專利名稱::培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的方法和用于培養(yǎng)其的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及液體培養(yǎng)雙孢蘑菇C4g"n'o^W^on^)菌絲體的方法。
背景技術(shù):
:雙孢蘑菇是一種屬于蘑菇目蘑菇科(AgaricalesAgaricaceae)的蘑菇。作為培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的常規(guī)方法,已知固體培養(yǎng)方法和液體培養(yǎng)方法。固體培養(yǎng)方法具有這樣的缺點(diǎn),即培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng),污染可能性高,且難于在培養(yǎng)結(jié)束后自動(dòng)化僅重獲菌絲體的操作。與固體培養(yǎng)方法相比,雙孢蘑菇的液體培養(yǎng)方法具有低污染可能性、和在相對(duì)緊湊的空間內(nèi)短期大規(guī)模培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。Himfeid等寫的論文(真菌學(xué)(Mycology)44:605-611,1952)公開(kāi)了在搖動(dòng)和供氧條件下液體培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的方法。另外,F(xiàn)raser等寫的論文(蘑菇科學(xué)(MushroomSci.)3:190-200,1956)描述了酵母提取物和酪蛋白促進(jìn)雙孢蘑菇菌絲體的生長(zhǎng)。而且,韓國(guó)專利公布號(hào)1997-0027295公開(kāi)了利用選自由糖、麥芽糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽提取物和淀粉糖漿組成的組中的至少一種作為碳源液體培養(yǎng)擔(dān)子菌綱(Basidiomycetes)的方法。然而,該液體培養(yǎng)方法具有這樣的缺點(diǎn),即培養(yǎng)時(shí)間相對(duì)長(zhǎng),且由于使用單糖和二糖,所以成本高,且由此不適合于大規(guī)模培養(yǎng)
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問(wèn)題如在上述現(xiàn)有技術(shù)中所見(jiàn),仍存在對(duì)開(kāi)發(fā)利用這樣的培養(yǎng)基成分培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體方法的需要,所述培養(yǎng)基成分是便宜的,以適合于大規(guī)模培養(yǎng),并且支持菌絲體的高度生長(zhǎng),從而減少培養(yǎng)時(shí)間和由此減少污染可能性。技術(shù)方案本發(fā)明提供有效培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的方法。本發(fā)明還提供用于培養(yǎng)雙孢蘑燕菌絲體的培養(yǎng)基。按照本發(fā)明的方面,提供了培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的方法,其包括在包含甘蔗提取物的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)雙孢蘑燕菌絲體或其孢子。甘蔗提取物可以具有10-30g/1的濃度。當(dāng)甘蔗提取物的濃度低于10g/1時(shí),雙孢蘑菇菌絲體不能充分生長(zhǎng)。當(dāng)甘蔗提取物的濃度高于30g/l時(shí),滲透壓高并且過(guò)程不是成本經(jīng)濟(jì)型的。因此,濃度優(yōu)選地在10-30g/1的范圍內(nèi)。甘蔗提取物主要用作碳源和生長(zhǎng)因子來(lái)源。術(shù)語(yǔ)"甘蔗提取物"指通過(guò)提取甘蔗汁和再濃縮和結(jié)晶所述汁而制備的非精制的糖提取物。能夠直接制備或商購(gòu)甘蔗提取物。除甘蔗提取物外,所述培養(yǎng)基還可以包括營(yíng)養(yǎng)物,諸如氮源、磷酸、痕量元素等。氮源可以是有機(jī)氮或無(wú)機(jī)氮,優(yōu)選地是大豆胨(soytone)和硝酸鈉,并且更優(yōu)選地是硝酸鈉。硝酸鈉可以在培養(yǎng)基中具有1-10g/1的濃度。硝酸鈉顯示出被雙孢蘑菇菌絲體的高吸收效率,很便宜,并維持培養(yǎng)基的pH恒定,而當(dāng)使用其他基于銨的氮源時(shí),培養(yǎng)基的pH改變。當(dāng)硝酸鈉的濃度低于1g/1時(shí),雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)所需的氮源不足。當(dāng)硝酸鈉的濃度高于10g/l時(shí),沒(méi)有很大地影響雙孢蘑菇菌絲體的生長(zhǎng)。因此,優(yōu)選地,在培養(yǎng)基中使用1g/1-10g/1的硝酸鈉。所述培養(yǎng)基可以包括濃度為1-10g/1的酵母提取物。培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體可以在培養(yǎng)基初始pH6.0-6.5,培養(yǎng)溫度25-28°C,同時(shí)以150-250rpm的攪動(dòng)速率攪動(dòng)下進(jìn)行。可以在接種前利用攪拌器分散雙孢蘑菇菌絲體。當(dāng)培養(yǎng)接種物時(shí),隨著菌絲體的生長(zhǎng)形成大的團(tuán)塊,由此難于供氧。因此,為了防止氧氣供應(yīng)的限制,接種前需要將菌絲體分散為小粒子。