專利名稱：：預(yù)防和治療淀粉樣蛋白生成疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明大體來說涉及特異性結(jié)合晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的抗體和其片段，以及將所述抗體和其片段投與人類患者和非人類哺乳動物以治療或預(yù)防RAGE相關(guān)疾病和病癥的方法。
背景技術(shù)：
：阿茲海默氏病(Alzheimer'sdisease,AD)是一種主要影響老年人的進(jìn)行性、最終引起死亡的神經(jīng)退化病癥。其為癡呆的最常見形式，并且通常與認(rèn)知能力(記憶、推理、定向和判斷能力)的逐漸喪失和多種行為病癥的進(jìn)展相關(guān)聯(lián)。所述疾病傾向丁-分為兩類.-遲發(fā)型，其是在年齡較長(大于65歲)時發(fā)生；和早發(fā)型，其在老年期前(即，35歲與60歲之間)良好發(fā)展。在這兩類疾病中，病理學(xué)相同，但在年齡較輕即開始的情況下，異常往往更為嚴(yán)重且更為廣泛。所述疾病是以至少兩類腦損傷為特征神經(jīng)纖維纏結(jié)和老年斑。神經(jīng)纖維纏結(jié)為微管相關(guān)t蛋白的細(xì)胞內(nèi)沉積物，其是由成對地關(guān)于彼此纏繞的兩個纖絲組成。老年斑(即，淀粉樣斑塊)是由細(xì)胞外淀粉樣沉積物所形成的跨多達(dá)150微米的組織受到破壞的神經(jīng)纖維網(wǎng)區(qū)域，其中心通過腦紹織切片的顯微鏡分析可見。腦內(nèi)淀粉樣斑塊積累還與唐氏綜合癥(Down'ssyndrome)和其它認(rèn)知病癥(諸如血清淀粉樣蛋白A(SAA)淀粉樣變性病和海綿狀腦病)相關(guān)。稱為p淀粉樣肽或ap的肽為淀粉樣斑塊的主要成分，且據(jù)悉其在ad的發(fā)病機(jī)理中起到主要作用。Ap是稱為淀粉樣前體蛋白(APP)的較大跨膜糖蛋白中具有39-43個氨基酸殘基的4kDa疏水性內(nèi)部片段。作為p分泌酶和y分泌酶蛋白水解加工APP的結(jié)果，A(3主要是以40個氨基酸長的短型和42-43個氨基酸長的長型存在。腦中淀粉樣斑塊積累最終將導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞死亡。據(jù)悉，阿茲海默氏病(AD)的缺陷和身體癥狀特征至少部分是由A(3的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)退化引起。通過抑制A(3的產(chǎn)生或增強(qiáng)A(3的清除率來降低A卩含量是廣泛認(rèn)可的針對阿茲海默氏疾病的疾病緩和策略。APP蛋白內(nèi)的若干突變己與阿茲海默氏病的存在相關(guān)。所述突變的實例包括纈氨酸717變?yōu)楫惲涟彼?、甘氨酸或苯丙氨酸，以及賴氨?95-甲硫氨酸596變?yōu)樘於０?95-亮氨酸，的雙重突變。認(rèn)為所述突變通過增加或改變APP成為A(3的加工、尤其將APP加工成增加量的長型A卩(即A(31-42和A(31-43)來引起阿茲海默氏病。據(jù)悉，諸如早老素(preseniUn)基因PS1和PS2等其它基因的突變會間接影響APP的加工，從而產(chǎn)生增加量的長型Ap。己成功地使用小鼠模型來確定阿茲海默氏病中淀粉樣斑塊的重要性(蓋姆斯(Games)等人，1995,自然(Nature)，373:523;約翰遜-伍德(Johnson-Wood)等人，1997，美閨國家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),94:1550)。具體來說，當(dāng)用長型Ap注射表達(dá)突變形式的人類APP且在較小年齡時發(fā)展阿茲海默氏病的PDAPP轉(zhuǎn)基因小鼠時，所述小鼠呈現(xiàn)阿茲海默氏病進(jìn)展減慢且針對AP肽的抗休效價增加(申克(Schenk)等人，1999，自然，400:173)。上文所論述的觀察結(jié)果表明，A(3、尤其其長型為阿茲海默氏病的致病要素。A卩肽可存在于溶液中并月.可以在CNS(例如CSF)和血漿中檢測到。在某些條件下，可溶性A(3轉(zhuǎn)化成在AD患者的神經(jīng)炎性斑和腦血管中所見的纖維狀、有毒卩折疊形式。已對涉及用針對A(3的單克隆抗體進(jìn)行免疫的治療展開研究。已在AD小鼠模型中測試主動免疫和被動免疫。主動免疫在一定程度上引起腦中斑塊負(fù)荷的降低，伹只有在經(jīng)鼻投與時才能達(dá)到。也已研究PDAPP轉(zhuǎn)基因小鼠的被動免疫(貝德(Bard)等人，2000,自然醫(yī)學(xué)(NatureMed.)，6:916-19)。已提出供有效清除的兩種機(jī)制，即中樞降解和周圍降解。中樞降解機(jī)制取決于能夠跨血腦屏障、結(jié)合斑塊且誘導(dǎo)清除預(yù)先存在的斑塊的抗體。已證實，通過Fc受休介導(dǎo)的吞噬作用可促進(jìn)清除(貝德等人，同上文)。A卩清除的周圍降解機(jī)制取決于投々抗體后，腦、CSF與血漿之間A(3動態(tài)平衡的破壞，從而導(dǎo)致A卩從一個隔室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一隔室。將中樞來源的A(3轉(zhuǎn)運(yùn)到使其降解的CSF和血漿中。近期的研究表明，甚至在不減少腦中淀粉樣沉積的情況下，可溶目.未結(jié)合的Ap也涉及與AD相關(guān)的記憶障礙(多德(Dodel)等人，2003'柳葉刀(TheLancet)，2:215)。晚期糖基化終產(chǎn)物受休(RAGE)為免疫球蛋白超家族的多配體細(xì)胞表面成員。RAGE是由細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、單一跨膜結(jié)構(gòu)域和胞漿尾(cytosolictail)組成。所述受體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域是由一個V型免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域、隨后兩個C型免疫球蛋A結(jié)構(gòu)域組成。RAGE也以可溶形式(sRAGE)存在。RAGE是由許多不同組織(包括肺、心臟、腎臟、骨骼肌和腦)中的許多細(xì)胞類型(例如內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)表達(dá)。8在慢性炎癥狀態(tài)(諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和糖尿病性腎病)下，表達(dá)增加。盡管RAGE的生理學(xué)功能尚未了解，但其涉及炎癥反應(yīng)并且可在各種發(fā)育過程中起作用，包括成肌細(xì)胞分化和神經(jīng)發(fā)育。RAGE是一種不常見的模式識別受體，其結(jié)合若干不同種類的內(nèi)源分子，從而引起各種細(xì)胞反應(yīng)，包括細(xì)胞因子分泌、細(xì)胞氧化應(yīng)力增加、神經(jīng)突向外生長和細(xì)胞遷移。巳證實，RAGE在多種淀粉樣蛋白生成(amyloidogenic)疾病和病癥中起到積極的致病作用。需要治療阿茲海默氏病和其它淀粉樣蛋A生成疾病的新穎療法和試劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供通過投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE(即抗RAGE抗體)且抑制RAGE結(jié)合搭配物(RAGEbindingpartner)結(jié)合的抗體來治療患有以Ap淀粉樣沉積物為特征的疾病或病癥的個體的方法?？赏ㄟ^所揭示的方法治療的所述疾病或病癥可以腦屮AP淀粉樣沉積物(諸如出現(xiàn)于阿茲海默氏病屮)為特征。如本文所述的抗RAGE抗體也可用于抑制或減少個體體內(nèi)A(3淀粉樣沉積物積累、抑制或減少個體神經(jīng)退化、抑制或降低個體的認(rèn)知能力下降和/或改善個體的認(rèn)知能力。圖1A-1C繪示小鼠、大鼠、兔(2種同功異型物)、狒狒、食蟹猴(cynomolgusmonkey)和人類的RAGE的經(jīng)比對氨基酸序列(SEQIDNO:3、14、11、13、7、9、1)。圖2為直接結(jié)合ELISA的數(shù)據(jù)圖，其表明XT-H2以90pM的EC50與hRAGE結(jié)合'且XT-M4以300pM的EC50與hRAGE-Fc結(jié)合。圖3為直接結(jié)合ELISA分析的數(shù)據(jù)圖，其表明抗體XT-M4和XT-H2以100pM的EC50與hRAGEV結(jié)構(gòu)域-Fc結(jié)合。圖4為配體競爭ELISA結(jié)合檢定的數(shù)據(jù)圖，其展現(xiàn)XT-H2和XT-M4阻斷HMG1與hRAGE-Fc的結(jié)合的能力。圖5為抗體競爭ELISA結(jié)合檢定的數(shù)據(jù)圖，其展現(xiàn)XT-H2和XT-M4共有類似表位且結(jié)合人類RAGE上的重疊位點(diǎn)。圖6繪示鼠科抗RAGE抗體XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5和XT-H7以及大鼠抗RAGE抗體XT-M4的重鏈可變區(qū)的經(jīng)比對氨基酸序列(SEQIDNO:18、21、24、20、26、16)。圖7繪示鼠科抗RAGE抗體XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5和XT-H7以及大鼠抗RAGE抗體XT-M4的輕鏈可變區(qū)的經(jīng)比對氨基酸序列(SEQIDNO:19、22、25、23、27、17)。圖8繪示編碼狒狒RAGE的cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:6)。圖9繪示編碼食蟹猴RAGE的cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:8)。圖IO繪示編碼兔RAGE同功異型物1的cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:10)。圖11繪示編碼兔RAGE同功異型物2的cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:12)。圖12A-12E繪示編碼狒狒RAGE的經(jīng)克隆狒狒基因組DNA(克隆18.2)的核苷酸序列(SEQIDNO:15)。圖13提供四個圖，其展現(xiàn)如通過競爭ELISA結(jié)合檢定所測定的嵌合XT-M4抗體和大鼠抗體XT-M4阻斷RAGE配體HMGBl、淀粉樣蛋白(31-42肽、SI00-A和S100-B與hRAGE-Fc的結(jié)合的能力。圖14提供多個圖，其展現(xiàn)如通過抗體競爭ELISA結(jié)合檢定所測定的嵌合XT-M4與抗體XT-M4和XT-H2競爭與hRAGE-Fc的結(jié)合的能力。圖15描述食蟹猴、兔和狒狒的肺組織IHC染色，表明XT-M4結(jié)合這些組織中的內(nèi)源性細(xì)胞表面RAGE。對照樣本為表達(dá)接觸XT-M4的hRAGE的CHO細(xì)胞、不表達(dá)RAGE的NGBCHO細(xì)胞和表達(dá)接觸對照IgG抗體的hRAGE的CHO細(xì)胞。圖16繪示大鼠抗體XT-M4結(jié)合正常人的肺和患有慢性阻塞性肺病〔COPD)的人的月市中的RAGE。圖17繪示人類化鼠科XT-H2HV區(qū)的氨基酸序列。圖18繪示人類化鼠科XT-H2HL區(qū)的氨基酸序列。圖9繪示人類化大鼠XT-M4HV區(qū)的氨基酸序列。圖20A-20B繪示人類化大鼠XT-H2HL區(qū)的氨基酸序列。圖21描述用于產(chǎn)生人類化輕鏈和重鏈多肽的表達(dá)載體。圖22繪示如通過競爭ELISA所測定的人類化XT-H2抗體與人類RAGE-Fc結(jié)合的ED50值。圖23繪示如通過BIACORETM結(jié)合檢定所測定的XT-M4以及人類化抗體XT-M4-V10、XT-M4-V11禾QXT-M4-V14結(jié)合hRAGE-SA的動力學(xué)速率常數(shù)(ka和kd)以及締合常數(shù)和解離常數(shù)(Ka和Kd)。圖24繪示如通過BIACORETM結(jié)合檢定所測定的XT-M4以及人類化抗體XT-M4-V10、XT-M4-V11和XT-M4-V14結(jié)合mRAGE-SA的動力學(xué)速率常數(shù)(ka和kd)以及締合常數(shù)和解離常數(shù)(Ka和Kd)。圖25繪示鼠科XT-H2VL-VHScFv構(gòu)筑體的核苷酸序列(SEQIDNO:51)。圖26繪示鼠科XT-H2VH-VLScFv構(gòu)筑體的核苷酸序列(SEQIDNO:52)。圖27繪示大鼠XT-M4VL-VHScFv構(gòu)筑體的核苷酸序列(SEQIDNO:54)。圖28繪示大鼠XT-M4VH-VLScFv構(gòu)筑體的核苷酸序列(SEQIDNO:53)。圖29為ELISA數(shù)據(jù)圖，其展現(xiàn)XT-H2和XT-M4抗RAGE抗體的ScFv構(gòu)筑體以VL/VH或VH/VL構(gòu)型結(jié)合人類RAGE-Fc。圖30為ELISA數(shù)據(jù)圖，其展現(xiàn)在大腸桿菌(Escherichiacoli)中表達(dá)為可溶性蛋白的XT-H2和XT-M4抗RAGE抗體的ScFv構(gòu)筑體以VL/VH或VH/VL構(gòu)型結(jié)合人類RAGE-Fc禾卩BSA。ActRIIb為作為陰性對照的由相同載體表達(dá)的不結(jié)合蛋白。圖31示意性展現(xiàn)使用PCR將摻加示蹤劑的突變(spikedmutation)引入XT-M4的CDR中。圖32繪示XT-M4VL-VHScFv構(gòu)筑體的C末端的核苷酸序列(SEQIDNO:56)。VH-CDR3加下劃線。還繪示兩個摻加示蹤劑的寡核苷酸(SEQIDNO:57-58)，其中各突變位點(diǎn)處具有標(biāo)識用于在所述位點(diǎn)處突變的摻加示蹤劑的比率的數(shù)字。也標(biāo)識出具有與所述數(shù)字對應(yīng)的摻加示蹤劑的比率的核苷酸組成。圖33示意性展現(xiàn)核糖體展示載體pWRIL-3。"T7"表示T7啟動子，"RBS"為核糖體結(jié)合位點(diǎn)，"間隔多肽"為將折疊蛋白與核糖體連接的間隔多肽，"Flag標(biāo)簽"為用于蛋白檢測的Flag表位標(biāo)簽。圖34示意性展現(xiàn)噬菌體展示載體pWRIL-l。圖35示意性展現(xiàn)使用Fab展示載體pWRIL-6進(jìn)行的摻加示蹤劑的VL和VH的文庫的組合組裝。'圖36為抗體競爭ELISA數(shù)據(jù)圖，其展現(xiàn)在去除52位處的糖基化位點(diǎn)的突變后XT-M4抗體對hRAGE的親和力增加。圖37為繪示在對小鼠單次靜脈內(nèi)投藥后嵌合XT-M4的血清濃度的圖。圖38為繪示嵌合XT-M4對Tg2576小鼠模型中記憶缺失的影響的圖。具體實施例方式抗RAGE抗體本發(fā)明提供特異性結(jié)合如本文所述的RAGE(包括可溶性RAGE和內(nèi)源性分泌型RAGE)的抗體。代表性抗RAGE抗體可包含SEQIDNO:16-49中所示的抗體可變區(qū)氨基酸序列中的至少一種。本發(fā)明的抗RAGE抗體包括特異性結(jié)合RAGE且具有與SEQIDNO:16-49中的任一序列一致或?qū)嵸|(zhì)上一致的氨基酸序列的抗體。實質(zhì)上一致的抗RAGE抗體的氨基酸序列為與SEQIDNO:16-49中任一序列具有至少85%、85%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%—致性的序列。本發(fā)明的抗RAGE抗體包括一種抗體，其特異性結(jié)合RAGE,且(a)包含選自由SEQIDNO:19、22、25、23、27和17組成的群組的輕鏈可變區(qū)，或(b)包含具有與SEQIDNO:19、22、25、23、27和17中任一序列至少90%—致的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，或為根據(jù)(a)或(b)的抗體的RAGE結(jié)合片段。本發(fā)明的抗RAGE抗體還包括一種抗體，其特異性結(jié)合RAGE，且(a)包含選自由SEQIDNO:18、21、24、20、26和16組成的群組的重鏈可變區(qū)，或(b)包含具有與SEQIDNO:18、21、24、20、26和16中任一序列至少90%—致的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，或為根據(jù)(a)或(b)的抗體的RAGE結(jié)合片段。本發(fā)明包括一種抗RAGE抗體，其特異性結(jié)合RAGE且(a)與選自由XT-Hl、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體競爭與RAGE的結(jié)合；(b)々結(jié)合選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的RAGE的表位結(jié)合；(c)包含選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的輕鏈或重鏈的一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);或(d)為根據(jù)(a)、(b)或(c)的抗體的RAGE結(jié)合片段。本發(fā)明包括在活體外和活體內(nèi)特異性結(jié)合RAGE表達(dá)細(xì)胞的抗RAGE抗體，以及以在至少約1x10—7M到約1x10—mM范圍內(nèi)的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合人類RAGE的抗體。還包括特異性結(jié)合人類RAGE的V結(jié)構(gòu)域的本發(fā)明的抗RAGE抗體，和阻斷RAGE與RAGE結(jié)合搭配物(RAGE-BP)結(jié)合的抗RAGE抗體。本發(fā)明還包括一種抗體，其特異性結(jié)合RAGE,并且阻斷RAGE與Rage結(jié)合搭配物(例如，配體，諸如HMGB1、AGE、A(3、SAA、S100、兩性霉素(amphoterin)、S100P、S100A(包括S100A8和S100A9)、S100A4、CRP、卩2-整合素(integrin)、Mac-l和p150,95)的結(jié)合，且具有具四個或四個以上以下特征的CDR(位置編號是關(guān)于如圖6和7中關(guān)于VH和VL序列所示的氨基酸位置)121.VHCDR1中的氨基酸序列為Y-X-M(Y32、X33、M34)，其中X優(yōu)選為W或N;2.VHCDR2中的氨基酸序列為I-N-X-S(151、N52、X53和S54),其中X為P或N;3.VH的CDR2中第58位氨基酸為蘇氨酸；4.VH的CDR2中第60位氨基酸為酪氨酸；5.VH的CDR3中第103位氨基酸為蘇氨酸；6.VH的CDR3中具有一個或多個酪氨酸殘基；7.VL的CDR1中第24位為帶正電殘基(Arg或Lys);8.VL的CDR1中第26位為親水性殘基(Thr或Ser);9.VL的CDR1中第25位為小殘基Ser或Ala:10.VL的CDR1中第33位為帶負(fù)電殘基(Asp或Glu);11.VL的CDR1中第37位為芳香族殘基(Phe或Tyr或Trp);12.VL的CDR2中第57位為親水性殘基(Ser或Thr);13.VL的CDR3末端處為P-X-T序列，其中X可為疏水性殘基Leu或Trp。本發(fā)明的抗RAGE抗體包括特異性結(jié)合人類RAGE的V結(jié)構(gòu)域并且阻斷RAGE與其配體的結(jié)合且具有具5、6、7、8、9、10、11、12或所有13個特征的CDR的抗體。本發(fā)明的抗RAGE抗體包括如上文所述的抗RAGE抗體，或選自由以下組成的群組的RAGE結(jié)合片段嵌合抗體、人類化抗體、單鏈抗體、四聚體抗體、四價抗體、多特異性抗體、結(jié)構(gòu)域特異性抗體、結(jié)構(gòu)域缺失抗體、融合蛋白、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、ScFv片段、Fd片段、單結(jié)構(gòu)域抗體、dAb片段和Fc融合蛋白(即，與免疫球蛋白恒定區(qū)融合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)。這些抗體可與細(xì)胞毒性劑、放射性治療劑或可檢測標(biāo)記偶聯(lián)。舉例來說，已制備包含大鼠XT-M4抗體的VH和VL結(jié)構(gòu)域的ScFv抗體(SEQIDNO:63),且通過基于細(xì)胞的ELISA分析證實，其對狒狒、小鼠、兔和人類RAGE的結(jié)合親和力可與嵌合和野生型XT-M4抗體的結(jié)合親和力相當(dāng)。另外，預(yù)期本發(fā)明的抗體包括異源連結(jié)物、雙特異性分子、單鏈分子以及嵌合分子和人類化分子，其對標(biāo)的多肽中的一種具有由抗體的至少一個CDR區(qū)所賦予的親和力。特異性結(jié)合RAGE的本發(fā)明的抗體還包括本文所述的任一種抗體的變體，其可易于使用已知的分子生物學(xué)和克隆技術(shù)來制備。例如，參看美國公開專利申請案第2003/0118592號、第2003/0133939號、第2004/0058445號、第2005/0136049號、第2005/0175614號、第2005/0180970號、第2005/0186216號、第2005/0202012號、第2005/0202023號、第2005/0202028號、第2005/0202534號和第2005/0238646號，以及其相關(guān)專利家族成員，所有所述專利都是以全文引用的方式并入本文中。舉例來說，本發(fā)明的變體抗體也可包含結(jié)合結(jié)構(gòu)域-免疫球蛋白融合蛋白，其包括與免疫球蛋白鉸鏈或鉸鏈作用區(qū)多肽融合或以其它方式與其連接的結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽(例如，scFv),而所述鉸鏈或鉸鏈作用區(qū)多肽又與包含一個或多個除CH1外的免疫球蛋白重鏈的天然或經(jīng)工程改造的恒定區(qū)(例如，IgG和IgA的CH2和CH3區(qū)或IgE的CH3和CH4區(qū))的區(qū)融合或以其它方式與其連接(有關(guān)更為完整的描述，例如參看萊德貝特J.(Ledbetter，J.)等人的US2005/0136049，其是以引用的方式并入本文中)。結(jié)合結(jié)構(gòu)域-免疫球蛋白融合蛋白可另外包括一個區(qū)，其包括天然或經(jīng)工程改造的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)多肽(或在全部或部分來自IgE的構(gòu)筑體的情況下為CH3),所述多肽與融合CH2恒定區(qū)多肽或以其它方式連接到CH2恒定區(qū)多肽(或在全部或部分來自IgE的構(gòu)筑體的情況下為CH3)的鉸鏈區(qū)多肽和天然或經(jīng)丄程改造的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)多肽(或在全部或部分來自IgE的構(gòu)筑體的情況下為CH4)融合或以其它方式與其連接。通常，所述結(jié)合結(jié)構(gòu)域-免疫球蛋白融合蛋白能夠具有至少一種免疫活性，例如特異性結(jié)合RAGE、抑制RAGE與RAGE結(jié)合搭配物之間的相互作用、誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、誘導(dǎo)補(bǔ)體結(jié)合等。本發(fā)明的抗體也可包含與其連接且能夠檢測的標(biāo)記(例如，所述標(biāo)記可為放射性同位素、熒光化合物、酶或酶輔助因子)。RAGE多肽本發(fā)明還提供狒狒、食蟹猴和兔的經(jīng)分離RAGE蛋白，其具有SEQIDNO:7、9、U或13中所不的氨基酸序列；且另外包括具有與SEQIDNO:7、9、11或13中所示的氨基酸序列實質(zhì)上一致的氨基酸序列的RAGE蛋白，這是因為所述氨基酸序列與SEQIDNO:7、9、11或13中任一序列的氨基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、%%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%—致。本發(fā)明還包括通過所屬領(lǐng)域中已知的任何方式產(chǎn)生本發(fā)明的抗RAGE抗體和其RAGE結(jié)合片段的方法。本發(fā)明還包括一種經(jīng)純化單克隆抗體制劑，其特異性結(jié)合如SEQIDNO:1、3、7、9、11或13中任一序列所述的RAGE氨基酸序列的一個或多個表位。定義為簡便起見，將本說明書、實例和隨附權(quán)利要求書中所使用的某些術(shù)語收集于此。除非另作定義，否則本文所使用的所有科技術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常所了解相同的含義。冠詞"一"在本文中用于指所述冠詞的一個或多個(即至少一個)語法體。舉例來說，"一要素"意謂一個要素或多個要素。除非上下文中另作清楚指示，否則術(shù)語"或"在本文中用于意謂術(shù)語"和/或"并且可與術(shù)語"和/或"互換使用。"經(jīng)分離"或"經(jīng)純化"多肽或蛋白(例如"經(jīng)分離抗體")是經(jīng)純化至超出其在自然界中所存在的狀態(tài)的狀態(tài)。舉例來說，"經(jīng)分離"或"經(jīng)純化"多肽或蛋白(例如"經(jīng)分離抗體")可實質(zhì)上不含來自產(chǎn)生所述蛋白的細(xì)胞或組織來源的細(xì)胞材料或其它污染蛋白；或當(dāng)化學(xué)合成時，實質(zhì)上不含化學(xué)前體或其它化學(xué)物質(zhì)。具有小于約50%的非抗體蛋白(在本文中也稱為"污染蛋白")或化學(xué)前體的抗體蛋白制劑被認(rèn)為是"實質(zhì)上不含"所述非抗體蛋白或化學(xué)前體。40%、30%、20%、10%且更優(yōu)選5%(以干重計)的非抗體蛋白或化學(xué)前體被認(rèn)為是實質(zhì)上不存在的。當(dāng)重組產(chǎn)生抗體蛋白或其生物活性部分時，也優(yōu)選實質(zhì)上不含培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基占蛋白制劑的體積或質(zhì)量的不足約30%、優(yōu)選不足約20%、更優(yōu)選不足約10%且最優(yōu)選不足約5%。在本文中稱為"重組體"的蛋白或多肽為通過重組核酸表達(dá)產(chǎn)生的蛋白或多肽。術(shù)語"抗體"在本文中可與術(shù)語"免疫球蛋白"互換使用，且包括完整抗體、抗體片段(例如，F(xiàn)ab、F(ab')2片段)，以及恒定區(qū)和/或可變區(qū)已突變(例如，用于產(chǎn)生嵌合抗體、部分人類化抗體或完全人類化抗體以及用于產(chǎn)生具有所需特性(例如增強(qiáng)的IL13結(jié)合和/或減弱的FcR結(jié)合)的抗體的突變)的完整抗體和片段。術(shù)語"片段"是指包含比完整或完全抗體或抗體鏈少的氨基酸殘基的一部分抗體或抗體鏈?？山?jīng)由化學(xué)或酶處理完整或完全抗體或抗體鏈而獲得片段。也可通過重組方式獲得片段。例示性片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc、Fd、dAb和scFv禾G/或Fv片段。術(shù)語"抗原結(jié)合片段"是指結(jié)合抗原或與完整抗體(即，產(chǎn)生所述片段的完整抗體)競爭抗原結(jié)合(即，特異性結(jié)合)的免疫球蛋白或抗體的多肽片段。因此，這些抗體或其片段包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，條件是所述抗體或片段特異性結(jié)合RAGE，并且中和或抑制一種或多種RAGE相關(guān)活性(例如，抑制RAGE結(jié)合搭配物(RAGE-BP)與RAGE的結(jié)合)。所述抗體包括包含通過二硫鍵互連的四條多肽鏈(兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈)的分子結(jié)構(gòu)。各重鏈包含重鏈可變區(qū)(在本文中縮寫為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個結(jié)構(gòu)域，即CH1、CH2和CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(在本文中縮寫為LCVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個結(jié)構(gòu)域CL。VH和VL區(qū)可進(jìn)一步細(xì)分為高變區(qū)，稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，散布有更為保守的區(qū)域，稱為框架區(qū)(FR)。VH和VL各自是由三個CDR和四個FR構(gòu)成，從氨基末端到羧基末端以下列順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。預(yù)期術(shù)語"抗體"涵蓋從任何來源(例如，人類和非人類靈長類動物，和嚙齒動物、兔類、山羊、牛、馬、綿羊等)獲得的任何Ig種類或任何Ig亞類(例如IgG的IgG,、IgG2、IgG3和IgG4亞類)。如本文所使用，術(shù)語"lg種類"或"免疫球蛋白種類"是指已在人類和高級哺乳動物中鑒別出的5個免疫球蛋白種類IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。術(shù)語"Ig亞類"是指已在人類和高級哺乳動物中鑒別出的IgM的兩個亞類(H和L)、IgA的三個亞類(IgAl、IgA2和分泌型IgA)和IgG的四個亞類(IgG,、IgG2、IgG3和IgG"。所述抗體可以單體或聚合物形式存在；舉例來說，IgM抗體以五聚體形式存在，且IgA抗體以單體、二聚體或多聚體形式存在。