一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法，該復(fù)合微生態(tài)制劑包括蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌，所述蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1：1～3：1～2.5。本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)點在于：該復(fù)合微生態(tài)制劑是將干酪乳桿菌與芽孢桿菌混合培養(yǎng)，充分發(fā)揮了菌株間的協(xié)同作用，對乳酸菌的有氧代謝提供了保護，提高了設(shè)備的利用率。
【專利說明】一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種微生態(tài)制劑，尤其涉及的是一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近幾年來，隨著抗生素和化學(xué)藥物等添加劑在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的廣泛使用，人們己經(jīng)逐漸意識到抗生素和化學(xué)藥物所帶來的種種負面效應(yīng)，例如抗生素導(dǎo)致動物正常菌群失調(diào)，大量耐藥性菌株產(chǎn)生；同時藥物殘留等毒副作用，給動物、人類以及環(huán)境帶來了嚴(yán)重危害，并且降低了畜禽產(chǎn)品在市場上的競爭力，因此，許多國家相繼禁止或限制抗生素等在飼料中的應(yīng)用。鑒于抗生素的種種不利影響，國內(nèi)外的研究人員一直致力于開發(fā)一些通過調(diào)整動物胃腸道平衡和功能，以達到促進生長和維持動物健康水平等目的的新型添加劑，動物微生態(tài)制劑因其具有促生長、無毒、無副作用、無殘留等特點而引起了各國的廣泛關(guān)注和重視，使用的種類越來越多，應(yīng)用范圍也十分廣泛，其應(yīng)用于動物生產(chǎn)的良好效果己被大量試驗和生產(chǎn)實踐所證實。
[0003]微生態(tài)制劑是在微生態(tài)學(xué)理論的指導(dǎo)下，調(diào)整微生態(tài)失調(diào)，保持微生態(tài)平衡提高宿主健康水平或促進有益菌生長及其代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的一類制劑。根據(jù)定義，微生態(tài)制劑包括了益生菌、益生元和合生元三個概念。近年來，國內(nèi)外研制出多種益生菌制劑，其指導(dǎo)思想是用人或動物正常生理菌群的成員，經(jīng)過選種和人工繁殖，通過各種途徑制成活菌制劑，然后再以投入方式使其回到原環(huán)境，發(fā)揮自然的生理作用。益生菌在使用中具有促進有益菌增殖、抑制病原菌、增強機體免疫力等多種作用，因此在短時間內(nèi)已得到廣泛應(yīng)用。
[0004]芽孢桿菌是一種好氧、無害、能產(chǎn)生芽孢、耐酸堿、耐高溫和擠壓的細菌，在腸道酸性環(huán)境中具有高度的穩(wěn)定性；它能夠促進有益菌的生長，拮抗腸道內(nèi)的有害菌，增強機體免疫力，提高抗病能力；另外，`它還能分泌較強活性的蛋白酶及淀粉酶，可明顯提高動物生長速度，促進飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化，但它不能定值于腸道中，屬于腸道過路菌。目前報道較多的芽孢桿菌菌種有枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌及東洋芽孢桿菌等有益菌種類
[0005]乳酸菌是一種可以分解糖類產(chǎn)生乳酸的革蘭氏陽性菌，厭氧或者兼性厭氧生長。在動物體內(nèi)通過生物拮抗作用降低PH值，阻止和抑制致病菌的侵入和定值；降解氨、吲哚、糞臭素等有害物質(zhì)，維持腸道中正常的生態(tài)平衡；增強體液免疫和細胞免疫；可用于哺乳和斷乳期動物的飼料中。目前應(yīng)用的乳酸菌主要是來源于乳酸桿菌屬、乳酸鏈球菌屬和雙歧桿菌屬的近30種微生物，我國農(nóng)業(yè)部允許用作飼料添加劑的乳酸菌有:干酪乳桿菌、糞鏈球菌、屎鏈球菌、乳酸片球菌、嗜酸乳桿菌以及乳鏈球菌。
[0006]乳酸菌是一大類能從發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)酸的細菌，為腸道中的正常微生物，為厭氧菌或兼性厭氧菌。在生長過程中，乳酸菌不形成芽孢，抗性較差，因而在飼料制粒及制劑儲藏過程中容易失活。為提高抗性，保存較長時間，在生產(chǎn)過程中可以將其微膠囊化，但提高了生產(chǎn)成本，因此在飼料工業(yè)中應(yīng)用受到了一些限制。[0007]現(xiàn)有技術(shù)中干酪乳桿菌與芽孢桿菌的混合培養(yǎng)，由于干酪乳桿菌是兼性厭氧菌，且其生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)比芽孢桿菌復(fù)雜，如果直接混合培養(yǎng)，各菌株未能吸收到較好的營養(yǎng)，菌株活性也不是很好，進而得到的復(fù)合微生態(tài)制劑的效果并不顯著。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法，以提供一種干酪乳桿菌與芽孢桿菌的混合培養(yǎng)方法和一種新的高活性微生態(tài)制劑。
[0009]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0010]一種復(fù)合微生態(tài)制劑，所述復(fù)合微生態(tài)制劑包括蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌，所述蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:1~3:1 ~2.5。
