專利名稱：：前列腺素e1原料藥及生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于一種藥品的原料配方以及該種藥品的生產(chǎn)工藝。前列腺素(Prostaglandin，簡稱PG)是以前列酸為基本骨架的一大類新化合物，發(fā)展至今，已有10個(gè)型，每個(gè)型又分為1、2、3類，品種繁多，國際醫(yī)藥界曾預(yù)言PG的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展將是“一代新藥物”的誕生。前列腺素PGE1是前期E型PG之一，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為有抑制血小板聚集、保護(hù)急性心肌缺血、抑制血栓素A2合成，抑制動脈粥樣斑塊形成、抑制免疫反應(yīng)等多種重要活性作用，是體內(nèi)重要的PG之一，在試用于防治心肌梗塞、脈管炎、視網(wǎng)膜中央靜脈血栓方面取得較好療效，國外還試用于新生兒先天性紫紺心臟病、動脈造影等。然而，國內(nèi)原有的PGE1系利用手工器械操作一些玻璃器皿制成，不僅產(chǎn)量低，而要害問題是臨床副作用大，如嘔吐、四肢騷癢、靜脈疼痛，個(gè)別的病人發(fā)熱等現(xiàn)象，這是因?yàn)橹圃熘型鈦黼s質(zhì)混入，以及副產(chǎn)物含有害雜質(zhì)的緣故，且某些投料易燃易爆(如石油醚、乙醚)，某些投料帶有毒性(如三氯甲烷)，構(gòu)成環(huán)境污染與火災(zāi)隱患。在國際上如日、美、法等國均已對PGE1投入工業(yè)化生產(chǎn)，但就產(chǎn)品純度，市場價(jià)格，成本，年產(chǎn)量，每批料的生產(chǎn)周期講，均遜于本發(fā)明的指標(biāo)。本發(fā)明的目的是，提供一種先進(jìn)的PGE1原料配方及生產(chǎn)工藝，以達(dá)到產(chǎn)品的高質(zhì)量，低成本，生產(chǎn)周期短無毒副作用。本發(fā)明包括兩大部分第一部分是制造PGE1原料配方，第二部分是PGE1的生產(chǎn)工藝。首先公布本發(fā)明的制造PGE1的原料配方，該配方按重量組成為二高-γ-亞麻酸0.20％～0.50％(作底物)；谷胱甘肽0.30％～0.60％(作輔酶因子)；對苯二酚0.0010％～0.0030％(作活化因子)；純化復(fù)合酶99.01％～99.40％(作催化劑)。下述為本發(fā)明的生產(chǎn)工藝?yán)貌缓s質(zhì)的精制哺乳動物精囊，磨碎到0.002毫米～0.01毫米微粒，投入離心機(jī)中經(jīng)離心作用達(dá)到復(fù)合酶的純化后送入生化反應(yīng)器中，上述離心機(jī)為8000～15000轉(zhuǎn)/分，離心過程分兩段進(jìn)行，第一段持續(xù)25～40分鐘，第二段仍持續(xù)25～40分鐘，在反應(yīng)器中，投入下列優(yōu)化配方原料1.磷酸鹽緩沖液(作溶劑)；2.二高-γ-亞麻酸(作底物)；3.純化復(fù)合酶(作催化劑)；4.谷胱甘肽(作輔酶因子)；5.對苯二酚(作活化劑)，并通入足量的氧氣或無油無菌的空氣，在20℃～37℃溫度范圍內(nèi)進(jìn)行仿生合成反應(yīng)，仿生合成的產(chǎn)物是含雜質(zhì)的PGE1，底物生成PGE1的轉(zhuǎn)化率達(dá)30％～40％，及副產(chǎn)品PGS(見后)。將仿生合成物送入稀釋器后用下列稀釋劑稀釋之1.添加2～5倍于生化液體積的丙酮液；2.添加檸檬酸液使生化液PH值為2.0～4.2，以使復(fù)合酶失活，終止其反應(yīng)。為了從該稀釋液的水層提取出PGE1溶液，須加入溶劑RX此處R包括CH2-～C5H9-，X包括-OH，-O-C2H5，CL-，Br-，-C-C2H5；以便在提取器(4)中提取PGE1溶液，提取率可高于98％。提取出的PGE1溶液被送入自動分離機(jī)中進(jìn)行分離。首先分離出酶蛋白，其次分離出水層，水層中含PGE1，另作回收處理(見后)，剩余物在減壓至20℃～40℃下被送到減壓蒸發(fā)儀中被濃縮成PGE1粗制品，加入RX溶劑以控制濃度后，被送入濾膜孔徑為0.0002～0.0008毫米的超濾器中，進(jìn)行方法為一步除去酶蛋白、油脂、二高-γ-亞麻酸和水，得到PGE1晶體，將晶體送入層析柱設(shè)備中，將固相Si柱或Ag+-Si柱以及液相氯仿、甲醇加入柱層進(jìn)行柱層析，以收集純PGE1組分溶液，采用的玻璃柱的直徑對柱高的比是1∶20，節(jié)板孔徑為0.0002～0.0004毫米，然后將該溶液送入結(jié)晶器中，加入H2O-R′Y復(fù)合溶劑進(jìn)行結(jié)晶純化，即可得到純度為99.9％的最終產(chǎn)品PGE1白色針狀晶體。