本發(fā)明涉及一種紅茶，具體涉及一種富含苯乙醇苷的紅茶，以及該紅茶的制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
苯乙醇苷類化合物是一類廣泛分布在植物界中，具有廣泛生物學(xué)活性的化合物。
目前大量研究表明，苯乙醇苷類化合物具有抗炎、抗菌、抗氧化、保肝、調(diào)節(jié)免疫力、增強(qiáng)記憶力及促生殖等多種藥理活性。
苯乙醇苷是由苯乙醇和糖結(jié)合形成的苷，主要存在于肉蓯蓉植物中。
肉蓯蓉(CistancheHoffing.et Link)為列當(dāng)科多年生寄生草本植物，有“沙漠人參”之美譽(yù)，是常用中藥之一。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，肉蓯蓉為上品，其性溫，味甘，有滋肝養(yǎng)腎，益精血的功效。在我國，其主要用于治療腎陽不足，精血虧虛，腰膝酸軟，陽痿不育等癥。
肉蓯蓉的肉質(zhì)莖基部含有大量的苯乙醇苷類物質(zhì)，包括肉蓯蓉苷A、肉蓯蓉苷B、肉蓯蓉苷C、肉蓯蓉苷D、肉蓯蓉苷H、管花苷A、管花苷B、管花苷E、紅景天苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷、2’-乙?；锘ㄌ擒?、松果菊苷、丁香苷和李糖苷等。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種制備富含苯乙醇苷的紅茶的方法，由該方法制備得到的紅茶不僅富含苯乙醇苷，而且口感獨(dú)特，甘醇、香甜、唇齒留香。
為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
一種富含苯乙醇苷的紅茶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(一)制備肉蓯蓉花干花：
(1)采摘鮮花：采摘新鮮的肉蓯蓉花，去除雜質(zhì)及花面積水；
(2)萎凋：將花瓣置于萎凋器上，在空調(diào)房中進(jìn)行萎凋處理，待花瓣失水率達(dá)10％-15％時，萎凋結(jié)束；
(3)細(xì)胞破碎：將萎凋處理后的肉蓯蓉花花瓣放入揉捻桶，進(jìn)行揉捻處理，待細(xì)胞破壞率達(dá)90％以上、條索緊卷、花瓣汁液溢而不成滴流時結(jié)束揉捻；
(4)發(fā)酵：將揉捻好的條索放入發(fā)酵室進(jìn)行發(fā)酵處理，發(fā)酵的時長為4-5個小時；
(5)烘炒：將發(fā)酵后的條索放入殺青機(jī)中烘炒，使其終止發(fā)酵，待條索含水量小于25％時烘炒完成；
(6)整形：將烘炒后的條索迅速移入揉捻桶，進(jìn)行第二次的揉捻整形，輕揉1分鐘后結(jié)束整形；
(7)烘干：將整形的條索進(jìn)行烘干處理，干燥方式為溫度先低后高，80℃條件下初烘2h，120℃條件下復(fù)烘，待條索含水量低于5％時，結(jié)束烘干；
(二)制備富含苯乙醇苷的粉末：
(1)首次蒸餾：取50g干燥的肉蓯蓉的肉質(zhì)莖基部粉碎粒，加入100mL食用酒精，旋轉(zhuǎn)蒸餾1個小時；
(2)二次蒸餾：紗布過濾后，收集濾液，濾渣繼續(xù)加入50mL食用酒精，旋轉(zhuǎn)蒸餾1個小時；
(3)凍干濾液：再次紗布過濾后，收集濾液，并與步驟(2)獲得的濾液合并，混勻后放入冷凍干燥機(jī)中凍干，即得富含苯乙醇苷的粉末；
(三)混合：
將步驟(一)制備得到的肉蓯蓉花干花和步驟(二)制備得到的富含苯乙醇苷的粉末與桂花精油混合均勻，三者的混合比例為：肉蓯蓉花干花10-20g、富含苯乙醇苷的粉末2-3g、桂花精油1-2g。
前述的制備方法，其特征在于，在步驟(一)中，發(fā)酵分兩個階段：
