專利名稱：用淀粉樣蛋白抗體除去淀粉樣蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總地涉及治療淀粉樣蛋白相關(guān)疾病的方法。具體地說，本發(fā)明提供了依靠患者自身免疫吞噬系統(tǒng)來除去淀粉樣原纖維的與治療性抗體有關(guān)的方法。
背景技術(shù)：
淀粉樣變性指親剛果、雙折射呈綠色的原纖維形式的蛋白的病理性沉積，該原纖維被剛果紅染色時(shí)呈分散的或局部化淀粉樣瘤的形式。這種沉積是某些疾病的癥狀，例如有阿爾茨海默病、炎性相關(guān)淀粉樣蛋白癥、II型糖尿病、牛海綿狀腦病(BES)、Creutzfeld-Jakob病(CJD)、羊癢病和原發(fā)性淀粉樣變性。
淀粉樣蛋白變性病(amyloidoses)通常分為三類主要為全身性的淀粉樣蛋白變性病、主要為局部性的淀粉樣蛋白變性病，以及混雜性淀粉樣蛋白變性病。主要為全身性的淀粉樣蛋白變性病包括慢性炎性病(如結(jié)核病、骨髓炎等)；非傳染性病，如青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎和Crohn′s病等；家族性地中海熱，漿細(xì)胞惡液質(zhì)(原發(fā)性淀粉樣變性)和各種家族性多發(fā)性神經(jīng)病和心肌病。主要為局部性的淀粉樣蛋白變性病包括慢性透析(通常為8年以上)，阿爾茨海默病，Down綜合征，遺傳性大腦出血(Dutch)，以及老年人的非創(chuàng)傷性大腦出血?；祀s性淀粉樣蛋白變性病包括家族性多發(fā)性神經(jīng)病(1owa)、家族性淀粉樣變性(Finnish)、遺傳性大腦出血(Icelandic)、CJD、甲狀腺髓樣癌、動(dòng)脈淀粉樣蛋白病和糖尿病(胰島瘤)。其它淀粉樣蛋白變性病包括Louis W.Heck，″淀粉樣蛋白疾病″《Cecil′s醫(yī)學(xué)課本》1504-6(W.B.Saunders & Co.，Philadelphia，PA；1996)中有所描述。
引起CJD和Gerstmann-Strassler-Scheinker(GSS)病的可傳染的海綿狀腦病在B.Chesebro等人，″可傳染的海綿狀腦病簡(jiǎn)介″《田間病毒學(xué)》2845-49(第三版；RavenPublishers，Philadelphia，PA；1996)以及D.C.Gajdusek，″傳染性淀粉樣蛋白作為可傳染的大腦淀粉樣蛋白變性病的亞急性海綿狀腦病″《田間病毒學(xué)》2851-2900(1996)中有所描述。這些疾病有許多可能由朊病毒(一種感染性蛋白質(zhì))介導(dǎo)。見S.B.Prusiner，″朊病毒″《田間病毒學(xué)》2901-50(1996)及其所附參考文獻(xiàn)。Online Mendelian Inheritancein Man(OMIM)″www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/omim/dispmin″上描述了淀粉樣蛋白變性病的遺傳形式。上述內(nèi)容均納入本文作為參考。
很少有經(jīng)臨床證實(shí)患淀粉樣變性的患者能自發(fā)地完全恢復(fù)，這可能是因?yàn)榈矸蹣拥鞍鬃冃圆≡w維本身是非免疫原性的。已經(jīng)研究了各種治療淀粉樣變性的方法，例如高劑量化療、類固醇、碘化阿霉素、以及干細(xì)胞替代治療。然而，藥物治療(用秋水仙堿)只在一種淀粉樣蛋白疾病(即家族性地中海淀粉樣變性)中有效。
用單克隆抗體(mAb，單抗)誘導(dǎo)或調(diào)節(jié)免疫學(xué)除去未被識(shí)別的物質(zhì)的方法是已知的。例如，單抗已經(jīng)成功用于治療非霍奇金(Hodgkin′s)淋巴瘤和乳房癌。
以前，各種研究已經(jīng)鑒定出與淀粉樣原纖維或淀粉樣蛋白結(jié)合的抗體。例如參見，美國專利No.5,714,471；5,693,478；5,688,651；5,652,092；5,593,846；5,536,640；5,385,915；5,348,963；5,270,165；5,262,332；5,262,303；5,164,295和4,782,014。另外，幾份出版物已經(jīng)提出，抗淀粉樣蛋白抗體可用來研究β-淀粉樣變性的進(jìn)展以及各種治療選項(xiàng)。例如參見，Bellottii，等人，Scand.J.Immunol.(1992)36(4)607-615；Bellotti等人，Ren.Fail.(1993)15(3)365-371；Walker等人，J.Neuropathol.Exp.Neurol.(1994)53(4)377-383；和Bickel等人，Bioconjug.Chem.(1994)5(2)119-125。然而，沒有一種治療性抗體顯示出能停止或逆轉(zhuǎn)患者體內(nèi)的淀粉樣原纖維沉積。因此，需要有一種用含有能結(jié)合淀粉樣原纖維的抗體的抗體制劑，治療淀粉樣蛋白變性病的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了治療淀粉樣蛋白相關(guān)疾病和病情的新方法。這些方法利用了針對(duì)淀粉樣蛋白的蛋白組分的單抗的調(diào)理作用。
本發(fā)明包括一種治療淀粉樣蛋白相關(guān)疾病患者的方法，該方法包括下列步驟給予該患者治療有效劑量的至少一種免疫球蛋白多肽或其片段，以及藥學(xué)上可接受的載體；其中免疫球蛋白多肽或其片段可以是能與人淀粉樣原纖維結(jié)合的基本純的免疫球蛋白多肽，其中多肽的結(jié)合調(diào)理了淀粉樣原纖維。
具體地說，本發(fā)明涉及下文所述的三種單抗的任一種或其組合的用途。這些抗體具有通常的抗淀粉樣蛋白結(jié)合性能，并且提供了激活患者自身細(xì)胞免疫清除機(jī)制的非固有的調(diào)理試劑。
附圖簡(jiǎn)述圖lA和1B。

圖1A和1B是Balb/c小鼠在注射淀粉樣蛋白后立即拍攝的(1A)以及注射14天后拍攝的(1B)重顯照片。注射部位被刮過，以便更好地說明注射淀粉樣蛋白物質(zhì)所引起的“隆起”。
圖2A-2B。圖2A和2B是人中性粒細(xì)胞粘附于體外受到調(diào)理的人淀粉樣蛋白的重顯照片。
圖3A-3D。圖3A-3D是免疫組織化學(xué)染色的充滿淀粉樣蛋白的組織樣品的重顯照片(放大20倍)。圖3A是用剛果紅染色的κ1淀粉樣變性患者的組織樣品；在偏振光下觀察，淀粉樣蛋白沉積物呈藍(lán)綠色顆粒。圖3B是用抗κI(57-18-H12)單抗標(biāo)記后的堿性磷酸酶染色的組織樣品。圖3C是如圖3B所述那樣染色的組織樣品，只是用抗κlV(11-1F4)單抗。圖3D是如圖3B所述那樣染色的組織樣品，只是采用抗λVIII(31-8c7)單抗。
