專利名稱：包含因子VIIα和因子XIII的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含因子VIIa和因子XIII的藥物組合物。本發(fā)明還涉及因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防主體發(fā)生流血事件的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及治療主體的流血事件的方法和增強(qiáng)主體血塊形成的方法。本發(fā)明還涉及包含這些化合物的試劑盒。
背景技術(shù)：
止血(haemostasis)是由于在血管壁受到損傷后，在暴露于循環(huán)血液的組織因子(TF)與血液循環(huán)中存在的對應(yīng)于約1％的總FVII蛋白質(zhì)量的FVIIa之間形成復(fù)合物(complex)而啟動(dòng)的。這種復(fù)合物錨固在帶有TF的細(xì)胞上，把細(xì)胞表面上的FX活化為FXa，把FIX活化為FIXa。FXa把凝血酶原活化為凝血酶，凝血酶使FVIII、FV、FXI和FXIII活化。而且，在止血的這個(gè)啟動(dòng)步驟中形成的有限數(shù)量的凝血酶還使血小板活化。在凝血酶作用于血小板上之后，血小板的形狀發(fā)生改變，將帶電荷的磷脂暴露在它們的表面上。這種活化后的血小板表面成為進(jìn)一步活化FX和形成全部的凝血酶的模板。通過在活化的血小板表面上形成的FIXa-FVIIIa復(fù)合物，在活化的血小板表面上的FX發(fā)生進(jìn)一步活化，然后FXa把凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，同時(shí)仍然位于表面上。然后凝血酶把血纖蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槟苁棺畛醯难“逅ǚ€(wěn)定的不溶性的血纖蛋白。把這個(gè)過程分區(qū)，即定位到TF表達(dá)或暴露的部位，從而盡可能地減小凝固體系發(fā)生系統(tǒng)性活化的危險(xiǎn)。形成血栓的不溶性血纖蛋白進(jìn)一步被FXIII-催化的血纖蛋白-纖維的交聯(lián)所穩(wěn)定。
血漿中的FVIIa主要以單鏈酶原的形式存在，該酶原被FXa切割成兩條鏈—活化形式的FVIIa。已經(jīng)把重組體活化因子(recombinant activatedfactor)VIIa(rFVIIa)開發(fā)成促止血?jiǎng)?。服?administer)rFVIIa能在血友病主體中產(chǎn)生迅速并且高效的促止血反應(yīng)。這些血友病主體(subject)由于抗體的形成，不能用凝血因子產(chǎn)品治療流血。而且可以用FVIIa成功地治療缺乏因子VII的流血主體或具有正常的凝血體系但是遭遇過量流血的主體。在這些研究中，還沒有遇到過rFVIIa產(chǎn)生不良的副作用(特別是發(fā)生血栓栓塞)。
額外服用外源性的FVIIa促進(jìn)了活化的血小板表面上凝血酶的形成。這發(fā)生在缺乏FIX或FVIII的血友病主體中，因此失去了凝血酶充分形成的最有力的途徑。而且在較低數(shù)量的血小板或缺乏功能的血小板存在下，額外的FVIIa促進(jìn)了凝血酶的形成。
FXIII—血纖蛋白穩(wěn)定因子，是一種能使血纖蛋白單體交聯(lián)從而使血纖蛋白結(jié)構(gòu)抵抗血纖蛋白溶酶和其它蛋白水解酶溶解的能力增大的谷胺酰胺轉(zhuǎn)移酶。還已知因子XIII被稱為＂血纖蛋白連接酶＂和＂血纖蛋白穩(wěn)定因子＂?；罨?，F(xiàn)XIIIa能在血纖蛋白分子的側(cè)鏈之間以及其它底物之間形成分子間的γ-谷氨二?；?ε-賴氨酸交聯(lián)。在血漿和血小板中發(fā)現(xiàn)有FXIII。在血漿中以四聚的酶原形式存在的酶由兩個(gè)α-亞基和兩個(gè)β-亞基組成(表示為a2b2)，而在血小板中以酶原形式存在的酶由兩個(gè)α-亞基組成(表示為a2-二聚體)。
這兩種酶原都可以被凝血酶和Ca2+活化。血小板在受傷部位聚集時(shí)釋放出鈣。凝血酶切去1-37N-末端氨基酸殘基(a2-二聚體的)。在為a2b2-酶原的情況下，接下來β-亞基從活化后的α-亞基上解離下來。鈣同樣能與酶原和凝血酶改性的分子很好地結(jié)合。在凝血酶和鈣活化后，α-鏈上的活性中心半胱氨酸暴露出來，形成了充分活化的酶。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)患有嚴(yán)重的血小板減少癥的主體其血漿中FXIII的水平很低。
眾所周知，與外科手術(shù)損傷或大的損傷有關(guān)的流血過多的需要輸血的主體與沒有發(fā)生任何流血的主體相比，出現(xiàn)了更多的并發(fā)癥。然而，還有需要供給人血或血液產(chǎn)品(血小板、白細(xì)胞、從血漿制得的用于治療凝血缺陷的濃縮液等)的中度失血也會(huì)產(chǎn)生與人類病毒(肝炎病毒、HIV病毒、細(xì)小病毒以及其它目前未知的病毒)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)有關(guān)的并發(fā)癥。需要大量輸血的大面積失血會(huì)導(dǎo)致發(fā)展成許多器官衰竭，包括肺和腎功能受損。一旦主體出現(xiàn)了這些嚴(yán)重的并發(fā)癥，就會(huì)啟動(dòng)涉及多種細(xì)胞因子和炎癥反應(yīng)的連鎖事件的發(fā)生，使得治療極其困難，而且不幸的是經(jīng)常會(huì)不成功。因此，在外科手術(shù)和主要的組織損傷的治療中，一個(gè)主要的目標(biāo)是避免或最大限度地減少失血。
為了避免或最大限度地減少這種失血，重要的是要確保不容易被血纖蛋白溶酶溶解的穩(wěn)定的固體止血栓的形成，而且重要的是要確保這種血栓或血塊能夠快速有效地形成。
JP2-167234A涉及一種用于生物組織的黏附劑(adhesive)，其特征在于包含血纖蛋白原、凝血酶原、血液凝固因子VII、血液凝固因子IX、血液凝固因子X、血液凝固因子XIII、抗凝血酶、蛋白酶抑制劑和鈣離子。
JP 59-116213A涉及一種用作組織膠的包含一種血液凝固劑作為活性組份的氣溶膠組合物。血液凝固劑可以選自血液凝固因子I、II、III、IV、V、VII、VIII、IX、X、XI、XII和XIII、激肽釋放酶原、高聚物激肽原和凝血酶，優(yōu)選F XIII和凝血酶的組合物。
WO 93/12813(ZymoGenetics)涉及FXIII在減少進(jìn)行外科手術(shù)的主體發(fā)生外科手術(shù)失血中的用途。該組合物還包含抑肽酶。FXIII是以大丸劑注射液的形式給主體服用的，典型地是在外科手術(shù)的前一天服用。
歐洲專利225160(Novo Nordisk)涉及FVIIa的組合物和治療不是由凝血因子缺陷或凝血因子抑制劑引起的流血癥的方法。
歐洲專利82182(Baxter Travenol Lab.)涉及一種用于主體的平衡凝血因子缺乏或凝血因子抑制劑的作用的因子VIIa的組合物。
國際專利公開號WO 93/06855(Novo Nordisk)涉及FVIIa的局部應(yīng)用。
Kjalke等人的Thrombosis and Haemostasis，1999(Suppl)，0951涉及在一種模擬血友病A或B的條件的模型體系中，服用額外的外源性FVIIa及其對活化的血小板表面上凝血酶形成的影響。
本領(lǐng)域中依然需要一種改善的可靠的并且可以廣泛應(yīng)用在主體，特別是凝血酶的形成受到損傷的主體中，促進(jìn)凝血、快速形成穩(wěn)定的止血栓(haemostatic plug)和達(dá)到完全止血的方法。還需要一種為了達(dá)到完全止血只需要低劑量的FVIIa的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供能有效地用于治療或預(yù)防流血事件(bleedingepisode)和凝血癥(coagulation disorder)的組合物。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供能有效地用于治療或預(yù)防流血事件或作為促凝血?jiǎng)┦褂玫膯我粍┬偷慕M合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供具有協(xié)同作用的組合物、治療方法或試劑盒。
本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供沒有實(shí)質(zhì)性的副作用(例如高水平的凝血體系的系統(tǒng)性活化)的組合物、治療方法或試劑盒。
在閱讀了本發(fā)明的說明書后，本發(fā)明的其它目的將變得顯而易見。
本發(fā)明人證實(shí)與單獨(dú)的因子VIIa或因子XIII相比，因子VIIa和因子XIII的組合能更有效地減少正常人血漿的凝固時(shí)間。并且還顯示與單獨(dú)的因子VIIa或因子XIII相比，因子VIIa和因子XIII的組合能更有效地增大血塊的牢固度(firmness)。通過把觀察到的不會(huì)進(jìn)一步增大血塊牢固度的濃度的因子VIIa與同樣是觀察到的不會(huì)進(jìn)一步增大血塊牢固度的濃度的因子XIII組合，出人意料地顯示出血塊的牢固度得到了進(jìn)一步的增大。此外還顯示與單獨(dú)的因子VIIa或因子XIII的抑制劑相比，因子VIIa和因子XIII的組合能更有效地延長體外的正常人血漿中血塊的溶解時(shí)間。因此，通過增強(qiáng)凝血，能使主體的流血得到更有效的治療。而且，可以用相對較低濃度的因子VIIa來治療病人，降低與單獨(dú)使用因子VIIa進(jìn)行的常規(guī)治療有關(guān)的相對較高的費(fèi)用。
