專利名稱：樟樹葉煙用香料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種煙用香料的制備方法，具體地指一種樟樹葉煙用香料的制備方法。
背景技術(shù)：
加香加料是卷煙工藝中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是完善產(chǎn)品風(fēng)格的決定性因素和提高卷煙香氣質(zhì)量的有效手段之一。目前煙用香料按香料生產(chǎn)方法的不同主要分為2種，即采用各種分離手段直接從煙草或其它植物中提取的天然香料和采用化學(xué)反應(yīng)合成的香料。樟樹葉中含量豐富的樟葉黃酮和各種維生素，可以有效地防止煙草中尼古丁、苯并芘、放射性元素及大量的自由基等對(duì)人體的危害。樟葉中的多酚類物質(zhì)(樟多酚)可與香煙中尼古丁化合形成無毒復(fù)合物，對(duì)煙堿還有良好的過濾作用。在煙絲中加入不同濃度的樟葉提取物，能降低卷煙焦油含量和焦油的致突變性。樟多酚對(duì)氣相煙引起鼠肺細(xì)胞膜損傷具有抑制作用，可抑制氣相煙自由基引起的膜脂類分子的過氧化作用，對(duì)維護(hù)細(xì)胞膜的流動(dòng)性有良好效果，可以有效地清除由GPCS(香煙氣霧)處理的大鼠肝線粒體產(chǎn)生的脂質(zhì)自由基，能抑制煙氣中有害物質(zhì)的生物活性和它對(duì)生物體基因的惡變，對(duì)“亞硝胺”、“黃曲霉毒素Bi”等其它強(qiáng)致癌物的毒性，也有抑制作用。由于樟樹葉具有上述的多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)有技術(shù)已有將樟樹葉精油用于煙草工業(yè)中報(bào)道，但是并未詳述其工藝過程。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的空白，提供一種樟樹葉煙用香料的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所提供的樟樹葉煙用香料的制備方法，所述方法包括以下步驟(1)原料準(zhǔn)備①選取樟樹葉作為原料、滅菌得到無菌樟樹葉備用；滅菌條件可選用在115°C下滅菌15 20min，為本領(lǐng)域常用技術(shù)手段；滅菌前可將樟樹葉粉碎成樟樹葉粉，使微生物分解樟樹葉時(shí)更快速。②煙葉復(fù)合培養(yǎng)基的制備將煙葉和水按1 5的比例混合后加熱至100°C，并保持1 2小時(shí)，過濾得到煙水，將煙水和微生物固體培養(yǎng)基按3 7 10的比例混合，制成煙葉復(fù)合培養(yǎng)基；制作煙葉復(fù)合培養(yǎng)基在于為其后的微生物培養(yǎng)提供適宜的生長(zhǎng)環(huán)境，促進(jìn)能分解煙草中有機(jī)物，產(chǎn)生香氣的微生物有更大幾率成為優(yōu)勢(shì)菌種。(2)產(chǎn)香微生物的篩選 ①取煙葉5 10g，加入到無菌蒸餾水中，從中取100 1000 μ 1的液體，滴加到由步驟(1)得到的煙葉復(fù)合培養(yǎng)基上，以平板劃線分離或稀釋涂平板法，在有氧或厭氧條件下培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌落后，將煙葉復(fù)合培養(yǎng)基放到體視鏡下篩查，挑取10 50個(gè)酵母菌和/或芽孢桿菌的單菌落；發(fā)明人在大量的試驗(yàn)中得出酵母菌作為能產(chǎn)香微生物的效果更優(yōu)秀，其次為芽孢桿菌，其他的菌體不適宜作為產(chǎn)香微生物的菌種培養(yǎng)。②將挑出的單菌落在煙葉復(fù)合培養(yǎng)基中分別進(jìn)行小量擴(kuò)增培養(yǎng)，將小量擴(kuò)增培養(yǎng)得到的菌液與無菌樟樹葉混合，進(jìn)行小試量的固體堆積發(fā)酵，然后對(duì)發(fā)酵好的樟樹葉進(jìn)行提取，獲得發(fā)酵型樟樹葉提取物；將得到的單菌落做小試培養(yǎng)，并提取其分泌的揮發(fā)油為篩選產(chǎn)香微生物做準(zhǔn)備。③將發(fā)酵型樟樹葉提取物稀釋后添加至香煙中，并通過卷煙加香評(píng)吸篩選所需的產(chǎn)香微生物，然后保存篩得的產(chǎn)香微生物的菌種；需要說明的是，卷煙加香評(píng)吸一般選取 10 15人進(jìn)行人工的香味評(píng)吸，綜合評(píng)價(jià)能夠產(chǎn)生增加醬香和柔和細(xì)膩煙氣作用的微生物作為產(chǎn)香微生物，為本領(lǐng)域常用技術(shù)手段，此處不做贅述。