圖4。圖4是顯示與植入Balb/c小鼠中的人淀粉樣蛋白結(jié)合的熒光素化(FITC)κ4單抗(FITC)的重顯照片。將該單抗注入小鼠大腿。注射后72小時(shí)，切下淀粉樣瘤，用落射熒光顯微鏡(放大20倍)觀察。
發(fā)明實(shí)施方式綜述本發(fā)明利用免疫球蛋白多肽來調(diào)節(jié)和增強(qiáng)宿主或患者體內(nèi)淀粉樣原纖維不良沉積物的降解和清除。預(yù)計(jì)本發(fā)明例如可用來治療患有以淀粉樣原纖維不良沉積無為特征的疾病或病情的病人。不希望受任何特定的作用機(jī)理的約束，認(rèn)為本發(fā)明的免疫球蛋白多肽的給予調(diào)理了淀粉樣變性患者體內(nèi)沉積的淀粉樣原纖維，從而有助于患者靠患者自身的免疫系統(tǒng)除去這些淀粉樣原纖維。據(jù)認(rèn)為，如果沒有這種治療性干預(yù)，單靠患者免疫系統(tǒng)不能除去淀粉樣原纖維所調(diào)節(jié)的病情中的淀粉樣原纖維，推測(cè)是因?yàn)榈矸蹣釉w維本身相對(duì)沒有免疫原性。
為了治療淀粉樣變性患者，將治療有效量的本發(fā)明免疫球蛋白多肽或其片段與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑一同給予。在這些免疫球蛋白多肽與淀粉樣原纖維不良沉積物結(jié)合或粘附時(shí)，認(rèn)為后者受到了調(diào)理。
本發(fā)明組合物的單次或多次給予可根據(jù)劑量進(jìn)行，并可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適用于給予其它治療性抗體產(chǎn)品的給藥程序進(jìn)行。這些參數(shù)可由治療具體患者的醫(yī)師來選擇和/或優(yōu)選。
較佳的，治療有效量的本發(fā)明藥物制劑應(yīng)輸送一定量的抗淀粉樣蛋白的免疫球蛋白多肽，該用量應(yīng)足以基本上抑制淀粉樣原纖維的不良沉積或基本上抑制淀粉樣原纖維不良沉積產(chǎn)生的速度。更佳的，該制劑應(yīng)減少患者體內(nèi)沉積的淀粉樣原纖維的總負(fù)荷。另外，這些制劑的給藥應(yīng)在診斷出淀粉樣變性后立即開始，并持續(xù)直至癥狀基本上消除再隨后持續(xù)一段時(shí)間。在病情頑固的情況下，加載量后可能需要維持劑量。
定義本文中術(shù)語“肽”、“多肽”或“蛋白質(zhì)”可以互換使用。術(shù)語“基本上相同”在指多肽時(shí)，表示所述多肽或蛋白質(zhì)與完整的天然存在的蛋白質(zhì)或其部分有至少大約30％的相同性，通常至少大約70％的相同性，較佳的至少大約95％的相同性。
本文所用的術(shù)語“分離的”、“基本純的”和“基本均一的”可互換使用，這些術(shù)語描述了將蛋白質(zhì)與其天然相伴組分分離。基本純的蛋白質(zhì)通常包含大約85％至90％的蛋白質(zhì)樣品，更通常的大約95％，較佳的為大約99％以上純。蛋白純度或均一性可用本領(lǐng)域熟知的多種方法來表明，例如蛋白質(zhì)樣品的聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后通過染色使聚丙烯酰胺凝膠上的一條多肽帶顯色。某些目的需要高的分辨率，可采用HPLC或類似純化方式。
蛋白質(zhì)可用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)純化成基本均一，這些方法包括用諸如硫酸銨等物質(zhì)進(jìn)行選擇性沉淀、柱層析、免疫純化方法和其它方法。例如參見，Scopes，《蛋白質(zhì)純化原理和實(shí)踐》，Springer-VerlagNew York(1982)，其內(nèi)容納入本文作為參考。
抗體純化技術(shù)是本領(lǐng)域中熟知的。Harlow等人，《抗體實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》，Cold SpringHarbor Laboratory，Cold Spring Harbor(1988)，288-318，其內(nèi)容納入本文作為參考，其中例如描述了用硫酸銨沉淀、辛酸(caprlic acid)、DEAE、羥基磷灰石層析、凝膠過濾層析、蛋白質(zhì)A珠層析和免疫親和層析進(jìn)行純化。
本文所用的核酸可以是DNA或RNA。當(dāng)指核酸時(shí)，術(shù)語“基本相同”表示兩個(gè)核酸或其指定部分的序列在最佳排列對(duì)比時(shí)，至少大約80％的核苷酸是相同的，通常為至少大約90-95％，更佳的有至少大約98％-99.5％的核苷酸是相同的，并有適量的核苷酸插入或缺失。
或者，當(dāng)核酸片段在選擇性雜交條件下與另一核酸鏈的互補(bǔ)鏈雜交時(shí)，則核酸序列是基本相同的。
“基本互補(bǔ)”同樣指一個(gè)核酸與另一核酸選擇性雜交或相同。通常，當(dāng)至少14-25個(gè)核苷酸的鏈內(nèi)有至少大約55％的相同性，較佳的有至少大約65％的相同性，更佳的有至少大約75％的相同性，最佳的有至少大約90％的相同性時(shí)，才會(huì)發(fā)生選擇性雜交。見M.Kanehisa Nucl.Acids Res.12203(1984)，其內(nèi)容納入本文作為參考。
嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件通常包括鹽濃度低于大約1M，更通常地低于大約500mM，較佳的低于大約200mM。溫度通常大于22℃，通常大于大約30℃，較佳的超過大約37℃。由于其它因素(包括堿基組成和互補(bǔ)鏈的大小，有機(jī)溶劑的存在以及堿基錯(cuò)配的程度)對(duì)雜交嚴(yán)謹(jǐn)性可能有顯著影響，因此這些參數(shù)的組合比任何單獨(dú)一個(gè)絕對(duì)的量度都更為重要。
術(shù)語“分離的”或“基本純的”在指核酸時(shí)，是指用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(包括堿性/SDS處理、CsCl分帶、柱層析以及本領(lǐng)域中熟知的其它技術(shù))從其它細(xì)胞組分或其它污染物(例如其它細(xì)胞核酸或蛋白質(zhì))中純化出的那些核酸。見F.Ausubel，等人編輯，《當(dāng)代分子生物學(xué)方法》，Greene Publishing and Wiley-Interscience，New-York(1987)，該文納入本文作為參考。
