一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，屬于磁性顆粒的制備領(lǐng)域。本發(fā)明是為了解決傳統(tǒng)磁流體制備成本高，磁性粒子在緩沖溶液中的穩(wěn)定性差，放置1個(gè)月、甚至幾天后，其分離和純化效果降低等問題。為解決上述問題，本發(fā)明提供的磁流體的制備方法包括以下內(nèi)容：將氯化鐵、氯化亞鐵和氨水分別配制成水溶液，混合攪拌后，逐滴加入油酸，得到黑色溶液A，用外加磁場(chǎng)分離得到黑色固體A；將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩后，分離得到黑色固體B；將黑色固體B分散在去離子水中，即得所述的磁流體。本發(fā)明提供的制備方法操作簡(jiǎn)單，成本低；制備而成的磁流體，磁響應(yīng)好，能實(shí)現(xiàn)核酸的快速分離和純化。
【專利說明】—種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于磁性顆粒的制備領(lǐng)域，具體涉及一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0003]核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸(簡(jiǎn)稱I？嫩)和脫氧核糖核酸(簡(jiǎn)稱0嫩X 0嫩和觀八在動(dòng)植物種都有存在，但一種病毒只含有一種核酸，0嫩或I？嫩。核酸在整個(gè)分子生物學(xué)中的所具有的無可替代的作用，分子生物學(xué)創(chuàng)立以來，一直是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。因此，核酸的提取和分離純化也是分子生物學(xué)各類實(shí)驗(yàn)不可缺少的一個(gè)環(huán)節(jié)。
[0004]大腸桿菌作為外源基因表達(dá)的宿主，遺傳背景清楚，技術(shù)操作簡(jiǎn)單，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟(jì)，倍受遺傳工程專家的重視。目前大腸桿菌是應(yīng)用最廣泛，最成功的表達(dá)體系，常做高效表達(dá)的首選體系。它的基因組0嫩為擬核中的一個(gè)環(huán)狀分子，同時(shí)可以有多個(gè)環(huán)狀質(zhì)粒0嫩。正由于大腸桿菌的上述優(yōu)點(diǎn)，人們?cè)诶么竽c桿菌表達(dá)外源基因時(shí)，常常有質(zhì)粒提取的操作。目前人們常用的質(zhì)粒提取的方法是采用酚氯仿抽提質(zhì)粒0嫩，然后用異丙醇或乙醇沉淀，此方法中需要用到酚氯仿這些有毒物質(zhì)，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員造成潛在危害。為改善實(shí)驗(yàn)人員的工作環(huán)境，目前人們采用商業(yè)的0嫩回收柱來進(jìn)行質(zhì)粒提取，此類0嫩回收柱價(jià)格昂貴，回收柱的使用是一次性的，造成大量實(shí)驗(yàn)室固體垃圾。
[0005]在基因克隆實(shí)驗(yàn)中，也常常將基因通過擴(kuò)增后，從瓊脂糖凝膠中回收目的基因。從瓊脂糖凝膠中回收的方法很多，如陰離子交換色譜純化、電洗脫至透析袋、有機(jī)溶劑抽提、瓊脂糖酶消化、柱式樹脂吸附系統(tǒng)回收等，方便快捷的回收方法及較高的回收效率在分子克隆中是十分重要的。采用市售回收試劑盒，價(jià)格較昂貴，且回收效率不穩(wěn)定；并且回收柱是一次性的，造成大量的生物實(shí)驗(yàn)耗材垃圾；目前市場(chǎng)上的0嫩回收柱的容積一般是2此，當(dāng)需要大量回收0嫩時(shí)，需要操作人員用多個(gè)回收柱進(jìn)行回收，不僅造成實(shí)驗(yàn)成本高，并且提高操作人員的工作量。
[0006]方便快捷的核酸分離和純化方法，在基因遺傳工程中十分重要。利用磁流體分離和純化核酸具有以下好處:磁性粒子具有超順磁性，在磁場(chǎng)中有較強(qiáng)的磁性，去掉磁場(chǎng)后磁性很快消失，在磁場(chǎng)中不被永久磁化，故可在外加磁場(chǎng)(如磁鐵)作用下，快速、方便地分離和純化目標(biāo)核酸。目前的磁流體制備成本高，磁性粒子在緩沖溶液中的穩(wěn)定性差，放置1個(gè)月、甚至幾天后，其分離和純化效果降低，這些都限制了磁流體在核酸分離和純化操作中的廣泛使用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為解決上述問題，本發(fā)明提供一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，制備而成的磁流體磁響應(yīng)性好，在不同緩沖液中對(duì)核酸的吸附和解吸效果佳，能方便迅速地實(shí)現(xiàn)核酸的分離或純化。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