術(shù)語"IgG亞類"是指已在人類和高級哺乳動物中分別通過免疫球蛋白的Y重鏈"-W鑒別出的免疫球蛋白IgG種類的四個亞類一IgGi、IgG2、IgG3和IgG4。術(shù)語"單鏈免疫球蛋白"或"單鏈抗體"(在本文中可互換使用)是指具有由重鏈和輕鏈組成的兩條多肽鏈結(jié)構(gòu)的蛋白，所述鏈例如是通過鏈間肽連接子達(dá)到穩(wěn)定，所述蛋白具有特異性結(jié)合抗原的能力。術(shù)語"結(jié)構(gòu)域"是指重鏈或輕鏈多肽的球形區(qū)，其包含例如通過(3折疊片和/或鏈內(nèi)二硫鍵達(dá)到穩(wěn)定的肽環(huán)(例如，包含3到4個肽環(huán))。根據(jù)在"恒定"結(jié)構(gòu)域的情況下各類成員的結(jié)構(gòu)域內(nèi)序列變異的相對缺乏，或者在"可變"結(jié)構(gòu)域的情況下各類成員的結(jié)構(gòu)域內(nèi)的明顯變異，在本文中將結(jié)構(gòu)域另外稱為"恒定"或"可變"結(jié)構(gòu)域?？贵w或多肽"結(jié)構(gòu)域"通常在所屬領(lǐng)域中互換稱為抗體或多肽"區(qū)"?？贵w輕鏈的"恒定"結(jié)構(gòu)域可互換稱為"輕鏈恒定區(qū)"、"輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域"、"CL"區(qū)或"CL"結(jié)構(gòu)域?？贵w重鏈的"恒定"結(jié)構(gòu)域可互換稱為"重鏈恒定區(qū)"、"重鏈恒定結(jié)構(gòu)域"、"CH"區(qū)或"CH"結(jié)構(gòu)域。抗體輕鏈的"可變"結(jié)構(gòu)域可互換稱為"輕鏈可變區(qū)"、"輕鏈可變結(jié)構(gòu)域"、"VL"區(qū)或"VL"結(jié)構(gòu)域?？贵w重鏈的"可變"結(jié)構(gòu)域可互換稱為"重鏈恒定區(qū)"、"重鏈恒定結(jié)構(gòu)域"、"VH"區(qū)或"VH"結(jié)構(gòu)域。術(shù)語"區(qū)"也可以指抗體鏈或抗體鏈結(jié)構(gòu)域的一部分(例如，重鏈或輕鏈的一部分16或者恒定結(jié)構(gòu)域或可變結(jié)構(gòu)域的一部分，如本文所定義)以及所述鏈或結(jié)構(gòu)域的更為分散的部分。舉例來說，輕鏈和重鏈或輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括散布于"框架區(qū)"或"fr"間的"互補(bǔ)決定區(qū)"或"CDR"，如本文所定義。術(shù)語"構(gòu)象"是指蛋白或多肽(例如，抗體、抗體鏈、其結(jié)構(gòu)域或區(qū))的三級結(jié)構(gòu)。舉例來說，短語"輕(或重)鏈構(gòu)象"是指輕(或重)鏈可變區(qū)的三級結(jié)構(gòu)，且短語"抗體構(gòu)象"或"抗體片段構(gòu)象"是指抗體或其片段的三級結(jié)構(gòu)。抗體的"特異性結(jié)合"意謂所述抗體對特定抗原或表位展現(xiàn)可察覺的親和力且通常不展現(xiàn)明顯的交叉反應(yīng)性。如本文所使用，術(shù)語"抗RAGE抗體"是指特異性結(jié)合RAGE的抗體。所述抗體可能不展現(xiàn)交叉反應(yīng)性(例如，不與非RAGE肽或RAGE上的遠(yuǎn)端表位交叉反應(yīng))。"可察覺的"結(jié)合包括以至少106、107、108、109m—1或lO^n/t1的親和力結(jié)合。具有高于107m"或10sm—'的親和力的抗體通常相應(yīng)地以較高特異性結(jié)合。預(yù)期本文所述值的中間值也在本發(fā)明的范圍內(nèi)，并且本發(fā)明的抗體以在一定范圍內(nèi)的親和力(例如，106到lC^M-'或107到1(Tm-'或108到1(TM—1)纟吉合rage。"不展現(xiàn)明顯交叉反應(yīng)性"的抗體為不會可察覺地結(jié)合除其標(biāo)靶外的實體(例如，不同表位或不同分子)的抗體。舉例來說，特異性結(jié)合RAGE的抗體將可察覺地結(jié)合RAGE，但不會與非RAGE蛋白或肽顯著反應(yīng)。例如，對特定表位具特異性的抗體將不會與同一蛋白或肽上的遠(yuǎn)端表位顯著交叉反應(yīng)。可根據(jù)所屬領(lǐng)域認(rèn)可的任何測定特異性結(jié)合的方式測定所述結(jié)合。優(yōu)選根據(jù)斯卡恰特分析(Scatchardanalysis)和/或競爭性結(jié)合檢定測定特異性結(jié)合。如本文所使用，術(shù)語"親和力"是指單抗原組合位點(diǎn)與抗原決定基結(jié)合的強(qiáng)度。親和力視抗體組合位點(diǎn)與抗原決定基之間立體化學(xué)擬合的接近程度、其間的接觸區(qū)域的大小、帶電和疏水性基團(tuán)的分布等而定?？梢酝ㄟ^平衡透析或動力學(xué)BIACORETM方法測量抗體親和力。BIACORE頂方法取決于當(dāng)在金屬/液體界面處激發(fā)表面等離子體波時出現(xiàn)的表面等離子體共振(spr)現(xiàn)象。將光導(dǎo)向不與樣本接觸的表面?zhèn)惹覐乃鰝?cè)面反射，并且在角度和波長的特定組合下，SPR引起反射光強(qiáng)度的降低。雙分子結(jié)合事件引起表而層處折射率的改變，這可檢測為SPR信號的改變。解離常數(shù)Kd和締合常數(shù)Ka為親和力的定量度量。平衡時，游離抗原(Ag)和游離抗體(Ab)與抗原-抗體復(fù)合物(Ag-Ab)達(dá)到平衡，且速率常數(shù)ka和kd用數(shù)量表示個別反應(yīng)的速率kakdAb+Ag~>Ab-Ag禾口Ab-Ag—Ab+Ag。平衡時，ka[Ab][Ag]=kd[Ag-Ab]。解離常數(shù)Kd由下式提供Kd=kd/ka=[Ag][Ab]/[Ag-Ab]。Kd具有濃度單位，最通常為M、mM、^M、nM、pM等。當(dāng)比較以Kd表示的抗體親和力時，由較低值指示對RAGE具有較大親和力。締合常數(shù)Ka由下式提供Ka=ka/kd=[Ag-Ab]/[Ag][Ab]。Ka的單位為濃度的倒數(shù)，最通常為M—1、mM"、pM—1、nM—\pM—i等。如本文所使用，術(shù)語"親合力(avidity)"是指形成可逆復(fù)合物后抗原-抗體鍵的強(qiáng)度?？梢訩d表征抗RAGE抗體與RAGE蛋白的結(jié)合，如"以在約(較低Kd值)到約(較高Kd值)范圍內(nèi)的解離常數(shù)(Kd)"結(jié)合。在此情況下，術(shù)語"約"意欲意謂所指示的Kd值土20呢；艮卩，約為1的Kd二在0.8到1.2范圍內(nèi)的Kd。如本文所使用，術(shù)語"單克隆抗體"是指由產(chǎn)生抗體的細(xì)胞(例如，B淋巴細(xì)胞或B細(xì)胞)的克隆種群得到的抗體，所述克隆種群的結(jié)構(gòu)和抗原特異性相同。術(shù)語"多克隆抗體"是指由產(chǎn)生抗體的細(xì)胞的不同克隆種群得到的多個抗體，所述克隆種群的結(jié)構(gòu)和表位特異性不同，但識別共同的抗原。單克隆抗體和多克隆抗體可以粗制劑形式存在于體液內(nèi)，或可如本文所述經(jīng)純化。術(shù)語抗體的"結(jié)合部分"(或"抗體部分")包括一個或多個完整結(jié)構(gòu)域，例如一對完整結(jié)構(gòu)域，以及保留特異性結(jié)合RAGE的能力的抗體片段。己證實，抗體的結(jié)合功能可通過全長抗體的片段來執(zhí)行。通過重組DNA技術(shù)或完整免疫球蛋白的酶促或化學(xué)裂解產(chǎn)生結(jié)合片段。結(jié)合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc、Fd、dAb、Fv、單鏈、單鏈抗體(例如scFv)以及單結(jié)構(gòu)域抗體(沐伊德曼斯(Muylde腿ns)等人，2001,26:230-5)和經(jīng)分離互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。Fab片段為由VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段。F(ab')2片段為包含兩個在鉸鏈區(qū)通過二硫橋連接的Fab片段的二價片段。Fd片段是由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成，并且Fv片段是由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成。dAb片段是由VH結(jié)構(gòu)域組成(沃德(Ward)等人，(1989),自然，341:544-546)。盡管Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域VL和VH是由單獨(dú)基因編碼，但其可使用重組方法通過能使其成為單一蛋白鏈(其中VL與VH區(qū)配對形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv)))的合成連接子連接(伯德(Bird)等人，1988，科學(xué)(Science),242:423-426)。預(yù)期所述單鏈抗體也涵蓋于術(shù)語抗體的"結(jié)合部分"內(nèi)。也涵蓋其它形式的單鏈抗體，諸如雙功能抗體。雙功能抗體為二價、雙特異性抗體，其中VH和VL結(jié)構(gòu)域表達(dá)于單一多肽鏈上，但使用過短而無法使同一鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域配對，從而迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對且產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的連接子(例如，參看霍利格(Holliger)等人，1993,美國國家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),90:6444-6448)?？贵w或其結(jié)合部分也可為通過抗體或抗體部分與一個或多個其它蛋白或多肽的共價或非共價締合所形成的較大免疫粘附分子的部分。所述免疫粘附分子的實例包括使用抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)核心區(qū)來制備四聚scFv分子(基普亞諾夫S.M.(Kipriyanov，S.M.)等人，(1995)，人類抗體和雜交瘤(HumanAntibodiesandHybridomas)，6:93-101)以及使用半胱氨酸殘基、標(biāo)記肽和C末端聚組氨酸標(biāo)簽來制備二價和生物素化scFv分子(基普亞諾夫S.M.等人，(1994),分子免疫學(xué)(Mol.Immunol.),31:1047-1058)?？墒褂贸Ｒ?guī)技術(shù)(諸如，分別以木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化全抗體)由全抗體制備結(jié)合片段，諸如Fab和F(ab')2片段。此外，也可使用如本文所述且如所屬領(lǐng)域中己知的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)來獲得抗體、抗體部分和免疫粘附分子。應(yīng)了解，除"雙特異性"或"雙功能"抗體外，抗體的各個結(jié)合位點(diǎn)一致。"雙特異性"或"雙功能抗體"為具有兩個不同的重鏈/輕鏈對和兩個不同結(jié)合位點(diǎn)的人工雜交抗體。雙特異性抗體也可包括兩個抗原結(jié)合區(qū)和插入恒定區(qū)?？赏ㄟ^多種方法(包括融合雜交瘤或連接Fab'片段)產(chǎn)生雙特異性抗體。例如，參看松斯威萊(Songsivilai)等人，臨床與實驗免疫學(xué)(Clin.Exp.Immunol.),79:315-321，1990.;克斯托林(Kostelny)等人，1992,免疫學(xué)雜志(J.Immunol.)，148，1547-1553。術(shù)語"回復(fù)突變(backmutation)"是指將人類抗體的一些或全部體細(xì)胞突變的氨基酸用來自同源生殖系抗體序列的相應(yīng)生殖系殘基置換的方法。將本發(fā)明的人類抗體的重鏈和輕鏈序列單獨(dú)與VBASE數(shù)據(jù)庫中的生殖系序列比對以鑒別具冇最高同源性的序列。通過使編碼所述不同氨基酸的指定核苷酸位置突變而使本發(fā)明人類抗體的差異回復(fù)到生殖系序列。應(yīng)關(guān)于在抗原結(jié)合中所起的直接或間接作用來研究由此鑒別為回復(fù)突變候選物的各氨基酸的作用，并且在最終人類抗體中不應(yīng)包括突變后所發(fā)現(xiàn)的會影響人類抗體的任何所需特征的任何氨基酸；舉例來說，不應(yīng)使通過選擇性誘變方法所鑒別的活性增強(qiáng)氨基酸經(jīng)歷回復(fù)突變。為使經(jīng)歷回復(fù)突變的氨基酸的數(shù)目降至最低，可保留所發(fā)現(xiàn)的與最接近的生殖系序列不同但與第二生殖系序列中的相應(yīng)氨基酸一致的氨基酸位置，條件是所述第二生殖系序列在所論及的氨基酸兩側(cè)與本發(fā)明人類抗體的序列關(guān)于至少io個、優(yōu)選12個氨基酸一致且具有共線性?；貜?fù)突變可在抗體優(yōu)化的任何階段發(fā)生；優(yōu)選地，回復(fù)突變是在選擇性誘變方法之前或之后直接發(fā)生。更優(yōu)選，回復(fù)突變是在選擇性誘變方法之前直接發(fā)生。完整抗體(也稱為免疫球蛋白)通常為由各自約25kDa的兩條輕(L)鏈和各自約50kDa的兩條重(H)鏈構(gòu)成的四聚體糖基化蛋白。稱為、和k的兩類輕鏈可見于抗體中。視重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列而定，可將免疫球蛋白指定為五個主要種類A、D、E、G和M，且其中若干類可進(jìn)一步分為亞類(同型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。各輕鏈?zhǔn)怯蒒末端可變(V)結(jié)構(gòu)域(VL)和恒定(C)結(jié)構(gòu)域(CL)構(gòu)成。各重鏈?zhǔn)怯蒒末端V結(jié)構(gòu)域(VH)、三個或四個C結(jié)構(gòu)域(CH)和鉸鏈區(qū)構(gòu)成。將最接近VH的CH結(jié)構(gòu)域稱為CH1。VH和VL結(jié)構(gòu)域是由稱為框架區(qū)的四個相對保守的序列區(qū)(FR1、FR2、FR3和FR4)組成，所述框架區(qū)形成三個高變序列區(qū)(互補(bǔ)決定區(qū)，CDR)的支架。CDR含有負(fù)責(zé)抗體與抗原的特異性相互作用的大部分殘基。CDR稱為CDR1、CDR2禾QCDR3。因此，重鏈上的CDR組分稱為Hl、H2禾QH3，而輕鏈上的CDR組分稱為L1、L2和L3。CDR3是抗體結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)分子多樣性的最大來源。舉例來說，H3可短至兩個氨基酸殘基或超過26個氨基酸。所屬領(lǐng)域中眾所周知不同種類免疫球蛋白的亞單元結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型。有關(guān)抗體結(jié)構(gòu)的綜述，參看抗體實驗手冊(Antibodies:ALaboratoryManual),冷泉港實驗室(ColdSpringHarborLaboratory)編，哈洛(Harlow)等人，19S8。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識到，各亞單元結(jié)構(gòu)(例如，CH、VH、CL、VL、CDR、FR結(jié)構(gòu))包含活性片段，例如VH、VL或CDR亞單元中結(jié)合抗原的部分，即結(jié)合片段；或例如CH亞單元中結(jié)合和/或活化例如Fc受體和/或補(bǔ)體的部分?？贵w多樣性是通過使用多個編碼可變區(qū)的生殖系基因以及多個體細(xì)胞事件而產(chǎn)生。體細(xì)胞事件包括將可變基因區(qū)段與多樣性(D)和連接(J)基因區(qū)段重組以制得完整VH區(qū)，以及將可變基因區(qū)段與連接基因區(qū)段重組以制得完整VL區(qū)。重組方法本身并不嚴(yán)密，從而導(dǎo)致V(D)J連接處氨基酸的缺失或添加。所述多樣性機(jī)制是在抗原暴露之前出現(xiàn)于發(fā)育的B細(xì)胞中。抗原刺激后，B細(xì)胞中所表達(dá)的抗體基因經(jīng)歷體細(xì)胞突變。根據(jù)所估計的生殖系基因區(qū)段的數(shù)目，隨機(jī)重組這些區(qū)段并且使VH-VL隨機(jī)配對，可產(chǎn)生多達(dá)1.6x107種不同抗體(基礎(chǔ)免疫學(xué)(FundamentalImmunology),第3版(1993)，保羅(Paul)編，瑞文出版社(RavenPress),紐約州紐約市(NewYork,NY))。當(dāng)考慮有助于抗體多樣性的其它方法(諸如體細(xì)胞突變)時，認(rèn)為可產(chǎn)生超過lxl(yo種不同抗體(免疫球蛋白基因(ImmunoglobulinGenes)，第2版(1995),朱利諾(Jonio)等人，學(xué)術(shù)出版社(AcademicPress),加州圣迭戈(SanDiego，CA))。由于許多方法涉及產(chǎn)生抗體多樣性，所以獨(dú)立產(chǎn)生的具有相同抗原特異性的單克隆抗體未必具有一致氨基酸序列。術(shù)語"二聚化多肽"或"二聚化結(jié)構(gòu)域"包括與另一多肽形成二聚體(或較高級別復(fù)合物，諸如三聚體、四聚體等)的任何多肽。視情況，將二聚化多肽與其它相同的二聚化多肽締合，從而形成均多聚體。IgGFc元件為傾向于形成均多聚體的二聚化結(jié)構(gòu)域的實例。視情況，將二聚化多肽與其它不同的二聚化多肽締合，從而形成雜多聚體。Jun亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域與Fos亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域形成二聚體，且因此為傾向于形成雜多聚體的二聚化結(jié)構(gòu)域的實例。二聚化結(jié)構(gòu)域可形成25種雜多聚體和均多聚體。術(shù)語"人類抗體"包括具有與如卡貝特(Kabat)等人所述的人類生殖系免疫球蛋白序列對應(yīng)的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體(參看卡貝特等人(1991)，免疫學(xué)關(guān)注的蛋白的序列(SequencesofproteinsofImmunologicalInterest)，第5版，美國衛(wèi)生和公共服務(wù)部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices)，NIH公開案第91-3242號)。本發(fā)明的人類抗體可包括并非由例如CDR且尤其CDR3中的人類生殖系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如，通過活體外隨機(jī)或位點(diǎn)特異性誘變或者活體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)。優(yōu)選使用本文所述的"選擇性誘變方法"引入突變。人類抗體可具有至少一個經(jīng)并非由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如，活性增強(qiáng)氨基酸殘基)置換的位置。人類抗體可具有至多20個經(jīng)并非人類生殖系免疫球蛋白序列的部分的氨基酸殘基置換的位置。此外，至多10個、至多5個、至多3個或至多2個位置經(jīng)置換。如下文詳細(xì)描述，這些置換可在CDR區(qū)內(nèi)。然而，如本文所使用，術(shù)語"人類抗體"不打算包括已將從另一哺乳動物物種(諸如小鼠)得到的CDR序列移植到人類框架序列上的抗體。短語"重組人類抗體"包括通過重組方式制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的人類抗體，諸如使用轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體(進(jìn)一步描述于下文第II部分中)、從重組、組合人類抗體庫分離的抗體(進(jìn)一步描述于下文第III部分中)、從關(guān)于人類免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的動物(例如，小鼠)分離的抗體(例如，參看泰勒L.D.(Taylor,L.D.)等人(1992)，核酸研究(Nucl.AcidsRes.),20:6287-6295);或通過涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列中的任何其它方式制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的抗體。所述重組人類抗體具有來源于人類生殖系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)(參看卡貝特E.A.等人(1991),免疫學(xué)關(guān)注的蛋白的序歹ij(S叫uencesofProteinsofImmunologicalInterest),第5版，美國衛(wèi)生和公共服務(wù)部，NIH公開案第91-3242號)。然而，所述重組人類抗體可經(jīng)歷活體外誘變(或，當(dāng)使用關(guān)于人類Ig序列轉(zhuǎn)基因的動物時，活體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，且因此重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列為盡管源于且涉及人類生殖系VH和VL序列，但可能不天然存在于活體內(nèi)人類抗體生殖系譜系中的序列。然而，在某些實施例中，所述重組抗體可為選擇性誘變方法或回復(fù)突變或二者的結(jié)果。"經(jīng)分離抗體"包括實質(zhì)上不含具有不同抗原特異性的其它抗體的抗體(例如，特異性結(jié)合RAGE的經(jīng)分離抗體實質(zhì)上不含特異性結(jié)合除hRAGE外的RAGE的抗體)。特異性結(jié)合RAGE的經(jīng)分離抗體可結(jié)合來自其它物種的RAGE分子。此外，經(jīng)分離抗體可實質(zhì)上不含其它細(xì)胞材料和/或化學(xué)物質(zhì)。21"中和抗體"(或"中和RAGE活性的抗體")包括與hRAGE的結(jié)合導(dǎo)致調(diào)節(jié)hRAGE生物活性的抗體。可通過測量一種或多種hRAGE生物活性指示劑來評定所述hRAGE生物活性的調(diào)節(jié)，諸如在人類RAGE受體結(jié)合檢定中抑制受體結(jié)合(例如參看實例6和7)。這些hRAGE生物活性指示劑可通過所屬領(lǐng)域中已知的若干標(biāo)準(zhǔn)活體外或活體內(nèi)檢定中的一種或多種檢定來評定(例如參看實例6和7)。非人類(例如，鼠科)抗體的"人類化"形式為含有源于非人類免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。一般地，人類化抗體為來自受體高變區(qū)的殘基經(jīng)來自具有所需特異性、親和力和容量的非人類物種(諸如，小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)(供體抗體)高變區(qū)的殘基置換的人類免疫球蛋白(受體抗體)。在一些情況下，人類免疫球蛋白的FR殘基經(jīng)相應(yīng)非人類殘基置換。此外，人類化抗體也可包含受體抗體或供體抗體中不可見的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改進(jìn)抗體效能。一般來說，人類化抗體將包含實質(zhì)上所有的至少一個且通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或?qū)嵸|(zhì)上所有高變區(qū)與非人類免疫球蛋白的高變區(qū)對應(yīng)，并且所有或?qū)嵸|(zhì)上所有FR區(qū)為人類免疫球蛋白序列的FR區(qū)。人類化抗體視情況還將包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)的至少一部分，通常人類免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分。有關(guān)其它細(xì)節(jié)，參看瓊斯(Jones)等人，自然，321:522-525(1986);里奇曼(Riechmann)等人，自然，332:3.23-329(1988);和普雷斯塔(Presta),結(jié)構(gòu)生物學(xué)新觀點(diǎn)(Curr.Op.Struct.Biol.),2:593-596(1992)。術(shù)語"活性"包括以下活性諸如抗體對抗原的結(jié)合特異性/親和力，例如抗hRAGE抗體結(jié)合RAGE;和/或抗體的中和效力，例如結(jié)合hRAGE的抗hRAGE抗體抑制RAGE的生物活性，例如在人類RAGE受體結(jié)合檢定中抑制受體結(jié)合。"表達(dá)構(gòu)筑體"為任何重組核酸，其包括可表達(dá)的核酸以及足以介導(dǎo)可表達(dá)的核酸蛋白或多肽在適當(dāng)宿主細(xì)胞中表達(dá)的調(diào)控元件。術(shù)語"融合蛋白"和"嵌合蛋白"可互換，并且指具有特定氨基酸序列的蛋ft或多肽，所述氨基酸序列具有與來自兩種或兩種以上蛋白的氨基酸序列對應(yīng)的部分。來自兩種或兩種以上蛋白的序列可為完整蛋白或蛋白的部分(即片段)。融合蛋白也可在對應(yīng)于蛋白的氨基酸序列的部分之間具有氨基酸的連接區(qū)。所述融合蛋白可通過重組方法制備，其中通過用核酸酶和連接酶處理來連接對應(yīng)核酸，并將其并入表達(dá)載體中。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常了解融合蛋白的制備。術(shù)語"核酸"是指聚核苷酸，諸如脫氧核糖核酸(DNA),且適當(dāng)時是指核糖核酸(RNA)。也應(yīng)了解，所述術(shù)語包括由核苷酸類似物構(gòu)成的RNA或DNA的類似物(作為等效物)，以及可應(yīng)用于所述實施例的單鏈(有義鏈或反義鏈)和雙鏈聚核苷酸。術(shù)語"一致百分比"或"一致性百分比"是指兩個氨基酸序列之間或兩個核苷酸序列之間的序列一致性。一致性百分比可通過比較可出于比較目的而比對的各序列的位置來測定。表述為一致性百分比是指在多個位置處所比較的序列共有的一致氨基酸或核酸的數(shù)目的函數(shù)?？墒褂酶鞣N比對算法和/或程序，包括FASTA、BLAST或ENTREZ。FASTA和BLAST可用作GCG序列分析包(威斯康星州威斯康星大學(xué)麥迪遜分校(UniversityofWisconsin,Madison,Wis.))的一部分，并且例如可使用默認(rèn)設(shè)置。ENTREZ通過美國國家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation),國家醫(yī)學(xué)圖書館(NationalLibraryofMedicine)、美國國家衛(wèi)生研究院(NationalInstitutesofHealth)(馬里蘭州貝塞斯達(dá)(Bethesda，Md.))可用?？赏ㄟ^間隙權(quán)重為1的GCG程序測定兩個序列的一致性百分比，例如對各氨基酸間隙加權(quán)，就如同其為兩個序列之間的單一氨基酸或核苷酸錯配。供比對的其它技術(shù)描述于以下文獻(xiàn)中酶學(xué)方法(MethodsinEnzymology)，第266巻大分子序列分析的計算機(jī)方法(ComputerMethodsforMacromolecularSequenceAnalysis)(1996)，杜里特爾(Doolittle)編，學(xué)術(shù)出版公司(AcademicPress,Inc.)，哈考特'布雷斯出版公司分公司(adivisionofHarcourtBrace&Co.)，美國加州圣迭戈(SanDiego,California,USA.)。優(yōu)選利用允許序列中存在間隙的比對程序來比對序列。史密斯-沃特曼(Smith-Waterman)為一類允許序列比對中存在間隙的算法。參看分子生物學(xué)方法(Meth.Mol.Viols.)，70:173-187(1997)。另外，也可利用使用尼德曼和溫克斯(NeedlenanandWunsch)比對方法的GAPI程序來比對序列。另一研究策略使用在MASPAR計算機(jī)上運(yùn)行的MPSRCH軟件。MPSRCH使用史密斯-沃特曼算法在大規(guī)模并行計算機(jī)上對序列5評分。這一方法改善揀取遠(yuǎn)端相關(guān)匹配的能力，并且尤其耐受小間隙和核苷酸序列錯誤?？墒褂煤怂峋幋a的氨基酸序列來搜索蛋白和DNA數(shù)據(jù)庫。術(shù)語"多肽"和"蛋白"在本文中可互換使用。如所屬領(lǐng)域已知，"RAGE"蛋白為"晚期糖基化終產(chǎn)物受體"。代表性RAGE蛋白描述于圖1A-1C中。RAGE蛋白包括可溶性RAGE(sRAGE)和內(nèi)源性分泌型RAGE(esRAGE)。內(nèi)源性分泌型RAGE為在細(xì)胞外釋放的RAGE剪接變體，其中其能夠結(jié)合AGE配體且中和AGE作用。例如，參看小山(Koyama)等人，A7V￡,2005;25:2587-2593。已觀察到人類血漿esRAGE與代謝綜合癥的若干組分(BMI、胰島素抵抗、BP、高甘油二酯血癥和IGT)之間呈反向相關(guān)。血漿esRAGE含量也已與忠有或未患有糖尿病的個體的頸動脈和股動脈粥樣硬化呈反向相關(guān)(通過超聲波定量)。此外，經(jīng)血管造影證實患有冠狀動脈疾病的非糖尿病患者體內(nèi)的血漿esRAGE含量明顯低于年齡相當(dāng)?shù)慕】祵φ铡?晚期糖基化終產(chǎn)物受體配體結(jié)合元件"或"RAGE-LBE"(在本文中也稱為"RAGE-Fc"禾卩"RAGE-strep")包括跨膜RAGE多肽的任何細(xì)胞外部分和其保留結(jié)合RAGE配體的能力的片段。此術(shù)語也涵蓋與RAGE多肽(例如，將結(jié)合RAGE配體或RAGE-BP的人類或鼠科多肽)具有至少85%—致性、優(yōu)選至少90%—致性或更優(yōu)選至少95%—致性的多肽。"晚期糖基化終產(chǎn)物受體結(jié)合搭配物"或"RAGE-BP"包括在生理學(xué)環(huán)境中結(jié)合RAGE蛋白(受體多肽，諸如RAGE或RAGE-LBE)的細(xì)胞外部分的任何物質(zhì)(例如，多肽、小分子、碳水化合物結(jié)構(gòu)等)。"RAGE相關(guān)病癥"包括受影響細(xì)胞或組織展現(xiàn)RAGE或者一種或多種RAGE配體的表達(dá)和/或活性的增加或降低的任何病癥。RAGE相關(guān)病癥還包括可通過降低RAGE功能(例如，包括投與破壞RAGE:RAGE-BP相互作用的藥劑)進(jìn)行治療(即，可消除或改善一種或多種癥狀)的任何病癥。"RAGE的V結(jié)構(gòu)域"是指如尼普(Neeper)等人的"RAGE的克隆和表達(dá)蛋白晚期糖基化終產(chǎn)物的細(xì)胞表面受體(CloningandexpressionofRAGE:acellsurfacereceptorforadvancedglycosylationendproductsofproteins)"，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)267:14998-15004(1992)(所述文獻(xiàn)的內(nèi)容是以引用的方式并入本文中)的圖5中所示的免疫球蛋白樣可變結(jié)構(gòu)域。V結(jié)構(gòu)域包括如SEQIDNO:l和SEQIDNO:3中所示的第1位到第120位的氨基酸。人類RAGE的cDNA具有1406個堿基對且編碼具有404個氨基酸的成熟蛋白。參看尼普等人，1992的圖3。術(shù)語"重組核酸"包括包含至少兩個在自然界中不會一起出現(xiàn)的序列的任何核酸?？稍诨铙w外例如通過使用分子生物學(xué)方法來產(chǎn)生重組核酸，或在活體內(nèi)例如通過同源或非同源重組在新穎染色體位置處插入核酸，從而產(chǎn)生重組核酸。關(guān)于個體的術(shù)語"治療"是指改善所述個體的疾病或病癥的至少一種癥狀。治療可為治愈疾病或病況或者改善疾病或病況。術(shù)語"載體"是指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)所連接的另一核酸的核酸分子。一類載體為附加體，即能夠染色體外復(fù)制的核酸。另一類載體為整合載體，其是設(shè)計成與宿主細(xì)胞的遺傳物質(zhì)重組。載體可自主復(fù)制且可整合，并且載體的特性可視細(xì)胞環(huán)境而不同(即，載體可在一種宿主細(xì)胞類型中自主復(fù)制且在另一宿主細(xì)胞類型中完全整合)。能夠引導(dǎo)可操作地連接的可表達(dá)核酸的表達(dá)的載體在本文中稱為"表達(dá)載體"。"特異性免疫反應(yīng)性"是指當(dāng)抗體與特定肽序列相互作用時，化合物[抗體]與特定肽序列的優(yōu)先結(jié)合。如本文所使用，短語"有效量"意謂在動物體內(nèi)有效產(chǎn)生某種所需作用的一種或多種藥劑、材料或包含一種或多種本發(fā)明藥劑的組合物的量。應(yīng)理解，當(dāng)使用一種藥劑來實現(xiàn)治療作用時，包含"有效量"的實際劑量將視多種條件而變化，包括所治療的特定病況、疾病的嚴(yán)重程度、患者的體格和健康情況、投藥途徑等。醫(yī)藥從業(yè)人員可使用醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
