專利名稱：N－葡萄糖基－n－二硫代羧酸－l－氨基酸鈉鹽在鉑驅(qū)排中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-葡萄糖基-N-二硫代羧酸-L-氨基酸鈉鹽在鉑驅(qū)排中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的提供下式的N-葡萄糖基-N-二硫代羧基-L-氨基酸鈉鹽作為含鉑化療藥物，尤其順鉑的解毒劑的應(yīng)用。 其中R選自H、CH3、CH2C6H5、CH(OH)CH3和CH2SH。
該類化合物的制備方法公開在彭師奇、王超、趙明等的中國專利ZL951063413(驅(qū)鎘藥物及它們的合成方法和應(yīng)用)以及Wang Chao，Peng ShiQi等，synthesis of Novel Chelating Agents and Their effect of CadmiumDecorproation，Chem，Res Toxicol，1999，12(4)，331-334中，在該專利中同時公開了該類化合物作為驅(qū)鎘藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明針對順鉑的嚴重腎毒性以及通式所示的化合物對重金屬中毒的緩解作用，采用協(xié)同用藥方案，探索通式所示的化合物在腫瘤化療中的應(yīng)用。
本發(fā)明對腫瘤接種24小時后的小鼠進行順鉑治療，給藥后第二天即可引起血尿素、血肌酐、肌酐清除率、尿鈉排泄，以及尿滲透壓明顯改變，其中尿鈉排泄、肌酐清除率和血尿素氮的改變與對照組呈非常顯著差異(P＜0.001)。順鉑治療四天后，腎損害最明顯，可觀察到血尿素氮、血肌酐和尿蛋白排泄大幅度上升并達到峰值；尿鈉排泄、尿滲透壓和肌酐清除率大幅度降低。這些指標與對照組呈非常顯著性差異(P＜0.01至0.001)。順鉑治療6天后，腎損害癥狀減輕，血尿素氮、血肌酐和尿蛋白排泄回落，肌酐清除率稍稍恢復(fù)，尿鈉排泄和尿滲透壓仍保持低水平。順鉑治療8天后腎功能開始恢復(fù)，尿蛋白排泄、尿鈉排泄和肌酐清除率恢復(fù)至正常水平，血尿素氮和肌酐清除率與正常值相比仍有顯著性差異(P＜0.01至0.001)，尿滲透壓仍保持非常低的水平。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在順鉑治療腫瘤接種小鼠的同時給予本發(fā)明所述的通式化合物，四天后不出現(xiàn)腎損傷。若在順鉑治療腫瘤接種小鼠24小時后再用本發(fā)明所述的通式化合物處理，四天后可見一定程度的腎損害。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，同時用順鉑和本發(fā)明所述的通式化合物治療腫瘤接種小鼠，以及用順鉑治療腫瘤接種小鼠24小時后再用本發(fā)明所述的通式化合物處理，都有明顯的治療作用，本發(fā)明所述通式化合物不影響順鉑的療效。
為了闡明本發(fā)明，下面用實施例詳細解釋本發(fā)明的技術(shù)關(guān)鍵，應(yīng)當指出的是，這些實施例完全是例證性的，它們對本發(fā)明沒有任何意義的限制。
(4)往試管底部的乳白色膠狀物中加9ml滅菌生理鹽水，用吸管輕輕吹氣，使瘤細胞均勻浮起。取100ul該懸浮液加至9.9ml滅菌生理鹽水中，混勻，得100倍稀釋液，混勻，加蓋，放入冰中待用。
(5)取100ul上面的瘤細胞稀釋液置入Eppendoff小管中，加100ul臺盼蘭染液，混勻。取少許該混勻液加至計數(shù)板的計數(shù)池內(nèi)，于顯微鏡下計算4個大格中被染上藍色的存活瘤細胞的個數(shù)。按下式計算原液中的存活瘤細胞數(shù) (6)將原液中的存活瘤細胞稀釋成2.0×107個/ml，用于接種。
(7)在無菌條件下用1ml腹水瘤細胞接種液，用2％碘酒棉球和75％酒精棉球在昆明種小鼠右側(cè)腹下消毒。并注入0.2ml瘤細胞液，緩緩抽出針頭。按此方法給每批40只昆明種小鼠接種，隨機分為4組，放入動物室飼養(yǎng)。
二、治療劑配制(1)順鉑注射液的配制臨用前在適宜的容器中將20mg順鉑粉劑與20ml滅菌生理鹽水混合，使充分溶解，用注射器吸取10ml順鉑溶液，棄去。往容器中用注射器加入10ml滅菌生理鹽水，將剩余的溶液稀釋成濃度為0.5mg/ml的順鉑注射液。