第一階段：發(fā)酵室的溫度控制在24℃-25℃，相對濕度控制在95％，發(fā)酵的時長為2.5個小時，發(fā)酵過程中適當(dāng)翻拌1-2次，使發(fā)酵均勻一致；
第二階段：在32℃下，再發(fā)酵1.5個小時。
前述的制備方法，其特征在于，在步驟(一)中，烘炒的溫度控制在110℃-120℃。
前述的制備方法，其特征在于，在步驟(三)中，前述桂花精油的制備過程為：
(1)浸泡：稱取50g干桂花，置于2000mL圓底燒瓶中，加入200mL蒸餾水、1.5mg-2.0mgNaCl和若干粒沸石，混合均勻后浸泡12個小時；
(2)萃?。簩⒔菀悍湃胼腿x中進(jìn)行萃取，萃取壓力為25MPa、萃取溫度為74.9℃、萃取時間為3h；
(3)干燥：蒸餾結(jié)束后加入無水MgSO4干燥，過濾后即得桂花精油。
本發(fā)明的有益之處在于：
(一)制備方法：
經(jīng)過制備條件的優(yōu)化，所選取的方法簡單、方便、快速；
實(shí)驗(yàn)材料常見易得；
高效、成本低廉，便于工廠化及自動化管理。
(二)紅茶：
口感獨(dú)特，甘醇、香甜、唇齒留香，同時富含苯乙醇苷，具有促進(jìn)男性精力旺盛的作用。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作具體的介紹。
首先，介紹本發(fā)明的富含苯乙醇苷的紅茶的制備方法。
第一步：制備肉蓯蓉花干花
1、采摘鮮花
采摘新鮮的、無污染的肉蓯蓉花，去除雜質(zhì)及花面積水。
2、萎凋
將花瓣置于萎凋器(例如：布墊)上，放在空調(diào)房中進(jìn)行萎凋處理，溫度在20-25℃時進(jìn)行萎凋2h左右，待花瓣失水率達(dá)10％-15％時(此時，花瓣表面大部分都失去了光澤)，萎凋結(jié)束。
3、細(xì)胞破碎
將萎凋處理后的肉蓯蓉花花瓣放入揉捻桶，進(jìn)行揉捻處理，待細(xì)胞破壞率達(dá)90％以上、條索緊卷、花瓣汁液(充分外溢、粘附于花瓣表面)溢而不成滴流時，結(jié)束揉捻。
4、發(fā)酵
將揉捻好的條索放入發(fā)酵室進(jìn)行發(fā)酵處理，茶坯的厚度為10cm，攤花瓣時需抖松攤勻，不緊壓。發(fā)酵室的溫度控制在24℃-25℃，相對濕度控制在95％，發(fā)酵的時長為2.5個小時，發(fā)酵過程中適當(dāng)翻拌1-2次，使發(fā)酵均勻一致。然后，在32℃下，再發(fā)酵1.5個小時。
5、烘炒
將發(fā)酵后的條索放入殺青機(jī)中烘炒，烘炒的溫度控制在110℃-120℃，使其終止發(fā)酵，待條索含水量小于25％時，烘炒完成。
6、整形
將烘炒后的條索迅速移入揉捻桶，進(jìn)行第二次的揉捻整形，輕揉1分鐘后，結(jié)束整形。
7、烘干
將整形的條索進(jìn)行烘干處理，干燥方式為溫度先低后高，80℃條件下初烘2h，120℃條件下復(fù)烘，待條索含水量低于5％左右時結(jié)束烘干。
在制備肉蓯蓉花干花的過程中，步驟2、步驟4和步驟7是關(guān)鍵步驟，其中，
步驟2：在空調(diào)房中進(jìn)行萎凋，保證了葡萄糖苷酶和多酚氧化酶的活性。
步驟4：發(fā)酵方式中溫度為先低后高，有效保證了酶的活性；發(fā)酵時間為4.5h，使其充分發(fā)酵，湯色紅亮；發(fā)酵中減少了空氣對流，保證發(fā)酵更透徹，且發(fā)酵中所需要的濕度是靠本身花汁的水分回流，保證濕度而無需加濕，采用該方法發(fā)酵產(chǎn)品花香味更顯，更耐泡。
步驟7：烘干溫度采用先低后高，使得該款產(chǎn)品的花香味明顯，產(chǎn)品口感甜香，濃郁持久并滋味醇厚，品質(zhì)獨(dú)具一格。