當(dāng)一核酸被置于與另一核酸序列有功能上關(guān)系的位置時(shí)，該核酸是“操作性連接的”。例如，如果啟動(dòng)子或增強(qiáng)子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則它與編碼序列操作性連接。通常，操作性連接指被連接的核酸序列是毗鄰的，當(dāng)需要連接兩個(gè)蛋白質(zhì)編碼區(qū)時(shí)，指被連接的核酸序列是毗鄰的且在同一讀框內(nèi)。
核酸操作的技術(shù)，例如將編碼多肽的核酸序列亞克隆到表達(dá)載體中、標(biāo)記探針、DNA雜交等等，例如在Sambrook等人，(1989)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第二版)1-3卷，Cold Spring Harbor Laboratory，或Ausubel等人編輯(1987)op.cit.中有大致的描述，兩者均納入本文作為參考。
“表達(dá)載體”、“克隆載體”或“載體”通常是能在所選宿主細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)?；蚱渌怂岱肿?。表達(dá)載體可以自主復(fù)制，或可通過本領(lǐng)域熟知的方法插入宿主細(xì)胞的基因組中而進(jìn)行復(fù)制。自主復(fù)制的載體具有在所選宿主細(xì)胞內(nèi)起作用的復(fù)制起點(diǎn)或自主復(fù)制序列(“ARS”)。通常，希望一個(gè)載體可用于多種宿主細(xì)胞內(nèi)，例如在大腸桿菌中用于克隆和構(gòu)建，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞用于表達(dá)。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞系通常被用作表達(dá)真核細(xì)胞衍生多肽的宿主細(xì)胞。哺乳動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)物中的繁殖本來就是熟知的。見《組織培養(yǎng)》，Academic Press，Kruse and Patterson編輯(1973)，該文納入本文作為參考。宿主細(xì)胞系還可包括以下生物體，如細(xì)菌(如大腸桿菌或枯草芽孢桿菌)、酵母、絲狀真菌、植物細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞。
“轉(zhuǎn)化”指用熟知的方法將含有感興趣的核酸的載體直接導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)化方法因宿主細(xì)胞類型而異，包括電穿孔；采用氯化鈣、氯化銣磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其它物質(zhì)的轉(zhuǎn)染；微粒轟擊；脂轉(zhuǎn)染；感染(載體是感染因子)；和其它方法。見Sambrook等人，(1989)同上。在談到已經(jīng)導(dǎo)入了上述核酸的細(xì)胞時(shí)，還包括這些細(xì)胞的后代。
本文所用的術(shù)語“免疫球蛋白多肽”指衍生自天然免疫球蛋白(例如多肽)的、對(duì)特定靶標(biāo)(例如對(duì)淀粉樣原纖維)有特異性免疫反應(yīng)活性的分子?？贵w通常是免疫球蛋白多肽的四聚體。本文所用的術(shù)語“抗體”還指基本上由免疫球蛋白基因編碼的一種或多種多肽所組成的蛋白質(zhì)。免疫球蛋白基因包括編碼輕鏈(可以是κ型或λ型)的基因，以及編碼重鏈的那些基因。重鏈的類型有α、γ、δ、ε和μ。免疫球蛋白重鏈和輕鏈的羧基端部分是恒定區(qū)，而氨基端部分由多個(gè)免疫球蛋白可變區(qū)基因編碼。免疫球蛋白可變區(qū)是提供抗原識(shí)別特異性的部分。具體地說，特異性在于免疫球蛋白的互補(bǔ)決定區(qū)(“CDR”)中，該互補(bǔ)決定區(qū)也稱為超變區(qū)。
免疫球蛋白可以各種片段形式存在，例如包括Fv，F(xiàn)ab，F(xiàn)(ab″)，F(xiàn)(ab′)2，SvFv和其它片段，以及單鏈(例如Huston，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，855879-5883(1988)和Bird，等人，Science 242423-426(1988)，納入本文作為參考)。(通常見，Hood，等人，″免疫學(xué)″Benjamin，N.Y.，第2版(1984)，和Hunkapiller and Hood，Nature，32315-16(1986)，納入本文作為參考)。還可采用單鏈抗體，其中重鏈基因和輕鏈基因被組合成單條編碼序列。免疫球蛋白多肽還包括截短的免疫球蛋白鏈，例如鏈中含有的恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域少于天然多肽。這些截短的多肽可用標(biāo)準(zhǔn)方法制備，例如在待缺失結(jié)構(gòu)域序列的5′端基因序列中導(dǎo)入一終止密碼子。然后，將截短的多肽裝配到截短的抗體內(nèi)。本文所用的抗體還包括雙特異性抗體，該抗體可用下列參考文獻(xiàn)中描述的方法來制備Glennie，等人，J.Immunol.，1392367-2375(1987)；Segal等人，Biologic Therapy ofCancer Therapy of Cancer Updateds 2(4)1-12(1992)；和Shalaby等人，J.Exp.Med.175217-225(1992)。
“單克隆抗體”可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種技術(shù)獲得。簡(jiǎn)言之，使經(jīng)所需抗原免疫的動(dòng)物的脾細(xì)胞無限增殖，通常通過與骨髓瘤細(xì)胞融合來進(jìn)行(見，Kohler和Milstein，Eur.J.Immunol.6511-519(1976))。另一種無限增殖的方法包括用EB病毒、腫瘤基因或逆轉(zhuǎn)錄病毒來轉(zhuǎn)化，或本領(lǐng)域熟知的其它方法。在從單個(gè)無限增殖的細(xì)胞產(chǎn)生的集落中篩選對(duì)抗原有所需特異性和親和性的抗體的產(chǎn)生，且這些細(xì)胞產(chǎn)生單克隆抗體的產(chǎn)量可用各種技術(shù)來增強(qiáng)，這些技術(shù)包括將細(xì)胞注射入脊椎動(dòng)物宿主的腹膜腔。
單特異性和雙特異性免疫球蛋白還可用在原核或真核宿主細(xì)胞中的重組技術(shù)來制備。
