一種鹽霉素菌株的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鹽霉素菌株，分類命名為白色鏈霉菌(Streptomycesalbums)S-610-11，保藏編號(hào)為CCTCCM2012492。本發(fā)明采用常壓常溫等離子體誘變并結(jié)合高通量篩選方法獲得鹽霉素高產(chǎn)菌(Streptomycesalbums)S-610-11，可較大幅度提高鹽霉素的含量，且穩(wěn)定性好，菌株連續(xù)傳代5次后鹽霉素效價(jià)無(wú)明顯變化。利用搖瓶發(fā)酵，鹽霉素產(chǎn)量達(dá)56000u/ml，較出發(fā)菌株F2-1#提高了70%。本發(fā)明完全符合工業(yè)化鹽霉素生產(chǎn)菌株的誘變和篩選需要，并可應(yīng)用于工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)，具有重大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種鹽霉素菌株
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉屬于工業(yè)菌株篩選及應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及到一種鹽霉素菌株。
【背景技術(shù)】
[0002]鹽霉素是我國(guó)生產(chǎn)、使用和出口的主要獸用抗菌素之一，能有效殺滅家禽體內(nèi)的各種球蟲(chóng)，廣泛用于飼料添加劑，是理想的抗球蟲(chóng)藥、飼料添加劑。它是一類由白色鏈霉菌{Streptomyces albums)產(chǎn)生的一元羧酸聚醚系動(dòng)物專用抗生素,對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌(包括分枝桿菌和一些絲狀真菌)以及各種球蟲(chóng)有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用。鹽霉素是被美國(guó)FDA批準(zhǔn)的抗球蟲(chóng)劑，已被世界各國(guó)廣泛應(yīng)用。
[0003]鹽霉素是典型的離子載體抗生素，它對(duì)細(xì)胞中的陽(yáng)離子，尤其K+、Na+、Rb+的親和力特別強(qiáng)，使細(xì)胞生命活動(dòng)所必需的陽(yáng)離子通過(guò)膜上脂質(zhì)屏障的浸透性增強(qiáng)，可自由出入細(xì)胞，妨礙細(xì)胞內(nèi)外陽(yáng)離子的正常傳遞，使細(xì)胞內(nèi)外離子濃度發(fā)生急劇變化，打破離子的正常平衡狀態(tài)，從而使細(xì)胞的滲透壓增加，最終使細(xì)胞崩解，起到殺菌作用。
[0004]目前常用的菌種選育技術(shù)(strain improvement)根據(jù)其原理可分成隨機(jī)選育(random screening)和理性選育(rationalized selection)兩大類。雖然以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的基因工程、代謝工程以及由各種組學(xué)組成的系統(tǒng)生物學(xué)研究為定向構(gòu)建功能細(xì)胞株提供了廣闊前景，但要真正實(shí)現(xiàn)以這些功能細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)達(dá)到改造目標(biāo)卻極其困難。由于微生物體內(nèi)代謝網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性和多結(jié)點(diǎn)性，基因操作后菌株的代謝流往往并不朝著預(yù)期設(shè)計(jì)的方向轉(zhuǎn)移。尤其是在產(chǎn)生抗生素等次級(jí)代謝產(chǎn)物的復(fù)雜體系中，要想得到優(yōu)良的工業(yè)生產(chǎn)菌株，主要還是采用隨機(jī)選育技術(shù)。長(zhǎng)期以來(lái)針對(duì)Streptomyces albus菌株改良的隨機(jī)選育技術(shù)中主要是采用的是紫外誘變和LiCl誘變等傳統(tǒng)的育種手段，且已取得一定的效果，然而長(zhǎng)期使用這些誘變劑處理同一菌種，由于突變的不定向性及突變的累積使得在獲得高產(chǎn)的同時(shí)菌株在生活能力、產(chǎn)孢量等方面會(huì)明顯減弱，并且多次誘變往往導(dǎo)致較高的負(fù)突變率和抗性飽和，從而使得菌株改善的空間不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的問(wèn)題在于提供一種鹽霉素菌株。
