適用于大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白的培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種適用于大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白的培養(yǎng)基（PCY），是由下述原料按比例配制而成：磷酸鹽和氯鹽混合溶液200ml/L，20%葡萄糖溶液20ml/L，酵母浸粉30g/L；在每升磷酸鹽和氯鹽混合溶液中，Na2HPO4·12H2O含量為85.481g，KH2PO4含量為15g，NaCl含量為2.5g，NH4Cl含量為5.0g。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于成本低，其中酵母浸粉的存在給大腸桿菌的生長(zhǎng)提供了可用的有機(jī)氮源，保證了大腸桿菌在該培養(yǎng)基中能正常生長(zhǎng)，并且通過(guò)PCY培養(yǎng)基發(fā)酵獲得的目的蛋白的產(chǎn)量相對(duì)比較高，如果用此培養(yǎng)基在同一條件下和運(yùn)用LB培養(yǎng)基發(fā)酵獲得的目的蛋白產(chǎn)量相比，用此培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)量可提高10%左右，滿足了后續(xù)藥效研究的需要。
【專利說(shuō)明】適用于大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白的培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及基因工程研究中所用的培養(yǎng)基，尤其是涉及一種適用于大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白的培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]通過(guò)采用基因工程手段將麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)與幽門螺旋桿菌中性粒細(xì)胞激活蛋白(HP-NAP)進(jìn)行融合得到重組蛋白rMBP-NAP，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌疋coli TBl中，再運(yùn)用LB培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵并用IPTG對(duì)疋coli TBl進(jìn)行誘導(dǎo)，使其表達(dá)重組蛋白rMBP-NAP，然后再進(jìn)行后續(xù)的一些藥效研究。研究中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)這種發(fā)酵方式得到的重組蛋白產(chǎn)量很低，而且LB培養(yǎng)基中各個(gè)組分的成本又很高。如果要進(jìn)行正常的藥效研究，就需要獲得大量的重組蛋白，所以現(xiàn)有的LB培養(yǎng)基已滿足不了研究需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種適用于大腸桿菌疋coli TBl發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白rMBP-NAP的培養(yǎng)基。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案:` 本發(fā)明所述的適用于大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白的培養(yǎng)基(PCY)，是由下述原料按比例配制而成:磷酸鹽和氯鹽混合溶液200ml/L，20%葡萄糖溶液20ml/L，酵母浸粉30g/L ;所述磷酸鹽和氯鹽混合溶液中，Na2HPO4.12Η20含量為85.481 g/L，KH2PO4含量為15g/L，NaCl含量為 2.5g/L，NH4Cl 含量為 5.0g/L。。
[0005]本發(fā)明培養(yǎng)基(PCY)的配制方法如下:
首先按上述比例配制磷酸鹽和氯鹽混合溶液，高溫高壓滅菌后儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?br> 配制20%葡萄糖溶液，0.22 μ m濾器過(guò)濾除菌后備用；
按一定體積配制酵母浸粉溶液，高溫高壓滅菌后備用；
將磷酸鹽和氯鹽混合溶液、酵母浸粉溶液冷卻后混合，最后加入20%的葡萄糖溶液即可。
[0006]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于用上述原料配制的培養(yǎng)基(PCY)成本低，培養(yǎng)基成分主要由磷酸鹽和氯鹽以及葡萄糖和酵母粉組成，而且葡萄糖用量很少，其中酵母浸粉的存在給大腸桿菌的生長(zhǎng)提供了可用的有機(jī)氮源，保證了大腸桿菌疋coli TBl在該培養(yǎng)基中能正常生長(zhǎng)，并且通過(guò)PCY培養(yǎng)基發(fā)酵獲得的目的蛋白rMBP-NAP的產(chǎn)量相對(duì)比較高，如果用此培養(yǎng)基在同一條件下和運(yùn)用LB培養(yǎng)基發(fā)酵獲得的目的蛋白產(chǎn)量相比，用此培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)量可提高10%左右，滿足了后續(xù)藥效研究的需要。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0007]圖1是SDS-PAGE電泳分析圖譜結(jié)果?！揪唧w實(shí)施方式】
[0008]下面以配制終體積為IL的PCY培養(yǎng)基為例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0009]1、分別稱取 Na2HPO4.12H20 85.481g, KH2PO4 15g，NaCl 2.5g , NH4Cl 5.0g，將其溶解在IL的蒸餾水中，制得磷酸鹽和氯鹽混合溶液，高溫(121°C)高壓(0.15MPa)滅囷后冷卻備用；
2、配制20%的葡萄糖溶液20ml，0.22 μ m濾器過(guò)濾除菌后備用；
3、稱取30g酵母浸粉，用少量蒸餾水溶解后，定容至780ml，高溫(121°C)高壓(0.15MPa)滅菌后冷卻備用；
4、待磷酸鹽和氯鹽混合溶液、酵母浸粉溶液冷卻至40-50°C時(shí)，取磷酸鹽和氯鹽混合溶液200ml，葡萄糖溶液20ml與780ml的酵母浸粉溶液在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行混合，得到終體積為IL的PCY培養(yǎng)基。
[0010]如果在發(fā)酵罐中進(jìn)行本培養(yǎng)基的配制操作時(shí)，可以先將磷酸鹽和氯鹽混合溶液配制好滅菌備用，20%葡萄糖溶液配制好滅菌備用；將酵母浸粉用蒸餾水溶解后在發(fā)酵罐中進(jìn)行實(shí)罐滅菌，冷卻后用火圈接種的形式將前兩種已經(jīng)滅菌后的溶液與酵母浸粉溶液進(jìn)行混合然后使用。
[0011]表1為大腸桿菌疋coli TBl分別在六種不同培養(yǎng)基中發(fā)酵終止后得到的終止OD600和表達(dá)量以及干重。
[0012]表1
【權(quán)利要求】
1.一種適用于大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組蛋白的培養(yǎng)基，其特征在于:它是由下述原料配制而成:磷酸鹽和氯鹽混合溶液200ml/L，20%葡萄糖溶液20ml/L，酵母浸粉30g/L ;所述磷酸鹽和氯鹽混合溶液中，Na2HPO4.12H20含量為85.481g/L，KH2PO4含量為15g/L，NaCl含量為 2.5g/L，NH4Cl 含量為 5 .0g/L。
【文檔編號(hào)】C12P21/02GK103757077SQ201410023165
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】康巧珍, 宋祺, 魯吉珂, 汲振余, 劉鑫, 王婷 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)