“嵌合的”抗體由免疫球蛋白基因編碼，該基因已經(jīng)過基因工程改造，從而使得輕鏈和重鏈基因由屬于不同種類的免疫球蛋白基因片段組成。例如，可將小鼠單抗基因的可變區(qū)(V)片段與人恒定區(qū)(C)片段連接。這種嵌合抗體對(duì)人而言抗原性可能比用小鼠恒定區(qū)和小鼠可變區(qū)組成的抗體低。
本文所用的術(shù)語嵌合抗體還指這樣一種抗體，它包括具有人樣構(gòu)架區(qū)的免疫球蛋白，其中任何恒定區(qū)與人免疫球蛋白恒定區(qū)有至少大約85-90％的多肽序列相同性，較佳的有大約95％的多肽序列相同性，它也稱為“人化的”免疫球蛋白(例如參見，PCT出版物WO90/07861，該文納入本文作為參考)。因此，這樣的“人化”免疫球蛋白的所有部分，可能除了互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)外，與一種或多種天然的人免疫球蛋白序列的對(duì)應(yīng)部分基本上相同。需要的時(shí)候，構(gòu)架殘基也可用種內(nèi)或種間的殘基替代，尤其是若發(fā)現(xiàn)某些構(gòu)架殘基影響CDR的結(jié)構(gòu)時(shí)。嵌合的抗體還可含有截短的可變區(qū)或恒定區(qū)。
本文所用的術(shù)語“構(gòu)架區(qū)”指在單個(gè)種類的不同免疫球蛋白之間相對(duì)保守的免疫球蛋白輕鏈和重鏈可變區(qū)的那些部分(即CDR除外的那些)(如Kabat，等人，(1987)；《感興趣的免疫學(xué)蛋白質(zhì)序列》第4版，U.S.Dept.Health and Human Services中定義的，納入本文作為參考)。本文所用的術(shù)語“人樣構(gòu)架區(qū)”是這樣一個(gè)構(gòu)架區(qū)，每一存在的鏈中包含至少大約70或更多，通常為75-85或更多個(gè)與人免疫球蛋白中殘基相同的殘基。
人恒定區(qū)DNA序列可用熟知的程序從各種人細(xì)胞分離獲得，但是較佳的是分離自無限增殖的B細(xì)胞。用于制備本發(fā)明嵌合免疫球蛋白的可變區(qū)或CDR可以類似方式衍生自能結(jié)合人型淀粉樣蛋白的單克隆抗體，并在任何合適的哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中生產(chǎn)，包括小鼠、大鼠、家兔、野兔、人細(xì)胞系，或可用熟知的方法產(chǎn)生抗體的其它脊椎動(dòng)物?？勺儏^(qū)或CDR可用標(biāo)準(zhǔn)的重組方法合成制得，這些重組方法包括聚合酶鏈反應(yīng)(“PCR”)或通過噬菌體展示文庫制得。對(duì)于噬菌體展示方法，例如參見，McCafferty等人，Nature 348552-554(1990)；Clackson等人，Nature 352624-628和Marks等人，Biotechnology l11145-1149(1993)?？刹捎煤线m的原核系統(tǒng)如細(xì)菌、酵母和噬菌體。
DNA序列的合適細(xì)胞來源以及用于表達(dá)和分泌免疫球蛋白的宿主細(xì)胞可從各種來源獲得，例如從美國典型培養(yǎng)物保藏中心獲得(“細(xì)胞系和雜交瘤分類”第5版(1985)Rochville，Maryland，U.S.A.，納入本文作為參考)。
除了本文具體描述的嵌合的和“人化的”免疫球蛋白外，還可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種重組DNA技術(shù)來設(shè)計(jì)和生產(chǎn)有所改進(jìn)但基本上相同的其它免疫球蛋白。通常，對(duì)基因的改進(jìn)容易用各種熟知的技術(shù)來實(shí)現(xiàn)，這些技術(shù)例如有PCR和定點(diǎn)誘變(見，Gillman和Smith，Gene 881-97(1979)和S.Roberts等人，Nature 328731-734(1987)，兩篇文獻(xiàn)均納入本文作為參考)。
或者，可以制得只含免疫球蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)之一部分的多肽片段。例如，可能希望制備出具有除抗原識(shí)別活性以外的一種或多種免疫球蛋白活性(如補(bǔ)體固定)的免疫球蛋白多肽片段。
整個(gè)或部分免疫球蛋白基因還可與其它基因(如酶)的功能區(qū)或其它分子(如毒素、標(biāo)記和尋靶部分)組合，以產(chǎn)生具有新性質(zhì)的融合蛋白(例如“免疫毒素”)。在這些基因融合的情況下，相同多肽鏈中存在兩個(gè)組分?；蛘撸梢杂酶鞣N熟知的化學(xué)程序?qū)⒚庖咔虻鞍谆蚱淦闻c毒素或標(biāo)記用化學(xué)方法連接起來。例如，當(dāng)標(biāo)記或細(xì)胞毒性劑是蛋白質(zhì)而第二個(gè)組分是完整的免疫球蛋白時(shí)，此種連接可通過異雙功能交聯(lián)劑(如SPDP、碳化二亞胺、戊二醛等)實(shí)現(xiàn)。
合適的標(biāo)記例如包括放射性核素、酶、底物、輔因子、抑制劑、熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、磁性顆粒。例如參見說明這些標(biāo)記的使用的專利、美國專利No.3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；和4,366,241，所有這些均納入本文作為參考。
免疫毒素，包括單鏈分子，也可用重組方法制得。各種免疫毒素的制備是本領(lǐng)域中熟知的，其方法可在例如“單抗-毒素偶聯(lián)物瞄準(zhǔn)目標(biāo)的有魔力的子彈”Thorpe等人，《臨床醫(yī)學(xué)單克隆抗體》Academic Press，168-190頁(1982)；E.Vitetta，Science(1987)2381098-1104；和G.Winter和C.Milstein，Nature(1991)349293-299中找到，所有這些文獻(xiàn)均納入本文作為參考。
制備免疫球蛋白和免疫球蛋白片段的其它技術(shù)在V.S.Malik等人，《抗體技術(shù)》(Academic Press，1994)；C.A.K.Borrebaeck，《抗體工程分子生物學(xué)的突破》(OxfordUniv.Press，1995)；和P.J.Delves等人，《抗體制備的基本技術(shù)》(John Wiley & Sons，1997)中有所描述，這些文獻(xiàn)均納入本文作為參考。