雙孢蘑菇菌絲體培養(yǎng)可以進(jìn)行到直到獲得需要量的菌絲體。例如,培養(yǎng)期通常可以是3-10天,和優(yōu)選地是3-6天。按照本發(fā)明的實(shí)施方案,需要3-6天的培養(yǎng)期,從而獲得雙孢蘑燕菌絲體的理想最大產(chǎn)量。因此,與現(xiàn)有技術(shù)中獲得雙孢蘑菇菌絲體理想最大產(chǎn)量需要14-15天的培養(yǎng)期相比,按照本發(fā)明的雙孢蘑菇菌絲體的培養(yǎng)期能夠縮短許多。培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體還可以包括在液體培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)雙孢蘑燕菌絲體或其孢子,所述液體培養(yǎng)基包括15-25g/了的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基、1-10g/1的酵母提取物、2-5g/1麥芽提取物、和2-5g/1的大豆胨。預(yù)培養(yǎng)指在進(jìn)行雙孢蘑菇菌絲體的主培養(yǎng)前為了從原始菌株獲得蘑菇種子培養(yǎng)物的初步培養(yǎng)。原始菌株指從中起源種子培養(yǎng)物的菌株。種子培養(yǎng)物指理想菌株,即原始菌株的純培養(yǎng),且接種物指為了增殖被接種到培養(yǎng)基中的種子培養(yǎng)物。預(yù)培養(yǎng)可以在初始pH6.0-6.5,培養(yǎng)溫度25-28°C,并且同時(shí)以150-250rpm的攪動(dòng)速率攪動(dòng)下進(jìn)行。獲得的菌絲體能夠利用攪拌器分散。在預(yù)培養(yǎng)過(guò)程中,由于菌絲體的生長(zhǎng)可以形成大團(tuán)塊,并由此限制氧氣的供應(yīng)。因此,為了防止氧氣供應(yīng)的限制,需要將菌絲體分散為小粒子。預(yù)培養(yǎng)能夠進(jìn)行到直到獲得增殖所需的種子培養(yǎng)物的量,并且預(yù)培養(yǎng)通常需要3-4天。本發(fā)明還提供用于培養(yǎng)雙孢蘑燕菌絲體的培養(yǎng)基。所述培養(yǎng)基包括甘蔗提取物,并且可以優(yōu)選地包括濃度為10-30g/l的甘蔗提取物。所述培養(yǎng)基還可以包括硝酸鈉作為氮源。優(yōu)選地,所述培養(yǎng)基可以包括濃度為1-10g/1的硝酸鈉。另外,所述培養(yǎng)基還可以包括濃度為1-10g/1的酵母提取物。該培養(yǎng)基可以具有6.0-6.5的初始pH值。按照本發(fā)明實(shí)施方案的培養(yǎng)基可以優(yōu)選地包括濃度為15-25g/l的甘蔗提取物和濃度為5-10g/l硝酸鈉,并且更優(yōu)選地,還包括濃度為5-10g/1的酵母提取物。本發(fā)明還提供用于預(yù)培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體或其孢子的培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基包括15-25g/1的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基、1-10g/1的酵母提取物、2-5g/l的麥芽提取物、和2-5g/l的大豆胨。附圖簡(jiǎn)述通過(guò)參考附圖詳細(xì)描述本發(fā)明的示范性實(shí)施方案,本發(fā)明的以上和其他特征和優(yōu)點(diǎn)將變得更加清楚,在所述附圖中圖1是按照本發(fā)明實(shí)施方案的雙孢蘑菇菌絲體電子顯微鏡圖像;圖2顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)溫度相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng);圖3顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與初始pH相關(guān)的雙孢蘑燕菌絲體生長(zhǎng);圖4顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)期相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng);圖5顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)基中碳源類型相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng);圖6顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與作為碳源使用的甘蔗提取物濃度相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng);圖7顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)基中氮源類型相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng);圖8顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與作為氮源使用的硝酸鈉濃度相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng);圖9顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與生物反應(yīng)器攪動(dòng)速率相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。