專利名稱：腺苷a的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的吸入組合，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品(tiotropium)鹽。本發(fā)明還涉及藥物組合物(包括給藥系統(tǒng))和所述組合物的用途。
選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的組合能夠用于治療氣道阻塞性疾病和其它炎性疾病(obstructive airways and other inflammatorydiseases)，特別是氣道阻塞性哮喘疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)和由增強(qiáng)的支氣管反射、炎癥、支氣管高反應(yīng)性和支氣管痙攣所惡化的其它氣道阻塞性疾病。所述組合特別能夠用于治療COPD。
可以用本發(fā)明治療的具體疾病的實(shí)例包括呼吸哮喘疾病、急性呼吸窘迫綜合癥、慢性肺炎、支氣管炎、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺(氣道)疾病和矽肺，以及免疫系統(tǒng)疾病例如過敏性鼻炎和慢性(鼻)竇炎。
腺苷具有廣泛的生理活性，包括免疫和炎癥反應(yīng)，其是受體介導(dǎo)的生理活性，涉及與至少4種質(zhì)膜(plasma membrane)受體發(fā)生相互作用。這些受體通常稱為A1、A2a、A2b和A3。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腺苷及其類似物具有廣譜抗炎活性，其涉及大量免疫和炎癥細(xì)胞，包括中性白細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞。中性白細(xì)胞上A2a受體的活化抑制這些細(xì)胞產(chǎn)生活性氧化劑和其它炎癥介質(zhì)(例如彈性蛋白酶)，并且β2-整聯(lián)蛋白的表達(dá)降低。
已知A2a受體存在于淋巴細(xì)胞、中性白細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞，并且存在于血管內(nèi)皮組織，與它們相互作用。結(jié)合到A2a受體的腺苷通過影響許多上述類型細(xì)胞的活性而減少炎癥。例如，A2a受體激動(dòng)劑顯著抑制生理刺激劑釋放的氧化物質(zhì)，例如中性白細(xì)胞化學(xué)引誘物、細(xì)胞因子和脂類產(chǎn)品。
占據(jù)腺苷A2a受體刺激中性白細(xì)胞腺苷酰環(huán)化酶，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)cAMP增加。結(jié)果，中性白細(xì)胞cAMP增加引起刺激后的中性白細(xì)胞氧化活性抑制。通過與其它類型炎癥細(xì)胞的相關(guān)反應(yīng)，A2a激動(dòng)劑的抗炎特性延伸至中性白細(xì)胞以外的抑制活性。腺苷還降低了內(nèi)毒素刺激的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的TNFα釋放，已經(jīng)觀察到內(nèi)源性腺苷和腺苷類似物通過與A2a受體結(jié)合降低人單核TNFα的產(chǎn)生。
腺苷類似物降低了內(nèi)毒素刺激的白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的釋放，其效果顯示A2a腺苷受體活性。白介素-10(IL-10)具有抗炎活性，因?yàn)槠淠芙档陀蓛?nèi)毒素刺激的TNFα從單核細(xì)胞的釋放，抑制氧化活性并且降低白細(xì)胞粘附分子的表達(dá)。腺苷使人單核細(xì)胞生成IL-10的能力增強(qiáng)；因此，就可能涉及的所有發(fā)展中的炎癥反應(yīng)來說，腺苷與A2a受體的結(jié)合促進(jìn)了其消退。
活化的嗜酸性細(xì)胞移居到組織中，引起細(xì)胞損傷和炎癥，例如過敏性和非過敏性哮喘、過敏性鼻炎和特應(yīng)性皮炎。通過在嗜酸性細(xì)胞上與A2a受體結(jié)合，腺苷和腺苷A2a受體激動(dòng)劑抑制活性氧的刺激釋放，同時(shí)使中性白細(xì)胞上的A2a受體活性受到抑制。
另外，吸入A2a激動(dòng)劑通過在肺中的作用抑制嗜酸性細(xì)胞募集到致敏豚鼠的肺中(參見WO-A-99/67263)。這是非常重要的，因?yàn)锳2a激動(dòng)劑舒張動(dòng)物血管，并降低動(dòng)物血壓，因此，在肺中比在周邊隔室具有更高治療指數(shù)的吸入劑理想地產(chǎn)生了A2a激動(dòng)劑的抗炎作用抗膽堿能試劑防止了副交感神經(jīng)沖動(dòng)引起的作用，這種活性是因?yàn)榭鼓憠A能試劑通過阻斷乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)與毒蕈堿膽堿能受體結(jié)合而抑制乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)的作用。毒蕈鹼受體至少存在三種亞型，M1受體主要發(fā)現(xiàn)存在于腦和其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織，M2受體發(fā)現(xiàn)存在于心臟和其它心血管組織，M3受體發(fā)現(xiàn)存在于平滑肌和腺體組織。這些毒蕈堿受體位于神經(jīng)效應(yīng)器位點(diǎn)(例如平滑肌上的神經(jīng)效應(yīng)器位點(diǎn))，具體地說，M3毒蕈堿受體位于氣管平滑肌中。因此，抗膽堿能試劑也被稱為毒蕈堿受體拮抗劑。
副交感神經(jīng)系統(tǒng)對于調(diào)節(jié)支氣管舒縮狀況有重要作用，支氣管收縮主要是因?yàn)榇碳さ牟煌M合(diverse set)引起副交感神經(jīng)活性中反射增加?？鼓憠A能試劑在治療以部分可逆性氣道狹窄為特征的慢性氣道疾病(例如COPD和哮喘)方面的用途已經(jīng)有很長一段歷史了。在開發(fā)出腎上腺素之前，抗膽堿能試劑被用作支氣管擴(kuò)張劑。然后，其被β-腎上腺素能試劑和甲基黃嘌呤所代替。然而，最近異丙托溴銨的開發(fā)又使抗膽堿能治療重新應(yīng)用于呼吸疾病。在外周器官系統(tǒng)例如(唾液腺和腸)上存在毒蕈堿受體，因此，全身活性的毒蕈堿受體拮抗劑的應(yīng)用受到其副作用(例如口干和便秘)的限制。因此，在肺中比在周邊隔室中具有更高治療指數(shù)活性的吸入劑理想地產(chǎn)生了支氣管擴(kuò)張活性以及毒蕈堿受體拮抗劑的其它有利作用。
抗膽堿能試劑還部分拮抗由組胺、緩激肽或前列腺素F2α引起的支氣管收縮作用，這被認(rèn)為反映副交感神經(jīng)傳出神經(jīng)(efferents)參與了由這些試劑引起的支氣管反射。
現(xiàn)在已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的組合在治療氣道阻塞性疾病和其它炎性疾病方面比單獨(dú)應(yīng)用一種試劑具有明顯的益處。組合應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)在于通過最適合疾病病理的機(jī)理(即拮抗毒蕈堿受體)以最優(yōu)化的方式控制氣道口徑，同時(shí)有效地抑制不合適的炎癥。通過把抗毒蕈堿和A2a激動(dòng)劑化合物以吸入途徑組合給藥，每種藥的作用都發(fā)揮出來，并且沒有不理想的外周作用。另外，組合顯示出人意外的協(xié)同效應(yīng)，比其中單獨(dú)一種藥以最大耐受劑量應(yīng)用產(chǎn)生了更好的效果。
因此，本發(fā)明還提供選擇性A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的吸入組合，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
另外，本發(fā)明提供用作藥物的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的吸入組合，其中抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
另外，本發(fā)明還提供通過吸入途徑同時(shí)、連續(xù)或者獨(dú)立給藥的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的組合，用于治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
另外，本發(fā)明提供一種藥物組合物，含有選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑、抗膽堿能試劑和可藥用賦形劑、稀釋劑或載體，以吸入途徑給藥，用于治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
另外，本發(fā)明提供選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑或抗膽堿能試劑在制備藥物中的應(yīng)用，在該藥物中，這兩種試劑以同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立的方式通過吸入途徑給藥，所述藥物用于治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
另外，本發(fā)明提供治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病的方法，包括以吸入途徑把有效量的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑通過同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立的方式給藥至需要所述治療的哺乳動(dòng)物，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
另外，本發(fā)明提供一種用于以同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立方式給藥選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的吸入裝置(inhalation device)，該裝置用于治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病，其中所述抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
選擇性A2a受體激動(dòng)劑對腺苷A2a受體比所有其它已知的腺苷受體具有更大的親和力。優(yōu)選地，這樣的選擇性A2a受體激動(dòng)劑對腺苷A2a受體的親和力比對其它腺苷受體的親和力要高至少100倍。
用于本發(fā)明的合適的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑包括在WO-A-00/23457、WO-A-00/77018、WO-A-01/27131、WO-A-01/27130、WO-A-01/60835、WO-A-02/00676和WO-A-01/94368中一般公開和具體公開的化合物。
