一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒，屬于生物技術(shù)檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒，主要包括無Mg2+的10×PCR緩沖液，濃度為25mM的Mgcl2溶液，濃度為0.1mM的dNTP溶液，濃度5U/μl的taq酶溶液，濃度都為10μM的上游引物溶液和下游引物溶液，所述的上游引物溶液和下游引物溶液包含一堆特異性引物，所述的一對(duì)特異性義務(wù)的核苷酸序列分別為：上游引物5，-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3，,下游引物5，-CAAGACCCAATGGCCATAGG-3，.解決現(xiàn)有技術(shù)花生根結(jié)線蟲檢測(cè)存在的靈敏度低、穩(wěn)定性差、操作煩瑣及污染環(huán)境等技術(shù)問題。
【專利說明】一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒，屬于生物技術(shù)檢測(cè)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 花生根結(jié)線蟲?。≒eanut Root Knot Nematode),俗稱地黃病、地落病、矮黃病、黃 秧病等。二齡幼蟲侵入花生的幼嫩根尖，形成不規(guī)則形根結(jié)，線蟲鉆入花生根部中柱造成根 液滲流，損耗養(yǎng)分，易引起次生病害。根結(jié)線蟲定居取食旱刺激根細(xì)胞增生，連續(xù)為害新根 根尖，使次生根結(jié)成團(tuán)(根結(jié)團(tuán))，吸收養(yǎng)分困難。病株生長(zhǎng)緩慢或萎黃不長(zhǎng)，植株矮小，始花 期葉片變黃瘦小，葉緣焦枯，提早脫落?；ㄐ∏议_花晚，結(jié)果少或不結(jié)果。線蟲還可侵害果 殼、果柄和根頸，果殼受害形成乳白突起的小瘤，后蟲瘤呈褐色瘡痂狀，但較少見。果柄和根 莖形成葡萄狀蟲瘤簇。
[0003] 花生根結(jié)線蟲病發(fā)生的輕重主要受土壤溫濕度、土質(zhì)和栽培管理?xiàng)l件的影響。土 壤溫度和濕度對(duì)幼蟲侵染影響很大。幼蟲侵染的溫度范圍為12?34°C，最適為20?26°C。 土壤含水量在20%以下和90%以上都不利于幼蟲侵入，最適侵入的土壤含水量為70%左右， 但從為害程度來看，雨水少、灌溉不及時(shí)為害重，雨水多或灌溉及時(shí)為害輕。土質(zhì)疏松的砂 壤土和砂土地發(fā)病重,黏土和低洼堿性土壤發(fā)病輕，甚至不發(fā)病。輪作田發(fā)病輕，連作田發(fā) 病重。春花生比麥茬花生發(fā)病重，早播比晚播發(fā)病重。田間寄主雜草及病殘?bào)w多的發(fā)病重。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種用于花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒，主要解決現(xiàn)有技術(shù)存在 的靈敏度低、穩(wěn)定性差、操作煩瑣及污染環(huán)境等技術(shù)問題。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒，主要包括無 Mg2+的 10XPCR緩沖液，濃度為25mM的Mgcl2溶液，濃度為0. ImM的dNTP溶液，濃度5υ/μ 1的taq 酶溶液，濃度都為10 μ Μ的上游引物溶液和下游引物溶液，所述的上游引物溶液和下游引 物溶液包含一堆特異性引物，所述的一對(duì)特異性義務(wù)的核苷酸序列分別為： 上游引物 5' -GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3' 下游引物 5 ' -CAAGACCCAATGGCCATAGG-3， 該特異性引物對(duì)花生根結(jié)線蟲擴(kuò)增的特異性片段大小為799bp。
[0006]

【具體實(shí)施方式】： 實(shí)施例1 : 一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒。
[0007] 主要包括無 Mg2+的10XPCR緩沖液，濃度為25mM的Mgcl2溶液，濃度為0. ImM的 dNTP溶液，濃度5U/ μ 1的taq酶溶液，濃度都為10 μ Μ的上游引物溶液和下游引物溶液，： 的上游引物溶液和下游引物溶液包含一堆特異性引物，一對(duì)特異性義務(wù)的核苷酸序列分別 為：上游引物 5'-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3'，下游引物 5'-CAAGACCCAATGGCCATAGG-3'。
[0008] 實(shí)施例2 :DNA的提取 調(diào)取單條線蟲放入20〇μ 1PCR管中（已加有1〇μ 1雙蒸水和5μ 1 10XPCR緩沖液(無
【權(quán)利要求】
1. 一種花生根結(jié)線蟲檢測(cè)試劑盒，主要包括無 Mg2+的10XPCR緩沖液，濃度為25mM 的Mgcl2溶液，濃度為0. ImM的dNTP溶液，濃度5U/ μ 1的taq酶溶液，濃度都為10 μ Μ的上 游引物溶液和下游引物溶液，所述的上游引物溶液和下游引物溶液包含一堆特異性引物， 所述的一對(duì)特異性義務(wù)的核苷酸序列分別為：上游引物5'-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3'，下 游引物 5' -CAAGACCCAATGGCCATAGG-3'。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104046691SQ201410285598
【公開日】2014年9月17日 申請(qǐng)日期:2014年6月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月24日
【發(fā)明者】李永鋒, 陳國(guó)勇, 傅汝毅, 陶玲云, 藍(lán)文苑 申請(qǐng)人:廣西博士海意信息科技有限公司