一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明適用于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法及應(yīng)用，該方法包括以下步驟：設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增VDR基因Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)片段的PCR引物，并通過突變PCR引物近3’端的一個堿基形成特異性PCR引物，所述特異性PCR引物的突變堿基與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的G等位基因堿基形成能被BseMII內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)；使用上述特異性PCR引物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；使用BseMII內(nèi)切酶對上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)得到酶切產(chǎn)物；對所述酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳、并分析電泳結(jié)果。本發(fā)明提供的新的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，操作簡單、且準(zhǔn)確性高。
【專利說明】—種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]維生素D受體(vitamin D receptor, VDR)是介導(dǎo)活性維生素D— 1，25 (OH) 2D發(fā)揮生物效應(yīng)的生物大分子，位于細(xì)胞膜或細(xì)胞核中。1，25 (OH)2D激素信號分子在靶細(xì)胞與VDR結(jié)合形成激素-受體復(fù)合物，該復(fù)合物作用于靶基因上的特定DNA序列，對結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。因此，1，25 (OH) 2D在維持機(jī)體鈣-磷代謝，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化等方面的重要作用是通過VDR介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。
[0003]VDR基因上存在眾多單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(Single NucleotidePolymorphisms, SNPs),它們廣泛分布于基因啟動子、外顯子和內(nèi)含子等區(qū)域。這其中的一些SNPs可能通過各種機(jī)制影響VDR基因表達(dá)或蛋白質(zhì)活性水平，從而影響到機(jī)體健康狀況。
[0004]Rsl 1568820[美國生物信息中心(National Center for BiotechnologyInformation, NCBI)的SNPs編號]是位于VDR基因啟動子上的一個SNP，并處于尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子_2 (Caudal Type Homeobox Transcription Factor2, CDX-2,為一種小腸特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子)與VDR啟動子結(jié)合的區(qū)域，故通常也叫Cdx-2位點(diǎn)。該位點(diǎn)多數(shù)情況下的等位基因?yàn)镚，少數(shù)情況下為A。 VDR上Cdx-2位點(diǎn)的A等位基因可促進(jìn)⑶X_2調(diào)節(jié)VDR啟動子的活性而提高VDR基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)小腸鈣吸收。AA基因型能降低骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)疏松性骨折、原發(fā)性侏儒癥的發(fā)病風(fēng)險，而系統(tǒng)分析發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)AA基因型與腫瘤風(fēng)險增加有關(guān)。因此，檢測Cdx-2位點(diǎn)的基因型，對研究VDR相關(guān)的生物醫(yī)學(xué)作用具有重要價值。
[0005]在眾多分析SNP的實(shí)驗(yàn)技術(shù)中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase ChainReaction, PCR)后的限制性酶切片段長度多態(tài)性(Restriction Fragment LengthPolymorphism, RFLP)分析(PCR-RFLP)通常是最為簡單、有效的技術(shù)。但在目前知道的全部限制性內(nèi)切酶中，僅有Bst4CI (或其同切口限制性內(nèi)切酶HpyCH4II1、Tsp4C1、TaaI)能夠識別VDR基因Cdx-2位點(diǎn)所在的核苷酸序列(ACN'GT)，這類內(nèi)切酶較不常用，且缺乏PCR擴(kuò)增該目的片段的理想引物。同時，也尚未見到通過引物堿基替換引入其它酶切位點(diǎn)而實(shí)現(xiàn)分析的報(bào)道。因此，此前的研究者通過測序、探針雜交或高分辨率熔解曲線法(HighResolution Melting, HRM)分析等方法來檢測該位點(diǎn)的基因型。
[0006]1.測序法。該技術(shù)是分析核苷酸(或堿基)種類及排列順序的直觀方法，需要PCR儀和測序儀等。通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增含有VDR基因Cdx-2位點(diǎn)的核酸片段，再用測序儀判讀該片段中依次排列的全部核苷酸種類，從測序報(bào)告中直接判定該DNA片段中Cdx-2位點(diǎn)的等位基因喊基。因測序原理的不同，可有不同的測序設(shè)備可選。如Illumina、AB1、LifeTechnology.Roche等等公司均有自己的品牌測序儀。這些測序設(shè)備通常含配套檢測試劑，如ABI3100/3700系列的核酸序列檢測儀，可結(jié)合ABI PRISM SNaPShot Multiplex試劑盒使用。測序設(shè)備價格相對較貴，大都在100萬元以上，配套試劑也較為封閉。這類方法大致分析流程是:特異性引物擴(kuò)增含SNPs目的片段的PCR反應(yīng)一PCR產(chǎn)物純化一純化產(chǎn)物為模版的再次PCR擴(kuò)增(如用特殊試劑盒ABI SNaPshot)—純化PCR產(chǎn)物一測序一軟件分析。
