專利名稱：積雪甙防粘膜及制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用材料，具體涉及一種積雪甙防粘膜及制備方法。
粘連是外科手術(shù)后常見的并發(fā)癥，其發(fā)生率極高，是長期困擾外科手術(shù)的難題，如腹部外科手術(shù)后腸粘連發(fā)生率高達80～90％，其中又有30％左右最終發(fā)展為腸梗阻，給病人造成了極大的痛苦，因此，如何有效解決手術(shù)后粘連的發(fā)生是近十幾年來國內(nèi)外外科研究的重要課題，在不斷改進外科手術(shù)技巧的同時也進行抗粘連藥物的尋找與研究。
外科手術(shù)后的防粘連藥物的臨床應用面較寬，胸外科、腹外科、婦外科等均需有應用。美國曾就其本國外科防粘連藥物的應用做過市場估計外科手術(shù)造成的粘連每年就占近800萬件，其中僅腹部粘連的手術(shù)經(jīng)濟負擔每年約為1.1億美元。而我國擁有12億人口，其市場需求空間將更為可觀。
有關資料報道，國外已有不少學者開始研究以玻璃酸鈉為骨架，采用各種方法將某些藥物成分與玻璃酸鈉相結(jié)合以期研制出較好的抗粘連藥物，如美國的Genzyme′s公司以玻璃酸鈉為原料研制成膜劑，據(jù)從有關方面了解到，這一產(chǎn)品即將得到美國F.D.A.的許可；另外，據(jù)最近的美國外科雜志報道，玻璃酸鈉與CMC(即羧甲基纖維素)結(jié)合制成的外科用生物膜已進行臨床前研究。另一上市商品名為高分子材料防粘膜GORE-TEX，一張6cm×12cm的膜折合人民幣2000元。因此，研制生產(chǎn)有效的抗術(shù)后粘連藥物是我國臨床醫(yī)學的迫切需要。
積雪草產(chǎn)于我國的江蘇、浙江、廣東、福建、廣西等多個外省市植物資源極為豐富。積雪總甙是運用現(xiàn)代分離技術(shù)從中藥積雪草Centella asiatia(L.)Urban[Hydrocotyle asiatia L.]中提取分離精制的植物有效成份，主含積雪草甙(asiaticoside)和羥基積雪草甙(madecassoside)，其成份的化學結(jié)構(gòu)明確，現(xiàn)代藥理藥效實驗證實，它具有以下功能能促進傷口愈合，防止粘連，軟化、縮小以至避免疤痕，恢復皮膚的平滑及彈性，淡化色素沉著等功能。其藥理作用機理主要是激活皮膚上皮細胞，促進正常肉芽組織的形成，使創(chuàng)面迅速愈合；同時它對成纖維細胞的增殖有明顯抑制作用，對無秩序的瘢痕疙瘩增生具有抑制和緩解作用，可防止粘連發(fā)生和緩解粘連的形成，以達到較好的治療目的與效果。臨床上它已有廣泛應用，對靜脈功能不良引起的長期不愈下肢潰瘍、手術(shù)等造成的創(chuàng)傷和肌腱粘連、灼燒等因素所致的傷面恢復后形成的增生性瘢痕疙瘩、炎癥引起的損傷性粘連、其它因素產(chǎn)生的長期皮膚潰瘍、以及硬皮病和皮膚淀粉樣變性等均有顯著的治療效果。
積雪甙防粘膜用于治療外科手術(shù)后粘連，其作用機理是利用積雪甙防粘膜中藥成分積雪草總甙能抑制肉芽組織在成熟過程中成纖維細胞的增殖，從而抑制和緩解了無序瘢痕疙瘩的增生，到達抗術(shù)后粘連的治療目的。
本發(fā)明的目的在于應用積雪甙設計一種療效好、成本低的生物抗粘膜。
本發(fā)明提供了一種積雪甙防粘膜，它是由積雪草總甙與玻璃酸鈉組成的膜劑。
本發(fā)明利用玻璃酸鈉分子具有良好的立體空間構(gòu)架，將它作為有效成分積雪甙的載體骨架，同時因玻璃酸鈉具有良好的彈性、潤滑性、滲透性，故積雪甙防粘膜能很好地粘附于創(chuàng)口、使局部藥物濃度維持較高水平，并能延緩藥物釋放時間，更好的發(fā)揮積雪草總甙抗組織粘連的作用。
玻璃酸鈉(Sodium Hyaluronate)廣泛存在于人體器官及動物體器官內(nèi)。從雞冠中提取精制純化的玻璃酸鈉為大分子多糖，是由一分子乙酰氨基葡萄糖和一分子葡萄糖醛酸交替排列結(jié)合構(gòu)成的長鏈大分子物質(zhì)。本發(fā)明利用玻璃酸鈉三度空間結(jié)構(gòu)及可塑性好可成膜的特性，在積雪甙防粘膜中，將其作為中藥有效成分的載體骨架而制成膜劑，同時也因其具有良好的彈性、潤滑性及良好的生物相容性，并且在體內(nèi)能逐步被降解吸收，是理想的成膜材料。