保存篩選出的產(chǎn)香微生物菌種可以將其直接作為以后的發(fā)酵菌種，而不必每次進(jìn)行微生物篩選工作，以簡(jiǎn)化工藝程序。(3)利用步驟O)中得到的產(chǎn)香微生物與無菌樟樹葉混合，進(jìn)行固體堆積發(fā)酵；需要說明的是，如果是將保存的產(chǎn)香微生物菌種取出來進(jìn)行樟樹葉的發(fā)酵，則需要先將保存的菌種活化，其過程為將所述產(chǎn)香微生物的菌種接種到斜面培養(yǎng)基上，置于 20 37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)M 4 使其中的菌種活化，再將活化的菌種接種于添加糖源的液體培養(yǎng)基中，于20 37°C恒溫培養(yǎng)M 4 得到的培養(yǎng)液，將所述培養(yǎng)液離心棄除上清液，所得到的沉淀用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即得到的活化菌種液；斜面培養(yǎng)基優(yōu)選為固體PDA培養(yǎng)基。添加糖源的液體培養(yǎng)基優(yōu)選為PDA液體培養(yǎng)基，更適合酵母菌和芽孢桿菌的生長(zhǎng)。(4)對(duì)步驟(3)得到的發(fā)酵好的樟樹葉進(jìn)行提取，得到樟樹葉煙用香料。上述方法中，步驟(1)中所述的煙葉優(yōu)選為自然陳化一年至兩年的煙葉，其表面的產(chǎn)香微生物較其他的微生物多，為煙葉表面的優(yōu)勢(shì)菌種，使產(chǎn)香微生物的篩選更容易。步驟(1)中所述的煙葉可選為白肋煙葉。步驟( 中和步驟C3)中所述的固體堆積發(fā)酵優(yōu)選為將產(chǎn)香微生物按照1 1 10的質(zhì)量比接種到無菌樟樹葉中，放置于觀 35°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵2 7天，得到發(fā)酵好的樟樹葉。步驟O)中和步驟中對(duì)發(fā)酵好的樟樹葉進(jìn)行提取的方法優(yōu)選為水蒸氣蒸餾法。水蒸氣蒸餾法為本領(lǐng)域業(yè)內(nèi)的常用香料提取方法，制得的香料無其他的殘留物，綠色環(huán)保，為本發(fā)明的優(yōu)選方法，但并不用以限制本發(fā)明。所述水蒸氣蒸餾法為將上述發(fā)酵好的樟樹葉，置于水蒸氣蒸餾裝置中，按發(fā)酵固體與純凈水質(zhì)量比1 10 15的比例加入的純凈水，加熱至100°c，直至發(fā)酵固體與水的混合物開始沸騰，連續(xù)加熱2 10h，收集發(fā)酵型樟樹葉揮發(fā)油，利用95%的乙醇溶液按與揮發(fā)油質(zhì)量比例100 1000 1稀釋揮發(fā)油，得到樟樹葉煙用香料。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用微生物發(fā)酵的方法來獲得煙用香料，可以有效的保存發(fā)酵原料中的活性成分，工藝簡(jiǎn)單，且為香料制備工業(yè)提供了一種新途徑。本發(fā)明所獲得樟樹葉煙用香料可在一定程度上降低香煙對(duì)人體的傷害，且煙氣細(xì)膩，平滑，有潤感和輕微的甜感，透發(fā)性好，喉部刺激性明顯減輕，有釀香和發(fā)酵的酸香，舌面無明顯殘留。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
實(shí)施例1本發(fā)明實(shí)施例提供了一種樟樹葉煙用香料的備方法，包括以下步驟(1)原料準(zhǔn)備①選取干燥的已粉碎的樟樹葉作為原料，在115°C下滅菌15 20min，得到無菌樟樹葉粉備用；②煙葉復(fù)合培養(yǎng)基的制備將自然陳化一年至兩年的白肋煙葉和水按1 5的比例混合后加熱至100°C，并保持1小時(shí)，過濾得到白肋煙水，將白肋煙水和微生物固體培養(yǎng)基按3 7的比例混合，制成煙葉復(fù)合培養(yǎng)基；(2)產(chǎn)香微生物的篩選①取自然陳化一年至兩年的白肋煙葉10g，加入到5ml無菌蒸餾水中，震蕩45min， 從中取100μ 1的液體，滴加到由步驟⑴得到的煙葉復(fù)合培養(yǎng)基上，以平板劃線分離或稀釋涂平板法，在有氧或厭氧條件下培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌落后，將煙葉復(fù)合培養(yǎng)基放到體視鏡下篩查，挑取10 