本文所用的術(shù)語“調(diào)理”指免疫球蛋白多肽與特定的靶標(biāo)，尤其是淀粉樣原纖維沉積物上發(fā)現(xiàn)的表位結(jié)合，從而使抗體和靶標(biāo)一同被宿主細(xì)胞免疫系統(tǒng)識(shí)別為“外來物質(zhì)”。換句話說，本發(fā)明免疫球蛋白的結(jié)合增強(qiáng)了對(duì)淀粉樣原纖維的吞噬作用。
本文所用的術(shù)語“淀粉樣變性”指特征為存在淀粉樣蛋白物質(zhì)的任何情況。這種物質(zhì)可以是淀粉樣瘤形式或是更為分散的淀粉樣沉積物或原纖維形式。
藥物組合物本發(fā)明的用于治療性處理的藥物組合物可用于腸胃外給藥、口服或局部給藥。較佳的，腸胃外給予該藥物組合物，例如靜脈內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)或肌內(nèi)給予。由于IgG不能滲透通過血腦屏障(見U.Bickel等人，1994 Bioconjug.Chem.5119-25)，因此克服血腦屏障(BBB)的抗體輸送可將抗體通過脂質(zhì)體或分子團(tuán)輸送至所需部位來實(shí)現(xiàn)。另外，本發(fā)明的制劑可以直接輸送至腦脊液(例如參見L.C.Walker等人，1994 J.Neuropathol.Exp.Neurol.53377-83)。對(duì)于其它輸送機(jī)制，參見P.M.Friden，1996，美國專利5,527,527和W.M.Pardridge，1991美國專利No.5,004,697。所有上述文獻(xiàn)均納入本文作為參考。
因此，本發(fā)明提供了適合腸胃外給藥的組合物，該組合物包含溶解或懸浮在藥學(xué)上可接受的載體(較佳的是水性載體)中的抗淀粉樣蛋白的免疫球蛋白多肽。可以使用各種水性載體，例如水、緩沖水溶液、0.4％鹽水、0.3％甘氨酸、透明質(zhì)酸等。這些組合物可用常規(guī)的熟知的滅菌技術(shù)來除菌，或可經(jīng)過無菌過濾。得到的水溶液可包裝使用或凍干，凍干制劑在給藥前與無菌溶液組合。該組合物可根據(jù)需要含有藥學(xué)上可接受的輔助性物質(zhì)以接近生理?xiàng)l件，例如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、漲力調(diào)節(jié)劑、潤(rùn)濕劑等(例如乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、脫水山梨糖醇月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等)。
藥物制劑中本發(fā)明抗淀粉樣蛋白的免疫球蛋白多肽的濃度可以有很大差異，即從低于大約1％起，通常為至少大約10-15％，至高達(dá)50％或更高(以重量計(jì))，主要是根據(jù)所選的特定給藥方式從液體體積、粘度等來選擇。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員無需過多實(shí)驗(yàn)就能確定足以調(diào)理淀粉樣瘤的免疫球蛋白多肽有效量。該用途的有效量將取決于，例如，抗淀粉樣蛋白的免疫球蛋白多肽組合物的特性、給藥方式、待治療的疾病的階段和嚴(yán)重程度、患者的體重以及總體健康狀況、以及處方醫(yī)師的判斷。通?？刹捎?.5毫克/千克的典型單劑量。必須注意的是，抗淀粉樣免疫球蛋白多肽以及其衍生的肽組合物可用于嚴(yán)重的疾病狀態(tài)，即威脅生命或可能威脅生命的場(chǎng)合。在這些情況下，可以、而且治療醫(yī)師可能感到需要給予過量的這些組合物。因此，本發(fā)明的人抗淀粉樣蛋白單克隆抗體或基本上人抗淀粉樣蛋白受體單克隆抗體在這些情況下是最佳的。
本發(fā)明的治療淀粉樣變性病人的方法也適用于易患淀粉樣變性的動(dòng)物，如奶?；蜃须u。因此，本文中涉及到人患者的也適用于非人患者。
本文所定義的免疫球蛋白多肽宜為針對(duì)淀粉樣瘤或其組分或前體的抗淀粉樣蛋白的單抗。該單抗可針對(duì)IgLC可變區(qū)結(jié)構(gòu)域產(chǎn)生，或較佳的針對(duì)IgLC亞組κ1、κ4、λ8或其組合產(chǎn)生。將基本上非人的免疫球蛋白多肽給予人可能會(huì)引起對(duì)該抗體的應(yīng)答反應(yīng)。因此，希望制備基本上是人(源)的本發(fā)明抗IgLC免疫球蛋白多肽?！盎旧鲜侨?源)”指抗體或其結(jié)合片段由以下氨基酸序列組成，該序列有至少大約50％來源于人，更佳的有至少70-80％，最佳的有大約95-99％或更多的來源于人，尤其是對(duì)于在治療已建立的淀粉樣瘤所需的長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)反復(fù)給藥來說，這更為需要。如本文所用的，人抗體意味著包括完整人來源的抗體以及基本上來自于人的那些抗體，除非內(nèi)容另有描述。
還可產(chǎn)生針對(duì)合成的淀粉樣原纖維的單克隆抗體。用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離重組的輕鏈、可變區(qū)肽，并體外純化。然后，用諸如Wall等人，″體外免疫球蛋白輕鏈原纖維形成″《酶學(xué)方法》309卷(在出版)中描述的技術(shù)從肽制得合成的原纖維。然后，用標(biāo)準(zhǔn)的免疫技術(shù)產(chǎn)生針對(duì)該合成原纖維的抗體，免疫通常在小鼠或家兔中進(jìn)行。用標(biāo)準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生分泌抗原纖維抗體的單克隆細(xì)胞系。
本發(fā)明的抗淀粉樣免疫球蛋白多肽可用任何一種熟知的技術(shù)制得。例如，它們可以這樣制得，用純化或部分純化的人淀粉樣蛋白免疫動(dòng)物。該受免疫動(dòng)物可以是免疫學(xué)上能識(shí)別人型淀粉樣胞外結(jié)構(gòu)域表位特征的任何一種動(dòng)物，例如鼠、兔、馬等。
本發(fā)明的單克隆抗體可通過使含有以下核酸序列的細(xì)胞無限增殖來制得，該核酸序列編碼的免疫球蛋白多肽或其部分能與人型淀粉樣蛋白胞外結(jié)構(gòu)域的特征性抗原決定簇特異性結(jié)合。無限增殖過程可通過雜交瘤融合技術(shù)、用病毒轉(zhuǎn)化產(chǎn)生抗體的淋巴細(xì)胞、重組DNA技術(shù)或細(xì)胞融合、病毒轉(zhuǎn)化和/或重組DNA方法相聯(lián)合的技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。產(chǎn)生單克隆抗體的免疫原包括合成的淀粉樣原纖維，例如A.Lomakin等人，1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA 947924-7中所述，該文獻(xiàn)納入本文作為參考。