該H2O-R′Y復(fù)合溶劑中的R′意指C2H5-～C6H11-，Y意指-OH，-O-C2H5和-C-C1～5H2～9。上述工序分離出的固態(tài)酶蛋白可做高級飼料的原料。分離出的含PGE1的水層另送入反滲透儀中，將0.001毫米以上的粒子，分子量大于500的分子，無機(jī)鹽小分子加以攔截，排出的清液為純水，被攔截的濃縮液送入冷凍干燥機(jī)中用真空冷凍干燥法將其結(jié)冰，進(jìn)而使其升華以除去水分，余留下的含PGE1組分復(fù)放送入提取器中，加入丙酮-RX復(fù)合溶劑，以再次對PGE1進(jìn)行回收，(以下工序同前)。上述生產(chǎn)工藝除特別注明的外，均為常溫(室溫)、常壓。與手工生產(chǎn)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一、由于配方合理，使產(chǎn)品在治療中無毒，副作用極為輕微，且無廢氣、廢水、廢渣的排放，不存在環(huán)境污染問題。投料中無易燃易爆品，保證了生產(chǎn)的安全。二、以工業(yè)化生產(chǎn)替代了手工生產(chǎn)，其副產(chǎn)品PGS(前列腺素類物質(zhì))，主要由PGH1(前列腺素H1)，PGA1(前列腺素A1)，PGB1(前列腺素B1)三種物質(zhì)組成，在生化反應(yīng)中只允許三種物質(zhì)中的一種出現(xiàn)，且該物質(zhì)又在柱層析中被嚴(yán)格去除，因此確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量純度99.9％，而手工生產(chǎn)的PGE1純度僅為84％～88％，大幅度降低了工人的勞動強(qiáng)度。三、簡化了工藝流程的工序，生產(chǎn)相同重量的產(chǎn)品，周期縮短到二分之一，生產(chǎn)成本降低了20％，年產(chǎn)量是手工生產(chǎn)的60倍。四、可將離心機(jī)分離出的水層，利用反滲透儀處理，將殘留其中的PGE1，再次回收。五、本產(chǎn)品由于選料精當(dāng)，工藝合理，故各項(xiàng)指標(biāo)均處于世界領(lǐng)先地位。現(xiàn)列表作一比較</tables></tables>現(xiàn)給出本發(fā)明原料藥配方及生產(chǎn)工藝的兩個(gè)實(shí)施例實(shí)施例一二高-γ-亞麻酸0.25％谷胱甘肽0.50％對苯二酚0.0015％純化復(fù)合酶99.2485％本原料藥物的制備工藝如下A.用精制哺乳動物精囊的微粒在離心機(jī)中實(shí)現(xiàn)復(fù)合酶純化后，送入生化反應(yīng)器；B.在生化反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液二高-γ-亞麻酸，純化復(fù)合酶，谷胱甘肽，對苯二酚，通入足量氧氣進(jìn)行仿生合成，產(chǎn)品為含雜質(zhì)的PGE1，將其送入稀釋器中；C.在稀釋器中加入丙酮及檸檬酸液，使生化液PH值為3.0，使反應(yīng)終止，復(fù)加入溶液RX，其中R包括CH2-～C5H9-，X包括-OH，-O-C2H5，CL-，Br-，-C-C2H5，以提取PGE1溶液，將提出的PGE1溶液送入自動分離機(jī)中；D.在自動分離機(jī)中先分離出固態(tài)酶蛋白，其次分離出水層；剩余物在真空，30℃下被送入在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中加以濃縮，濃縮成PGE1粗制晶體，復(fù)加入RX溶劑送入超濾器中；E.在超濾器中，進(jìn)行PGE1的精制，即一步除去酶蛋白、油脂、二高-γ-亞麻酸和水，得到PGE1晶體，送入設(shè)備層析柱中；F.在層析柱中加固相Si柱或Ag+-Si柱，液相氯仿、甲醇入柱層進(jìn)行柱層析，將收集到的純PGE1溶液，送入到結(jié)晶器中；g.在結(jié)晶器中，加入H2O-R′Y復(fù)合溶劑進(jìn)行結(jié)晶純化，獲得最終產(chǎn)品PGE1。上述R′意指C2H5-～C6H11-，Y意指-OH，-O-C2H5，和-C-C1～5H2～9。實(shí)施例二二高-γ-亞麻酸0.35％谷胱甘肽0.30％對苯二酚0.0020％純化復(fù)合酶99.3480％本發(fā)明的制備工藝如下A.