專利名稱：一種用于乳腺癌藥敏檢測(cè)的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測(cè)試的裝置，具體地說(shuō)，涉及一種用于乳腺癌藥敏檢測(cè)的試劑盒。
背景技術(shù)：
乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤。2011年美國(guó)CA:A Cancer JournalforClinicians雜志公布的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，美國(guó)2011年預(yù)計(jì)將有230480例女性罹患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的30%，排名女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位。在我國(guó)北京、上海、天津等大城市的統(tǒng)計(jì)顯示乳腺癌同樣是我國(guó)女性最常見的惡性腫瘤，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。乳腺癌的化療藥物從20世紀(jì)70年代的環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶，到80年代的蒽環(huán)類藥物阿霉素、表柔比星，再到90年代的紫杉類藥物紫杉醇、多西他賽的問(wèn)世，已經(jīng)成為乳腺癌治療中重要的治療方式，無(wú)論在乳腺癌的術(shù)前新輔助、術(shù)后的輔助治療還是復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者的解救治療中都占有非常重要的位置。目前蒽環(huán)類和紫杉類仍然是乳腺癌治療中非常重要的兩大類藥。其他常用乳腺癌化療藥物還有:長(zhǎng)春瑞濱、吉西他濱、卡培他濱、鉬類、烷化劑、氨甲喋呤等。盡管化療在惡性腫瘤的治療中占有非常重要的地位，但是在臨床實(shí)踐中，結(jié)果往往不盡如人意。其中，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥是導(dǎo)致腫瘤化療失敗的常見因素，也是困擾腫瘤治療的關(guān)鍵性難題。耐藥問(wèn)題是極為普遍的臨床問(wèn)題，據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，90%以上因腫瘤死亡的患者在不同程度上受到耐藥影響。腫瘤細(xì)胞耐藥分為原發(fā)性和獲得性耐藥兩大類。目前臨床上通常的做法是，根據(jù)國(guó)際腫瘤臨床試驗(yàn)的循證 研究結(jié)果，得知不同的化療藥物對(duì)不同腫瘤的治療敏感性不同，即每一種腫瘤有相應(yīng)有效的化療藥物敏感譜，從而選擇療效最高的化療單藥或多種藥物組成的聯(lián)合方案進(jìn)行治療。但在臨床上經(jīng)常碰到這樣的情況，經(jīng)循證研究公認(rèn)為對(duì)某種腫瘤有效的治療方案，而對(duì)有的患者卻毫無(wú)效果。如阿霉素對(duì)浸潤(rùn)性乳腺癌是一種具有里程碑意義的治療藥物，但仍有50%的浸潤(rùn)性乳腺癌病人對(duì)這種藥不敏感。又如健擇，對(duì)乳腺癌公認(rèn)的療效明顯，但也有60%以上的病人療效并不明顯。腫瘤對(duì)各種化療藥物存在著明顯的個(gè)體差異。即不同的腫瘤類型或同一類型的不同病人，甚至同一病人在不同的發(fā)病階段，對(duì)化療的敏感性并不完全相同，治療效果差別也很大。至今還沒有一種化療藥物或幾種化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用，能對(duì)某一種腫瘤100%有效。臨床上，用同一種化療藥物或同一種化療方案治療不同的腫瘤患者，顯然帶有一定的盲目性。因此，在化療前針對(duì)不同的患者進(jìn)行腫瘤藥敏試驗(yàn)來(lái)選擇有效化療藥物進(jìn)行化療顯得十分必要。為此,建立一種像細(xì)菌敏感試驗(yàn)一樣,通過(guò)相對(duì)可靠的敏感試驗(yàn)方法,對(duì)不同的病人準(zhǔn)確篩選敏感的化療藥物，并確定其劑量，真正實(shí)現(xiàn)臨床的個(gè)體化用藥。目前腫瘤藥敏試驗(yàn)操作所需的藥物以臨用現(xiàn)配為主，腫瘤藥敏試驗(yàn)需要測(cè)試多種抗腫瘤藥物，藥液配制稀釋繁瑣，且腫瘤藥敏試驗(yàn)所需抗腫瘤藥物劑量小，取樣不便。部分藥物溶液狀態(tài)下保存時(shí)間短，剩余部分只能報(bào)廢，造成藥物的浪費(fèi)，尤其是價(jià)格昂貴的藥物。CN93111551.5公開了腫瘤化療藥物敏感預(yù)測(cè)試劑配制方法及試劑盒，該專利將8種常用抗腫瘤藥物按設(shè)定劑量預(yù)裝于標(biāo)本瓶?jī)?nèi)。但該方法不便于聯(lián)合化療方案的測(cè)試，且不便于方案的劑量調(diào)整。cN03102260.X采用預(yù)制藥敏檢測(cè)板的方法，將抗腫瘤藥物按計(jì)算劑量加入檢測(cè)板內(nèi)，凍干、包裝，用于腫瘤藥敏試驗(yàn)。該方法同樣不便于聯(lián)合化療方案的測(cè)試，且不便于方案的劑量調(diào)整。臨床目前有少量采用抗腫瘤藥物臨時(shí)配制的方法進(jìn)行抗腫瘤藥物藥敏測(cè)試，但是，該方法存在許多問(wèn)題:配制藥物的準(zhǔn)確濃度未知，所配制藥液的準(zhǔn)確性存疑；臨床口服抗腫瘤藥物的抗腫瘤藥物藥敏測(cè)試無(wú)法進(jìn)行；個(gè)體操作誤差大。