中眾所周知的方法容易地確定適當(dāng)劑量。短語"醫(yī)藥學(xué)上可接受"在本文中用于指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)、適于與人類和動物組織接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥、與合理的效益/風(fēng)險比相符的化合物、材料、組合物和/或劑型。如本文所使用，短語"醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑"意謂涉及將標(biāo)的藥劑從一個器官或身體的一部分載運(yùn)或轉(zhuǎn)運(yùn)到另一器官或身體的一部分的醫(yī)藥學(xué)上可接受的材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或封裝材料。從與調(diào)配物中的其它成分可相容的意義上說，各載劑必須為"可接受的"?？捎米麽t(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的材料的一些實例包括(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素和其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)粉末狀黃貧膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂和栓劑蠟(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油(10)二醇類，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原質(zhì)水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer'ssolution);(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)用于醫(yī)藥調(diào)配物中的其它無毒可相容物質(zhì)。單克隆抗體的制備可用全長蛋白或其片段或編碼全長蛋A或其片段的cDNA(肽的免疫原形式)使哺乳動物(諸如小鼠、大鼠、倉鼠或兔)免疫。用于賦予蛋白或肽免疫原性的技術(shù)包括與載體連結(jié)或所屬領(lǐng)域中眾所周知的其它技術(shù)。可在存在佐劑的情況下投與多肽的免疫原性部分。可通過檢測血漿或血清中的抗體效價來監(jiān)測免疫的進(jìn)展?？衫妹庖咴鳛榭乖?，使用標(biāo)準(zhǔn)ELISA或其它免疫檢定來評定抗體含量。在用標(biāo)的多肽的抗原制劑使動物免疫后，可獲得抗血清，并且在必要時可從血清中分離多克隆抗體。為產(chǎn)生單克隆抗體，可從經(jīng)免疫動物采集產(chǎn)生抗體的細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)，并且通過標(biāo)準(zhǔn)體細(xì)胞融合程序?qū)⑵渑c永生化細(xì)胞(諸如骨髓瘤細(xì)胞)融合以得到雜交瘤細(xì)胞。所屬領(lǐng)域中眾所周知所述技術(shù)，且其例如包括雜交瘤技術(shù)(最初是由柯勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein),(1975)自然，256:495-497提出)、人類B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(卡茲巴(Kozbar)等人(1983)，今日免疫學(xué)(ImmunologyToday),4:72)和用于產(chǎn)生人類單克隆抗體的EBV-雜交瘤技術(shù)(柯爾(Cole)等人，(1985)單克隆抗體和癌癥治療(MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy)，AlanR.Liss有限公司，第77-96頁)?？赏ㄟ^免疫化學(xué)方法針對與RAGE多肽表位特異性反應(yīng)的抗體以及從包含雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)物分離的單克隆抗體的產(chǎn)生來篩選所述雜交瘤細(xì)胞。人類化嵌合抗體包含來自至少兩個不同物種的序列。舉一個實例，可使用重組克隆技術(shù)以包括來自非人類抗體(即，在經(jīng)抗原免疫的非人類物種中制備的抗體)的可變區(qū)(其含有抗原結(jié)合位點(diǎn))和來源于人類免疫球蛋白的恒定區(qū)。人類化抗體是一類嵌合抗體，其中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的可變區(qū)殘基(即，縮寫為互補(bǔ)決定區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)殘基，或參與抗原結(jié)合的任何其它殘基)是來源于非人類物種，而剩余可變區(qū)殘基(即框架區(qū)殘基)和恒定區(qū)至少部分來源于人類抗體序列。人類化抗體的一小組框架區(qū)殘基和恒定區(qū)殘基可來源于非人類來源。人類化抗體的可變區(qū)也被描述為人類化(即，人類化輕鏈或重鏈可變區(qū))。非人類物種通常為用于利用抗原免疫的物種，諸如小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類動物或其它非人類哺乳動物物種。人類化抗體的免疫原性通常低于傳統(tǒng)的嵌合抗體并且在投與人類后展現(xiàn)改善的穩(wěn)定性。例如，參看本因克薩(Benincosa)等人(2000),藥理學(xué)和實驗治療學(xué)雜志(/.尸/mmwco/.Exp.77^)，292:810-6;卡羅芳斯(Kalofonos)等人(1994)'歐洲癌癥雜志/.Ca"c")，30A:1842-50;薩伯拉曼尼安(Subramanian)等人(1998)，兒科傳染病雜志(/W/。,r./"/ecf.Z>".,17:110-5?；パa(bǔ)決定區(qū)(CDR)為參與抗原結(jié)合的抗體可變區(qū)的殘基。用于標(biāo)識CDR的若干編號系統(tǒng)同樣適用。卡貝特界定(Kabatdefinition)是基亍序列可變性，且齊羅夏界定(Chothiadefinition)是基于結(jié)構(gòu)環(huán)區(qū)的位置。AbM界定為卡貝特方法與齊羅夏方法之間的折衷。根據(jù)卡貝特、齊羅夏或AbM算法，通過第24位和第34位(CDR1-L)、第50位和第56位(CDR2-L)以及第89位和第97位(CDR3-L)殘基限定輕鏈可變區(qū)CDR的邊界。根據(jù)卡貝特界定，通過第31位和第35B位(CDR1-H)、第50位和第65位(CDR2-H)以及第95位和第102位(CDR3-H)(根據(jù)卡貝特進(jìn)行編號)殘基限定重鏈可變區(qū)的CDR的邊界。根據(jù)齊羅夏界定，通過第26位和第32位(CDR1-H)、第52位和第56位(CDR2-H)以及第95位和第102位(CDR3-H)(根據(jù)齊羅夏進(jìn)行編號)殘基限定重鏈可變區(qū)的CDR的邊界。根據(jù)AbM界定，通過第26位和第35B位(CDR1-H)、第50位和第58位(CDR2-H)以及第95位和第102位(CDR3-H)(根據(jù)卡貝特進(jìn)行編號)殘基限定重鏈可變區(qū)的CDR的邊界。參看馬丁(Martin)等人(1989)美國國家科學(xué)院院干'J(尸rac.淑/.Aca"d.,)86:9268-9272;馬丁(Martin)等人(1991)酶方法(M"/w^^zz;ymoZ.)203:121-153;佩德森(Pedersen)等人(1992)免疫方法(/mmM"o/nef/u心)1:126;和丙斯(Rees)等人(1996)斯騰伯格M丄E.(SternbergM丄E.)(編)，蛋A結(jié)構(gòu)預(yù)測(ProteinStructurePrediction),牛津人學(xué)出版社(OxfordUniversityPress)，牛津(Oxford),第141-172頁。如本文所使用，術(shù)語"CDR"是指如卡貝特或齊羅夏所界定的CDR;此外，可構(gòu)筑本發(fā)明的人類化抗體可變區(qū)以包含一個或多個如卡貝特所界定的CDR,且也包含一個或多個如齊羅夏所界定的CDR。特異性決定區(qū)(SDR)為直接與抗原相互作用的CDR內(nèi)的殘基。SDR對應(yīng)于高變殘基。參看(帕德蘭(Padlan)等人(1995)美國實驗生物學(xué)聯(lián)合會會志(FAS￡￡/.)9:133-139)。框架殘基為除高變或CDR殘基外的抗體口P變區(qū)的殘基。框架殘基可來源于天然存在的人類抗體，諸如實質(zhì)上類似于本發(fā)明的抗RAGE抗體的框架區(qū)的人類框架。也可使用呈現(xiàn)個別序列間的一致性的人工框架序列。當(dāng)選擇框架區(qū)以供人類化時，人類中廣泛呈現(xiàn)的序列可優(yōu)于較不常見的序列?？蓪θ祟惪蚣苁荏w序列進(jìn)行額外突變以恢復(fù)據(jù)悉涉及抗原接觸的鼠科殘基和/或涉及抗原結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)完整性的殘基，或改善抗體表達(dá)?？墒褂秒慕Y(jié)構(gòu)預(yù)測來分析人類化可變重鏈和輕鏈區(qū)序列，從而鑒別并避免由人類化設(shè)計引入的翻譯后蛋白修飾位點(diǎn)?？墒褂冒ㄨ傦?veneering)、互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)移植、縮短的CDR的移棺、特異性決定區(qū)(SDR)移植和弗蘭肯斯坦組裝(Frankensteinassembly)(如下文所述)在內(nèi)的多種方法中的任一種來制備人類化抗體。人類化抗體還包括超人類化抗體，其中已在CDR中引入一種或多種改變。舉例來說，可用人類殘基取代CDR中的非人類殘基?？蓪⑦@些常用方法與標(biāo)準(zhǔn)誘變以及合成技術(shù)組合以產(chǎn)生具有任何所需序列的抗RAGE抗體。鑲飾是基于通過用人類氨基酸序列對抗體的溶劑可達(dá)外部進(jìn)行表面重塑來減少嚙齒動物或其它非人類抗體中的潛在免疫原性氨基酸序列的觀念。因此，經(jīng)鑲飾抗體相對于人類細(xì)胞似乎比未經(jīng)修飾的非人類抗體具有較少外來性。參看帕德蘭(1991),分子免疫學(xué)(M"/mmtmo/.)28:489-98。通過鑒別非人類抗體中暴露的外部框架區(qū)殘基(其不同于人類抗體框架區(qū)的相同位置處的殘基)且用通常占據(jù)人類抗體的這些相同位置的氨基酸置換所述經(jīng)鑒別的殘基來鑲飾非人類抗體。CDR移植是通過用供體抗體(例如非人類抗體)的CDR置換受體抗體(例如，人類抗體或包含所需框架殘基的其它抗體)的一個或多個CDR來進(jìn)行?？苫诤蜻x受體抗體與供體抗體之間框架殘基的相似性來選擇受體抗體。舉例來說，根據(jù)弗蘭肯斯坦方法，將人類框架區(qū)鑒別為具有與相關(guān)非人類抗體的各框架區(qū)實質(zhì)同源的序列，并且將所述非人類抗體的CDR移植到不同人類框架區(qū)的復(fù)合物上。同樣適用-丁-制備本發(fā)明抗體的相關(guān)方法描述于美國專利申請公開案第2003/0040606號中。縮短的CDR的移植為一種相關(guān)方法。縮短的CDR包括特異性決定殘基和相鄰氨基酸，包括輕鏈第27d-34位、第50-55位和第89-96位的氨基酸以及重鏈第31-35b位、第50-58位和第95-101位的氨基酸(根據(jù)(卡貝特等人(1987))的編號慣例)。參看(帕德蘭(Padlan)等人(1995)美國實驗生物學(xué)聯(lián)合會會志(E4SES/.)9:133-9)。特異性決定殘基(SDR)移植是依據(jù)以下理解抗體組合位點(diǎn)的結(jié)合特異性和親和力是由各互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)內(nèi)最高度可變的殘基來決定。可使用抗體-抗原復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)分析以及可用氨基酸序列數(shù)據(jù)分析，以基于CDR內(nèi)各位置處存在的氨基酸殘基的結(jié)構(gòu)差異建立序列可變性模型。將SDR鑒別為由接觸殘基組成的具有最小免疫原性的多肽序列。參看帕德蘭(Padlan)等人(1995)美國實驗生物學(xué)聯(lián)合會會志(MSEflJ.)9:133-139。用于CDR或縮短的CDR的移植的受體框架可經(jīng)進(jìn)一步修飾以引入所需殘基。舉例來說，受體框架可包含人類亞群I一致序列的重鏈可變區(qū)，視情況以及在第l位、第28位、第48位、第67位、第69位、第71位和第93位中的一個或多個位置處的非人類供體殘基。另舉例來說，人類受體框架可包含人類亞群I一致序列的輕鏈可變區(qū)，視情況以及在第2位、第3位、第4位、第37位、第38位、第45位和第60位中的一個或多個位置處的非人類供體殘基。移植后，可在供體和/或受體序列中進(jìn)行其它改變以使抗體28結(jié)合和功能性最優(yōu)化。例如，參看PCT國際公開案第WO91/09967號?？捎糜谥苽淙祟惢筊AGE抗體的重鏈可變區(qū)的人類框架包括以下框架殘基DP-75、DP54、DP-54FWVH3JH4、DP-54VH33-07、DP-8(VHl-2)、DP-25、Vl-2b禾口VI-3(VHl-03)、DP-15禾口Vl-8(VHl-08)、DP-14禾口Vl-18(VH1-18)、DP-5禾口V1-24P(VHl-24)、DP-4(VHl-45)、DP-7(VHl-46)、DP-IO、DA-6禾BYAC-7(VHl-69)、DP-88(VHl-e)、DP-3禾口DA-8(VHl-f)。可用于制備人類化抗RAGE抗體的輕鏈可變區(qū)的人類框架包括人類生殖系克隆DPK24、DPK-12、DPK-9Vkl、DPK-9Jk4、DPK9Vkl02以及生殖系克隆亞群VkIII和VKI的框架殘基。DPK24生殖系的以下突變可增加抗體表達(dá)F10S、T45K、I63S、Y67S、F73L禾卩T77S。本發(fā)明的代表性人類化抗RAGE抗體包括具有一個或多個具有選自SEQIDNO:16-27的可變區(qū)氨基酸序列的CDR的抗體。舉例來說，人類化抗RAGE抗體可包含兩個或兩個以上CDR，其選自具有SEQIDNO:16、18、21、24、20和26中任一者的重鏈可變區(qū)或者SEQIDNO:17、19、22、25、23和27中任一者的輕鏈可變區(qū)的CDR。人類化抗RAGE抗體還可包含重鏈，其包含具有兩個或三個具SEQIDN0:16、18、21、24、20和26中任一者的CDR的可變區(qū)；和輕鏈，其包含具有兩個或=個具SEQIDNO:I7、19、22、25、23和27中任一者的CDR的可變區(qū)?？蓸?gòu)筑本發(fā)明的人類化抗RAGE抗體，其中第一鏈的可變區(qū)(即，輕鏈可變區(qū)或重鏈可變區(qū))經(jīng)人類化，且其中第二鏈的可變區(qū)(即，在非人類物種中產(chǎn)生的抗體的可變區(qū))未經(jīng)人類化。這些抗體為一類稱為半人類化抗體的人類化抗體。嵌合和人類化抗RAGE抗體的恒定區(qū)可來源于IgA、IgD、IgE、IgG、IgM和其任何同型(例如，IgG的IgGl、lgG2、IgG3或IgG4同型)中任一者的恒定區(qū)。已知許多抗體恒定區(qū)的氮基酸序列。人類同型的選擇以及同型中特定氨基酸的修飾可增強(qiáng)或消除宿主防御機(jī)制的活化并改變抗體生物分布。參看(雷夫(Reff)等人(2002)癌癥控制(OmcerCwzfroD9:152-66)。為克隆編碼免疫球蛋白恒定區(qū)的序列，可使內(nèi)含子序列缺失?？墒褂盟鶎兕I(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)構(gòu)筑嵌合和人類化抗RAGE抗體。舉例來說，可通過使編碼可變區(qū)的重疊寡核苷酸在一起退火且將其連接到含有人類抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中來制備可變區(qū)。例如，參看哈洛(Harlow)和雷因(Lane)(1988)抗體實驗室手冊(Antibodies:ALaboratoryManual),冷泉港實驗出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress),冷泉港(ColdSpringHarbor),紐約(NewYork);以及美國專利第4,196,265號、第4,946,778號、第5,091,513號、第5,132,405號、第5,260,203號、第5,677,427號、第5,892,019號、第5,985,279號、第6,054,561號。舉例來說，可如PCT國際公開案第WO02/096948號中所述來制備四價抗體(H4L4)，其包含兩個完整的四聚體抗體(包括均二聚體和雜二聚體)。也可經(jīng)由將促進(jìn)鏈間二硫鍵形成的半胱氨酸殘基引入抗體恒定區(qū)中；利用異型雙功能交聯(lián)劑(沃爾夫(Wolff)等人(1993)癌癥研究(CVwceA"/")53:2560-5);或通過重組產(chǎn)生以包括兩個恒定區(qū)(史蒂芬孫(Stevenson)等人(1989)抗癌藥物研究(AWc訓(xùn)ce/"DragD".)3:219-30)來制備抗體二聚體。例如，可通過表達(dá)截短的抗體序列或通過全長抗體的翻譯后消化來制備本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段?？扇菀椎刂苽浔景l(fā)明的抗RAGE抗體的變體以使其包括各種改變、取代、插入和缺失。舉例來說，可在用于抗體表達(dá)的細(xì)胞類型中關(guān)于密碼子用法優(yōu)化抗體序列。為增加抗體的血清半衰期，可將補(bǔ)救受體結(jié)合表位并入(如果尚不存在)抗體重鏈序列中。參看美國專利第5,739,277號。用于增強(qiáng)抗體穩(wěn)定性的其它修飾包括用脯氨酸置換殘基241處的絲氨酸來修飾IgG4。參看安格(Angal)等人(1993)分子免疫學(xué)(MoZ.//nm隨o/.)30:105-108。其它有用的改變包括視需要進(jìn)行取代以使抗體與藥物的連結(jié)效率最佳。舉例來說，可對抗體的羧基末端進(jìn)行修飾以使其包括供藥物連接的氨基酸，例如可添加一個或多個半胱氨酸殘基?？蓪愣▍^(qū)進(jìn)行修飾以引入供碳水化合物或其它部分結(jié)合的位點(diǎn)。其它抗體變體包括引起功能特性改善的糖基化同功異型物。舉例來說，F(xiàn)c糖基化的修飾可引起效應(yīng)功能的改變，例如增加與Fcy受體的結(jié)合和改善ADCC,和/或可降低Clq結(jié)合和CDC(例如，將Fc寡糖從復(fù)合形式變?yōu)楦吒事短腔螂s合類型可降低Clq結(jié)合和CDC)(例如，參看康達(dá)(Kanda)等人，糖生物學(xué)(Glycobiology)，2007:17:104-118)?？赏ㄟ^生物工程改造細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞進(jìn)行修飾；還可通過操控經(jīng)基因工程改造的有機(jī)體中的蛋白或天然產(chǎn)物糖基化路徑來進(jìn)行修飾。也可通過利用使糖連接酶(糖基轉(zhuǎn)移酶)耐受多種不同底物的自由來改變糖基化。最后，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可通過多種化學(xué)方法使蛋白和天然產(chǎn)物糖基化利用小分子、酶、蛋白連接、代謝生物工程改造或總體合成。N-聚糖加工的適當(dāng)小分子抑制劑的實例包括栗精胺(Castanospermine，CS)、Kifunensine(KF)、脫氧甘露糖里予尻霉素(Deoxymannojirimycin,DMJ)、苦馬豆素(Swainsonine，Sw)、莫能霉素(Monensin，Mn)。可使用包括定點(diǎn)誘變或重組克隆的標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)來產(chǎn)生本發(fā)明的抗RAGE抗體的變體?？稍谵D(zhuǎn)基因非人類動物中經(jīng)由基因配置和基因轉(zhuǎn)化方法(美國專利公開案第2003/0017534號)來制備抗RAGE抗體的多樣化譜系，隨后使用功能檢定來測試其相關(guān)活性。在本發(fā)明的特定實施例中，使用有關(guān)使CDR突變(楊(Yang)等人(1995)分子生物學(xué)雜志(/.5〖o(jì)Z.)254:392-403)、鏈改組(麥克斯(Marks)等人(1992)生物技術(shù)(紐約)(脂ec/mo一間)10:779-783)、使用大腸桿菌(￡.co/O的增變菌株(羅(Low)等人(1996)分子生物學(xué)雜志(MoZ.仏oO260:359-368)、DNA改組(派頓(Patten)等人(1997)生物技術(shù)近期述評(C0—.腸"c/moZ.)8:724-733)、噬菌體呈現(xiàn)(辛普森(Thompson)等人(1996)分子生物學(xué)雜志256:77-88)和性別PCR(克拉梅利(Crameri)等人(1998)^然391:288-291)的親和力成熟方案獲得變體。對于免疫療法應(yīng)用來說，相關(guān)功能檢定包括特異性結(jié)合人類RAGE抗原、抗體內(nèi)化，和對荷瘤動物投藥時靶向腫瘤部位(如下文所述)。本發(fā)明另外提供表達(dá)本發(fā)明的抗RAGE抗體的細(xì)胞和細(xì)胞系。代表性宿主細(xì)胞包括哺乳動物和人類細(xì)胞，諸如CHO細(xì)胞、HEK-293細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、CV-1細(xì)胞和COS細(xì)胞。所屬領(lǐng)域中已知將異源構(gòu)筑體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞中后產(chǎn)生穩(wěn)定細(xì)胞系的方法。代表性非哺乳動物宿主細(xì)胞包括昆蟲細(xì)胞(伯特(Potter)等人(1993)國際免疫學(xué)評述(/W./m應(yīng)"。/.)10(2-3):103-112)。也可在轉(zhuǎn)基因動物(烏德賓(Houdebine)(2002)生物技術(shù)近期述評(Ckat.Op/",fl/wec/j"(/.)13(6):625-629)和轉(zhuǎn)基因植物(斯蒂爾伯格(Schillberg)等人(2003)細(xì)胞與分子生命科學(xué)(Ce〃MW.Z^/eSc/.)60(3):433-45)中產(chǎn)生抗體。如上文所論述，已例如通過缺失、添加或取代抗體其它部分(例如恒定區(qū))而修飾的單克隆、嵌合和人類化抗體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。舉例來說，可如下對抗體加以修飾(i)通過缺失恒定區(qū)；(ii)通過用另一恒定區(qū)(例如用于增加抗體半衰期、穩(wěn)定性或親和力的恒定區(qū)，或來自另一物種或另一類別的恒定區(qū))置換所述恒定區(qū)或(iii)通過修飾恒定區(qū)中的一個或多個氨基酸以例如改變糖棊化位點(diǎn)數(shù)目、效應(yīng)細(xì)胞功能、Fc受體(FcR)結(jié)合、補(bǔ)體結(jié)合等。所屬領(lǐng)域中已知用于改變抗體恒定區(qū)的方法。可通過用不同殘基置換抗體恒定部分中的至少一個氨基酸殘基來產(chǎn)生功能改變(例如，對效應(yīng)配體(諸如細(xì)胞上的FcR或補(bǔ)體的C1組分)的親和力改變)的抗體(例如，參看EP388，151Al、US5,624,821和US5,648,260，所述專利文獻(xiàn)的所有內(nèi)容都是以引用的方式并入本文中)。也可描述其它類型的改變，如果將其應(yīng)用于鼠科或其它物種，那么免疫球蛋白將減少或消除這些功能。舉例來說，可能通過用側(cè)鏈具有適當(dāng)官能性的殘基置換特定殘基，或通過引入帶電官能團(tuán)(諸如谷氨酸或天冬氨酸)或可能芳族非極性殘基(諸如，苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或丙氨酸)來改變抗體(例如，IgG，諸如人類IgG)Fc區(qū)對FcR(例如FcyR1)或Clq結(jié)合的親和力(例如，參看US5,624,821)。可將抗體或其結(jié)合片段與細(xì)胞毒素、治療劑或放射性金屬離子連結(jié)。在一個實施例中，經(jīng)連結(jié)蛋白為抗體或其片段。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒性劑包括對細(xì)胞有害的任何藥劑。非限制性實例包括刺孢霉素(calicheamicin)、紫杉酚(taxol)、細(xì)胞松弛素B(cytochalasinB)、短桿菌肽D(gramicidinD)、溴化乙錠(ethidiumbromide)、依米丁(emetine)、絲裂霉素C(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、長春新堿(vincristine)、長春堿(vinblastine)、秋zK仙堿(colchicin)、阿霉素(doxorubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、二羥基蒽二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光輝霉素(mithramycin)、方夂線菌素D(actinomycinD)、1-去氫睪酮(l匿dehydrotestoste訓(xùn)e)、糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids)、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤霉素(pu腿ycin)和其類似物或同系物。