專利名稱：一種用于卵巢癌藥敏檢測(cè)的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測(cè)試的裝置，具體地說，涉及一種用于卵巢癌藥敏檢測(cè)的試劑盒。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類生命和健康的常見病和多發(fā)病，是導(dǎo)致殘疾和早死的主要疾病之一，在35 59歲年齡組中，惡性腫瘤居死因第一位。資料顯示，我國惡性腫瘤年發(fā)病例數(shù)為200萬，死亡約150萬，并以3%的速度遞增且呈年輕化趨勢(shì)，居各類疾病中死亡率之最。目前世界對(duì)惡性腫瘤的主要治療手段包括手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌治療及生物免疫治療等。在惡性腫瘤治療的諸多手段中，化療作為一種全身性的治療方法，較之其他方法有可能最大程度地殺滅患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，因此，化療在惡性腫瘤治療中占有非常重要的地位。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，化療已經(jīng)不再是單純起姑息性治療作用的手段，正在從姑息向根治過渡。卵巢癌是卵巢腫瘤的一種惡性腫瘤，是指生長在卵巢上的惡性腫瘤，其中90% 95%為卵巢原發(fā)性的癌，另外5% 10%為其它部位原發(fā)的癌轉(zhuǎn)移到卵巢。卵巢癌的發(fā)病率低于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌居?jì)D科惡性腫瘤的第三位，但死亡率卻超過宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌之和，高居?jì)D科癌癥首位，是嚴(yán)重威脅婦女健康的最大疾患。卵巢癌的化療經(jīng)歷了 3個(gè)重要階段，即70年代的烷化劑，80年代的順鉬類藥物和90年代的紫杉醇。近年來，有很多新藥問世，不少治療方案也在改進(jìn)，一些觀點(diǎn)也逐步更新。但是，正規(guī)、足量、及時(shí)，仍是最基本的用藥原則?；瘜W(xué)治療的目的是 延長生存期、改善生活質(zhì)量及提高手術(shù)等其他治療的效果，包括手術(shù)后的輔助化療以及針對(duì)未接受根治性治療患者的姑息化療。近年來，在一些大的胰腺中心，術(shù)前以改善手術(shù)治療效果或提高手術(shù)切除率為目的的新輔助化療也有較多的應(yīng)用。盡管化療在惡性腫瘤的治療中占有非常重要的地位，但是在臨床實(shí)踐中，結(jié)果往往不盡如人意。其中，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥是導(dǎo)致腫瘤化療失敗的常見因素，也是困擾腫瘤治療的關(guān)鍵性難題。耐藥問題是極為普遍的臨床問題，據(jù)美國癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，90%以上因腫瘤死亡的患者在不同程度上受到耐藥影響。腫瘤細(xì)胞耐藥分為原發(fā)性和獲得性耐藥兩大類。目前臨床上通常的做法是，根據(jù)國際腫瘤臨床試驗(yàn)的循證研究結(jié)果，得知不同的化療藥物對(duì)不同腫瘤的治療敏感性不同，即每一種腫瘤有相應(yīng)有效的化療藥物敏感譜，從而選擇療效最高的化療單藥或多種藥物組成的聯(lián)合方案進(jìn)行治療。但在臨床上經(jīng)常碰到這樣的情況，經(jīng)循證研究公認(rèn)為對(duì)某種腫瘤有效的治療方案，而對(duì)有的患者卻毫無效果。如阿霉素對(duì)浸潤性乳腺癌是一種具有里程碑意義的治療藥物，但仍有50%的浸潤性乳腺癌病人對(duì)這種藥不敏感。又如健擇，對(duì)卵巢癌公認(rèn)的療效明顯，但也有60%以上的病人療效并不明顯。[0009]腫瘤對(duì)各種化療藥物存在著明顯的個(gè)體差異。即不同的腫瘤類型或同一類型的不同病人，甚至同一病人在不同的發(fā)病階段，對(duì)化療的敏感性并不完全相同，治療效果差別也很大。至今還沒有一種化療藥物或幾種化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用，能對(duì)某一種腫瘤100%有效。臨床上，用同一種化療藥物或同一種化療方案治療不同的腫瘤患者，顯然帶有一定的盲目性。因此，在化療前針對(duì)不同的患者進(jìn)行腫瘤藥敏試驗(yàn)來選擇有效化療藥物進(jìn)行化療顯得十分必要。為此,建立一種像細(xì)菌敏感試驗(yàn)一樣,通過相對(duì)可靠的敏感試驗(yàn)方法,對(duì)不同的病人準(zhǔn)確篩選敏感的化療藥物，并確定其劑量，真正實(shí)現(xiàn)臨床的個(gè)體化用藥。目前腫瘤藥敏試驗(yàn)操作所需的藥物以臨用現(xiàn)配為主，腫瘤藥敏試驗(yàn)需要測(cè)試多種抗腫瘤藥物，藥液配制稀釋繁瑣，且腫瘤藥敏試驗(yàn)所需抗腫瘤藥物劑量小，取樣不便。部分藥物溶液狀態(tài)下保存時(shí)間短，剩余部分只能報(bào)廢，造成藥物的浪費(fèi)，尤其是價(jià)格昂貴的藥物。CN93111551.5公開了腫瘤化療藥物敏感預(yù)測(cè)試劑配制方法及試劑盒，該專利將8種常用抗腫瘤藥物按設(shè)定劑量預(yù)裝于標(biāo)本瓶內(nèi)。但該方法不便于聯(lián)合化療方案的測(cè)試，且不便于方案的劑量調(diào)整。CN03102260.X采用預(yù)制藥敏檢測(cè)板的方法，將抗腫瘤藥物按計(jì)算劑量加入檢測(cè)板內(nèi)，凍干、包裝，用于腫瘤藥敏試驗(yàn)。