[0011]優(yōu)選地，所述蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:3:2。
[0012]優(yōu)選地，所述蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌是從動物消化道盲腸內(nèi)容物中篩選獲得的，尤其是從雞盲腸內(nèi)容物中篩選獲得的，也可用普通蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌替代。
[0013]一種制備上述復(fù)合微生態(tài)制劑的方法，包括以下步驟:
[0014](I)取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的干酪乳桿菌，接種到MRS培養(yǎng)基中，厭氧靜置培養(yǎng)24±2小時，獲得干酪乳桿菌培養(yǎng)液；
[0015](2)取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌，分別接種到LB培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12±2小時，所述枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌優(yōu)選從動物消化道盲腸內(nèi)容物中篩選獲得，因為從消化道盲腸中篩選的枯草芽孢桿菌菌體在生長過程中可形成內(nèi)生芽胞，它在腸道短時間定植后，可以消耗大量的氧氣，維持腸道厭氧環(huán)境，增強腸道對厭氧菌的定植，抑制病原微生物同時促進乳酸菌等有益微生物的生長，并產(chǎn)生乳酸等有機酸類，降低腸道PH值，間接抑制其它致病菌的生長，同時，消化道中的枯草芽孢桿菌菌體能自身合成消化性酶類，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，在消化道中與內(nèi)源酶共同發(fā)揮作用，提高飼料消化率；另外，消化道盲腸中的蠟樣芽孢桿菌不僅能產(chǎn)生內(nèi)生孢子，而且芽孢能耐高溫，能夠耐受胃液、腸液的消化和膽汁的影響，具有較強的腸道定植力，能夠在腸道內(nèi)維持一定數(shù)量級的活菌數(shù)；本發(fā)明中，枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌也可用任何市售菌種代替；
[0016](3)先將步驟(2)的震蕩培養(yǎng)后的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例I~4:1~4進行不同比例的復(fù)合配比，測定不同配比下芽孢桿菌混合液產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的含量，篩選出產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶含量高的最佳復(fù)合比例，篩選的最佳復(fù)合比例為1:1~3，將震蕩后的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例1:1~3混合，獲得混合液，將混合液接種到LB液體培養(yǎng)基中，37 ± 1°C下220rpm繼續(xù)震蕩培養(yǎng)14± 2h，獲得芽孢桿菌培養(yǎng)液；
[0017](4)先將步驟(1)的干酪乳桿菌培養(yǎng)液與步驟(3)的芽孢桿菌培養(yǎng)液進行不同比例的復(fù)合配比，所述復(fù)合配比的比例范圍為:蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例1:1~3:1~4，測定不同復(fù)合配比下混合菌液產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的含量，篩選出產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶含量高的最佳復(fù)合比例，所述最佳復(fù)合比例為:蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例1:1~3:1~2.5 ;將干酪乳桿菌培養(yǎng)液與芽孢桿菌培養(yǎng)液按最佳復(fù)合比例進行混合，混合后的培養(yǎng)液中蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:1~3:1~2.5，即為所述復(fù)合微生態(tài)制劑。
[0018]優(yōu)選地，所述步驟(3)中，蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例1:3混合，所述步驟(4)中，蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:3:2。
[0019]優(yōu)選地，所述步驟(3)中，混合液的接種量為每IOOmL的LB液體培養(yǎng)基接種ImL混合液。
[0020]本發(fā)明的原理是:本發(fā)明首先確定了干酪乳桿菌的產(chǎn)細菌素較高時的生長時間是24~48h，混合芽孢桿菌產(chǎn)酶量較高的生長時間是14~16h，然后將干酪乳桿菌在厭氧條件下培養(yǎng)24h后，再將好氧條件下培養(yǎng)14h的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌混合液與干酪乳桿菌按比例混合，繼續(xù)培養(yǎng)10±2h，得到復(fù)合效果較好的微生態(tài)制劑，再通過不同比例的復(fù)合配比，篩選出三種細菌的最佳復(fù)合比例，得到產(chǎn)淀粉酶和產(chǎn)蛋白酶含量高的復(fù)合菌株。
