一種從貓豆渣中提取多肽的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種從貓豆渣中提取多肽的方法，其步驟包括原料預(yù)處理、微波輔助萃取蛋白質(zhì)、沉析蛋白質(zhì)、稀解分離蛋白、酶解、滅活、沉析除雜、蒸發(fā)濃縮、微波干燥和粉碎均質(zhì)。本方法具有效率高，收益好，節(jié)約資源的優(yōu)點(diǎn)，本方法為貓豆資源的綜合利用提供了新的途徑。
【專利說明】一種從貓豆渣中提取多肽的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)產(chǎn)品加工【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種從貓豆渣中提取多肽的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 貓豆又叫狗爪豆、白藜豆、龍爪豆等，是豆科藜豆屬草質(zhì)藤本一年生植物，廣泛分 布于亞熱帶地區(qū)，在我國的海南、廣東、廣西等省及貴州和云南的南部地區(qū)廣有分布，產(chǎn)量 最多的是廣西。貓豆有野生、半野生和人工栽植，在基巖為石灰?guī)r山區(qū)多有半野生貓豆，即 于春天播種巖石裂隙或風(fēng)化巖邊，不施肥、不搭架讓枝蔓攀爬在巖石上，待到秋末冬初豆莢 成熟后采收。
[0003] 貓豆?fàn)I養(yǎng)豐富，由于不同地區(qū)、不同栽培方法，其營養(yǎng)成分也略有差異。粗蛋白含 量為22-27 %，粗脂肪含量為3-6 %，粗纖維含量為10-15 %，無氮浸出物含量為41-52 %，所 含氨基酸種類比較齊全，游離氨基酸有17種，水解氨基酸有18種，其中以谷氨酸和天冬氨 酸最高，其次是亮氨酸、賴氨酸，最低是色氨酸和蛋氨酸，藥用成分左旋多巴的含量3-7%。 據(jù)研宄報(bào)道，野生或半野生貓豆中左旋多巴含量比栽培的高2-3%，貓豆豆仁外皮呈紫花色 或黑色的左旋多巴含量比白色的高2-3%，特別是豆仁外皮呈黑色，內(nèi)部呈淡黑色的貓豆中 左旋多巴含量高達(dá)7. 3%。
[0004] 左旋多巴的分子式為：C9HnN04，相對(duì)分子量為197. 19,其結(jié)構(gòu)式為：
[0005]

【權(quán)利要求】
1. 一種從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟： (1) 原料預(yù)處理：將貓豆渣與水按照固液比1:20加入容器，浸泡4h后取出，脫水，再取 少量貓豆渣與0. 2mol/L HCL水溶液按照質(zhì)量比1:4加入到容器中，加熱至溫度達(dá)到50°C， 保溫lOmin，檢測(cè)溶液中無左旋多巴后，方可進(jìn)入下一步驟； (2) 微波輔助萃取蛋白質(zhì)：將脫去左旋多巴的貓豆渣按固液比1:10加入軟水，調(diào)pH = 8. 5,將其投入有攪拌裝置和冷卻水循環(huán)、微波頻率為2450MHz，功率為20kw的立式微波罐 中，控制料液溫度55-60°C，微波萃取反應(yīng)30min，保溫20min，然后用離心機(jī)兩次過濾脫溶， 兩次過濾的濾布的細(xì)度分別為20和200目，將所得濾渣合并； (3) 沉析蛋白質(zhì)：將1. 5%殼聚糖醋酸溶液緩慢加入步驟⑵所得濾渣中并不斷攪拌， 當(dāng)溶液pH = 5時(shí)停止攪拌，靜置4h，分層，取下層沉淀離心、過濾，所得濾渣即為分離蛋白； (4) 稀解分離蛋白：加入軟水使底物質(zhì)濃度達(dá)7%，攪拌，使分離蛋白溶解，然后調(diào)pH = 8. 5 ； (5) 酶解I :把稀解分離蛋白溶液投入立式微波罐中，添加堿性蛋白酶占底物質(zhì)量的 2. 5 %，微波反應(yīng)20min，控制料液溫度<60°C，微波反應(yīng)結(jié)束后，55-60°C保溫20min，在微 波反應(yīng)20min中，前15min每隔5min測(cè)pH值1次：第1次若測(cè)得pH〈8時(shí)，則調(diào)pH值= 8. 2-8. 3 ;第2次若測(cè)得pH值〈7. 5時(shí)，則調(diào)pH值=7. 8-8. 0 ;第3次若測(cè)得pH值〈7. 5時(shí)， 則調(diào)pH值=7. 5 ; (6) 酶解II :當(dāng)酶解I結(jié)束后，控制料液pH值=7. 5,添加木瓜蛋白酶占底物質(zhì)量的 2. 5%，控制料液溫度<55°C，微波反應(yīng)20min，保溫20min，微波反應(yīng)的前15min每隔5min測(cè) 定1次pH值：第1次若測(cè)得pH值〈7. 0時(shí)，則調(diào)pH值=7. 2-7. 3 ;第2次若測(cè)得pH值〈6. 8 時(shí)，則調(diào)pH值=7. 0 ;第3次若測(cè)得pH值〈6. 8時(shí)，則調(diào)pH值=7. 0 ; (7) 滅活：待步驟（6)結(jié)束后，關(guān)閉微波罐的冷卻循環(huán)，開啟升溫，使料液溫度達(dá)到 80-90°C，保溫 lOmin ; (8) 沉析除雜：將酶解液排出，待溫度冷卻至40°C以下時(shí)，加入殼聚糖酸溶液，調(diào)節(jié)酶 解液pH = 5,靜置3-4h、分層、過濾下層濃液、將其干燥，溫度< 70°C，上清液和濾液為多肽 液； (9) 蒸發(fā)濃縮：將多肽液投入真空濃縮器中，減壓濃縮使其濃度>60% ; (10) 微波干燥：將步驟（9)中所得多肽濃漿投入微波干燥器中，控制溫度<65°C，得多 肽干粉； (11) 粉碎均質(zhì)：將步驟（10)中所得多肽干粉粉碎、混合均勻，即得多肽成品。
2. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟⑴中檢測(cè)溶液 中無左旋多巴的方法為，取溶液加入10%三氯化鐵試液檢驗(yàn)，若溶液不顯示藍(lán)色表示無左 旋多巴。
3. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（3)中殼聚糖的 脫乙酰度多87%。
4. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（3)中1. 5%殼 聚糖醋酸溶液，是將殼聚糖溶解于10%醋酸溶液中所得。
5. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（3)中過濾，使 用的濾布細(xì)度為300目。
6. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（5)中堿性蛋白 酶的酶活力為20萬u/g。
7. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（6)中木瓜蛋白 酶的酶活力為20萬u/g。
8. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟⑶中過濾所用 濾布細(xì)度為10 um。
9. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（8)中真空濃縮 器的工作參數(shù)為：壓強(qiáng)彡〇. 〇8MPa，溫度為50-60°C。
10. 如權(quán)利要求1所述的從貓豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步驟（11)中多肽干 粉粉碎后的細(xì)度〈80目。
【文檔編號(hào)】C12P21/00GK104480171SQ201410670753
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】梁尚文, 梁滿水, 苗城 申請(qǐng)人:南寧知本康業(yè)生物技術(shù)有限公司, 梁尚文, 梁滿水, 苗城