一種蟲草多糖的提取方法
【專利摘要】一種蟲草多糖的提取方法，涉及一種生物多糖的提取方法，所述方法包括蟲草菌培養(yǎng)、蟲草菌培養(yǎng)、蟲草多糖的提取；蟲草菌為冬蟲夏草菌-中國(guó)被毛孢（Hirsutellasinensis）,購于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存；將菌絲體和培養(yǎng)液分離，將盛有蟲草菌粉的提取液放置與超聲波破碎儀的探頭之下，旋轉(zhuǎn)旋鈕破碎，收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于-25℃冷凍干燥在35℃解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草多糖。本發(fā)明提取方法避免了超聲波破碎過程中產(chǎn)生的過氧化氫還原蟲草多糖，保留了超聲波破碎法的優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)其不足，使蟲草多糖的提取率明顯提高。
【專利說明】一種蟲草多糖的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物多糖的提取方法，特別是涉及一種蟲草多糖的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]目前隨著人們生活水平的不斷提高，冬蟲夏草多糖逐漸走進(jìn)人們的生活。蟲草多糖作為主要藥用成分被廣泛提取并應(yīng)用于眾多領(lǐng)域。超聲波法提取多糖具有提取充分，提取效率高等特點(diǎn)，然而在超聲波破碎細(xì)胞的過程中會(huì)產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫具有氧化性，會(huì)和具有還原性的蟲草多糖發(fā)生氧化還原反應(yīng)，從而降低了蟲草多糖的提取率。本發(fā)明在保留超聲波提取方法優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上，在提取液中加入一定濃度的碘化鉀溶液作為保護(hù)劑，極大程度地和超聲波破碎過程中產(chǎn)生的過氧化氫發(fā)生氧化還原反應(yīng)，從而避免了過氧化氫對(duì)蟲草多糖的氧化，使得所得蟲草多糖的提取率明顯提高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種蟲草多糖的提取方法，該方法采取超聲波破碎技術(shù)與碘化鉀結(jié)合的方法提取蟲草多糖，這種提取方法避免了超聲波破碎過程中產(chǎn)生的過氧化氫還原蟲草多糖，保留了超聲波破碎法的優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)其不足，使蟲草多糖的提取率明顯提高。
[0004]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種蟲草多糖的制備方法，步驟為:
(I)蟲草菌培養(yǎng)基制備
蟲草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g, MgS04.7H201.5g,維生素 BI 1mg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0005]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000ml，pH7_8。
[0006]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000 ml。
[0007](2)蟲草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲草菌為冬蟲夏草菌-中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis),購于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0008]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取5?10mm2大小的菌苔4?6塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為100ml/ 250ml三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為200ml/500ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0009](3)蟲草多糖的提取將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:100加人蒸餾水并加入濃度為5mg/mL的碘化鉀溶液，混勻。將盛有蟲草菌粉的提取液放置與超聲波破碎儀的探頭之下，旋轉(zhuǎn)旋鈕，調(diào)整燒杯和探頭之間的距離，使探頭沒入提取液液面3cm以下，破碎時(shí)間為300s，破碎功率為500W。離心(2500rpmX20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200mL，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12 h，3000 r/min離心15 min,收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草多糖。
[0010](4)多糖含量的測(cè)定方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:精確稱取干燥至恒重的葡萄糖10 g，加水溶解定容到1000 mL所得標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0.01 g/mL，取7支試管，分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1,0.2,0.3,0.4,0.6、0.8 mL,置于0、1、2、3、4、5、6號(hào)7支試管中，再分別加蒸懼水補(bǔ)至lmL。每支試管立即加入蒽酮試劑4.0 g，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸1min取出，用流水冷卻，室溫暗處放置lOmin，以零管調(diào)儀器零點(diǎn)。在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(g/L)作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得葡萄糖溶液濃度(C)與吸光度值(D)關(guān)系曲線的回歸方程式。
[0011]樣品多糖含量的測(cè)定:吸取I mL提取液與4 mL蒽酮溶劑混合后如上法先在沸水中加熱10 min,再在暗處放置10 min后，以蒸懼水的混合液為調(diào)零點(diǎn),在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，最后把吸光度放入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出多糖含量。
[0012]得率計(jì)算多糖提取率=多糖含量/蛹蟲草菌絲體粉末質(zhì)量X 100%。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，采取超聲波破碎技術(shù)與碘化鉀結(jié)合的方法提取蟲草多糖，這種提取方法避免了超聲波破碎過程中產(chǎn)生的過氧化氫還原蟲草多糖，保留了超聲波破碎法的優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)其不足，使蟲草多糖的提取率明顯提高。

【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述。
[0015]實(shí)施例1:
(I)蟲草菌培養(yǎng)基制備