[0007]2.探針技術(shù)法。主要是使用TaqMan探針，針對含有Cdx-2位點(diǎn)的VDR基因片段設(shè)計(jì)一對特異性引物，同時，設(shè)計(jì)兩種分別帶有不同熒光染料的特異性探針。TaqMan探針是在探針5'-端標(biāo)記熒光染料，3'-端標(biāo)記熒光淬滅劑，抑制同一條探針5'-端熒光染料的熒光信號；但當(dāng)探針斷裂或分解后，位于探針兩端的熒光基團(tuán)和猝滅基團(tuán)分離，前者發(fā)出的熒光信號可被檢測，從而反映出某反應(yīng)體系中是否具有能與該探針特異性結(jié)合的目的基因片段。這一方法的實(shí)現(xiàn)，需在實(shí)時熒光定量PCR儀上設(shè)定運(yùn)行特定的溫控反應(yīng)程序。在目的DNA片段變性-退火階段，完全匹配的探針會特異性地結(jié)合到互補(bǔ)的Cdx-2等位基因片段上；擴(kuò)增目的片段的階段，特異性結(jié)合的探針會被復(fù)制延伸DNA模版的聚合酶從5'-端外切下來，發(fā)生探針分解、斷裂，通過檢測該探針?biāo)鶐У奶囟晒庑盘?，判斷探針?biāo)鶎?yīng)的某一基因型。同理，如果另一熒光染料被檢測到，說明待測DNA片段是該熒光探針?biāo)鶎?yīng)的另一基因型。
[0008]3.高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting，HRM)。該方法依賴于高精度PCR儀(如LightScanner> Roche480II等設(shè)備)和飽和染料(如LC Green)。目的基因片段在含特異性引物等PCR反應(yīng)體系中經(jīng)過變性-退火-延伸反應(yīng)后，飽和染料插入到擴(kuò)增的目的DNA雙鏈中后，發(fā)出特定波長的熒光信號；而在熔解反應(yīng)階段，雙鏈DNA會解開成為單鏈并釋放出飽和染料，熒光信號出現(xiàn)降低和消失的過程。熒光信號在整個過程中的強(qiáng)弱變化過程被儀器檢測記錄，生成熔解曲線。由于目的DNA片段不同基因型中的GC含量以及堿基互補(bǔ)性存在差異，該熔解曲線的峰值溫度和峰形會有所差異，其分辨精度可以達(dá)到對單個堿基差異的區(qū)分，即能分辨Cdx-2的C/G基因型。
[0009]測序、探針雜 交或高分辨率溶解曲線分析等方法均依賴于昂貴的儀器和試劑，以及較高的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的在于提供一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法及應(yīng)用，旨在解決由于針對VDR的Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)擴(kuò)增設(shè)計(jì)引物難度極大、導(dǎo)致無法通過常規(guī)的PCR-RFLP的方式，簡單、準(zhǔn)確地進(jìn)行VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx_2分析的問題。
[0011]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，包括以下步驟:
[0012]設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增VDR基因Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)片段的PCR引物，并通過突變PCR引物近3’端的一個堿基形成特異性PCR引物，所述特異性PCR引物的突變堿基與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的G等位基因堿基形成能被BseMII內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)；
[0013]使用上述特異性PCR弓丨物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
[0014]使用BseMII內(nèi)切酶對上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)得到酶切產(chǎn)物；
[0015]對所述酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳、并分析電泳結(jié)果。
[0016]以及，一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法在肥胖流行病學(xué)研究領(lǐng)域中的應(yīng)用。[0017]本發(fā)明提供的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，通過在用于擴(kuò)增VDR基因Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)片段的PCR引物近3’端人為突變一個堿基，從而使得該突變堿基與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的G等位基因堿基形成能被BseMII內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)，使得BseMII內(nèi)切酶能選擇性的對擴(kuò)增產(chǎn)物的酶切位點(diǎn)進(jìn)行酶切反應(yīng)，從而達(dá)到分析所述VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的基因型的目的。該方法不僅操作簡單便捷、成本低廉，且準(zhǔn)確度高。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物示意圖；
[0019]圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的VDR基因Cdx-2位點(diǎn)的RFLP電泳分析結(jié)果圖；
