本發(fā)明涉及一種多肽口服液的制備方法，尤其是涉及一種高生物利用度的桃仁多肽口服液的制備方法。
背景技術(shù)：
桃仁為薔薇科植物桃或山桃的干燥成熟種子，是一種常見(jiàn)中藥材，具有活血祛瘀、潤(rùn)腸通便、止咳平喘等功效。桃仁目前除少量用于中藥外，絕大部分沒(méi)有得到利用。桃仁的主要成分是油脂和蛋白質(zhì)，其中蛋白質(zhì)含量約占25%。研究表明，很多植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶解后產(chǎn)生的多肽除了具有易被人體消化吸收的特性外，還具有很強(qiáng)的抗氧化、降低膽固醇、促進(jìn)鈣吸收等功能特性。因此，利用桃仁脫脂后的蛋白質(zhì)生產(chǎn)多肽，進(jìn)而加工出人們食用方便的口服液將具有重要意義和市場(chǎng)前景。
活性多肽由于對(duì)人體具有諸多的保健功效而備受關(guān)注。但大多數(shù)多肽是親水性的，在胃腸道內(nèi)復(fù)雜環(huán)境下穩(wěn)定性差，易被胃酸和胃蛋白酶等分解，且會(huì)影響它對(duì)小腸黏液層和小腸上皮層的穿透，導(dǎo)致活性多肽的生物利用度較低，對(duì)人體的功能作用不顯著。但目前多肽的研究主要集中在制備方法和功能評(píng)價(jià)，對(duì)如何提高多肽生物利用度的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。例如cn201410352633.9公開(kāi)的一種功能性白蕓豆多肽及其制備方法和應(yīng)用中，提供了一種以白蕓豆為原料，通過(guò)浸泡、離心、超濾、酶解、濃縮干燥等工藝制備具有減肥和降脂功效的方法；cn201410509346.4公開(kāi)的蠶蛹多肽及其制備方法和應(yīng)用中，介紹了蠶蛹經(jīng)過(guò)煎煮、酶解、蛋白質(zhì)分離、半制備rp-hplc分離純化、凍干等步驟制備能有效預(yù)防或治療糖尿病的方法；cn201410353810.5公開(kāi)的一種抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的多肽和多肽復(fù)合物的制備方法及其應(yīng)用中，介紹了一種利用hsa提高多肽在鹽溶液中溶解性的方法、多肽-has復(fù)合物的制備方法及其在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用方法。這些專利技術(shù)幫助解決了多肽制備過(guò)程中的一些技術(shù)難題，有力地促進(jìn)了多肽產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，但大部分都忽視了如何提高多肽生物利用度，如何將其加工成口感好食用方便的產(chǎn)品之類的難題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種綜合利用桃仁，開(kāi)發(fā)出具有高生物利用度的桃仁多肽口服液的制備方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案：一種高生物利用度的桃仁多肽口服液的制備方法，包括如下步驟：
（1）粉碎：將去殼剝皮后的桃仁用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)10目篩網(wǎng)，得粉碎桃仁；
（2）脫脂：將步驟（1）所得桃仁粉與石油醚按1g:6～7ml的料液比分別加入容器中，攪拌混合，浸泡4～6h，然后抽濾，得到脫脂桃仁粉末；
（3）蛋白質(zhì)提?。簩⒉襟E（2）所得脫脂桃仁粉末與純凈水按1g:19～20ml的料液比混合形成懸浮液，調(diào)節(jié)ph至10.0～11.0，于40～45℃條件下磁力攪拌90～100min；接著將懸浮液用轉(zhuǎn)速為12000～15000r/min的離心機(jī)離心15～20min，獲得上清液；將上清液ph調(diào)至5.0～5.5，用轉(zhuǎn)速為12000～15000r/min的離心機(jī)離心15～20min，取沉淀物，然后將其冷凍干燥，得桃仁蛋白質(zhì)；