最佳實(shí)施方式在下文中,將參考下列實(shí)施例更明確地描述本發(fā)明。下列實(shí)施例是為了舉例說(shuō)明的目的,而非意欲限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例l:分離菌株和制備接種物通過(guò)組織培養(yǎng)獲得雙孢蘑燕菌株,并且將獲得的菌株在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上在25t:培養(yǎng)3周,并且然后將獲得雙孢蘑菇菌絲體保存在4°C。圖1是按照本發(fā)明實(shí)施方案的雙孢蘑菇菌絲體電子顯微鏡圖像。為了利用固體培養(yǎng)制備接種物,從保存在冰箱中的PDA平板培養(yǎng)基的中心部分分離菌絲體,并接種在固體培養(yǎng)基中,并然后在溫度為25。C的恒溫箱中培養(yǎng),從而獲得接種物。當(dāng)通過(guò)液體培養(yǎng)從雙孢蘑菇菌絲體制備接種物時(shí),在121'C,高壓滅菌在500ml錐形瓶中的100mlPDBYMS培養(yǎng)基15分鐘,所述PDBYMS培養(yǎng)基包括20g/1馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基(PDB)、10g/l酵母提取物、5g/l麥芽提取物和5g/l大豆胨,并且然后將菌絲體接種到PDBYMS培養(yǎng)基中,并在200rpm攪動(dòng)速率下培養(yǎng)。在下列實(shí)施例中,除特別指明的成分以外,培養(yǎng)基的剩余部分是蒸餾水。實(shí)施例2:種子預(yù)培養(yǎng)為了檢查種子預(yù)培養(yǎng)的最適條件,制備了具有下表l中所示成分的培養(yǎng)基。將IOOml各種制備的培養(yǎng)基加入的500ml錐形瓶中,然后在121'C高壓滅菌15分鐘。然后將1%(v/v)在無(wú)菌條件下攪勻的接種物接種到其中,并在溫度為25'C的恒溫箱中,以200rpm搖動(dòng)下,培養(yǎng)4天。為了測(cè)量菌絲體的生長(zhǎng),利用紗布過(guò)濾培養(yǎng)基,并利用超速離心機(jī),以1500rpm,分離10分鐘,然后在溫度為6(TC的干燥箱中干燥24小時(shí),從而測(cè)量菌絲體的干重。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>如表1中所示,當(dāng)使用包括24g/lPDB、10g/l酵母提取物、2-5g/1麥芽提取物和2-5g/1大豆胨的培養(yǎng)基時(shí),菌絲體的生長(zhǎng)最高。因此,使用包括24g/lPDB、10g/l酵母提取物、5g/l麥芽提取物和5g/l大豆胨的培養(yǎng)基作為預(yù)培養(yǎng)種子培養(yǎng)物的培養(yǎng)基。另外,作為用于設(shè)置最適培養(yǎng)條件的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,使用了包括24g/lPDB、10g/l酵母提取物、5g/l麥芽提取物、禾Q5g/1大豆胨的PDBYMS培養(yǎng)基。在主培養(yǎng)前,利用攪拌器分散在預(yù)培養(yǎng)中隨著雙孢蘑菇菌絲體的生長(zhǎng)而形成的團(tuán)塊。所述攪拌器是韓國(guó)專利公布號(hào)1998-0072112中公開(kāi)的小攪拌機(jī)類型。實(shí)施例3:設(shè)定主培養(yǎng)的最適條件1.最適溫度為了檢查生長(zhǎng)雙孢蘑菇菌絲體的最適培養(yǎng)溫度,將100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入到500ml錐形瓶中,并且然后在12rC高壓滅菌15分鐘。然后,將1%(v/v)在無(wú)菌條件下攪勻的接種物接種到其中,并且在以200rpm搖動(dòng)的同時(shí),在溫度為25。C的恒溫箱中培養(yǎng)4天,從而檢查菌絲體的生長(zhǎng)。除了使用28'C和然后3(TC的溫度以外,在相同條件下重復(fù)該過(guò)程。圖2顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)溫度相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)參考圖2,菌絲體在28。C和30'C生長(zhǎng)極好,并且特別地,在28。C顯示出最高值。2.最適pH為了檢查生長(zhǎng)菌絲體的最適初始pH,將100ml初始pH4.0的基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入到500ml錐形瓶中。然后,在12rC高壓滅菌該培養(yǎng)基15分鐘,并將1%(v/v)在無(wú)菌條件下攪勻的接種物接種到其中,并然后在以25'C和200rpm搖動(dòng)的同時(shí)培養(yǎng)4天,從而檢查菌絲體的生長(zhǎng)。除了利用磷酸和50%NaOH以0.5的增量將pH調(diào)節(jié)到4.5-9.0范圍內(nèi)以外,在相同條件下重復(fù)該過(guò)程。圖3顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與初始pH相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。參考圖3,在pH6.0時(shí),觀察到菌絲體的生長(zhǎng)達(dá)到最高。3.培養(yǎng)期為了檢査培養(yǎng)期怎樣影響雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng),將100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入到500ml錐形瓶中,并然后將初始pH調(diào)節(jié)到6.0-6.5范圍內(nèi)。