1將氯化鐵、氯化亞鐵和氨水分別配制成水溶液，然后攪拌混合，得到混合液八；
6、向混合液八中逐滴加入油酸，繼續(xù)攪拌『1011，得到黑色溶液八，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液八中分離得到黑色固體八；
0、將黑色固體八分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩5?121！，得到黑色溶液8，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液8中分離得到黑色固體8 ；
么將黑色固體8分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0008]優(yōu)選地，步驟3中所述的氯化鐵、氯化亞鐵和氨水的水溶液的混合比例按溶質(zhì)的摩爾份數(shù)計(jì)，為2:1:8。
[0009]優(yōu)選地，步驟3中所述的攪拌混合時(shí)間為5?101??；所述的攪拌混合的同時(shí)采用油浴加熱，加熱溫度為30?501。
[0010]優(yōu)選地，步驟13中所述的用外加磁場(chǎng)從黑色溶液4中分離得到黑色固體4包括以下內(nèi)容:從黑色溶液八中用外加磁場(chǎng)收集固體后，用無水乙醇清洗固體廣3次，然后用去離子水清洗固體直到清洗液的邱=6.7?7，用外加磁場(chǎng)收集固體，即為所述的黑色固體八。
[0011]優(yōu)選地，步驟(1中所述磁流體的濃度為2?501118/1111。
[0012]本發(fā)明的有益效果如下:
1.本發(fā)明提供的用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法中，采用油酸對(duì)四氧化三鐵表面進(jìn)行修飾，對(duì)納米粒子進(jìn)行包覆，使外表面形成保護(hù)層阻止粒子團(tuán)聚，使制備而成的磁流體粒徑為納米級(jí)的，在溶液中的分散性好，增大與核酸的接觸面積。
[0013]2.本發(fā)明提供的用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法中，采用聚醚酰亞胺對(duì)磁性粒子進(jìn)行表面改性，得到表面有氨基修飾的磁性粒子，便于對(duì)核酸的分離和純化。
[0014]3.本發(fā)明提供的磁流體的制備方法，制備而成的磁流體磁響應(yīng)性好，在碘化鈉等溶膠液，或異硫氰酸胍等溶液中，能很好地吸附核酸，在去離子水或12緩沖液中，又能很好地將核酸解吸下來，達(dá)到核酸的快速分離和純化，無需離心操作，操作過程中，核酸損失少，并且不影響核酸后面的酶切等操作。

【具體實(shí)施方式】
[0015]以下實(shí)施例是為了更好地說明本發(fā)明的具體內(nèi)容，并不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0016]實(shí)施例1
一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，包括以下步驟:
￡1、將氯化鐵、氯化亞鐵和氨水分別配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶質(zhì)的摩爾份數(shù)計(jì)，為2:1:8 ；然后在油浴加熱條件下攪拌混合，加熱溫度為3(^401，攪拌混合時(shí)間為5?711，得到混合液八；
6、向混合液八中逐滴加入油酸，繼續(xù)攪拌3?711，得到黑色溶液八，從黑色溶液八中用外加磁場(chǎng)收集固體后，用無水乙醇清洗固體21次，除去多余的油酸，然后用去離子水清洗固體，除去乙醇，直到清洗液的？訴7，用外加磁場(chǎng)收集固體，即為所述的黑色固體八； 0、將黑色固體八分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩5?101！，得到黑色溶液8，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液8中將溶液去除，然后用去離子水清洗黑色固體，利用外加磁場(chǎng)分離得到黑色固體8；
么將黑色固體8分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0017]制備而成的磁流體磁響應(yīng)性好，對(duì)核酸的吸附效果好，尤其適用于質(zhì)粒的快速提取，質(zhì)粒提取時(shí)，磁流體的配制濃度為30?50呢加1。
[0018]實(shí)施例2
一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，包括以下步驟:
￡1、將氯化鐵、氯化亞鐵和氨水分別配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶質(zhì)的摩爾份數(shù)計(jì)，為2:1:8 ；然后在油浴加熱條件下攪拌混合，加熱溫度為40飛01，攪拌混合時(shí)間為5?10匕得到混合液八；