在第一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種包含因子VIIa和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種包含因子VIIa和因子XIII作為惟一的活性試劑以及選擇性(任選)使用的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
在另外一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種配制成用于靜脈內(nèi)給藥的包含因子VIIa和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
在另外一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種配制成用于靜脈內(nèi)給藥的包含因子VIIa和因子XIII作為惟一的活性試劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
在一種實(shí)施方式中，因子VIIa是重組的因子VIIa，因子XIII是重組的因子XIII。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，因子VIIa重組的因子(recombinantfactor)VIIa。在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa是重組的人類因子(recombinanthuman factor)VIIa。在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa是因子VIIa變體。
在一種實(shí)施方式中，因子VIIa的變體是與野生型因子VIIa(即具有US4,784,950中公開的氨基酸序列的多肽)相比，不超過20個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入的氨基酸序列變體。在另一個(gè)實(shí)施方式中，與野生型因子VIIa相比，因子VIIa的變體有不超過15個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入；在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa的變體有不超過10個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入；在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa的變體有不超過8個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入；在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa的變體有不超過6個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入；在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa的變體有不超過5個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入；在另一個(gè)實(shí)施方式中，因子VIIa的變體有不超過3個(gè)氨基酸被替換、刪去或插入。在一種實(shí)施方式中，因子VIIa的變體選自[L305V]-FVIIa、[L305V/M306D/D309S]-FVIIa、[L3051]-FVIIa、[L305T]-FVIIa、[F374P]-FVIIa、[V1 58T/M298Q]-FVIIa、[V158D/E296V/M298Q]-FVIIa和[K3 37A]-FVIIa之列。
在一種實(shí)施方式中，因子XIII是FXIIIa2b2。在另一種實(shí)施方式中，因子XIII是FXIIIa2。在另一種實(shí)施方式中，因子XIII是活化的因子XIII(FXIIIa)。在一種實(shí)施方式中，因子XIII是因子XIII的變體。在一種實(shí)施方式中，因子XIII是人類因子XIII。在一種實(shí)施方式中，因子XIII是重組的因子XIII。在一種實(shí)施方式中，因子XIII是重組的人類因子XIII。在一種實(shí)施方式中，因子XIII是人類a2-二聚體。
在一個(gè)方面中，組合物還包含TFPI抑制劑。在另一個(gè)方面中，組合物還包含因子VIII。在另一個(gè)方面中，組合物還包含因子VIII和TFPI抑制劑。
在一種實(shí)施方式中，組合物還包含一種血纖蛋白溶解體系的抑制劑，例如抑肽酶、ε-氨基己酸或氨甲環(huán)酸(tranexamic acid)。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在一個(gè)方面中，試劑盒包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；c)以第三種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和d)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和TFPI抑制劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和TFPI抑制劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；
c)以第三種單位劑型存在的有效量的因子VIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；d)以第四種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和e)用于容納所說的第一、第二、第三和第四種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，試劑盒包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；c)以第三種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和d)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，試劑盒包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和TFPI抑制劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；c)以第三種單位劑型存在的有效量的因子VIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和d)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和因子VIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；c)以第二種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和d)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIII和TFPI抑制劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIII和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；c)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和d)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子XIII和TFPI抑制劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；e)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和因子VIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；f)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIII和因子VIIa以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和TFPI抑制劑以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子VIII和因子XIII以及選擇性使用的藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于治療流血事件的藥物中的用途。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于減少主體的凝血時(shí)間的藥物中的用途。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于延長哺乳動(dòng)物血漿中血塊的溶解時(shí)間的藥物中的用途。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于增大哺乳動(dòng)物血漿中血塊的強(qiáng)度的藥物中的用途。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及用途因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于增強(qiáng)哺乳動(dòng)物血漿中血纖蛋白凝塊的形成的藥物中的用途。