(2)通式化合物注射液的配制臨用前準確稱取其中R為CH2SH的通式化合物的滅菌生理鹽水，使溶解成濃度為8.44mg/ml的注射液。
三、腫瘤的治療腫瘤接種24小時后，各組小鼠分別進行處理。
(1)空白對照組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔和左側(cè)腹腔各注射滅菌生理鹽水10ml/kg.bw。
(2)順鉑治療組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔注射順鉑注射液10ml/kg.bw，左側(cè)腹腔注射滅菌生理鹽水10ml/kg.bw。
(3)順鉑治療同時通式化合物解毒組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔注射順鉑注射液10ml/kg.bw，左側(cè)腹腔注射通式化合物注射液10ml/kg.bw。
(4)順鉑治療24小時后通式化合物解毒組腫瘤接種昆明種小鼠的右側(cè)腹腔注射順鉑注射液10ml/kg.bw，24小時后左側(cè)腹腔注射通式化合物注射液10ml/kg.bw。
各組小鼠正常飼養(yǎng)，15天后各組荷瘤小鼠處死，取瘤稱重，按下式計算抑瘤率。 獲得的數(shù)據(jù)以(x±sx)表示，組間用樣本均數(shù)比較，t檢驗。所述腫瘤治療實驗重復(fù)2次。
結(jié)果見表1。
表1 通式化合物對順鉑治療作用的影響*
*n均為10；所有組與空白對照組相比均有非常顯著差異，P＜0.001，順鉑治療并用通式化合物保護組與單純順鉑治療組相比沒有顯著差異，P＞0.05表1的數(shù)據(jù)說明，順鉑可用有效地抑制接種S180腹水瘤小鼠的腫瘤生長，與空白對照組相比，小鼠瘤重顯示非常顯著的差異(P＜0.001)。順鉑治療的同時或24小時之后使用通式化合物輔助治療，不會影響順鉑的療效，小鼠瘤重不顯示顯著差異(P＞0.05)。
用本發(fā)明通式化合物的其它化合物進行同樣的實驗，取得了類似的結(jié)果。
實驗二 順鉑對健康大鼠腎功能的損傷(1)順鉑注射液的配制臨用前20mg順鉑數(shù)值劑用20ml滅菌生理鹽水溶解，配制成濃度為1mg/ml的注射液待用。
(2)實驗動物處置80只體重250g左右的Wistar大鼠飼養(yǎng)1周適應(yīng)環(huán)境后，隨機分為8組，其中2-1，4-1，6-1和8-1組大鼠腹腔注射順鉑注射液6ml/kg.bw；2-2，4-2，6-2和8-2組大鼠腹腔注射滅菌生理鹽水6ml/kg.bw。2-1和2-2組腹腔注射2天后處死，4-1和4-2組腹腔注射4天后處死，6-1和6-2組腹腔注射6天后處死，8-1和8-2組腹腔注射8天后處死。各組大鼠處死前均取6小時尿液。
各組大鼠取尿之后腹腔注射2％戊巴比妥納(40ml/kg.bw)麻醉，開胸，用注射器直接刺入右心室內(nèi)取約5ml血裝入試管于4℃冰箱中放置待用。摘取肝和腎，剝除包膜及周圍結(jié)締組織，用去離子水沖洗4次后用濾紙吸干，稱重，置-25℃冰箱待用。
(3)尿樣處置收集到的尿樣用ERMA Clnal折射儀測定尿滲透壓，用Na+/K+/Cl-分析儀測定尿鈉，用考馬斯亮蘭(朱忠勇主編，實用醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)，人民軍醫(yī)出版社，北京，1992，940)測定尿蛋白，用飽和苦味酸法(湖南醫(yī)學(xué)院第二附屬檢驗科編，臨床生經(jīng)檢驗，湖南科學(xué)技術(shù)出版社，長沙，1983，417)。結(jié)果見表2。
表2 順鉑對健康大鼠尿液生化指標的影響
(4)血樣處置收集到的血樣于4℃冰箱放置4小時后2000轉(zhuǎn)/分離心制備血清。得到的血清用全自動生化分析儀測定血清尿素氮和血清肌酐，結(jié)果見表3。
表3 順鉑對健康大鼠血液生化指標的影響
實驗三 通式化合物對鉑的健康大鼠腎操作傷的保護作用(1)順鉑注射液按試驗二的方法配制。
(2)通式化合物注射液的配制臨用前準確稱取R為CH2SH通式化合物適量，用滅菌生理鹽水配成濃度為16.875mg/ml的溶液。
(3)10％甲醛溶液的配制10ml甲醛用蒸餾水稀釋至100ml，待用。