50個(gè)酵母菌和/或芽孢桿菌的單菌落；②將挑出的單菌落在煙葉復(fù)合培養(yǎng)基中分別進(jìn)行小量擴(kuò)增培養(yǎng)，將小量擴(kuò)增培養(yǎng)得到的菌液按照1 10的質(zhì)量比分別加入到無菌樟樹葉粉中，于^ 35°C的培養(yǎng)箱中7 天進(jìn)行小試固體堆積發(fā)酵，然后對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取，獲得發(fā)酵型樟樹葉提取物；③將發(fā)酵型樟樹葉提取物稀釋后添加至香煙中，并通過卷煙加香評(píng)吸篩選所需的產(chǎn)香微生物，然后保存篩得的產(chǎn)香微生物的菌種；(3)利用步驟O)中得到的產(chǎn)香微生物對(duì)樟樹葉進(jìn)行固體堆積發(fā)酵①菌種活化將所述產(chǎn)香微生物的菌種接種到固體PAD培養(yǎng)基上，置于37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h使其中的菌種活化，再將活化的菌種接種于PAD液體培養(yǎng)基中，于37°C 恒溫培養(yǎng)40h得到的培養(yǎng)液，將所述培養(yǎng)液離心棄除上清液，所得到的沉淀用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即得到的活化菌種液；②固體發(fā)酵將活化種子液800ml接種到800g干燥的無菌的樟樹葉粉中，攪拌，使其與種子液充分混合均勻，放置于35°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵2天，得到發(fā)酵好的樟樹葉粉；(4)對(duì)步驟( 得到的發(fā)酵好的樟樹葉粉進(jìn)行提取將上述發(fā)酵好的樟樹葉粉，置于水蒸氣蒸餾裝置中，按發(fā)酵固體與純凈水質(zhì)量比1 12例加入的純凈水，加熱至100°C， 直至發(fā)酵固體與水的混合物開始沸騰，連續(xù)加熱2h，收集發(fā)酵型樟樹葉揮發(fā)油，利用95% 的乙醇溶液按與揮發(fā)油質(zhì)量比例1000 1稀釋揮發(fā)油，得到樟樹葉煙用香料1。實(shí)施例2本發(fā)明實(shí)施例提供了一種樟樹葉煙用香料的備方法，包括以下步驟(1)原料準(zhǔn)備①選取干燥的已粉碎的樟樹葉作為原料，在115°C下滅菌15 20min，得到無菌樟樹葉粉備用；②煙葉復(fù)合培養(yǎng)基的制備將自然陳化一年至兩年的白肋煙葉和水按1 5的比例混合后加熱至100°C，并保持2小時(shí)，過濾得到白肋煙水，將白肋煙水和微生物固體培養(yǎng)基按3 8的比例混合，制成煙葉復(fù)合培養(yǎng)基；(2)產(chǎn)香微生物的篩選
①取自然陳化一年至兩年的白肋煙葉5g，加入到5ml無菌蒸餾水中，震蕩30min， 從中取1000 μ 1的液體，滴加到由步驟(1)得到的煙葉復(fù)合培養(yǎng)基上，以平板劃線分離或稀釋涂平板法，在有氧或厭氧條件下培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌落后，將煙葉復(fù)合培養(yǎng)基放到體視鏡下篩查，挑取10 50個(gè)酵母菌和/或芽孢桿菌的單菌落；②將挑出的單菌落在煙葉復(fù)合培養(yǎng)基中分別進(jìn)行小量擴(kuò)增培養(yǎng)，將小量擴(kuò)增培養(yǎng)得到的菌液按照1 5的質(zhì)量比分別加入到無菌樟樹葉粉中，于^ 35°C的培養(yǎng)箱中4天進(jìn)行小試固體堆積發(fā)酵，然后對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取，獲得發(fā)酵型樟樹葉提取物；③將發(fā)酵型樟樹葉提取物稀釋后添加至香煙中，并通過卷煙加香評(píng)吸篩選所需的產(chǎn)香微生物，然后保存篩得的產(chǎn)香微生物的菌種；(3)利用步驟O)中得到的產(chǎn)香微生物對(duì)樟樹葉進(jìn)行固體堆積發(fā)酵①菌種活化將所述產(chǎn)香微生物的菌種接種到固體PAD培養(yǎng)基上，置于35°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 使其中的菌種活化，再將活化的菌種接種于PAD液體培養(yǎng)基中，于20°C 