在一種實(shí)施方式中，哺乳動(dòng)物血漿是人血漿。在另一種實(shí)施方式中，哺乳動(dòng)物血漿是正常的血漿；在另一種實(shí)施方式中，血漿是正常人的血漿；在一種實(shí)施方式中，血漿是從凝血酶的產(chǎn)生受到減損(impaired thrombingeneration)的主體得到的。在一種實(shí)施方式中，血漿是來自具有較低的血纖蛋白原水平的主體。
在一種實(shí)施方式中，因子VIIa和因子XIII延長了體外的正常人血漿中血塊的溶解時(shí)間。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種增強(qiáng)主體的血纖蛋白凝塊形成的方法，包括給主體服用有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種治療主體的流血事件的方法，包括給主體服用有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種減少哺乳動(dòng)物血漿的凝血時(shí)間的方法，包括使血漿與有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合接觸。在一種實(shí)施方式中，給需要這種治療的主體服用有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合(combination)。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種增強(qiáng)主體的血纖蛋白形成的方法，包括給主體服用有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合。
在本發(fā)明方法的一種實(shí)施方式中，因子VIIa和因子XIII是給主體服用的惟一的活性試劑。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，藥物組合物包含因子VIIa和因子XIII作為惟一的活性試劑。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，因子VIIa和因子XIII是以一劑形式(one-dosage form)同時(shí)被服用的。在另一種實(shí)施方式中，因子VIIa和因子XIII是被順序服用的。在另外一種實(shí)施方式中，因子VIIa和因子XIII是在彼此間隔大約1-2小時(shí)的時(shí)間內(nèi)，例如30分鐘的時(shí)間內(nèi)，例如10分鐘的時(shí)間內(nèi)，例如以包含第一種單位劑型的因子VIIa和第二種單位劑型的因子XIII的試劑盒形式被服用的。
在一種實(shí)施方式中，有效量的因子VIIa為0.05mg/天至500mg/天(70-kg的主體)。在一種實(shí)施方式中，有效量的因子XIII為0.05mg/天至500mg/天(70-kg的主體)。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，藥物組合物(單制劑形式時(shí))基本上是由因子VIIa和因子XIII以及至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑(detergent)，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑組成。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，藥物組合物(單制劑形式的)基本上是由因子VIIa和因子XIII以及至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑，和/或TFPI抑制劑組成。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，藥物組合物(單制劑形式時(shí))基本上是由因子VIIa和因子XIII以及至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑，和/或TFPI抑制劑，和/或因子VIII組成。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，藥物組合物(試劑盒形式時(shí))由基本上是由因子VIIa和至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑構(gòu)成的第一種單位劑型；和主要由因子XIII和至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑構(gòu)成的第二種單位劑型組成。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，藥物組合物(試劑盒形式時(shí))由基本上是由因子VIIa和至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑，和/或TFPI抑制劑構(gòu)成的第一種單位劑型；和基本上是由因子XIII和至少選擇性使用的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，和/或穩(wěn)定劑，和/或去污劑，和/或中性鹽，和/或抗氧化劑，和/或防腐劑，和/或蛋白酶抑制劑，和/或TFPI抑制劑，和/或因子VIII構(gòu)成的第二種單位劑型組成。
在另一種實(shí)施方式中，主體是人；在另外一種實(shí)施方式中，主體的凝血酶產(chǎn)生受到減損；在一種實(shí)施方式中，主體血漿中的血纖蛋白原的濃度降低(例如多次輸血的主體)。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，組合物還包含因子VIII。在一種實(shí)施方式中，因子VIII是一種活化的因子VIII(因子VIIIa)。在另外一種實(shí)施方式中，因子VIII是一種重組的因子VIIIa。在另一種實(shí)施方式中，因子VIII是重組的人類因子VIIIa。
在另一個(gè)方面中，組合物還包含一種血纖蛋白溶解體系的抑制劑，例如抑肽酶、ε-氨基己酸或氨甲環(huán)酸。
附圖列示

圖1顯示在微量滴定孔中，在用含有20nM Hepes、150mM NaCl和5mM CaCl2，pH7.4的緩沖液把含有檸檬酸鹽的正常人血漿(NHP)中稀釋到1/10(總體積為250μl)，在大約2500-3000秒時(shí)得到的血塊的自發(fā)性形成。通過在一臺SpecramaxTM340(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)中在600nm處光密度的增大來監(jiān)測血纖蛋白凝塊的形成。圖1顯示10nM從NovoNordisk A/S Bagsvaerd，Denmark得到的重組因子VIIa(rFVIIa)把凝血時(shí)間縮短到1600秒(n＝2)。當(dāng)把30nM從American Diagnosticainc，Greenwich，CT得到的因子XIII(FXIII)與10nM rFVIIa(n＝3)一起加入時(shí)，凝血時(shí)間得到了進(jìn)一步的縮短。在FXIII存在下形成的凝塊比沒有FXIII存在時(shí)形成的凝塊更透明(更低的最大OD)，表明加入FXIII產(chǎn)生了含有更薄纖維的網(wǎng)眼更細(xì)的血纖蛋白凝膠結(jié)構(gòu)。
圖2顯示添加FXIII(30nM)延長了在rFVIIa和組織纖溶酶原活化劑(tPA)存在下形成的凝塊的血纖蛋白凝塊的溶解時(shí)間。在有或沒有30nM XIII存在下，通過向225μl含有從Novo Nordisk A/S Bagsvserd，Denmark得到的50nM rFVIIa和0.5nM重組tPA的20nM Hepes，150mM NaCl，5mM CaCl2，pH7.4中加入25μl NHP來誘發(fā)血塊的形成。通過一臺Spectramax_340在600nm處以O(shè)D600nm的增大以及之后軌跡向基線的返回來監(jiān)測血塊的形成以及之后由tPA-介導(dǎo)的纖溶酶原活化所誘發(fā)的血塊溶解。圖2顯示，在這些條件下，由于FXIII的存在，血塊的溶解時(shí)間被明顯地延長了。
