專利名稱：一種用于抗腫瘤藥敏檢測的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測試的裝置，具體地說，涉及一種用于抗腫瘤藥敏檢測的試劑盒。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類生命和健康的常見病和多發(fā)病，是導(dǎo)致殘疾和早死的主要疾病之一，在35 59歲年齡組中，惡性腫瘤居死因第一位。資料顯示，我國惡性腫瘤年發(fā)病例數(shù)為200萬，死亡約150萬，并以3%的速度遞增且呈年輕化趨勢，居各類疾病中死亡率之最。目前世界對惡性腫瘤的主要治療手段包括手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌治療及生物免疫治療等。在惡性腫瘤治療的諸多手段中，化療作為一種全身性的治療方法，較之其他方法有可能最大程度地殺滅患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，因此，化療在惡性腫瘤治療中占有非常重要的地位。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，化療已經(jīng)不再是單純起姑息性治療作用的手段，正在從姑息向根治過渡。1998年，世界衛(wèi)生組織提出，使用適當(dāng)，化療在部分腫瘤(惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、睪丸癌、急性粒細(xì)胞白血病、胚胎性橫紋肌肉瘤、皮膚癌、小細(xì)胞肺癌和卵巢癌等)中已成為可以治愈腫瘤的根治性治療手段。經(jīng)輔助化療后可能治愈的腫瘤有乳腺癌、成骨肉瘤、大腸癌、骨肉瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤及腎母細(xì)胞瘤等。抗腫瘤是一種惡性程度比較高的腫瘤。多發(fā)生于中老年人，發(fā)達(dá)國家發(fā)病率高于發(fā)展中國家。隨著我國生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，近年來抗腫瘤的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢，并且有年輕化的傾向。化學(xué)治療的目的是延長`生存期、改善生活質(zhì)量及提高手術(shù)等其他治療的效果，包括手術(shù)后的輔助化療以及針對未接受根治性治療患者的姑息化療。近年來，在一些大的胰腺中心，術(shù)前以改善手術(shù)治療效果或提高手術(shù)切除率為目的的新輔助化療也有較多的應(yīng)用。盡管化療在惡性腫瘤的治療中占有非常重要的地位，但是在臨床實踐中，結(jié)果往往不盡如人意。其中，腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥是導(dǎo)致腫瘤化療失敗的常見因素，也是困擾腫瘤治療的關(guān)鍵性難題。耐藥問題是極為普遍的臨床問題，據(jù)美國癌癥協(xié)會估計，90%以上因腫瘤死亡的患者在不同程度上受到耐藥影響。腫瘤細(xì)胞耐藥分為原發(fā)性和獲得性耐藥兩大類。目前臨床上通常的做法是，根據(jù)國際腫瘤臨床試驗的循證研究結(jié)果，得知不同的化療藥物對不同腫瘤的治療敏感性不同，即每一種腫瘤有相應(yīng)有效的化療藥物敏感譜，從而選擇療效最高的化療單藥或多種藥物組成的聯(lián)合方案進(jìn)行治療。但在臨床上經(jīng)常碰到這樣的情況，經(jīng)循證研究公認(rèn)為對某種腫瘤有效的治療方案，而對有的患者卻毫無效果。如阿霉素對浸潤性乳腺癌是一種具有里程碑意義的治療藥物，但仍有50%的浸潤性乳腺癌病人對這種藥不敏感。又如健擇，對抗腫瘤公認(rèn)的療效明顯，但也有60%以上的病人療效并不明顯。腫瘤對各種化療藥物存在著明顯的個體差異。即不同的腫瘤類型或同一類型的不同病人，甚至同一病人在不同的發(fā)病階段，對化療的敏感性并不完全相同，治療效果差別也很大。至今還沒有一種化療藥物或幾種化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用，能對某一種腫瘤100%有效。臨床上，用同一種化療藥物或同一種化療方案治療不同的腫瘤患者，顯然帶有一定的盲目性。因此，在化療前針對不同的患者進(jìn)行腫瘤藥敏試驗來選擇有效化療藥物進(jìn)行化療顯得十分必要。為此,建立一種像細(xì)菌敏感試驗一樣,通過相對可靠的敏感試驗方法,對不同的病人準(zhǔn)確篩選敏感的化療藥物，并確定其劑量，真正實現(xiàn)臨床的個體化用藥。目前腫瘤藥敏試驗操作所需的藥物以臨用現(xiàn)配為主，腫瘤藥敏試驗需要測試多種抗腫瘤藥物，藥液配制稀釋繁瑣，且腫瘤藥敏試驗所需抗腫瘤藥物劑量小，取樣不便。部分藥物溶液狀態(tài)下保存時間短，剩余部分只能報廢，造成藥物的浪費，尤其是價格昂貴的藥物。CN93111551.5公開了腫瘤化療藥物敏感預(yù)測試劑配制方法及試劑盒，該專利將8種常用抗腫瘤藥物按設(shè)定劑量預(yù)裝于標(biāo)本瓶內(nèi)。但該方法不便于聯(lián)合化療方案的測試，且不便于方案的劑量調(diào)整。CN03102260.X采用預(yù)制藥敏檢測板的方法，將抗腫瘤藥物按計算劑量加入檢測板內(nèi)，凍干、包裝，用于腫瘤藥敏試驗。該方法同樣不便于聯(lián)合化療方案的測試，且不便于方案的劑量調(diào)整。臨床目前有少量采用抗腫瘤藥物臨時配制的方法進(jìn)行抗腫瘤藥物藥敏測試，但是，該方法存在許多問題:配制藥物的準(zhǔn)確濃度未知，所配制藥液的準(zhǔn)確性存疑；臨床口服抗腫瘤藥物的抗腫瘤藥物藥敏測試無法進(jìn)行；個體操作誤差大。為了便于腫瘤藥敏試驗的操作以及節(jié)約成本，我們將各種常用的抗腫瘤抗腫瘤藥物制備成劑量準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、能夠在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中快速溶解的無菌藥膜。并將藥膜按使用劑量進(jìn)行準(zhǔn)確的切 片，分裝。