由于人抗淀粉樣蛋白單克隆抗體的產(chǎn)生很難采用常規(guī)的無限增殖技術(shù)，因此希望首先制得非人抗體，然后通過重組DNA技術(shù)，將非人抗體的抗原結(jié)合區(qū)(例如Fab、互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)或超變區(qū))轉(zhuǎn)移到合適的人恒定區(qū)(Fc)或構(gòu)架區(qū)內(nèi)，產(chǎn)生基本上為人(源)的分子。這種方法是本領(lǐng)域中通常所知道的，且在例如美國專利4,816,397、PCT出版物WO 90/07861和EP出版物173494和239400中有所描述，其中每篇文獻(xiàn)均納入本文作為參考。然而，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中可以產(chǎn)生完整的人抗體。例如，通過PCR，可從人B細(xì)胞分離所需的人免疫球蛋白基因或基因片段，將該DNA克隆到適合在真核細(xì)胞表達(dá)的載體中，將克隆的DNA導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)，以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因。適合產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因來表達(dá)人免疫球蛋白的動(dòng)物包括小鼠、大鼠、家兔和豬，其中表達(dá)人免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因嚙齒類動(dòng)物宜有一個(gè)或多個(gè)內(nèi)源免疫球蛋白基因座已被滅活或“剔除”，從而有利于鑒定和分離人抗體(例如參見，Lonberg，等人，Nature 368856-859(1994))。
得到的能與人淀粉樣蛋白結(jié)合的嵌合抗體或嵌合的免疫球蛋白多肽也在本發(fā)明范圍內(nèi)。典型的治療性嵌合抗體是一種雜交蛋白，它由對(duì)人淀粉樣抗原性決定簇有特異性的小鼠免疫球蛋白的可變區(qū)(V)或抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及人免疫球蛋白的恒定區(qū)(C)或效應(yīng)結(jié)構(gòu)域組成，雖然可變和恒定結(jié)構(gòu)域也可采用其它哺乳動(dòng)物種類的結(jié)構(gòu)域。本文所用的術(shù)語“嵌合抗體”還指由一免疫球蛋白基因編碼的抗體，該基因中只有CDR是轉(zhuǎn)移自特異性識(shí)別抗原決定簇的免疫球蛋白，而免疫球蛋白基因的其余部分衍生自人(或其它哺乳動(dòng)物，根據(jù)需要)免疫球蛋白基因。如上所述，此類嵌合抗體稱為“人化”(在使用人免疫球蛋白基因的情況下)抗體。另外也考慮到的是不含其它動(dòng)物序列的重組人抗體。
抗淀粉樣蛋白的免疫球蛋白多肽可變結(jié)構(gòu)域的超變區(qū)是本發(fā)明的一個(gè)相關(guān)方面。該超變區(qū)(或CDR)與構(gòu)架區(qū)(在一種動(dòng)物中不同免疫球蛋白之間相對(duì)保守的免疫球蛋白輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架部分)的偶聯(lián)能使抗淀粉樣蛋白的免疫球蛋白多肽識(shí)別并從而結(jié)合人淀粉樣蛋白。超變區(qū)可被克隆和測(cè)序。一旦確定，就可將賦予特異性識(shí)別人淀粉樣蛋白能力的這些區(qū)域克隆到在宿主細(xì)胞中表達(dá)的載體中，作為另一免疫球蛋白分子的一部分或作為融合蛋白，例如作為起增強(qiáng)克隆的個(gè)體型免疫原性作用的載體分子。
本發(fā)明的抗淀粉樣免疫球蛋白多肽通常以完整的形式使用，或以免疫原性片段(如Fv，F(xiàn)ab，F(xiàn)(ab′)2)形式使用。這些片段可用常規(guī)技術(shù)從抗體獲得，這些常規(guī)技術(shù)是用諸如胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其它蛋白水解酶水解消化抗體，或用重組DNA技術(shù)，其中克隆或合成編碼所需片段的基因或其部分，并在各種宿主中表達(dá)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，可用特異性免疫球蛋白作為免疫原根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制得“抗獨(dú)特型”抗體。例如，用淀粉樣原纖維或其片段進(jìn)行感染或免疫，誘導(dǎo)出中和性免疫球蛋白，該蛋白的Fab可變區(qū)組合部位上有淀粉樣蛋白的圖象，該圖象對(duì)于特定的免疫球蛋白來說是獨(dú)特的，即是獨(dú)特型的。用這種抗淀粉樣免疫球蛋白進(jìn)行免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生抗獨(dú)特型抗體，該抗體的結(jié)合部位具有的構(gòu)象模仿了原來的淀粉樣抗原結(jié)構(gòu)。因此，這些抗獨(dú)特型抗體可用來代替淀粉樣抗原。例如參見，Nisonoff(1991)J.Immunol.1472429-2438，該文獻(xiàn)納入本文作為參考。
下列工作實(shí)施例具體指出了本發(fā)明的較佳實(shí)施方案，不應(yīng)理解這些方案限制了其它公開內(nèi)容。其它一般的構(gòu)型對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
實(shí)施例1鼠宿主中人IgLC淀粉樣蛋白的無輔助性分辨從尸體解剖期間獲得的感染器官抽提并純化獲得人IgLC淀粉樣蛋白。第一個(gè)實(shí)驗(yàn)涉及將50-200毫克該淀粉樣物質(zhì)移植到Balb/c小鼠體內(nèi)。將淀粉樣塊或“淀粉樣瘤”制備在無菌PBS中，進(jìn)行連續(xù)超聲處理和研磨步驟，以產(chǎn)生完全具有體內(nèi)所見輔助性分子的淀粉樣原纖維精細(xì)懸浮液。進(jìn)行該程序的目的是使淀粉樣蛋白能通過寬口徑皮下注射針注射入小鼠。