然后,在12rC高壓滅菌該培養(yǎng)基15分鐘,將1%(v/v)在無(wú)菌條件下攪勻的接種物接種到其中,并然后在以25'C和200rpm搖動(dòng)的同時(shí)培養(yǎng)10天,從而檢査菌絲體的生長(zhǎng)。圖4顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)期相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。參考圖4,菌絲體的生長(zhǎng)緩慢增長(zhǎng)直到培養(yǎng)期2天時(shí),并從第三天起快速增長(zhǎng),顯示出典型的指數(shù)生長(zhǎng)期。菌絲體的最大量是在第九天的2.43g/100ml,并且菌絲體的生長(zhǎng)在其后下降。由圖4中所示的結(jié)果,確定了6天培養(yǎng)期作為最適培養(yǎng)期,該6天培養(yǎng)期顯示出與9天培養(yǎng)期時(shí)菌絲體量的微小差別。4.選擇碳源及其最適濃度為了選擇用于本培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基,改良基礎(chǔ)培養(yǎng)基,從而檢查其對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響。艮口,將作為碳源的20g/lPDB與10g/l酵母提取物、5g/l麥芽提取物和5g/1大豆胨混合。再將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)為6.0-6.5,并且然后將100ml該培養(yǎng)基加入到500ml錐形瓶中,并在121'C高壓滅菌15分鐘,從而制備試驗(yàn)培養(yǎng)基。然后,將1%U/v)在無(wú)菌條件下攪勻的接種物接種到其中,并在以200rpm搖動(dòng)的同時(shí),在25'C培養(yǎng)4天,從而檢査菌絲體的生長(zhǎng)。除了使用葡萄糖和甘蔗提取物(CJ公司(CJCorporation))作為碳源以夕卜,在相同條件下重復(fù)該過(guò)程。圖5顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)基中碳源類型相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。參考圖5,當(dāng)使用甘蔗提取物作為碳來(lái)源時(shí),菌絲體的生長(zhǎng)最有效。其次,為了選擇碳源的最適濃度,制備了與10g/l酵母提取物、5g/1麥芽提取物和5g/l大豆胨相混合的分別包括lg/1、5g/1、10g/1、15g/1和20g/1甘蔗提取物的培養(yǎng)基。然后將每種培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)為6.0-6.5,并將100ml所述培養(yǎng)基加入到500ml錐形瓶中,并且然后在12rC高壓滅菌15分鐘,從而制備具有不同的碳源濃度的一系列培養(yǎng)基。然后,以與選擇碳源試驗(yàn)中相同的方式檢查菌絲體的生長(zhǎng)。圖6顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與作為碳源使用的甘蔗提取物濃度相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。參考圖6,當(dāng)甘蔗提取物的濃度是10-20g/l時(shí),菌絲體生長(zhǎng)極好。5.選擇氮源及其最適濃度為了檢查對(duì)于雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)最適的氮來(lái)源和濃度,將20g/l甘蔗提取物,即最適碳源添加到PDBYMS培養(yǎng)基中。然后向其中加入10g/1硝酸鈉作為氮源。將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)到6.0-6.5,將100ml該培養(yǎng)基加入到500ml錐形瓶中,并在121'C高壓滅菌15分鐘,從而制備培養(yǎng)基。除了使用硝酸銨、氯化銨、硫酸銨和然后大豆胨作為氮源以外,在相同條件下重復(fù)該過(guò)程。然后,以與選擇碳源試驗(yàn)中相同的方式檢査菌絲體的生長(zhǎng)。圖7顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與培養(yǎng)基中氮源類型相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。參考圖7,當(dāng)使用大豆胨作為氮來(lái)源時(shí),菌絲體的生長(zhǎng)最高,其次是硝酸鈉。當(dāng)考慮經(jīng)濟(jì)因素和生長(zhǎng)效果時(shí),硝酸鈉作為氮源可以是最優(yōu)選的。其次,為了選擇氮來(lái)源的最適濃度,除使用1g/1、3g/1、5g/1、7g/1和10g/1的硝酸鈉外,以與選擇氮源試驗(yàn)中相同的方式檢查菌絲體的生長(zhǎng)。圖8顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與作為氮源使用的硝酸鈉濃度相關(guān)的雙孢蘑菇菌絲體生長(zhǎng)。參考圖8,當(dāng)硝酸鈉的濃度是10g/l時(shí),菌絲體的生長(zhǎng)最高。另外的試驗(yàn)顯示,當(dāng)培養(yǎng)基包括10g/1硝酸鈉作為氮源、和5g/1酵母提取物時(shí),菌絲體的生長(zhǎng)達(dá)到最高。