恒溫培養(yǎng)24h得到的培養(yǎng)液，將所述培養(yǎng)液離心棄除上清液，所得到的沉淀用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即得到的活化菌種液；②固體發(fā)酵將活化種子液IOOml接種到700g干燥的無菌的樟樹葉粉中，攪拌，使其與種子液充分混合均勻，放置于30°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵5天，得到發(fā)酵好的樟樹葉粉；(4)對(duì)步驟(3)得到的發(fā)酵好的樟樹葉粉進(jìn)行提取將上述發(fā)酵好的樟樹葉粉，置于水蒸氣蒸餾裝置中，按發(fā)酵固體與純凈水質(zhì)量比1 15例加入的純凈水，加熱至100，直至發(fā)酵固體與水的混合物開始沸騰，連續(xù)加熱5h，收集發(fā)酵型樟樹葉揮發(fā)油，利用95%的乙醇溶液按與揮發(fā)油質(zhì)量比例100 1稀釋揮發(fā)油，得到樟樹葉煙用香料2。實(shí)施例3本發(fā)明實(shí)施例提供了一種樟樹葉煙用香料的備方法，包括以下步驟(1)原料準(zhǔn)備①選取干燥的已粉碎的樟樹葉作為原料，在115°C下滅菌15 20min，得到無菌樟樹葉粉備用；②煙葉復(fù)合培養(yǎng)基的制備將自然陳化一年至兩年的白肋煙葉和水按1 5的比例混合后加熱至100，并保持1. 5小時(shí)，過濾得到白肋煙水，將白肋煙水和微生物固體培養(yǎng)基按3 7的比例混合，制成煙葉復(fù)合培養(yǎng)基；(2)產(chǎn)香微生物的篩選取自然陳化一年至兩年的白肋煙葉8g，加入到5ml無菌蒸餾水中，震蕩60!^11，從中取50(^1的液體，滴加到由步驟(1)得到的煙葉復(fù)合培養(yǎng)基上，以平板劃線分離或稀釋涂平板法，在有氧或厭氧條件下培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌落后，將煙葉復(fù)合培養(yǎng)基放到體視鏡下篩查，挑取10 50個(gè)酵母菌和/或芽孢桿菌的單菌落；②將挑出的單菌落在煙葉復(fù)合培養(yǎng)基中分別進(jìn)行小量擴(kuò)增培養(yǎng)，將小量擴(kuò)增培養(yǎng)得到的菌液按照1 1的質(zhì)量比分別加入到無菌樟樹葉粉中，于^ 35°c的培養(yǎng)箱中2天進(jìn)行小試固體堆積發(fā)酵，然后對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取，獲得發(fā)酵型樟樹葉提取物；③將發(fā)酵型樟樹葉提取物稀釋后添加至香煙中，并通過卷煙加香評(píng)吸篩選所需的產(chǎn)香微生物，然后保存篩得的產(chǎn)香微生物的菌種；
(3)利用步驟O)中得到的產(chǎn)香微生物對(duì)樟樹葉進(jìn)行固體堆積發(fā)酵①菌種活化將所述產(chǎn)香微生物的菌種接種到固體PAD培養(yǎng)基上，置于的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 使其中的菌種活化，再將活化的菌種接種于PAD液體培養(yǎng)基中，于
恒溫培養(yǎng)4 得到的培養(yǎng)液，將所述培養(yǎng)液離心棄除上清液，所得到的沉淀用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即得到的活化菌種液；②固體發(fā)酵將活化種子液IOOml接種到IOOOg干燥的無菌的樟樹葉粉中，攪拌， 使其與種子液充分混合均勻，放置于的培養(yǎng)箱中發(fā)酵7天，得到發(fā)酵好的樟樹葉粉；(4)對(duì)步驟( 得到的發(fā)酵好的樟樹葉粉進(jìn)行提取將上述發(fā)酵好的樟樹葉粉，置于水蒸氣蒸餾裝置中，按發(fā)酵固體與純凈水質(zhì)量比1 10例加入的純凈水，加熱至100°C， 直至發(fā)酵固體與水的混合物開始沸騰，連續(xù)加熱10h，收集發(fā)酵型樟樹葉揮發(fā)油，利用95% 的乙醇溶液按與揮發(fā)油質(zhì)量比例500 1稀釋揮發(fā)油，得到樟樹葉煙用香料3。將上述實(shí)施例中制得的煙用香料分別加入到香煙中做評(píng)析得到加入樟樹葉香料的香煙，煙氣細(xì)膩，平滑，有潤感和輕微的甜感，透發(fā)性好，喉部刺激性明顯減輕，有釀香和發(fā)酵的酸香，舌面無明顯殘留。
權(quán)利要求