該方法同樣不便于聯(lián)合化療方案的測(cè)試，且不便于方案的劑量調(diào)整。 臨床目前有少量采用抗腫瘤藥物臨時(shí)配制的方法進(jìn)行抗腫瘤藥物藥敏測(cè)試，但是，該方法存在許多問題:配制藥物的準(zhǔn)確濃度未知，所配制藥液的準(zhǔn)確性存疑；臨床口服抗腫瘤藥物的抗腫瘤藥物藥敏測(cè)試無法進(jìn)行；個(gè)體操作誤差大。為了便于腫瘤藥敏試驗(yàn)的操作以及節(jié)約成本，我們將各種常用的卵巢癌抗腫瘤藥物制備成劑量準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、能夠在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中快速溶解的無菌藥膜。并將藥膜按使用劑量進(jìn)行準(zhǔn)確的切片，分裝。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測(cè)試的裝置，具體地說，涉及一種用于卵巢癌藥敏測(cè)試的試劑盒。本實(shí)用新型技術(shù)方案如下:一種卵巢癌藥敏檢測(cè)的試劑盒，由盒體、藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說明書組成，藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件包括卵巢癌藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件還包括藥物活化酶包裝。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，卵巢癌藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，卵巢癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨(dú)立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的卵巢癌藥物藥膜選自多西他賽膜、紫杉醇膜、卡鉬膜、順鉬膜、環(huán)磷酰胺膜、阿霉素膜、托泊替康膜中一種或者兩種以上。上述所述的試劑盒，其特征在于所述的細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。[0023]作為優(yōu)選，上述所述的試劑盒，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。優(yōu)選的，上述所述的試劑盒，其特征在于所述的預(yù)裝培養(yǎng)板是卵巢癌藥敏檢測(cè)板，其為預(yù)裝24孔培養(yǎng)板，孔預(yù)裝藥膜如下:2個(gè)孔中無藥膜2個(gè)孔中預(yù)裝空白藥膜2個(gè)孔中預(yù)裝紫杉醇膜和卡鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝多西他賽膜和卡鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝紫杉醇膜和順鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝多西他賽膜和順鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜和卡鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜和順鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜、阿霉素膜和卡鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜、阿霉素膜和順鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝托泊替康膜和卡鉬膜2個(gè)孔中預(yù)裝托泊替康膜和順鉬膜。本實(shí)用新型是一種用于卵巢癌抗腫瘤藥敏測(cè)試的試劑盒，試劑盒中藥敏測(cè)試組件包裝形式為將卵巢癌藥物藥膜與24孔細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝的預(yù)裝培養(yǎng)板和獨(dú)立的藥膜包裝與空白24孔細(xì)胞培養(yǎng)板組合的可調(diào)式套裝兩種。每個(gè)可調(diào)式套裝中含有一個(gè)卵巢癌常用的抗腫瘤藥物藥膜包裝盒、一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板。藥膜包裝上有每一種藥膜的代號(hào)，每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板附帶一張標(biāo)示卡，用于標(biāo)記各孔內(nèi)的藥物成分。各種抗腫瘤藥膜和空白藥膜均分別置于獨(dú)立的無菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。各種藥物活化酶均分別置于獨(dú)立的無菌有蓋小塑料盒內(nèi)，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內(nèi)。細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，標(biāo)示卡為24格，用于標(biāo)記各孔內(nèi)的藥物成分。使用時(shí)，將空白對(duì)照、空白藥膜對(duì)照和各種化療方案分別標(biāo)記于標(biāo)示卡上，按標(biāo)示卡內(nèi)容向細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)添加藥膜，加入腫瘤細(xì)胞懸液，振蕩使藥膜溶解混勻。