圖3顯示rFVIIa和FXIII對最大的血塊牢固度(MCF)和血塊對t-PA介導(dǎo)的溶解的抵抗力的影響。在加入rFVIIa和/或FXIII之前得到的MCF是25mm，溶解一半的血塊所需要的時(shí)間為12.3分鐘(圖3)。加入逐漸增大的濃度的FXIII(0-40nM)沒有改變MCF；然而，觀察到溶解一半血塊的時(shí)間隨劑量而延長，最佳在30nM FXIII時(shí)(溶解一半血塊的時(shí)間14.3分鐘，圖3)。同樣地，加入rFVIIa(1nM)導(dǎo)致對血塊的保護(hù)，使其免受t-PA-介導(dǎo)的血纖蛋白溶解(溶解一半血塊的時(shí)間16.4分鐘)，而對MCF沒有任何影響(圖3)。然而，在一起加入rFVIIa(1nM)和FXIII(30nM)時(shí)，觀察到MCF的增大(29mm)以及深度的免受血纖蛋白溶解的保護(hù)作用(溶解一半血塊的時(shí)間27.1分鐘)(圖3)。這些結(jié)果綜合起來證明，向血漿中加入rFVIIa和FXIII，以協(xié)同方式改善了機(jī)械強(qiáng)度和對t-PA-介導(dǎo)的血纖蛋白溶解的抵抗力。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供包含因子VIIa和因子XIII的組合的組合物。本發(fā)明還提供包含因子VIIa和因子XIII的組合作為惟一的活性組份的組合物。組合物可以是單一的組合物形式或者可以是多組份的試劑盒形式。本發(fā)明的組合物可用作具有治療和預(yù)防作用的促凝血?jiǎng)┖脱w蛋白凝塊的穩(wěn)定劑，并且能快速地在哺乳動(dòng)物包括靈長類例如人類中形成血纖蛋白凝塊。
無論何時(shí)，本說明書中提到的第一或第二或第三種單劑量都不指示優(yōu)選的給藥順序，而僅僅是為了方便。
本發(fā)明還提供一種治療(包括預(yù)防性治療或預(yù)防)主體包括人類的流血事件(例如由創(chuàng)傷或外科手術(shù)引起的流血事件)或者缺乏或帶有缺陷型血液凝固因子FIX或FVIII或血小板的主體的方法。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，因子VIIa和因子XIII的組合是一種具有優(yōu)勢的產(chǎn)品，能確保固體的、穩(wěn)定的止血栓的快速形成。
凝血酶的充分形成對于固體的、穩(wěn)定的止血栓的形成是必要的。這種止血栓的血纖蛋白結(jié)構(gòu)既依賴于形成的凝血酶的數(shù)量，也依賴于最初的凝血酶的形成速率。當(dāng)凝血酶的產(chǎn)生存在減損時(shí)，就形成了具有高滲透性的多孔的血纖蛋白栓。通常存在于血纖蛋白表面上的血纖蛋白溶解酶易于溶解這種血纖蛋白栓。穩(wěn)定的血纖蛋白栓的形成還取決于因子XIIIa的存在，該因子能被凝血酶活化并因此也取決于充足的凝血酶的生成。而且，近來所述的凝血酶活化的血纖蛋白溶解抑制劑TAFI的活化需要有相當(dāng)高數(shù)量的凝血酶。因此，在沒有充足的凝血酶形成的情況下，TAFI不會(huì)被活化而導(dǎo)致止血栓的形成，這比通常情況下更容易被正常的血纖蛋白溶解活性所溶解。
通過增加凝血酶的產(chǎn)生，因子VIIa為充分活化因子XIII提供了基礎(chǔ)，而因子XIII的充分活化對于形成充分穩(wěn)定的止血栓從而保持止血是至關(guān)重要的。在血小板數(shù)量較低、血小板數(shù)量減少的情況下，通過服用額外的外源性因子VIIa可以加快凝血酶的生產(chǎn)。但是，總的凝血酶的產(chǎn)生與因子VIIa不是標(biāo)準(zhǔn)化的(normalized)，即使在因子VIIa濃度很高的情況下也是如此。
通過把因子VIIa和因子XIII，特別是因子XIII的α-鏈(a2-二聚體)組合使用，有利于因子XIII的充分活化，增強(qiáng)了因子VIIa的止血作用。
而且，對于血漿中血纖蛋白原的濃度較低的主體(由于多次創(chuàng)傷或大面積外科手術(shù)而導(dǎo)致的多次輸血的主體)，不會(huì)發(fā)生因子XIII的充分活化。通過服用因子VIIa和因子XIII的組合，可以達(dá)到更為有效的的止血。
增大血纖蛋白止血栓的穩(wěn)定性的另一種方法是確保有充足的因子XIIIa(活化的因子XIII)存在。
患有血小板減少癥的主體其凝血酶的生產(chǎn)受到減損，并且血纖蛋白栓的穩(wěn)定作用有缺陷，導(dǎo)致止血栓傾向于在成熟前溶解。而且受到大的創(chuàng)傷或器官損傷影響的主體以及由此導(dǎo)致的頻繁輸血的主體其血小板的數(shù)量以及血纖蛋白原、因子VIII和其它凝血蛋白的水平常常較低。這些主體就會(huì)出現(xiàn)凝血酶的產(chǎn)生受損(或降低)。另外，主體的較低的血纖蛋白原水平又對因子XIII的活化產(chǎn)生負(fù)面影響。因此，這些主體具有缺陷型或不太有效的形成血纖蛋白栓的止血機(jī)制，纖維蛋白酶易于在成熟前被蛋白溶解酶溶解，在以大面積創(chuàng)傷和器官損傷為特征的部位也大量地釋放這種溶解酶。
為了便于在主體中形成充分穩(wěn)定的足夠數(shù)量的血栓以維持止血，服用了本發(fā)明的組合物。該組合物對血小板數(shù)量較低的主體和血漿中血纖蛋白原和/或其它凝血蛋白的水平較低的主體是特別有利的。
在因子XIII的存在下，較低濃度的因子VIIa可以足以保證充分的止血。
如上所述，因子XIII以四聚體的酶原形式存在于血漿中，四聚體的酶原由兩個(gè)α-亞基和兩個(gè)β-亞基構(gòu)成(表示為a2b2)，但是發(fā)現(xiàn)它在其它組織(例如血小板)中以a2-二聚體形式存在。無論是這些酶原形式，還是活化的因子XIII(因子XIIIa)以及保留了其特征性的交聯(lián)活性的因子XIII的基因工程變體都可以用在本發(fā)明中。在一種實(shí)施方式中，因子XIII是人類因子XIII；在另一種實(shí)施方式中，因子XIII是人類的a2-二聚體；在另外一種實(shí)施方式中，因子XIII是活化的人類因子XIIIa。
本發(fā)明中所用的因子XIII和因子VIIa可以從血液中純化而得到或者通過重組方法生產(chǎn)。很顯然，實(shí)施本發(fā)明的方法不依賴于純化的因子XIII和因子VIIa是怎么得到的，因此，考慮把本發(fā)明覆蓋到適用于本發(fā)明的因子XIII和因子VIIa的任何制劑的用途。優(yōu)選人類因子VIIa和人類因子XIII。保留了其特征性的與止血有關(guān)的活性的因子VIIa和因子XIII的基因工程變體也可以用于本發(fā)明中。保留了其特征性的與止血有關(guān)的活性的因子VIIa或因子VIIa-或因子XIII變體的片斷也可以用在本發(fā)明中。因子VIIa的與止血有關(guān)的活性例如可以使用本發(fā)明的說明書中描述的因子VIIa活性試驗(yàn)進(jìn)行測定。因子XIII的與止血有關(guān)的活性例如可以使用本發(fā)明的說明書中描述的因子XIII活性試驗(yàn)進(jìn)行測定。
基本上具有與野生型因子VIIa相同或更好的生物學(xué)活性的因子VII的變體的非限定性的例子包括但是不限于丹麥專利申請?zhí)朠A2000 00734、PA2000 01360、PA2000 01361和PA2001 00477中所說的那些。非限定性的例子包括[L305V]-FVIIa、[L305V/M306D/D309S]-FVIIa、[L3051]-FVIIa、[L305T]-FVIIa、[F374P]-FVIIa、[V158T/M298Q]-FVIIa、[V158D/E296V/M298Q]-FVIIa和[K337A]-FVIIa。
在本發(fā)明的上下文中，以其常規(guī)意義使用了代表氨基酸的三-字母或單-字母符號，如表1中所示。除非清楚地說明，這里提到的氨基酸是L-氨基酸。應(yīng)當(dāng)明白，第一個(gè)字母，例如K337的中的第一個(gè)字母代表天然存在于野生型因子VII的所示位置的氨基酸，并且，例如[K337A]-FVIIa表示FVII-變體，其中單-字母碼K所代表的天然存在于所示位置的氨基酸被單-字母碼A所代表的氨基酸替換。
表1氨基酸的縮寫
術(shù)語＂因子VIIa＂或＂FVIIa＂可以相互交換使用。術(shù)語因子VIIa包括酶原因子VII(單鏈因子VII)。術(shù)語＂因子XIII＂或＂FXIII＂可以相互交換使用。術(shù)語＂因子VIII＂或＂FVIII＂可以相互交換使用。
很顯然，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，可以在對于因子VIIa或因子XIII-分子的功能關(guān)鍵的區(qū)域外圍進(jìn)行替換，并且依然會(huì)得到具有活性的多肽。因此，對于因子VIIa或因子XIII-多肽來說必要的氨基酸殘基并因此不經(jīng)替換的氨基酸殘基，可以按照本領(lǐng)域中已知的方法，例如點(diǎn)突變(site-directedmutagensis)或丙氨酸掃描突變(參見例如Cunningham and Wells，1989，Science 2441081-1085)，把這些氨基酸鑒別出來。在后一種技術(shù)中，在分子的每一個(gè)帶正電荷的殘基上引入突變，把所得的突變體分子作為凝血?jiǎng)┻M(jìn)行試驗(yàn)，分別試驗(yàn)交聯(lián)活性以鑒別對分子的活性的至關(guān)重要的氨基酸殘基。還可以通過諸如核磁共振分析、晶體學(xué)或光親和標(biāo)記這樣的技術(shù)測得的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，測定底物-酶的相互作用位點(diǎn)(參見例如de Vos et al.，1992，Science 255306 312；Smith et al.，1992，Journal of Molecular Biology224899-904；Wlodaver et al.，1992，F(xiàn)EBS Letters 30959-64)。