（4）酶解：將步驟（3）所得桃仁蛋白質(zhì)配制成底物濃度為2.5-3.5wt%（優(yōu)選3wt%）的分散液，調(diào)節(jié)ph至9.0～10.0，然后加入堿性蛋白酶，加酶量以桃仁蛋白質(zhì)為底物加入5000～6000u/g，在50～55℃條件下酶解3～5h；接著將酶解液置于85～90℃條件下滅活10～15min，然后用轉(zhuǎn)速為12000～15000r/min的離心機(jī)離心10～15min，獲得酶解上清液；
（5）超濾分離：將步驟（4）所得上清液進(jìn)行超濾分離，超濾膜截留分子量為10000da，工作壓力為0.2～0.5mpa，溫度5～10℃，得到分子量小于10000da的桃仁多肽液；接著用截留分子量為1000da的超濾膜分離，得到分子量范圍在1000～10000da之間的桃仁多肽液；然后對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥，得到桃仁多肽粉；
（6）化學(xué)修飾：將步驟（5）所得桃仁多肽粉用純凈水配成2.5～3.5wt%（優(yōu)選3wt%）的多肽液，然后按桃仁多肽粉與甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺乙酸酯摩爾比為l:3～5的比例，加入甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺乙酸酯（mpeg-scm，mw6000）反應(yīng)，調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液ph值為7.0～8.0之間，溫度為5～25℃，時(shí)間為6～12h，終止反應(yīng)時(shí)用檸檬酸調(diào)節(jié)ph值到4.0～5.0，即可；
（7）均質(zhì)：將步驟（6）處理后的多肽液中按4～6g/kg（優(yōu)選5g/kg）的比例加入大豆卵磷脂，攪拌均勻；接著對(duì)多肽液進(jìn)行均質(zhì)處理，均質(zhì)兩次，第一次均質(zhì)壓力為30～35mpa，時(shí)間為20～25min，第二次均質(zhì)壓力為15～20mpa，時(shí)間為8～10min；
（8）微膠囊化處理：將步驟（7）所得的均質(zhì)多肽液與濃度為10g/l的海藻酸鈉溶液按體積比1:4～5分別加入到微膠囊造粒儀中，設(shè)定膠囊直徑為150～250μm，噴嘴孔徑為膠囊直徑的1.0～2.5倍；多肽液和海藻酸鈉溶液在壓力作用下從微膠囊造粒儀噴嘴中噴出直接進(jìn)入濃度為20～23g/l的cacl2溶液中，固化10～20min后形成微膠囊顆粒，用120目的濾膜濾出，純凈水沖洗2～3次；接著采用低溫沸騰干燥器干燥，干燥溫度為40～50℃，時(shí)間為30～50min，得干燥微膠囊多肽顆粒；
（9）風(fēng)味調(diào)整：將風(fēng)味調(diào)整物料溶解混勻，然后加入步驟（8）制備的微膠囊多肽顆粒，經(jīng)調(diào)配后成為多肽口服液；
（10）灌裝：將步驟（9）制備的多肽口服液進(jìn)行軟包灌裝；灌裝密封后用水檢測(cè)密封滲漏狀況，剔除滲漏產(chǎn)品，得軟包裝多肽口服液；
（11）超高壓滅菌：將步驟（10）的軟包裝多肽口服液置于密閉的超高壓容器內(nèi)，用水作為介質(zhì)對(duì)軟包裝多肽口服液施以400～600mpa的壓力，水溫為40～50℃，滅菌時(shí)間為20～30min，得桃仁多肽口服液成品；
（12）檢驗(yàn)入庫(kù)：檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品則可入庫(kù)，于1～4℃冷藏。
進(jìn)一步，步驟（4）中，所述堿性蛋白酶的酶活為2×105u/g。
進(jìn)一步，步驟（9）中，加入微膠囊多肽顆粒的質(zhì)量百分比為20～25%。
進(jìn)一步，步驟（9）中，所述風(fēng)味調(diào)整物料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：8～14%蜂蜜、0.15～0.30%檸檬酸、0.03～0.08%cmc-na、0.01～0.02%黃原膠，其余為純凈水。
進(jìn)一步，步驟（9）中，所述軟包灌裝的包裝材料為pet/al/cpp復(fù)合蒸煮袋。