第二步：制備富含苯乙醇苷的粉末
1、首次蒸餾
取50g干燥的肉蓯蓉的肉質(zhì)莖基部粉碎粒，加入100mL食用酒精，80℃旋轉(zhuǎn)蒸餾1個小時。
苯乙醇苷類有效成分可充分溶解于酒精中，因此該產(chǎn)品采用食用酒精進(jìn)行提取。
所選取的肉蓯蓉的肉質(zhì)莖基部粉碎粒與酒精比例為1:2，保證了肉蓯蓉苯乙醇苷類物質(zhì)的有效提取，且不浪費(fèi)酒精。
旋轉(zhuǎn)蒸餾的溫度為80℃，降低了化學(xué)鍵的斷裂。
2、二次蒸餾
紗布過濾后，收集濾液(記為濾液I)，濾渣繼續(xù)加入50mL食用酒精，80℃旋轉(zhuǎn)蒸餾1個小時。
二次蒸餾可以充分提取肉蓯蓉中的苯乙醇苷類有效成分。
3、濾液凍干
再次紗布過濾后，收集濾液(記為濾液II)，并與步驟(2)獲得的濾液I合并，混勻后放入冷凍干燥機(jī)中凍干，即得富含苯乙醇苷的粉末。
采用冷凍干燥法，有效降低了化合物的化學(xué)變質(zhì)。
第三步：制備桂花精油
1、浸泡
稱取50g干桂花，置于2000mL圓底燒瓶中，加入200mL蒸餾水、1.8mgNaCl和3粒沸石，混合均勻后浸泡12個小時。
NaCl的用量可以在1.5mg-2.0mg范圍內(nèi)做適當(dāng)調(diào)整。
2、萃取
將浸泡液放入萃取儀中進(jìn)行萃取，萃取壓力為25MPa、萃取溫度為74.9℃、萃取時間為3h。
經(jīng)驗(yàn)證，該組壓力、溫度和時間為萃取率最佳的條件。
3、干燥
蒸餾結(jié)束后加入無水MgSO4干燥，過濾后即得桂花精油。
第四步：混合
將步驟(一)制備得到的肉蓯蓉花干花、步驟(二)制備得到的富含苯乙醇苷的粉末和步驟(三)制備得到的桂花精油先殺菌，然后混合均勻，三者的混合比例為：
肉蓯蓉花干花 10g、
富含苯乙醇苷的粉末 3g、
桂花精油 2g。
當(dāng)然，我們還可以適當(dāng)增減各組分的用量，例如：將肉蓯蓉花干花的重量增加至20g，將富含苯乙醇苷的粉末的重量減少至2g，將桂花精油的重量減少至1g。
第五步：制成茶包
將殺菌完畢并混合均勻的混合物裝入濾紙茶袋中，每袋10g。
接下來，介紹采用上述方法制備得到的紅茶。
一、品質(zhì)評價(jià)
本發(fā)明的紅茶由肉蓯蓉花、肉蓯蓉提取物及桂花精油調(diào)配而成，其湯色紅亮，滋味濃厚甘甜，香氣鮮爽，為茶葉愛好者提供了一款新的口感，同時最大程度保證了肉蓯蓉中苯乙醇苷類有效成分含量，可促進(jìn)男性精力旺盛的保健品。
二、動物試驗(yàn)
1、試驗(yàn)?zāi)康?/p>
模型組雄性大鼠口服環(huán)境雌激素雙酚A建立雄性生殖損傷大鼠模型，然后給予富含苯乙醇苷的紅茶，比較激素水平和精子質(zhì)量的變化。
2、材料
無特殊病原體SD雄性大鼠，體重在180g-200g，購自第四軍醫(yī)大學(xué)試驗(yàn)動物中心。
雙酚A(BPA)購自索來寶生物技術(shù)有限公司。
3、試驗(yàn)方法和步驟
(1)實(shí)驗(yàn)分組
SD雄性大鼠42只，分為7組，適應(yīng)性飼喂1周后，給紅茶或BPA6周。
正常對照組：玉米油(5mL/kg bw/d)；
雙酚A組：雙酚A(200mg/kg/bw/d)；
雙酚A-茶(低)組：雙酚A(200mg/kg bw/d)和茶包(100mg/kg bw/d)；
雙酚A-茶(高)組：雙酚A(200mg/kg bw/d)和茶包(200mg/kg bw/d)；
茶(低)組：茶包(100mg/kg bw/d)；
茶(高)組：茶包(200mg/kg bw/d)。
(2)激素水平測定
末次給藥24h后，麻醉大鼠，頸動脈采集血液。血液4℃靜置6h，2500rpm離心10min，分離血清，分裝-20℃保存。