(4)動物處置110只體重250g左右的Wister大鼠飼養(yǎng)1周，適度環(huán)境后隨機分為11組，其中4-1和6-1組為空白對照組，左側(cè)腹腔注射來滅菌生理鹽水6m/Kg.bw；4-2組和6-2組左側(cè)腹腔注射順鉑溶液6ml/Kg.bw；4-3組和6-3組左側(cè)腹腔注射順鉑注射液6ml/Kg.bw后右側(cè)腹腔立即注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw；4-4組和6-4組左側(cè)腹腔注射順鉑注射液6ml/Kg.bw 24小時后，右側(cè)腹腔注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw；4-5組和6-5組左側(cè)腹腔注射順鉑注射液6ml/Kg.bw72小時后，右側(cè)腹腔注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw；4-6組左側(cè)腹腔注射通式化合物注射液6ml/Kg.bw。4-1至4-6組4天后處死取樣，6-1至6-5組6天后處死。
(5)樣本采集抽血后立即摘取右側(cè)腎臟，沖洗干凈后用不銹鋼刀片切成1.0×0.2×0.5cm3的小塊，置10％甲醛溶液中固定。
(6)病理切片按文獻(鄒萬忠主編，腎臟病理與臨床，湖南科學(xué)技術(shù)出版社，長沙，1993，4-13)制作。
(7)采集的樣品按實施例4的操作檢測，4天后處死取樣的結(jié)果見表4-7。
表4、通式化合物對單次順鉑治療治療鉑在組織蓄積(ug/g組織)的影響
*與空白對照組比較，P＜0.05；**與空白對照組比較，P＜0.01；***與空白對照組比較，P＜0.001；#與順鉑治療組比較，P＜0.05表5 順鉑治療4天后通式化合物對鉑致大鼠腎髓質(zhì)區(qū)組織變化的影響
-代表未觀察到；+代表稍許；++代表中度；+++代表嚴重；++++代表很嚴重表6、順鉑治療4天后通式化合物對鉑致血液中微量元素的影響
*與空白對照組比較，P＜0.05；**與空白對照組比較，P＜0.01；#與順鉑組比較，P＜0.05；##與順鉑組比較，P＜0.01表7 順鉑治療4天后通式化合物對鉑致肝微量元素(ug/g濕組織)的影響
*與空白對照組比較，P＜0.05；**與空白對照組比較，P＜0.01。
表7 順鉑治療4天通式化合物對鉑致腎微量元素(ug/g濕組織)的影向
*與空白對照比較，P＜0.05；**與空白對照組比較P＜0.01；***與空白對照組比較P＜0.001。
從本實驗的上述結(jié)果可以看出，本發(fā)明通式化合物可以減少鉑在組織中的蓄積，促進鉑從腎臟排出，降低鉑對腎組織的毒性作用，從而驗證了本發(fā)明通式化合物作為鉑解毒劑的效果。
權(quán)利要求
1.下面通式的化合物作為鉑解毒劑的應(yīng)用 其中R選自H、CH3、CH2C6H5、CH(OH)CH3和CH2SH。
2.下面通式的化合物在含鉑化療藥物治療腫瘤時作為緩解含鉑化療藥物毒性的解毒劑的應(yīng)用 其中R選自H、CH3、CH2C6H5、CH(OH)CH3和CH2SH。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述含鉑化療藥物是順鉑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述通式的化合物與含鉑化療藥物同時或在含鉑化療藥物之后應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述腫瘤為頭頸部腫瘤。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述腫瘤是生殖系統(tǒng)腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及下面通式的化合物在含鉑化療藥物治療腫瘤時作為緩解鉑毒性的解毒劑的應(yīng)用:其中R選自H、CH
文檔編號A61P39/00GK1343493SQ01141628
公開日2002年4月10日 申請日期2001年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月29日
發(fā)明者彭師奇, 王超, 趙明 申請人:北京艾葉醫(yī)藥技術(shù)有限公司