[0020]圖3是本發(fā)明實(shí)施例提供的VDR基因Cdx-2位點(diǎn)三種基因型的測序結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]為了使本發(fā)明要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0022]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，包括以下步驟:
[0023]SO1.設(shè)計(jì)用 于擴(kuò)增VDR基因Cdx_2多態(tài)性位點(diǎn)片段的PCR引物，并通過突變PCR弓丨物近3’端的一個堿基形成特異性PCR引物，所述特異性PCR引物的突變堿基與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的G等位基因堿基形成能被BseMII內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)；
[0024]S02.使用上述特異性PCR弓丨物擴(kuò)增Cdx_2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
[0025]S03.使用BseMII內(nèi)切酶對上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)得到酶切產(chǎn)物；
[0026]S04.對所述酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳、并分析電泳結(jié)果。
[0027]具體地，上述步驟SOl中，發(fā)明人通過NCBI網(wǎng)站下載得到VDR基因序列(GeneID:7421,NCBI Reference Sequence:NG_008731.1)，并從 SNP 數(shù)據(jù)庫查得 rsl 1568820 序列如下，對應(yīng) SED ID NO:3, SED ID NO:4，具體為 rsll568820[Homo sapiens]:
[0028]ATATTCCTGAGTAAACTAGGTCACA [A/G] TAAAAACTTATTTCTTATTATGG GT，其中上述序列中的[A/G]分別代表Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的兩種不同基因型A或G。
[0029]發(fā)明人利用Primer Premier和NEBcutter等生物學(xué)軟件的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)搜索功能，截取該SNP兩側(cè)約400bp共800bp的堿基長度，尋找酶切位點(diǎn)，僅找到Bst4CI (HpyCH4II1、Tsp4C1、TaaI)這種識別ACN'GT序列的內(nèi)切酶可用于鑒定Cdx_2位點(diǎn)基因型。但在VDR的Cdx-2位點(diǎn)兩側(cè)距離最近的上游312bp處和下游51bp處還各有一個Bst4CI識別位點(diǎn)，為方便以下進(jìn)行描述，分別將Cdx-2位點(diǎn)上下游的這2處Bst4CI識別位點(diǎn)表示為Bst4C1-312、和Bst4CI+51。因此，理論上可以在Bst4CI_312—Cdx_2位點(diǎn)之間設(shè)計(jì)上游引物，Cdx-2—Bst4CI+51之間設(shè)計(jì)下游引物，從而擴(kuò)增出只含一個Bst4CI內(nèi)切酶識別的Cdx-2位點(diǎn)。但對Cdx-2—Bst4CI+51之間的核苷酸序列分析發(fā)現(xiàn):由于該狹窄區(qū)域的GC含量很低，僅為21.5%，要想在這個50bp的區(qū)域設(shè)計(jì)出理想的引物十分困難，并隨之會增加實(shí)驗(yàn)條件摸索的難度與成本。因此，Bst4CI內(nèi)切酶鑒定VDR Cdx-2基因型的路線無法實(shí)現(xiàn)。
[0030]此外，發(fā)明人還嘗試通過截取VDR Cdx-2位點(diǎn)兩側(cè)約50bp共IOObp的堿基長度，利用SiteFind在線軟件搜索該位點(diǎn)附近可經(jīng)引物近3'-端突變1_2個堿基而形成鑒別該位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶，仍無合適結(jié)果。
[0031]經(jīng)過發(fā)明人對Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)序列反復(fù)研究發(fā)現(xiàn)，設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增VDR基因Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)片段的PCR引物時，Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)附近的序列可以通過PCR引物近3'端突變I個堿基形成特異性PCR引物，具體地，PCR引物近3'端的一個堿基A突變?yōu)閴A基T，突變后的特異性PCR引物的突變堿基與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的G等位基因堿基構(gòu)成能被SiteFind在線軟件的候選內(nèi)切酶庫中并不含有、本領(lǐng)域技術(shù)人員不會想到的BseMIl(BspCNI)內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)，所述BseMII (BspCNI)內(nèi)切酶識別序列為5-CTCAG (N) 1(|丨_3或
3-GAGTC(N)8 ? -5。向SiteFind軟件的內(nèi)切酶庫添加BseMII后，發(fā)現(xiàn)在Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)附近突變I個堿基后，擴(kuò)增產(chǎn)物將含有能被能BseMII內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)。
[0032]作為優(yōu)選實(shí)施例，為在VDR Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)附近構(gòu)建BseMII識別序列來鑒定Cdx-2基因型，所述特異性PCR引物的序列如SED ID NO: 1、SED ID N0:2所示，其上游引物用Cdx-2F表示，下游引物用Cdx-2B表示，所述Cdx-2F、Cdx-2B的序列為:
[0033]Cdx-2F:TTATATATATTCCTGAGTAAACTAGGTCTCA ；
[0034]Cdx-2B: GCGTGGAGTTAGAAAGACAGAAG?