進(jìn)一步，步驟（11）中，所述超高壓容器為s-f600/q600-s3溫控超高壓實(shí)驗(yàn)機(jī)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
1）本發(fā)明通過(guò)加入mpeg-scm對(duì)桃仁多肽進(jìn)行化學(xué)修飾，提高了桃仁多肽在腸道中的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)桃仁活性多肽在血漿中的半衰期，提高其生物利用度；
2）本發(fā)明在桃仁多肽液中添加大豆卵磷脂，通過(guò)均質(zhì)等方式與多肽液形成穩(wěn)定乳化液，促進(jìn)人體對(duì)多肽的吸收，進(jìn)而提高桃仁多肽的生物利用度；
3）本發(fā)明將多肽液進(jìn)行微膠囊化處理，不僅能減緩多肽在腸道中的釋放速率，避免胃酸和胃蛋白酶對(duì)桃仁多肽的降解，提高多肽的生物利用度，而且掩蔽了多肽的不良風(fēng)味；
4）本發(fā)明整個(gè)制備過(guò)程沒(méi)有超過(guò)50℃高溫的工藝流程，殺菌是采用超高壓滅菌方式，多肽的活性基本沒(méi)有受到破壞，使得產(chǎn)品具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；
5）本發(fā)明最終將產(chǎn)品制備成口服液，口感好，風(fēng)味佳，食用和攜帶方便，是一種具有較高生物活性的營(yíng)養(yǎng)佳品；
總之，本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種桃仁多肽口服液的制備方法；該產(chǎn)品的多肽不僅具有較高的生物活性，而且生物利用度高，酸甜可口，具較強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力和前景。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1
一種高生物利用度的桃仁多肽口服液的制備方法，包括以下步驟：
（1）粉碎：將去殼剝皮后的桃仁用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)10目篩網(wǎng)，得粉碎桃仁；
（2）脫脂：將步驟（1）所得桃仁粉與石油醚按1g:6ml的料液比分別加入容器中，攪拌混合，浸泡5h，然后抽濾，得到脫脂桃仁粉末；
（3）蛋白質(zhì)提?。喝〔襟E（2）所得脫脂桃仁粉末與純凈水按1g:19ml的料液比混合形成懸浮液，調(diào)節(jié)ph至10.0，于40℃條件下磁力攪拌90min；接著將懸浮液用轉(zhuǎn)速為12000r/min的離心機(jī)離心15min，獲得上清液；將上清液ph調(diào)至5.0，用轉(zhuǎn)速為12000r/min的離心機(jī)離心15min，取沉淀物，然后將其冷凍干燥，得桃仁蛋白質(zhì)；
（4）酶解：將步驟（3）所得桃仁蛋白質(zhì)配制成底物濃度為3wt%的分散液，調(diào)節(jié)ph至9.0，然后加入酶活為2×105u/g的堿性蛋白酶，加酶量以桃仁蛋白質(zhì)為底物加入6000u/g，在50℃條件下酶解4h；接著將酶解液置于85℃條件下滅活12min，然后用轉(zhuǎn)速為12000r/min的離心機(jī)離心12min，獲得酶解上清液；
（5）超濾分離：將步驟（4）所得上清液進(jìn)行超濾分離，超濾膜截留分子量為10000da，工作壓力為0.3mpa，溫度6℃，得到分子量小于10000da的桃仁多肽液；接著用截留分子量為1000da的超濾膜分離，得到分子量范圍在1000da～10000da之間的桃仁多肽液；然后對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥，獲得桃仁多肽粉；
桃仁蛋白質(zhì)通過(guò)加入酶活為2×105u/g的堿性蛋白酶酶解后獲得桃仁多肽粉，添加不同量的堿性蛋白酶后所獲得的得率見(jiàn)表1。從表1可以看出，通過(guò)堿性蛋白酶酶解處理后所獲得的分子量范圍在1000da～10000da之間的桃仁多肽得率均超過(guò)60%，取得了較好的效果。