把突變引入核酸序列中，把一種核苷酸(nucleotide)換成另一種核苷酸可以通過點(diǎn)突變，使用本領(lǐng)域中已知的任何方法完成。特別有用的是使用超螺旋化的帶有感興趣的插入子的雙股DNA載體和帶有所要的突變子的兩個(gè)合成引物。通過Pfu DNA聚合酶，各自與載體的相對鏈互補(bǔ)的核苷酸引物在溫度循環(huán)期間擴(kuò)展。加入引物后，產(chǎn)生一種含有錯(cuò)開的缺口的變異的質(zhì)粒。在溫度循環(huán)之后，用專用于把DNA甲基化和半甲基化的Dpnl處理產(chǎn)物以消解母體DNA模板，并且為含有突變的合成的DNA進(jìn)行選擇。還可以使用本領(lǐng)域已知的用于產(chǎn)生、鑒別和分離變異體的其它方法，例如基因改組或噬菌體展示技術(shù)。
術(shù)語＂因子VIII＂或＂FVIII＂包括活化的因子VIII(表示為因子VIIIa)、保留了其特征性的凝血活性的因子VIII的變體和截短體。在一種實(shí)施方式中，因子VIII是人類因子VIII。
術(shù)語＂TFPI抑制劑＂是指能夠抑制TFPI(組織因子途徑抑制劑)的抗凝血活性的化合物。該術(shù)語包括EP558 529、WO 96/28153和US5,622,988中所公開的化合物。＂TFPI＂和＂EPI＂(外部途徑抑制劑)可以相互交換使用。
在本發(fā)明中，＂有效量＂的因子VIIa和＂有效量＂的因子XIII被定義為足以預(yù)防或減少流血或失血以便治愈、減輕或部分抑制疾病及其并發(fā)癥的因子VIIa和因子XIII的數(shù)量。
根據(jù)本發(fā)明，服用的因子VIIa的數(shù)量和因子XIII的數(shù)量可以在大約1∶100至大約100∶1(μg因子VIIa∶μg因子XIII)的比例范圍內(nèi)變化。
在上下文中，＂凝血酶生產(chǎn)受到減損的主體＂是指不能在活化的血小板表面上產(chǎn)生充足的凝血酶爆發(fā)的主體，包括那些凝血酶的生產(chǎn)比具有全部功能的正常止血體系(包括正常數(shù)量和功能的凝血因子、血小板和血纖蛋白原)的主體少的主體，包括缺乏FIX和/或FVIII(血友病A和B)或具有缺陷型FIX和/或FVIII或具有抗FIX和/或FVIII的抑制劑的主體；缺乏FXI的主體；血小板數(shù)量較低或血小板功能有缺陷的主體(例如血小板減少或Glanzmann血小板功能不全或流血過多的主體)；以及凝血酶原、FX或FVII的水平較低的主體。
血漿中血纖蛋白原的濃度較低的主體(例如因多次創(chuàng)傷或大面積外科手術(shù)而而多次輸血的主體)還遭受血形成的纖蛋白栓更為疏松和不穩(wěn)定易于被溶解的痛苦。
術(shù)語＂充足的止血作用＂是指在受傷的部位形成一種穩(wěn)定的固體血纖蛋白凝塊或栓，能有效地阻止流血并且不易被血纖蛋白溶解體系溶解。
術(shù)語＂因子VIIa的活性＂或＂因子VIIa-活性＂是指產(chǎn)生凝血酶的能力；該術(shù)語還包括在沒有組織因子的存在下，在活化的血小板表面上產(chǎn)生凝血酶的能力。
術(shù)語＂正常的止血體系的增強(qiáng)＂是指產(chǎn)生凝血酶的能力的增強(qiáng)。
這里所用的術(shù)語＂流血癥(bleeding disorder)＂反映了在流血中顯示出來的源于細(xì)胞或分子的任何缺陷型(defect)、先天性(congenital)、獲得性(acquired)或誘導(dǎo)性(induced)缺陷，例如凝血因子缺陷(例如血友病A和B或缺乏凝血因子XI或VII)、凝血因子抑制劑，血小板功能缺陷、血小板減少或vonWillebrand病。
術(shù)語＂流血事件＂的意思包括作為與外科手術(shù)和其它形式的組織損傷有關(guān)的大問題的無節(jié)制的過多的流血。無節(jié)制的過多的流血可以發(fā)生在基本上具有正常的凝血體系的主體(然而由于流血，這些主體會(huì)發(fā)展出凝血途徑—由于流血的稀釋效果，凝血蛋白被稀釋，血纖蛋白溶解增大，血小板減少)和具有凝血或流血癥的主體中。凝血因子缺乏(血友病A和B，凝固因子XI或VII缺乏)或凝血因子抑制劑可能是流血癥的病因。過多流血還發(fā)生在具有正常功能的凝血爆發(fā)(不缺乏凝血因子或沒有抗凝血因子的抑制劑)的主體中，并且可以由血小板功能缺陷、血小板減少或von Willebrand癥引起。在這樣的情況下，流血或許與由血友病引起的流血類似，因?yàn)槿狈χ寡w系(例如在血友病中)或者具有能引起大的流血的不正常的必要的凝血＂化合物＂(例如血小板或von Willebrand因子蛋白)。
在發(fā)生了與外科手術(shù)或大的創(chuàng)傷有關(guān)的大面積組織損傷的主體中，正常的止血機(jī)制可以被瞬時(shí)的止血要求所淹沒，雖然有基本上(創(chuàng)傷前)正常的止血機(jī)制，也會(huì)發(fā)展成流血。當(dāng)流血發(fā)生在通過外科手術(shù)止血的可能性有限的器官，例如大腦、內(nèi)耳區(qū)域和眼睛中時(shí)，要取得滿意的止血還是一個(gè)問題。同樣的問題會(huì)在對各種器官(肝、肺、腫瘤組織、胃腸道)的活組織檢查的過程中以及腹腔鏡外科手術(shù)中出現(xiàn)。所有這些情況的共同點(diǎn)是難以通過外科手術(shù)技術(shù)(縫合、夾等)來提供止血，當(dāng)流血是擴(kuò)散性的(出血性胃炎和大量的子宮出血)時(shí)也是這樣。急性的大量出血還可以發(fā)生在正在進(jìn)行抗凝血治療的主體中，其中由所說的抗凝血治療誘發(fā)了止血缺陷。當(dāng)抗凝血作用需要被迅速抵銷時(shí)，這樣的主體或許需要外科手術(shù)的介入。根本的恥骨后前列腺切除術(shù)是一種通常對患有局部前列腺癌癥的主體進(jìn)行的一種操作。手術(shù)經(jīng)常并發(fā)顯著的有時(shí)是大量的失血。在進(jìn)行前列腺切除術(shù)期間發(fā)生的相當(dāng)多的失血主要與牽扯的解剖位置和外科手術(shù)止血不容易達(dá)到的血管分布密集的各種位點(diǎn)有關(guān)，它們會(huì)導(dǎo)致大面積的彌散性出血。另一種可能會(huì)在不滿意的止血情況下發(fā)生的情況是在對具有正常的止血機(jī)制的主體進(jìn)行抗凝血治療以預(yù)防血栓栓塞病時(shí)。這樣的治療可以包括肝素、其它形式的蛋白多糖、丙酮芐羥香豆素或其它形式的維生素K-拮抗劑以及阿斯匹林和其它血小板聚集抑制劑。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，流血與血友病有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與抑制劑引起的獲得性血友病有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與血小板減少有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與von Willebrand癥有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與嚴(yán)重的組織損傷有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與嚴(yán)重的創(chuàng)傷有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與外科手術(shù)有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與腹腔鏡手術(shù)有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與出血性胃炎有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血是彌散性的子宮出血。在另一種實(shí)施方式中，流血發(fā)生在具有有限的止血機(jī)制可能性的器官中。在另一種實(shí)施方式中，流血發(fā)生在大腦、內(nèi)耳部位或眼睛。在另一種實(shí)施方式中，流血與進(jìn)行活組織檢查的方法有關(guān)。在另一種實(shí)施方式中，流血與抗凝血治療有關(guān)。
本發(fā)明的組合物還可以包含TFPI-抑制劑。這樣的組合物應(yīng)當(dāng)優(yōu)選給患有血友病A或B的主體服用。