[0021]本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點:本發(fā)明提供了一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法，所述復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法為液態(tài)混合發(fā)酵培養(yǎng)，彌補了固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的缺陷，實現(xiàn)了多菌株同時共發(fā)酵培養(yǎng)，制備簡單，成本低；發(fā)酵的菌液直接用于動物喂飼，達到有益菌的有效組合，使各種有益菌的優(yōu)良性能得到充分發(fā)揮；所述微生態(tài)制劑可直接用來喂飼雛雞，對雞的生產(chǎn)性能、免疫性能、腸道pH、腸道微生物等方面都有改善，有利于促進雞的生長，提高免疫力，增加飼料的消化率；另外，所述復(fù)合微生態(tài)制劑在體外抑菌試驗中，對腸道致病菌具有較好的抑菌活性，在體內(nèi)的動物喂飼實驗中，在不添加任何抗生素藥物的情況下，顯著提高了白羽肉雞的平均日增重和免疫性能，改善了白羽肉雞腸道的菌群環(huán)境，促進了白羽肉雞的生長。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為干酪乳桿菌生長曲線圖 ；
[0023]圖2為枯草芽孢桿菌生長曲線圖；
[0024]圖3為蠟樣芽胞桿菌生長曲線圖；
[0025]圖4為蠟樣芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌不同復(fù)合配比下產(chǎn)蛋白酶活性；
[0026]圖5為蠟樣芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌不同復(fù)合配比下產(chǎn)淀粉酶活性；
[0027]圖6為蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌不同復(fù)合配比下產(chǎn)蛋白酶活性；
[0028]圖7為蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌不同復(fù)合配比下產(chǎn)淀粉酶活性；
【具體實施方式】
[0029]下面結(jié)合附圖1~7對本發(fā)明的實施例作詳細說明，本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。
[0030]實施例1[0031]1、培養(yǎng)基配制
[0032]YPD培養(yǎng)基:包括10g/L的酵母粉，20g/L的蛋白胨B和20g/L的D~無水葡萄糖，115°C下滅菌15分鐘；
[0033]MRS培養(yǎng)基:包括10.0g/L的蛋白胨，8.0g/L的牛肉粉，4.0g/L的酵母粉，20.0g/L的葡萄糖，2.0g/L的磷酸氫二鉀，2.0g/L的檸檬酸氫二胺，5.0g/L的乙酸鈉，0.2g/L的硫酸鎂，0.04g/L的硫酸錳和1.0g/L的吐溫~80，25 °C下調(diào)節(jié)pH值至5.7±0.2，118°C下滅菌15分鐘；
[0034]LB培養(yǎng)基:包括10.0g/L的胰蛋白胨，5.0g/L的酵母浸粉和10.0g/L氯化鈉，25°C下調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.1，121°C下滅菌15分鐘。
[0035]以上培養(yǎng)基中加入2g/L的瓊脂，配制成固體培養(yǎng)基。
[0036]2、制備方法
[0037](I)干酪乳桿菌的培養(yǎng)
[0038]無菌條件下，取干酪乳桿菌凍干菌種，在MRS固體培養(yǎng)基上涂布，37 °C下靜置厭氧培養(yǎng)20h，挑取單菌落，在MRS固體培養(yǎng)基上進一步劃線純化，37°C培養(yǎng)20h后，挑取單菌落，接種到IOOmL的MRS液體培養(yǎng)基中，37°C下厭氧靜置培養(yǎng)，分別于26h，0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h、24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h、40h,在吸光度600nm下測定OD值，得到干酪乳桿菌的的生長曲線，所述生長曲線如圖1所示，從圖1中可以看出，干酪乳桿菌在24~48h時處于指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期，取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的干酪乳桿菌菌液，接種到MRS培養(yǎng)基中，37°C厭氧靜置培養(yǎng)24h，獲得干酪乳桿菌培養(yǎng)液；
[0039](2)芽孢桿菌的篩選
[0040]無菌條件下，取0.5g雞盲腸內(nèi)容物，加入4.5mL的無菌生理鹽水，充分震蕩搖勻后，放80°C水浴lOmin，取10(^1^菌液，加入營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，371:振蕩培養(yǎng)24h后進行倍比稀釋，倍比稀釋的稀釋度為1(Τ4、1(Τ5和1(Τ6，分別取0.1mL倍比稀釋后的菌液，涂布于YH)平板上，觀察菌落形態(tài)，再挑取單菌落，接種到生化發(fā)酵管中培養(yǎng)18~24h并觀察，根據(jù)生化鑒定管中的反應(yīng)和菌落形態(tài)，參照第八版伯杰氏細菌鑒定手冊，篩選出枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌；