治療劑包括(但不限于)抗代謝物(例如甲氨喋呤(methotrexate)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)、阿糖胞苷(cytarabine)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氨烯咪胺(decarbazine))、浣化齊l」(例如氮芥(mechlorethamine)、塞替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法蘭(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)和羅莫司丁(lomustine)(CCNU)、環(huán)磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇(dibromomannitol)、鏈唑霉素(streptozotocin)、絲裂霉素C(mitomycinC)禾口順-二氯畫二胺鉬(cis-dichlorodiamineplatinum(II)(DDP)，(順鉑(cisplatin))、蒽環(huán)類(例如柔紅霉素(daunorubicin)和阿霉素(doxorubicin))、抗生素(例如更生霉素(dactinomycin)、博來霉素(bleomycin)、光輝霉素(mithramycin)和安曲霉素(anthramycin))和抗有絲分裂劑(例如長春新堿(vincristine)和長春堿(vinblastine))。用于將所述部分與蛋ft連結(jié)的技術(shù)已在所屬領(lǐng)域中眾所周知。另外，現(xiàn)可能產(chǎn)生在免疫后能夠在無內(nèi)源免疫球蛋白產(chǎn)生的情況下產(chǎn)生完全人類抗體譜系的轉(zhuǎn)基因動物(例如，小鼠)。舉例來說，已描述在嵌合和生殖系突變小鼠中純合性缺失抗體重鏈連接(JM)基因會導(dǎo)致內(nèi)源抗體產(chǎn)生的完全抑制。在所述生殖系突變小鼠中轉(zhuǎn)入人類生殖系免疫球蛋白基因陣列將在抗原激發(fā)后導(dǎo)致產(chǎn)生人類抗體。例如，參看雅克博維次(Jackobovits)等人，美國國家科學(xué)院院刊，90:2551(1993);雅克博維次等人，自然，362:255-258(1993);布魯格曼(Bruggermann)等人，免疫年刊(YearinImmune),7:33(1983);和杜奇索(Duchosal)等人自然355:258(1992)。人類抗體還可來源于噬菌體展示文庫(霍根伯姆(Hoogenboom)等人，分子生物學(xué)雜志U.Mol.Biol.)227:381(1991);麥克斯(Marks)等人，分子生物學(xué)雜志，222:581-597(1991);沃漢(Vaughan)等人，自然生物技術(shù)(NatureBiotech)14:309(1996))。在某些實施例中，本發(fā)明的抗體可與作為組合療法的一部分的其它藥劑組合投與。舉例來說，在發(fā)炎性病況的情況下，可將標(biāo)的抗體與一種或多種可用于治療發(fā)炎性疾病或病況的其它藥劑組合投與。在心血管疾病病況且尤其由動脈粥樣硬化斑塊(認(rèn)為其具有實質(zhì)發(fā)炎性組分)引起的疾病病況的情況下，可將標(biāo)的抗體與一種或多種可用于治療心血管疾病的其它藥劑組合投與。在癌癥的情況下，可將標(biāo)的抗體與一種或多種抗血管生成因子、化療劑組合投與或作為放射療法的佐劑投與。另外，預(yù)期投與標(biāo)的抗體將充當(dāng)可能組合多種不同癌癥治療劑的癌癥治療方案的一部分。在IBD的情況下，可將標(biāo)的抗體與一種或多種消炎劑組合投與，并且可將其另外與經(jīng)修改的飲食方案組合。用于抑制RAGE-LBE與RAGE-BP之間的相互作用的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明包括用于抑制RAGE與RAGE-BP之間的相互作用或調(diào)節(jié)RAGE活性的方法。優(yōu)選將所述方法用于治療RAGE相關(guān)病癥。所述方法可包含投與如本文所揭示的針對RAGE的抗體。所述方法包含投與一種特異性結(jié)合RAGE蛋白的一個或多個表位的抗體，所述RAGE蛋白具有如SEQIDNO:l、SEQIDNO:3、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:ll或SEQIDNO:13中所述的氨基酸序列。在另一實施例中，所述方法包含投與抑制RAGE與一個或多個RAGE-BP結(jié)合的化合物。下文討論鑒別所述化合物的例示性方法。在某些實施例中，在活體外抑制諸如包含經(jīng)純化蛋白、細(xì)胞、生物樣本、組織、人工組織等的反應(yīng)混合物中的相互作用。在某些實施例中，在活體內(nèi)例如通過投與結(jié)合RAGE或其RAGE結(jié)合片段的抗體來抑制相互作用。所述抗體或其片段結(jié)合RAGE并抑制RAGE-BP的結(jié)合。本發(fā)明包括通過抑制RAGE與RAGE-BP的相互作用或者調(diào)節(jié)RAGE活性來預(yù)防或治療RAGE相關(guān)病癥的方法。所述方法包括將有效抑制所述相互作用的量的抗體投與RAGE且歷時足以預(yù)防或治療所述病癥的時間。核酸核酸為脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸以及其單鏈、雙鏈或三聯(lián)體形式的聚合物。除非特別限定，否則核酸可含有已知的具有與參考天然核酸類似的特性的天然核苷酸的類33似物。核酸包括基因、cDNA、mRNA和cRNA?？珊铣珊怂?，或者核酸可來源于任何生物來源，包括任何有機(jī)體。本發(fā)明的代表性核酸包含編碼SEQIDNO:6、8、10、12(與所揭示的編碼狒狒、食蟹猴和兔的RAGE的cDNA對應(yīng))中任一者所示或SEQIDNO:15(與編碼狒狒RAGE的基因組DNA序列對應(yīng))中所示的RAGE的核苷酸序列。本發(fā)明的核酸還包含編碼SEQIDNO:16-49中所示的任一抗體可變區(qū)氨基酸序列的核苷酸序列。本發(fā)明的核酸還可包含與SEQIDNO:6、8、10、12和15中任一者實質(zhì)上一致的核苷酸序列，包括與SEQIDNO:6、8、10、12和15中任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%—致的核苷酸序列。本發(fā)明的核酸還可包含編碼RAGE蛋白的核苷酸序列，所述RAGE蛋白具有與SEQIDNO:7、9、11和13中所示的任一氨基酸序列實質(zhì)上一致的氨基酸序列，所述核苷酸序列包括與SEQIDNO:7、9、11和13中任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%—致的核苷酸序列。本發(fā)明的核酸還可包含編碼抗RAGE抗體可變區(qū)的核苷酸序列，所述可變區(qū)具有與SEQIDNO:16-49中所示的任一氨基酸序列實質(zhì)上一致的氨基酸序列，所述核苷酸序列包括編碼與SEQIDNO:16-49中任一者至少85%、86%、87%、88%、89%、卯％、91%、92%、93%、947。、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%—致的氨基酸序列的核苷酸序列。使用序列比較算法，使用編碼SEQIDNO:16-49中任一者的序列的全長可變區(qū)(即，編碼具有SEQIDNO:16-49中所示的任一序列的全長可變區(qū)的核苷酸序列)作為詢探序列(如下文所述)或通過目測來比較序列以得到最大對應(yīng)性。實質(zhì)上一致的序列可為多形序列，即可選序列或等位基因群集。等位基因差異可小至一個堿基對。實質(zhì)上一致的序列也可包含誘變序列，包括包含沉默突變的序列。突變可包含一個或多個殘基改變、一個或多個殘基缺失或者一個或多個額外殘基插入。也將實質(zhì)上一致的核酸鑒別為在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:6、8、10、12或15中任一者的全長，或編碼SEQIDNO:7、9、11和13中所示的RAGE氨基酸序列的任何核苷酸序列的全長，或編碼SEQIDNO:16-49中所示的抗體可變區(qū)氨基酸序列的任何核苷酸序列的全長特異性雜交或?qū)嵸|(zhì)上雜交的核酸。在核酸雜交的情況下，所比較的兩個核酸序列可稱為探針和標(biāo)靶。探針為參考核酸分子，且標(biāo)靶為測試核酸分子，通常見于異源核酸分子群內(nèi)。標(biāo)靶序列與測試序列同義。對于雜交研究來說，有用探針與本發(fā)明核酸分子的至少約14到40個核苷酸序列互補(bǔ)或模擬本發(fā)明核酸分子的至少約14到40個核苷酸序列。優(yōu)選探針包含14到20個核苷酸或必要時甚至更長核苷酸，諸如SEQIDNO:6、8、10、12或15中任一者的30、40、50、60、100、200、300或500個核苷酸或多達(dá)其全長，或者編碼SEQIDNO:7、9、U和13中所示的RAGE氨基酸序列的任何核苷酸序列的全長，或編碼SEQIDNO:16-49中所示的抗體可變區(qū)氨基酸序列的任何核苷酸序列的全長?？梢子诶缤ㄟ^片段的化學(xué)合成、通過應(yīng)用核酸擴(kuò)增技術(shù)或通過將所選序列引入供重組制備的重組載體中來制備所述片段。特異性雜交是指當(dāng)特定核苷酸序列存在于復(fù)雜核酸混合物(例如，全細(xì)胞DNA或RNA)中時，在嚴(yán)格條件下分子僅與所述序列結(jié)合、形成雙鏈體或雜交。特異性雜交可視雜交條件的嚴(yán)格度而接受探針與靶序列之間的錯配。在諸如Southern和Northern印跡分析等核酸雜交實驗的情況下，嚴(yán)格雜交條件和嚴(yán)格雜交洗滌條件具有序列和環(huán)境依賴性。較長序列在較高溫度下特異性雜交。有關(guān)核酸雜交的深入指導(dǎo)見于迪積森(Tijssen)(1993)利用核酸探針的生物化學(xué)和分子生物學(xué)雜交的實驗室技術(shù)(LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology-HybridizationwithNucleicAcidProbes)，第I部分第2章，愛思唯爾(Elsevier),紐約州紐約(NewYork,NewYork)。一般來說，所選的高度嚴(yán)格雜交和洗滌條件比在指定離子強(qiáng)度和pH值下特定序列的熱熔點(diǎn)(Tm)低約5'C。通常，在嚴(yán)格條件下，探針將與其標(biāo)耙序列而非其它序列特異性雜交。Tm為50%標(biāo)靶序列與良好匹配的探針雜交的溫度(在指定離子強(qiáng)度和pH值下)。所選的極為嚴(yán)格的條件等于特定探針的Tm。具冇超過約100個互補(bǔ)殘基的互補(bǔ)核酸的Southern或Northern印跡分析的嚴(yán)格雜交條件的實例為在42。C下在50%甲酰胺和1mg肝素中雜交整夜。高度嚴(yán)格洗滌條件的實例為在65'C下在0.1xSSC中15分鐘。嚴(yán)格洗滌條件的實例為在65'C下在0.2xSSC緩沖液中15分鐘。有關(guān)SSC緩沖液的描述，參看薩布魯克(Sambrook)等人編(1989)分子克隆實驗手冊(MolecularCloning:ALaboratoryManual),冷泉港實驗出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)，冷泉港(ColdSpringHarbor),紐約(NewYork)。通常，在低嚴(yán)格度洗滌去除背景探針信號后進(jìn)行高嚴(yán)格度洗滌。具有超過約IOO個核苷酸的雙鏈體的中等嚴(yán)格度洗滌條件的實例為在45X:下在lxSSC中15分鐘。具有超過約100個核苷酸的雙鏈體的低嚴(yán)格度洗滌條件的實例為在40'C下在4xSSC到6xSSC中15分鐘。對于短探針(例如，約10到50個核苷酸)，嚴(yán)格條件通常涉及在pH7.0-8.3下小于約1MNa+離子、通常為約0.01到1MNa+離子濃度(或其它鹽)的鹽濃度，且溫度通常為至少約3(TC。嚴(yán)格條件也可通過添加去穩(wěn)定劑(諸如甲酰胺)來達(dá)到。一般來說，信雜比為在特定雜交檢定中所觀察的不相關(guān)探針的2倍(或更高)表明檢測到特異性雜交。以下為可用于鑒別與本發(fā)明的參考核苷酸序列實質(zhì)上一致的核苷酸序列的雜交條件和洗滌條件的實例探針核苷酸序列優(yōu)選與標(biāo)靶核苷酸序列在5(TC下在7%十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5MNaP04、lmMEDTA中雜交，隨后在50°C下在2xSSC、0.1%SDS中洗滌；更優(yōu)選，探針與標(biāo)靶序列在5(TC下在7%十二垸基硫酸鈉(SDS)、0.5MNaPO4、1mMEDTA中雜交，隨后在50°C下在lxSSC、0.1呢SDS中洗滌；更優(yōu)選，探針與標(biāo)靶序列在50'C下在7%十一.烷基硫酸鈉(SDS)、0.5MNaPO4、1mMEDTA中雜交，隨后在50'C下在0.5xSSC、0.1呢SDS中洗滌；更優(yōu)選，探針與標(biāo)靶序列在50°C下在7%十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5MNaP04、1mMEDTA中雜交，隨后在5(TC下在O.lxSSC、0.1%SDS中洗滌；更優(yōu)選，探針與標(biāo)靶序列在50'C下在7%十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5MNaP04、1mMEDTA中雜交，隨后在65°C下在O.lxSSC、0.1呢SDS中洗滌。兩個核酸序列實質(zhì)上一致的另一指示為由所述核酸編碼的蛋白實質(zhì)上一致、共有整個二維結(jié)構(gòu)或為生物功能等效物。這些術(shù)語將在下文進(jìn)一步定義。如果相應(yīng)蛋白實質(zhì)上一致，那么在嚴(yán)格條件下彼此不雜交的核酸分子也實質(zhì)上一致。舉例來說，當(dāng)兩個核酸序列包含如遺傳密碼所允許的保守取代變體時，可能出現(xiàn)這種情形。保守取代變體為具有簡并密碼子取代的核酸序列，其中一個或多個所選(或全部)密碼子的第二個位置經(jīng)混合堿基和/或脫氧肌苷殘基取代。參看貝澤爾(Batzer)等人(1991)核酸研究(W"c/^cA"心)19:5081;大冢(Ohtsuka)等人(19S5)生物化學(xué)雜志(J.腸/.C/i纖.)260:2605-2608;和羅西里尼(Rossolini)等人(1994)分子細(xì)胞探針CW/Prah)8:91-98。本發(fā)明的核酸還包含與SEQIDNO:6、8、10、12或15中任一者互補(bǔ)的核酸，或編碼SEQIDNO:7、9、11和13中所示的RAGE氨基酸序列的核苷酸序列，或編碼SEQIDNO:16-49中所示的抗體可變區(qū)氨基酸序列的核苷酸序列和其互補(bǔ)序列。互補(bǔ)序列為包含在堿基對間形成氫鍵后能夠彼此配對的反向平行核苷酸序列的兩個核苷酸序列。如本文所使用，術(shù)語互補(bǔ)序列意謂如可通過下文所述的相同核苷酸比較方法評定的實質(zhì)上互補(bǔ)的核苷酸序列，或是定義為能夠與所論及的核酸區(qū)段在相對嚴(yán)格的條件(諸如本文所述的條件)下雜交?；パa(bǔ)核酸區(qū)段的特定實例為反義寡核苷酸。子序列為包含較長核酸序列的一部分的核酸序列。例示性子序列為上文所述的探針或引物。如本文所使用，術(shù)語引物是指包含所選核酸分子的約8個或8個以上脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸、優(yōu)選10-20個核苷酸且更優(yōu)選20-30個核苷酸的鄰近序列。本發(fā)明的引物涵蓋具有足夠長度和適當(dāng)序列的寡核苷酸，從而使本發(fā)明核酸分子的聚合起始。延長序列包含并入核酸中的其它核苷酸(或其它類似分子)。舉例來說，聚合酶(例如DNA聚合酶)可在核酸分子的3'末端添加序列。此外，核苷酸序列也可與其它DNA序列(諸如啟動子、啟動子區(qū)、增強(qiáng)子、聚腺苷酸化信號、內(nèi)含子序列、其它限制酶位點(diǎn)、多克隆位點(diǎn)和其它編碼區(qū)段)組合。因此，本發(fā)明也提供包含所揭示的核酸的載體，包括用于重組表達(dá)的載體，其中本發(fā)明的核酸可操作地連接到功能性啟動子。當(dāng)與核酸可操作地連接時，啟動子為與核酸的功能性組合，以致核酸的轉(zhuǎn)錄受啟動子區(qū)控制和調(diào)控。載體是指能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制的核酸，諸如質(zhì)粒、柯斯質(zhì)粒(cosmid)和病毒載體。本發(fā)明的核酸可經(jīng)克隆、合成、改變、誘變或其組合。所屬領(lǐng)域中已知用于分離核酸的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA和分子克隆技術(shù)。用于產(chǎn)生堿基對改變、缺失或小插入的位點(diǎn)特異性誘變也為所屬領(lǐng)域中已知。例如，參看薩布魯克(Sambrook)等人(編)(1989)分子克隆實驗手冊(MolecularCloning:ALaboratoryManual)，冷泉港實驗出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress),冷泉港(ColdSpringHarbor)，紐約(NewYork);希爾哈維(Silhavy)等人(1984)基因融合實驗(ExperimentswithGeneFusions.)冷泉港實驗出版社，冷泉港，紐約；格洛弗(Glover)和珀斯(Hames)(1995)DNA克隆實用方法(DNACloning:APracticalApproach)，第2版牛津大學(xué)出版社IRL出版(IRLPressatOxfordUniversityPress),牛津/紐約(Oxford/NewYork);阿蘇貝爾(Ausubel)(編)(1995)分子生物學(xué)短方案(ShortProtocolsinMolecularBiologv),第3版威利(Wiley)編，紐約。預(yù)防和治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種治療患有以A(3淀粉樣沉積物為特征的疾病或病癥(諸如阿茲海默氏病)的個體的方法，其包含對個體投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明還提供一種抑制或減少個體A(3淀粉樣沉積物積累的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明還包括一種抑制或減少個體神經(jīng)退化的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明另外包括一種抑制或降低個體認(rèn)知能力下降或改善認(rèn)知能力的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明還提供一種治療患有以淀粉樣沉積物為特征的淀粉樣蛋白生成疾病或病癥的個體的方法，其包含投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明提供一種治療患有以A(3淀粉樣沉積物為特征的疾病或病癥(諸如阿茲海默氏病)的個體的方法，其包含在個體體內(nèi)產(chǎn)生有益治療反應(yīng)(例如，在患者體內(nèi)降低斑塊負(fù)荷、抑制斑塊形成、減少神經(jīng)營養(yǎng)不良，和改善認(rèn)知功能，例如迅速改善認(rèn)知能力和/或逆轉(zhuǎn)、治療或預(yù)防認(rèn)知能力下降)的條件下對個體投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE月.抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。腦部與A(3淀粉樣沉積物有關(guān)的疾病包括阿茲海默氏病、唐氏綜合癥和認(rèn)知障礙。認(rèn)知障礙可伴隨出現(xiàn)或不出現(xiàn)其它淀粉樣蛋白生成疾病的特征。除在長期高血糖狀態(tài)下形成的晚期糖基化終產(chǎn)物(AGE)夕卜，RAGE的配體還包括具有(3折疊原纖結(jié)構(gòu)的蛋白(其為淀粉樣沉積物和促炎性介質(zhì)的特征)，包括(3淀粉樣蛋白(A卩)、血清淀粉樣蛋白(SAA)(纖維形式)、S100/鈣粒蛋白(calgranulin)(例如，S100A12、S100B、S100A8-A9)和高遷移率族1染色體蛋白1(highmobilitygroupbox-1chromosomalprotein，HMGB1，也稱為兩性霉素)。人們逐漸認(rèn)識到RAGE在淀粉樣蛋白生成疾病的病理進(jìn)程中的作用。除引起阿茲海默氏病發(fā)病外，經(jīng)證實RAGE還與脾中細(xì)胞應(yīng)力和血清淀粉樣蛋白A(SAA)的沉積密切相關(guān)(嚴(yán)(Yan)等人，2000，自然醫(yī)學(xué)(NatureMed.),6:643-51)。RAGE與腎臟中淀粉樣蛋白積累和組織破壞關(guān)聯(lián)，從而導(dǎo)致患有家族性淀粉樣多發(fā)性神經(jīng)病(FAP)的個體腎衰竭(松永(Matsunaga)等人，2005，斯堪的那維亞臨床實驗研究雜志(Scand.J.Clin.Lab.Invest.))。RAGE配體兩性霉素(HMGBl)也含有淀粉樣蛋白生成肽一一種與阿茲海默氏A卩肽高度同源且當(dāng)由天然蛋白釋放時形成淀粉樣肽的肽(科爾積域(Kallijarvi)等人，2001,生物化學(xué)(Biochem.)，40:10032-7)。A卩與血管壁中的含RAGE細(xì)胞的相互作用引起A(5的跨血腦屏障(BBB)轉(zhuǎn)運(yùn)以及促炎性細(xì)胞因子和內(nèi)皮素-l(ET-1)的表達(dá)，所述內(nèi)皮素-1介導(dǎo)A(3誘導(dǎo)的血管收縮。因此，本發(fā)明還提供減少A(3誘導(dǎo)的血管收縮的方法。已在阿茲海默氏樣疾病的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中證實，抑制RAGE-配體相互作用將抑制腦實質(zhì)中Ap的積累(甸尼(Deane)等人，2003，自然醫(yī)學(xué)(NatureMedicine)9:907-913)。RAGE在多種淀粉樣蛋白生成疾病和病癥中的主動、致病作用使得可能通過本發(fā)明的方法對患有這些淀粉樣蛋白生成病癥的患者提供治療性有益治療，所述方法提供特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明的方法可用于無癥狀患者和目前顯現(xiàn)疾病癥狀的患者。用于所述方法中的抗體可為如本文所述的人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體或非人類抗體，或其片段(例如，RAGE結(jié)合片段)。另一方面，本發(fā)明涉及投與由經(jīng)A(3肽免疫[假定其應(yīng)為RAGE，但可能其應(yīng)簡單地缺失]的人類制備的抗體，所述人類可為將經(jīng)抗體治療的患者。本發(fā)明的方法可使用一種抗體進(jìn)行，所述抗體(a)與選自由XT-Hl、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體競爭與RAGE的結(jié)合(b)與結(jié)合選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7禾卩XT-M4組成的群組的抗體的RAGE的表位結(jié)合；(c)包含選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7禾flXT-M4組成的群組的抗體的輕鏈或重鏈的一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);或(d)為根據(jù)(a)、(b)或(c)的抗體的RAGE結(jié)合片段。舉例來說，可通過對個體投與抗體或RAGE結(jié)合抗體片段來進(jìn)行本發(fā)明的方法，所述抗體或RAGE結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，其包含XT-M4輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:17)的CDR;重鏈可變區(qū)，其包含XT-M4重鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:16)的CDR;人類K輕鏈恒定區(qū)；和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。還可使用下述抗體或其RAGE結(jié)合片段來進(jìn)行本發(fā)明的方法，所述抗體或其RAGE結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，其具有XT-M4輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO:17);重鏈可變區(qū)，其具有XT-M4重鏈可變區(qū)序列的氨基酸序列(SEQIDNO:16);人類K輕鏈恒定區(qū)；和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。本文中描述可成功用于本發(fā)明方法中的這些和許多其它抗體的描述。本發(fā)明的治療劑通常實質(zhì)上純的，而無不需要的污染物。這意味著藥劑通常至少約50%w/w(重量/重量)純，且實質(zhì)上不含干擾蛋白和污染物。有時，所述藥劑至少約80%w/w純且更優(yōu)選至少90或約95%w/w純。然而，使用常規(guī)蛋白純化技術(shù)可獲得至少99%w/w純的均質(zhì)肽。本發(fā)明包括以醫(yī)藥組合物形式投與抗體和醫(yī)藥載劑?；蛘?，可通過投與編碼至少一條抗體鏈的聚核苷酸來對患者投與抗體。使所述聚核苷酸表達(dá)以在患者體內(nèi)產(chǎn)生抗體鏈。聚核苷酸可編碼抗體的重鏈和輕鏈。使聚核苷酸表達(dá)以在患者體內(nèi)產(chǎn)生重鏈和輕鏈。在例示性實施例中，針對患者血液中所投與的抗體的含量來監(jiān)測患者。因此，本發(fā)明滿足對用于預(yù)防或改善神經(jīng)病理學(xué)以及一些患者的與阿茲海默氏病相關(guān)的認(rèn)知障礙的治療方案的長期需求。減少認(rèn)知能力下降和/或改善認(rèn)知能力本發(fā)明提供一種抑制或減少患有AP相關(guān)疾病或病癥或淀粉樣蛋白生成疾病或病癥(例如AD)或者具有患所述疾病或病癥的風(fēng)險的患者的認(rèn)知能力下降和/或改善其認(rèn)知能力的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。本發(fā)明涉及投與有效劑量的本發(fā)明抗體，從而實現(xiàn)認(rèn)知能力下降的減少和/或認(rèn)知能力的改善。舉例來說，實現(xiàn)患者的一種或多種認(rèn)知障礙(例如，過程學(xué)習(xí)和/或記憶障礙)的改善。認(rèn)知障礙可為外顯記憶(也稱為"陳述性"記憶或"工作"記憶)障礙，其是定義為儲存和重新取得有意識可用的特定信息并且因此可通過語言表達(dá)的能力(例如記起特定事實或事件的能力)。另外，認(rèn)知障礙也可為程序記憶(也稱為"內(nèi)隱"記憶或"情境式"記憶)障礙，其是定義為獲取、保留和重新取得有意識不可用的一般信息或知識且需要表達(dá)學(xué)習(xí)技能、關(guān)聯(lián)、習(xí)慣或復(fù)雜反映的能力，例如記起如何執(zhí)行一項特定任務(wù)的能力。罹忠程序記憶障礙的個體正?；顒拥哪芰p弱的多。因此，有效改善程序記憶障礙的治療將為特別需要且有益的。適用治療的患者可通過本發(fā)明治療的患者包括具有患A卩相關(guān)疾病或病癥或者淀粉樣蛋白生成疾病或病癥的風(fēng)險但未顯現(xiàn)癥狀的個體，以及目前顯現(xiàn)癥狀的患者。在阿茲海默氏病的情況下，如果活的足夠長久，那么實際上任何人都有罹患阿茲海默氏病的風(fēng)險。因此，可對普通人群預(yù)防性地投與本發(fā)明的方法，而無需對目標(biāo)患者的風(fēng)險進(jìn)行任何評定。本發(fā)明的方法尤其適用于有AD風(fēng)險的個體，例如展現(xiàn)AD風(fēng)險因子的個體。AD的主要風(fēng)險因子為年齡的增長。隨著人群年齡的增長，AD的頻率持續(xù)增加。當(dāng)前的評估指出，超過65歲的人群中有多達(dá)10%患有AD且超過85歲的人群中有多達(dá)50呢患有AD。盡管罕見，但仍有某些個體可在年齡較輕時被鑒別為遺傳上具有發(fā)展AD的傾向?？捎赏耆C實的AD家族病史、已知當(dāng)突變時引起AD的基因(例如APP或早老素基因)的分析來鑒別帶有AD遺傳形式的個體，稱為"家族性AD"或"早發(fā)型AD"。良好表征的APP突變包括APP770密碼子716和717處的"哈迪(Hardy)"突變(例如，纈氨酸717突變?yōu)楫惲涟彼?高特(Goate)等人(1991),自然349:704);纈氨酸717突變?yōu)楦拾彼?查蒂爾(Chartier)等人(1991)自然353:844;默雷爾(Murrell)等人(1991),科40學(xué)254:97);纈氨酸717突變?yōu)楸奖彼?穆蘭(Mullan)等人(1992),自然一遺傳學(xué)(NatureGenet.)1:345-7))、APP770密碼子670和671處的"斯維蒂希(Swedish)"突變以及APP770密碼子692處的"法蘭德斯(Flemish)"突變。認(rèn)為所述突變通過APP成為A(3的加工、尤其將APP加工成增加量的長型A(3(即A卩l(xiāng)-42禾l]Apl-43)的增加或改變來引起阿茲海默氏病。據(jù)悉，諸如早老素基因PSl和PS2等其它基因的突變會間接影響APP的加工，從而產(chǎn)生增加量的長型A(3(參看哈迪(Hardy),TINS20:154(1997);科瓦爾斯卡(Kowalska)等人，(2004),波蘭藥理學(xué)雜志(PolishJ.Pharmacol.)，56:171-8)。