將相當(dāng)于動(dòng)物體重10％的淀粉樣物質(zhì)注射入小鼠肩胛骨之間(處于麻醉下)，產(chǎn)生可見的大團(tuán)塊(見圖1A)。小鼠需要15-18天完全消除淀粉樣瘤(見圖1B)，此時(shí)動(dòng)物看上去是健康的，并活了正常的壽命。淀粉樣瘤的消除由實(shí)驗(yàn)者主觀決定；通過簡(jiǎn)單地觸摸注射部位，很容易感覺到皮膚下的硬豌豆?fàn)畹牡矸蹣恿觥?br> 實(shí)施例2抗體介導(dǎo)的免疫力和細(xì)胞免疫力均參與了淀粉樣瘤的消除通過篩選先前注射了淀粉樣物質(zhì)的小鼠的針對(duì)注射物質(zhì)樣品的血清，顯示出抗淀粉樣抗體參與了淀粉樣瘤的清除。這用Western印跡分析來進(jìn)行，采用合適稀釋度的小鼠血清作為第一抗體。結(jié)果顯示對(duì)淀粉樣基質(zhì)的每個(gè)組分均有抗體，即凝膠上的每條帶均被小鼠血清染色，即使是在10000倍的血清稀釋度下(數(shù)據(jù)未顯示)。
細(xì)胞組分的參與得到體外中性粒細(xì)胞結(jié)合試驗(yàn)(見圖2A和2B)以及利用剔除突變型小鼠株的證實(shí)(數(shù)據(jù)未顯示)。圖2A和2B表明，在淀粉樣蛋白經(jīng)小鼠抗人IgLC單抗處理后，人中性粒細(xì)胞與人淀粉樣蛋白發(fā)生粘附。這表明該小鼠單抗能與人淀粉樣蛋白結(jié)合并吸引人中性粒細(xì)胞。
剔除突變株小鼠的研究進(jìn)一步證實(shí)了抗體參與淀粉樣蛋白消除的這一發(fā)現(xiàn)。首先，缺少B和T淋巴細(xì)胞的scid/scid小鼠即使在三個(gè)月后也不能消除注入的淀粉樣瘤(數(shù)據(jù)未顯示)。其次，CD18基因剔除的動(dòng)物不能象正常動(dòng)物那樣迅速地除去淀粉樣瘤。CD18剔除的動(dòng)物有97％缺少CD18(在粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系上發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面整聯(lián)蛋白)。盡管這些細(xì)胞不能離開循環(huán)，但動(dòng)物是B細(xì)胞和T細(xì)胞有活性的，因此可產(chǎn)生抗體應(yīng)答。第三，沒有白細(xì)胞的裸鼠不能除去淀粉樣瘤。
而且，用另一小鼠的淀粉樣蛋白反應(yīng)性血清培育過的淀粉樣蛋白在植入第二個(gè)小鼠體內(nèi)后4天內(nèi)被除去。在該實(shí)驗(yàn)中，將50毫克HIG淀粉樣蛋白注射入Balb/c小鼠中，放置1周，然后剪開尾靜脈取血。對(duì)血液進(jìn)行1500rpm離心沉淀，吸除細(xì)胞。血漿保藏于4℃直至使用。HIG淀粉樣蛋白(100毫克)的另一制備物是通過懸浮在無菌PBS中制得的，在該P(yáng)BS中加入1毫升前一小鼠的血漿。然后將該制備物注射入第二只小鼠(Balb/c)，淀粉樣蛋白在4天內(nèi)被除去。因此，得出結(jié)論，即該過程可通過注射前調(diào)理該物質(zhì)來加速。
實(shí)施例3 IgLC亞系列的ELISA篩選用ELISA技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)性研究，用針對(duì)IgLC亞系列(λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6、κ1、κ2、κ3、κ4、沒有κ和λ以及全部的κ和λ)的單抗篩選了大量抽提的人淀粉樣蛋白樣品。令人感興趣的是，時(shí)常發(fā)現(xiàn)，淀粉樣蛋白用對(duì)其自身亞型有特異性的單抗、全部的κ或λ抗體以及κ1(57-18H12)、κ4(11-1F4)和λ8(31-8C7)單抗測(cè)試呈陽性。發(fā)現(xiàn)這后三種制劑以非亞型特異性方式進(jìn)行反應(yīng)，即，κ1單抗與包含除κ1外的IgLC的淀粉樣蛋白反應(yīng)；而另兩種抗體表現(xiàn)出相同的性質(zhì)。這表明這些抗體識(shí)別的表位可能是淀粉樣原纖維的普遍性特征，表明可能靶向共同的淀粉樣蛋白表位。
實(shí)施例4免疫化學(xué)染色用標(biāo)準(zhǔn)免疫化學(xué)技術(shù)對(duì)淀粉樣患者的組織樣品染色，結(jié)果觀察到相似的結(jié)合現(xiàn)象。圖3A-3D顯示抗κ1與κ1淀粉樣蛋白結(jié)合，令人驚奇的是，抗κ4與κ1淀粉樣蛋白反應(yīng)，這提示這些抗體可能識(shí)別一個(gè)淀粉樣蛋白表位。另外，抗κ4與含有λ的淀粉樣蛋白反應(yīng)(未說明)。這是交叉同種型反應(yīng)性的一個(gè)例子。然而，ELISA與免疫組織化學(xué)的結(jié)果并不總是相符。這可能是因?yàn)槟闼姮F(xiàn)象的內(nèi)在差別，即ELISA是采用抽提純化的淀粉樣蛋白進(jìn)行的液相結(jié)合試驗(yàn)，而免疫組織化學(xué)在波片上固定的組織切片上進(jìn)行。
根據(jù)布達(dá)佩斯條約，分泌抗κ1單抗的雜交瘤細(xì)胞樣品(57-18-H12(ATCC保藏號(hào)＿))、分泌抗κ4單抗的雜交瘤細(xì)胞樣品(11-1F4(ATCC保藏號(hào)＿))和分泌抗κ8單抗的雜交瘤細(xì)胞樣品(31-8c7(ATCC保藏號(hào)＿))于1999年5月21日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)。
實(shí)施例5抗IgLC亞組的體內(nèi)研究將0.1毫克上述鑒定的三種抗體—κ1、κ4或λ8中的一種注射入如上所述已經(jīng)導(dǎo)入淀粉樣瘤形式的淀粉樣蛋白的小鼠大腿。κ1和κ4制劑導(dǎo)致宿主在7天內(nèi)完全消除大多數(shù)種類的受測(cè)試的淀粉樣原纖維(對(duì)于某些淀粉樣蛋白來源短達(dá)4天)。圖4顯示了與人淀粉樣蛋白結(jié)合的熒光素化的κ4單抗。
在上述兩種體外研究中的某些情況下有反應(yīng)性的λ8制劑在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中使淀粉樣瘤分辨率增加大約10％。
實(shí)施例6抗IgLC亞組的體內(nèi)研究從炎性相關(guān)的AA-淀粉樣患者分離出人淀粉樣蛋白，反復(fù)超聲處理和研磨以允許其注入小鼠體內(nèi)，制得用于注入Balb/c小鼠的制劑(見實(shí)施例1)。在注射入100毫克人AA-淀粉樣蛋白抽提物后，立即用100微克κ4單抗、抗AA-單抗、無單抗以及非特異性單抗對(duì)照(抗游離κ)處理小鼠。在48小時(shí)內(nèi)，在經(jīng)κ4和抗AA單抗處理的動(dòng)物中觀察到淀粉樣物質(zhì)完全消除。相反，對(duì)照動(dòng)物有大塊淀粉樣蛋白物質(zhì)留在注射部位。