[0041]將篩選出的枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌分別接種到50mL的LB液體培養(yǎng)基中，37±1 °C 下，220rpm 震蕩培養(yǎng)，分別于 0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h、24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h、40h，在吸光度600nm下測定OD值，得到兩株芽孢桿菌
的的生長曲線，結(jié)果如圖1和圖2所示，從圖中可以看出，枯草芽孢桿菌的指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的培養(yǎng)時間為12~20h，蠟樣芽孢桿菌的指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的培養(yǎng)時間為12~24h ；
[0042]取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌，分別接種到LB培養(yǎng)基中，37 ± I °C下220rpm震蕩培養(yǎng)12±2h ;
[0043](3)將步驟(2)的震蕩培養(yǎng)后的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例I~4:1~4進行不同比例的復(fù)合配比，獲得不同配比的混合液，分別取不同配比的混合液接種到LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每IOOmL的LB液體培養(yǎng)基接種ImL菌液，測出兩種芽孢桿菌不同比例混合下產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶含量，其中蛋白酶的測定采用考馬斯亮藍法，淀粉酶的測定采用碘-淀粉比色法，結(jié)果如圖4和圖5所示，從圖中可以看出，產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶含量較多的最佳復(fù)合比例為1:1~3 ;
[0044]根據(jù)上述獲得的最佳復(fù)合比例，將步驟(2)的震蕩后的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例1:1混合，獲得混合液，取1%體積比的混合液接種到LB液體培養(yǎng)基中，37±1°C下220rpm繼續(xù)震蕩培養(yǎng)14 ±2h，獲得芽孢桿菌培養(yǎng)液；
[0045](4)將步驟(1)的干酪乳桿菌培養(yǎng)液與步驟(3)的芽孢桿菌培養(yǎng)液進行不同比例的復(fù)合配比，所述復(fù)合配比的比例范圍為:蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例1:1~3:1~4，測定不同復(fù)合配比下混合菌液產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的含量，篩選出產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶含量高的最佳復(fù)合比例，結(jié)果如圖6和圖7所示，從圖中可以看出，所述最佳復(fù)合比例為:蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例1:1~3:1 ~2.5 ;
[0046]根據(jù)上述最佳復(fù)合比例，將步驟(1)干酪乳桿菌培養(yǎng)液與步驟(3)的芽孢桿菌培養(yǎng)液按最佳復(fù)合比例進行混合，混合后的培養(yǎng)液中蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:1:1，即為所述復(fù)合微生態(tài)制劑。
[0047]實施例2
[0048]本實施例中，培養(yǎng)基配制與實施例1相同，制備方法包括以下步驟:
[0049](I)干酪乳桿菌的培養(yǎng)
[0050]無菌條件下，取干酪乳桿菌凍干菌種，在MRS固體培養(yǎng)基上涂布，37 °C下靜置厭氧培養(yǎng)20h，挑取單菌落，在MRS固體培養(yǎng)基上進一步劃線純化，37°C培養(yǎng)20h后，挑取單菌落，接種到IOOmL的MRS液體培養(yǎng)基中，厭氧條件下靜置培養(yǎng)24h，此時干酪乳桿菌進入指數(shù)生長后期或穩(wěn)定期后期，取培`養(yǎng)后的菌液，接種到MRS培養(yǎng)基中，37°C厭氧靜置培養(yǎng)24h，獲得干酪乳桿菌培養(yǎng)液；
[0051](2)芽孢桿菌的培養(yǎng)
[0052]無菌條件下,取0.5g雞盲腸內(nèi)容物,加入4.5mL的無菌生理鹽水，充分震蕩搖勻后，放80°C水浴lOmin，取100μ L菌液，加入營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)24h后進行倍比稀釋，倍比稀釋的稀釋度為1(Τ4、1(Τ5和1(Τ6，分別取0.1mL倍比稀釋后的菌液，涂布于YH)平板上，觀察菌落形態(tài)，再挑取單菌落，接種到生化發(fā)酵管中培養(yǎng)18~24h并觀察，根據(jù)生化鑒定管中的反應(yīng)和菌落形態(tài)，參照第八版伯杰氏細菌鑒定手冊，篩選出枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌；
