0 70.24±2.61 7.59±0.72連翹苷小劑量組 30 60.52±10.65*4.66±0.74**連翹苷大劑量組 90 40.08±0.44**3.37±0.14***P＜0.05，**P＜0.01表示與高齡對照組相比較統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示.兩樣本比較采用t檢驗。
試驗結論丙二醛和單胺氧化酶-B都隨衰老程度的增加而升高，與衰老密切相關。連翹苷可顯著地降低高齡小鼠線粒體中丙二醛含量，抑制單胺氧化酶-B的活性。
(4)連翹苷對小鼠肝指數、胸腺指數和脾指數的影響試驗結果實驗結果見表12。
表12連翹苷對小鼠肝指數、胸腺指數和脾指數的影響(X±s，n＝12)組別 肝指數(mg/g)胸腺指數(mg/g) 脾指數(mg/g)少齡對照組 51.08±4.36**2.04±0.56**5.90±0.88*高齡對照組 34.35±6.56 0.61±0.15 3.17±1.16連翹苷小劑量組 39.35±4.54*0.90±0.08**4.06±1.08連翹苷大劑量組 39.61±4.29*0.98±0.13**3.59±0.81*P＜0.05，**P＜0.01表示與高齡對照組相比較。
統(tǒng)計學處理計量資料均以X±s表示，兩樣本比較采用t檢驗。
實驗結論連翹苷顯著增加高齡小鼠肝指數，說明對小鼠的肝有一定的保護作用。對高齡小鼠的脾指數沒有明顯作用。老年小鼠的胸腺隨衰老程度的增加而逐漸變小，連翹苷顯著增加小鼠的胸腺指數，說明連翹苷可延緩衰老。
4、連翹苷對營養(yǎng)性高血脂癥小鼠的影響試驗目的觀測連翹苷對營養(yǎng)性高血脂小鼠的降血脂作用。
受試藥物連翹苷(批號0821-9903)，購自中國藥品生物制品檢定所經高效液相峰面積歸一化法測定含量大于99.54％。連翹苷用0.3％的羧甲基纖維素鈉按劑量要求配制成相應濃度。
實驗動物ICR小鼠由陜西省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供，體重20～22g，動物合格證為醫(yī)動字08-24號。
試驗用化學試劑測定血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的試劑盒由北京中生生物工程高科技公司生產，陽性對照藥非諾貝特由中國藥科大新藥開發(fā)中心廣州威爾曼藥業(yè)有限公司生產(批號020801)。
指標及測定方法體重和腹腔內脂肪用精確度為0.01g的電子天平稱量，計算脂肪系數(脂肪系數＝脂肪重量/體重×100)；脂肪細胞的記數和直徑測量方法為取腹腔同一部位的脂肪一小塊，用2.5％甲醛乙醇液固定，石蠟切片，HE染色，在400倍顯微鏡下記數全視野中脂肪細胞數，并用經標準物鏡測微尺校正的目鏡測微器測脂肪細胞的最大徑與最小徑；肝臟膽固醇測定采用鄰苯二甲醛法；血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白均用美國ACE公司全自動生化分析儀采用酶法測定。
試驗方法ICR小鼠按體重隨機分為正常對照組、模型對照組、連翹苷高劑量組、連翹苷中劑量組、連翹苷低劑量組和陽性藥對照組，劑量見表13。正常對照組喂普通飼料由陜西省中藥醫(yī)研究院實驗動物中心提供，其余5組飼喂高脂飼料(由陜西省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供，配方為基礎飼料79％、膽固醇1％、蛋黃粉10％、豬油10％)。三周后各組動物均禁食12小時后稱重。正常對照組與其他各組的體重相比，數據差異顯著，說明小鼠的高血脂癥模型已經形成。隨后按表1劑量對各組小鼠等體積灌胃給藥，正常對照組、模型對照組灌胃等體積.3％羧甲基纖維素鈉。各種藥物均用0.3％羧甲基纖維素鈉制成懸浮液。給藥三周后，各組動物眼眶采血，離心分離血清，隨即引頸處死，分離腹腔脂肪和肝臟備用。
表13動物分組及劑量

*表示與正常對照組相比，經t檢驗，*P＜0.05。
發(fā)明人委托試驗單位采用本發(fā)明的活性成分連翹苷對對營養(yǎng)性高血脂癥小鼠腹腔脂肪濕重和脂肪細胞大小的影響，連翹苷對高血脂癥小鼠血脂及肝臟總膽固醇含量的影響，進行了試驗，各種試驗結果如下(1)連翹苷對營養(yǎng)性高血脂癥小鼠腹腔脂肪濕重和脂肪細胞大小的影響試驗結果見表14。
表14F連翹苷對高血脂癥小鼠脂肪濕重和脂肪細胞大小的影響(X±s，n＝12)組別 脂肪濕重(g) 脂肪系數(％) 脂肪細胞數(視野)最大徑(um) 最小徑(um)正常對照組 0.53±0.10** 2.04±0.10** 123±13** 109±11**32±4**模型對照組 0.89±0.223.16±0.67 75±7 161±12 64±7連翹苷低劑量組 0.73±0.132.64±0.37*99±6** 125±10**50±5**連翹苷中劑量組 0.71±0.10* 2.42±0.37*103±12** 114±10**44±5**連翹苷高劑量組 0.72±0.192.37±0.49*89±7** 142±6** 57±4**陽性對照組 0.66±0.08** 2.44±0.20*104±7**112±12**51±3**注*表示與模型對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗結論模型對照組的脂肪濕重、脂肪系數和脂肪細胞直徑均大于正常對照組，而脂肪細胞數目小于正常對照組，數據差異有顯著意義，說明其腹腔內脂肪蓄積明顯增多。連翹苷三個劑量組的脂肪系數和脂肪細胞直徑均小于模型對照組，脂肪細胞數目多于模型對照組，數據差異有顯著意義。