積雪草總甙與玻璃酸鈉組成的高分子藥膜，能貼附于創(chuàng)口，提高局部藥物濃度，延緩藥物釋放作用時間，更好的發(fā)揮積雪草總甙抑制成纖維細胞增生、抗組織粘連的作用，從而達到有效防止外科手術(shù)后粘連并發(fā)癥的發(fā)生。
玻璃酸鈉可市售得到，質(zhì)量標準為分子量不低于75萬含量大于90％蛋白含量小于0.5％紫外吸收值(1％水溶液)280nm＜3.0，257nm＜2.0pH5.0～7.0細菌、熱源合格本發(fā)明的積雪甙防粘膜的規(guī)格要求為厚度0.3-0.4厘米，片重約300±30mg(因玻璃酸鈉的吸濕性較強，片重量為±10％)，其中積雪草總甙含量以積雪草甙和羥基積雪草甙的合計量計不低于78mg。膜型根據(jù)臨床需要可作調(diào)整。
本發(fā)明的積雪甙防粘膜的主要藥效學經(jīng)上海第二醫(yī)科大學附屬瑞金醫(yī)院普外科上海消化外科研究所研究結(jié)果如下一、試驗目的本實驗以家兔行胃手術(shù)，并于手術(shù)后在胃前壁切口，腹壁切口內(nèi)側(cè)貼附積雪甙防粘膜即積雪草甙—玻璃酸鈉(Asiaticosides-Sodium Hyaluronate，A-HA)、玻璃酸鈉(Sodium Hyalruonate，HA)膜，以觀察防止術(shù)后粘連的效果。二、受試藥物名稱及批號A-HA膜(990524)(每片含積雪草總甙100mg)HA膜 (981026)提供單位均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院研制。
規(guī)格圓形，直徑4.5cm，厚0.2～0.3cm。三、動物新西蘭大白兔(由上海市洞涇良種飼養(yǎng)場提供)體重平均2.5公斤動物數(shù)36只(雌、雄各半)動物分組對照組N＝12A-HA膜組N＝12HA膜組N＝12四、試驗方法與步驟家兔經(jīng)氯氨酮靜脈麻痹后，腹部正中切口，切口長約6cm，進腔后于胃前壁肌層作2cm切口，然后縫合切口。給藥組分別用A-HA、HA膜(半片)置于胃前壁切口上，然后縫合腹壁切口。對照組作相同手術(shù)，不給藥，逐層縫合切口。五、試驗觀察實驗兔于手術(shù)后第二天正常進食，飲水。每組動物于手術(shù)后4周及8周外死并解剖觀察腹部切口、胃前壁切口愈合及粘連的情況，并作病理檢查。
按國內(nèi)外對粘連程度的分極標準分級，粘連分為0-4級；0級無粘連1級個別疏松，透明薄片狀粘連2級片狀粘連，但粘連索帶無血管，能鈍性分離。
3級粘連較明顯，內(nèi)有少量血管，需銳性分離4級粘連緊密，組織間界限消失解剖后判斷粘連等級，并按0、1、2、3、4級粘連級分別計0、1、2、3、4分，記錄。
取對照組及實驗組胃部創(chuàng)傷部位組織，作病理檢查。六、試驗結(jié)果1、對照組對照組12只兔，3只兔中途死亡。經(jīng)4周與8周解剖觀察，均見腹壁切口及胃壁切口有不同程度的粘連。其中重度粘連(3級或4級)占55.5％(n＝5)，其腹壁切口有粘連帶、胃壁切口與大網(wǎng)膜粘連。中度粘連(2級)占11.1％(n＝5)。無粘連或輕度粘連(0級或1級)占33.3％(n＝3)。2、積雪草甙—玻璃酸鈉(A-HA)膜組A-HA膜組12只兔，手術(shù)后4周與8周解剖。見胃壁切口與大網(wǎng)膜中度粘連(2級)占8.3％(n＝1)。輕度粘連(1級)占33.35(n＝4)。腹壁切口與胃壁切口均光滑無粘連(0級)占58.3％(n＝7)。3、玻璃草甙(HA)膜組HA膜組兔12只，其中1只兔中途死亡。解剖有一只兔見粘連較明顯，腹壁切口內(nèi)側(cè)見粘連束帶形成(3級)占9.0％(n＝1)。中度粘連，胃壁切口與大網(wǎng)膜粘連(1級)占27.2％(n＝3)。無粘連，腹部及胃壁切口均光滑(0級)占45.5％。