實用新型內(nèi)容本實用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測試的裝置，具體地說，涉及一種用于抗腫瘤藥敏測試的試劑盒。本實用新型技術(shù)方案如下:一種抗腫瘤藥敏檢測的試劑盒，由盒體、藥敏測試組件、標(biāo)示卡和說明書組成,藥敏測試組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測試組件包括抗腫瘤藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測試組件還包括藥物活化酶包裝。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測試組件中，抗腫瘤藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測試組件中，抗腫瘤藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的抗腫瘤藥物藥膜選自預(yù)防或治療如下腫瘤的藥物藥膜中一種或者兩種以上:急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、毛細(xì)胞性白血病、膽管癌、多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑色素瘤、惡性間皮細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肝癌、肛管癌、睪丸癌、甲狀腺癌、結(jié)直腸癌、頸部腫瘤、卡波西肉瘤、類癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)于中樞系統(tǒng)的淋巴瘤、上皮來源卵巢癌、生殖細(xì)胞來源卵巢癌、腦腫瘤、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、軟組織肉瘤、腎細(xì)胞癌、食管癌、頭頸部腫瘤、胃癌、胃腸間質(zhì)腫瘤、胸腺瘤、胰腺癌或者子宮內(nèi)膜癌。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其中所述的藥物活化酶選自P450酶系、羧酸酯酶、胞苷脫氨酶、胸苷磷酸化酶、磷酰胺酶、磷酸酶中一種或者兩種以上。本實用新型是一種用于抗腫瘤抗腫瘤藥敏測試的試劑盒，試劑盒中藥敏測試組件包裝形式為將抗腫瘤藥物藥膜與24孔細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝的預(yù)裝培養(yǎng)板和獨立的藥膜包裝與空白24孔細(xì)胞培養(yǎng)板組合的可調(diào)式套裝兩種。每個可調(diào)式套裝中含有一個抗腫瘤常用的抗腫瘤藥物藥膜包裝盒、一個細(xì)胞培養(yǎng)板。藥膜包裝上有每一種藥膜的代號，每個細(xì)胞培養(yǎng)板附帶一張標(biāo)示卡，用于標(biāo)記各孔內(nèi)藥物成分。各種抗腫瘤藥膜和空白藥膜均分別置于獨立的無菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。各種藥物活化酶均分別置于獨立的無菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。細(xì)胞培養(yǎng)板為2 4孔細(xì)胞培養(yǎng)板，標(biāo)示卡為24格，用于標(biāo)記各孔內(nèi)的藥物成分。使用時，將空白對照、空白藥膜對照和各種化療方案分別標(biāo)記于標(biāo)示卡上，按標(biāo)示卡內(nèi)容向細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)添加藥膜，加入腫瘤細(xì)胞懸液，振蕩使藥膜溶解混勻。預(yù)裝培養(yǎng)板所設(shè)定的化療方案參考最新的診療指南的標(biāo)準(zhǔn)化療方案制訂。按設(shè)定方案將藥膜裝入培養(yǎng)板各孔中。本實用新型中所述的藥物藥膜，通常地，藥物藥膜按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和1% 20%增塑劑。其中，所述的成膜材料包括但不限于聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯胺類、聚乙烯氨基縮醛衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、明膠、阿拉伯膠、蟲膠、瓊脂、海藻酸及其鹽、玉米朊、淀粉、糊精、白芨膠等。優(yōu)選使用聚乙烯醇04-88和聚乙烯醇05-88。