[0035]其中Cdx_2F近3’端第三個堿基T為突變堿基，上述引物Cdx_2F、Cdx_2B經(jīng)引物評價軟件分析，此對引物的Tm值為58°C,具評分結(jié)果較好，以Primer Premier5.0評測結(jié)果為例，其Rating值達(dá)到了 84。所述引物Cdx_2F、Cdx_2B適宜的Tm值(55_65°C為宜)、良好的引物評分，適合所述Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)DNA片段的擴(kuò)增；且若PCR產(chǎn)物能被BseMII酶切，即可獲得水平凝膠電泳能夠分辨的適宜的酶切片段長度:282bp和42bp。
[0036]上述步驟S02中，使用上述特異性PCR引物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段，可以得到含有BseMII內(nèi)切酶識別位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；由于特異性PCR上游引物近3’端、與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)相距兩個堿基的位置含有人為替代的堿基T，從而使得當(dāng)Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)基因型為G時，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有能被BseMII內(nèi)切酶識別的位點(diǎn)5’ -CTCAG(N) 1(|_3’，因此PCR擴(kuò)增產(chǎn)物能被BseMII內(nèi)切酶酶切，分別得到不同長度的酶切片段；而當(dāng)Cdx_2多態(tài)性位點(diǎn)基因型為A時，此時，與BseMII內(nèi)切酶識別位點(diǎn)對應(yīng)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物序列為5’ -CTCAA(N) 1(|-3’，因此，其仍然不能被BseMII內(nèi)切酶酶切，酶切后的PCR產(chǎn)物的長度仍然保持不變。作為具體實(shí)施例，當(dāng)特異性PCR引物的序列為:
[0037]Cdx-2F:TTATATATATTCCTGAGTAAACTAGGTCTCA ；
[0038]Cdx-2B:GCGTGGAGTTAGAAAGACAGAAG 時，所述 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物如圖1 所示，其中，Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)A基因型的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物序列如SED ID NO: 5所示，Cdx_2多態(tài)性位點(diǎn)G基因型的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物序列如SED ID N0:6所示。當(dāng)Cdx_2多態(tài)性位點(diǎn)基因型為G時，經(jīng)酶切后將得到長度為282bp和42bp的酶切片段；而當(dāng)Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)基因型為A時，此時，與BseMII內(nèi)切酶識別位點(diǎn)對應(yīng)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物序列為5-CTCAA (N) 1(|_3’，因此，其仍然不能被BseMII內(nèi)切酶酶切，酶切后的PCR產(chǎn)物的長度仍然保持不變，為324bp。
[0039] 上述用于擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段可以直接從生物樣品中提取得到，當(dāng)然，也可以通過其他獲得該DNA片段的途徑獲取得到。[0040]作為優(yōu)選實(shí)施例，所述步驟S02中，所述使用特異性PCR引物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段的PCR擴(kuò)增體系為:
[0041]
[0042]
【權(quán)利要求】
1.一種分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，包括以下步驟: 設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增VDR基因Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)片段的PCR引物，并通過突變PCR引物近3’端的一個堿基形成特異性PCR引物，所述特異性PCR引物的突變堿基與Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的G等位基因堿基形成能被BseMII內(nèi)切酶識別的酶切位點(diǎn)； 使用上述特異性PCR引物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物； 使用BseMII內(nèi)切酶對上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)得到酶切產(chǎn)物； 對所述酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳、并分析電泳結(jié)果。
2.如權(quán)利要求1所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，其特征在于，所述特異性PCR引物的上游引物用Cdx-2F表示，下游引物用Cdx-2B表示，所述Cdx-2F、Cdx_2B的序列分別如SED ID NO: 1、SED ID N0:2所示，具體為:
Cdx-2F:TTATATATATTCCTGAGTAAACTAGGTCTCA ；
Cdx-2B:GCGTGGAGTTAGAAAGACAGAAG, 其中Cdx-2F近3’端第三個堿基T為突變堿基。
3.如權(quán)利要求1所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，其特征在于，所述使用特異性PCR引物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的步驟中，PCR擴(kuò)增體系為:
4.如權(quán)利要求1~3任一所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，其特征在于，所述使用特異性PCR引物擴(kuò)增Cdx-2多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的步驟中，PCR擴(kuò)增體系為:
5.如權(quán)利要求1~3任一所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，其特征在于，在所述使用BseMII內(nèi)切酶對上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)的步驟中，所述酶切反應(yīng)的反應(yīng)體系如下:
6.如權(quán)利要求1~3任一所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，其特征在于，在所述使用BseMII內(nèi)切酶對上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)的步驟中，所述酶切反應(yīng)的反應(yīng)體系如下:
7.如權(quán)利要求1~3任一所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法，其特征在于，所述電泳的條件為使用2%的瓊脂糖凝膠、以TBE為電泳緩沖液，在120V穩(wěn)壓條件下，電泳40min.
8.如權(quán)利要求1~7任一所述的分析VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)Cdx-2的方法在肥胖流行病學(xué)研究領(lǐng)域中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/68GK103952486SQ201410168692
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月23日
【發(fā)明者】周繼昌, 朱玉梅, 劉小立, 楊應(yīng)周, 楊慧, 郭平, 徐健, 車曉玲 申請人:深圳市慢性病防治中心