6、向混合液八中逐滴加入油酸，繼續(xù)攪拌疒1011，得到黑色溶液八，從黑色溶液八中用外加磁場(chǎng)收集固體后，用無水乙醇清洗固體21次，除去多余的油酸，然后用去離子水清洗固體，除去乙醇，直到清洗液的邱=6.7，用外加磁場(chǎng)收集固體，即為所述的黑色固體八；
0、將黑色固體八分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩7?121！，得到黑色溶液8，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液8中將溶液去除，然后用去離子水清洗黑色固體，利用外加磁場(chǎng)分離得到黑色固體8；
么將黑色固體8分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0019]制備而成的磁流體磁響應(yīng)性好，對(duì)核酸的吸附效果好，尤其適用于0嫩從瓊脂糖凝膠中的快速回收，0嫩瓊脂糖回收時(shí)，磁流體的配制濃度為2151118/1111。
[0020]實(shí)施例3
一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，包括以下步驟:
￡1、將氯化鐵、氯化亞鐵和氨水分別配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶質(zhì)的摩爾份數(shù)計(jì)，為2:1:8 ；然后在油浴加熱條件下攪拌混合，加熱溫度為35?451，攪拌混合時(shí)間為6111，得到混合液八；
6、向混合液八中逐滴加入油酸，繼續(xù)攪拌5?811，得到黑色溶液八，從黑色溶液八中用外加磁場(chǎng)收集固體后，用無水乙醇清洗固體21次，除去多余的油酸，然后用去離子水清洗固體，除去乙醇，直到清洗液的1^=6.7飛.8，用外加磁場(chǎng)收集固體，即為所述的黑色固體八；
0、將黑色固體八分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩8、?。?，得到黑色溶液8，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液8中將溶液去除，然后用去離子水清洗黑色固體，利用外加磁場(chǎng)分離得到黑色固體8；
么將黑色固體8分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0021]制備而成的磁流體磁響應(yīng)性好，對(duì)核酸的吸附效果好。
【權(quán)利要求】
1.一種用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，其特征在于包括以下步驟: a、將氯化鐵、氯化亞鐵和氨水分別配制成水溶液，然后攪拌混合，得到混合液A； b、向混合液A中逐滴加入油酸，繼續(xù)攪拌:TlOh，得到黑色溶液A，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液A中分離得到黑色固體A ; C、將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩5?12h，得到黑色溶液B，用外加磁場(chǎng)從黑色溶液B中分離得到黑色固體B ; d、將黑色固體B分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟a中所述的氯化鐵、氯化亞鐵和氨水的水溶液的混合比例按溶質(zhì)的摩爾份數(shù)計(jì)，為2:1..8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟a中所述的攪拌混合時(shí)間為5?10h ;所述的攪拌混合的同時(shí)采用油浴加熱，加熱溫度為30^50 0C ο
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟b中所述的用外加磁場(chǎng)從黑色溶液A中分離得到黑色固體A包括以下內(nèi)容:從黑色溶液A中用外加磁場(chǎng)收集固體后，用無水乙醇清洗固體2?3次，然后用去離子水清洗固體直到清洗液的PH=6.7?7，用外加磁場(chǎng)收集固體，即為所述的黑色固體A。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸分離和純化的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟d中所述磁流體的濃度為2?50mg/ml。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK104450679SQ201410656016
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月18日
【發(fā)明者】武守陽 申請(qǐng)人:成都理想財(cái)富投資咨詢有限公司