用精制哺乳動物精囊的微粒在離心機(jī)中實(shí)現(xiàn)復(fù)合酶純化后，送入生化反應(yīng)器；B.在生化反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液二高-γ-亞麻酸，純化復(fù)合酶，谷胱甘肽，對苯二酚，通入足量氧氣進(jìn)行仿生合成，產(chǎn)品為含雜質(zhì)的PGE1，將其送入稀釋器中；C.在稀釋器中加入丙酮及PH值為4.0的檸檬酸液，使反應(yīng)終止，復(fù)加入溶液RX，其中R包括CH2-～C5H9-，X包括-OH，-O-C2H5，CL-，Br-，-C-C2H5，以提取PGE1溶液，將提出的PGE1溶液送入自動分離機(jī)中；D.在自動分離機(jī)中先分離出固態(tài)酶蛋白，其次分離出水層；剩余物在真空，25℃下被送入在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中加以濃縮，濃縮成PGE1粗制晶體，復(fù)加入RX溶劑送入超濾器中；E.在超濾器中，進(jìn)行PGE1的精制，即一步除去酶蛋白、油脂、二高-γ-亞麻酸和水，得到PGE1晶體，送入設(shè)備層析柱中；F.在層析柱中加固相Si柱或Ag+-Si柱，液相氯仿、甲醇入柱層進(jìn)行柱層析，將收集到的純PGE1溶液，送入到結(jié)晶器中；g.在結(jié)晶器中，加入H2O-R′Y復(fù)合溶劑進(jìn)行結(jié)晶純化，獲得最終產(chǎn)品PGE1。上述R′意指C2H5-～C6H11-，Y意指-OH，-O-C2H5，和-C-C1～5H2～9。在自動分離機(jī)中，分離出的水層中PGE1可將該部分水層送入反滲透儀、冷凍干燥機(jī)，復(fù)送入提取器中加以回收。權(quán)利要求1.一種制造前列腺素PGE1的原料藥，其特征是該原料藥按重量配方為二高-γ-亞麻酸0.20％～0.50％谷胱甘肽0.30％～0.60％對苯二酚0.0010％～0.0030％純化復(fù)合酶99.01％～99.40％以上四種原料藥的總重量100％2.一種制造前列腺素PGE1的原料藥生產(chǎn)工藝，其特征在于按以下工藝順序進(jìn)行A.用精制哺乳動物精囊的微粒在離心機(jī)中實(shí)現(xiàn)復(fù)合酶純化后，送入生化反應(yīng)器；B.在生化反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液二高-γ-亞麻酸，純化復(fù)合酶，谷胱甘肽，對苯二酚，通入足量氧氣進(jìn)行仿生合成，產(chǎn)品為含雜質(zhì)的PGE1，將其送入稀釋器中；C.在稀釋器中加入丙酮及檸檬酸，使生化液PH值為2.0～4.2，使反應(yīng)終止，復(fù)加入溶液RX，其中R包括CH2-～C5H9-，X包括-OH，-O-C2H5，CL-，Br-，-C-C2H5，以提取PGE1溶液，將提出的PGE1溶液送入自動分離機(jī)中；D.在自動分離機(jī)中先分離出固態(tài)酶蛋白，其次分離出水層；剩余物在真空，20℃～40℃下被送入在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中加以濃縮，濃縮成PGE1粗制晶體，復(fù)加入RX溶劑送入超濾器中；E.在超濾器中，進(jìn)行PGE1的精制，即一步除去酶蛋白、油脂、二高-γ-亞麻酸和水，得到PGE1晶體，送入設(shè)備層析柱中；F.在層析柱中加固相Si柱或Ag+-Si柱，液相氯仿、甲醇入柱層進(jìn)行柱層析，將收集到的純PGE1溶液，送入到結(jié)晶器中；g.在結(jié)晶器中，加入H2O-R′Y復(fù)合溶劑進(jìn)行結(jié)晶純化，獲得最終產(chǎn)品PGE1；上述R′意指C2H5-～C6H11-，Y意指-OH，-O-C2H5，和-C-C1～5H2～9。3.如權(quán)利要求2所述的制造前列腺素PGE1的生產(chǎn)工藝，其特征在于，在自動分離機(jī)中，分離出的水層中PGE1可將該部分水層送入反滲透儀、冷凍干燥機(jī)，復(fù)送入提取器中加以回收4.如權(quán)利要求2所述的制造前列腺素E1的生產(chǎn)工藝，其特征在于也可以將無油、無菌的空氣送入生化反應(yīng)器中以替代氧氣全文摘要本發(fā)明為一種制造前列腺素PGE文檔編號C12N9/00GK1160766SQ96101488公開日1997年10月1日申請日期1996年3月21日優(yōu)先權(quán)日1996年3月21日發(fā)明者蔡海德,王曲波申請人:江西鹿迪制藥有限公司