WO-A-00/23457公開了式(I)化合物、其可藥用鹽和溶劑化物 其中R1為烷基或環(huán)丙基甲基；R2為苯基-亞烷基或萘基亞烷基，該亞烷基鏈任選進(jìn)一步被苯基或萘基取代，各個(gè)苯基或萘基任選被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，每個(gè)取代基獨(dú)立地選自烷基、烷氧基、鹵素和氰基；n為1或2；A為NRa、NRaC(O)、NRaC(O)NRa、NRaC(O)O、OC(O)NRa、C(O)NRa、NRaSO2、SO2NRa、O、S或SO2；Ra為H、烷基或在環(huán)上任選被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的芐基，所述取代基每個(gè)獨(dú)立地選自烷基、烷氧基、鹵素和氰基；R3為-(CH2)p-Rp-B；
p為0、1或2；Rp為一個(gè)鍵、亞烷基、環(huán)亞烷基、亞苯基或亞萘基，所述環(huán)亞烷基、亞苯基和亞萘基每個(gè)任選被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，每個(gè)取代基獨(dú)立地選自烷基、烷氧基、鹵素和烷氧基亞烷基；B為(i)H、-NRbRb、RbRbN-亞烷基、-ORb、-COORb、-OCORb、-SO2Rb、-CN，(ii)-SO2NRbRb、-NRbCORb、-NRbSO2Rb或-CONRbRb；其中各個(gè)Rb相同或不同，選自H、烷基、苯基和芐基，其條件是(a)當(dāng)B為-OCORb、-SO2Rb、-NRbCORb或-NRbSO2Rb時(shí)，則末端Rb不為氫，以及(b)只有當(dāng)A為NRa、NRaC(O)NRa、OC(O)NRa、C(O)NRa、SO2NRa、O或S時(shí)，Rp為一個(gè)鍵，p為0，B為H；(ii)任選被取代的、完全飽和或部分飽和或未飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，所述雜環(huán)通過環(huán)碳原子與Rp相連；或(iii)N-連接的氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉基，所有這些基團(tuán)均任選被一個(gè)或多個(gè)烷基取代，其條件是-(CH2)p-Rp-不為-CH2-；和當(dāng)A為NRa、C(O)NRa、OC(O)NRa或SO2NRa時(shí)，Ra和R3以及與連接它們的氮原子一起可以形成氮雜環(huán)丁烷、吡咯烷、哌啶或哌嗪環(huán)，各個(gè)環(huán)任選被一個(gè)或多個(gè)烷基取代。
另一方面，WO-A-00/23457公開了如上所示的式(I)化合物、其可藥用鹽及其溶劑化物，其中R1為C1-C6烷基或環(huán)丙基甲基；R2為苯基-(C1-C6)亞烷基或萘基-(C1-C6)亞烷基，所述(C1-C6)亞烷基鏈任選被苯基或萘基進(jìn)一步取代，各個(gè)苯基或萘基任選被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，每個(gè)取代基獨(dú)立地選自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵素和氰基；n為1或2；A為NRa、NRaC(O)、NRaC(O)NRa、NRaC(O)O、OC(O)NRa、C(O)NRa、NRaSO2、SO2NRa、O、S或SO2；Ra為H、(C1-C6)烷基或在環(huán)上任選被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的芐基，所述取代基各自獨(dú)立地選自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵素和氰基；
R3為-(CH2)p-Rp-B；p為0、1或2；Rp為一個(gè)鍵、C1-C6亞烷基、C3-C7環(huán)亞烷基、亞苯基或亞萘基，所述C3-C7環(huán)亞烷基、亞苯基和亞萘基各自任選被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，這些取代基各自獨(dú)立地選自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素和(C1-C6)烷氧基-(C1-C6)-亞烷基；B為(i)H、-NRbRb、RbRbN-(C1-C6)亞烷基、-ORb、-COORb、-OCORb、-SO2Rb，(ii)-CN、-SO2NRbRb、-NRbCORb、-NRbSO2Rb或-CONRbRb，其中各個(gè)Rb相同或不同，選自H、(C1-C6)烷基、苯基和芐基，其條件是(a)當(dāng)B為-OCORb、-SO2Rb、-NRbCORb或-NRbSO2Rb時(shí)，則末端Rb不為氫，以及(b)只有當(dāng)A為NRa、NRaC(O)NRa、OC(O)NRa、C(O)NRa、SO2NRa、O或S時(shí)，Rp為一個(gè)鍵，p為0，B為H；(i)任選被取代的、完全飽和或部分飽和或未飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)，所述雜環(huán)通過環(huán)碳原子與Rp相連；或(ii)N-連接的氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉基，所有這些基團(tuán)均任選被一個(gè)或多個(gè)(C1-C6)烷基取代，其條件是-(CH2)p-Rp-不為-CH2-；和當(dāng)A為NRa、C(O)NRa、OC(O)NRa或SO2NRa時(shí)，Ra和R3以及與連接它們的氮原子一起可以形成氮雜環(huán)丁烷、吡咯烷、哌啶或哌嗪環(huán)，各個(gè)環(huán)任選被一個(gè)或多個(gè)(C1-C6)烷基取代；第三方面，WO-A-00/23457公開了如上所示的式(I)化合物、其可藥用鹽及其溶劑化物，其中R1為烷基或環(huán)丙基甲基；R2為苯基-亞烷基或萘基-亞烷基，該亞烷基鏈可被甲基、乙基、苯基或萘基取代；n為1或2；和A為NRa、NRaC(O)、NRaC(O)NRa、NRaC(O)O、OC(O)NRa、C(O)NRa、NRaSO2、SO2NRa、O、S或SO2，其中Ra為H或烷基；R3為-(CH2)p-Rp-B，其中p為0、1或2；
Rp為一個(gè)鍵，或?yàn)閬喭榛?、任選被烷基取代的環(huán)亞烷基、亞苯基或亞萘基；和，B為(i)H、-NRbRb、-ORb、-COORb、-OCORb、-SO2Rb、-CN、-SO2NRbRb、-NRbCORb或-CONRbRb，其中各個(gè)Rb相同或不同，選自H或烷基，其條件是(a)當(dāng)B為-SO2Rb或-NRbCORb時(shí)，則末端Rb不為氫，以及(b)只有當(dāng)A為NRa、NRaC(O)NRa、C(O)NRa、SO2NRa、O或S時(shí)，Rp為一個(gè)鍵，p為0，B為H；或(ii)B為任選被取代的、完全飽和或部分飽和或未飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，各個(gè)基團(tuán)通過環(huán)碳原子連接；WO-A-00/77018公開了下式化合物或其可藥用鹽或其溶劑化物 其中R1為氫或任選被1-2個(gè)取代基所取代的C1-C6烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自苯基和萘基，所述苯基和萘基任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基所取代；R2為H或C1-C6烷基；A為C1-C6亞烷基；R3為(i)氫、C1-C6烷基、-COOR4、-CN、-CONR4R4、C3-C8環(huán)烷基、苯基或萘基；所述C3-C8環(huán)烷基、苯基和萘基任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基(C1-C6)烷基、R4R4N(C1-C6)烷基、鹵素(C1-C6)烷基、氟(C1-C6)烷氧基、C2-C5烷?；?、鹵素、-OR4、氰基、-COOR4、C3-C8環(huán)烷基、-S(O)mR5、-NR4R4、-SO2NR4R4、-CONR4R4、-NR4COR5或-NR4SO2R5取代；
或(ii)當(dāng)A為C2-C6亞烷基時(shí)，R3為-NR4R4、-OR4、-OCOR5、-SO2R5、-SO2NR4R4或-NR4COR5，或(iii)C-連接的、4-11元環(huán)的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)，其含有1-4個(gè)環(huán)氮原子、或者含有1-2個(gè)氮原子和1個(gè)氧原子或1個(gè)硫原子作為環(huán)原子，在碳原子上任選被氧、C1-C6烷氧基(C1-C6)烷基、R6R6N(C1-C6)烷基、鹵素(C1-C6)烷基、氟(C1-C6)烷氧基、氟(C2-C5)烷?；Ⅺu素、氰基、-OR6、R7、-COR6、-NR6R6、-COOR6、-S(O)mR7、-SO2NR6R6、-CONR6R6、-NR6SO2R7或-NR6COR7取代，并且在所述環(huán)氮原子上任選被C1-C6烷氧基(C1-C6)烷基、R6R6N(C2-C6)烷基、鹵素(C1-C6)烷基、氟(C2-C5)烷?；?、R7、-COR6、-COOR7、-SO2R7、-SO2NR6R6或-CONR6R6取代，或(iv)當(dāng)A為C2-C6亞烷基時(shí)，R3為N-連接的氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)或嗎啉基，其中各個(gè)基團(tuán)任選在碳原子上被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基(C1-C6)烷基、R4R4N(C1-C6)烷基、鹵素(C-C6)烷基、氟(C1-C6)烷氧基、C2-C5烷?；?、鹵素、-OR4、氰基、-COOR4、C3-C8環(huán)烷基、-S(O)mR5、-NR4R4、-SO2NR4R4、-CONR4R4、-NR4COR5或-NR4SO2R5取代，所述哌嗪基或高哌嗪基在氮原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基(C2-C6)烷基、R4R4N(C2-C6)烷基、氟(C1-C6)烷基、C2-C5烷?；?COOR5、C3-C8環(huán)烷基、-SO2R5、-SO2NR4R4或-CONR4R4取代；R4為H、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或苯基；R5為C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或苯基；R6為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、萘基或het；R7為C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、萘基或het；m為0、1或2；在R6和R7定義中所用的術(shù)語“het”指C-連接的吡咯基、咪唑基、三唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚基、異吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、喹唑啉基、2，3-二氮雜萘基、苯并噁唑基或喹喔啉基，各自任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氰基或鹵素取代。
WO-A-01/27131公開了下列式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑化物，