除AD外，APP的770個氨基酸同功異型物的氨基酸692或693處的突變已涉及腦淀粉樣蛋白生成病癥，稱為遺傳性腦出血伴Dutch型淀粉樣變性病(HereditaryCerebralHemorrhagewithAmyloidosisoftheDutch-type，HCHWA-D)。更常見的是，AD并非由患者遺傳，而是因于各種遺傳因素的復(fù)雜相互影響而發(fā)展。據(jù)悉，這些個體患有"散發(fā)性AD"(也稱為"遲發(fā)型AD")，即一種更難診斷的形式。盡管如此，可關(guān)于不會引起AD但已知以比一般群體高的頻率與AD隔離的易感性等位基因或特性(例如載脂蛋白(apoipoprotein)E的e2、s3和s4等位基因)的存在來篩選患者群體(科德(Corder)等人(1993),科學(xué)，261:921-923)。具體來說，可將優(yōu)選除AD的一些其它標(biāo)記外還缺乏e4等位基因的患者鑒別為具有患AD的"風(fēng)險"。舉例來說，可將有患AD或罹患高膽固醇血癥或動脈粥樣硬化癥的親屬且缺乏s4等位棊因的患者鑒別為具有患AD的"風(fēng)險"。另一潛在生物標(biāo)記為腦脊髓液(CSF)Ap42和t含量的組合評定。低A卩42和高t含量為鑒別具有患AD的風(fēng)險的患者的預(yù)測值。具有患AD的風(fēng)險的忠者的其它指示包括活體內(nèi)動態(tài)神經(jīng)病理學(xué)數(shù)據(jù)，例如活體內(nèi)檢測腦(3淀粉樣蛋白、腦運(yùn)動模式等。所述數(shù)據(jù)可使用例如二維磁共振成像(MRI)、正電子發(fā)射斷層顯像(PET)掃描和單光子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像(SPECT)而獲得?？赡芑糀D的患者的指不包括(但不限于)患者(1)患有癡呆；(2)40-90歲；(3)例如兩個或兩個以上認(rèn)知領(lǐng)域的認(rèn)知障礙；(4)障礙進(jìn)展超過6個月；(5)經(jīng)鎮(zhèn)靜而清醒；禾P/或(6)無其它合理診斷。然而，罹患散發(fā)性或家族性AD形式的個體通常是在呈現(xiàn)一個或多個AD特征癥狀后才被確診。AD的常見癥狀包括影響常規(guī)技能或工作的執(zhí)行的認(rèn)知障礙、語言問題、時間或位置定向障礙、判斷力較弱或降低、抽象思維障礙、運(yùn)動控制喪失、情緒或行為改變、性格改變或缺乏能動性。患者所呈現(xiàn)的障礙的數(shù)目或認(rèn)知障礙的程度通常反映疾病的進(jìn)展程度。舉例來說，患者可僅展現(xiàn)輕度認(rèn)知障礙，因此忠者展現(xiàn)記憶問題(例如情境式記憶)但仍能夠良好活動。本發(fā)明方法也適用于患有AP相關(guān)認(rèn)知障礙(例如A(3相關(guān)癡呆)的個體。具體來說，本發(fā)明方法尤其適用于患有由中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)(例如，腦或CSF中)可溶性寡聚A卩的存在引起或歸因于所述存在的認(rèn)知障礙或異常的個體。由A(3引起或與A卩有關(guān)的認(rèn)知障礙也包括由以下引起或與以下相關(guān)的認(rèn)知障礙(l)腦中P淀粉樣斑塊的發(fā)展；(2)A(3合成、加工、降解或清除的異常速率(3)可溶性寡聚AP物質(zhì)(例如，腦中)的形成或活性；和/或(4)異常A(3形式的形成。不必在特定患者中建立A(3異常與認(rèn)知障礙的實際致病關(guān)聯(lián)，但例如應(yīng)通過上述AD標(biāo)記中的一種來指示某種關(guān)聯(lián)，以辨識罹患預(yù)期不會從A(3免疫治療劑治療獲益的非A(3相關(guān)認(rèn)知障礙的患者。已開發(fā)若干種測試來評定人類個體(例如，有患癡呆癥(例如AD)風(fēng)險或具有癡呆癥癥狀或病理學(xué)的個體)的認(rèn)知技能或效能?？赏ㄟ^這些測試效能的削弱來鑒別認(rèn)知障礙，并且己基于改善這些測試的效能的能力提出多種治療。盡管一些工作已評估個體的行為或運(yùn)動功能，但大部分工作仍設(shè)計成測試學(xué)習(xí)或記憶。可使用包括(但不限于)以下測試的多種測試來評定人類的認(rèn)知能力。ADAS-Cog(阿茲海默氏病評定量表-認(rèn)知分量表)為需花費(fèi)30分鐘完成的11部分的測試。ADAS-Cog是一種優(yōu)選的研究語言和記憶技能的簡單測驗。參看羅森(Rosen)等人(1984)美國精神病學(xué)雜志(AmJPsychiatry.)141(11):1356-64;伊爾(Ihl)等人(2000)神經(jīng)心理學(xué)(Neuropsychobiol.)41(2):102-7;和維爾(Weyer)等人(1997)國際老年精祌病學(xué)(IntPsychogeriatr.)9(2):123-38。布蘭斯德測試(BlessedTest)是另一種評定口常生活和記憶、專心程度和定向活動的快速(約10分鐘)認(rèn)知測試。參看布蘭斯德(Blessed)等人(1968)英國老年精神病學(xué)雜志(BrJPsychiatry)H4(512):797-811。劍橋神經(jīng)精神測試自動蓄電(CambridgeNeuropsychologicalTestAutomatedBattery,CANTAB)是用于評定患有神經(jīng)退化性疾病或腦損傷的人類的認(rèn)知障礙。其是由13個相互關(guān)聯(lián)的有關(guān)記憶、注意力和執(zhí)行功能的計算機(jī)測試組成，并且經(jīng)由個人計算機(jī)的觸摸屏(touchsensitivescreen)來投與。所述測試為語言與超文化測試，且經(jīng)證實，其對阿茲海默氏病的早期檢測和常規(guī)篩選極為靈敏。參看斯溫森(Swainson)等人(2001)癡呆和老年認(rèn)知病癥(DementGeriatrCognDisord.);12:265-280;和傅雷(Fray)和羅賓斯(Robbins)(1996)神經(jīng)毒理學(xué)和畸形學(xué)(NeurotoxicolTeratol.18(4):499匿504);羅賓斯等人(1994)癡呆癥(Dementia)5(5):266匿81。阿茲海默氏病聯(lián)合登錄研究組織(ConsortiumtoEstablishaRegistryforAlzheimer'sDisease,CERAD)臨床和神經(jīng)精神測試包括言語流暢性測試、波士頓命名測試(BostonNamingTest)、簡易精神狀態(tài)檢查表(MiniMentalStateExam,MMSE)、十個單詞回憶、結(jié)構(gòu)行為(constructionalpraxis)禾口行為項延遲回憶(delayedrecallofpraxisitems)。測試通?；ㄙM(fèi)20-30分鐘且對于評定和跟蹤認(rèn)知能力下降極為便利和有效。參看莫里斯(Morris)等人(1988)精神藥理學(xué)通報(PsychopharmacolBull.)24(4):641-52;莫里斯等人(1989)神經(jīng)學(xué)(Neurology)39(9):1159-65;和威爾士(Welsh)等人(1991)神經(jīng)學(xué)文獻(xiàn)(ArchNeurol)48(3):278-81。簡易精神狀態(tài)檢查表(MMSE)是1975年由佛爾斯坦(Folestein)等人提出的一種有關(guān)精神狀態(tài)和認(rèn)知功能的簡易測試。其并不測量其它精神現(xiàn)象且因此不能替代完全精神狀態(tài)檢查。其適用于篩選癡呆癥且其評分系統(tǒng)有助于跟蹤隨時間變化的進(jìn)展。簡易精神狀態(tài)檢査表MMSE使用廣泛，其標(biāo)準(zhǔn)可關(guān)于年齡和教育而作出調(diào)整。其可用于篩選認(rèn)知障礙、評估指定時間點(diǎn)時認(rèn)知障礙的嚴(yán)重程度、跟蹤個體隨時間變化的認(rèn)知改變過程和備案個體對治療的反應(yīng)。個體的認(rèn)知能力評定可能需要正式的神經(jīng)心理學(xué)測試，以及相隔9個月或更長時間(針對人類)的隨訪測試。參看佛羅斯坦(Folstein)等人(1975)精神病學(xué)研究雜志(JPsychiatrRes.)12:196-198;寇克瑞爾(Cockrell)和佛羅斯坦(Folstein)(1988)神經(jīng)藥理學(xué)通報(PsychopharmBull.)24(4):689-692;和克魯姆(Crum)等人(1993)美國醫(yī)學(xué)協(xié)會雜志(J.Am.Med.Association)18:2386-2391。七分鐘篩選是一種幫助鑒別需評估阿茲海默氏病的患者的篩選工具。所述篩選工具對于AD的早期病征極為靈敏，其使用一系列問題來評定不同類型的智能。測試是由四組問題組成，所述問題集中在定向、記憶、視覺空間技能和語言表達(dá)。其可辨識由正常老化過程引起的認(rèn)知改變與因癡呆引起的認(rèn)知障礙。參看所羅門(Solomon)和彭德爾伯里(Pendlebury)(1998)家族醫(yī)學(xué)(FamMed.)30(4):265-71;所羅門等人(1998)神經(jīng)學(xué)文獻(xiàn)(ArchNeurol.)55(3):349-55?？捎商卣餍园V呆以及上述風(fēng)險因子的存在來識別目前罹患阿茲海默氏病的個體。此外，多種診斷測試也可用于鑒別患有AD的個體。這些測試包括測量CSFt和AP42含量。t含量升高和A(342含量降低表明AD的存在。罹患阿茲海默氏病的個體也可通過ADRDA標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。組合療法本發(fā)明的抗RAGE抗體可與一種或多種其它藥劑組合使用，其可同時或以任何順序依次投與個體。所揭示的組合療法可引起協(xié)同治療作用，即大于任一單獨(dú)藥劑的作用的作用。上文己描述可測量的治療作用。舉例來說，協(xié)同治療作用可為比由單一藥劑所引起的治療作用高至少約2倍，或至少約5倍，或至少約10倍，或至少約20倍，或至少約50倍，或至少約100倍的作用。舉例來說，本發(fā)明包括投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體與特異性結(jié)合A(3的另一抗體。結(jié)合A(3的抗體可為特異性結(jié)合A卩肽而不^全長淀粉樣前體蛋白(APP)結(jié)合的抗體?；蛘?，可將本發(fā)明的抗體與結(jié)合和/或捕獲可溶性A(3或者結(jié)合患者體內(nèi)的淀粉柞沉積物且誘導(dǎo)針對所述淀粉樣沉積物的清除反應(yīng)的抗體組合投與。所述清除反應(yīng)可受Fc受體介導(dǎo)的吞噬作用影響。例如，可通過包括Fc受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如，IgG2a恒定區(qū))而將所述清除反應(yīng)工程改造到抗體中。本發(fā)明的抗體也可投與已接收或正在接收A(3疫苗的患者。在阿茲海默氏病和唐氏綜合癥(其中淀粉樣沉積物出現(xiàn)在腦中)的情況下，本發(fā)明的抗體也可與使本發(fā)明藥劑跨血腦屏障的通道增加的其它藥劑組合投與。本發(fā)明的抗體也可與增強(qiáng)治療劑對標(biāo)靶細(xì)胞或組織的接取的其它藥劑(例如，脂質(zhì)體等)組合投與。共投與所述藥劑可降低實現(xiàn)所需作用所需的治療劑(例如，治療抗體或抗體鏈)的劑量。監(jiān)測治療過程本發(fā)明提供監(jiān)測罹患阿茲海默氏病或易患阿茲海默氏病的患者的治療的方法，即用于監(jiān)測對患者投與的治療的過程的方法。所述方法可用于監(jiān)測對有癥狀患者的治療性治療以及對無癥狀患者的預(yù)防性治療。具體來說，所述方法適用于監(jiān)測被動免疫(例如，測量所投與的抗體的含量)。一些方法涉及在投與一定劑量的藥劑之前測定患者體內(nèi)(例如)抗休含量或分布的基線值，且將其與治療后的分布或含量值相比較。所述含量或分布值的明顯增加(即，在同一樣本的重復(fù)測量中高于實驗誤差的典型界線，表示為與所述測量值的平均值的一個標(biāo)準(zhǔn)差)表明陽性治療結(jié)果(即，投與所述藥劑實現(xiàn)所需反應(yīng))。如果免疫反應(yīng)值并無顯著改變或降低，那么表明陰性治療結(jié)果。在其它方法中，關(guān)于對照群體來測定含量或分布的對照值(即，平均值與標(biāo)準(zhǔn)差)。通常，對照群體的個體未接收先前治療。隨后，將投勺治療劑后所測量的患者的含量或分布值與對照值相比較。相對于對照值的明顯增加(例如，人于與平均值的一個標(biāo)準(zhǔn)差)表明陽性或充分的治療結(jié)果。無明顯增加或降低表明陰性或不足的治療結(jié)果。在所述含量相對于對照值增加的同時，通常持續(xù)投與藥劑。同以前一樣，相對于對照值達(dá)到停滯期為可中斷投藥治療或降低其劑量和/或頻率的指示。在其它方法中，由巳經(jīng)歷治療劑治療且響應(yīng)治療，含量或分布已達(dá)停滯期的對照個體群體測定含量或分布的對照值(例如，平均值與標(biāo)準(zhǔn)差)。將所測量的患者的含量或分布值與對照值相比較。如果所測量的患者體內(nèi)的含量與對照值并無明顯不同(例如，高于一個標(biāo)準(zhǔn)差)，那么可中斷治療。如果患者體內(nèi)的含量明顯低于對照值，那么確保持續(xù)投與藥劑。如果患者體內(nèi)的含量始終低于對照值，那么表明改變治療。在其它方法中，監(jiān)測目前未接收治療何已經(jīng)歷先前治療過程的患者的抗體含量或分布以確定是否需要重新開始治療?？蓪⒒颊唧w內(nèi)的所測量含量或分布與先前治療過程后患者先前所達(dá)到的值相比較。相對T先前測量值明顯降低(即，大丁-同一樣本的重復(fù)測量值的典型誤差界線)表明可重新開始治療?；蛘?，可將患者體內(nèi)所測量的值與在經(jīng)歷治療過程后的患者群體中所測定的對照值(平均值加標(biāo)準(zhǔn)差)相比較?；蛘?，可將患者的測量值與仍無疾病癥狀的經(jīng)預(yù)防性治療的患者群體或者展現(xiàn)疾病特征的改善的經(jīng)治療性治療的患者群體的對照值相比較。在所有這些情況下，相對于對照值明顯降低(即，大于一個標(biāo)準(zhǔn)差)為應(yīng)對患者重新開始治療的指示。供分析的組織樣本通常為來自患者的血液、血漿、血清、粘液或腦脊髓液。例如，可分析樣本中針對RAGE肽的抗休的含量或分布，例如人類化抗休的含量或分布。檢測對RAGE具特異性的抗體的ELISA方法將在實例中加以描述。在一些力'法中，如本文所述例如在活體外吞噬作用檢定中，使用清除檢定測定所投與的抗休的含量或分布。在所述方法中，使所測試的患者的組織樣本與淀粉樣沉積物(例如來自PDAPP小鼠)和載有Fc受體的吞噬細(xì)胞接觸。隨后，監(jiān)測淀粉樣沉積物的后續(xù)清除。清除反應(yīng)的存在和程度提供有效清除所測試患者的組織樣本中的A(3的抗體的存在和含量的指示。被動免疫后抗體的分布通常展現(xiàn)抗體濃度的即時峰值，隨后呈指數(shù)下降。在無額外劑量的情況下，視所投與的抗體半衰期而定，下降在數(shù)天到數(shù)月內(nèi)接近預(yù)治療含量。在一些方法中，在投藥前取得患者體內(nèi)抗RAGE抗體的基線測量值，在投藥后立即取得第一.測量值以測定抗體峰含量，且以特定時間間隔取得一個或多個其它測量值以監(jiān)測抗體含量下降。當(dāng)抗體含量己下降到基線或預(yù)定的低于基線的峰值百分比(例如，50%、25%或10%)時，投與另一抗體劑量的投與。在一些方法中，將低于背景的峰值或后續(xù)測量含量與先前測定的參考含量相比較以構(gòu)成其它患者的有益預(yù)防或治療性治療方案。如果所測量的抗體含量明顯低于參考含量(例如，小T從治療獲益的患者群體的參考值的平均值減一個標(biāo)準(zhǔn)差)，那么表明需投與額外劑量的抗體。監(jiān)測治療過程和患者狀況的可測量指標(biāo)包括監(jiān)測(降低)患者腦中AP含量、監(jiān)測淀粉樣蛋白池和監(jiān)測A(3誘發(fā)的神經(jīng)元功能障礙的改善。其它可測量的指標(biāo)包括監(jiān)測阿茲海默氏病中血管嗜剛果紅淀粉樣血管病(vascularcongophilicamyloidangiopathy,CAA)的病理狀況或改變且監(jiān)測患者包括AP介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和炎癥的改變。后者將提供有關(guān)利用多種發(fā)散的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑通過配體調(diào)控RAGE的信息，例如轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活化，活化RAGE啟動子并且通過活化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(MAP激酶級聯(lián)(MAPK)、ERK1/2、Akt、JNK、p38)介導(dǎo)細(xì)胞毒性反應(yīng)且抗RAGEMAb阻斷JNK、p38、NFkB憐酸化。有用測量還包括監(jiān)測由RAGE加強(qiáng)的A(3誘導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及神經(jīng)突觸可塑性，并且由RAGE和LRP介導(dǎo)的跨血/腦屏障的A(3的差異腦流入/排出可介導(dǎo)跨血腦屏障的Ap的差異腦流入/排出。因此，本發(fā)明提供減少與A(3有關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如，減少M(fèi)APK級聯(lián))和炎癥的方法。其它方法包括隨治療過程監(jiān)測任何所屬領(lǐng)域認(rèn)可的生理學(xué)癥狀(例如，身體或精神癥狀)，這通常取決于由研究人員或醫(yī)師對淀粉樣蛋A生成疾病(例如阿茲海默氏病)的診斷或監(jiān)測。舉例來說，可監(jiān)測認(rèn)知障礙。認(rèn)知障礙為阿茲海默氏病和唐氏綜合癥的一種癥狀，并且也可在無所述疾病中任一種的其它特征的情況下發(fā)生。舉例來說，可根據(jù)整個治療過程的慣例，通過測定患者關(guān)于簡易精神狀態(tài)檢查表的得分來監(jiān)測認(rèn)知障礙。醫(yī)藥制劑本發(fā)明的標(biāo)的蛋白或核酸最優(yōu)選是以適當(dāng)組合物的形式投與。作為適當(dāng)?shù)慕M合物，可例舉通常用于全身或局部投與藥物的所有組合物。醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑應(yīng)實質(zhì)上為惰性的，從而不與活性組分作用。適當(dāng)?shù)亩栊暂d劑包括水、醇、聚乙二醇、礦物油或石油凝膠、丙二醇、磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)、抑菌注射用水(BWFI)、注射用無菌水(SWFI)等?？烧{(diào)配所述醫(yī)藥制劑(包括標(biāo)的抗體或編碼標(biāo)的抗體的核酸)以便以用于人類或獸醫(yī)學(xué)的任何常規(guī)方式投與。因此，本發(fā)明的另一方面提供醫(yī)藥學(xué)上可接受的組合物，其包含有效量的抗體與--種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑(添加劑)和/或稀釋劑的調(diào)配物。如下文將詳細(xì)描述，可特別調(diào)配本發(fā)明的醫(yī)藥組合物以便以固體或液體形式投與，包括適于以下方式的形式(1)經(jīng)口投與，例如浸液(水性或非水性溶液或懸浮液)、片劑、大丸劑、散劑、顆粒劑、施用于舌的糊劑；(2)不經(jīng)腸投與，例如通過皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射投與，例如無菌溶液或懸浮液；(3)局部施用，例如乳膏、油膏或施用于皮膚的噴霧劑；或(4)經(jīng)陰道內(nèi)或經(jīng)直腸內(nèi)投與，例如陰道栓、乳膏或泡沫。然而，在某些實施例中，可將標(biāo)的藥46劑簡單地溶解或懸浮于無菌水中。在某些實施例中，醫(yī)藥制劑為無熱原質(zhì)的，即，不會引起患者體溫升高。不經(jīng)腸投藥、尤其皮下和靜脈內(nèi)注射為優(yōu)選的投藥途徑。在某些實施例中，一種或多種藥劑可含有堿性官能團(tuán)，諸如氨基或烷基氨基，且因此能夠與醫(yī)藥學(xué)上可接受的酸形成醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。就此方面看，術(shù)語"醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽"是指本發(fā)明化合物的相對無毒、無機(jī)和有機(jī)酸加成鹽?？稍诒景l(fā)明化合物的最終分離和純化過程中當(dāng)場制備這些鹽，或者通過單獨(dú)使經(jīng)純化的游離堿形式的本發(fā)明化合物與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或無機(jī)酸反應(yīng)且分離由此形成的鹽來制備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽和月桂基磺酸鹽等。(例如，參看伯格(Berge)等人(1977)"藥物鹽(PharmaceuticalSalts)",藥學(xué)雜志(J.Pharm.Sci.)66:1-19)。所述藥劑的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽包括例如由無毒有機(jī)或無機(jī)酸形成的化合物的常規(guī)無毒鹽或季銨鹽。舉例來說，所述常規(guī)無毒鹽包括由無機(jī)酸(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)得到的鹽，和由有機(jī)酸(諸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、羥乙基磺酸等)制備的鹽。在其它情況下，所述一種或多種藥劑可含有一個或多個酸性官能團(tuán)，且因此能夠與醫(yī)藥學(xué)上可接受的堿形成醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。同樣，可在所述化合物的最終分離和純化過程中當(dāng)場制備這些鹽，或通過單獨(dú)使游離酸形式的經(jīng)純化化合物與適當(dāng)堿(諸如醫(yī)藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)、氨或醫(yī)藥學(xué)上可接受的有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)來制備。代表性堿金屬鹽或堿土金屬鹽包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁鹽等。適用于形成堿加成鹽的代表性有機(jī)胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(例如，參看伯格等人，同上文)。所述組合物中也可存在潤濕劑、乳化劑和潤滑劑(諸如，月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂)以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。醫(yī)藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實例包括(1)水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血基棕櫚酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、a-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。本發(fā)明的調(diào)配物包括適于經(jīng)口、經(jīng)鼻、局部(包括口腔和舌下)、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道和/或不經(jīng)腸投與的調(diào)配物。所述調(diào)配物可便利地以單位劑型提供且可通過藥學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的任何方法制備?？膳c載劑材料組合產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量將視所治療的宿主、特定投藥模式等而變化?？膳c載劑材料組合產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量通常將為產(chǎn)生治療作用的化合物的量。一般來說，以100%計，此量將在約1%到約99%活性成分、優(yōu)選約5%到約70%、最優(yōu)選約10%到約30%的范圍內(nèi)。制備這些調(diào)配物或組合物的方法包括使藥劑與載劑以及視情況一種或多種附加成分組合的步驟。一般來說，通過使本發(fā)明的藥劑與液體載劑或適時分開的固體載劑均勻且充分地組合，且隨后視需要使產(chǎn)物成型來制備調(diào)配物。適于經(jīng)口投與的本發(fā)明的調(diào)配物可為膠囊、扁囊劑、丸劑、片劑、錠劑(使用調(diào)味基質(zhì)，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠)、散劑、顆粒劑，或水性或非水性液體中的溶液或懸浮液，或者水包油或油包水液體乳液，或酏劑或糖漿，或軟錠(使用惰性基質(zhì)，諸如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或漱口液等的形式，其各自含有預(yù)定量的本發(fā)明化合物作為活性成分。本發(fā)明化合物也可以大丸劑、藥糖劑或糊劑形式投與。在供經(jīng)口投與的本發(fā)明的固體劑型(膠囊、片劑、丸劑、糖衣錠、散劑、顆粒劑等)中，將活性成分與一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑(諸如檸檬酸鈉或磷酸氫鈣)和/或以下各物中的任一種混合(1)填充劑或增積劑，諸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合劑，諸如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯垸酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉；(5)溶液延遲劑，諸如石蠟；(6)吸收加速劑，諸如季銨化合物；(7)潤濕劑，諸如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(8)吸附劑，諸如高嶺土和膨潤土；(9)潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和其混合物；和(10)著色劑。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，醫(yī)藥組合物還可包含緩沖劑。還可使用諸如乳糖(lactose或milksugar)以及高分子量聚乙二醇等作為賦形劑，將類似類型的固體組合物用作軟和硬明膠膠囊中的填充劑?？赏ㄟ^壓縮或模制，視情況用一種或多種附加成分制成片劑?？墒褂谜澈蟿?例如，明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，羧甲淀粉鈉(sodiumstarchglycolate)或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑來制備壓縮片劑。可通過在適當(dāng)機(jī)器中模制用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物來制成模制片劑。本發(fā)明醫(yī)藥組合物的片劑和其它固體劑型(諸如，糖衣錠、膠囊、丸劑和顆粒劑)可視情況用包衣和外殼(諸如，腸衣和醫(yī)藥調(diào)配領(lǐng)域眾所周知的其它包衣)刻痕或制備。也可使用用于提供所需釋放概況的不同比例的(例如)羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球?qū)ζ溥M(jìn)行調(diào)配，從而提供其中活性成分的緩慢或受控釋放?？衫缤ㄟ^濾過細(xì)菌截留過濾器，或通過并入在使用前可溶解于無菌水或一些其它無菌可注射介質(zhì)中的無菌固體組合物形式的滅菌劑來使其滅菌。這些組合物也可視情況含有遮光劑且還可具有使其在胃腸道的某一部分中視情況以延緩方式只釋放或優(yōu)先釋放活性成分的組成?？墒褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟。必要時，活性成分還可為與上述賦形劑中的一種或多種形成的微膠囊化形式。供經(jīng)口投與本發(fā)明化合物的液體劑型包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除活性成分外，液體劑型還可含有所屬領(lǐng)域中常用的惰性稀釋劑，諸如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃基醉、聚乙二醇和脫水山梨糖醇脂肪酸酯，和其混合物。除惰性稀釋劑外，口服組合物還可包括佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味齊U、調(diào)味劑、著色劑、芳香劑和防腐劑。除活性化合物外，懸浮液還可含有懸浮劑，諸如乙氧基化異硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和黃芪膠，和其混合物。供經(jīng)直腸或陰道投與的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的調(diào)配物可以栓劑形式提供，其可通過將一種或多種本發(fā)明的化合物與一種或多種適當(dāng)?shù)臒o刺激性的賦形劑或載劑混合來制備，所述賦形劑或載劑例如包含可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸鹽，且其在室溫下為固體，而在體溫下為液體且因此將在直腸或陰道腔中熔融并釋放所述藥劑。