蟲草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g, MgS04.7H201.5g,維生素 BI 1mg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0016]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000ml，pH7_8。
[0017]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000 ml。
[0018](2)蟲草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲草菌為冬蟲夏草菌-中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis),購于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0019]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取5mm2大小的菌苔4塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為10ml三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為200ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0020](3)蟲草多糖的提取
將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:100加人蒸餾水并加入濃度為5mg/mL的碘化鉀溶液，混勻。將盛有蟲草菌粉的提取液放置與超聲波破碎儀的探頭之下，旋轉(zhuǎn)旋鈕，調(diào)整燒杯和探頭之間的距離，使探頭沒入提取液液面3cm以下，破碎時(shí)間為300s，破碎功率為500W?；靹?。置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200mL,加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12 h, 3 OOO r/min離心15 min,收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草多糖。
[0021](4)多糖含量的測(cè)定方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:精確稱取干燥至恒重的葡萄糖10 g，加水溶解定容到1000 mL所得標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0.0l g/mL，取7支試管，分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1,0.2,0.3,0.4,0.6、0.8 mL,置于0、1、2、3、4、5、6號(hào)7支試管中，再分別加蒸懼水補(bǔ)至lmL。每支試管立即加入蒽酮試劑4.0 g，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸1min取出，用流水冷卻，室溫暗處放置lOmin，以零管調(diào)儀器零點(diǎn)。在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(g/L)作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得葡萄糖溶液濃度(C)與吸光度值(D)關(guān)系曲線的回歸方程式。
[0022]樣品多糖含量的測(cè)定:吸取I mL提取液與4 mL蒽酮溶劑混合后如上法先在沸水中加熱10 min,再在暗處放置10 min后，以蒸懼水的混合液為調(diào)零點(diǎn),在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，最后把吸光度放入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出多糖含量。
[0023]得率計(jì)算多糖提取率=多糖含量/蛹蟲草菌絲體粉末質(zhì)量X 100%。
[0024]實(shí)施例2:
(I)蟲草菌培養(yǎng)基制備
蟲草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g, MgS04.7H201.5g,維生素 BI 1mg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0025]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000ml，pH7_8。
[0026]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000 ml。
[0027](2)蟲草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲草菌為冬蟲夏草菌-中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis),購于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0028]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取10mm2大小的菌苔6塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為250ml三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為500ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0029](3)蟲草多糖的提取
將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:100加人蒸餾水并加入濃度為Omg/mL的碘化鉀溶液，混勻。將盛有蟲草菌粉的提取液放置與超聲波破碎儀的探頭之下，旋轉(zhuǎn)旋鈕，調(diào)整燒杯和探頭之間的距離，使探頭沒入提取液液面3cm以下，破碎時(shí)間為300s，破碎功率為500W?；靹颉Ｖ糜?5°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200mL，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12 h，3000 r/min離心15 min,收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草多糖。
[0030](4)多糖含量的測(cè)定方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:精確稱取干燥至恒重的葡萄糖10 g，加水溶解定容到1000 mL所得標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0.01 g/mL，取7支試管，分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1,0.2,0.3,0.4,0.6、
0.8 mL,置于0、1、2、3、4、5、6號(hào)7支試管中，再分別加蒸懼水補(bǔ)至lmL。每支試管立即加入蒽酮試劑4.0 g，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸1min取出，用流水冷卻，室溫暗處放置lOmin，以零管調(diào)儀器零點(diǎn)。在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(g/L)作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得葡萄糖溶液濃度(C)與吸光度值(D)關(guān)系曲線的回歸方程式。
[0031]樣品多糖含量的測(cè)定:吸取I mL提取液與4 mL蒽酮溶劑混合后如上法先在沸水中加熱10 min,再在暗處放置10 min后，以蒸懼水的混合液為調(diào)零點(diǎn),在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，最后把吸光度放入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出多糖含量。