(2)連翹苷對高血脂癥小鼠血脂及肝臟總膽固醇含量的影響試驗結果見表15。
表15連翹苷對高血脂癥小鼠血脂及肝臟總膽固醇的影響(X±s，n＝12)組別TG(mmol/l)TC(mmol/l)HDL-C(mmol/l) LDL-C(mmol/l) 肝臟TC正常對照組 0.53±0.14** 3.05±0.35** 2.29±0.15** 1.13±0.30** 3.62±0.51**模型對照組 0.72±0.13 3.87±0.511.74±0.211.90±0.267.16±1.09連翹苷低劑量組 0.60±0.08*3.38±0.34* 2.08±0.12* 1.70±0.24* 6.20±0.61*連翹苷中劑量組 0.62±0.05*3.35±0.35* 2.20±0.31** 1.59±0.27* 5.39±0.78**連翹苷高劑量組 0.60±0.06*3.28±0.51* 2.18±0.30* 1.64±0.405.09±0.93**陽性對照組 0.55±0.10** 3.32±0.43* 2.13±0.32** 1.62±0.21* 4.83±0.75**注*表示與模型對照組相比t檢驗，*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗結論模型對照組的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白高于正常對照組，高密度脂蛋白低于正常對照組，數據差異極顯著，說明已形成高血脂癥模型。連翹苷中劑量組、大劑量組的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白低于模型對照組，高密度脂蛋白高于模型對照組，說明其對血脂調節(jié)有良好的作用。正常對照組及各給藥組肝臟總膽固醇含量皆低于模型對照組，說明連翹苷也有降低肝臟膽固醇的作用。
權利要求
1.一種抗氧化降血脂的口服藥物，其特征在于連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶0.25～100重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑；連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶100～350重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。
2.按照權利要求1所述的一種抗氧化降血脂的口服藥物，其特征在于所說的固體口服藥劑為片劑、顆粒劑、膠囊劑；所說的液體口服藥劑為糖漿劑。
3.按照權利要求1所述的一種抗氧化降血脂的口服藥物，其中連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶1～50重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑；連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶200～350重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。
4.按照權利要求1所述的一種抗氧化降血脂的口服藥物，其中連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶7重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑；連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶300重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。
全文摘要
一種抗氧化降血脂的口服藥物，連翹苷與常規(guī)藥物固體賦形劑按1∶0.25～100重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成固體口服藥劑；連翹苷與常規(guī)藥物液體賦形劑按1∶100～350重量比混合，按常規(guī)制劑工藝制成液體口服藥劑。本發(fā)明的活性成分連翹苷經藥效試驗表明，它具有良好的清除羥自由基的作用，可以有效抑制組織、細胞器水平的氧化損傷作用。不同劑量組組織中的超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性和丙二醛含量均低于模型對照組與正常對照組接近。有延緩衰老的作用，可以有效的提高衰老小鼠抗氧化酶系的活力，減少衰老產物過氧化脂質在組織中的積累。有良好的降低營養(yǎng)性高血脂癥小鼠血脂的作用?？蛇M入初期臨床觀察試驗。
文檔編號A61P39/06GK1452973SQ0310807
公開日2003年11月5日 申請日期2003年5月23日 優(yōu)先權日2003年5月23日
發(fā)明者李發(fā)榮, 王喆之, 楊建雄 申請人:陜西師范大學