（6）化學(xué)修飾：將步驟（5）所得桃仁多肽粉用純凈水配成3wt%的多肽液，然后按桃仁多肽粉與甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺乙酸酯摩爾比為l:3的比例加入甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺乙酸酯（mpeg-scm，mw6000）反應(yīng)，調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液ph值為7.0之間，溫度為15℃，時(shí)間為8h，終止反應(yīng)時(shí)用檸檬酸調(diào)節(jié)ph值到4.5即可；
分別測(cè)定化學(xué)修飾后的桃仁多肽與不修飾的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，化學(xué)修飾后的桃仁多肽與未修飾相比，兩者的入血速度沒(méi)有顯著性差異，在服用30min后血液中即出現(xiàn)最大值（cmax）。但化學(xué)修飾多肽的最大血液濃度顯著高于不修飾多肽，說(shuō)明在服用相同劑量（100mg.kg-1）條件下，進(jìn)行化學(xué)修飾能有效提高吸收多肽進(jìn)入血液。同時(shí)，采用二室模型測(cè)定多肽在體內(nèi)的消除半衰期（t1/2β），結(jié)果表明化學(xué)修飾多肽較穩(wěn)定，在血液中的消除速度緩慢；
注：表中數(shù)據(jù)右上角*表示不修飾桃仁多肽與修飾桃仁多肽相比存在顯著性差異，p＜0.05。
（7）均質(zhì)：將步驟（6）處理后的多肽液中按5g/kg的比例加入大豆卵磷脂，攪拌均勻；接著對(duì)多肽液進(jìn)行均質(zhì)處理，均質(zhì)兩次，第一次均質(zhì)壓力為30mpa，時(shí)間為20min，第二次均質(zhì)壓力為15mpa，時(shí)間為8min；
（8）微膠囊化處理：將步驟（7）所得的均質(zhì)多肽液與濃度為10g/l的海藻酸鈉溶液按體積比1:4分別加入到型號(hào)為b-395的微膠囊造粒儀中，設(shè)定膠囊直徑為200μm，噴嘴孔徑為膠囊直徑的1.0倍；多肽液和海藻酸鈉溶液在壓力作用下從微膠囊造粒儀噴嘴中噴出直接進(jìn)入濃度為20g/l的cacl2溶液中，固化10min后形成微膠囊顆粒，用120目的濾膜濾出，純凈水沖洗2次；接著采用低溫沸騰干燥器干燥，干燥溫度為40℃，時(shí)間為30min，得干燥微膠囊多肽顆粒；
（9）風(fēng)味調(diào)整：將風(fēng)味調(diào)整物料充分溶解混勻，然后加入步驟（8）制備的微膠囊多肽顆粒，經(jīng)調(diào)配后成為多肽口服液；
所述加入微膠囊多肽顆粒的質(zhì)量百分比為20%；所述風(fēng)味調(diào)整物料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：10%蜂蜜、0.20%檸檬酸、0.04%cmc-na、0.02%黃原膠，其余為純凈水；
（10）灌裝：將步驟（9）制備的多肽口服液進(jìn)行軟包灌裝；所述軟包灌裝的包裝材料為pet/al/cpp復(fù)合蒸煮袋；灌裝密封后用水檢測(cè)密封滲漏狀況，剔除滲漏產(chǎn)品，得軟包裝多肽口服液；
（11）超高壓滅菌：將步驟（10）的軟包裝多肽口服液置于密閉的型號(hào)為s-f600/q600-s3溫控超高壓實(shí)驗(yàn)機(jī)內(nèi)，用水作為介質(zhì)對(duì)軟包裝多肽口服液施以500mpa的壓力，水溫為50℃，滅菌時(shí)間為20min，得桃仁多肽口服液成品；
（12）檢驗(yàn)入庫(kù)：檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品則可入庫(kù)，于2℃冷藏。
本發(fā)明所制得的口服液，口感好，風(fēng)味佳，食用和攜帶方便，是一種具有較高生物活性的營(yíng)養(yǎng)佳品；該產(chǎn)品的多肽不僅具有較高的生物活性，而且生物利用度高，酸甜可口，具較強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力和前景。