其中R1為H或任選被1-2個(gè)取代基取代的C1-C6烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自苯基或萘基，所述苯基和萘基任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基所取代；A為一個(gè)鍵或C1-C3亞烷基；R2為(i)氫、C1-C6烷基或C3-C7環(huán)烷基、苯基或萘基，所述C3-C7環(huán)烷基、苯基或萘基任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)、R3R3N-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷氧基、C2-C5烷?；?、鹵素、-OR3、氰基、-COOR3、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)mR4、-NR3R3、-SO2NR3R3、-CONR3R3、-NR3COR4或-NR3SO2R4取代，其條件是當(dāng)A為一個(gè)鍵時(shí)，R2不是H；或(ii)當(dāng)A為C2-C3亞烷基時(shí)，R2為-NR8R9、-OR3、-COOR3、-OCOR4、-SO2R4、-CN、-SO2NR3R3、-NR3COR4或-CONR3R3，或(iii)具有1-4個(gè)環(huán)氮原子、或者具有1-2個(gè)環(huán)氮原子和1個(gè)環(huán)氧原子或1個(gè)環(huán)硫原子的碳連接的4-11元單環(huán)或雙環(huán)，其在碳原子上任選被氧、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)、R3R3N-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷氧基、氟-(C2-C5)烷?；Ⅺu素、氰基、-OR5、R6、-COR5、-NR5R5、COOR5、-S(O)mR6、-SO2NR5R5、-CONR5R5、-NR5SO2R6或-NR5COR6取代，在氮原子上任選被C1-C6烷氧基-(C1-C6)烷基、R3R3N-(C2-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、氟-(C2-C5)烷?；?、R6、-COR5、-COOR5、-S(O)mR6、-SO2NR5R5或-CONR5R5所取代。
R3為H、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基或苯基；R4為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基或苯基；
R5為氫、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基或het；R6為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基或het；m為0、1或2；在R5和R6定義中所用的“het”意指C-連接的吡咯基、咪唑基、三唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、喹唑啉基、2，3-二氮雜萘基、苯并噁唑基或喹喔啉基，各個(gè)基團(tuán)任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氰基或鹵素取代；R7為甲基、乙基或環(huán)丙基甲基；或，R8和R9以及與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、高哌啶基(homopiperidingl)、高哌嗪基或四氫異喹啉基，其各自任選在環(huán)碳原子上被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)烷基、R3R3N-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、-CONR3R3、-COOR3或C2-C5烷?；〈⑶胰芜x在與環(huán)氮原子不相鄰的環(huán)碳原子上被氟-(C1-C6)烷氧基、鹵素、-OR3、氰基、-S(O)mR4、-NR3R3、-SO2NR3R3、-NR3COR4或-NR3SO2R4所取代，所述哌嗪-1-基和高哌嗪-1-基在不與A相連的環(huán)氮原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C2-C6)烷基、R3R3N-(C2-C6)-烷基、氟-(C1-C6)烷基、C2-C5烷?；?、-COOR4、C3-C8環(huán)烷基、-SO2R4、-SO2NR3R3或-CONR3R3所取代。
或者R8為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基或芐基；并且R9為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、芐基、氟-(C1-C6)烷基、-CONR3R3、-COOR4、C2-C5烷?；?SO2NR3R3。
WO-A-01/27130公開了下列式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑化物，
其中，R1為H或任選被1-2個(gè)獨(dú)立選自苯基和萘基的取代基所取代的C1-C6烷基，所述苯基和萘基任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基所取代；A為一個(gè)鍵或C1-C3亞烷基；R2為(i)氫、C1-C6烷基或C3-C7環(huán)烷基、苯基或萘基，所述C3-C7環(huán)烷基、苯基或萘基任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)烷基、R3R3N-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷氧基、C2-C5烷?；Ⅺu素、-OR3、氰基、-COOR3、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)mR4、-NR3R3、-SO2NR3R3、-CONR3R3、-NR3COR4或-NR3SO2R4取代，其前提是當(dāng)A為一個(gè)鍵時(shí)，R2不為H；或(ii)當(dāng)A為C2-C3亞烷基時(shí)，R2為NR7R8、-OR3、-COOR3、-OCOR4、-SO2R4、-CN、-SO2NR3R3、-NR3COR4或-CONR3R3，或(iii)C-連接的4-11元單環(huán)雜環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)，所述雜環(huán)具有1-4個(gè)環(huán)氮原子，或者具有1-2個(gè)環(huán)氮原子和1個(gè)環(huán)氧原子或1個(gè)環(huán)硫原子，其在碳原子上任選被氧、C1-C6烷氧基-(C1-C6)烷基、R3R3N-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷氧基、氟-(C2-C5)烷?；?、鹵素、氰基、-OR5、R6、-COR5、-NR5R5、-COOR5、-S(O)mR6、-SO2NR5R5、-CONR5R5、-NR5SO2R6或NR5COR6所取代，在氮原子上任選被C1-C6烷氧基-(C1-C6)烷基、R3R3N-(C2-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、氟-(C2-C5)烷?；?、R6、-COR5、-COOR5、-S(O)mR5、-SO2NR5R5或-CONR5R5取代。
R3為氫、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基或苯基；R4為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基或苯基；R5為氫、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基或het；R6為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基或het；R7和R8以及與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、高哌啶基、高哌嗪基或四氫異喹啉基，其各自任選在環(huán)碳原子上被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)、R3R3N-(C1-C6)烷基、氟-(C1-C6)烷基、-CONR3R3、-COOR3或C2-C5烷酰基所取代，在與環(huán)氮原子不相鄰的環(huán)碳原子上任選被氟-(C1-C6)烷氧基、鹵素、-OR3、氰基、-S(O)mR4、-NR3R3、-SO2NR3R3、-NR3COR4或-NR3SO2R4所取代，所述哌嗪-1-基和高哌嗪-1-基在不與A相連的環(huán)氮原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C2-C6烷基)、R3R3N-(C2-C6)-烷基、氟-(C1-C6)烷基、C2-C5烷酰基、-COOR4、C3-C8環(huán)烷基、-SO2R4、-SO2NR3R3或-CONR3R3所取代；或者，R7為H、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基或芐基，并且R8為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、芐基、氟-(C1-C6)烷基、-CONR3R3、-COOR4、-(C2-C5)烷?；?SO2NR3R3；m為0、1或2；在R5和R6定義中所用的術(shù)語“het”指C-連接的吡咯基、咪唑基、三唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、喹唑啉基、2，3-二氮雜萘基、苯并噁唑基或喹喔啉基，各自任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氰基或鹵素所取代。