對照組、A-HA膜組、HA膜組的病理學檢查手術(shù)部位組織均呈炎性反應，其它未見病理變化。七、討論術(shù)后粘連是外科手術(shù)后易產(chǎn)生的并發(fā)癥。近年來，國內(nèi)外均進行了抗手術(shù)后粘連的研究。本實驗應用上海醫(yī)藥工業(yè)研究院研制的防粘膜，于家兔的外手術(shù)后使用，觀察其抗手術(shù)粘連的效果。
實驗結(jié)果表明手術(shù)后使用抗粘膜后(即于手術(shù)后將膜平置在手術(shù)組織上)，術(shù)后粘連發(fā)生率明顯降低(見表一)。
表一 粘連分級統(tǒng)計表
對腹壁、胃壁藥膜能減輕創(chuàng)傷部位的粘連。經(jīng)統(tǒng)計學處理對照組與給藥組有著顯著性的差異(P＜0.01)。其中以A-HA膜更為有效(見表二)。
表二 粘連級數(shù)百分率
積雪草總甙是從植物提取的有效化合物，國外已廣泛應用于臨床，它能抑制成纖維細胞的增生。玻璃酸鈉是生物高分子多糖，存在于人體組織，在機內(nèi)能逐步被降解和吸收，積雪甙防粘膜中以其作為植物有效成分積雪草總甙的載體，使藥膜能貼附于創(chuàng)口，提高創(chuàng)口局部藥物濃度，又能延緩藥物釋放時間，二者結(jié)合發(fā)揮防止術(shù)后粘連的作用。藥效實驗表明積雪甙防粘膜是一個有效的抗術(shù)后為粘連劑，希望能進一步進行臨床驗證。
本發(fā)明的積雪甙防粘膜的動物急性毒性，經(jīng)上海醫(yī)藥工業(yè)研究院毒理室試驗結(jié)果如下一、實驗目的測定積雪甙防粘膜溶液腹腔注射小鼠的最大耐受量。二、受試物名稱積雪甙防粘膜，批號為990524，片重300mg，每片積雪草總甙含量為100mg。
樣品的制備積雪甙防粘膜能配制的最大濃度為10mg/ml。取積雪草總甙防粘膜兩片，剪成碎片后，用生理鹽水配制成最終體積20ml的溶液。三、動物健康昆明種小鼠(由本院動物房提供，合格證號滬動合證字116號)體重18-22克動物數(shù)20只(雌、雄性各半)四、給藥途徑與給藥量用腹腔注射，每只小鼠的最大給藥容量為0.6ml/20g。五、試驗方法選用健康合格的昆明小鼠20只，雌、雄性各半。每只小鼠腹腔注射積雪甙防粘膜溶液，給藥容量為0.6ml/20g體重。給藥后即刻觀察動物反應情況，連續(xù)觀察7天，記錄毒性反應癥狀和死亡分布情況，并于給藥前、給藥后24小時、48小時、72小時及試驗結(jié)束時稱取小鼠的體重。六、實驗結(jié)果動物反應情況未觀察到任何毒性反應癥狀，觀察期間無一例動物死亡。
體重給藥前、給藥后25小時、48小時、72小時及試驗結(jié)束時小鼠的平均體重分別為18.7±0.7、22.4±1.2、23.4±1.6、23.8±2.2、24.9±1.9。七、結(jié)論小鼠腹腔注射積雪甙防粘膜溶液的LD50值大于300mg/kg。
文獻資料1《國外醫(yī)藥》植物藥分冊于1998年第13卷第5期轉(zhuǎn)載Fitoterapia.-1997，68(5).-413-416.研究報道積雪草提取物的藥理學及毒理學研究。現(xiàn)將有關急性毒性方面的內(nèi)容摘要如下受試物積雪草70％乙醇提取物(CAE，1mg CAE相當于5.95mg干燥原藥材)實驗動物大鼠試驗結(jié)果LD50大于675mg/kg。
文獻資料2英國專利1,123,288文獻報道從植物積雪草中分離得到的有效成分羥基積雪草甙的急性毒性及長期毒性試驗。現(xiàn)將有關急性毒性方面的內(nèi)容摘要如下1、羥基積雪草甙(C48H78O20，Madecassoside)是從積雪草CentellaAsitica(L.)Urban提取、分離得到的。
2、羥基積雪草甙的急性毒性試驗受試物羥基積雪草甙純品實驗動物小鼠(體重約20克)、大鼠(體重約120克)給藥劑量3g/kg、5g/kg(選取預試驗中兩個高劑量組的給藥劑量，每個劑量組20只動物)給藥途徑口服及皮下注射觀察時間14天結(jié)論(1)所有實驗組動物無一例死亡(2)由于藥物的毒性太低，無法求得藥物的半數(shù)致死量(LD50)