由北京華英生物技術(shù)研究所(中國，北京)代檢睪酮(T)含量。
(3)精子參數(shù)測定
附睪精子懸液制備：末次給藥24h后，麻醉大鼠，摘取一側(cè)尾狀附睪，放入預(yù)溫的4mL生理鹽水中，沿橫切面減一下，使精子游出，放入37℃溫浴5min。
睪丸精細(xì)胞懸液制備：末次給藥24h后，麻醉大鼠，摘取一側(cè)睪丸，放入預(yù)溫的4mL生理鹽水中，沿橫切面減一下，放入37℃溫浴5min。
(i)精子能動性測定
吸取10μL上述制備的附睪精子懸液，將其滴到載玻片上(37℃預(yù)熱)，蓋上載玻片，40×光學(xué)顯微鏡下觀察，選取10個視野計(jì)算精子的能動性(運(yùn)動和不運(yùn)動)，結(jié)果以百分?jǐn)?shù)顯示。
(ii)精子畸形率測定
吸取10μL上述制備的附睪精子懸液，將其滴到載玻片上(37℃預(yù)熱)，輕柔推開，自然干燥，10％甲醛固定10min，使用2％的伊紅水溶液染色15min，隨后自來水沖洗，自然干燥。40×光學(xué)顯微鏡下觀察，選取10個視野計(jì)算精子的畸形率(畸形分為頭畸形和尾畸形)，結(jié)果以百分?jǐn)?shù)顯示。
(iii)精子計(jì)數(shù)
吸取50μL上述制備的附睪精子懸液，加入450μL，10％甲醛固定液，混勻。吸取10μL精子滴入血球計(jì)數(shù)版上靜置5min后，計(jì)數(shù)6個方格子中的精子數(shù)，計(jì)算平均數(shù)再乘107，即為每精液中的精子數(shù)(個/mL)。
(iiii)精子每日生產(chǎn)量
吸取50μL上述制備的睪丸精細(xì)胞懸液，加入450μL，10％甲醛固定液，混勻。吸取10μL精子滴入血球計(jì)數(shù)版上靜置5min后，計(jì)數(shù)6個方格子中的精細(xì)胞，計(jì)算平均數(shù)再乘107，即為每精液中的精細(xì)胞(個/mL)。
利用公式DSP＝X/6.1，DSP為精子每日生產(chǎn)量，X表示睪丸中19階段精細(xì)胞的數(shù)量。
(4)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
數(shù)據(jù)分析使用SAS軟件(9.1版本)，采用one way ANOVA分析，選擇Tukey’s方法分析顯著性差異，P<0.05為差異性顯著。每個處理組至少選取6個樣品數(shù)據(jù)，每個數(shù)據(jù)重復(fù)性操作3次，結(jié)果用mean±SD表示。
4、結(jié)果
表1富含苯乙醇苷的紅茶對雄性激素和精子質(zhì)量的影響
注：不同的字母代表差異性顯著(p<0.05)。
(1)富含苯乙醇苷的紅茶對雄性激素水平的影響
如表1所示，富含苯乙醇苷的紅茶可有效緩解BPA導(dǎo)致的雄性激素含量降低，另外單獨(dú)給予富含苯乙醇苷的紅茶可顯著提高雄性激素的分泌。
(2)富含苯乙醇苷的紅茶對精子質(zhì)量的影響
如表1所示，與模型對照組小鼠相比，富含苯乙醇苷的紅茶可顯著緩解BPA導(dǎo)致的精子總數(shù)、每日生成量、精子活性下降的現(xiàn)象；與正常組相比，單獨(dú)給予富含苯乙醇苷的紅茶可顯著增加精子的總數(shù)、活性和每日生成量。這說明：富含苯乙醇苷的紅茶可提高精子的質(zhì)量，促進(jìn)男性的生殖能力。所以，采用本發(fā)明的方法制備得到的紅茶可以應(yīng)用到制備促進(jìn)男性精力旺盛的保健品或藥品中。
需要說明的是，上述實(shí)施例不以任何形式限制本發(fā)明，凡采用等同替換或等效變換的方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。