WO-A-01/60835公開了下式化合物或其可藥用鹽或溶劑化物， 其中R1為氫、C1-C6烷基或C3-C7環(huán)烷基，各自任選被1個(gè)或2個(gè)取代基所取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自羥基、芴基、苯基和萘基，所述苯基和萘基任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基所取代；A為一個(gè)鍵或C1-C6亞烷基；R2為(i)氫、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基或萘基，所述C3-C7環(huán)烷基、苯基和萘基任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、氨基-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷氧基、C2-C5烷?；?、鹵素、-OR3、氰基、-COOR3、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)mR4、-NR3R3、-SO2NR3R3、-CONR3R3、-NR3COR4或-NR3SO2R4取代，前提是當(dāng)A為一個(gè)鍵時(shí)，R2不為氫；或(ii)當(dāng)A為C2-C6亞烷基時(shí)，R2為-NR3R3、-OR3、-COOR3、-OCOR4、-SO2R4、-CN、-SO2NR3R3、-NR3SO2R4、-NR3COR4或-CONR3R3；或(iii)C-連接的4-11元單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)，所述雜環(huán)具有1-4個(gè)環(huán)氮原子或者具有1-2個(gè)環(huán)氮原子和1個(gè)環(huán)氧原子或1個(gè)環(huán)硫原子，其任選在碳原子上被氧、C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、氨基-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷氧基、氟-(C2-C5)-烷?；?、鹵素、氰基、-OR5、R6、-COR5、-NR5R5、-COOR5、-S(O)mR6、-SO2NR5R5、-CONR5R5、-NR5SO2R5或-NRSCOR6取代，在氮原子上任選被C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、氨基-(C2-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、氟-(C2-C5)-烷酰基、R6、-COR5、-COOR6、-SO2R6、-SO2NR5R5或-CONR5R5取代，或(iv)當(dāng)A為C2-C6亞烷基，R2為N-連接的氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、嗎啉基、四氫異喹啉基、哌啶基或哌嗪基時(shí)，各自在碳原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、氨基-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷氧基、C2-C5烷?；Ⅺu素、-OR3、氰基、-COOR3、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)mR4、-NR3R3、-SO2NR3R3、-CONR3R3、-NR3COR4或-NR3SO2R4所取代，其中所述哌嗪基在氮原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、氨基-(C2-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、C2-C5烷?；?COOR4、C3-C7環(huán)烷基、-SO2R4、-SO2NR3R3或-CONR3R3取代；各個(gè)R3獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、苯基或吡啶基；R4為C1-C6烷基或苯基；R5為氫、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基或het；R6為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基或het；m為0，1或2；R7為氫、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、苯基、萘基、氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或het，所述氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基和哌啶-4-基任選被C1-C6烷基取代；R8為H或C1-C6烷基；在R5、R6和R7定義中所用的“het”意指C-連接的吡咯基、咪唑基、三唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、喹唑啉基、2，3-二氮雜萘基、苯并噁唑基或喹喔啉基，各自可任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氰基或鹵素取代。
WO-A-02/00676公開了下式化合物或其可藥用鹽或溶劑化物， 其中R1為(i)氫，(ii)任選被1-2個(gè)取代基所取代的C1-C6烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自苯基、萘基和芴基，所述苯基、萘基和芴基任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基取代，或(iii)芴基；R2為H或C1-C6烷基；R3和R4與它們連接的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基或高哌嗪基，其各自在環(huán)氮原子或環(huán)碳原子上任選被C1-C6烷基或C3-C8環(huán)烷基取代，在與環(huán)氮原子不相鄰的環(huán)碳原子上任選被-NR6R7或-OR9取代；或者，R3為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或芐基，所述C1-C6烷基任選被C3-C8環(huán)烷基取代，并且R4為(a)C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或R15，所述C1-C6烷基任選被R15取代，或(b)-(C2-C6亞烷基)-R8，或(c)-(C1-C6亞烷基)-R13；R5為-CH2OH或-CONR14R14；R6和R7各自獨(dú)立地為H或C1-C6烷基，或者這兩個(gè)基團(tuán)和與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基或哌啶基，所述氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基和哌啶基任選被C1-C6烷基取代；R8為(i)氮雜環(huán)丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、嗎啉-4-基、哌嗪-1-基、高哌啶-1-基、高哌嗪-1-基或四氫異喹啉-1-基，其各自在環(huán)碳原子上任選被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、R9R9N-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)烷基、-CONR9R9、-COOR9或C2-C5烷?；〈⑶以谂c環(huán)氮原子不相鄰的環(huán)碳原子上任選被氟-(C1-C6)-烷氧基、鹵素、-OR9、氰基、-S(O)mR10、-NR9R9、-SO2NR9R9、-NR9COR10或-NR9SO2R10取代，另外，所述哌嗪-1-基和高哌嗪-1-基在不與C2-C6亞烷基相連的環(huán)氮原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C2-C6)-烷基、R9R9N-(C2-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、C2-C5烷?；?COOR10、C3-C8環(huán)烷基、-SO2R10、-SO2NR9R9或-CONR9R9取代，或(ii)-NR11R12；R9為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或苯基；R10為C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或苯基；R11為C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或芐基；R12為C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、芐基、氟-(C1-C6)-烷基、-CONR9R9、-COOR10、-COR10、-SO2R10或-SO2NR9R9，所述C1-C6烷基任選被苯基取代；R13為苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，各個(gè)基團(tuán)任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基取代；R14為H或任選被環(huán)丙基取代的C1-C6烷基；R15為氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、高哌啶-3-基或高哌啶-4-基，各自任選被R13、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或芐基取代；m為0、1或2；X為-CH2-或-CH2CH2-；并且，Y為CO、CS、SO2或C＝N(CN)。
WO-A-01/94368公開了下式化合物或其可藥用鹽或溶劑化物，
其中R1為氫、C1-C6烷基或芴基，所述C1-C6烷基任選被1-2個(gè)取代基取代，所述取代基各自獨(dú)立地選自苯基和萘基，所述苯基和萘基任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素或氰基取代；(A)R2為H或C1-C6烷基；R15為H或C1-C6烷基；X為(i)直鏈C2-C3亞烷基，其任選被C1-C6烷基或C3-C8環(huán)烷基取代，或(ii)式-(CH2)n-W-(CH2)p基團(tuán)，其中W為任選被C1-C6烷基取代的C5-C7環(huán)亞烷基，n為0或1，p為0或1，或(B)R15為H或C1-C6烷基，R2和X以及與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、高哌啶-3-基或高哌啶-4-基，各自任選被C1-C6烷基取代，或(C)R2為H或C1-C6烷基，R15和X以及與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、高哌啶-3-基或高哌啶-4-基，各自任選被C1-C6烷基取代；R3和R4以及與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基或高哌嗪基，各自在環(huán)氮原子或環(huán)碳原子上任選被C1-C6烷基或C3-C8環(huán)烷基取代，在不與環(huán)氮原子相連的環(huán)碳原子上任選被-NR6R7取代；或者，R3為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或芐基；R4為(a)氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、高哌啶-3-基或高哌啶-4-基，各自任選被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、芐基或het取代，或