本發(fā)明的組合物患有包含因子VIII。這樣的組合物應(yīng)當(dāng)優(yōu)選給沒有因子VIII的抑制劑的主體服用。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語＂治療＂的意思既包括預(yù)防預(yù)期的流血，例如外科手術(shù)中的流血，也包括調(diào)節(jié)已經(jīng)發(fā)生的流血，例如血友病中或創(chuàng)傷中的流血，目的是抑制或盡可能地減少流血。因此，預(yù)防性的服用因子VIIa和因子XIII也被包括在術(shù)語＂治療＂中。
這里所用的術(shù)語＂主體(subject)＂是指任何動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，例如人類，并且在合適的情況下可以與術(shù)語＂病人＂互換使用。
縮寫TF組織因子FVII單鏈的未活化形式的因子VIIFVIIa活化形式的因子VIIrFVIIa活化形式的重組因子VIIFXIII未活化的酶原形式的因子XIIIFXIIIa活化形式的因子XIIIrFXIII重組的FXIIIrFXIIIa重組的FXIIaa2FXIII或rFXIII的α-鏈或a-鏈b2FXIII或rFXIII的β-鏈或b-鏈FXIIIa2含有兩個(gè)a-鏈的二聚體形式的FXIIIFXIIIa2b2含有兩個(gè)a-鏈和兩個(gè)b-鏈的四聚體形式的FXIIIFVIII未活化的酶原形式的因子VIII
rFVIII重組的FVIIIFVIIIa活化形式的因子VIIIrFVIIIa重組的FVIIIaTFPI組織因子途徑抑制劑化合物的制備適用于本發(fā)明的純化的人類因子VIIa優(yōu)選通過DNA重組技術(shù)制備，例如按照Hagen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 832412-2416，1986中所述的方法或者按照EP 200,421(ZymoGenetics，Inc.)中所述的方法制備。通過重組技術(shù)生產(chǎn)的因子VIIa可以是可靠的因子VIIa或被或多或少修飾的因子VIIa，只要是這樣的因子VIIa基本上具有與可靠的因子VIIa(野生型因子VIIa)同樣的凝血方面的生物學(xué)活性?？梢酝ㄟ^已知的手段例如點(diǎn)特異性突變，改變給天然的因子VII編碼的核酸中的氨基酸密碼子或者刪去一些氨基酸密碼子來對給野生型因子VII編碼的核酸序列進(jìn)行修飾，可以生產(chǎn)這種的經(jīng)過修飾的因子VIIa。
因子VII還可以通過Broze and Majerus，J.Biol.Chem.255(4)1242-1247，1980和Hedner and Kisiel，J.Clin.Invest.711836-1841，1983中描述的方法生產(chǎn)。這些方法生產(chǎn)出不含可檢測數(shù)量的其它凝血因子的因子VII。甚至還有一種純化的因子VIII的制劑可以通過另外加入凝膠過濾作為最后的純化步驟而得到。然后通過已知方法，例如通過幾種不同的血漿蛋白，如因子Xlla、IXa或Xa，把因子VII轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨囊蜃覸IIa。另外，如Bjoem et al.(Research Disclosure，269 September 1986，pp.564-565)中所述，通過使因子VII一種離子交換色譜柱，例如Mono Q_(Pharmacia fineChemicals)等，可以把它活化。
本發(fā)明中使用的因子XIII可以按照已知方法，例如Cooke and Holbrook(Biochem.J.14179-84，1974)和Curtis and Lorand(Methods Enzymol.45177-191，1976)中公開的方法(在此通過參考文獻(xiàn)引入)，從血漿制得。因子XIII的a2-二聚體形式可以按照美國專利號3,904,751、3,931,399、4,597,899和4,285,933中公開的方法(在此通過參考文獻(xiàn)引入)，從胎盤制得。然而，為了避免使用具有傳染疾病危險(xiǎn)的從血液或組織得到的產(chǎn)品，優(yōu)選使用重組的因子XIII。在本領(lǐng)域中，制備重組的因子XIII的方法是已知的，參見例如Davie et al.，EP 268,772、Grundmann et al.，AU-A-69896/87、Bishop et al.，Biochemistry 1990，291861-1869、Board et al.，Thromb.Haemost.1990，63235-240、Jagadeeswaran et al.，Gene 1990，86279-283和Broeker etal.，F(xiàn)EBS Lett.1989，248105-110，在此通過參考文獻(xiàn)全部引入。在一種實(shí)施方式中，因子XIII的a2二聚體是按照同時(shí)待審的美國專利申請?zhí)?7/741,263(在此通過參考文獻(xiàn)全文引入)中公開的方法，從釀酒酵母的胞漿制得的。捕獲細(xì)胞并且進(jìn)行溶解，制備澄清的溶菌液。通過陰離子交換色譜，在中性至微堿性的pH下，使用衍生的瓊脂糖(例如DEAE Fast-Flow Sepharose.TM.(Pharmacia)等)柱對溶菌液進(jìn)行層析。然后通過濃縮洗脫液并且把pH調(diào)節(jié)到5.2-5.5(例如通過對丁二酸銨緩沖液進(jìn)行膜滲濾)，把因子XIII從色譜柱的洗脫液中沉淀出來。然后把沉淀溶解，使用常規(guī)的色譜技術(shù)例如凝膠過濾和疏水性的相互作用色譜進(jìn)行進(jìn)一步純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)領(lǐng)會(huì)到，為了減少誘發(fā)免疫反應(yīng)的危險(xiǎn)，優(yōu)選給主體使用具有協(xié)同作用的蛋白質(zhì)因子XIII和因子VIIa。非人類因子XIII的制劑及其表征已經(jīng)被Nakamura et al.(J.Biochem.781247-1266，1975)所公開。本發(fā)明還包括這樣的蛋白質(zhì)因子XIII和因子VIIa在獸醫(yī)中的用途。
給藥和藥物組合物用于與有目的的插入有關(guān)的治療時(shí)，典型地在進(jìn)行插入前大約24小時(shí)以內(nèi)服用因子VII和因子XIII，之后服藥7天或更長的時(shí)間?？梢圆捎帽景l(fā)明中所用的多種途徑來服用凝血?jiǎng)?br> 根據(jù)主體的體重、病情和病情的嚴(yán)重程度的不同，因子VII的劑量范圍為從大約0.05mg至大約500mg/天，例如對于一個(gè)70kg的主體，作為負(fù)載和維持劑量，劑量為從大約1mg至大約200mg/天，或者例如從大約10mg至大約175mg/天。
根據(jù)主體的體重、病情和病情的嚴(yán)重程度的不同，因子XIII的劑量范圍大約為0.05mg-500mg/天，例如對于一個(gè)70kg的主體，作為負(fù)載和維持劑量，劑量為從大約1mg至大約200mg/天，或者例如從大約10mg至大約175mg/天。
本發(fā)明的組合物和試劑盒可用于人醫(yī)和獸醫(yī)中，例如用于治療或預(yù)防發(fā)生流血事件或患有凝血癥的主體。為了用于本發(fā)明中，把因子VIIa和因子XIII配制成制劑，選擇性地使用藥學(xué)上可接受的載體配制成制劑。優(yōu)選地，通過非腸胃給藥方式，即靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥或肌肉內(nèi)給藥或者通過連續(xù)的或搏動(dòng)的灌注(pulsatile infusion)發(fā)生服用藥物組合物。
制劑還可以包含一種或多種稀釋劑、乳化劑、防腐劑、緩沖劑、賦形劑等，并且可以被制成液體制劑、粉劑、乳液、控制釋放的制劑等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以以合適的方式，按照已經(jīng)被認(rèn)可的操作方式，例如按照Remington′s Pharmaceutical Sciences，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990中公開的方法配制本發(fā)明的組合物。用于非腸胃給藥的組合物包含因子VII和因子XIII的組合，優(yōu)選這些因子溶于藥學(xué)上可接受的載體，優(yōu)選一種水性載體中?？梢允褂枚喾N水性載體，例如水、緩沖水溶液、0.4％的鹽水、0.3％甘氨酸等。還可以把本發(fā)明的因子VII的變體配制成脂質(zhì)體制劑，用于向受傷部位輸送或定位。在例如US4,837,028、US4,501,728和US4,975,282中對脂質(zhì)體制劑作了一般性的描述。
可以配制靜脈灌注用的藥物組合物使其包含250ml無菌的格林溶液和10mg因子VIIa和/或因子XIII。制備非腸胃給藥用的組合物的實(shí)際方法將是已知的或者對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，更詳細(xì)地描述在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA(1990)中。