預(yù)裝培養(yǎng)板所設(shè)定的化療方案參考最新的診療指南的標(biāo)準(zhǔn)化療方案制訂。按設(shè)定方案將藥膜裝入培養(yǎng)板各孔中。本實(shí)用新型中所述的藥物藥膜，通常地，藥物藥膜按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和I % 20%增塑劑。其中，所述的成膜材料包括但不限于聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯胺類、聚乙烯氨基縮醛衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、明膠、阿拉伯膠、蟲膠、瓊脂、海藻酸及其鹽、玉米朊、淀粉、糊精、白芨膠等。優(yōu)選使用聚乙烯醇04-88和聚乙烯醇05-88。所述的增塑劑選自甘油、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、山梨醇、檸檬酸三乙酯等。本實(shí)用新型中所述的藥物藥膜，可以用本領(lǐng)域中常規(guī)方法制備，例如可以按如下方法制得卵巢癌藥物藥膜:(I)將成膜材料加入水中，攪拌溶解或加熱溶解；(2)加入增塑劑和抗腫瘤藥物，攪拌溶解均勻，采用加熱、靜置或超聲等方式脫氣;(3)將上述溶液涂布于制膜設(shè)備，采用熱風(fēng)或冷風(fēng)等方式干燥；(4)脫膜，測(cè)定含量，并按照測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分劑量分割；(5)將分割后的藥膜采用放射線照射滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌，優(yōu)選放射線照射滅菌。各種腫瘤化療藥物藥膜參考藥物在人體內(nèi)的血漿峰值濃度制備，根據(jù)藥膜含量測(cè)定結(jié)果，將每片藥膜切割為含Iml血漿峰值濃度的化療藥物，空白藥膜切割面積1cm2。為了便于腫瘤藥敏測(cè)試的操作，藥膜需要能快速溶解于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中。因此成膜材料要易于溶解，膜的厚度和面積要控制在合適的范圍，保證溶解速度和機(jī)械強(qiáng)度。厚度優(yōu)選0.04mm 0.15mm。形狀可為圓形、正方形或長方形,面積優(yōu)選為0.5cm2 16cm2,以適應(yīng)相應(yīng)規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng)板。本發(fā)明Icm2大小的膜劑可在Iml培養(yǎng)液中于100秒內(nèi)溶解。所述的空白藥膜，是指不含卵巢癌藥物的藥膜，可以按照上述卵巢癌藥物藥膜方法進(jìn)行制備，但不加入卵巢癌藥物。本實(shí)用新型在進(jìn)行卵巢癌藥敏測(cè)試中，不僅提高腫瘤藥敏測(cè)試的操作效率，使操作簡便，而且大大提高了藥敏測(cè)試的準(zhǔn)確性，大大減少測(cè)試藥物用量，節(jié)約用藥成本，提高藥敏測(cè)試的經(jīng)濟(jì)性，特別是，也適用于聯(lián)合化療的藥敏測(cè)試。

圖1:實(shí)施例1實(shí)用新型中卵巢癌藥敏檢測(cè)預(yù)裝24孔培養(yǎng)板俯視圖；圖2:實(shí)施例1實(shí)用新型中卵巢癌藥敏檢測(cè)預(yù)裝24孔培養(yǎng)板平視圖3:實(shí)施例1實(shí)用新型中標(biāo)示卡。其中:圖1、2中,A-D為培養(yǎng)板的孔行號(hào)，1-6為培養(yǎng)板的孔列號(hào),孔對(duì)應(yīng)的行號(hào)和列號(hào)的組合即為孔的編號(hào)，例如:A6孔表不培養(yǎng)板的第A行第6列的孔。圖3中,標(biāo)不卡中每格編號(hào),對(duì)應(yīng)于培養(yǎng)板的孔編號(hào)。培養(yǎng)板各孔中，預(yù)裝藥膜如下:A1-A2空白(無藥膜，空白對(duì)照)A3-A4空白藥膜(藥膜不含藥物，空白藥膜對(duì)照)A5-A6紫杉醇膜+卡鉬膜B1-B2多西他賽膜+卡鉬膜B3-B4紫杉醇膜+順鉬膜B5-B6多西他賽膜+順鉬膜C1-C2環(huán)磷酰胺膜+卡鉬膜C3-C4環(huán)磷酰胺膜+順鉬膜C5-C6環(huán)磷酰胺膜+阿霉素膜+卡鉬膜D1-D2環(huán)磷酰胺膜+阿霉素膜+順鉬膜D3-D4托泊替康膜+卡鉬膜D5-D6托泊替康膜+順鉬膜。
具體實(shí)施方式
[0073]實(shí)施例1:用于卵巢癌藥物藥敏檢測(cè)試劑盒本實(shí)用新型試劑盒，由盒體、卵巢癌藥敏檢測(cè)預(yù)裝24孔培養(yǎng)板(圖1、2)、標(biāo)示卡(圖3)和說明書組成。卵巢癌藥敏測(cè)試預(yù)裝24孔培養(yǎng)板、標(biāo)示卡和說明書置于盒中。說明書是解釋和介紹試劑盒，便于使用者正確使用本試劑盒。于化療前取患者的卵巢癌新鮮組織塊(0.5 Icm3)，置于無菌生理鹽水中(含20萬單位/ml青霉素、25萬單位/ml鏈霉素)，在超凈工作臺(tái)上，剪除脂肪、纖維等正常組織，以及壞死和血污組織，用帶抗生素的生理鹽水沖洗干凈組織，加入組織消化酶(胰酶、膠原酶)消2 3h，使組織塊成為單個(gè)細(xì)胞漏過銅網(wǎng)，離心棄上清，加RPMI1640培養(yǎng)液吹打成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)并調(diào)細(xì)胞濃度至I X 106/ml。細(xì)胞懸液種于預(yù)裝24孔培養(yǎng)板(圖1或2)中(lml/孔)，振蕩使藥膜溶解混勻，并在標(biāo)示卡(圖3)中記錄。