(b)-(C2-C6亞烷基)-R8，(c)-(C1-C6亞烷基)-R13，或(d)C1-C6烷基或C3-C8環(huán)烷基；R5為CH2OH或CONR14R14；R6和R7各自獨(dú)立地為H或C1-C6烷基，或者這兩個(gè)基團(tuán)以及與它們相連的氮原子一起組成氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基或哌啶基，所述氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基和哌啶基任選被C1-C6烷基取代；R8為(i)氮雜環(huán)丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、嗎啉-4-基、哌嗪-1-基、高哌啶-1-基、高哌嗪-1-基或四氫異喹啉-1-基，各自在環(huán)碳原子上任選被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C1-C6)-烷基、R9R9N-(C1-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、-CONR9R9、-COOR9或C2-C5烷酰基取代；各自在不與環(huán)氮原子相連的環(huán)碳原子上任選被氟-(C1-C6)-烷氧基、鹵素、-OR9、氰基、-S(O)mR10、-NR9R9、-SO2NR9R9、-NR9COR10或-NR9SO2R10取代，所述哌嗪-1-基和高哌嗪-1-基在不與C2-C6亞烷基相連的環(huán)氮原子上任選被C1-C6烷基、苯基、C1-C6烷氧基-(C2-C6)-烷基、R9R9N-(C2-C6)-烷基、氟-(C1-C6)-烷基、C2-C5烷酰基、-COOR10、C3-C8環(huán)烷基、-SO2R10、-SO2NR9R9或-CONR9R9取代，或(ii)NR11R12；R9為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或苯基；R10為C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或苯基；R11為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或芐基；R12為氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、芐基，氟-(C1-C6)-烷基、-CONR9R9、-COOR10、C2-C5烷酰基或-SO2NR9R9；R13為(a)苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，各自任選被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-(C1-C3亞烷基)-(C1-C6烷氧基)、鹵素、氰基、-(C1-C3亞烷基)-CN、-CO2H、-(C1-C3亞烷基)-CO2H、-CO2(C1-C6烷基)、-(C1-C3亞烷基)-CO2(C1-C6烷基)、-(C1-C3亞烷基)-NR14R14、-CONR14R14或-(C1-C3亞烷基)-CONR14R14取代，或(b)氮雜環(huán)丁烷-2-基、氮雜環(huán)丁烷-3-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、高哌啶-2-基、高哌啶-3-基或高哌啶-4-基，各自任選被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、苯基、芐基或het取代；
R14為H或C1-C6烷基，其任選被環(huán)丙基取代；m為0、1或2；Y為CO、CS、SO2或C＝N(CN)；在R4和R13定義中所用的“het”為C-連接的4-6元、具有1-4個(gè)氮環(huán)雜原子或者具有1-2個(gè)氮環(huán)雜原子和1個(gè)氧或1個(gè)硫環(huán)雜原子的雜環(huán)，它們?nèi)芜x被C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環(huán)烷氧基、羥基、氧或鹵素取代。
用于本發(fā)明優(yōu)選的選擇性腺苷A2a-受體激動(dòng)劑包括N-({9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(甲氧基甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9H-嘌呤-2-基}甲基)-2-甲基-1-丙磺酰胺(WO-A-00/23457的實(shí)施例15)；順式-(2R，3R，4S，5R)-2-(6-((2，2-二苯基乙基)氨基)-2-{[(4-異丙基環(huán)己基)氨基]甲基}-9H-嘌呤-9-基)-5-(甲氧基甲基)四氫-3，4-呋喃二醇和反式-(2R，3R，4S，5R)-2-(6-((2，2-二苯基乙基)氨基)-2-{[(4-異丙基環(huán)己基)氨基]甲基}-9H-嘌呤-9-基)-5-(甲氧基甲基)四氫-3，4-呋喃二醇(WO-A-00/23457中的實(shí)施例17)N-({9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9H-嘌呤-2-基]甲基}-2-甲基-1-丙磺酰胺(WO-A-01/27130的實(shí)施例1)；(2S，3S，4R，5R)-5-(6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-2-{[(異丙基磺酰基)氨基]甲基}-9H-嘌呤-9-基)-N-乙基-3，4-二羥基四氫-2-呋喃甲酰胺(WO-A-01/27131的實(shí)施例3)；9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺(WO-A-00/77018的實(shí)施例1)6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺(WO-A-01/60835的實(shí)施例1)N-({9-[(4R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9H-嘌呤-2-基}甲基)-N′-[2-(二異丙基氨基)乙基]脲(WO-A-02/00676的實(shí)施例1)；和
6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺(WO-A-01/94368的實(shí)施例8和35)；及上述化合物的可藥用鹽和溶劑化物。
本發(fā)明特別優(yōu)選的選擇性腺苷A2a-受體激動(dòng)劑包括9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺和6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺及其可藥用鹽和溶劑化物。最優(yōu)選的A2a-受體激動(dòng)劑為6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺及其可藥用鹽和溶劑化物。
用于本發(fā)明的合適的抗膽堿能試劑包括異丙托品(ipratropium)鹽和氧托品(oxitropium)鹽及其溶劑化物。
噻托品鹽(參見EP418716B1)具有式(1.1)結(jié)構(gòu) 其中X-是生理上可接受的陰離子。
異丙托品鹽(參見EP309464B1)具有下列式(1.2)結(jié)構(gòu)
其中X-為生理上可接受的陰離子。
氧托品鹽(參見EP579615B1)具有式(1.3)結(jié)構(gòu) 其中，X為生理上可接受的陰離子。
合適的異丙托品鹽和氧托品鹽形式的實(shí)例包括氫氟酸鹽，F(xiàn)-；鹽酸鹽，Cl-；氫溴酸鹽，Br-；氫碘酸鹽，I-；甲磺酸鹽，CH3S(＝O)2O-；乙磺酸鹽，CH3CH2S(＝O)2O-；甲基硫酸鹽，CH3OS(＝O)2O-；苯磺酸鹽，C6H5S(＝O)2O-和對甲苯磺酸鹽，4-CH3-C6H5S(＝O)2O-。其中優(yōu)選氫溴酸鹽。
在本發(fā)明中，選擇性A2a受體激動(dòng)劑與抗膽堿能化合物的優(yōu)選的特異性組合包括9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物和異丙托品鹽或其溶劑化物的組合；6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物與異丙托品鹽或其溶劑化物的組合；9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物和氧托品鹽或其溶劑化物的組合；6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物與氧托品鹽或其溶劑化物的組合。
用于本發(fā)明的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑或抗膽堿能試劑可以任選地以可藥用鹽形式或其溶劑化物的形式應(yīng)用。這樣的鹽可以是酸加成鹽或堿鹽。
合適的酸加成鹽從形成非毒性鹽的酸得到，其例子為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、琥珀酸鹽、蔗糖鹽(saccharate)、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽。
合適的堿鹽由形成非毒性鹽的堿得到，其例子為鈉鹽、鉀鹽、鋁鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽和二乙醇胺鹽。
關(guān)于合適鹽的綜述參見Berge等，J.Pharm.Sci.，66，1-19，1977。
用于本發(fā)明的選擇性A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的可藥用溶劑化物或其鹽包括其水合物。
本發(fā)明的選擇性A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑可以一種或多種多晶型形式存在。
本發(fā)明的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑可以含有一個(gè)或多個(gè)不對稱碳原子，因此存在兩種或多種立體異構(gòu)體。當(dāng)這樣的化合物含有烯基或炔基時(shí)，還可以存在順式/反式(或Z/E)異構(gòu)形式。本發(fā)明包括所述化合物的各個(gè)立體異構(gòu)體，當(dāng)合適時(shí)，還包括它們的互變異構(gòu)形式，以及包括它們的混合物。
非對映異構(gòu)體或順式與反式異構(gòu)體的分離可以按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行，例如通過分級(jí)結(jié)晶、色譜或H.P.L.C.分離本發(fā)明化合物的立體異構(gòu)體混合物或合適的鹽或其衍生物。本發(fā)明化合物的各個(gè)對映異構(gòu)體也可以由相應(yīng)光學(xué)純的中間體制備，或者通過拆分制備，例如應(yīng)用合適的手性載體(chiralsupport)對相應(yīng)的消旋體進(jìn)行H.P.L.C.，或者在合適時(shí)通過分級(jí)結(jié)晶非對映異構(gòu)體鹽制備，該鹽通過相應(yīng)的消旋體與合適的光學(xué)活性酸或堿進(jìn)行反應(yīng)得到。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的所有合適的同位素變異體(isotopic variations)。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的同位素變異體的定義為其中至少一個(gè)原子被另一個(gè)具有相同原子序數(shù)但其原子質(zhì)量不同于通常在自然界中發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量的原子取代?？梢該胶系奖景l(fā)明化合物及其可藥用鹽的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、磷、硫、氟和氯的同位素，例如分別為2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36CI。本發(fā)明化合物及其可藥用鹽的某些同位素變異體例如摻入放射性同位素(如3H或14C)的同位素變異體能夠用于藥物和/或底物(substrate)組織分布研究。氚(3H)和碳-14(14C)同位素是特別優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀字苽洌⑶胰菀讬z測。另外，用同位素(例如氘(即2H))取代的化合物具有某些治療優(yōu)點(diǎn)，這是因?yàn)樗鼈兏叩拇x穩(wěn)定性，例如，體內(nèi)半衰期延長或者劑量降低，因此在某些情況下是優(yōu)選的。