所述的增塑劑選自甘油、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、山梨醇、檸檬酸三乙酯等。本實用新型中所述的藥物藥膜，可以用本領(lǐng)域中常規(guī)方法制備，例如可以按如下方法制得抗腫瘤藥物藥膜:(I)將成膜材料加入水中，攪拌溶解或加熱溶解；(2)加入增塑劑和抗腫瘤藥物，攪拌溶解均勻，采用加熱、靜置或超聲等方式脫氣;(3)將上述溶液涂布于制膜設(shè)備，采用熱風(fēng)或冷風(fēng)等方式干燥；(4)脫膜，測定含量，并按照測定結(jié)果進(jìn)行分劑量分割；(5)將分割后的藥膜采用放射線照射滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌,優(yōu)選放射線照射滅菌。各種腫瘤化療藥物藥膜參考藥物在人體內(nèi)的血漿峰值濃度制備，根據(jù)藥膜含量測定結(jié)果，將每片藥膜切割為含Iml血漿峰值濃度的化療藥物，空白藥膜切割面積1cm2。為了便于腫瘤藥敏測試的操作，藥膜需要能快速溶解于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中。因此成膜材料要易于溶解，膜的厚度和面積要控制在合適的范圍，保證溶解速度和機(jī)械強(qiáng)度。厚度優(yōu)選0.04mm 0.15mm。形狀可為圓形、正方形或長方形,面積優(yōu)選為0.5cm2 16cm2,以適應(yīng)相應(yīng)規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng)板。本發(fā)明Icm2大小的膜劑可在Iml培養(yǎng)液中于100秒內(nèi)溶解。所述的空白藥膜，是指不含抗腫瘤藥物的藥膜，可以按照上述抗腫瘤藥物藥膜方法進(jìn)行制備，但不加入抗腫瘤藥物。本實用新型在進(jìn)行抗腫瘤藥敏測試中，不僅提高腫瘤藥敏測試的操作效率，使操作簡便，而且大大提高了藥敏測試的準(zhǔn)確性，大大減少測試藥物用量，節(jié)約用藥成本，提高藥敏測試的經(jīng)濟(jì)性，特別是，也適用于聯(lián)合化療的藥敏測試。

圖1:實施例1實用新型中可調(diào)式套裝培養(yǎng)板的24孔培養(yǎng)板俯視圖；圖2:實施例1實用新型中可調(diào)式套裝培養(yǎng)板的24孔培養(yǎng)板平視圖；圖3:實施例1實用新型中標(biāo)示卡。其中:圖1、2中,A-D為培養(yǎng)板的孔行號，1-6為培養(yǎng)板的孔列號,孔對應(yīng)的行號和列號的組合即為孔的編號，例如:A6孔表不培養(yǎng)板的第A行第6列的孔。圖3中,標(biāo)不卡中每格編號,對應(yīng)于培養(yǎng)板的孔編號。
具體實施方式
以下以用于急性淋巴細(xì)胞白血病藥敏檢測試劑盒為例，來說明本實用新型。但其不構(gòu)成對本實用新型的限制。實施例1:用于急性淋巴細(xì)胞白血病的抗腫瘤藥物篩選的藥敏檢測試劑盒本實用新型試劑盒，由盒體、藥敏檢測組件、標(biāo)示卡(圖3)和說明書組成，藥敏檢測組件、標(biāo)示卡(圖3)和說明書置于盒內(nèi)。藥敏檢測組件為抗急性白血病藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板(圖1或2)組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板，即藥敏檢測組件由24孔培養(yǎng)板(圖1或2所示)和大塑料盒組成，大塑料盒中有獨立包裝的用于急性淋巴細(xì)胞白血病的抗腫瘤藥物藥膜、獨立包裝的空白藥膜、獨立包裝的藥物活化酶(肝微粒體)組成。各種抗腫瘤藥膜和空白藥膜均分別置于獨立的無菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)；藥物活化酶置于獨立的無菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。藥敏檢測組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒中，成為用于急性淋巴細(xì)胞白血病的抗腫瘤藥物篩選的藥敏檢測試劑盒。說明書是解釋和介紹試劑盒，便于使用者正確使用本試劑盒。于化療前無菌技術(shù)下抽取20例急性淋巴細(xì)胞白血病患者的外周血IOml (肝素抗凝)，在凈化室內(nèi)經(jīng)FIcol I液分離出白血病細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)液洗滌，置于RPMI1640培養(yǎng)體系中制成IXlO6Ail的細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液種 于24孔培養(yǎng)板(圖1或2)中(lml/孔)，設(shè)細(xì)胞對照組(腫瘤細(xì)胞懸液)、空白藥膜對照組(腫瘤細(xì)胞懸液+空白藥膜)、實驗組(腫瘤細(xì)胞懸液+化療藥膜)。向培養(yǎng)板各孔加入相應(yīng)藥膜和活化酶，并記錄在標(biāo)示卡(圖3)上。向各孔加入細(xì)胞懸液lml/孔，振蕩使藥膜溶解混勻。37°C、5%二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)24小時。離心收集懸浮細(xì)胞，微量離心機(jī)轉(zhuǎn)速2000RPM，離心時間5min，棄培養(yǎng)基。