簡言之，適用于本發(fā)明的藥物組合物是通過把因子VIIa或因子XIII或因子VIIa與因子XIII(優(yōu)選是純化形式的)的組合與合適的助劑和合適的載體或稀釋劑混合而制得的。合適的生理上可以接受的載體或稀釋劑包括無菌的水和鹽水。組合物可以包含藥學(xué)上可接受的助劑以接近生理?xiàng)l件，例如調(diào)節(jié)pH的試劑和緩沖劑、調(diào)節(jié)滲透性的試劑等，例如乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等。合適的助劑還包括能夠穩(wěn)定純化的因子VIIa和/或因子XIII的鈣、蛋白質(zhì)(例如白蛋白)或其它惰性的多肽(例如雙甘氨肽)或氨基酸(例如甘氨酸或組氨酸)。其它生理上可以接受的助劑有非還原性的糖、多元醇(例如山梨醇、甘露醇或甘油)、多糖(例如低分子量的環(huán)糊精)、去污劑(例如山梨醇酯)和抗氧化劑(例如亞硫酸氫鹽和抗壞血酸)。助劑的濃度一般為0.001-4％w/v。藥物組合物還可以包含蛋白酶抑制劑例如抑肽酶或氨甲環(huán)酸和防腐劑。而且，制劑還可以包含TFPI-抑制劑和/或因子VIII。
可以常規(guī)的眾所周知的滅菌技術(shù)給組合物滅菌?？梢栽跓o菌條件下把所得的水溶液包裝備用或者過濾，并且冷凍干燥，在給藥前把冷凍干燥后的制劑與無菌的水溶液混合。
在這些制劑中，因子VIIa、因子XIII或因子VIIa與因子XIII的組合的濃度可以在很寬的范圍內(nèi)變化，即從低于大約0.5％重量，通常為或至少為大約1％重至高達(dá)15或20％重量，并且將主要根據(jù)液體的體積、黏度等，按照具體選定的給藥方式進(jìn)行選擇。
優(yōu)選通過注射或灌注，特別是注射方式給藥。因此，把因子VIIa和因子XIII配制成適合靜脈內(nèi)給藥的制劑，例如是同時(shí)含有因子VIIa和因子XIII的一種劑型的溶解的冷凍干燥粉末或液體制劑，或者是含有因子VIIa的一種劑型的溶解的冷凍干燥粉末或液體制劑和含有因子XIII的另一種劑型的溶解的冷凍干燥粉末或液體制劑。
局部輸送因子VIIa和因子XIII，例如局部服用可以通過例如噴灑、灌注、雙氣球?qū)Ч?double balloon catheter)、印模膏(stent)、插入血管的移植片或印模膏、用于給氣球?qū)Ч馨碌乃z或其它熟知的方法。用于要求日常維護(hù)水平的急救主體時(shí)，可以通過使用便攜式泵體系來連續(xù)地灌注因子VIIa和因子XIII。在任何情況下，藥物組合物都應(yīng)當(dāng)能提供一定量的足以有效地治療主體的因子VIIa和因子XIII。
因子VIIa和因子XIII的組合在體外的血塊牢固度試驗(yàn)和血纖蛋白溶解試驗(yàn)中表現(xiàn)出了協(xié)同作用，而且，因子VIIa和因子XIII的組合在形成穩(wěn)定的血纖蛋白血塊、增大血塊的半溶解時(shí)間、增大血塊的強(qiáng)度和增大對血纖蛋白溶解的抵抗力方面都表現(xiàn)出了協(xié)同作用。
可以服用含有因子VIIa和因子XIII的組合來進(jìn)行預(yù)防和/或治療。在治療應(yīng)用中，給患有上述疾病的主體服用一定量的足以治愈、減輕或部分控制疾病及其并發(fā)癥的組合物。把足以實(shí)現(xiàn)這個(gè)目的的數(shù)量定義為＂有效量＂或＂治療有效量＂。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)明白，達(dá)到這個(gè)目的的有效量將取決于疾病或損傷的嚴(yán)重程度以及主體的重量和總的狀況。必須牢記，本發(fā)明的物質(zhì)一般可用于嚴(yán)重的疾病或損傷狀況，即威脅生命或可能威脅生命的情況。在這樣的情況下，考慮到要最大限度地減少外來物質(zhì)和人類身體中一般缺乏因子VIIa和因子XIII的免疫原性，通過實(shí)施治療的醫(yī)生服用相當(dāng)過量的這些組合物是可能的，并且也感到有必要。
在預(yù)防性應(yīng)用中，給易感主體或其它處于病態(tài)或受傷成脅下的主體服用含有因子VIIa和因子XIII的組合物來增強(qiáng)主體自身的凝血能力，把這樣的數(shù)量定義為“有效預(yù)防的劑量”。
單次或多次服用組合物的劑量水平和模式可以由實(shí)施治療的醫(yī)生選定。每天或每周可以服用組合物一次或多次。這種藥物組合物的有效量是能在臨床上提供顯著的針對流血事件的效果的數(shù)量。這樣的數(shù)量將部分地取決于被治療的特定疾病、主體的年齡、體重和總的健康狀況以及其它對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是很顯然的因素。
一般在預(yù)期的流血之前或者在流血開始的時(shí)候，服用一個(gè)單位劑量的組合物。然而，根據(jù)給定的劑量和主體的狀況，還可以服用多個(gè)劑量，優(yōu)選以2-4-6-12小時(shí)的間隔服藥。
組合物可以是同時(shí)包含合適濃度的因子VIIa和因子XIII的單個(gè)的制劑，還可以是由包含因子VIIa的第一種劑型和包含因子XIII的第二種劑型以及選擇性使用的一種或多種包含因子VIII和/或TFPI抑制劑的其它單位劑型的試劑盒形式。在這種情況下，因子VIIa和因子XIII應(yīng)當(dāng)按順序服用，優(yōu)選在相互間隔大約1-2小時(shí)內(nèi)，例如在相互間隔30分鐘內(nèi)，更優(yōu)選在相互間隔10分鐘內(nèi)，更加優(yōu)選在相互間隔5分鐘內(nèi)服用?？梢允紫确脙煞N單位劑型中的任何一種。
由于本發(fā)明涉及通過用可以單獨(dú)服用的活性組份的組合物進(jìn)行處理來預(yù)防或治療流血事件或進(jìn)行凝血治療，所以本發(fā)明還涉及以試劑盒形式來組合單獨(dú)的藥物組合物。試劑盒包括至少兩種單獨(dú)的藥物組合物。試劑盒包括用于容納單獨(dú)的組合物的容器，例如單個(gè)的瓶子或單個(gè)的箔包裝。典型的試劑盒包括服用單獨(dú)的組份的說明書。當(dāng)單獨(dú)的組份優(yōu)選以不同的劑型、以不同的藥劑間隔服用時(shí)或者當(dāng)組合物的單個(gè)組份的劑量需要由實(shí)施治療的醫(yī)生精確確定時(shí)，使用試劑盒形式是特別有利的。
試驗(yàn)對因子VIIa的活性試驗(yàn)用于測試因子VIIa的活性，從而選擇合適的因子VIIa的變體的合適的試驗(yàn)作為一種簡單的初步的體外試驗(yàn)來進(jìn)行體外水解試驗(yàn)可以試驗(yàn)天然的(野生型)因子VIIa和因子VIIa變體(以后均稱為＂因子VIIa＂)的特定活性，還可以對它們進(jìn)行平行試驗(yàn)以直接比較它們的特定活性。試驗(yàn)在微量滴定盤(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進(jìn)行。把最終濃度為1mM的生色底物D-Ile-Pro-Arg-對硝基-N-?；桨?S-2288，Chromogenix，Sweden)加入因子VIIa(最終濃度為100nM)在含有0.1M NaCl，5mM CaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白的50mM pH7.4的Hepes中。在SpectraMaxTM340盤式讀數(shù)計(jì)(Molecular Devices，USA)中連續(xù)測定405nm處的吸收。在20分鐘的溫育期間吸收得到了發(fā)展，在減去不含酶的空白孔中的吸收后，用來計(jì)算變體與野生型因子VIIa的活性的比值比值＝(因子VIIa的變體的A405nm)/(野生型因子VIIa的A405nm)基于此，可以鑒別出活性相當(dāng)于或高于天然因子VIIa的因子VIIa的變體，例如其中變體的活性與圖1中所示的天然因子VII的活性的比值在1.0左右和高于1.0的變體。
還可以使用生理上的底物例如因子X，合適地，在100-1000nM的濃度下測定因子VIIa或因子VIIa變體的活性，其中在加入合適的生色底物(例如S-2765)后，測定產(chǎn)生的因子Xa。此外，活性試驗(yàn)可以在生理溫度下進(jìn)行。
還可以在生理濃度(當(dāng)模擬血友病A時(shí)，減去因VIII)時(shí)包含所有相關(guān)的凝血因子和抑制劑以及活化的血小板(如Monroe et al.(1997)Brit.J.Haematol.99，542-547的第543頁中所述，在此通過參考文獻(xiàn)引入)的試驗(yàn)中測定因子VIIa或因子VIIa變體生產(chǎn)凝血酶的能力。
對因子XIII的活性試驗(yàn)一種測試因子XIII的谷胺酰胺轉(zhuǎn)移酶活性從而選擇合適的因子XIII的變體的合適的試驗(yàn)可以簡單地例如按照Methods of Enzymology，Vol.45(1976)，Proteolytic Enzymes，Part B，pages177-191(Ed.Lorand，L.)中所述的體外試驗(yàn)進(jìn)行。
進(jìn)一步通過下列實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)說明，然而，不應(yīng)當(dāng)把這些實(shí)施例解釋為對保護(hù)范圍的限定。說明書前面部分和下列實(shí)施例中所公開的特征獨(dú)自或組合起來都是以其不同的方式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的材料。