37°C、5%二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)24小時(shí)。離心收集懸浮細(xì)胞，微量離心機(jī)轉(zhuǎn)速2000RPM，離心時(shí)間5min，棄培養(yǎng)基。用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次(2000RPM，離心時(shí)間5min收集細(xì)胞)。用400μ11Χ Binding Buffer懸浮細(xì)胞,濃度大約為lX106/ml。在細(xì)胞懸浮液中加入5 μ I Annexin V-FITC，輕輕混勻后于2_8°C避光條件下孵育15分鐘。加入10 μ I PI后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。在I小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)照組及藥物組細(xì)胞凋亡及壞死的數(shù)量，計(jì)算藥物的抑制率，評(píng)估藥物的敏感度。結(jié)果見表
1表I供篩選化療方案的抑制率
權(quán)利要求1.一種用于卵巢癌藥敏檢測(cè)的試劑盒，由盒體、藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說明書組成，藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件包括卵巢癌藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，如果需要，所述的藥敏測(cè)試組件還可包括藥物活化酶包裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，卵巢癌藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件中，卵巢癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨(dú)立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述的卵巢癌藥物藥膜選自多西他賽膜、紫杉醇膜、卡鉬膜、順鉬膜、環(huán)磷酰胺膜、阿霉素膜、托泊替康膜中一種或者兩種以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)板為24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述的預(yù)裝培養(yǎng)板是卵巢癌藥敏檢測(cè)板，其為預(yù)裝24孔培養(yǎng)板，孔預(yù)裝藥膜如下: 2個(gè)孔中無藥膜 2個(gè)孔中預(yù)裝空白藥膜 2個(gè)孔中預(yù)裝紫杉醇膜和卡鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝多西他賽膜和卡鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝紫杉醇膜和順鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝多西他賽膜和順鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜和卡鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜和順鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜、阿霉素膜和卡鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝環(huán)磷酰胺膜、阿霉素膜和順鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝托泊替康膜和卡鉬膜 2個(gè)孔中預(yù)裝托泊替康膜和順鉬膜。
專利摘要本實(shí)用新型提供一種用于卵巢癌藥敏測(cè)試的試劑盒，由盒體、藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說明書組成，藥敏測(cè)試組件、標(biāo)示卡和說明書置于盒內(nèi)，其特征在于所述的藥敏測(cè)試組件包括卵巢癌藥物藥膜、空白藥膜和細(xì)胞培養(yǎng)板，其中，卵巢癌藥物藥膜和空白藥膜與細(xì)胞培養(yǎng)板按設(shè)定化療方案預(yù)裝形成預(yù)裝培養(yǎng)板，或者卵巢癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨(dú)立包裝和細(xì)胞培養(yǎng)板組成了可調(diào)式的套裝培養(yǎng)板。本實(shí)用新型在進(jìn)行卵巢癌抗腫瘤藥敏檢測(cè)中，不僅提高腫瘤藥敏測(cè)試的操作效率，使操作簡便，而且大大提高了藥敏測(cè)試的準(zhǔn)確性，大大減少測(cè)試藥物用量，節(jié)約用藥成本，提高藥敏測(cè)試的經(jīng)濟(jì)性，特別是，也適用于聯(lián)合化療的藥敏檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12M1/34GK203144401SQ20132015960
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月26日
發(fā)明者陶征宇, 戚文榮, 邱瑞寶, 張發(fā)明, 朱美霞, 吳明輝, 鄧鋼 申請(qǐng)人:蘇州麥克威爾生物醫(yī)藥科技有限公司