用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次(2000RPM，離心時間5min收集細(xì)胞)。用400 μ I IX Binding Buffer懸浮細(xì)胞，濃度大約為I X IO6/ml ο在細(xì)胞懸浮液中加入5μ I Annexin V-FITC，輕輕混勻后于2_8°C避光條件下孵育15分鐘。加入IOul PI后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。在I小時內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測對照組及藥物組細(xì)胞凋亡及壞死的數(shù)量，計算藥物的抑制率，評估藥物的敏感度。加入各孔中藥膜如下:A1-A2空白(細(xì)胞對照組，無藥膜)A3-A4空白藥膜(不含藥物的空白藥膜，作為空白藥膜對照)A5長春新堿膜A6依托泊苷膜BI甲氨蝶呤膜B2阿糖胞苷膜B3羥基喜樹堿膜B4高三尖杉酯堿膜B5柔紅霉素膜
B6米托蒽醌膜 Cl阿霉素膜C2去甲柔紅霉素膜C3長春地辛膜C4表柔比星膜C5阿柔比星膜C6吡柔比星膜Dl替尼泊苷膜 D2環(huán)磷酰胺膜和肝微粒體D3米托蒽醌膜和阿糖胞苷膜D4替尼泊苷膜和阿糖胞苷膜D5柔紅霉素膜、長春新堿膜、環(huán)磷酰胺膜和肝微粒體D6柔紅霉素膜、長春新堿膜和地塞米松膜。急性淋巴細(xì)胞白血病藥敏檢測結(jié)果如下表I所示。表I藥敏測試的敏感度
權(quán)利要求1.一種用于抗腫瘤藥敏檢測的試劑盒，由盒體、藥敏測試組件、標(biāo)示卡和說明書組成，藥敏測試組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測試組件包括抗腫瘤藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，如果需要，所述的藥敏測試組件還可包括藥物活化酶包裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測試組件中，抗腫瘤藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測試組件中，抗腫瘤藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的試劑盒，其特征在于所述的抗腫瘤藥物藥膜選自預(yù)防或治療如下腫瘤的 藥物藥膜中一種或者兩種以上:急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、毛細(xì)胞性白血病、膽管癌、多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑色素瘤、惡性間皮細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肝癌、肛管癌、睪丸癌、甲狀腺癌、結(jié)直腸癌、頸部腫瘤、卡波西肉瘤、類癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)于中樞系統(tǒng)的淋巴瘤、上皮來源卵巢癌、生殖細(xì)胞來源卵巢癌、腦腫瘤、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、軟組織肉瘤、腎細(xì)胞癌、食管癌、頭頸部腫瘤、胃癌、胃腸間質(zhì)腫瘤、胸腺瘤、胰腺癌或者子宮內(nèi)膜癌。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的藥物活化酶選自P450酶系、羧酸酯酶、胞苷脫氨酶、胸苷磷酸化酶、磷酰胺酶、磷酸酶中一種或者兩種以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的試劑盒，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
專利摘要本實用新型提供一種用于抗腫瘤藥敏檢測的試劑盒，由盒體、藥敏檢測組件、標(biāo)示卡和說明書組成，藥敏檢測組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏檢測組件包括抗腫瘤藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板，其中，所述的藥敏檢測組件中，抗腫瘤藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板，或者抗腫瘤藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。本實用新型在抗腫瘤藥物藥敏檢測中，不僅提高腫瘤藥敏測試的操作效率，使操作簡便，而且劑量準(zhǔn)確、可調(diào)，大大提高了藥敏測試的準(zhǔn)確性，大大減少測試藥物用量，節(jié)約用藥成本，提高藥敏測試的經(jīng)濟(jì)性，特別是，也適用于聯(lián)合化療的藥敏檢測。
文檔編號C12Q1/02GK203144402SQ2013201596
公開日2013年8月21日 申請日期2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月26日
發(fā)明者邱瑞寶, 張發(fā)明, 戚文榮, 陶征宇, 朱美霞, 吳明輝, 鄧鋼 申請人:蘇州麥克威爾生物醫(yī)藥科技有限公司