實(shí)施例實(shí)施例1因子XIII增強(qiáng)因子VIIa誘發(fā)的血纖蛋白凝塊的形成。
在微量滴定孔中，用含有20nM Hepes、150mM NaCl和5mM CaCl2，pH7.4的緩沖液把含有檸檬酸鹽的正常人血漿(NHP)稀釋到1/10(總體積為250μl)，通過SpecramaxTM340(Molecular Devices，Sunnyvale CA)在600nm處光密度的增大來監(jiān)測血纖蛋白凝塊的形成。
在大約2500-3000秒時(shí)得到血塊的自發(fā)性形成。圖1顯示10nM重組因子VIIa(rFVIIa)(從Novo Nordisk A/S Bagsvaerd，Denmark得到)把凝血時(shí)間縮短到1600秒(n＝2)。當(dāng)把30nM因子XIII(FXIII)(從American DiagnosticaInc，Greenwich，CT得到)與10nM rFVIIa(n＝3)一起加入時(shí)，凝血時(shí)間得到了進(jìn)一步的縮短。在FXIII存在下形成的凝塊比沒有FXIII存在時(shí)形成的凝塊更透明(更低的最大OD)，表明加入FXIII產(chǎn)生了含有更薄纖維的網(wǎng)眼更細(xì)的血纖蛋白凝膠結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例2在因子VIIa-誘發(fā)的血塊形成期間輔助因子XIII的存在增大了對血纖蛋白溶解降解的抵抗力與含有相同數(shù)量的血纖蛋白并且排列成厚纖維或交聯(lián)更少的纖維的凝塊相比，由薄纖維構(gòu)成的血纖蛋白凝塊的機(jī)械強(qiáng)度更大，更難以降解。圖2中所示的試驗(yàn)說明，輔助因子FXIII(30nM)延長了在rFVIIa和組織纖溶酶原活化劑(t-PA，American Diagnostica)存在下形成的凝塊的血纖蛋白凝塊的溶解時(shí)間。在有或沒有30nM XIII存在下，通過把25μl NHP加入225μl含有50 nM rFVIIa和0.5nM重組tPA的20nM Hepes，150mM NaCl，5mMCaCl2，pH7.4中來誘發(fā)血塊的形成。通過一臺Spectramax_340在600nm處以O(shè)D600nm的增大以及之后軌跡向基線的返回來監(jiān)測血塊的形成以及之后由tPA-介導(dǎo)的纖溶酶原活化所誘發(fā)的血塊溶解。圖2顯示，在這些條件下，由于FXIII的存在，血塊的溶解時(shí)間被明顯地延長了。
實(shí)施例3因子VIIa和因子XIII的組合物增大了血塊的最大牢固度，增大了對血纖蛋白溶解的抵抗力對添加了6nM重組的組織型纖溶酶原活化劑(t-PA，AmericanDiagnostica)的含有檸檬酸鹽的正常人血漿進(jìn)行血栓彈性譜圖(Thrombelastograph)測量，分析了單獨(dú)加入1nM rFVIIa(從Novo Nordisk A/SBagsvaerd，Denmark得到)或者把1nM rFVIIa和各種濃度的因子XIII(FXIII，Haematologic Technologies，HCXIII-0160，Lot N1212，)一起加入時(shí)的影響(FXIII對最大的血塊牢固度(MCF)和血塊對t-PA介導(dǎo)的溶解的抵抗力的影響。通過加入Innovin(最終濃度稀釋2000倍，Dade Behring # 526945)和鈣(最終濃度15mM)在20mM HEPES，150mM NaCI，pH7.4緩沖液中的濃度來啟動(dòng)凝血。
使用測得的血栓彈性譜圖分析rFVIIa和FXIII對血塊的最大牢固度(MCF)和血塊對由t-PA-介導(dǎo)的血纖蛋白溶解的抵抗力的影響。在加入rFVIIa和/或FXIII之前得到的MCF是25mm，溶解一半的血塊所需要的時(shí)間為12.3分鐘(圖3)。加入逐漸增大的濃度的FXIII(0-40nM)沒有改變MCF；然而，觀察到溶解一半血塊的時(shí)間隨劑量而延長，最佳在30nM FXIII時(shí)(溶解一半血塊的時(shí)間14.3分鐘，圖3)。同樣地，加入rFVIIa(1nM)導(dǎo)致對血塊的保護(hù)，使其免受t-PA-介導(dǎo)的血纖蛋白溶解(溶解一半血塊的時(shí)間16.4分鐘)，而對MCF沒有任何影響(圖3)。然而，在一起加入rFVIIa(1nM)和FXIII(30nM)時(shí)，觀察到MCF的增大(29mm)以及深度的免受血纖蛋白溶解的保護(hù)作用(溶解一半血塊的時(shí)間27.1分鐘)(圖3)。這些結(jié)果綜合起來證明，向血漿中加入rFVIIa和FXIII，以協(xié)同方式改善了機(jī)械強(qiáng)度和對t-PA-介導(dǎo)的血纖蛋白溶解的抵抗力。
權(quán)利要求
1.包含因子VIIa和因子XIII的藥物組合物。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中因子VIIa是因子VII的變體。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中因子VIIa是人類因子VIIa。
4.權(quán)利要求1或3的組合物，其中因子VIIa和因子XIII是重組的人類因子VIIa和重組的人類因子XIII。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，其中因子XIII是因子XIII的a2-二聚體。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的組合物，其中因子XIII是活化的因子XIII。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的組合物，其中組合物還包含TFPI抑制劑。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的組合物，其中組合物還包含因子VIII。
9.含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
10.權(quán)利要求9的試劑盒，包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和藥學(xué)上可接受的載體；c)以第三種單位劑型存在的有效量的TFPI抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體；和d)用于容納所說的第一、第二和第三種劑型的容器。
11.含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和TFPI抑制劑以及藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
12.含有用于治療流血事件的治療劑的試劑盒，它包含a)以第一種單位劑型存在的有效量的因子VIIa和藥學(xué)上可接受的載體；b)以第二種單位劑型存在的有效量的因子XIII和TFPI抑制劑以及藥學(xué)上可接受的載體；和c)用于容納所說的第一和第二種劑型的容器。
13.權(quán)利要求9-12中任一項(xiàng)的試劑盒，還包含因子VIII，它或者被配制成單獨(dú)的單位劑型或者包含在還包含一種或多種選自因子VIIa、因子XIII或TFPI抑制劑的化合物的單位劑型中。
14.因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于治療主體的流血事件的藥物中的用途。
15.因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于減少主體的凝血時(shí)間的藥物中的用途。
16.因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于延長正常的哺乳動(dòng)物血漿中血塊的溶解時(shí)間的藥物中的用途。
17.因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于增大正常的哺乳動(dòng)物血漿中血塊的強(qiáng)度的藥物中的用途。
18.因子VIIa和因子XIII的組合在生產(chǎn)用于增強(qiáng)正常人血漿中血纖蛋白凝塊的形成的藥物中的用途。
19.增強(qiáng)主體中血纖蛋白凝塊的形成的方法，該方法包括給主體服用有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合。
20.治療主體的流血事件的方法，包括給主體服用有效量的因子VIIa和有效量的因子XIII的組合。
21.權(quán)利要求19或20的方法，其中因子VIIa和因子XIII以一劑形式服用。
22.權(quán)利要求19或20的方法，其中因子VIIa和因子XIII是按照順序服用的。
全文摘要
本發(fā)明涉及因子VIIa和因子XIII在治療或預(yù)防流血事件中的用途。
文檔編號A61K38/48GK1429117SQ01809311
公開日2003年7月9日 申請日期2001年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月10日
發(fā)明者拉斯·C·彼得森, 烏爾拉·赫得納, 拉斯馬斯·羅克耶爾 申請人:諾沃挪第克公司