可以用本發(fā)明的組合物治療的疾病種類包括但不限于哮喘、慢性或急性支氣管收縮、慢性支氣管炎、小氣管阻塞、氣腫(emphysema)、慢性阻塞性肺病(COPD)、伴有慢性支氣管炎、肺氣腫或呼吸困難的COPD和以不可逆進(jìn)行性(progressive)氣道阻塞為特征的COPD。
哮喘可以用本發(fā)明的治療試劑組合治療的一種最重要的呼吸系統(tǒng)疾病為哮喘，哮喘是一種全球日益增加的慢性疾病，其特征在于間歇性可逆性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性和發(fā)炎。哮喘的病因仍然有待確定，但哮喘最通常的病理學(xué)表現(xiàn)為氣道炎癥，其在輕度哮喘患者的氣道中非常顯著。這種炎癥驅(qū)使起因于血漿蛋白外滲的反射性氣道發(fā)作、呼吸困難和支氣管收縮。支氣管活組織檢查和灌洗試驗(yàn)(lavage studies)明顯表明哮喘涉及肥大細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和和T-淋巴細(xì)胞滲入到患者氣道中。特異反應(yīng)性哮喘的支氣管肺泡(Bronchoalveolar)顯示白介素(IL)-3、IL-4、IL-5和粒性白細(xì)胞/巨噬細(xì)胞-菌落刺激因子(GM-CSF)的活化，從而表明輔助T-細(xì)胞2(Th-2)類T-細(xì)胞群的存在。
本發(fā)明治療試劑的組合能夠用于治療特應(yīng)性和非特應(yīng)性哮喘。術(shù)語“特應(yīng)性”意指趨向發(fā)展對抗普通環(huán)境抗原的I型(直接)高靈敏度反應(yīng)的遺傳傾向。最常見的臨床表現(xiàn)為過敏性鼻炎，而在支氣管哮喘中，特應(yīng)性皮炎和食物過敏反應(yīng)發(fā)生的頻率較低些。因此，此處所用的術(shù)語“特應(yīng)性哮喘”與“過敏性哮喘”同義，即支氣管哮喘是過敏人群的過敏性表現(xiàn)。此處所用的術(shù)語“非特應(yīng)性哮喘”意指所有其它哮喘，特別是原發(fā)性或“真性(true)”哮喘，其被多種因素引起，這些因素包括劇烈運(yùn)動(dòng)、刺激性顆粒和心理性應(yīng)激等。
慢性阻塞性肺病(COPD)本發(fā)明治療試劑的組合還能用于治療COPD或COAD，包括慢性支氣管炎、肺氣腫或與之有關(guān)的呼吸困難。COPD的特征在于可逆性差的進(jìn)行性氣道阻塞。慢性支氣管炎常常伴有在大軟骨性氣道粘膜下層的粘液分泌腺的增生和肥大。杯狀細(xì)胞增生、粘膜層和粘膜下層炎癥細(xì)胞浸潤、水腫、纖維化、粘液塞(mucus plugs)和增加的平滑肌均在末端和呼吸細(xì)支氣管中發(fā)現(xiàn)。已知這些小氣道是氣道阻塞的主要部位。肺氣腫的特征在于肺泡壁損傷和肺彈性喪失。許多危險(xiǎn)因素還已經(jīng)被鑒定為與COPD的發(fā)生有關(guān)。已經(jīng)完全確認(rèn)吸煙與COPD有關(guān)。其它危險(xiǎn)因素包括接觸煤塵和各種遺傳因子。參見Sandford等.，“Genetic risk factors for chronic obstructivepulmonary disease，”，Eur.Respir.J.10 1380-1391，1997。COPD的發(fā)病率增加，其意味著工業(yè)國家人群的巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。COPD本身在臨床上還出現(xiàn)許多變化從不喪失勞動(dòng)能力的單純性慢性支氣管炎至患有慢性呼吸衰竭的處于嚴(yán)重喪失勞動(dòng)能力的患者。
與哮喘一樣，COPD的特征在于氣道炎癥，但在患者支氣管肺泡灌洗液(lavag fluid)和唾液中發(fā)現(xiàn)的炎癥細(xì)胞是中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，而不是嗜酸性細(xì)胞。在COPD中還發(fā)現(xiàn)炎癥介質(zhì)的水平升高，這些炎癥介質(zhì)包括IL-8、LTB4和TNF-α，，并且還發(fā)現(xiàn)T-淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤至這些患者的支氣管表面上皮和上皮下膜。通過應(yīng)用β-激動(dòng)劑和抗膽堿能支氣管擴(kuò)張?jiān)噭┠軌蚓徑釩OPD患者的癥狀，但疾病的進(jìn)展不會(huì)改變。COPD已經(jīng)通過應(yīng)用茶堿治療，但沒有獲得太多成功，部分原因在于其存在毒副作用。在COPD的治療中，類固醇物質(zhì)也顯示不是令人滿意的治療試劑，因?yàn)檫@些物質(zhì)相對不能有效地用作抗炎試劑。
因此，本發(fā)明試劑在治療COPD及其相關(guān)疾病(包括阻塞性氣道疾病)中的應(yīng)用為現(xiàn)有技術(shù)作出了顯著的進(jìn)步。本發(fā)明不限于任何具體的作用模式，也不限于任何理論或假說，因?yàn)閼?yīng)用本發(fā)明治療試劑的組合已經(jīng)獲得了需要的治療目標(biāo)。
支氣管炎和支氣管擴(kuò)張如上所述，本發(fā)明治療試劑的組合具有獨(dú)特的多種抑制活性，它們能夠用于治療各種類型的支氣管炎，不管其病因?qū)W和發(fā)病機(jī)理如何，這些支氣管炎的例子包括急性支氣管炎，其病程短但嚴(yán)重，由寒冷、吸入刺激性物質(zhì)或急性感染引起；急性支氣管炎形式的卡他性支氣管炎，伴有大量粘液膿性物質(zhì)釋放；慢性支氣管炎，是一種長期持續(xù)形式的支氣管炎，在無癥狀階段后多多少少有明顯的復(fù)發(fā)傾向，其由急性支氣管炎或慢性一般性疾病的反復(fù)發(fā)作所引起，特征在于咳嗽，吐痰過多或過少，肺組織的繼發(fā)性變化；干性支氣管炎，特征在于tough唾液分泌不足；傳染性哮喘支氣管炎，其顯著癥狀為發(fā)展支氣管痙攣癥狀，然后在哮喘患者中產(chǎn)生呼吸道感染；增生性支氣管炎，其屬于一種帶有排痰性咳的支氣管炎。
本發(fā)明治療試劑的組合能夠用于治療特應(yīng)性哮喘或非特應(yīng)性哮喘、COPD或其它慢性炎癥氣道疾病，這可通過應(yīng)用本領(lǐng)域已知的許多模型證實(shí)和說明，所述模型可以抑制氣道的反射事件，其中包括下述的血漿外滲和支氣管痙攣模型。
支氣管擴(kuò)張劑活性-cAMP不僅涉及平滑肌松弛，而且對氣道平滑肌增生產(chǎn)生整體的抑制影響，這兩種作用可能是由本發(fā)明的組分活化A2a受體所引起。氣道平滑肌肥大和增生可通過cAMP調(diào)節(jié)，這些狀況是慢性哮喘的一般形態(tài)學(xué)特征。
體外支氣管痙攣解痙活性-本發(fā)明治療試劑的組合可以引起豚鼠氣管平滑肌松弛，關(guān)于這一點(diǎn)可以在下述試驗(yàn)方法中證明用硫噴妥鈉(100mg/kgi.p.)殺死豚鼠(350-500g)，分離出氣管，切取2-3cm長的一段。在不同的軟骨片(alternate cartilage plates)處沿橫切面把氣管橫切，從而得到3-5mm厚的組織環(huán)。棄去近側(cè)環(huán)和遠(yuǎn)側(cè)環(huán)。把各個(gè)環(huán)豎直放置于不銹鋼載體上，其中之一固定在器官浴槽底部，而另一個(gè)系列等長傳感器上。把這些環(huán)浸泡在37℃的Krebs溶液(組成μMNaHCO325；NaCl 113；KCl 4.7；MgSO4·7H2O1.2；KH2PO41.2；CaCl22.5；葡萄糖11.7)中，通入O2/CO2(95∶5，v/v)。以此方式制備的環(huán)用電場刺激收縮。為了確定解痙劑活性，把本發(fā)明試劑的測試組合物溶解于生理鹽水中，以5m的間隔按遞增的量加入，以提供累積的量效曲線。
在上述試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?dāng)濃度為0.001-1.0μM時(shí)，本發(fā)明治療試劑的組合抑制豚鼠氣管環(huán)的電場刺激收縮。
人支氣管的舒張-在癌癥手術(shù)期間，獲得切除3天后的人肺樣品。切取小支氣管(內(nèi)徑為2-5mm)，切成片段，置于2ml液氮儲(chǔ)存的安瓿中，所述安瓿預(yù)先盛有胎牛血清(FCS)，其含有1.8M二甲亞砜(DMSO)和0.1M蔗糖作為低溫防護(hù)劑。把該安瓿放置于聚苯乙烯盒(11×11×22cm)中，在保持在-70℃的冷凍庫中以約0.6℃/分鐘的平均冷卻速率緩緩冷凍。經(jīng)3-15小時(shí)后，把該安瓿轉(zhuǎn)移至液氮(-196℃)中儲(chǔ)存直至使用。在使用前，把該組織在-70℃下暴露30-60分鐘，然后將該安瓿放置在37℃的水浴中解凍2.5分鐘。然后，在37℃下，把所述支氣管片斷放置在含有Krebs-Henseleit溶液(uMNaCl 118，KCl 4.7，MgSO41.2，CaCl21.2，KH2PO41.2，NaHCO325，葡萄糖11，EDTA 0.03)的碟中以清洗該支氣管片斷，切成環(huán)，再懸浮于10ml器官浴槽中，用于在約1g預(yù)加載情況下進(jìn)行等長張力記錄。通過應(yīng)用電場刺激使張力進(jìn)一步增加，已知所述電場刺激能夠誘導(dǎo)氣管樣品的神經(jīng)活化，并且通過釋放乙酰膽堿和其它神經(jīng)遞質(zhì)產(chǎn)生張力。通過累積添加產(chǎn)生量效曲線，添加各個(gè)濃度直至之前的濃度已經(jīng)產(chǎn)生最大效應(yīng)。在量效曲線末端添加?jì)胨趬A(300μM)以誘導(dǎo)支氣管環(huán)的完全松弛。該效應(yīng)被認(rèn)為是達(dá)到100％松弛。
在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，本發(fā)明治療試劑的組合通常在0.001-1.0μM的濃度范圍對人支氣管環(huán)制品產(chǎn)生濃度相關(guān)性松弛作用，在優(yōu)選的方案中，產(chǎn)生活性的濃度范圍是5.0nM至500nM。
抑制辣椒辣素誘導(dǎo)的支氣管收縮-在實(shí)驗(yàn)之前讓雄性Dunkin-Hartley豚鼠(400-800g)自由進(jìn)食飲水，用苯巴比妥鈉(100mg/kg i.p.(腹腔給藥))麻醉。用加熱襯墊在37℃下飼養(yǎng)動(dòng)物，用直腸溫度計(jì)控制溫度，通過氣管插管(約8ml/kg，1Hz)通入空氣和氧氣(45∶55v/v)的混合氣體。用連接至壓差傳感器的呼吸速度描記器在氣管上監(jiān)測換氣情況，其中壓差傳感器與呼吸泵相符。通過胸腔插管用壓差傳感器直接監(jiān)測胸腔中的壓力變化，從而可以測定和顯示氣管和胸腔之間的壓力差異。從這些氣流和跨肺壓力的測定，用數(shù)字電子呼吸分析儀計(jì)算各個(gè)呼吸周期的氣道阻力(R1cmH2O/l/s)和順應(yīng)性(compliance)(Cddyn)。應(yīng)用壓力傳感器從頸動(dòng)脈測定血壓和心率。
當(dāng)基本阻力和順應(yīng)性數(shù)值穩(wěn)定時(shí)，通過靜脈快速注射辣椒辣素誘導(dǎo)支氣管收縮的急性發(fā)作。把辣椒辣素溶解于100％乙醇中，用磷酸鹽緩沖液稀釋。施用本發(fā)明治療試劑的測試組合物直至對辣椒辣素的反應(yīng)穩(wěn)定為止，經(jīng)計(jì)算為在10分鐘的間隔2-3次給藥之后。在氣管內(nèi)或十二直腸內(nèi)滴注或靜脈快速注射進(jìn)行1-8小時(shí)后評估支氣管收縮的逆轉(zhuǎn)。把支氣管解痙攣活性表達(dá)為輸注辣椒辣素后起始最大阻力(RD)的抑制百分率。ED50值代表引起辣椒辣素誘導(dǎo)的阻力增加的減少50％時(shí)的劑量。作用時(shí)間定義為支氣管收縮降低50％或更多的分鐘時(shí)間。對血壓(BP)和心率(HR)的作用用ED20值表征，即在給藥5分鐘后BP和HR降低達(dá)20％時(shí)的劑量。