實(shí)施例7特異性抗淀粉樣原纖維單抗的制備體外制得合成的淀粉樣原纖維，并作為小鼠的免疫原來產(chǎn)生第一代抗淀粉樣原纖維的單抗。簡(jiǎn)言之，用細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)和標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)產(chǎn)生、分離和純化重組的λ6-輕鏈、可變區(qū)肽。如Wall等人，″體外免疫球蛋白輕鏈原纖維形成″《酶學(xué)方法》39卷(出版中)(該文納入本文作為參考)中所描述的，通過在溶液中長(zhǎng)期攪拌，從這些肽制得合成的原纖維。室溫下17000xg離心20分鐘，濃縮原纖維。
然后用濃縮的原纖維免疫Balb/c小鼠數(shù)周。用標(biāo)準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生分泌抗原纖維抗體的單克隆細(xì)胞系。所得抗體具有根據(jù)ELISA試驗(yàn)證實(shí)的抗原纖維活性(如實(shí)施例3所述)。當(dāng)用ELISA測(cè)試時(shí)，這些抗體迄今與測(cè)試的所有人IgLC淀粉樣抽提物中的99％反應(yīng)，而不論前體蛋白的同種型或亞組的性質(zhì)如何。同樣，抗體以ELISA形式與分離的鼠AA-淀粉樣蛋白以及衍生自阿爾茨海默病蛋白Aβ[Aβ(25-35)]的肽組成的合成原纖維反應(yīng)。
應(yīng)理解，前述討論和實(shí)施例僅僅詳細(xì)地描述了本發(fā)明的某些較佳實(shí)施方案。因此，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯然能不背離本發(fā)明精神范圍而作各種改動(dòng)和等價(jià)變換。上文引用的所有文獻(xiàn)、文章和專利均全部納入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.一種治療淀粉樣沉積疾病患者的方法，該方法包括給予患者下列物質(zhì)的步驟，a)治療有效量的至少一種免疫球蛋白多肽或其片段，其中免疫球蛋白多肽或其片段與淀粉樣原纖維結(jié)合；和b)藥學(xué)上可接受的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中免疫球蛋白多肽或其片段針對(duì)的是免疫球蛋白輕鏈。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中免疫球蛋白多肽或其片段的結(jié)合調(diào)理了淀粉樣原纖維。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中免疫球蛋白多肽或其片段是單克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中單克隆抗體是人化抗體。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中單克隆抗體是嵌合抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中嵌合抗體是人化抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中抗體是標(biāo)記的抗體。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中單克隆抗體選自κ1(57-18H12)、κ4(11-1F4)、λ8(31-8C7)及其組合。
10.一種免疫球蛋白多肽或其片段，它與淀粉樣原纖維結(jié)合并有效地增強(qiáng)患者細(xì)胞免疫應(yīng)答，以除去與疾病相關(guān)的淀粉樣原纖維沉積物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的免疫球蛋白多肽或其片段，其中免疫球蛋白多肽或其片段是單克隆抗體或其片段。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫球蛋白或其片段，其中單克隆抗體是人化抗體。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫球蛋白多肽或其片段，其中單克隆抗體是嵌合抗體。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫球蛋白多肽或其片段，其中嵌合抗體是人化抗體。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫球蛋白多肽或其片段，其中抗體是標(biāo)記的抗體。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫球蛋白多肽或其片段，其中單克隆抗體選自κ1(57-18H12)、κ4(11-1F4)、λ8(31-8C7)及其組合。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的單克隆抗體或其片段，其中單克隆抗體是人化抗體。
18.根據(jù)權(quán)利要求10所述的免疫球蛋白多肽或其片段，其中免疫球蛋白多肽或其片段針對(duì)的是合成的淀粉樣原纖維。
19.一種藥物組合物，它包含權(quán)利要求10-17任一所述的免疫球蛋白肽或其片段。
20.一種核酸分子，它編碼的多肽至少包含權(quán)利要求10-17任一所述的免疫球蛋白多肽的超變區(qū)。
21.一種宿主細(xì)胞，它包含權(quán)利要求20所述的核酸分子。
22.一種生產(chǎn)免疫球蛋白多肽的方法，該方法包括培育權(quán)利要求21所述的宿主細(xì)胞的步驟。
全文摘要
本發(fā)明公開了增強(qiáng)患者對(duì)淀粉樣原纖維沉積物的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法和有關(guān)的免疫球蛋白肽及其片段。這些方法利用了針對(duì)淀粉樣物質(zhì)的抗體或其組成部分的調(diào)理作用。
文檔編號(hào)C12P21/08GK1344275SQ99808844
公開日2002年4月10日 申請(qǐng)日期1999年5月21日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月21日
發(fā)明者A·所羅門, R·赫尼西, J·S·沃爾 申請(qǐng)人:田納西州立大學(xué)研究股份有限公司