[0006]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種鹽霉素高產(chǎn)菌，分類命名為白色鏈霉菌{Streptomyces albums) S-610-11,所述菌株保藏編號(hào)為CCTCC M 2012492。
[0007]鹽霉素高產(chǎn)菌，其分類命名為白色鏈霉菌{Streptomyces albums) S-610-11,該菌株已于2012年12月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏單位地址:武漢大學(xué)武昌珞珈山，保藏編號(hào)為CCTCC M 2012492。
[0008] 本發(fā)明所述的鹽霉素高產(chǎn)菌{Streptomyces albums) S-610-11的獲得方法是:由 申請(qǐng)人:提供以工業(yè)生產(chǎn)菌株F2-1s為出發(fā)菌株，先經(jīng)過(guò)常壓常溫等離子體(ARTP)誘變處理獲得突變株，然后通過(guò)高通量篩選技術(shù)得到高產(chǎn)突變株，最后通過(guò)搖瓶驗(yàn)證、傳代培養(yǎng)獲得遺傳性穩(wěn)定的鹽霉素高產(chǎn)菌。
[0009]本發(fā)明所述菌株的形態(tài)學(xué)、生理生化及碳源利用特征如下:
【權(quán)利要求】
1.一種鹽霉素菌株，分類命名為白色鏈霉菌{Streptomyces albums) S-610-11,其特征在于鹽霉素高產(chǎn)菌株的選育方法，具體步驟如下: (1)利用常溫常壓等離子體(ARTP)誘變出發(fā)菌株 制備出發(fā)菌株的孢子懸浮液，并在無(wú)菌風(fēng)下吹干，然后置于ARTP誘變系統(tǒng)中進(jìn)行等離子體照射I~IOmin ;將樣品用生理鹽水洗下，梯度稀釋后涂布在平板培養(yǎng)基上，避光培養(yǎng).5 ~8d ; (2)突變株高通量初篩 挑取步驟(1)所得的單菌落突變株同時(shí)用無(wú)菌牙簽點(diǎn)接種于兩塊分別裝有I~6ml固體培養(yǎng)基和0.3~1.5ml液體發(fā)酵培養(yǎng)基的24、48或96孔板中，前者25~30°C靜置培養(yǎng)4~.8d,后者 25 ~37°C、濕度 50 ~90%、200 ~300r/min 培養(yǎng) 4 ~8d ; 培養(yǎng)后，檢測(cè)各孔中發(fā)酵液的鹽霉素含量，挑出產(chǎn)素水平高于出發(fā)菌株30%的突變株，即為初篩高產(chǎn)菌株； (3)突變株高通 量復(fù)篩 將步驟(2)所得的高產(chǎn)突變株的固體培養(yǎng)物用無(wú)菌牙簽點(diǎn)接于裝有0.8^1.5ml種子培養(yǎng)基的24、48或96孔深板中，25~37°C、濕度50~90%、200~300r/min振蕩培養(yǎng)20~.28h左右； 以5~15%的接種量轉(zhuǎn)接于裝有0.8^1.5ml發(fā)酵培養(yǎng)基的24、48或96孔深板中，振蕩培養(yǎng)6~9d ;培養(yǎng) 后，檢測(cè)各孔中發(fā)酵液的鹽霉素含量，挑出產(chǎn)素水平高于出發(fā)菌株30%的突變株，即為復(fù)篩高產(chǎn)菌株； (4)突變株搖瓶驗(yàn)證 將步驟(3)所得高產(chǎn)菌株接種于裝有20~50ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，25~.35 0C >200 ~300r/min 振蕩 25 ~30h 左右； 以5~15%的接種量轉(zhuǎn)接于裝有20~50ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)5~IOd ; (5)突變株遺傳穩(wěn)定性驗(yàn)證 將經(jīng)搖瓶驗(yàn)證過(guò)的高產(chǎn)菌株經(jīng)250ml搖瓶連續(xù)培養(yǎng)3~5代。
【文檔編號(hào)】C12R1/47GK104017756SQ201410237201
【公開(kāi)日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月31日
【發(fā)明者】賈永峰, 蔡群芳, 吳黎誠(chéng), 熊莉, 陳中兵, 梁劍光, 徐順清, 唐俊, 黃海濤 申請(qǐng)人:浙江升華拜克生物股份有限公司