為了便于腫瘤藥敏試 驗(yàn)的操作以及節(jié)約成本，我們將各種常用的乳腺癌抗腫瘤藥物制備成劑量準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、能夠在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中快速溶解的無(wú)菌藥膜。并將藥膜按使用劑量進(jìn)行準(zhǔn)確的切片，分裝。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測(cè)試的裝置，具體地說(shuō)，涉及一種用于乳腺癌藥敏測(cè)試的試劑盒。本實(shí)用新型技術(shù)方案如下:一種乳腺癌藥敏檢測(cè)的試劑盒，由盒體、藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說(shuō)明書組成，藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說(shuō)明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件包括乳腺癌藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件還包括藥物活化酶包裝。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，乳腺癌藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，乳腺癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨(dú)立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的乳腺癌藥物藥膜選自紫杉醇膜、多西他賽藥膜，阿霉素膜、表柔比星膜、環(huán)磷酰胺膜、甲氨蝶呤膜、氟尿嘧啶膜、卡培他濱膜、卡鉬膜、吉西他濱膜、長(zhǎng)春瑞濱膜中一種或者兩種以上。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。作為優(yōu)選，上述所述的試劑盒，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。優(yōu)選的，上述所述的試劑盒，其特征在于所述的預(yù)裝培養(yǎng)板是乳腺癌藥敏檢測(cè)板，其為預(yù)裝24孔培養(yǎng)板，孔預(yù)裝藥膜如下:2個(gè)孔中無(wú)藥膜2個(gè)孔中預(yù)裝空白藥膜2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜、環(huán)磷酰胺膜和多西他賽膜2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜和多西他賽膜2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜和環(huán)磷酰胺膜[0027]2個(gè)孔中預(yù)裝氟尿嘧啶膜、阿霉素膜和環(huán)磷酰胺膜2個(gè)孔中預(yù)裝甲氨蝶呤膜、環(huán)磷酰胺膜和氟尿嘧啶膜2個(gè)孔中預(yù)裝表柔比星膜和環(huán)磷酰胺膜2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜、表柔比星膜和氟尿嘧啶膜2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜和紫杉醇膜2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜和多西他賽膜2個(gè)孔中預(yù)裝紫杉醇膜和吉西他濱膜。本實(shí)用新型是一種用于乳腺癌抗腫瘤藥敏測(cè)試的試劑盒，試劑盒中藥敏測(cè)試組件包裝形式為將乳腺癌藥物藥膜與24孔細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝的預(yù)裝培養(yǎng)板和獨(dú)立的藥膜包裝與空白24孔細(xì)胞培養(yǎng)板組合的可調(diào)式套裝兩種。每個(gè)可調(diào)式套裝中含有一個(gè)乳腺癌常用的抗腫瘤藥物藥膜包裝盒、一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板。藥膜包裝上有每一種藥膜的代號(hào)，每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板附帶一張標(biāo)示卡，用于標(biāo)記各孔內(nèi)的藥物成分。各種抗腫瘤藥膜和空白藥膜均分別置于獨(dú)立的無(wú)菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。各種藥物活化酶均分別置于獨(dú)立的無(wú)菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，標(biāo)示卡為24格，用于標(biāo)記各孔內(nèi)的藥物成分。使用時(shí)，將空白對(duì)照、空白藥膜對(duì)照和各種化療方案分別標(biāo)記于標(biāo)示卡上，按標(biāo)示卡內(nèi)容向細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)添加藥膜，加入腫瘤細(xì)胞懸液，振蕩使藥膜溶解混勻。預(yù)裝培養(yǎng)板所設(shè)定的化療方案參考最新的診療指南的標(biāo)準(zhǔn)化療方案制訂。按設(shè)定方案將藥膜裝入培養(yǎng)板各孔中。本實(shí)用新型中所述的藥物藥膜，通常地，藥物藥膜按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和I % 20%增塑劑。