本發(fā)明的積雪甙防粘膜的動物長期毒性積雪甙防粘膜作為抗外科手術(shù)后粘連的腹腔內(nèi)用藥，屬一次性給藥，每片藥膜中含積雪草總甙為100mg，其中有效成分積雪草甙和羥基雪草甙的合計含量不低于78mg。
積雪甙防粘膜的小鼠腹腔內(nèi)吸收試驗結(jié)果顯示四天即可達到完全吸收，且動物急性毒性試驗LD50大于300mg/kg，按國家藥品監(jiān)督管理局《中藥新藥研究的技術(shù)要求》中關于長期毒性試驗項下說明，申請免做積雪甙防粘膜的動物長期毒性試驗。
本發(fā)明的另一目是提供了一種積雪甙防粘膜的制備方法，該方法是按處方量分別稱取積雪草總甙及玻璃酸鈉，分別溶解后，混合兩種溶液，以磷酸沖液、生理鹽水溶液調(diào)節(jié)pH與離子強度后，按規(guī)定體積分裝于所需形狀的膜具內(nèi)，冷凍真空干燥，制膜成型，膜片置于無菌、無熱源的一次性平皿后塑封，存放于 5～8℃，干燥避光環(huán)境。
本發(fā)明選擇能有效防止術(shù)后粘連的中藥成分積雪草總甙與具有良好空間架構(gòu)和成膜性的生物大分子物質(zhì)玻璃酸鈉相結(jié)合，制成生物抗粘膜，其療效好，原材料成本相對較低，且市場需求廣闊，因而，積雪甙防粘膜具有很好的開發(fā)應用前景。
實例1、配方積雪草總甙 100.0克玻璃酸鈉 90.0克緩沖液 磷酸緩沖液(P.B.S)生理鹽水溶液 適 量配制方法分別稱取100克積雪草總甙及相對應量的玻璃酸鈉，分別用生理鹽水溶解后，并按一定比例混溶，以磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH6.5按規(guī)定的體積分裝于膜具內(nèi)，冷凍真空干燥，制成1000片尺寸約為直徑6cm，厚度為0.3-0.4cm膜劑。成膜后的膜片置于無菌、無熱源的一次性平皿后塑封。實例2、配方積雪草總甙 100.0克玻璃酸鈉 50.0克其他組份與操作均同實例1。實例3、配方積雪草總甙 100.0克玻璃酸鈉 110.0克其他組份與操作均同實例1。實例4、配方積雪草總甙 100.0克玻璃酸鈉 100.0克其他組份與操作均同實例1。實例5、配方積雪草總甙 50.0克玻璃酸鈉 100.0克其他組份與操作均同實例1。實例6、配方積雪草總甙 100.0克玻璃酸鈉 100.0克生理鹽水操作同實例1，以生理鹽水替代磷酸緩沖液。實例7、配方積雪草總甙 50.0克玻璃酸鈉 100.0克其他同實例6。實例8、配方積雪草總甙 100.0克玻璃酸鈉 50.0克其他同實例6。
權(quán)利要求
1.一種積雪甙防粘膜，其特征在于該防粘膜是由積雪草總甙與玻璃酸鈉組成的膜劑。
2.一種如權(quán)利要求1所述的一種積雪甙防粘膜的制備方法，其特征在于該方法是按處方量分別稱取積雪草總甙及玻璃酸鈉，分別用倍量的溶解后，混合兩種溶液，以磷酸沖液、生理鹽水溶液調(diào)節(jié)pH與離子強度后，按規(guī)定體積分裝于所需形狀的膜具內(nèi)，冷凍真空干燥，制膜成型，膜片置于無菌、無熱源的一次性平皿后塑封，存放于5～8℃，干燥避光環(huán)境。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種積雪甙防粘膜,它是由積雪草總甙與玻璃酸鈉組成的膜劑。本發(fā)明選擇的中藥積雪草總甙能有效防止外科手術(shù)后粘連,應用具有良好彈性、潤滑性、滲透性好的玻璃酸鈉作為載體滑架,制得的防粘膜能很好地粘附于創(chuàng)口,療效好,材料成本低,宜于規(guī)模型工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供了制備方法。
文檔編號A61B17/03GK1353972SQ0012746
公開日2002年6月19日 申請日期2000年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月21日
發(fā)明者蔣毅, 崔明 申請人:國家醫(yī)藥管理局上海醫(yī)藥工業(yè)研究院