[0053]將篩選出的枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌分別接種到50mL的LB液體培養(yǎng)基中，37土 1°C下220rpm震蕩培養(yǎng)，取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌，再分別接種到LB液體培養(yǎng)基中，37 ± I °C下220rpm震蕩培養(yǎng)12h ；
[0054](3)將步驟(2)的震蕩培養(yǎng)后的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例1:3混合，獲得混合液，取1%體積比的混合液接種到LB液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，獲得芽孢桿菌培養(yǎng)液；
[0055](4)將步驟(1)干酪乳桿菌培養(yǎng)液與步驟(3 )的芽孢桿菌培養(yǎng)液混合，混合后的培養(yǎng)液中蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:3:2，即為所述復(fù)合微生態(tài)制劑。
[0056]實施例3[0057]本實施例中，步驟(3)的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的細菌濃度比例為1:3 ;步驟(4)的混合后的培養(yǎng)液中，蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為I:3:2.5，其余步驟及培養(yǎng)基配制同實施例2。
[0058]將實施例1~3制備獲得的復(fù)合微生態(tài)制劑分別喂飼I日齡白羽肉雞雛雞，將雛雞分成四組，每組15只，在I~42天內(nèi)測定平均日增重，并測定白羽肉雞在42d時的免疫器官指數(shù)，空白對照組中，將微生態(tài)制劑用水代替，陽性對照為乳酸菌，芽孢桿菌，酵母鋅，酵母硒復(fù)合配制的復(fù)合微生態(tài)制劑，測定結(jié)果如下表1所示:
[0059]表1:復(fù)合微生態(tài)制劑對白羽肉雞平均日增重及免疫器官指數(shù)的影響分析
【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于，所述復(fù)合微生態(tài)制劑包括蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌，所述蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:1 ~3:1 ~2.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:3:2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌是從消化道盲腸內(nèi)容物中篩選獲得的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌是從雞盲腸內(nèi)容物中篩選獲得的。
5.一種制備如權(quán)利要求1所述復(fù)合微生態(tài)制劑的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的干酪乳桿菌，接種到MRS培養(yǎng)基中，厭氧靜置培養(yǎng)24±2小時，獲得干酪乳桿菌培養(yǎng)液； (2)取指數(shù)生長后期至穩(wěn)定期后期的枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌，分別接種到LB培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12±2小時； (3)將步驟(2)的震蕩培養(yǎng)后的蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例1:1~3混合，獲得混合液，將混合液接種到LB液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，震蕩培養(yǎng)14±2小時；，獲得芽孢桿菌培養(yǎng)液； (4)將步驟(1)的干酪乳桿菌培養(yǎng)液與步驟(3)的芽孢桿菌培養(yǎng)液混合，混合后的培養(yǎng)液中蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:1~3:1~2.5，即為所述復(fù)合微生態(tài)制劑。
6.根 據(jù)權(quán)利要求5所述的一種制備復(fù)合微生態(tài)制劑的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按細菌濃度比例1:3混合，所述步驟(4)中，蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和干酪乳桿菌的細菌濃度比例為1:3:2。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種制備復(fù)合微生態(tài)制劑的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，混合液的接種量為每IOOmL的LB液體培養(yǎng)基接種ImL混合液。
【文檔編號】C12N1/20GK103865854SQ201410103781
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月18日
【發(fā)明者】祁克宗, 謝玲玲, 涂健, 汪雪雁, 薛秀恒, 付瑞燕, 張明 申請人:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)