實(shí)施例4:在生物反應(yīng)器中液體培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體…-最適葉輪轉(zhuǎn)數(shù)為了大規(guī)模培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體,在生物反應(yīng)器中攪動(dòng)的同時(shí)培養(yǎng)菌絲體。使用BIOFLOIIc批/連續(xù)發(fā)酵器(BIOFLOlieBatch/ContinuousFermentor)(NewBrunsdwickScientific.)用作生物反應(yīng)器。使用在蒸餾水中包含20g/1甘蔗提取物、10g/1硝酸鈉和5g/1酵母提取物的培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基,并將1%(v/v)在無(wú)菌條件下攪勻的接種物接種到2l所述培養(yǎng)基中。然后,利用0.25v/v/m的空氣供應(yīng),在生物反應(yīng)器葉輪轉(zhuǎn)速150rpm下,培養(yǎng)接種物4天,從而測(cè)量濕重。除了分別使用葉輪轉(zhuǎn)速200rpm、250rpm和300rpm以外,在相同條件下重復(fù)該過(guò)程。圖9顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案,與生物反應(yīng)器葉輪轉(zhuǎn)速相關(guān)的雙孢蘑燕菌絲體生長(zhǎng)。參考圖9,當(dāng)葉輪轉(zhuǎn)速是200rpm時(shí),獲得最大量的菌絲體。工業(yè)適用性按照本發(fā)明的培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的方法,能夠在短期內(nèi)有效地培養(yǎng)大量的雙孢蘑菇菌絲體。權(quán)利要求1.培養(yǎng)雙孢蘑菇(Agaricusbisporus)菌絲體的方法,所述方法包括在包含甘蔗提取物的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體或其孢子。2.權(quán)利要求1的方法,其中所述甘蔗提取物具有10-30g/1的濃度。3.權(quán)利要求l的方法,其中所述培養(yǎng)基還包括硝酸鈉作為氮源。4.權(quán)利要求3的方法,其中所述硝酸鈉具有1-10g/1的濃度。5.權(quán)利要求1的方法,其中所述培養(yǎng)基包括濃度為1-10g/1的酵母提取物。6.權(quán)利要求1的方法,其中所述培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體是在初始pH6.0-6.5,培養(yǎng)溫度25-28°C,同時(shí)以150-250rpm的攪動(dòng)速率攪動(dòng)下進(jìn)行的。7.權(quán)利要求1的方法,其中利用攪拌器分散所述雙孢蘑菇菌絲體。8.權(quán)利要求1的方法,其中所述培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體在完成前進(jìn)行3-6天。9.權(quán)利要求1的方法,所述方法還包括通過(guò)在液體培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體或其孢子制備蘑菇種子培養(yǎng)物,所述液體培養(yǎng)基包括15-25g/1的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基、1-10g/1的酵母提取物、2-5g/1的麥芽提取物、和2-5g/l的大豆胨。10.權(quán)利要求9的方法,其中所述預(yù)培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體或其孢子是在初始pH6.0-6.5,培養(yǎng)溫度25-28。C,同時(shí)以150-250rpm的攪動(dòng)速率攪動(dòng)下進(jìn)行的。11.權(quán)利要求10的方法,所述方法還包括利用攪拌器分散預(yù)培養(yǎng)的蘑燕菌絲體。12.用于培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基包括10-30g/1的甘蔗提取物和1-10g/1的硝酸鈉。13.權(quán)利要求12的培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基還包括濃度為1-10g/I的酵母提取物。14.用于預(yù)培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體或其孢子的培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基包括15-25g/1的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基、1-10g/1的酵母提取物、2-5g/1的麥芽提取物、和2-5g/l的大豆胨。全文摘要本發(fā)明提供培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的方法和用于培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體的培養(yǎng)基,所述方法包括在包含甘蔗提取物的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)雙孢蘑菇菌絲體或其孢子。文檔編號(hào)A01G1/04GK101460049SQ200780018389公開(kāi)日2009年6月17日申請(qǐng)日期2007年5月25日優(yōu)先權(quán)日2006年5月25日發(fā)明者金容輝,金永德申請(qǐng)人:Cj第一制糖株式會(huì)社