適于經(jīng)陰道投與的本發(fā)明的調(diào)配物還包括陰道栓、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或含有諸如所屬領(lǐng)域中已知的載劑的噴霧調(diào)配物。供局部或經(jīng)皮投與本發(fā)明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、油膏、糊劑、乳膏、洗'液、凝膠、溶液、貼片和吸入劑?？稍跓o菌條件下將活性化合物與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑以及可能需要的任何防腐劑、緩沖劑或推進(jìn)劑混合。除本發(fā)明的活性化合物外，油膏、糊劑、乳膏和凝膠還可含有賦形劑，諸如動物和植物脂肪、油、蠟、石蠟、淀粉、黃芪膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅樹脂、膨潤土、硅酸、滑石和氧化鋅或其混合物。除本發(fā)明的化合物外，散劑和噴霧劑還可含有賦形劑，諸如乳糖、滑石、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末，或這些物質(zhì)的混合物。噴霧劑可另外含有常用推進(jìn)劑，諸如氯氟烴和未經(jīng)取代的揮發(fā)性烴，諸如丁烷和丙烷。經(jīng)皮貼片具有向身體提供本發(fā)明化合物的受控傳遞的額外益處。所述劑型可通過將所述藥劑懸浮或分散于適當(dāng)介質(zhì)中而制得。還可使用吸收增強(qiáng)劑來增加所述藥劑穿過皮膚的通量。可通過提供速率控制膜或?qū)⑺龌衔锓稚⒂诰酆衔锘|(zhì)或凝膠中來控制所述通量的速率。預(yù)期眼用調(diào)配物、眼用油膏、散劑、溶液等也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。適于不經(jīng)腸投與的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包含一種或多種本發(fā)明化合物以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的等滲水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液，或無菌散劑，其可在使用前在無菌可注射溶液或分散液中復(fù)水，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、使調(diào)配物與所需受體的血液等滲的溶質(zhì)或懸浮劑或增稠劑?？捎糜诒景l(fā)明的醫(yī)藥組合物中的適當(dāng)水性和非水性載劑的實例包括水、乙醇、多元醇(諸如，甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和其適當(dāng)混合物、植物油(諸如橄欖油)和可注射有機(jī)酯(諸如油酸乙酯)。例如，可利用包衣材料(諸如卵憐脂)，在分散液的情況通過保持所需粒徑且利用表而活性劑來保持適當(dāng)流動性。這些組合物還可含有佐劑，諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑?？赏ㄟ^包涵各種抗菌劑和抗真菌劑(例如，對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸等)來確保防止微生物作用。組合物中還可能需要包括等滲劑，諸如糖、氯化鈉等。此外，可通過包涵延緩吸收的試劑(諸如單硬脂酸鋁和明膠)而使可注射醫(yī)藥形式延遲吸收。在一些情況下，為延長藥劑的作用，需要減緩皮下或肌肉內(nèi)注射的藥劑的吸收。這可利用具有弱水溶性的結(jié)晶或無定形材料的液體懸浮液來實現(xiàn)。所述藥劑的吸收速率則視其溶解速率而定，而其溶解速率又可視晶體大小和結(jié)晶形式而定。另外，不經(jīng)腸投與的藥劑的延緩吸收是通過將所述藥劑溶解或懸浮于油媒劑中來實現(xiàn)。通過在生物可降解聚合物(諸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成標(biāo)的化合物的微膠囊基質(zhì)來制得可注射儲槽形式。視藥劑與聚合物的比例和所使用的特定聚合物的性質(zhì)而定，可控制藥劑釋放速率。其它生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。也可通過將所述藥劑包入可與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳液中來制備儲槽式可注射調(diào)配物。當(dāng)將本發(fā)明的化合物作為醫(yī)藥劑投與人類和動物時，其可以原樣給與或以例如含有與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑組合的0.1到99.5%(更優(yōu)選0.5到90%)活性成分的醫(yī)藥組合物形式給與。除上述組合物外，也可使用含有適量治療劑的覆蓋層，例如熟石膏、繃帶、敷料、紗布墊等。如上文詳細(xì)描述，可在軀干、裝置、假體和植入物上投與/傳遞治療性組合物。供分析的組織樣本通常為來自患者的血液、血漿、血清、粘液或腦脊髓液。例如，分析樣本中針對RAGE肽的抗體的含量或分布，例如人類化抗體的含量或分布。檢測對RAGE具特異性的抗體的ELISA方法將在實例中加以描述。被動免疫后抗體的分布通常展現(xiàn)抗體濃度的即時峰值，隨后呈指數(shù)衰退。在無額外劑量的情況下，視所投與的抗體半衰期而定，下降在數(shù)天到數(shù)月內(nèi)接近預(yù)治療含量。在一些方法中，在投藥前取得患者體內(nèi)抗RAGE抗體的基線測量值，在投藥后立即取得測定抗體峰含量的第二測量值，且以特定時間間隔取得一個或多個其它測量值以監(jiān)測抗體含量下降。當(dāng)抗體含量已下降到基線或低于基線的預(yù)定峰值百分比(例如，50%、25%或10%)時，投與另一抗體劑量的投與。在一些方法中，將低于背景的峰值或后續(xù)測量含量與先前測定的構(gòu)成其它患者的有益預(yù)防或治療性治療方案的參考含量相比較。如果所測量的抗體含量明顯低于參考含量(例如，小于從治療獲益的患者群體的參考值的平均值減一個標(biāo)準(zhǔn)差)，那么表明需投與額外劑量的抗體。雄鑒于現(xiàn)已大體描述本發(fā)明，參考以下實例將更易于了解本發(fā)明，所述實例僅出于說明本發(fā)明某些方面和實施例的目的而包括在內(nèi)且不意欲限制本發(fā)明。實例1RAGE構(gòu)筑體的制備鼠科RAGE(mRAGE，基因庫登陸號第NP—031451號；SEQIDNO:3)和人類RAGE(hRAGE，基因庫登陸號第NP—00127.1號；SEQIDNO:l)的氨基酸序列繪示于圖1A-1C中。將編碼mRAGE(登錄號第NM_007425.1號；SEQIDNO:4)禾卩hRAGE(登錄號第NM—001136號；SEQIDNO:2)的全長cDNA插入Adoril-2表達(dá)載體中，所述表達(dá)載體包含驅(qū)動cDNA序列表達(dá)的巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動子，并且含有用于病毒產(chǎn)生的腺病毒元件。通過將人類RAGE的氨基酸1-344附加到人類IgG的Fc結(jié)構(gòu)域所形成的人類RAGE-Fc融合蛋白是通過使用Adori表達(dá)載體在經(jīng)培養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)編碼所述融合蛋白的DNA構(gòu)筑體而制備得到。類似地制備通過將人類RAGE的氨基酸1-118附加到人類IgG的Fc結(jié)構(gòu)域所形成的人類RAGEV區(qū)-Fc融合蛋白。通過將抗生蛋白鏈菌素(str印)標(biāo)簽序列(WSHPQFEK)(SEQIDNO:5)分別附加到人類或鼠科RAGE的氨基酸1-344所形成的人類和鼠科RAGE-strep標(biāo)簽融合蛋白也是通過使用Adori表達(dá)載體表達(dá)編碼所述RAGE-strep標(biāo)簽融合蛋白的DNA構(gòu)筑體而制備得到。通過大量限制性消化分析且通過質(zhì)粒內(nèi)cDNA插入物的序列分析來驗證所有構(gòu)筑體。通過在人類胚腎細(xì)胞系293(HEK293)(ATCC，馬里蘭州羅克蘭德(Rockland,MD))中同源重組產(chǎn)生表達(dá)全長RAGE、hRAGE-Fc和hRAGEV-結(jié)構(gòu)域-Fc的重組腺病毒(Ad5Ela/E3缺失)。分離重組腺病毒且隨后使其在HEK293細(xì)胞中擴(kuò)增。通過三個冷凍解凍循環(huán)從受感染HEK293細(xì)胞中釋放所述病毒。通過兩個氯化銫離心梯度進(jìn)一步純化病毒并且在4'C下對磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)(pH7.2)透析。透析后，添加甘油以達(dá)到10%的濃度且在-8(TC下儲存病毒待用。通過感染性(293細(xì)胞上的空斑形成單位)、病毒的PCR分析、編碼區(qū)的序列分析、轉(zhuǎn)基因的表達(dá)和內(nèi)毒素測量來表征病毒構(gòu)筑體。使用陽離子脂質(zhì)體(lipofectin)(英杰公司(Invitrogen))將含有編碼人類RAGE-Fc、人類RAGE-V區(qū)-Fc以及人類和鼠科RAGE-strep標(biāo)簽融合蛋白的DNA的Adori表達(dá)載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞中。在20nM和50nM甲氨喋呤中選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體。采集個別克隆的條件培養(yǎng)基并且使用十二垸基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)禾口Western印跡加以分析以證實RAGE表達(dá)。(考夫曼R丄(Kaufman,R丄),1990,酶學(xué)方法(MethodsinEnzymology)，185:537-66;考夫曼R丄，1990，酶學(xué)方法，185:487-511;皮特曼D.D.(Pittman，D.D.)等人，1993，酶學(xué)方法，222:236-237)。培養(yǎng)表達(dá)可溶RAGE融合蛋白的CHO或經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK293細(xì)胞以采集條件培養(yǎng)基以供蛋白純化。使用所述的親和標(biāo)簽方法純化蛋白。使經(jīng)純化蛋白經(jīng)歷還原和非還原性SDS-PAGE，通過考馬斯藍(lán)染色(CoomassieBluestaining)(當(dāng)前蛋白科學(xué)方案(CurrentProtocolsinProteinSciences),WileyInterscience)使其顯現(xiàn)且證實其具有預(yù)期的分子量。實例2鼠科抗RAGE單克隆抗體的產(chǎn)生使用基因槍(GeneGun)裝置(伯樂公司(BioRad),加州赫拉克勒斯(Hercules,CA)),經(jīng)皮下對6-8周齡的雌性BALB/c小鼠(查爾斯河(CharlesRiver)，馬薩諸塞州安杜佛(Andover,MA))進(jìn)行免疫。將含有編碼全長人類RAGE的cDNA的pAdori表達(dá)載體預(yù)52先吸收到膠體金顆粒(伯樂公司(BioRad)，加州赫拉克勒斯)上，隨后經(jīng)皮下投與。每周2次用3)ig載體對小鼠免疫，持續(xù)2周。在最后一次免疫后一周對小鼠進(jìn)行抽血，并且評估抗體效價。在細(xì)胞融合前三天，使具有最高RAGE-抗體效價的小鼠再接收1次10pg重組人類RAGE-strep蛋白注射。使用50%聚乙二醇(MW1500)(羅氏診斷有限公司(RocheDiagnosticsCorp)，德國曼海姆(Mannheim,Germany)),將脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3X63Ag8.653(ATCC，馬里蘭州羅克威爾(Rockville，MD))以4:1的比率融合。融合后，對細(xì)胞接種并以1x105個細(xì)胞/孔培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板中的RPMI1640選擇培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基含有20%FBS、5%Origen(IGEN國際公司(IGENInternationalInc.)，馬里蘭州蓋塞斯堡(Gaithersburg，MD))、2mML-谷氨酰胺、100U/ml盤尼西林(penicillin)、100pg/ml鏈霉素、10mMHEPES禾Hlx次黃嘌呤-氨喋呤(aminopterin)-胸苷(西格瑪公司(Sigma)，密蘇里州圣路易斯(St.Louis,MO))。實例3大鼠抗RAGE單克隆抗體的產(chǎn)生使用基因槍(伯樂公司，加州赫拉克勒斯)，經(jīng)皮下對LOU大鼠(哈倫(Harlan),馬薩諸塞州哈倫(Harlan,MA))免疫。將含有編碼全長鼠科RAGE的cDNA的pAdori表達(dá)載體預(yù)先吸收到膠體金顆粒(伯樂公司(BioRad)，加州赫拉克勒斯)上，隨后經(jīng)皮下投與。每2周1次用3pg載體對大鼠免疫，共計4次。在最后一次免疫后一周對大鼠進(jìn)行抽血，并且評估抗體效價。在細(xì)胞融合前三天，使具有最高RAGE-抗體效價的大鼠再接收1次10pg重組鼠科RAGE-strep蛋白注射。使用50%聚乙二醇(MW1500)(羅氏診斷有限公司(RocheDiagnosticsCorp),德國曼海姆(Mannheim,Germany)),將脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3X63Ag8.653(ATCC，馬里蘭州羅克威爾(Rockville，MD))以4:1的比率融合。融合后，對細(xì)胞接種并以lx105個細(xì)胞/孔培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板中的RPMI1640選擇培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基含有20%FBS、5%Origen(IGEN國際公司(IGENInternationalInc.),馬里蘭州蓋塞斯堡(Gaithersburg,MD))、2mML-谷氨酰胺、100U/ml盤尼西林(penicillin)、100jag/ml鏈霉素、10mMHEPES和lx次黃嘌呤-氨喋呤-胸苷(西格瑪公司(Sigma),密蘇里州圣路易斯(St.Louis,MO))。實例4雜交瘤篩選通過使用基因槍和表達(dá)鼠科或人類RAGE的全長編碼區(qū)的Adori表達(dá)質(zhì)粒使cDNA免疫而產(chǎn)生多種大鼠抗鼠科RAGE和鼠科抗人類RAGEmAb。通過ELISA和針對瞬時表達(dá)RAGE的人類胚腎細(xì)胞(HEK-293)的FACS分析，關(guān)于與重組人類或鼠科RAGE-Fc的結(jié)合篩選雜交瘤上清液。另外測試陽性上清液中和RAGE與配體HMGB1的結(jié)合的能力。鑒別出7種大鼠單克隆抗體(XT-M系列)和7種小鼠單克隆抗體(XT-H系列)。通過4次連續(xù)稀釋和1次FACS揀選來亞克隆所選雜交瘤。采集穩(wěn)定雜交瘤培養(yǎng)物的條件培養(yǎng)基，并且使用蛋白A抗體純化柱(馬薩諸塞州畢萊卡，密理博公司(MilliporeBillerica,MA))純化免疫球蛋白。使用如所述的小鼠mAb同型試劑盒或大鼠mAb同型試劑盒(IsoStrip;寶靈曼有限公司(BoehringerMannheimCorp.))來確定各mAb的Ig類別。所選大鼠和小鼠單克隆抗體的同型陳述于表1(下表)中。表1大鼠單克隆抗muRAGE抗付鼠科單克隆抗huRAGE抗體雜交瘤克隆MabIg同型雜交瘤克隆MabIg同型lmRAGEP3/l*XT-MI大鼠IgG2a,khRAGEP3/6*XT-HI小鼠IgGI，klmRAGEP3/7XT-M2大鼠IgG2b，klhRAGEP3/16*XT-H2小鼠IgGl，klmRAGEP3/8XT-M3大鼠IgG2a,klhRAGEP3/18XT-H3小鼠IgGl,klmRAGEP3/10*XT-M4大鼠IgG2b,klhRAGEP3/48XT-H4小鼠IgGl,klmRAGEP3/15XT-M5大鼠IgG2a，klhRAGEP3/55*XT-H5小鼠IgGl，klmRAGEP3/16XT-M6大鼠IgG2b,klhRAGEP3/65XT-H6小鼠IgGl，klmRAGEP3/18*XT-M7大鼠IgG2b，klhRAGEP3/66XT-H7小鼠IgGl,k實例5FACS分析用人類和鼠科RAGE腺病毒感染人類293細(xì)胞。使受感染細(xì)胞以4x104個細(xì)胞/毫升的密度懸浮于含有1%BSA的PBS中。在4'C下，將細(xì)胞與100^樣本(稀免疫血清、雜交瘤上清液或經(jīng)純化抗體)一起培養(yǎng)30分鐘。洗滌后，在4'C下在暗處將細(xì)胞與PE標(biāo)記的山羊抗小鼠IgGF(ab')2(DAKO有限公司，丹麥哥洛斯卓普(GlostrupDenmark))一起培養(yǎng)30分鐘。通過每次處理使用5000個細(xì)胞的FACScan流式細(xì)胞熒光計(貝迪公司(BectonDickinson))來測量細(xì)胞相關(guān)熒光信號。使用碘化丙啶(propidiumiodide)鑒別死亡細(xì)胞，將其排除在分析之外。通過FACS分析證實7種鼠科單克隆抗體XT-HI到XT-H7和7種大鼠單克隆抗體XT-MI到XT-M7與細(xì)胞表面hRAGE結(jié)合(表2)。實例6ELISA結(jié)合檢定使用標(biāo)準(zhǔn)程序從雜交瘤上清液中純化抗體。使用ELISA來評估經(jīng)純化抗體與可溶形式的RAGE的結(jié)合。用100^重組人類RAGE-Fc或重組人類RAGEV區(qū)-Fc(1pg/ml)涂布96孔培養(yǎng)板(康寧公司(Corning),紐約康寧市(Corning,NY))并且在4'C下培養(yǎng)整夜。用含有1%BSA和0.05呢吐溫-20(Tween-20)的PBS洗滌并阻斷后，添加100^樣本(樣本呈若干種形式稀免疫血清、雜交瘤上清液或經(jīng)純化抗體，如所述)并且在室溫下培養(yǎng)1小時。將培養(yǎng)板用PBS(pH7.2)洗滌，并且借助于使用過氧化物酶聯(lián)結(jié)的山羊抗小鼠IgG(H+L)(IgG)(皮爾斯公司(Pierce),伊利諾伊州洛克夫(Rockford，IL))，隨后將其與底物TMB(BioFXLaboratories公司，馬里蘭州奧文斯米爾實驗室(OwingsMills,MDLaboratories)—起培養(yǎng)來檢測已結(jié)合的抗RAGE抗體。利用分光光度計在450nm下測定吸光率值。使用過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG(Fcy)(皮爾斯公司,伊利諾伊州洛克夫)來測定單克隆抗體的濃度，并且由經(jīng)純化、同型匹配的小鼠IgG產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。有關(guān)7種鼠科抗體XT-HI到XT-H7和7種大鼠抗體XT-MI到XT-M7與hRAGE-Fc、hRAGEV區(qū)-Fc、mRAGE-Fc和mRAGE-strep結(jié)合的能力的ELISA結(jié)果概述于表2中。如圖2和3中所示，大鼠抗體XT-M4和鼠科抗體XT-H2都結(jié)合人類RAGE-Fc和hRAGE的V結(jié)構(gòu)域。XT-M4與人類RAGE和人類RAGEV結(jié)構(gòu)域結(jié)合的EC50值分別為300pM禾n100pM。XT-H2與人類RAGE和人類RAGEV結(jié)構(gòu)域結(jié)合的EC50值分別為90pM和100pM。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>實例7RAGE配體和抗體競爭性ELISA結(jié)合檢定為確定RAGE單克隆抗體是否影響RAGE配體(HMGB1;西格瑪公司，密蘇里州圣路易斯)與RAGE的結(jié)合，進(jìn)行競爭性ELISA結(jié)合檢定。在4'C下，用1pg/mlHMGB1涂布96孔培養(yǎng)板整夜。如上文所述，洗滌并阻斷各孔，并且在室溫下，將其暴露于IOOpl預(yù)先培養(yǎng)的O.l)ng/mlRAGE-Fc或TrkB-Fc(非特異性Fc對照)與各種形式的所述抗體制劑(免疫血清稀釋液、雜交瘤上清液或經(jīng)純化抗體)的混合物達(dá)1小時。將培養(yǎng)板用PBS(pH7.2)洗滌，并且借助于使用過氧化物酶聯(lián)結(jié)的山羊抗人類IgG(Fc力(皮爾斯公司，伊利諾伊州洛克夫)，隨后將其與底物TMB(BioFXLaboratories公司，馬里蘭州奧文斯米爾實驗室(OwingsMills,MDLaboratories),馬里蘭州奧文斯米爾)一起培養(yǎng)來檢測配體結(jié)合的重組人類RAGE-Fc。將在不存在任何抗體或存在稀免疫前血清的情況下重組人類RAGE-Fc與配體的結(jié)合用作對照，并將其定義為100%結(jié)合。如通過競爭性ELISA結(jié)合檢定所確定的7種鼠科抗體XT-HI到XT-H7和7種大鼠抗體XT-MI到XT-M7阻斷HMGB1與hRAGE-Fc結(jié)合的能力展示于表3中。表3還概述如通過類似競爭性ELISA結(jié)合檢定所確定的鼠科抗體XT-Hl、XT-H2和XT-H5阻斷hRAGE的另一配體淀粉樣(31-42肽與RAGE結(jié)合的能力，和大鼠抗體XT-MI到XT-M7阻斷HMGB1與鼠科RAGE-Fc結(jié)合的能力。如圖4所示，大鼠抗體XT-M4和鼠科抗體XT-H2都阻斷HMGB1與人類RAGE的結(jié)合。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>使用類似競爭方法來確定抗體對之間的相關(guān)結(jié)合表位。首先，在4'C下在96孔培養(yǎng)板上涂布1貼/ml重組人類RAGE-Fc整夜。洗滌和阻斷(參看上文)后，在室溫下將各孔暴露于100|_11預(yù)先培養(yǎng)的生物素化標(biāo)耙抗體與競爭抗體稀釋液的混合物達(dá)1小時。使用過氧化物酶聯(lián)結(jié)的抗生蛋白鏈菌素(皮爾斯公司)來檢測已結(jié)合的生物素化抗體。使用類似競爭方法來確定抗體對之間的相關(guān)結(jié)合表位。首先，在4"C下在96孔培養(yǎng)板上涂布1嗎/ml重組人類RAGE-Fc整夜。洗滌和阻斷(參看上文)后，在室溫下將各孔暴露于100^U預(yù)先培養(yǎng)的生物素化標(biāo)耙抗體與競爭抗體的稀釋液的混合物達(dá)1小時。使用過氧化物酶聯(lián)結(jié)的抗生蛋白鏈菌素(皮爾斯公司，伊利諾伊州洛克夫)，隨后將其與底物TMB(BioFXLaboratories公司，馬里蘭州奧文斯米爾實驗室)一起培養(yǎng)，來檢測已結(jié)合的生物素化抗體。將在不存在任何競爭抗體的情況下生物素化抗體與重組人類RAGE-Fc的結(jié)合用作對照且將其定義為100%。分析大鼠與鼠科抗體之間關(guān)于結(jié)合hRAGE的競爭的競爭性ELISA結(jié)合檢定的結(jié)果展示于表3中。圖5提供競爭性ELISA結(jié)合檢定的數(shù)據(jù)圖，其分析大鼠XT-M4和抗體XT-H1、XT-H2、XT-H5、XT-M2、XT-M4、XT-M6和XT-M7之間關(guān)于結(jié)合hRAGE的競爭。圖5中所示的競爭性ELISA結(jié)合數(shù)據(jù)表明，XT-M4和XT-H2結(jié)合人類RAGE上的重疊位點(diǎn)。實例8鼠科和大鼠抗RAGE抗體與人類和鼠科RAGE-Fc的結(jié)合的BIACORETM結(jié)合檢定A.與人類和鼠科RAGE結(jié)合通過8仏[0尺￡@直接結(jié)合檢定來分析所選鼠科和大鼠抗RAGE抗體與人類和鼠科RAGE以及人類和鼠科RAGE的V結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。使用標(biāo)準(zhǔn)胺偶聯(lián)，使用以高密度(2000RU)涂布于CM5芯片上的人類或鼠科RAGE-Fc進(jìn)行檢定。一式兩份，在固定的RAGE-Fc蛋白上運(yùn)行50nm和100nm兩種濃度的抗RAGE抗體溶液。BIACOREtm技木利用抗RAGE抗體與固定RAGE抗原結(jié)合后表面層處折射率的改變。通過從所述表面折射的激光的表面等離子體共振(SPR)來檢測結(jié)合。BIACORETM直接結(jié)合檢定的結(jié)果概述于表4中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>通過BIACORETM直接結(jié)合檢定來確定鼠科和大鼠抗RAGE抗體與人類和鼠科RAGE結(jié)合的動力學(xué)速率常數(shù)(ka和kd)以及締合常數(shù)和解離常數(shù)(Ka和Kd)。有關(guān)締合速率和解離速率的信號動力學(xué)數(shù)據(jù)的分析使得能區(qū)別非特異性相互作用與特異性相互作用。通過針對鼠科XT-H2抗體和大鼠XT-M4抗體與hRAGE-Fc的結(jié)合的BIACOREtm直接結(jié)合檢定所確定的動力學(xué)速率常數(shù)和平衡常數(shù)展示于表5中。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>B.與人類RAGEV結(jié)構(gòu)域結(jié)合同樣通過BIACORETM直接結(jié)合檢定來確定鼠科和大鼠抗RAGE抗體與人類RAGEV結(jié)構(gòu)域結(jié)合的動力學(xué)速率常數(shù)以及締合常數(shù)和解離常數(shù)。由涂布于CM5芯片上的抗人類Fc抗體捕獲人類RAGEV結(jié)構(gòu)域-Fc,并且如上文關(guān)于與全長RAGE-Fc結(jié)合的檢定所述進(jìn)行鼠科和大鼠抗RAGE抗體與固定hRAGEV結(jié)構(gòu)域-Fc的結(jié)合的BIACOREtm直接結(jié)合檢定。實例9抗RAGE抗體可變區(qū)的氨基酸序列克隆編碼鼠科抗RAGE抗體XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5和XT-H7以及大鼠抗RAGE抗體XT-M4的輕鏈和重鏈可變區(qū)的DNA序列，并且對其進(jìn)行測序，且確定所述可變區(qū)的氨基酸序列。所述6種抗體的重鏈可變區(qū)的經(jīng)比對氨基酸序列繪示于圖6中，并且輕鏈可變區(qū)的經(jīng)比對氨基酸序列繪示于圖7中。實例10編碼RAGE的兔、狒狒和食蟹猴cDNA序列的分離使用標(biāo)準(zhǔn)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分離并克隆編碼RAGE的cDNA序列。使用Trizol(吉普科-英杰公司(GibcoInvitrogen)，加州卡斯壩(Carlsbad,CA))，經(jīng)由制造商的方案從肺組織中提取RNA并加以純化。使用TaqMan反轉(zhuǎn)錄試劑(羅氏應(yīng)用化學(xué)公司(RocheAppliedScience),印第安納州印第安納波里斯(Indianapolis,IN))和制造商的方案使mRNA反轉(zhuǎn)錄以產(chǎn)生cDNA。使用英杰公司的TaqDNA聚合酶(英杰公司，加州卡斯壩)和方案以及添加有S/^Z和￡C0/V限制性位點(diǎn)的寡核苷酸(51-GACCCTGGAAGGAAGCAGGATG(SEQIDNO:59)禾口5'-GGATCTGTCTGTGGGCCCCTCAAGGCC(SEQIDNO:60))，由cDNA擴(kuò)增食蟹猴(食蟹猴(Macacafascicularis))和狒狒(黃狒狒(Papiocvanoce。halus))RAGE序列。用Spel/EcoRV消化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，并且將其克隆到質(zhì)粒pAdoril-3的相應(yīng)位點(diǎn)中。使用如上文所述的RT-PCR，使用添加有和A^/位點(diǎn)的寡核苷酸5'-ACTAGACTAGTCGGACCATGGCAGCAGGGGCAGCGGCCGGA(EQIDNO:61)禾U62)來克隆兔RAGE，并將其克隆到pAdoril-3中的相應(yīng)位點(diǎn)中。確定所得質(zhì)粒中編碼狒狒、猴和兔RAGE兩種同功異型物的經(jīng)克隆cDNA序列的核苷酸序列。編碼狒狒RAGE的核苷酸序列繪示于圖8中(SEQIDNO:6)，且編碼食蟹猴RAGE的核苷酸序列繪示于圖9中(SEQIDNO:8)。編碼兔RAGE兩種同功異型物的核苷酸序列繪示于圖10(SEQIDNO:10)和圖11(SEQIDNO:12)中。實例ll編碼狒狒RAGE的基因組DNA序列的分離使用標(biāo)準(zhǔn)基因組克隆技術(shù)(例如，參看薩布魯克J(SambrookJ.)等人，分子克隆實驗手冊(MolecularCloning:ALaboratoryManual)，第2版，1989，冷泉港實驗出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress),冷泉港(ColdSpringHarbor)，紐約(NewYork))來分離編碼RAGE的狒狒基因組DNA序列。使用32P隨機(jī)引物人類RAGEcDNA，以XDASHII載體篩選狒狒(黃狒狒)X基因組文庫(Stratagene公司，加州拉赫亞(LaJolla,C))。分離陽性噬菌體斑，并使其再經(jīng)歷兩輪篩選以獲得單一分離株。制備人DNA,用Notl消化并且使用常用程序進(jìn)行尺寸分離以從人基因組中分離出插入物DNA。