在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，本發(fā)明治療試劑的組合在0.001-0.1mg/kg i.t.(氣管內(nèi)投藥法)發(fā)揮支氣管擴(kuò)張活性。另外，以i.t.途徑給藥的組合對支氣管痙攣發(fā)揮至少相加的抑制作用，各個(gè)組分單獨(dú)能夠抑制所觀測的對照反應(yīng)的50％以上。
LPS-誘導(dǎo)的肺中性白細(xì)胞增多-肺中中性白細(xì)胞的募集和活化被認(rèn)為是COPD和嚴(yán)重哮喘的重要病理學(xué)特征。因此，在動(dòng)物中抑制這些終端(endpoints)的一個(gè)或多個(gè)對應(yīng)用本發(fā)明提供了證據(jù)支持。
把雄性Wistar-Albino大鼠(150-250g)或雄性Dunkin-Hartley豚鼠(400-600g)預(yù)先用測試物品單獨(dú)或組合在簡單全麻醉(brief generalanaesthesia)下以吸入或氣管內(nèi)(i.t.)滴注法預(yù)處理。施用化合物1-24小時(shí)后，用細(xì)菌粘多糖(LPS)吸入氣霧劑攻擊動(dòng)物使足以誘導(dǎo)隨后1-24小時(shí)明顯的肺中性白細(xì)胞增多。通過支氣管洗滌物中的細(xì)胞計(jì)數(shù)或者通過確定肺洗滌物或組織中的中性白細(xì)胞產(chǎn)物評估中性白細(xì)胞增多。在該實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，本發(fā)明的治療試劑在0.0001-0.1mg/kg i.t.下產(chǎn)生抗炎活性。出人意外地，組合i.t.給藥產(chǎn)生至少相加的抗炎作用，盡管其中的組分之一本身不產(chǎn)生明顯的抗炎作用。另外，與高劑量的組分之一的抗炎效果相當(dāng)?shù)男Ч梢酝ㄟ^應(yīng)用低劑量的本發(fā)明試劑組合觀察到，因此使全身的毒副作用降到最低。
過敏豚鼠測試-一個(gè)測試用于評價(jià)本發(fā)明治療試劑對下列疾病的治療效果呼吸困難癥狀和支氣管痙攣，即呼吸困難或吃力，肺阻力增加；炎癥癥狀，即肺中性白細(xì)胞增多和嗜酸性細(xì)胞增多，測試用動(dòng)物為Dunkin-Hartley豚鼠(400-600g體重)。
此測試中應(yīng)用的V級(jí)卵白蛋白(EA)、結(jié)晶和冷凍干燥的氫氧化鋁和美吡拉敏馬來酸鹽均可市售得到。在內(nèi)部容積為10×6×4英寸的澄清塑料盒中進(jìn)行攻擊和隨后的呼吸讀數(shù)。盒子的端部與主體部分是分開的。在應(yīng)用時(shí)，這兩者用夾具緊緊夾在一起，通過一個(gè)軟橡膠墊圈維持這兩個(gè)腔室之間的氣密封條。通過腔室終端的中心經(jīng)氣密封條插入噴霧器，各個(gè)盒的終端還具有出口。把呼吸速度描記器插入至盒子的一端，將其聯(lián)結(jié)至體積-壓力傳感器上，所述傳感器通過合適的連接器與dynograph相連。當(dāng)霧化抗原時(shí)，出口是打開的，呼吸速度描記器與腔室相分離。然后關(guān)閉出口，呼吸速度描記器和腔室在呼吸模式記錄期間連通。為了攻擊，把2ml 3％的抗原生理鹽水溶液放置于各個(gè)霧化器中，在10psi和8l/m的流速下從小隔膜泵的空氣產(chǎn)生氣霧。
通過皮下和i.p.注射1ml含有在生理鹽水中的1mg EA和200mg氫氧化鋁的懸浮液使豚鼠致敏。在致敏12～24天后使用這些動(dòng)物。為了消除反應(yīng)的組胺組分，在氣霧劑攻擊之前用2mg/kg美吡拉敏(mepyarmine)以i.p.方式預(yù)處理豚鼠30分鐘。然后讓所述豚鼠接觸準(zhǔn)確體積為1ml的生理鹽水中的3％EA氣溶膠。隨后，在死后1-48小時(shí)之后確定是否有肺炎。根據(jù)呼吸記錄測定連續(xù)呼吸困難的持續(xù)時(shí)間。
本發(fā)明治療試劑的測試組合物通常在攻擊之前0.5-4小時(shí)之前以i.t.或氣霧劑方式給藥。把這些化合物的組合溶解于生理鹽水或生物兼容性溶劑中?；衔锏幕钚愿鶕?jù)其降低呼吸困難和支氣管痙攣癥狀的輕重和時(shí)間和/或肺炎輕重的能力來測定，并將其與載體處理的對照組進(jìn)行比較。本發(fā)明治療試劑組合的試驗(yàn)用一系列劑量評價(jià)，算出ED50，即抑制癥狀持續(xù)時(shí)間50％時(shí)的劑量(mg/kg)。
抗炎活性-本發(fā)明治療試劑的組合的抗炎活性通過抑制嗜酸性細(xì)胞或中性白細(xì)胞活化作用來證明。在此測試中，在含有0.06-0.47×109L-1的嗜酸性細(xì)胞的非特應(yīng)性志愿者中收集血樣。把靜脈血收集至含有5ml檸檬酸三鈉(3.8％，pH 7.4)的離心管中。
用磷酸緩沖鹽(PBS，不含鈣和鎂)稀釋(1∶1，v∶v)抗凝后的血，將其分層至在50ml離心管中的15ml等滲Percoll(密度1.082-1.085g/ml，pH 7.4)上。離心(30分鐘，1000×g，20℃)后，把血漿/Percoll界面的單核細(xì)胞小心抽出，棄去。
把中性白細(xì)胞/嗜酸性細(xì)胞/紅細(xì)胞顆粒(體積約5ml)輕輕重新懸浮于35ml等滲氯化銨溶液(NH4Cl，155mM；KHCO3，10mM；EDTA，0.1mM；0-4℃)中。15分鐘后，在含有胎牛血清(2％，F(xiàn)CS)的PBS中洗滌細(xì)胞2次(10分鐘，400×g，4℃)。
應(yīng)用磁性細(xì)胞分離系統(tǒng)(magnetic cell separation system)分離嗜酸性細(xì)胞和中性白細(xì)胞。該系統(tǒng)能夠按照表面標(biāo)記分離懸浮液中的細(xì)胞，其含有永久磁鐵，在該永久磁鐵中含有一根柱，柱中含有可磁化鋼基質(zhì)。在使用前，用PBS/FCS平衡該柱1小時(shí)，然后在逆行基底(retrograde basis)上通過20ml注射器用冰冷的PBS/FCS洗滌。把21G皮下注射器針連接于柱底部，讓1-2ml冰冷緩沖液經(jīng)該針流出。
離心粒細(xì)胞后，抽出上清液，然后用100μl磁粉(抗-CD16單克隆抗體，結(jié)合至超順磁性顆粒)輕輕重新懸浮細(xì)胞。把嗜酸性細(xì)胞/中性白細(xì)胞/抗-CD16磁粉混合物在冰上孵育40分鐘，然后用冰冷的PBS/FCS稀釋至5ml。把細(xì)胞懸浮液緩緩引入到柱頂部，打開龍頭使細(xì)胞緩緩流入到鋼基質(zhì)中。然后用PBS/FCS(35ml)洗滌該柱，將PBS/FCS小心加入到柱頂部從而不會(huì)擾亂已經(jīng)陷入到鋼基質(zhì)中的磁標(biāo)記的中性白細(xì)胞。把非標(biāo)記的嗜酸性細(xì)胞收集到50ml離心管中，洗滌(10分鐘，400×g，4℃)。把得到的顆粒重新懸浮于5ml Hank′s平衡鹽溶液(HBSS)中，以便在使用前可以評價(jià)細(xì)胞數(shù)目和純度。把分離柱去除磁性，洗脫中性白細(xì)胞部分。然后用PBS(50ml)和乙醇(絕對)洗滌柱，在4℃下保存。
用微細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)。把一滴引起溶解的溶液加入到樣品中，30秒鐘后重新計(jì)數(shù)以評估紅細(xì)胞污染。在Shandon Cytospin 2 cellspinner上制備Cytospin血涂片(100μl樣品，3分鐘，500rpm)。這些制品被污染，用光學(xué)顯微鏡確定不同的細(xì)胞數(shù)目，檢測至少500個(gè)細(xì)胞。通過排除臺(tái)盼藍(lán)評估細(xì)胞生存力。
把嗜酸性細(xì)胞或中性白細(xì)胞用HBSS稀釋，以1-10×103個(gè)細(xì)胞/孔吸移至96孔微量滴定板(MTP)中。每個(gè)孔含有200μl樣品100μl細(xì)胞懸浮液；50μl HBSS；10μl光澤精；20μl活化刺激物和20μl測試化合物。
用測試化合物或載體孵育樣品10分鐘，然后加入溶解于二甲亞砜中的活化刺激物fMLP(1-10μM)或C5a(1-100nM)，然后在緩沖液中稀釋，使所用的最高溶劑濃度為1％(100μM測試化合物)。攪拌MTP以促進(jìn)細(xì)胞與基質(zhì)混合。把MTP放置于發(fā)光計(jì)中。以20分鐘的時(shí)間同時(shí)測定各個(gè)孔的總化學(xué)螢光和時(shí)間特性(temporal profile)，結(jié)果以任意單位表示，或者以測試化合物不存在時(shí)的fMLP-誘導(dǎo)的化學(xué)螢光百分比表示。把所得結(jié)構(gòu)擬合成Hill方程式，自動(dòng)計(jì)算出IC50。
在上述測試方法中，本發(fā)明治療試劑的組合在0.0001-0.5μM的濃度下顯示活性，優(yōu)選的方案中，在0.1nM-100nM的濃度范圍具有活性。
另外，本發(fā)明治療試劑的組合物的抗炎活性還可以通過對血漿外滲入大鼠氣道的抑制來證明。在此測試方法中，取出氣管組織，測定血漿泄漏程度。此測試方法同樣涉及氣道的其它慢性炎癥，包括但不限于COPD，因此在此部分不再概述。
把Wistar大白鼠(150-200g)或Dunkin-Hartley豚鼠(450-600g)用戊巴比通鈉麻醉，插入靜脈和動(dòng)脈插管。靜脈給藥伊凡斯藍(lán)(30mg/kg)以結(jié)合血漿蛋白。10分鐘后以i.t.方式給藥測試試劑，10分鐘后以i.v.方式給藥辣椒辣素(3μg/kg)。30分鐘后，取出氣管組織，在甲酰胺中提取過夜，在620nm波長處讀取吸收度。在某些實(shí)驗(yàn)中，給藥順序顛倒，這樣在給藥伊凡斯藍(lán)和炎癥刺激物之前給藥所述化合物。
在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，本發(fā)明治療試劑的組合在0.001-0.1mg/kg的劑量以i.t.方式給藥時(shí)顯示抗炎活性。
從上可以看出，本發(fā)明治療試劑的組合能夠用于治療炎癥或阻塞性氣道疾病或其它涉及氣道阻塞的疾病。具體地說，它們能夠用于治療支氣管哮喘。
由于本發(fā)明治療試劑的組合具有抗炎活性，并且其對氣道高反應(yīng)性有影響，因此它們能夠用于治療(特別是預(yù)防性治療)阻塞性或炎性氣道疾病。因此，通過長期持續(xù)和規(guī)則給藥，本發(fā)明化合物的組合能夠預(yù)先防止由阻塞性或炎性氣道疾病引起的支氣管收縮或其它癥狀的復(fù)發(fā)。本發(fā)明化合物的組合還能夠用于控制、改善或逆轉(zhuǎn)這些疾病的基本狀態(tài)。
由于本發(fā)明治療試劑的組合具有支氣管擴(kuò)張活性，它們能夠用作支氣管擴(kuò)張劑，例如用于治療慢性或急性支氣管收縮，并且能夠用于阻塞性和炎性氣道疾病的對癥治療。
本發(fā)明用于治療的阻塞性或炎性氣道疾病的實(shí)例包括哮喘、塵肺病、慢性嗜酸性細(xì)胞性肺炎、慢性阻塞性氣道或肺疾病(COAD或COPD)和成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)，以及由其它藥物治療(例如阿斯匹林或β-激動(dòng)劑治療)引起的氣道高反應(yīng)性的加重。
本發(fā)明的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能化合物可以單獨(dú)給藥，也可以組合給藥，但通常與可藥用載體、賦形劑或稀釋劑一起給藥。