[0032]得率計(jì)算多糖提取率=多糖含量/蛹蟲草菌絲體粉末質(zhì)量X 100%。
[0033]實(shí)施例3
(I)蟲草菌培養(yǎng)基制備
蟲草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g, MgS04.7H201.5g,維生素 BI 1mg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0034]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000ml，pH7_8。
[0035]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000 ml。
[0036](2)蟲草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲草菌為冬蟲夏草菌-中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis),購于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0037]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取6mm2大小的菌苔5塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為250ml三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為500ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0038](3)蟲草多糖粗提
將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:100加人蒸餾水并加入濃度為8mg/mL的碘化鉀溶液，混勻。將盛有蟲草菌粉的提取液放置與超聲波破碎儀的探頭之下，旋轉(zhuǎn)旋鈕，調(diào)整燒杯和探頭之間的距離，使探頭沒入提取液液面3cm以下，破碎時(shí)間為300s，破碎功率為500W?；靹?。置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200mL，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12 h，3000 r/min離心15 min,收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草多糖。
[0039](4)多糖含量的測(cè)定方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:精確稱取干燥至恒重的葡萄糖10 g，加水溶解定容到1000 mL所得標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0.0l g/mL，取7支試管，分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1,0.2,0.3,0.4,0.6、
0.8 mL,置于0、1、2、3、4、5、6號(hào)7支試管中，再分別加蒸懼水補(bǔ)至lmL。每支試管立即加入蒽酮試劑4.0 g，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸1min取出，用流水冷卻，室溫暗處放置lOmin，以零管調(diào)儀器零點(diǎn)。在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(g/L)作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得葡萄糖溶液濃度(C)與吸光度值(D)關(guān)系曲線的回歸方程式。
[0040]樣品多糖含量的測(cè)定:吸取I mL提取液與4 mL蒽酮溶劑混合后如上法先在沸水中加熱10 min,再在暗處放置10 min后，以蒸懼水的混合液為調(diào)零點(diǎn),在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，最后把吸光度放入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出多糖含量。
[0041]得率計(jì)算多糖提取率=多糖含量/蛹蟲草菌絲體粉末質(zhì)量X 100%。
【權(quán)利要求】
1.一種蟲草多糖的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下制備步驟: (1)蟲草菌培養(yǎng)基制備: 蟲草在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基；三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下: 斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g, MgS04.7H201.5g，維生素 BI 1mg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8 ; 種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000ml，pH7_8 ； 發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2P04 3g,MgS04.7H20 1.5g,維生素 BI 1mg,水 1000 ml ； (2)蟲草菌培養(yǎng): 蟲草菌為冬蟲夏草菌-中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis),購于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存； 首先從經(jīng)活化的斜面菌種取5?10_2大小的菌苔4?6塊接入種子培養(yǎng)基，裝液量為100ml/ 250ml三角瓶?jī)?nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d種子液；其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基，裝液量為200ml/500ml三角瓶中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲夏草菌絲體以及發(fā)酵液； (3)蟲草多糖的提取: 將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干；準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:100加人蒸餾水并加入濃度為5mg/mL的碘化鉀溶液，混勻；將盛有蟲草菌粉的提取液放置與超聲波破碎儀的探頭之下，旋轉(zhuǎn)旋鈕，調(diào)整燒杯和探頭之間的距離，使探頭沒入提取液液面3cm以下，破碎時(shí)間為300s，破碎功率為500W;離心(2500rpmX20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200mL，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12 h,3000 r/min離心15 min，收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草多糖。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK104450537SQ201410656206
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月18日
【發(fā)明者】楊紹斌, 趙瑩, 姜帥章 申請(qǐng)人:沈陽大學(xué)