其中，所述的成膜材料包括但不限于聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯胺類、聚乙烯氨基縮醛衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、明膠、阿拉伯膠、蟲膠、瓊脂、海藻酸及其鹽、玉米朊、淀粉、糊精、白芨膠等。優(yōu)選使用聚乙烯醇04-88和聚乙烯醇05-88。所述的增塑劑選自甘油、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、山梨醇、檸檬酸三乙酯等。本實(shí)用新型中所述的藥物藥膜，可以用本領(lǐng)域中常規(guī)方法制備，例如可以按如下方法制得乳腺癌藥物藥膜:(I)將成膜材料加入水中，攪拌溶解或加熱溶解；(2)加入增塑劑和抗腫瘤藥物，攪拌溶解均勻，采用加熱、靜置或超聲等方式脫氣;(3)將上述溶液涂布于制膜設(shè)備，采用熱風(fēng)或冷風(fēng)等方式干燥；(4)脫膜，測(cè)定含量，并按照測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分劑量分割；(5)將分割后的藥膜采用放射線照射滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌,優(yōu)選放射線照射滅菌。各種腫瘤化療藥物藥膜參考藥物在人體內(nèi)的血漿峰值濃度制備，根據(jù)藥膜含量測(cè)定結(jié)果，將每片藥膜切割為含Iml血漿峰值濃度的化療藥物，空白藥膜切割面積1cm2。為了便于腫瘤藥敏測(cè)試的操作，藥膜需要能快速溶解于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中。因此成膜材料要易于溶解，膜的厚度 和面積要控制在合適的范圍，保證溶解速度和機(jī)械強(qiáng)度。厚度優(yōu)選0.04mm 0.15mm。形狀可為圓形、正方形或長(zhǎng)方形,面積優(yōu)選為0.5cm2 16cm2,以適應(yīng)相應(yīng)規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng)板。本發(fā)明Icm2大小的膜劑可在Iml培養(yǎng)液中于100秒內(nèi)溶解。所述的空白藥膜，是指不含乳腺癌藥物的藥膜，可以按照上述乳腺癌藥物藥膜方法進(jìn)行制備，但不加入乳腺癌藥物。本實(shí)用新型在進(jìn)行乳腺癌藥敏測(cè)試中，不僅提高腫瘤藥敏測(cè)試的操作效率，使操作簡(jiǎn)便，而且大大提高了藥敏測(cè)試的準(zhǔn)確性，大大減少測(cè)試藥物用量，節(jié)約用藥成本，提高藥敏測(cè)試的經(jīng)濟(jì)性，特別是，也適用于聯(lián)合化療的藥敏測(cè)試。

圖1:實(shí)施例1實(shí)用新型中乳腺癌藥敏檢測(cè)預(yù)裝24孔培養(yǎng)板俯視圖；圖2:實(shí)施例1實(shí)用新型中乳腺癌藥敏檢測(cè)預(yù)裝24孔培養(yǎng)板平視圖；圖3:實(shí)施例1實(shí)用新型中標(biāo)示卡。其中:圖1、2中,A-D為培養(yǎng)板的孔行號(hào)，1-6為培養(yǎng)板的孔列號(hào),孔對(duì)應(yīng)的行號(hào)和列號(hào)的組合即為孔的編號(hào)，例如:A6孔表不培養(yǎng)板的第A行第6列的孔。圖3中,標(biāo)不卡中每格編號(hào),對(duì)應(yīng)于培養(yǎng)板的孔編號(hào)。培養(yǎng)板各孔中，預(yù)裝藥膜如下:A1-A2空白(無(wú)藥膜, 空白對(duì)照)A3-A4空白藥膜(藥膜不含藥物，空白藥膜對(duì)照)A5-A6阿霉素膜、環(huán)磷酰胺膜和多西他賽膜B1-B2環(huán)磷酰胺膜和多西他賽膜B3-B4阿霉素膜和環(huán)磷酰胺膜B5-B6氟尿嘧啶膜、阿霉素膜和環(huán)磷酰胺膜C1-C2甲氨蝶呤膜、環(huán)磷酰胺膜和氟尿嘧啶膜C3-C4表柔比星膜和環(huán)磷酰胺膜C5-C6環(huán)磷酰胺膜、表柔比星膜和氟尿嘧啶膜D1-D2阿霉素膜和紫杉醇膜D3-D4阿霉素膜和多西他賽膜D5-D6紫杉醇膜和吉西他濱膜。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:用于乳腺癌藥物藥敏檢測(cè)試劑盒本實(shí)用新型試劑盒，由盒體、乳腺癌藥敏檢測(cè)預(yù)裝24孔培養(yǎng)板(圖1、2)、標(biāo)示卡(圖3)和說(shuō)明書組成。乳腺癌藥敏測(cè)試預(yù)裝24孔培養(yǎng)板、標(biāo)示卡和說(shuō)明書置于盒中。說(shuō)明書是解釋和介紹試劑盒，便于使用者正確使用本試劑盒。于化療前取I例乳腺癌患者的癌新鮮組織塊，置于生理鹽水中(含20萬(wàn)單位/ml青霉素、25萬(wàn)單位/ml鏈霉素)，在超凈工作臺(tái)上，剪除脂肪、纖維等正常組織，以及壞死和血污組織，用帶抗生素的無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)液沖洗干凈組織，剪成0.5 Icm3左右，力口入組織消化酶(胰酶、膠原酶)消2 3h，使組織塊成為單個(gè)細(xì)胞漏過(guò)銅網(wǎng)，離心棄上清，力口含10%血清的RPMI1640培養(yǎng)液吹打成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)并調(diào)細(xì)胞濃度至I X 106/ml。細(xì)胞懸液種于圖1或圖2的預(yù)裝24孔培養(yǎng)板中(lml/孔)，振蕩使藥膜溶解混勻，并記錄于圖3標(biāo)示卡中。37°C、5%二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)24小時(shí)。