本發(fā)明的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能化合物優(yōu)選以吸入方式給藥，方便地以干粉形式(單獨(dú)給藥或者以混合物形式給藥，例如與乳糖混合)從干粉吸入器中給藥，或者以氣霧劑形式用加壓容器、泵、噴霧裝置(spray)、霧化器(優(yōu)選用電流體動(dòng)力學(xué)(electrohydrodynamics)制成細(xì)霧狀)或噴霧器(nebuliser)給藥，可以應(yīng)用或不應(yīng)用合適的推進(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫氟烷例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商標(biāo)])或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA227EA[商標(biāo)])、二氧化碳和全氟化烴例如Perflubron(商標(biāo))或其它合適氣體。對于加壓氣霧劑的情況，可以通過閥給藥定量的劑量單位。加壓容器、泵、噴霧裝置、霧化器或噴霧器可以含有活性化合物的溶液或懸浮液，例如應(yīng)用乙醇混合物(任選，乙醇水溶液)或合適試劑以分散、溶解或延長釋放，并可含有推進(jìn)劑作為溶劑，其還可以含有潤滑劑，例如脫水山梨糖醇三油酸酯。在吸入器或吹入器中使用的膠囊、水皰(blisters)和藥筒(cartridges)(例如由明膠或HPMC制成)可以配制成含有粉末混合物，所述粉末混合物為本發(fā)明化合物、合適粉末基質(zhì)(例如乳糖或淀粉)和性能改進(jìn)劑(performance modifier)(例如1-亮氨酸、甘露糖醇或硬脂酸鎂)的混合物。
在用于吸入用干粉制劑或懸浮制劑之前，本發(fā)明的化合物應(yīng)該粉碎成適合吸入給藥的粒徑(通?？紤]小于5微米)。粉碎方式可以有一系列方法，例如螺旋氣流粉碎(spiral jet milling)、流化床氣流粉碎或者應(yīng)用超臨界流體結(jié)晶方法。
如果用于通過應(yīng)用電流體動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生細(xì)粉的霧化器，每次啟動(dòng)(peractuation)的合適溶液制劑可以含有1μg-10mg本發(fā)明化合物，啟動(dòng)體積在1-100μl范圍變化。通常的制劑可以含有本發(fā)明的化合物、丙二醇、無菌水、乙醇和氯化鈉。還可以用替代溶劑替換丙二醇，例如用甘油或聚乙二醇替換丙二醇。
優(yōu)選應(yīng)用氣溶膠或干粉制劑，以便每一個(gè)預(yù)定的劑量或“噴出(puff)”含有1-4000μg本發(fā)明化合物用于給藥至患者。氣溶膠的每日總劑量為1μg-20mg，其可以單次給藥，更通常地，一天分多次給藥。
選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑與抗膽堿能試劑的優(yōu)選用量重量比(w/w)將取決于所檢測的具體組合。這是因?yàn)楦鱾€(gè)化合物的效能存在差異。醫(yī)務(wù)工作者在任何情況下將確定各個(gè)化合物的具體劑量，所述劑量將最適合于各個(gè)具體的患者，并且所述劑量將隨具體患者的年齡、體重和反應(yīng)情況而變化。
應(yīng)該理解此處關(guān)于“治療”的所有說法包括治療、緩解和預(yù)防性處理。
權(quán)利要求
1.選擇性A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑的吸入組合，條件是抗膽堿能試劑不為噻托品鹽。
2.權(quán)利要求1的組合，其中選擇性A2a受體激動(dòng)劑為在WO-A-00/23457、WO-A-00/77018、WO-A-01/27131、WO-A-01/27130、WO-A-01/60835、WO-A-02/00676或WO-A-01/94368中一般公開或具體公開的化合物。
3.權(quán)利要求2的組合，其中選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑為N-({9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(甲氧基甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9H-嘌呤-2-基}甲基)-2-甲基-1-丙磺酰胺(WO-A-00/23457的實(shí)施例15)；順式-(2R，3R，4S，5R)-2-(6-[(2，2-二苯基乙基)氨基)-2-{[(4-異丙基環(huán)己基)氨基]甲基}-9H-嘌呤-9-基)-5-(甲氧基甲基)四氫-3，4-呋喃二醇和反式-(2R，3R，4S，5R)-2-(6-[(2，2-二苯基乙基)氨基)-2-{[(4-異丙基環(huán)己基)氨基]甲基}-9H-嘌呤-9-基)-5-(甲氧基甲基)四氫-3，4-呋喃二醇(WO-A-00/23457中的實(shí)施例17)；N-({9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9H-嘌呤-2-基}甲基)-2-甲基-1-丙磺酰胺(WO-A-01/27130的實(shí)施例1)；(2S，3S，4R，5R)-5-(6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-2-{[(異丙基磺?；?氨基]甲基}-9H-嘌呤-9-基)-N-乙基-3，4-二羥基四氫-2-呋喃甲酰胺(WO-A-01/7131的實(shí)施例3)；9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺(WO-A-00/77018的實(shí)施例1)；6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺(WO-A-01/60835的實(shí)施例1)；N-({9-[(4R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9H-嘌呤-2-基}甲基)-N′-[2-(二異丙基氨基)乙基]脲(WO-A-02/00676的實(shí)施例1)；或6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺(WO-A-01/94368的實(shí)施例8)；或其可藥用鹽或溶劑化物。
4.權(quán)利要求3的組合，其中選擇性A2a受體激動(dòng)劑為9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺或6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺，或其可藥用鹽或溶劑化物。
5.上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合，其中抗膽堿能試劑為異丙托品或氧托品鹽或其溶劑化物。
6.權(quán)利要求1的組合，其中腺苷A2a受體激動(dòng)劑為9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物，抗膽堿能試劑為異丙托品鹽或其溶劑化物；腺苷A2a受體激動(dòng)劑為6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物，抗膽堿能試劑為異丙托品鹽或其溶劑化物；腺苷A2a受體激動(dòng)劑為9-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫-2-呋喃基]-6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物，抗膽堿能試劑為氧托品鹽或其溶劑化物；或腺苷A2a受體激動(dòng)劑為6-[(2，2-二苯基乙基)氨基]-9-{(2R，3R，4S，5S)-5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}-N-{2-[({[1-(2-吡啶基)-4-哌啶基]氨基}羰基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-2-甲酰胺或其可藥用鹽或溶劑化物，抗膽堿能試劑為氧托品鹽或其溶劑化物。
7.用作藥物的上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的組合。
8.權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)的組合，其以同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立方式給藥以治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病。
9.藥物組合物，含有選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑、抗膽堿能試劑或可藥用賦形劑、稀釋劑或載體，以吸入途徑給藥用于治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病，前提是所述抗膽堿能試劑不為噻托品鹽。
10.權(quán)利要求9的藥物組合物，其中選擇性A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑如權(quán)利要求2-6任意一項(xiàng)所定義。
11.選擇性A2a受體激動(dòng)劑或抗膽堿能試劑在制備用于治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病的藥物中的應(yīng)用，其中這兩種試劑以吸入途徑同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立給藥，前提是抗膽堿能試劑不是噻托品鹽。
12.權(quán)利要求11的用途，其中選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑如權(quán)利要求2-6任意一項(xiàng)所定義。
13.治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病的方法，包括對需要治療的哺乳動(dòng)物以吸入途徑通過同時(shí)、連續(xù)或者獨(dú)立方式施用有效量的選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑，前提是抗膽堿能試劑不為噻托品鹽。
14.權(quán)利要求13的方法，其中選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑如權(quán)利要求2-6任意一項(xiàng)所定義。
15.一種吸入裝置，其在治療氣道阻塞性疾病或其它炎性疾病時(shí)以同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立方式給藥選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑，前提是所述抗膽堿能試劑不為噻托品鹽。
16.權(quán)利要求15的裝置，其中選擇性腺苷A2a受體激動(dòng)劑和抗膽堿能試劑如權(quán)利要求2-6任意一項(xiàng)所定義。
全文摘要
本發(fā)明涉及以同時(shí)、連續(xù)或獨(dú)立方式給藥的選擇性A
文檔編號(hào)A61P11/00GK1535161SQ02810618
公開日2004年10月6日 申請日期2002年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月25日
發(fā)明者邁克爾·耶頓, 羅伊西·A·阿姆斯特朗, A 阿姆斯特朗, 邁克爾 耶頓 申請人:美國輝瑞有限公司