1.一種樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)原料準(zhǔn)備①選取樟樹葉作為原料、滅菌得到無菌樟樹葉備用；②煙葉復(fù)合培養(yǎng)基的制備將煙葉和水按1 5的比例混合后加熱至100°C，并保持1 2小時(shí)，過濾得到煙水，將煙水和微生物固體培養(yǎng)基按3 7 10的比例混合，制成煙葉復(fù)合培養(yǎng)基；(2)產(chǎn)香微生物的篩選①取煙葉5 10g，加入到無菌蒸餾水中，從中取100 1000μ 1的液體，滴加到由步驟(1)得到的煙葉復(fù)合培養(yǎng)基上，以平板劃線分離或稀釋涂平板法，在有氧或厭氧條件下培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌落后，將煙葉復(fù)合培養(yǎng)基放到體視鏡下篩查，挑取10 50個(gè)酵母菌和/或芽孢桿菌的單菌落；②將挑出的單菌落在煙葉復(fù)合培養(yǎng)基中分別進(jìn)行小量擴(kuò)增培養(yǎng)，將小量擴(kuò)增培養(yǎng)得到的菌液與無菌樟樹葉混合，進(jìn)行小試量的固體堆積發(fā)酵，然后對(duì)發(fā)酵好的樟樹葉進(jìn)行提取，獲得發(fā)酵型樟樹葉提取物；③將發(fā)酵型樟樹葉提取物稀釋后添加至香煙中，并通過卷煙加香評(píng)吸篩選所需的產(chǎn)香微生物，然后保存篩得的產(chǎn)香微生物的菌種；(3)利用步驟O)中得到的產(chǎn)香微生物與無菌樟樹葉混合，進(jìn)行固體堆積發(fā)酵；(4)對(duì)步驟C3)得到的發(fā)酵好的樟樹葉進(jìn)行提取，得到樟樹葉煙用香料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述的煙葉為自然陳化一年至兩年的煙葉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于步驟⑴中所述的煙葉為白肋煙葉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于步驟O)中和步驟(3)中所述的固體堆積發(fā)酵為將產(chǎn)香微生物按照1 1 10的質(zhì)量比接種到無菌樟樹葉中，放置于觀 35°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵2 7天，得到發(fā)酵好的樟樹葉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于步驟(2)中和步驟(4)中對(duì)發(fā)酵好的樟樹葉進(jìn)行提取的方法為水蒸氣蒸餾法。
6.根據(jù)權(quán)利要求7所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于所述水蒸氣蒸餾法為將上述發(fā)酵好的樟樹葉，置于水蒸氣蒸餾裝置中，按發(fā)酵固體與純凈水質(zhì)量比.1 10 15的比例加入的純凈水，加熱至100°C，直至發(fā)酵固體與水的混合物開始沸騰，連續(xù)加熱2 10h，收集發(fā)酵型樟樹葉揮發(fā)油，利用95%的乙醇溶液按與揮發(fā)油質(zhì)量比例.100 1000 1稀釋揮發(fā)油，得到樟樹葉煙用香料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種樟樹葉煙用香料的制備方法，通過篩選煙葉表面的微生物，并分離出能產(chǎn)生香氣的產(chǎn)香微生物，然后將其與無菌的樟樹葉混合進(jìn)行固體發(fā)酵，其后提取發(fā)酵產(chǎn)物中的揮發(fā)油，稀釋得到樟樹葉煙用香料。本發(fā)明通過微生物發(fā)酵的方法來獲得煙用香料，可以有效的保存發(fā)酵原料中的活性成分，工藝簡(jiǎn)單，且為香料制備工業(yè)提供了一種新途徑。所獲得的樟樹葉煙用香料可在一定程度上降低香煙對(duì)人體的傷害，且煙氣細(xì)膩，平滑，有潤感和輕微的甜感，透發(fā)性好，喉部刺激性明顯減輕，有釀香和發(fā)酵的酸香，舌面無明顯殘留。
文檔編號(hào)A24B15/20GK102551192SQ20121001984
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月20日
發(fā)明者呂品, 朱巍, 潘家華 申請(qǐng)人:武漢市黃鶴樓科技園有限公司, 湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司