將Notl片段與Notl消化的pBluescriptSK+連接，并使用RAGE特異性引物對插入物進(jìn)行測序。所獲得的克隆稱為克隆18.2。編碼狒狒RAGE的經(jīng)克隆狒狒基因組DNA的核苷酸序列繪示于圖12A-12E中(SEQIDNO:15)。實例12嵌合XT-M4抗體通過將大鼠抗鼠科RAGE抗體XT-M4的輕鏈和重鏈可變區(qū)分別與人類K輕鏈和IgGl重鏈恒定區(qū)融合來產(chǎn)生嵌合XT-M4。為減少潛在的Fc介導(dǎo)的抗體的效應(yīng)活性，將嵌合突變L234A和G237A引入XT-M4的人類IgGlFc區(qū)中。所述嵌合抗體的分子編號指定為XT-M4-A-1。嵌合XT-M4抗體含有93.83呢的人類氨基酸序列和6.18%的大鼠氨基酸序列。實例13評定嵌合XT-M4與RAGE的結(jié)合通過ELISA和BIACORETM結(jié)合檢定來測量嵌合抗體XT-M4以及所選大鼠和鼠科抗RAGE抗體結(jié)合人類RAGE和其它物種的RAGE以及阻斷RAGE配體結(jié)合的能力。A.通過BIACORETM結(jié)合檢定測量的與可溶人類RAGE的結(jié)合通過BIACORETM捕獲結(jié)合檢定來測量嵌合抗體XT-M4、親代大鼠抗體XT-M4以及鼠科抗體XT-H2禾aXT-H5與可溶人類RAGE(hRAGE-SA)的結(jié)合。通過將抗體以5000-7000RU涂布于CM5BIA芯片上來進(jìn)行檢定。一式三份，使?jié)舛葹?00nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.12nM、1.56nM和0nM的抗生蛋白鏈菌素標(biāo)記的經(jīng)純化可溶人類RAGE(hRAGE-SA)的溶液流過同定抗體，并且確定關(guān)于結(jié)合hRAGE-SA的動力學(xué)速率常數(shù)(ka和kd)以及締合常數(shù)和解離常數(shù)(Ka和Kd)。結(jié)果展示于表6中。<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>XT-M4抗體和嵌合抗體XT-M4以類似動力學(xué)結(jié)合單體可溶人類RAGE。嵌合XT-M4對人類可溶單體RAGE的親和力為約5.5nM。B.RAGE配體競爭性ELISA結(jié)合檢定通過如實例7中所述的配體競爭性ELISA結(jié)合檢定來確定嵌合抗體XT-M4抗體和大鼠抗體XT-M4阻斷RAGE配體HMGBl、淀粉樣蛋白(31-42肽、S100-A和S100-B與hRAGE-Fc結(jié)合的能力。如圖13所示，嵌合抗體XT-M4與XT-M4阻斷HMGBl、淀粉樣蛋白(31-42肽、S100-A和S100-B與人類RAGE-Fc結(jié)合的能力大致相同。C.抗體競爭性ELISA結(jié)合檢定以實例7中所述的方式，通過抗體競爭性ELISA結(jié)合檢定，使用生物素連接的XT-M4和XT-H2抗體來確定嵌合抗體XT-M4抗體與大鼠抗體XT-M4和鼠科抗體XT-H2競爭與hRAGE-Fc的結(jié)合的能力。如圖14中所示，嵌合抗體XT-M4與大鼠抗體XT-M4和鼠科抗體XT-H2競爭與hRAGE-Fc的結(jié)合。實例14通過基于細(xì)胞的ELISA測量抗體與不同物種的RAGE的結(jié)合細(xì)胞轉(zhuǎn)染以每10平方厘米組織培養(yǎng)板5x106個細(xì)胞涂布人類胚腎293細(xì)胞(美國典型組織保藏中心(AmericanTissueTypeCulture)，維吉尼亞州馬納薩斯(Manassas,VA))，并且在37r下培養(yǎng)整夜。次日，使用制造商的方案，使用LF2000試劑(英杰公司，加州卡斯壩)利用RAGE表達(dá)載體(編碼小鼠、人類、狒狒、食蟹猴或兔RAGE的pAdoril-3載體)以4:1的試劑:質(zhì)粒DNA比率轉(zhuǎn)染細(xì)胞。使用胰蛋白酶進(jìn)行的轉(zhuǎn)染后48小時，采集細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)洗滌1次，隨后使其以2x106個細(xì)胞/毫升的濃度懸浮于無血清生長培養(yǎng)基中?；诩?xì)胞的ELISA將1昭/ml初級抗體以1:2或1:3連續(xù)稀釋于％孔培養(yǎng)板中含有l(wèi)呢牛血清白蛋戶i(BSA)的PBS中。將無血清生長培養(yǎng)基中2xl(^個細(xì)胞/毫升的經(jīng)RAGE轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞或?qū)φ沼H代293細(xì)胞(50pi)添加到U形底的96孔培養(yǎng)板中以達(dá)1><105個細(xì)胞/孔的最終濃度。以1600rpm將細(xì)胞離心2分鐘。借助于用手快速掠過而小心地棄去上清液，并且小心地輕拍培養(yǎng)板以使細(xì)胞小球松散。將含有10%胎牛血清(FCS)的冷PBS中的經(jīng)稀釋的初級抗RAGE抗體或同型匹配的對照抗體UOOpi)添加到細(xì)胞中并在冰上培養(yǎng)1小時。在冰上用100|il經(jīng)稀釋的二級抗IgG抗體HRP連結(jié)物(皮爾斯生物技術(shù)公司(PierceBiotechnology),伊利諾伊州洛克夫(Rockford,IL))對細(xì)胞染色達(dá)1小時。在初級抗體和二級抗體培養(yǎng)的各步驟后，用冰冷的PBS將細(xì)胞洗滌3次。將100pl底物TMB1組分(BIOFX,TMBW-0100-01)添加到培養(yǎng)板中并在室溫下培養(yǎng)5-30分鐘。通過添加100^0.18MH2S04來終止顯色。離心細(xì)胞并將上清液轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)板中，并在450nm(SoftMAXpro4.0，分子裝置有限公司(MolecularDevicesCorporation),力口州桑尼維爾(Sunnyvale,CA))下讀取。如通過基于細(xì)胞的ELISA所確定的抗體嵌合XT-M4和XT-M4結(jié)合人類和狒狒RAGE的能力繪示于圖14中。如通過基于細(xì)胞的ELISA所確定的嵌合抗體XT-M4和XT-M4結(jié)合由293細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞表面人類、狒狒、猴、小鼠和兔RAGE的EC50值展示于表7中。<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>實例15與不同物種的RAGE的結(jié)合一通過免疫組織化學(xué)染色來確定通過肺組織切片的免疫組織化學(xué)(IHC)染色來確定嵌合抗體XT-M4、大鼠XT-M4抗體以及鼠科抗體XT-Hl、XT-H2和XT-H5結(jié)合人類、食蟹猴、狒狒和兔的肺組織中的內(nèi)源細(xì)胞表面RAGE的能力。對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞進(jìn)行工程改造以使其表達(dá)鼠科和人類RAGE全長蛋白。將鼠科和人類RAGEcDNA克隆到哺乳動物表達(dá)載體中，使其線性化并使用陽離子脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中(考夫曼R丄(Kaufman,R丄)，1990,酶學(xué)方法(MethodsinEnzymology),185:537-66;考夫曼R丄，1990，酶學(xué)方法，185:487-511;皮特曼D.D.(Pittman，D.D.)等人，1993,酶學(xué)方法，222:236)。另外，以20nM甲胺喋呤選擇細(xì)胞并且采集個別克隆的細(xì)胞提取物，并通過SDS(十二烷基硫酸鈉)-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western印跡加以分析以確定表達(dá)。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行從狒狒、食蟹猴、兔中分離的RAGE肺組織或過度表達(dá)人類RAGE的中國倉鼠卵巢細(xì)胞或?qū)φ誄HO細(xì)胞的免疫組織化學(xué)。使用1-15mg的RAGE抗體和大鼠IgG2b同型對照或小鼠同型對照。將嵌合XT-M4、XT-M4-hVH-V2.0-2m/hVL-V2.10、XT-M4-hVH-V2.0-2m/hVL-V2.11、XT-M4-hVH-V2.0-2m/hVL-V2.14生物素化，并使用0.2、1、5和10pg/ml的西格瑪(Sigma)IgGl生物素化對照抗體。在用HRP禾QAlexaFluor594、AlexaFluor488或與FITC連結(jié)的抗生物素檢測后，另外用4'-6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)對切片染色。圖15繪示嵌合抗體XT-M4結(jié)合食蟹猴、兔和狒狒的肺組織中的RAGE。產(chǎn)生RAGE的細(xì)胞與嵌合XT-M4接觸的樣本中可見陽性IHC染色圖案，但不存在RAGE或RAGE結(jié)合抗體的樣本中并無圖案。圖16繪示大鼠抗體XT-M4結(jié)合正常人肺以及患有慢性阻塞性肺病(COPD)的人的肺中的RAGE。如通過肺組織切片的IHC染色所確定的大鼠XT-M4抗體和鼠科抗體XT-H1、XT-H2和XT-H5與膿毒癥狒狒的肺和正常食蟹猴肺中的內(nèi)源細(xì)胞表面RAGE的結(jié)合概述于表8中。將用表達(dá)編碼hRAGE的DNA的表達(dá)載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞用作陽性對照。<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>實例16人類化鼠科抗人類RAGE抗體XT-H2的分子建模鼠科抗人類RAGE抗體XT-H2HV結(jié)構(gòu)域的分子建?；卺槍Φ鞍讛?shù)據(jù)庫(PDB)序列數(shù)據(jù)庫的BLASTP搜索來選擇用于建立鼠科XT-H2重鏈模型的抗體結(jié)構(gòu)模板。使用InsightII的同源模組(homologymodule)(艾斯瑞公司(Accelrys)，圣迭戈(SanDiego))，基于6個模板結(jié)構(gòu)1SY6(抗CD3抗體)、1MRF(抗RNA抗體)和1RIH(抗腫瘤抗體)建構(gòu)鼠科XT-H2的分子模型?；诟鞣肿拥腃a距離矩陣來確定模板的結(jié)構(gòu)保守區(qū)(SCR)，并且基于SCR中相應(yīng)原T的最小RMS差來疊加模板結(jié)構(gòu)。將標(biāo)靶蛋白大鼠XT-H2VH的序列與疊加模板蛋白的序列相比對，并且將SCR的原子坐標(biāo)分配給標(biāo)靶蛋白的相應(yīng)殘基。基于標(biāo)靶與各SCR的模板之間的序列相似性程度，對不同SCR使用來自不同模板的坐標(biāo)。通過如同源模組中所實施的搜索循環(huán)(SearchLoop)或生成循環(huán)(GenerateLoop)方法生成未包括在SCR中的環(huán)和可變區(qū)的坐標(biāo)。簡單來說，搜索循環(huán)法掃描將模擬2個SCR之間的區(qū)域的蛋白結(jié)構(gòu)，其是通過將側(cè)接SCR殘基的Ca距離矩陣與從具有相同側(cè)接殘基數(shù)和指定長度的插入的肽區(qū)段的蛋白結(jié)構(gòu)得到的預(yù)先計算的矩陣相比較來進(jìn)行的。評估搜索循環(huán)法的輸出，首先發(fā)現(xiàn)側(cè)接SCR殘基中具有最小RMS差和最大序列一致性的匹配。隨后，評估潛在匹配與標(biāo)靶環(huán)序列之間的序列相似性。在搜索循環(huán)無法發(fā)現(xiàn)最佳匹配的情況下，使用生成循環(huán)法重新生成原子坐標(biāo)。如果模板和標(biāo)耙中的氨基酸殘基一致，那么使氨基酸側(cè)鏈的構(gòu)象與模板中的氨基酸側(cè)鏈構(gòu)象保持相同。另一方面，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的構(gòu)象搜索并且使與模板和標(biāo)靶中的殘基不一致的殘基保持能量最有利的構(gòu)象。為優(yōu)化兩個相鄰SCR(其坐標(biāo)是根據(jù)不同模板而修改)之間以及SCR與環(huán)之間的剪接點(diǎn)，使用同源模組的剪接修復(fù)(SpliceRepair)功能。剪接修復(fù)建立一個用于得出2個SCR之間或SCR與可變區(qū)之間的剪接點(diǎn)處的最佳鍵長和鍵角的分子力學(xué)模擬。最后，使所述模型經(jīng)歷使用最陡下降算法進(jìn)行的能量最小化直到達(dá)到5千卡/(摩爾埃)或500個循環(huán)的最大梯度，并且使其經(jīng)歷共軛梯度算法直到達(dá)到5千卡/(摩爾埃)或2000個循環(huán)的最大梯度。使用同源模組的ProStat/Struct—Check效用來評估模型品質(zhì)。人類化抗RAGEXT-H2HV結(jié)構(gòu)域的分子建模除所使用的模板不同外，遵循與關(guān)于小鼠XTH2抗體重鏈建模所述相同的程序，利用InsightII建構(gòu)人類化(移植CDR)抗RAGE抗體XT-H2重鏈的分子模型。在此情況中所使用的結(jié)構(gòu)模板為1L7I(抗ErbB2抗體)、1FGV(抗CD18抗體)、UPS(抗組織因子抗體)和1N8Z(抗Her2抗體)?？蚣芑貜?fù)突變-人類化的模型分析和預(yù)測關(guān)于以下特征中的一個或多個特征，比較親代小鼠抗體模型與CDR移植的人類化型式的模型CDR框架接觸、影響CDR構(gòu)象的潛在氫鍵和各個區(qū)域(諸如框架1、框架2、框架3、框架4和所述3個CDR)的RMS差。預(yù)測單獨(dú)以下回復(fù)突變和其組合對于通過CDR移植成功人類化極為重要E46Y、R72A、N77S、N74K、R67K、K76S、A23K、F68A、R38K、A40R。實例17人類化大鼠抗RAGE抗體XT-M4的分子建模大鼠抗鼠科RAGE抗體XT-M4HV結(jié)構(gòu)域的分子建模基于針對蛋白數(shù)據(jù)庫(PDB)序列數(shù)據(jù)庫的BLASTP搜索來選擇用于建立大鼠XT-M4重鏈模型的抗體結(jié)構(gòu)模板。使用InsightII的同源模組(艾斯瑞公司，圣迭戈)，基于6個模板結(jié)構(gòu)1QKZ(抗肽抗體)、1IGT(抗犬淋巴瘤單克隆抗體)、8FAB(抗胂酸對偶氮苯酯抗體)、1MQK(抗細(xì)胞色素C氧化酶抗體)、1H0D(抗血管生長素抗體)和1MHP(抗(xipi抗體)建構(gòu)大鼠XT-M4的分子模型?；诟鞣肿拥腝x距離矩陣來確定模板的結(jié)構(gòu)保守區(qū)(SCR)，并且基于SCR中相應(yīng)原子的最小RMS差來疊加模板結(jié)構(gòu)。將標(biāo)靶蛋白大鼠XT-M4VH的序列與疊加模板蛋白的序列相比對，并且將SCR的原子坐標(biāo)分配給標(biāo)靶蛋白的相應(yīng)殘基。基于標(biāo)耙與各SCR的模板之間的序列相似性程度，對不同SCR使用來自不同模板的坐標(biāo)。通過如同源模組中所實施的搜索循環(huán)或生成循環(huán)法生成未包括在SCR中的環(huán)和可變區(qū)的坐標(biāo)。簡單來說，搜索循環(huán)法掃描將模擬2個SCR之間的區(qū)域的蛋白結(jié)構(gòu)，其是通過將側(cè)接SCR殘基的Ca距離矩陣與從具有相同側(cè)接殘基數(shù)和指定長度的插入的肽區(qū)段的蛋白結(jié)構(gòu)得到的預(yù)先計算的矩陣相比較來進(jìn)行的。評估搜索循環(huán)法的輸出，首先發(fā)現(xiàn)側(cè)接SCR殘基中具有最小RMS差和最大序列一致性的匹配。隨后，評估潛在匹配與標(biāo)靶環(huán)序列之間的序列相似性。在搜索循環(huán)無法發(fā)現(xiàn)最佳匹配的情況下，使用生成循環(huán)法重新生成原子坐標(biāo)。如果模板和標(biāo)耙中的氨基酸殘基一致，那么使氨基酸側(cè)鏈的構(gòu)象與模板中的氨基酸側(cè)鏈構(gòu)象保持相同。另一方面，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的構(gòu)象搜索，并且使與模板和標(biāo)靶中不一致的殘基保持能量最有利的構(gòu)象。為優(yōu)化兩個相鄰SCR(其坐標(biāo)是根據(jù)不同模板而修改)之間以及SCR與環(huán)之間的剪接點(diǎn)，使用同源模組的剪接修復(fù)功能。剪接修復(fù)建立一個用于得出2個SCR之間或SCR與可變區(qū)之間的剪接點(diǎn)處的最佳鍵長和鍵角的分子力學(xué)模擬。最后，使所述模型經(jīng)歷使用最陡下降算法進(jìn)行的能量最小化直到達(dá)到5千卡/(摩爾埃)或500個循環(huán)的最大梯度，并且使其經(jīng)歷共軛梯度算法直到達(dá)到5千卡/(摩爾埃)或2000個循環(huán)的最大梯度。使用同源模組的ProStat/Struct—Check效用來評估模型品質(zhì)。XT-M4輕鏈可變結(jié)構(gòu)域使用1K6Q(抗組織因子抗體)、1WTL、1D5B(抗體AZ-28)禾Q1BOG(抗p24抗體)作為模板，利用Modeler8v2產(chǎn)生XTM4輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)模型。對于各標(biāo)靶，如通過分子概率密度函數(shù)所界定，在100個初始模型中選擇具有最低抑制違反的一個模型以供進(jìn)一步優(yōu)化。為進(jìn)行模型優(yōu)化，使用如DiscoveryStudio1.6(艾斯瑞軟件公司(AccelrysSoftwareInc.))中所實施的Charmm27力場(艾斯瑞軟件公司)禾口GeneralizedBorn虛擬溶劑(implicitsolvation)來進(jìn)行由最陡下降、共軛梯度和公認(rèn)的基礎(chǔ)牛頓-拉斐森方法(AdoptedBasisNewtonRaphsonmethod)組成的能量最小化級聯(lián)，直到滿足0.01的RMS梯度。在能量最小化期間，使用IO個質(zhì)量力的簡諧限制(harmonicconstraint)來約束主鏈原子的移動。人類化抗RAGEXT-M4VH結(jié)構(gòu)域的分子建模除所使用的模板不同外，遵循與關(guān)于大鼠XTM4抗體重鏈建模所述相同的程序，利用InsightII建構(gòu)人類化(移植CDR)抗RAGEXTM4抗體重鏈的分子模型。在此情況中所使用的結(jié)構(gòu)模板為1MHP(抗(xl(31抗體)、1IGT(抗犬淋巴瘤單克隆抗體)、8FAB(抗胂酸對偶氮苯酯抗體)、1MQK(抗細(xì)胞色素C氧化酶抗體)和1H0D(抗血管生成素抗體)。人類化XT-M4輕鏈可變結(jié)構(gòu)域除所使用的模板不同外，遵循與關(guān)于大鼠XTM4抗體輕鏈建模所述相同的程序，使用Modeler8v2建構(gòu)人類化(移植CDR)抗RAGEXTM4抗體輕鏈的分子模型。在此情況中所使用的結(jié)構(gòu)模板為作為模板的1B6D、1FGV(抗CD18抗體)、1UJ3(抗組織因子抗體)和1WTL。框架回復(fù)突變-人類化的模型分析和預(yù)測關(guān)于以下特征中的一個或多個特征，比較親代大鼠抗體模型與CDR移植的人類化型式的模型CDR框架接觸、影響CDR構(gòu)象的潛在氫鍵、各個區(qū)域(諸如框架1、框架2、框架3、框架4和所述3個CDR)的RMS差和計算的殘基-殘基相互作用的能量。將所鑒別的潛在回復(fù)突變單獨(dú)或組合并入使用InsightII或Modeler8v2建構(gòu)的另一輪模型中，并且將所述突變體的模型與親代大鼠抗體模型相比較以在電腦中""'co)評估突變體的適應(yīng)性。預(yù)測單獨(dú)以下回復(fù)突變和其組合對于通過CDR移植成功人類化極為重要重鏈L114M、113V和A88S;輕鏈K45R、L46R、L47M、D70I、G66R、T85D、Y87H、T69S、Y36F、F71Y。實例18具有鼠科XT-H2和大鼠XT-M4抗體的CDR的人類化可變區(qū)通過將鼠科XT-H2和大鼠XT-M4抗體的CDR移植到表9中所示的人類生殖系框架序列上并引入所選回復(fù)突變來制備人類化重鏈可變區(qū)。表9抗體同型人類生殖系一致性XT-H2—VHmGl/KDP陽75VH1;1-4677.50%XT-M4—VHrG2b/KDP-54VH3;3-0777.50%XT-H2—VLmGl/KDPK匿12VK2;A280.00%XT-M4一VLrG2b/KDPK匿9VK1;0264.50%人類化鼠科XT-H2重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別繪示于圖17(SEQIDNO:28-31)和圖18(SEQIDNO:32-35)中。人類化大鼠XT-M4重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別繪示于圖19(SEQIDNO:36-38)和圖20A-20B(SEQIDNO:39-49)中。產(chǎn)生框架序列的生殖系序列和人類化可變區(qū)的特定回復(fù)突變標(biāo)識于表10中。將編碼人類化可變區(qū)的DNA序列亞克隆到含有編碼人類免疫球蛋白恒定區(qū)的序列的表達(dá)載體中，并且使用標(biāo)準(zhǔn)程序在COS細(xì)胞中表達(dá)編碼全長輕鏈和重鏈的DNA序列。將編碼重鏈可變區(qū)的DNA亞克隆到pSMED2hlgGlm—(L234,L237)cDNA載體中，從而產(chǎn)生人類化IgGl抗體重鏈。將編碼輕鏈可變區(qū)的DNA亞克隆到pSMEN2hK載體屮，從而產(chǎn)生人類化K抗體輕鏈。參看圖21。表10人類化v結(jié)構(gòu)域生殖系回復(fù)突變XT-H2—hVH—V2.0DP-75A機(jī)、E46Y、M48I、R71A禾tJT73KXT-H2一hVH—V2.7DP-75XT-H2—hVH—V4.0DP-54FW、VH3、JH4XT-H2—hVH—V4.1DP-54FW、VH3、JH4XT-H2—hVL—V2.0DPK-12I2V、M4L和P48SXT-H2—hVL—V3.0DPK-24XT-H2—hVL—V4.0DPK-9VklXT-H2hVLV4.1DPK-9Vkl、Jk4XT-M4一hVH—V1.0DP-54，VH33-07XT-M4—hVH一Vl.lDP-54,VH33-07XT-M4一hVH一V1.0DP-54,VH33-07XT-M4—hVL—V2.4DPK匿9Vkl02G66RXT-M4—hVL—V2.5DPK-9Vkl02D70IXT-M4—hVL—V2.6DPK-9Vkl02T69SXT-M4—hVL—V2.7DPK-9Vkl02L46RXT-M4_hVL—V2.8DPK-9Vkl02XT-M4—hVL—V2.9DPK-9Vkl02F71Y<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>實例19競爭性ELISA方案通過競爭性酶聯(lián)免疫吸附劑檢定(ELISA)來表征人類化XT-H2和XT-M4抗體以及嵌合XT-M4與人類RAGE-Fc的結(jié)合。為產(chǎn)生競爭劑，將親代大鼠XT-M4抗體生物素化。用1pg/ml人類RAGE-Fc涂布ELISA板整夜。一式兩份，將不同濃度的生物素化XT-M4添加到各孔(0.11-250ng/ml)中，培養(yǎng)，洗滌并用抗生蛋白鏈菌素-HRP檢測。經(jīng)計算的生物素化親代大鼠XT-M4的ED50為5ng/ml。計算當(dāng)與12.5ng/ml生物素化親代XT-M4抗體競爭時嵌合和各人類化XT-M4抗體的IC50值。簡單來說，用1ng/ml人類RAGE-Fc涂布各板整夜。一式兩份，將與12.5ng/ml生物素化親代大鼠XT-M4混合的不同濃度的嵌合抗體或人類化抗體添加到各孔(在9ng/ml到20嗎/ml范圍內(nèi))中。利用抗生蛋白鏈菌素-HRP檢測生物素化親代大鼠XT-M4抗體并計算IC50值。通過競爭性ELISA分析所測定的人類化抗體的IC50值展示于表1中。表11人類化XT-M4抗體的IC50值<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>類似地，通過競爭性ELISA來測定人類化XT-H2抗體與人類RAGE-Fc的結(jié)合的ED50值，并且將其繪示于圖22中。實例20嵌合和人類化XT.M4抗體與其它細(xì)胞表面受體的交叉反應(yīng)性測試人類化XT-M4抗體XT-M4-hVH-V2.0-2m/hVL-V2.10和XT-M4-hVH-V2.0-2m/hVL-V2.U以及嵌合XT-M4與其它類RAGE受體的交叉反應(yīng)性。由于這些受體與RAGE—樣是在細(xì)胞表面表達(dá)并且其與配體的相互作用類似地依賴于電荷，故選擇所述受體。所測試受體為rhVCAM-l、rhICAM-l-Fc、rhTLR4(C末端His標(biāo)簽)、rhNCAM-l、rhB7-Hl-Fc、mLoxl-Fc、hLoxl-Fc禾口hRAGE-Fc(作為陽性對照)。用1pg/ml所列受體蛋白涂布ELISA板整夜。一式兩份，將不同濃度的上文所列的人類化和嵌合XT-M4抗體添加到各孔(0.03-20嗎/ml)中，培養(yǎng)，洗滌并用抗人類IgGHRP檢測。表12展示嵌合和人類化XT-M4抗體與人類和小鼠細(xì)胞表面蛋白的結(jié)合的直接結(jié)合ELISA分析的結(jié)果。所示數(shù)據(jù)為受體與20ng/ml(所測試的最高濃度)抗體之間所檢測的結(jié)合的OD450值。表12<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>結(jié)合可溶人類RAGE的BIACORETM結(jié)合檢定通過BIACORETM捕獲結(jié)合檢定測量嵌合抗體XT-M4和人類化XT-M4抗體與可溶人類RAGE(hRAGE-SA)和可溶鼠科RAGE(mRAGE-SA)的結(jié)合。通過將抗人類Fc抗體以5000RU涂布于流通池1-4中的CM5BIA芯片(pH5.0，7min.)上來進(jìn)行所述檢定。通過使2.0pg/ml的各抗體流過流通池2-4(流通池1用作參考)中的抗Fc抗體來捕獲所述抗體。一式兩份，使?jié)舛葹?00nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、1.25nM和0nM的抗生蛋白鏈菌素標(biāo)記的經(jīng)純化可溶人類RAGE(hRAGE-SA)的溶液流過固定抗體并解離5分鐘，且測定關(guān)于結(jié)合hRAGE-SA的動力學(xué)速率常數(shù)(、和kd)以及締合常數(shù)和解離常數(shù)(&和Kd)。有關(guān)嵌合XT-M4和人類化抗體XT-M4-V10、XT-M4-V11禾BXT-M4-V14結(jié)合hRAGE-SA禾BmRAGE-SA的結(jié)合結(jié)果分別繪示于圖23和24中。實例22前導(dǎo)抗體(leadantibody)XT-H2的物種交叉反應(yīng)性的優(yōu)化通過下述方法工程改造物種的交叉反應(yīng)性隨機(jī)突變XT-H2抗體，產(chǎn)生蛋白變體文庫并且選擇性富集具有導(dǎo)致小鼠-人類RAGE交叉反應(yīng)性的獲得性突變的分子。使用核糖體展示技術(shù)(漢斯(Hanes)等人，2000，酶學(xué)方法(MethodsEnzymol.)，328:404-30)和噬菌體展示技術(shù)(凱菲爾提(McAfferty)等人，1989，自然(Nature)，348:552-4)?；诳贵wXT-H2和HT-M4制備ScFv抗體A.基于XT-H2的ScFv抗體以VH/VL形式或VL/VH形式合成兩個借助于柔性連接子DGGGSGGGGSGGGGSS(SEQIDNO:50)連接的包含XT-H2V區(qū)的ScFv構(gòu)筑體。成形為VL-VH和VH-VL形式的ScFv構(gòu)筑體的序列分別繪示于圖25(SEQIDNO:51)和圖26(SEQIDNO:52)中。B.基于XT-M4的ScFv抗體以VH/VL形式或VL/VH形式合成兩個借助于柔性連接子DGGGSGGGGSGGGGSS(SEQIDNO:50)連接的包含XT-M4V區(qū)的ScFv構(gòu)筑體。成形為VL-VH和VH-VL形式的ScFv構(gòu)筑體的序列分別繪示于圖27(SEQIDNO:54)和圖28(SEQIDNO:53)中。圖29繪示活體外轉(zhuǎn)錄和翻譯的M4和H2構(gòu)筑體的ELISA數(shù)據(jù)。在4'C下，將ELISA板用碳酸氫鹽緩沖液中的人類RAGE-Fc(5Mg/ml)或BSA(200pg/ml)涂布整夜，用PBS+吐溫0.05%洗滌，并且在室溫下用2%奶粉PBS阻斷1小時。在室溫下，將所述板與活體外翻譯的ScFv—起培養(yǎng)2小時。將所述板阻斷并用抗Flag抗體(1/1000稀釋液)、隨后兔抗小鼠HRP(1/1000稀釋液)檢測。數(shù)據(jù)表明VL/VH或VH/VL構(gòu)型的XT-H2禾口XT-M4抗RAGE抗體的可變區(qū)的ScFv構(gòu)筑體可產(chǎn)生特異性結(jié)合人類RAGE的功能性折疊蛋白。使用如通過BIACORETM測定的兩種形式的ScFV的Kd值以測定用于選擇實驗的最佳抗原濃度。C.回收具有改善的小鼠/人類RAGE交叉反應(yīng)性的變體的選擇和篩選策略通過易錯PCR建立變體文庫(格拉姆(Gram)等人，1992，美國國家科學(xué)院院刊(PNAS)89:3576-80)。此誘變策略在ScFv基因的全長內(nèi)引入隨機(jī)突變。隨后，使用已確立的程序(例如，漢斯等人，2000,酶學(xué)方法，328:404-30)在活體外轉(zhuǎn)錄并翻譯所述文庫。使所述文庫經(jīng)歷第l輪關(guān)于人類RAGE-Fc的選擇，洗掉未結(jié)合的核糖體復(fù)合物，并洗脫抗原結(jié)合的核糖體復(fù)合物?；厥誖NA，通過RT-PCR將其轉(zhuǎn)化成cDNA并使其經(jīng)歷第2輪關(guān)于小鼠RAGE-Fc的選擇。所述交替選擇策略優(yōu)先富集結(jié)合人類和小鼠RAGE-Fc的克隆。隨后，使此選擇的產(chǎn)物再經(jīng)歷2次易錯PCR。