離心收集懸浮細(xì)胞，微量離心機(jī)轉(zhuǎn)速2000RPM，離心時(shí)間5min，棄培養(yǎng)基。用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次(2000RPM，離心時(shí)間5min收集細(xì)胞)。用400μ1 IX Binding Buffer懸浮細(xì)胞，濃度大約為I X 106/ml。在細(xì)胞懸浮液中加入5 μ IAnnexinV-FITC,輕輕混勻后于2_8°C避光條件下孵育15分鐘。加Λ 10 μ IPI后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。在I小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)照組及藥物組細(xì)胞凋亡及壞死的數(shù)量，計(jì)算藥物的抑制率，評(píng)估藥物的敏感度。結(jié)果見表I。表I供篩選化療方案的抑制率
權(quán)利要求1.一種用于乳腺癌藥敏檢測(cè)的試劑盒，由盒體、藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說(shuō)明書組成，藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說(shuō)明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件包括乳腺癌藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，如果需要，所述的藥敏測(cè)試組件還可包括藥物活化酶包裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，乳腺癌藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，乳腺癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨(dú)立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述的乳腺癌藥物藥膜選自紫杉醇膜、多西他賽藥膜，阿霉素膜、表柔比星膜、環(huán)磷酰胺膜、甲氨蝶呤膜、氟尿嘧啶膜、卡培他濱膜、卡鉬膜、吉西他濱膜、長(zhǎng)春瑞濱膜中一種或者兩種以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述的預(yù)裝培養(yǎng)板是乳腺癌藥敏檢測(cè)板，其為預(yù)裝24孔培養(yǎng)板，孔預(yù)裝藥膜如下: 2個(gè)孔中無(wú)藥膜 2個(gè)孔中預(yù)裝空白藥膜 2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜、環(huán)磷酰胺膜和多西他賽膜 2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜和多西他賽膜 2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉 素膜和環(huán)磷酰胺膜 2個(gè)孔中預(yù)裝氟尿嘧啶膜、阿霉素膜和環(huán)磷酰胺膜 2個(gè)孔中預(yù)裝甲氨蝶呤膜、環(huán)磷酰胺膜和氟尿嘧啶膜 2個(gè)孔中預(yù)裝表柔比星膜和環(huán)磷酰胺膜 2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜、表柔比星膜和氟尿嘧啶膜 2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜和紫杉醇膜 2個(gè)孔中預(yù)裝阿霉素膜和多西他賽膜 2個(gè)孔中預(yù)裝紫杉醇膜和吉西他濱膜。
專利摘要本實(shí)用新型提供一種用于乳腺癌藥敏檢測(cè)的試劑盒，由盒體、藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說(shuō)明書組成，藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說(shuō)明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件包括乳腺癌藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板，其中，乳腺癌藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板，或者乳腺癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨(dú)立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。本實(shí)用新型在進(jìn)行乳腺癌抗腫瘤藥敏檢測(cè)中，不僅提高腫瘤藥敏測(cè)試的操作效率，使操作簡(jiǎn)便，而且大大提高了藥敏測(cè)試的準(zhǔn)確性，大大減少測(cè)試藥物用量，節(jié)約用藥成本，提高藥敏測(cè)試的經(jīng)濟(jì)性，特別是，也適用于聯(lián)合化療的藥敏檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12M1/34GK203144410SQ2013201607
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月26日
發(fā)明者邱瑞寶, 朱美霞, 陶征宇, 戚文榮, 張發(fā)明, 吳明輝, 鄧鋼 申請(qǐng)人:蘇州麥克威爾生物醫(yī)藥科技有限公司