接著，使所產(chǎn)生的文庫經(jīng)歷第3輪和輪分別有關(guān)人類RAGE-Fc和小鼠RAGE-Fc的選擇。視需要重復(fù)此過程。將來自各選擇步驟的RNA產(chǎn)物池轉(zhuǎn)化成cDNA并將其克隆到蛋白表達(dá)載體pWRIL-l中以評估變體ScFv的物種交叉反應(yīng)性。另外，對多樣性池進(jìn)行測序以評估多樣性，從而確定選擇是否接近具有物種交叉反應(yīng)性的優(yōu)勢克隆。實例23前導(dǎo)抗體XT-M4的親和力突變經(jīng)改善的親和力轉(zhuǎn)化為降低劑量或劑量頻率和/或增加效用的潛在益處。使用與隨機(jī)易錯PCR誘變偶聯(lián)的針對VH-CDR3的耙向誘變的組合方法，通過親和力突變來改善對hRAGE的親和力(格拉姆等人，1992，美國國家科學(xué)院院刊89:3576-80)。這產(chǎn)生能回收對人類RAGE具有改善的親和力同時仍保持與小鼠RAGE-Fc的物種交叉反應(yīng)性的分子的抗體變體文庫。使用核糖體展示技術(shù)(漢斯等人，1997，同上文)和噬菌體展示技術(shù)(凱菲爾提等人，1989，同上文)。圖30繪示pWRIL-l中VL-VH形式的XT-M4和XT-H2ScFv構(gòu)筑體的ELISA結(jié)合數(shù)據(jù)，所述構(gòu)筑體在大腸桿菌中表達(dá)為可溶蛋白并針對關(guān)于人類RAGE-Fc和BSA的結(jié)合進(jìn)行測試。ActRIIb表示由與陰性對照相同的載體表達(dá)的不結(jié)合蛋白。在4'C下，將ELISA板用碳酸氫鹽緩沖液中的人類RAGE-Fc(5|ag/ml)或BSA(200pg/ml)涂布整夜，用PBS+吐溫0.05呢洗潘，并且在室溫下用2%奶粉PBS阻斷1小時。使用標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行20ml大腸桿菌培養(yǎng)物的周質(zhì)制劑。未經(jīng)純化的ScFv抗體的周質(zhì)制劑的最終體積為1ml,在室溫下將其中50pl與利用2%奶粉PBS以1/1000稀釋到100pl總體積的抗組氨酸抗體一起預(yù)培養(yǎng)1小時。將交聯(lián)周質(zhì)制劑添加到ELISA板中并在室溫下再培養(yǎng)2小時。將板用PBS+0.05柳土溫洗滌2次并用PBS洗滌2次，且將其與以1/1000稀釋于2%奶粉PBS中的兔抗小鼠HRP—起培養(yǎng)。如先前所述洗滌所述板，并使用標(biāo)準(zhǔn)TMB試劑檢測結(jié)合。數(shù)據(jù)表明，呈VL/VH構(gòu)型的XT-M4和XT-H2抗體的ScFv構(gòu)筑體可在大腸桿菌中產(chǎn)生特異性結(jié)合人類RAGE的功能性折疊可溶蛋白。使用如通過BIACORETM測定的兩種形式的ScFV的起始Kd值以測定用于親和選擇的最佳抗原濃度。實例24用于回收具有改善的對hRAGE-Fc的親和力同時保持物種交叉反應(yīng)性的變體的選擇和篩選策略通過使用PCR進(jìn)行的XT-M4的VH-CDR3的摻加示蹤劑的誘變建立變體文庫。圖31示意性說明如何使用PCR將摻加示蹤劑的突變引入XT-M4的CDR中。(1)設(shè)計在CDR環(huán)的長度內(nèi)載有多樣性區(qū)的摻加示蹤劑的寡核苷酸并通過同源區(qū)與FR3和FR4中的標(biāo)靶V基因連在一起。(2)將所述寡核苷酸用于具有特定引物的PCR反應(yīng)中，所述引物退火與標(biāo)靶V基因5'端黏合并與FR1區(qū)一致。圖32繪示XT-M4VL-VHScFv構(gòu)筑體的C末端的核苷酸序列(SEQIDNO:56)。VH-CDR3加下劃線。還繪示在各突變位點(diǎn)處具有標(biāo)識用于在所述位點(diǎn)處突變的摻雜示蹤劑的比率的數(shù)字的兩個摻雜示蹤劑的寡核苷酸(SEQIDN0:57-58)。還標(biāo)識出具有與所述數(shù)字對應(yīng)的摻雜示蹤劑的比率的核苷酸組成。將XT-M4-VHCDR3摻雜的PCR產(chǎn)物作為鄰7片段克隆到核糖體展示載體pWRIL-3中以產(chǎn)生文庫。使用核糖體展示，針對人類生物素化RAGE對此文庫加以選擇(漢斯(Hanes)和普拉克孫(Pluckthun)，2000)。由于生物素標(biāo)記的抗原允許進(jìn)行基于溶液的選擇，所述選擇使得能更好的對所述過程進(jìn)行動力學(xué)控制并且增加優(yōu)先富集較高親和力克隆的可能性，所以使用此抗原。以平衡模式以相對于起始親和力降低的抗原濃度或者以動力學(xué)模式(其中特定選擇改善的解離速率以使用在以經(jīng)驗測定的時間范圍與未經(jīng)標(biāo)記的抗原競爭)進(jìn)行選擇。將未結(jié)合的核糖體復(fù)合物洗去，洗脫抗原結(jié)合的核糖體復(fù)合物，回收RNA,通過RT-PCR將其轉(zhuǎn)化為cDNA并且進(jìn)行關(guān)于生物素化小鼠RAGE-Fc的第2輪選擇以保持物種交叉反應(yīng)性。隨后，使來自此選擇步驟的含有在VH-CDR3中具有突變的ScFv變體的產(chǎn)物經(jīng)歷2步驟的誘變循環(huán)。此誘變步驟涉及使用易錯PCR產(chǎn)生隨機(jī)突變。接著，使所產(chǎn)生的文庫經(jīng)歷3輪針對低10倍的抗原濃度的生物素化人類RAGE-Fc的選擇。視需要重復(fù)此過程。將來自各選擇步驟的RNA產(chǎn)物池轉(zhuǎn)化成cDNA且將其克隆到蛋白表達(dá)載體pWRIL-l中以歸類變體ScFv的親和力和物種交叉反應(yīng)性。另外，對多樣性池進(jìn)行測序以評估多樣性，從而確定選擇是否接近優(yōu)勢克隆。實例25使用噬菌體展示進(jìn)行的XT-M4的親和力突變將VH-CDR3摻雜文庫克隆到圖34中所示的噬菌體展示載體pWRIL-l中以供關(guān)于生物素化hRAGE進(jìn)行選擇。由于生物素標(biāo)記的抗原與親和力驅(qū)動的溶液中的選擇較為相容，所以使用此形式。以平衡模式以相對于起始親和力降低的抗原濃度或者以動力學(xué)模式(其中特定選擇改善的解離速率以使用隨經(jīng)驗測定的時間范圍與未經(jīng)標(biāo)記的抗原競爭)進(jìn)行選擇。使用有關(guān)噬菌體展示的標(biāo)準(zhǔn)程序。ScFv可二聚化，這使得選擇和篩選程序變復(fù)雜。二聚化ScFv潛在地展示基于親合力的結(jié)合，并且此增加的結(jié)合活性可支配選擇。所述ScFv二聚化能力的改善而非親和力的任何內(nèi)在改善與最終治療性抗體(其通常為IgG)具有極少關(guān)聯(lián)。為避免由二聚化能力改變所產(chǎn)生的人工產(chǎn)物，使用Fab抗體形式，因為其通常不會二聚化。已將XT-M4重排為Fab抗體并將其克隆到新的噬菌體展示載體pWRIL-6中。此載體具有跨VH和VL區(qū)并且不會在人類生殖系V基因中進(jìn)行頻繁切割的限制性位點(diǎn)。這些限制性位點(diǎn)可用于VL和VH譜系的改組和組合組裝。在一種策略中，將VH-CDR3和VL-CDR3摻雜文庫都組合地組裝到如圖34所示的Fab展示載體中，并且針對親和力的改善加以選擇。實例26嵌合抗體XT-M4的物理表征通過高效液相色譜(HPLC)/質(zhì)譜)(MS)肽定位和利用在線MS檢測的亞單元分析進(jìn)行的初步表征已證實，如所預(yù)期，氨基酸序列是來自嵌合XT-M4DNA序列。這些MS數(shù)據(jù)還表明，Asn，SerThr處的預(yù)期N連接寡糖序列一致位點(diǎn)已被占據(jù)且兩種主要物質(zhì)為分別含有0個或1個末端半乳糖殘基的復(fù)合N連接二天線核心巖藻糖基化聚糖。除位于分子Fc區(qū)的所預(yù)期的N連接寡糖外，在嵌合XT-M4重鏈的CDR2區(qū)中的序列一致位點(diǎn)(Asn52ASnSer)處也觀察到N連接寡糖。主要在僅一個重鏈上發(fā)現(xiàn)額外N連接寡糖，且其包含如通過CEX-HPLC分析所測定的約38%的分子(可能存在無法通過一級結(jié)構(gòu)區(qū)分的其它酸性物質(zhì)，其可構(gòu)成酸性物質(zhì)的總百分比)。主要物質(zhì)為具有兩個唾液酸的核心巖藻糖基化的二天線結(jié)構(gòu)。使用吸收率，通過測量A柳計算濃度。經(jīng)計算，嵌合XT-M4的理論吸收率為1.35mLmg—1cm—、如通過非還原SDS-PAGE所測定的嵌合XT-M4的表觀分子量為約200kDa?？贵w遷移比由其序列所預(yù)期的遷移慢。已在目前所分析的所有重組抗體中觀察到此現(xiàn)象。在還原條件下，嵌合XT-M4具有以約50kDa遷移的單一重鏈譜帶和以約25kDa遷移的單一輕鏈。還存在一個恰在所述重鏈譜帶上方遷移的額外譜帶。通過自動埃德曼降解(automatedEdmandegradation)來表征此譜帶并且測定其具有與嵌合XT-M4的重鏈對應(yīng)的NH2末端。這些結(jié)果連同通過SDS-PAGE觀察到的分子量增加表明，所述額外譜帶與在CDR2區(qū)中具有額外N連接寡糖的重鏈相符?；诎被嵝蛄兴A(yù)測的嵌合XT-M4的等電點(diǎn)(pl)為7.2(重鏈中無COOH末端Lys)。IEF將嵌合XT-M4解析為在約7.4-8.3的pl范圍內(nèi)遷移的約10個譜帶，其中一個優(yōu)勢遷移譜帶以約7.8的pl遷移。通過毛細(xì)管電泳等電聚焦所測定的pl為約7.7。通過陽離子交換高效液相色譜(CEX-HPLC)進(jìn)行的研發(fā)材料的分析進(jìn)一步提供對具有不同分子電荷的嵌合XT-M4物質(zhì)的解析。大部分所觀察的電荷不均一性很可能是由在位于重鏈CDR2區(qū)中的額外N連接寡糖上所發(fā)現(xiàn)的唾液酸的作用所引起。所觀察的少部分電荷不均一性可歸因于COOH末端賴氨酸的不均一性。實例27糖基化位點(diǎn)的去除如圖36中所示，如通過直接結(jié)合hRAGE-Fc的ELISA分析所測定，將抗體XT-M4重鏈可變區(qū)中第52位(根據(jù)卡貝特編號)的天冬酰胺(N)轉(zhuǎn)化為天冬氨酸(D)的突變改善XT-M4抗體與人類RAGE的結(jié)合。N52D突變是在抗體XT-M4重鏈可變區(qū)的CDR2中。實例28嵌合抗RAGE抗體功效的活體內(nèi)臨床前檢定A.藥物動力學(xué)(PK)針對嵌合XT-M4評估在對雄性BALB/c小鼠(n=3)單次靜脈內(nèi)(IV)給與5mg/kg后嵌合抗體嵌合XT-M4的血清濃度。用IgGELISA測量隨時間的抗體的血清濃度。嵌合XT-M4的平均血清暴露為(23,235ghr/mL)，并且半衰期為約1周(152小時)。參看圖37。實例29記憶障礙的CFC模型利用情境式恐懼制約(contextualfearconditioning,CFC)范例來檢查投與特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的嵌合大鼠抗體XT-M4對因淀粉樣蛋白沉積而引起的認(rèn)知功能減弱的動物模型的認(rèn)知效能的作用。Tg2576模型小鼠發(fā)展淀粉樣斑塊達(dá)18個月并且在此之前，在6月大時發(fā)展海馬CA1和齒狀回中的LTP障礙、在經(jīng)修飾水迷宮中的空間記憶障礙、突觸可塑性削弱和A卩聚集物和寡聚物增多。A(3誘發(fā)無斑塊的年輕Tg2576小鼠的情境式記憶障礙。情境式恐懼制約(一種海馬依賴性學(xué)習(xí)和記憶測試)是在具有A(3形成和淀粉樣蛋白沉積的Tg2576轉(zhuǎn)基因人類APP小鼠模型中進(jìn)行。情境式學(xué)習(xí)涉及將厭惡刺激(足底電擊)與發(fā)生刺激的特制罐籠環(huán)境(情境)相關(guān)聯(lián)。有關(guān)制約的記憶表現(xiàn)為在不存在電擊的情況下的情境依賴性僵硬。通過將情境與簡短的足底電擊配對而將小鼠制約于操作室中。訓(xùn)練是由在操作室中進(jìn)行的5分鐘活動組成，在此期間，動物接收2次輕微的足底電擊。當(dāng)將動物再引入其先前已接受電擊的環(huán)境中約24小時后，發(fā)生記憶測試。記錄在記憶測試期間的活動水平并且通過對整個治療組的ANOVA來分析處于"僵硬"狀態(tài)所花費(fèi)的時間，將其表示為時間總量的百分?jǐn)?shù)。活動水平的降低表明關(guān)于厭惡事件的完整記憶。與非轉(zhuǎn)基因的同窩仔畜相比，經(jīng)測定Tg2576在14-16周齡之間發(fā)展情境式記憶障礙并且在20周齡時觀察到完全障礙。投與抗體將對鼠科RAGE具特異性的嵌合XT-M4抗體稀釋于PBS中并在第1天、第4天、第7天和第IO天時將單次劑量(10mg/kg)經(jīng)腹膜內(nèi)(ip)投與20周齡的Tg2576和年齡相配的非轉(zhuǎn)基因(野生型)同窩仔畜。投與中和(無活性)抗體作為對照。小鼠的訓(xùn)練是在第ll天(即投與第4劑抗體后24小時)開始，并且在第12天時進(jìn)行測試。在第12天的測試期間檢查記憶評分(僵硬增加)。通過相對于PBS治療的轉(zhuǎn)基因動物證實記憶障礙的逆轉(zhuǎn)來測定功效。通過利用在0.1到30mg/kg范圍內(nèi)的劑量產(chǎn)生劑量-反應(yīng)曲線來測定最小有效劑量(MED)。通過時程分析并且針對認(rèn)知的改善評估訓(xùn)練前時間間隔的延長來測定在以已確立的MED單次免疫后功效的持續(xù)時間。嵌合XT-M4抗體(K，IgGl)呈現(xiàn)情境式記憶障礙的顯著逆轉(zhuǎn)。相比之下，投與不相關(guān)抗體和PBS對照的小鼠對Tg2576小鼠或野生型同窩仔畜的CFC未呈現(xiàn)作用。數(shù)據(jù)表明，投與針對鼠科RGE的嵌合單克隆XT-M4抗體對于改善阿茲海默氏病的APP轉(zhuǎn)基因模型的認(rèn)知有效。(參看圖38)材料與方法小鼠用于所述研究中的小鼠為表達(dá)人類APP蛋白的雜合雄性轉(zhuǎn)基因Tg257618小鼠。通過PCR確定基因型，并排除視網(wǎng)膜變性(Rd)突變的所有純合動物。背景株是由C57BI6和129SJL雜交株組成。對20周齡的小鼠(11=8-12/基因型/年齡)進(jìn)行情境式恐懼制約研究。測試設(shè)備在6個由鋁制側(cè)壁和樹脂玻璃天花板、門和后墻構(gòu)建的30x24x21cm操作室(MedAssociates公司，佛蒙特州圣艾班斯(St.Albans,VT〉)中進(jìn)行情境式恐懼制約(CFC)。各室裝備有由36個不銹鋼桿組成的地板，可通過所述桿投與足底電擊。此外，各室還具有2個刺激燈、一個照明燈和一個螺線管。照明、足底電擊(US)和螺線管(CS)都是由PC運(yùn)行的MED-PC軟件控制。所述各室位于存在紅光的隔音間中。情境式恐懼制約在第11天(即小鼠接收其第4劑嵌合XT-M4抗RAGE抗體后的一天)時，開始Tg2576小鼠或其年齡相配的野生型同窩仔畜的訓(xùn)練。訓(xùn)練是由以下步驟組成將小鼠放入操作室中，照亮剌激燈和照明燈，且使其探査2分鐘。2分鐘結(jié)束后，提供聽覺暗示(經(jīng)由螺線管以2Hz彈響；CS)達(dá)15秒。在CS最后2秒時投與足底電擊(US;1.5mAmp)并且與CS提供一起終止。重復(fù)此程序，并在第二次足底電擊后30秒，將小鼠從操作室中移出且使其回到其飼養(yǎng)籠中。訓(xùn)練后20小時，使動物回到先前對其進(jìn)行訓(xùn)練的室中。隨后，通過使用以10秒間隔進(jìn)行時間取樣持續(xù)5分鐘(30個樣本點(diǎn))的實驗來記錄在與動物接收電擊(情境)相同的環(huán)境中的僵硬行為。僵硬是定義為缺乏除需耍呼吸外的其它動作。5分鐘結(jié)束時，使小鼠回到其飼養(yǎng)籠中。在情境中測試所有小鼠后(在起始情境測試后約60分鐘)，收集有關(guān)新穎和暗示條件下關(guān)于僵硬的資料。新穎環(huán)境是由改變操作室組成，包括從右后角到左前角的不透明樹脂玻璃隔板、樹脂玻璃地板以及減少的照明(僅照明燈)。將小鼠放入新穎情境中，并使用時間取樣來收集僵硬得分達(dá)3分鐘(18個樣本點(diǎn))。在3分鐘結(jié)束時，提供聽覺彈響刺激(CS)達(dá)3分鐘，在此期間再次對僵硬評分(18個樣本點(diǎn))。將各動物的僵硬得分轉(zhuǎn)化為測試各部分的僵硬百分比。通過用在情境中觀察到的僵硬百分比減去新穎條件下(基本活動的量度)的僵硬百分比來獲得各動物的情境記憶(情境式記憶)。抗體治療將嵌合XT-M4抗體稀釋到PBSU0mg/kg)中，并在第1天、第4天、第7天和第10天以及第11天訓(xùn)練和第12天測試時，對20周齡的Tg2576小鼠或其年齡相配的野生型同窩仔畜以單次劑量經(jīng)腹膜內(nèi)投與。數(shù)據(jù)分析使用兩因子ANOVA和使用SAS統(tǒng)計軟件(SASInstitute公司)進(jìn)行的事后分析菲舍爾氏成對比較(posthocFischer'spairwisecomparison)來分析情境式記憶。所有數(shù)據(jù)都是以平均值士SEM形式來提供。權(quán)利要求1.一種治療患有以Aβ淀粉樣沉積物為特征的疾病或病癥的個體的方法，其包含對所述個體投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE(晚期糖基化終產(chǎn)物受體)且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述個體為人類個體。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述疾病或病癥是以腦中AP淀粉樣沉積物為特征。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述疾病或病癥為阿茲海默氏病(Alzheimer'sdisease)。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述疾病或病癥為臨床前阿茲海默氏病。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述抗體(a)與選自由XT-Hl、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體競爭與RAGE的結(jié)合；(b)與結(jié)合選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的RAGE的表位結(jié)合；(c)包含選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的輕鏈或重鏈的一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);或(d)為根據(jù)(a)、(b)或(c)的抗體的RAGE結(jié)合片段。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗體或RAGE結(jié)合抗體片段包含輕鏈可變區(qū)，其包含XT-M4輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:17)的CDR;重鏈可變區(qū)，其包含XT-M4重鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:16)的CDR:人類K輕鏈恒定區(qū)；和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述抗體或其RAGE結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，其具有XT-M4輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO:17);重鏈可變區(qū)，其具有XT-M4重鏈可變區(qū)序列的氨基酸序列(SEQIDNO:16);人類K輕鏈恒定區(qū)；和和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述嵌合抗體或人類化抗體包含人類恒定區(qū)或由其衍生的恒定區(qū)。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其包含投與所述抗體或其RAGE結(jié)合片段與一種或多種可用于治療阿茲海默氏病的藥劑組合，以由此引起協(xié)同治療作用。12.—種抑制或減少個體A(3淀粉樣沉積物積累的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述個體為人類個體。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其包含抑制或減少腦中A卩淀粉樣沉積物積累。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述腦中AP淀粉樣沉積物積累與阿茲海默氏病相關(guān)。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述腦中A(3淀粉樣沉積物積累與臨床前阿茲海默氏病相關(guān)。17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抗體(a)與選自由XT-Hl、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體競爭與RAGE的結(jié)合；(b)與結(jié)合選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的RAGE的表位結(jié)合；(c)包含選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的輕鏈或重鏈的一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);或(d)為根據(jù)(a)、(b)或(c)的抗體的RAGE結(jié)合片段。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述抗體或RAGE結(jié)合抗體片段包含輕鏈可變區(qū)，其包含XT-M4輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:17)的CDR;重鏈可變區(qū)，其包含XT-M4重鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:16)的CDR;人類K輕鏈恒定區(qū)；和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述抗體或其RAGE結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，其具有XT-M4輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO:17);重鏈可變區(qū)，其具有XT-M4重鏈可變區(qū)序列的氨基酸序列(SEQIDNO:16);人類K輕鏈恒定區(qū)；和和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。20.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述嵌合抗體或人類化抗體包含人類恒定區(qū)或由其衍生的恒定區(qū)。22.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其包含投與所述抗體或其RAGE結(jié)合片段與一種或多種可用于抑制或減少AP淀粉樣沉積物的藥劑組合，以由此引起協(xié)同作用。23.—種抑制或減少個體神經(jīng)退化的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述個體為人類個體。25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其包含抑制或減少腦中神經(jīng)退化。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述神經(jīng)退化與阿茲海默氏病相關(guān)。27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述神經(jīng)退化與臨床前阿茲海默氏病相關(guān)。28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗體(a)與選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體競爭與RAGE的結(jié)合；(b)與結(jié)合選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的RAGE的表位結(jié)合(c)包含選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的輕鏈或重鏈的一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);或(d)為根據(jù)(a)、(b)或(c)的抗體的RAGE結(jié)合片段。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述抗體或RAGE結(jié)合抗體片段包含輕鏈可變區(qū)'其包含XT-M4輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:17)的CDR;重鏈可變區(qū)，其包含XT-M4重鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:16)的CDR;人類K輕鏈恒定區(qū)；和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述抗體或其RAGE結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，其具有XT-M4輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO:17);重鏈可變區(qū)，其具有XT-M4重鏈可變區(qū)序列的氨基酸序列(SEQIDNO:16);人類K輕鏈恒定區(qū)；和和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。31.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述嵌合抗體或人類化抗體包含人類恒定區(qū)或由其衍生的恒定區(qū)。33.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其包含投與所述抗體或其RAGE結(jié)合片段與一種或多種可用于抑制或減少神經(jīng)退化的藥劑組合，以由此引起協(xié)同作用。34.—種抑制或減少個體認(rèn)知能力下降或改善認(rèn)知能力的方法，其包含對所述個體投與有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述個體為人類個體。36.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述認(rèn)知能力下降與阿茲海默氏病相關(guān)。37.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述認(rèn)知能力下降與臨床前阿茲海默氏病相關(guān)。38.根據(jù)權(quán)利耍求34所述的方法，其中所述抗體(a)與選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體競爭與RAGE的結(jié)合；(b)與結(jié)合選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的RAGE的表位結(jié)合；(c)包含選自由XT-H1、XT-H2、XT-H3、XT-H5、XT-H7和XT-M4組成的群組的抗體的輕鏈或重鏈的一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);或(d)為根據(jù)(a)、(b)或(c)的抗體的RAGE結(jié)合片段。39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗體或RAGE結(jié)合抗體片段包含輕鏈可變區(qū)，其包含XT-M4輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:17)的CDR;重鏈可變區(qū)，其包含XT-M4重鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:16)的CDR;人類K輕鏈恒定區(qū)；和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗體或其RAGE結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，其具有XT-M4輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO:17);重鏈可變區(qū)，其具有XT-M4重鏈可變區(qū)序列的氨基酸序列(SEQIDNO:16);人類K輕鏈恒定區(qū)；和和人類IgGl重鏈恒定區(qū)。41.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述嵌合抗體或人類化抗體包含人類恒定區(qū)或由其衍生的恒定區(qū)。43.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其包含投與所述抗體或其RAGE結(jié)合片段與一種或多種可用于抑制或減少認(rèn)知能力下降或改善認(rèn)知能力的藥劑組合，以由此引起協(xié)同作用。全文摘要本發(fā)明提供一種治療以Aβ淀粉樣沉積物為特征的疾病或病癥的方法，其包含對個體投與治療有效量的特異性結(jié)合RAGE且抑制RAGE結(jié)合搭配物的結(jié)合的抗體。文檔編號C07K16/18GK101448857SQ200780018082公開日2009年6月3日申請日期2007年3月21日優(yōu)先權(quán)日2006年3月21日發(fā)明者利烏米拉·奇斯蒂亞科瓦,安杰拉·維多姆,斯里庫爾瑪·拉曼·科丹加蒂,杰克·史蒂文·雅各布森,譚向陽申請人:惠氏公司